TỔNG QUAN
TỔNG QUAN VỀ CHI DÓ ĐẤT (BALANOPHORA)
Họ Balanophoraceae là nhóm thực vật có những đặc điểm độc đáo như không phân hóa rõ ràng các bộ phận như thân, cành, lá và rễ; không chứa diệp lục và sống ký sinh trên rễ của các loài thực vật khác Mặc dù các nhà nghiên cứu đều đồng thuận rằng các đại diện trong họ này thuộc thực vật có hoa hay thực vật hạt kín, nhưng vẫn tồn tại hai quan điểm khác nhau khi phân loại chúng trong hệ thống thực vật.
Quan điểm phân loại và sắp xếp đầy đủ các bậc taxon được đại diện bởi A Takhtajan (2009), bao gồm các cấp bậc như Giới Thực vật (Plantae), Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) hay Ngành Hạt kín (Angiosperemae), Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) hay Hai lá mầm (Dicotyledone), Phân lớp Hoa hồng (Rosidae), Bộ Dó đất (Balanophorales), Họ Dó đất (Balanophoraceae), và Chi Dó đất (Balanophora).
Theo hệ thống phân loại APG IV (2016) của nhóm phát sinh chủng loài thực vật hạt kín, Dó đất thuộc liên bộ Cúc (Superasterid), bộ Đàn hương (Santalales), họ Dó đất (Balanophoraceae) và chi Dó đất (Balanophora).
Quan điểm phân loại 1 được Nguyễn Tiến Bân (1997) và nhiều nhà thực vật khác ở Việt Nam áp dụng
Theo Bertel Hansen (1973) trong tác phẩm “Flore du Cambodge du Laos et du Vietnam” Tom 14, họ Balanophoraceae trên thế giới bao gồm 18 chi với 47 loài Tại khu vực Đông Dương, bao gồm Campuchia, Lào và Việt Nam, có 2 chi đại diện là Balanophora.
Rhopalocnemis), 5 loài [3] Đến năm 2003, khi biên soạn họ Balanophoraceae trong
Theo nghiên cứu của Huang Shu-mai và Ji Murata, trên thế giới có 18 chi và khoảng 50 loài thực vật thuộc họ Balanophoraceae Tại Trung Quốc, hiện chỉ ghi nhận được 13 loài thuộc 2 chi Balanophora.
Rhopalocnemis [4] Trong “Flora of Thailand”, Bertel Hansen (1970) cho rằng, họ Balanophoraceae ở Thái Lan có 3 chi (Balanophora, Rhopalocnemis và Exorhopala),
Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loài toa đuống Balanophora laxiflora Hemsl đã chỉ ra những yếu tố quan trọng trong việc hiểu rõ giá trị dược liệu của loài này Mặc dù không đề cập đến tổng số loài của cả họ, nghiên cứu tập trung vào chi Balanophora, góp phần làm sáng tỏ tiềm năng ứng dụng trong y học và bảo tồn các loài thực vật quý hiếm.
Theo tài liệu, họ Balanophoraceae tại các quốc gia lân cận Việt Nam chỉ có từ 2 đến 3 chi, trong đó chi Balanophora là phổ biến nhất.
Balanophora Forst.et Forst.f là chi lớn nhất trong họ Balanophoraceae, được đặt tên bởi các nhà thực vật học người Đức Johann Reinhold Forster và Georg Forster vào năm 1775 Trên toàn thế giới, có 19 loài thuộc chi Balanophora, chủ yếu phân bố ở các vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới và ôn đới ẩm ở châu Á, châu Phi và châu Đại Dương Tại Trung Quốc, có 12 loài Balanophora được ghi nhận; Thái Lan có 5 loài và Lào có 4 loài đã được xác nhận.
Trong số gần 20 loài thuộc chi Balanophora trên toàn cầu, B laxiflora Hemsl được xác định bởi nhà thực vật học William Hemsley vào năm 1894 Loài này hiện có một số đồng danh, trong đó có Polyplethia hexamera.
Tiegh = Acroblastum hexamerum (Tiegh.) Setch = Balanophora hexamera (Tiegh.)
Lecomte = Balanophora indica auct.non (Arn.) Griff [3], [4], [5]
Loài B laxiflora Hemsl đã được ghi nhận ở các quốc gia xung quanh Việt
Nam, cụ thể như ở Trung Quốc tại các tỉnh Quảng Đông, Quảng Tây, Vân Nam, Chiết Giang và đảo Đài Loan [4] Ở Thái Lan, loài B laxiflora Hemsl ghi nhận ở Khao
Luang [5] Ở Lào, một số tài liệu đã ghi nhận về phân bố của loài thực vật này, song chưa có địa điểm cụ thể [3], [4], [5]
1.1.1.2 Ở Việt Nam Ở Việt Nam, họ Balanophoraceae được gọi tên trong Tiếng Việt là họ “Dó đất”
Họ Balanophoraceae, được Bertel Hansen giới thiệu lần đầu tại Việt Nam và ba nước Đông Dương trong tác phẩm "Flora du Cambodge du Laos et du Viet-nam", bao gồm hai chi.
Rhopalocnemis (R phalloides Jungnum) và chi Balanophora (B abreviata Blume, B laxiflora Hemsl, B latisepala (Tiegh.) Lecomte và B fungosa Forst subsp indica
Người Việt Nam đầu tiên đề cập đến họ Balanophoraceae là Phạm Hoàng Hộ (2000) trong bộ “Cây cỏ Việt Nam” quyển II Ông đã chỉ ra hai chi, bao gồm chi Rhopalocnemis với một loài duy nhất là R phalloides Jungnum, và chi Balanophora với năm loài cùng một loài phụ: B abreviata Blume, B elongate Blume, B latisepala (Tiegh.) Lecomte, B fungosa Forst = B fungosa var fungosa Forst, và B fungosa Forst subsp indica (Arn) B Hansen.
Vào năm 2005, khi biên soạn bộ “Danh lục các loài thực vật Việt Nam” tập III, Nguyễn Tiến Bân vẫn khẳng định họ Balanophoraceae ở Việt Nam có 2 chi: chi
Rhopalocnemis có 1 loài như 2 tác giả trước đó, còn chi Balanophora có 7 loài và 1 thứ [8] gồm có: B abbreviata Blume, B cucphuongensis N.T Ban, B elongata
Blume, B fungosa Forst & Forst.f, B fungosa subsp indica (Arn.) B Hansen và thứ
B indica var globosa Ban, B latisepala (Tiegh.) Lecomte và B laxiflora Hemsl Trong số 7 loài và 1 thứ này, có 1 loài mới (B cucphuongensis N.T Ban) và 1 thứ mới (B indica var globosa Ban) do chính tác giả công bố [8] Đáng lưu ý, trong vài năm gần đây (2017-2019), một số tác giả trong nước đã bổ sung 3 loài mới cho Việt Nam (B subcupularis P C Tam [9], B tobiracola
Makino [10], B harlandii Hook f [11]) và công bố mới cho khoa học 1 loài thuộc chi là B aphylla Luu [12] Như vậy, tính đến năm 2019, tổng số loài đã biết thuộc chi
Balanophora, thuộc họ Balanophoraceae, hiện có 11 loài và 1 thứ được ghi nhận tại Việt Nam Dưới đây là bảng thống kê các loài Balanophora cùng với địa điểm phân bố của chúng.
Bảng 1.1 Các loài thuộc chi Balanophora ở Việt Nam
STT Tên khoa học Nơi phân bố đã được ghi nhận TLTK
1 B abbreviata Blume Ninh Bình, Cúc Phương, Quảng Nam [8]
3 B elongata Blume Ninh Bình (Cúc Phương) [8]
4 B fungosa Forst & Forst.f Ninh Bình, Kontum [8]
5 B fungosa subsp indica (Arn.) B Hansen và thứ B indica var globosa Ban
Hà Nam, Đà Nẵng, Khánh Hòa, Kon Tum, Lâm Đồng, Ninh Thuận, An Giang
Thanh Hóa, Khánh Hòa, Ninh Thuận, Đồng Nai, Bà Rịa Vũng Tàu, An Giang
7 B laxiflora Hemsl Ninh Bình, Kontum [8]
8 B subcupularis P C Tam Hà Giang, Điện Biên, Lâm Đồng, Lai
10 B harlandii Hook f Lai Châu, Yên Bái, Quảng Ninh, Lâm Đồng
Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loài toa đường Balanophora laxiflora Hemsley đã chỉ ra những tiềm năng quan trọng trong y học Các thành phần hóa học của loài này có thể đóng góp vào việc phát triển các sản phẩm điều trị hiệu quả cho các bệnh viêm Việc tìm hiểu sâu hơn về đặc tính sinh học và hóa học của Balanophora laxiflora sẽ mở ra hướng đi mới trong nghiên cứu dược liệu.
Trong số 11 loài và 1 thứ thuộc chi Balanophora ở Việt Nam, loài Tỏa dương –
B laxiflora Hemsl có phạm vi phân bố rộng nhất Hiện đã ghi nhận được sự phân bố của loài này tại các tỉnh: Lào Cai, Hà Giang, Cao Bằng, Yên Bái, Tuyên Quang, Ninh Bình, Kontum…
1.1.1.3 Đặc điểm hình thái chung của chi Balanophora Forst & Forst.f Theo thực vật chí Trung Quốc (Flora of China) [13], đặc điểm hình thái chi
TỔNG QUAN VỀ LOÀI TỎA DƯƠNG (Balanophora laxiflora Hemsl.)
Tỏa dương còn gọi là nấm đất, dó đất hoa thưa hay cu chó có tên khoa học là
Balanophora laxiflora Hemsl Theo trang chuyên khảo “The Plant list”, loài B laxiflora còn có tên đồng nghĩa là B spicata Hayata [72] thuộc chi Dó đất
(Balanophora), họ Dó đất (Balanophoraceae) [73]
Theo tác giả Võ Văn Chi, Tỏa dương là loài cây cao khoảng 10 - 20 cm, có màu nâu đỏ và không chứa diệp lục "Củ" của cây hình trứng, đường kính 2 - 2,5 cm, với bề mặt sần sùi và mụn hình sao nổi bật Thân cây mang từ 5 - 10 lá dạng vẩy, phiến lá hình mũi mác dài 2 - 2,5 cm và rộng 1 - 1,5 cm Hoa của cây là đơn tính, khác gốc, với cụm hoa đực hình trụ gồm những hoa gần như không có cuống Bao hoa thường có 6 mảnh, trong đó hai mảnh giữa lớn hơn và cụt đầu Cụm hoa cái hình bầu dục thuôn, có 1 vòi nhụy và không có bao hoa, mọc quanh chân của vảy bảo vệ hình trứng lõm Cụm hoa đực dài đến 20 cm, trong khi cụm hoa cái dài từ 5 - 10 cm và thường đứng riêng biệt Tại Việt Nam, Tỏa dương phân bố chủ yếu ở các tỉnh Ninh Bình, Lào Cai, Hà Giang và Kontum, trong khi trên thế giới, loài này được ghi nhận ở Trung Quốc, Lào và Thái Lan Cây mọc rải rác trong rừng nguyên sinh, ký sinh vào rễ của một số loài cây thuộc họ Moraceae, Sterculiaceae và Tiliaceae, với mùa hoa từ tháng 8 đến tháng 12.
1.2.2 Thành phần hóa học của loài Tỏa dương (Balanophora laxiflora) Đến nay, các nghiên cứu về thành phần hóa học của loài B laxiflora chủ yếu do các nhà khoa học Trung Quốc công bố Các nhóm chất cchính được tìm thấy trong loài Tỏa dương này gồm: tannin, phenylpropanoid đơn giản, lignan, flavonoid, terpenoid, steroid và một số hợp chất khác
Các hợp chất nhóm tannin
Nghiên cứu đầu tiên về thành phần hóa học của loài B laxiflora (B spicata) được công bố bởi nhóm tác giả Zhong Dai vào năm 2006 Từ thân rễ của B spicata, nhóm nghiên cứu đã phân lập thành công hợp chất tannin 1-O-(E)-caffeoyl-.
Năm 2009, Gai-Mei She và các cộng sự tại Học viện Khoa học Bắc Kinh, Trung Quốc đã nghiên cứu và phân lập thành công 9 hợp chất tannin từ cụm cây cái của loài B laxiflora Các hợp chất này bao gồm: 1-O-caffeoyl-β-ᴅ-glucopyranose, 1-O-(E)-caffeoyl-4,6-di-O-galloyl-β-ᴅ-glucopyranose, 1,3-di-O-galloyl-β-ᴅ-glucopyranose, 1,4,6-tri-O-galloyl-β-ᴅ-glucopyranose, 1-O-(E)-caffeoyl-3-O-galloyl-4,6-(S)-HHDP-β-ᴅ-glucopyranose, 1,3-di-O-(E)-caffeoyl-4,6-(S)-HHDP-β-ᴅ-glucopyranose, 1,3-di-O-galloyl-4,6-(S)-HHDP-β-ᴅ-glucopyranose, và 3-O-galloyl-β-ᴅ-glucopyranose.
Nhóm nghiên cứu của Shang-Tse Ho đã phân lập và xác định cấu trúc của 4 hợp chất tannin từ cây đực và cây cái của loài B laxiflora Các hợp chất này bao gồm 1-O-(E)-p-coumaroyl-β-ᴅ-glucopyranose và 1-O-(E)-caffeoyl-β-ᴅ-glucopyranose.
(2), 1-O-(E)-caffeoyl-4,6-(S)-HHDP-β-ᴅ-glucopyranose (28) và 1,3-di-O-galloyl-4,6- (S)-HHDP-β-ᴅ-glucopyranose (34) [18]
Như vậy, cho đến nay đã có 12 hợp chất tannin được phân lập từ loài Tỏa
Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loại toa dương Balanophora laxiflora Hemsley đã được thực hiện Cấu trúc của các hợp chất này được trình bày chi tiết trong hình 1.1 Balanophora laxiflora là một loài thực vật có tiềm năng trong việc phát triển các sản phẩm chống viêm hiệu quả.
Hình 1.1 Cấu trúc các hợp chất tannin phân lập từ loài B laxiflora
Các hợp chất nhóm phenylpropanoid
Từ thân rễ của loài B spicata (B laxiflora) nhóm nghiên cứu của tác giả Zhong Dai đã phân lập được hợp chất ethyl caffeat (81) [23]
Nghiên cứu của Gai-Mei She năm 2009 đã phân lập từ cụm cây đực của loài B laxiflora bốn hợp chất phenylpropanoid đơn giản, bao gồm coniferin, acid caffeic và acid p-coumaric.
Balaxiflorin B (84) là một hợp chất phenylpropanoid mới được công bố, trong khi acid caffeic (69) cũng được tác giả Shang-Tse Ho phân lập từ loài B laxiflora vào năm 2010.
Năm 2011, nhóm nghiên cứu của Wen-fei Chiou đã phân lập và xác định cấu trúc của 4 phenylpropanoid đơn giản từ rễ của loài B laxiflora,bao gồm: coniferin
Nhóm nghiên cứu của Trần Đức Đại tại Việt Nam đã công bố nghiên cứu về thành phần hóa học của loài B laxiflora thu hái tại Tuyên Quang Họ đã phân lập được ba hợp chất phenylpropanoid đơn giản, bao gồm methyl caffeat, ferulyl aldehyd và methyl-4-hydroxycinnamat.
Theo các nghiên cứu tại Việt Nam và trên thế giới, loài B laxiflora đã được phân lập 10 hợp chất phenylpropanoid đơn giản, trong đó các hợp chất 81, 84 và 91 là những hợp chất mới chỉ có ở loài này Cấu trúc của 10 hợp chất này được thể hiện trong hình 1.2.
Hình 1.2 Cấu trúc các phenylpropanoid đơn giản phân lập từ loài B laxiflora
Nhóm nghiên cứu của She Gai-Mei đã phân lập thành công 5 hợp chất lignan từ cụm cây đực của Tỏa dương, bao gồm (-)-pinoresinol-β-ᴅ-glucosid và (-)-isolariciresinol 4-O-β-ᴅ-glucopiranosid, bên cạnh các tannin và phenylpropanoid đơn giản.
Hợp chất lignan 100 là một hợp chất mới được công bố, trong đó nhóm nghiên cứu của Wen-fei Chiou đã phân lập và xác định cấu trúc của ba lignan, bao gồm (-)-pinoresinol, (-)-lariciresinol và seicoisolariciresinol từ rễ loài B laxiflora Tại Việt Nam, nhóm nghiên cứu của Trần Đức Đại cũng đã phân lập thành công hai lignan từ loài B laxiflora.
Theo nghiên cứu, loài B laxiflora đã được xác định chứa 7 hợp chất lignan, trong đó 2 hợp chất, 100 và 108, là đặc trưng chỉ có ở loài này và chưa được phát hiện ở các loài khác thuộc chi Balanophora Những phát hiện này mở ra hướng nghiên cứu mới về tiềm năng hóa học của B laxiflora.
Nghiên cứu về đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loài toa đường Balanophora laxiflora Hemsl cho thấy sự quan trọng của hợp chất lignan, được trình bày trong hình 1.3 Hợp chất này có tiềm năng ứng dụng trong y học nhờ vào khả năng chống viêm hiệu quả.
Hình 1.3 Cấu trúc các hợp chất lignan phân lập từ loài B laxiflora
➢ Các coumarin Theo tổng quan tài liệu cho thấy, hiện nay từ loài B laxiflora mới phân lập được 1 hợp chất coumarin là scopoletin (118) [39]
Hình 1.4 Cấu trúc hợp chất coumarin phân lập từ loài B laxiflora
Như vậy, từ loài B laxiflora đã có tổng cộng 19 hợp chất phenylpropanoid được phân lập
Các hợp chất nhóm flavonoid
Theo các nghiên cứu về thành phần hóa học của loài B laxiflora, số lượng flavonoid được phân lập từ loài này khá hạn chế Đến nay, chỉ có 4 hợp chất flavonoid đã được xác định, bao gồm catechin và quercetin.
TỔNG QUAN VỀ VIÊM
Viêm là một quá trình bệnh lý phổ biến, xuất hiện ở nhiều loại bệnh và do nhiều nguyên nhân khác nhau Mọi cơ quan và mô trong cơ thể đều có thể bị viêm, với nhiều yếu tố cụ thể gây ra tình trạng này Khái niệm về viêm đã được y học biết đến từ rất sớm, thậm chí trước công nguyên, và đã có sự phát triển theo thời gian nhờ vào những tiến bộ trong lĩnh vực y học.
Viêm là phản ứng tại chỗ của cơ thể do mô bị kích thích hoặc tổn thương, biểu hiện qua triệu chứng sưng, nóng, đỏ, đau và rối loạn chức năng Đây là một phản ứng bảo vệ chống lại yếu tố gây bệnh, nhưng cũng có thể gây tổn thương nghiêm trọng cho cơ thể, dẫn đến hoại tử và rối loạn chức năng Quá trình viêm là sự kết hợp phức tạp giữa điều hòa và phản ứng, xảy ra ở bộ máy liên kết và vi mạch, gây ra rối loạn về hóa ứng động và tính thấm thành mạch, dẫn đến thoát huyết tương, xuyên bạch cầu, tăng sinh tế bào và hiện tượng thực bào.
Viêm có thể do nhiều nguyên nhân, bao gồm nguyên nhân bên ngoài như cơ học, vật lý, hóa học và sinh học, cũng như nguyên nhân bên trong như thiếu oxy tại chỗ, hoại tử mô, xuất huyết, rối loạn thần kinh dinh dưỡng và phản ứng kháng nguyên – kháng thể.
Viêm có thể được phân loại theo nhiều tiêu chí khác nhau, bao gồm nguyên nhân gây bệnh như virus, vi khuẩn và ký sinh trùng; vị trí viêm như viêm nông và viêm sâu; loại dịch rỉ viêm như viêm thanh dịch, viêm tơ huyết và viêm mủ; diễn biến bệnh với viêm cấp và viêm mạn; và các đặc điểm tính chất của viêm.
Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loại toa đường Balanophora laxiflora Hemsley cho thấy tiềm năng ứng dụng trong y học Các hợp chất hóa học có trong cây này có thể đóng góp vào việc phát triển các phương pháp điều trị hiệu quả cho các bệnh viêm Việc hiểu rõ về đặc điểm sinh học và thành phần hóa học của Balanophora laxiflora sẽ mở ra hướng đi mới trong nghiên cứu dược liệu.
(viêm đặc hiệu và không đặc hiệu)
Trong viêm, có ba biến đổi chủ yếu: rối loạn tuần hoàn, rối loạn chuyển hóa, và tổn thương mô kèm theo tăng sinh tế bào, tất cả đều liên quan chặt chẽ với nhau Trong viêm cấp tính, yếu tố viêm gây ra hiện tượng co mạch sớm, sau đó là giãn tiểu động mạch dẫn đến sung huyết động mạch và tĩnh mạch, làm thay đổi cấu trúc vi tuần hoàn Điều này cho phép protein huyết tương thoái khỏi mạch và bạch cầu xuyên mạch xuất hiện tại ổ viêm, tạo ra dịch rỉ viêm, gây ra các triệu chứng sưng, nóng, đỏ, và đau Những biểu hiện này là cơ sở để nghiên cứu tác dụng chống viêm của thuốc trong các mô hình viêm cấp tính thực nghiệm.
1.3.2 Các chất trung gian hóa học trong phản ứng viêm
➢ Các chất có nguồn gốc tế bào:
Prostaglandin là sản phẩm chuyển hóa của acid arachidonic, được hình thành khi tế bào bị tổn thương và màng phospholipid của tế bào được kích hoạt bởi phospholipase A Có hai loại enzym COX, là COX-1 và COX-2; COX-1 có mặt ở hầu hết các mô và tham gia vào việc tổng hợp prostaglandin sinh lý, trong khi COX-2 chỉ xuất hiện ở các mô bị tổn thương, đóng vai trò tạo ra các prostaglandin gây viêm Nồng độ COX-2 trong tế bào thường rất thấp, nhưng trong các mô viêm, nó có thể tăng cao gấp 80 lần so với bình thường do sự kích thích từ các tế bào tham gia vào phản ứng viêm Trong viêm cấp, các mô và mạch máu sản xuất PGE 2 và PGI 2, trong khi trong viêm mạn, các bạch cầu đơn nhân và đại thực bào giải phóng PGE 2 và TXA 2.
Leucotrien là sản phẩm được tạo ra từ sự chuyển hóa acid arachidonic qua con đường lipoxygenase (LOX), bên cạnh con đường COX Chúng chủ yếu được tổng hợp bởi các tế bào viêm như bạch cầu đa nhân, đại thực bào và dưỡng bào Đặc biệt, Leucotrien B4 có vai trò quan trọng trong hóa ứng động, kích thích bạch cầu đa nhân trung tính, bạch cầu đơn nhân và một số tế bào lympho, đồng thời thúc đẩy sự bám dính của bạch cầu đa nhân trung tính vào tế bào nội mô, kích thích sự tăng sinh và sản xuất cytokine từ đại thực bào và lympho bào.
Cytokin là glycoprotein được sản xuất chủ yếu từ lympho bào và đại thực bào, bao gồm lymphokin từ tế bào lympho và monokin từ tế bào đơn nhân, thường được gọi chung là interleukin (IL) Chúng điều hòa hoạt động của các hệ thống cơ quan và tham gia vào mọi giai đoạn của đáp ứng viêm, từ khởi đầu đến sửa chữa Tại vị trí tổn thương, các cytokine như IL-1, IL-6 và TNF-α tác động lên nguyên bào xơ và tế bào nội mô, gây tổn thương tế bào và giải phóng các chất sinh lý làm giãn mạch và tăng tính thấm thành mạch, đồng thời thu hút bạch cầu đến ổ viêm, trong đó IL-8 đặc biệt hóa ứng động bạch cầu đa nhân trung tính Toàn thân, IL-1, IL-6 và TNF-α tác động lên vùng dưới đồi, làm tăng thân nhiệt, tổng hợp ACTH và hydrocortison Ngoài ra, các cytokine này còn kích thích tế bào gan sản xuất protein phản ứng C (CRP), giúp thu hút bổ thể và tạo phức hợp hấp dẫn cho các thực bào.
Các loại oxy phản ứng (ROS) bao gồm các gốc tự do như OH•, O2•-, ROO• và các phân tử oxy hóa mạnh như H2O2, NO, ROOH Gốc oxy tự do hình thành trong ti thể của đại thực bào đã hoạt hóa và có khả năng tiêu hủy đối tượng thực bào Trong quá trình viêm, khi đại thực bào bị ly giải, gốc tự do sẽ tràn ra ngoài, dẫn đến quá trình peroxyd hóa lipid màng tế bào Điều này làm tăng tính thấm mạch, tạo điều kiện cho việc giải phóng acid arachidonic và phospholipid màng tế bào, từ đó tổng hợp các chất trung gian hóa học gây viêm.
Nitơ oxid (NO) liên kết với nửa Hem trên guaniyl cyclase, kích hoạt enzym này và dẫn đến sự gia tăng guanosin monophosphat vòng Quá trình này làm giãn cơ trơn của huyết quản, gây giãn mạch, tăng tính thấm của thành mạch và thúc đẩy sản xuất các yếu tố sinh học khác.
PG viêm là một yếu tố quan trọng trong quá trình viêm nhiễm Nitric oxide (NO) được sản xuất bởi đại thực bào không chỉ giúp giản tụ tập và kết dính tiểu cầu mà còn hoạt động như các gốc tự do, gây độc cho tế bào vi khuẩn, nấm, virus và tế bào ung thư Tuy nhiên, việc đại thực bào sản xuất quá nhiều NO khi bị kích hoạt có thể gây hại cho cơ thể.
Nghiên cứu về Balanophora laxiflora Hemsl đã chỉ ra những đặc điểm thực vật quan trọng, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loại toa đường này Loài thực vật này có khả năng giãn mạch nặng và có thể gây choáng trong trường hợp sốc nhiễm khuẩn, cho thấy tiềm năng ứng dụng trong y học.
➢ Các chất trung gian có nguồn gốc huyết tương
Bao gồm: hệ thống bổ thể, hệ thống đông máu, hệ thống tiêu tơ huyết, hệ thống kinin và các globulin miễn dịch [86], [89]
Hệ thống bổ thể đóng vai trò quan trọng trong việc diệt khuẩn thông qua các thành phần cuối của nó Khi được kích hoạt từ C1 đến C5, hệ thống này không chỉ gia tăng phản ứng viêm nhờ các sản phẩm phụ như C3a và C5a mà còn tham gia vào quá trình opsonin hóa, hóa hướng động bạch cầu và thoát hạt tế bào mast.
Hệ thống đông máu đóng vai trò quan trọng trong việc ngăn chặn sự phát tán của vi khuẩn, bảo vệ cơ thể khỏi các tác nhân gây hại Nó hoạt động mạnh mẽ tại các vị trí có sự hiện diện của vi khuẩn và các vật lạ, tạo ra một bộ khung hỗ trợ cho quá trình sửa chữa và lành vết thương.
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
➢ Mẫu nghiên cứu về thực vật học
Tỏa dương, bao gồm lá, thân, rễ và hoa, đã được thu hái tại xã Bản Khoang, thị xã Sa Pa, tỉnh Lào Cai vào tháng 11/2015 và tháng 10/2017 Các mẫu tiêu bản cây hiện được lưu giữ tại Khoa Tài nguyên Dược liệu - Viện Dược liệu (TB-16409) và Phòng Thực vật học – Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật (BSp2).
Hình 2.1 Tỏa dương (Balanophora laxiflora Hemsl.)
A Cụm hoa cái, B: Cụm hoa đực, C: Dược liệu
➢ Mẫu nghiên cứu về hóa học và sinh học
Mẫu cây Tỏa dương được thu hái tại xã Bản Khoang, thị xã Sa Pa, tỉnh Lào Cai vào tháng 11 năm 2015 Sau khi thu hái, cây được thái nhỏ, rửa sạch và sấy khô ở nhiệt độ 50°C Mẫu dược liệu hiện đang được lưu giữ tại Khoa Hóa Thực vật - Viện Dược liệu (BSp2) và Phòng Cấu trúc – Viện Hóa Sinh biển – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam (NCCT-P01).
Cao toàn phần ethanol, cao phân đoạn, n-hexan, EtOAc, nước và các chất tinh khiết được phân lập từ các phân đoạn tiềm năng có tác dụng chống viêm, được áp dụng trong nghiên cứu tác dụng sinh học.
2.1.2 Động vật thí nghiệm
Chuột cống trắng Wistar, giống đực từ 8 - 10 tuần tuổi và nặng từ 140 - 160 g, được cung cấp bởi Học viện Quân y, đã được nuôi ổn định trong điều kiện phòng thí nghiệm tại Bộ môn Dược lực, Trường Đại học Dược Hà Nội ít nhất 5 ngày trước khi tiến hành nghiên cứu Chúng được cho ăn bằng thức ăn tiêu chuẩn từ Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương và có nước uống tự do.
2.1.3 Thuốc thử, hóa chất, dung môi
➢ Nghiên cứu thực vật : Ethanol đạt tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam V
- Định tính: Ethanol, nước cất, chì acetat 30%, chì acetat 10%, thuốc thử ninhydrin
The article lists various chemical reagents and substances essential for laboratory applications, including 3% solutions of Fehling A and B, Lugol's solution, 0.5% sodium nitroprusside, anhydrous sodium sulfate, sodium carbonate crystals, metallic magnesium powder, acetic anhydride, 1% gelatin solution, chloroform, concentrated hydrochloric acid, concentrated ammonia, 5% ferric chloride solution, and 5% sodium hydroxide solution, all meeting the standards of the Vietnamese Pharmacopoeia V.
- Chiết xuất, phân lập và xác định cấu trúc:
+ Dung môi hóa chất dùng trong chiết xuất phân lập: Ethanol (EtOH), n-hexan (Hx), ethyl acetat (EtOAc), methanol (MeOH), dichloromethan (DCM), aceton (Ace) đạt tiêu chuẩn công nghiệp
+ Dung môi đo phổ: DMSO-d 6 , CD 3 OD, CDCl 3 + Dianion HP-20, silica gel (cỡ hạt 0,04 - 0,063 mm, Merck), silica gel pha đảo YMC
(30 - 35 μm, FuJisilisa Chemical Ltd), sephadex LH-20
+ Sắc ký lớp mỏng được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60F 254
+ Dung dịch H 2 SO 4 10% trong ethanol 96%
+ MTPA, N,N-dimethyl-4-aminopyridin (4-DMAP), L-cystein methyl ester hydrochlorid, pyridin, o-tolyl isothiocyanat (Sigma-Aldrich)
➢ Nghiên cứu tác dụng sinh học:
• Thử tác dụng chống oxy hóa: Nitroblue tetrazolium (NBT), xanthin oxidase từ sữa bò (0,8 U/mg protein, 13 mg protein/ml), allopurinol, xanthin ≥ 99% (Sigma
Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loài toa đường Balanophora laxiflora Hemsley đã được thực hiện Bài viết cung cấp cái nhìn sâu sắc về các yếu tố sinh học và hóa học của loài cây này, đồng thời nhấn mạnh tiềm năng ứng dụng của nó trong y học, đặc biệt là trong điều trị các bệnh viêm Những phát hiện từ nghiên cứu này có thể mở ra hướng đi mới trong việc phát triển các sản phẩm tự nhiên có tác dụng chống viêm hiệu quả.
Aldrich), quercetin (90,32%, Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương), Na 2 HPO 4 ,
KH 2 PO 4 , HCl, NaOH, dimethyl sulfoxid (Merck)
• Nghiên cứu tác dụng chống viêm in vitro
- Chất gây viêm LPS (Sigma Aldrich, St Louis, MO, Mỹ)
- Huyết thanh bò (fetal bovine serum, FBS), môi trường nuôi cấy tế bào (Dulbecco’s modified Eagle’s medium, DMEM) và trypsin (Gibco BRL, Grand Island, NY, Mỹ)
- COX-2 (1:1000, lô 610204), COX-2 (Ptgs2, lô QT00165347), β-actin (lô A5316,
- Kháng sinh penicillin, streptomycin (Biochrom, Đức), NaCl, Tris, (Sigma, St Louis,
MO, Mỹ), dung dịch đệm phosphate-buffered saline, PBS (Sigma Aldrich, Mỹ)
- Tế bào RAW 264.7 (ATCC, Rockville, MD)
- Kit thí nghiệm Luciferase và MTS (Promega , Madison, WI, Hoa Kỳ)
- Kháng thể Primary antibodies (anti-COX-2, COX-2 và anti-β-actin) (Santa Cruz Biotechnology, CA, Mỹ)
- N-acetylcystein (NAC) (Hyclone Laboratories, South Logan, UT, Mỹ), Chloromethyl-2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate (CM-H2DCFDA) (Molecular Probes, Eugene, OR, Mỹ)
- Diphenyleneiodonium chlorid (DPI) (Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY, Mỹ)
- Kháng thể đặc hiệu cho p38MAPK, ERK, JNK (Cell Signaling Technology Inc, Beverly, MA, Mỹ)
➢ Nghiên cứu tác dụng chống viêm in vivo: indomethacin và prednisolon được cung cấp bởi Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương; carrageenan Sigma Aldrich (Mỹ)
- Kính hiển vi soi nổi Axio CamErc 5s (Đức)
- Máy ảnh kỹ thuật số Canon EOS 700D (Nhật Bản)
Máy đo phổ khối lượng ion hóa phun điện tử ESI-MS: Agilen 1100 LC-MSD Tram (Mỹ) là thiết bị hiện đại được sử dụng tại Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam Thiết bị này hỗ trợ phân tích và xác định cấu trúc các hợp chất hóa học một cách chính xác và hiệu quả.
Agilent 1260 Series Single Quadrupole LC/MS Systems (Mỹ) của Viện Hóa Sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam
Máy đo phổ khối độ phân giải cao HR-ESI-MS Agilent 910 TQ-FTMS, được sử dụng tại Viện Hóa Sinh biển thuộc Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, là một thiết bị tiên tiến giúp phân tích và xác định thành phần hóa học với độ chính xác cao.
- Máy đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer (Đức) của Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam
- Máy đo phổ CD: Chirascan TM CD spectrometer (Applied Photophysics Ltd., Surrey, Anh) của Viện Hóa Sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam
- Máy đo độ quay cực JASCO P-2000 polarimeter (Nhật) và máy đo nhiệt độ nóng chảy GALLENKAMP (Sanyo, Nhật Bản), Khoa Hóa Phân tích – Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu
- Mỏy HPLC Agilent infinity II 1290, cột Zorbax C 18 (50 ì 2,1 mm, 1,8 àm), tốc độ dũng 300 àL/phỳt, detector UV 250 nm
- Máy cất quay Buchi các loại (Đức)
- Tủ sấy Memmert, Binder-FD115 (Đức)
- Cân phân tích Precisa 262MA-FR (Thụy Sĩ)
- Cột thủy tinh các loại
- Các dụng cụ cần thiết trong phòng thí nghiệm
➢ Nghiên cứu tác dụng sinh học
- Máy đo quang microplate reader (BMG Labtech Inc., Orten-TROstar, Đức)
- Máy điện di Western blot (LAS 4000, Nhật Bản)
- Máy qPCR SYBER Green Capillary Mix (Thermo Scientific, Louborough, Anh)
- Hệ thống máy FACS Calibur (BD science, Thụy Sĩ)
- Hệ thống ELISA gồm máy đọc khay vi tinh thể (Biotek) và máy ủ lắc khay (Awareness)
- Máy đo thể tích chân chuột Plethysmometer (Ugo Basile, Ý).
ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU
- Khoa Tài Nguyên dược liệu – Viện Dược liệu
- Phòng Thực vật – Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật
Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loài toa đường (Balanophora laxiflora Hemsley) đã chỉ ra những đặc tính nổi bật của loài này Các thành phần hóa học trong Balanophora laxiflora có khả năng chống viêm hiệu quả, góp phần nâng cao hiểu biết về ứng dụng của thực vật trong y học Nghiên cứu này mở ra hướng đi mới trong việc khai thác tiềm năng dược liệu từ thiên nhiên.
- Khoa Hóa Thực vật - Viện Dược liệu
- Phòng Cấu trúc, Viện Hóa Sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam
➢ Nghiên cứu tác dụng sinh học
- Bộ môn Dược lực, Trường Đại học Dược Hà Nội
- Khoa Khoa học Y khoa thực nghiệm, Đại học Lund, Thụy Điển
- Khoa Dược, Đại học Yeungnam, Hàn Quốc.
THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU
Thiết kế nghiên cứu luận án được trình bày tóm tắt trong sơ đồ 2.2.
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.1 Phương pháp nghiên cứu thực vật
Tại xã Bản Khoang, thị xã Sa Pa, tỉnh Lào Cai, việc quan sát và mô tả đặc điểm hình thái thực vật được thực hiện cả tại thực địa lẫn trong phòng thí nghiệm Nghiên cứu này giúp hiểu rõ hơn về sự đa dạng và đặc trưng của hệ thực vật địa phương, đồng thời cung cấp thông tin quý giá cho các nghiên cứu sinh học và bảo tồn Việc kết hợp giữa quan sát thực tế và phân tích trong phòng thí nghiệm sẽ mang lại cái nhìn toàn diện hơn về các loài cây tại khu vực này.
- Thu hái, làm tiêu bản mẫu cây và lưu giữ tiêu bản: mẫu được ép, sấy khô và khâu trên bìa cứng
Nghiên cứu vi học bao gồm việc cắt và làm tiêu bản vi phẫu của lá, thân và rễ của cây tỏa dương Qua đó, các đặc điểm bột của cây được quan sát và mô tả chi tiết Hình ảnh tiêu bản được chụp dưới kính hiển vi để minh họa các đặc điểm nổi bật.
2.4.2 Phương pháp nghiên cứu hóa học
2.4.2.1 Phương pháp định tính Định tính sơ bộ các nhóm chất có trong dược liệu bằng các phản ứng hóa học đặc trưng [110]
2.4.2.2 Phương pháp chiết xuất, phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất
- Chiết xuất dược liệu bằng phương pháp chiết hồi lưu với dung môi EtOH 80% và chiết bằng phương pháp siêu âm với dung môi MeOH
- Phân đoạn bằng dung môi có độ phân cực tăng dần: n-hexan và EtOAc
Phân lập các hợp chất bằng phương pháp sắc ký cột và theo dõi các phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng là quy trình quan trọng trong hóa học Sắc ký cột được thực hiện với các chất hấp phụ như silica gel pha thường, pha đảo, Sephadex LH-20 và Dianion HP-20 Để kiểm tra độ tinh khiết và theo dõi các phân đoạn, sắc ký lớp mỏng được sử dụng Việc phát hiện chất được thực hiện bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 365 nm hoặc bằng dung dịch thích hợp.
Xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất phân lập dựa trên các thông số vật lý như màu sắc, nhiệt độ nóng chảy, độ tan và góc quay cực Ngoài ra, việc phân tích dữ liệu phổ như NMR và MS cũng đóng vai trò quan trọng trong quá trình này.
IR, UV và CD được sử dụng để phân tích và so sánh với dữ liệu phổ từ tài liệu tham khảo Cấu trúc của các chất mới được xác định thông qua hệ thống SciFinder.
➢ Thủy phân xác định cấu hình đường [111]
Hợp chất BL6 (2,0 mg) và BL9 (8 mg) được hòa tan trong 1,0 mL dung dịch
HCl 1,0 N được pha trộn với dioxan/H2O theo tỷ lệ 1/1 (v/v) và đun nóng ở 80°C trong 3 giờ bằng nồi cách thủy Dung dịch acid sau đó được trung hòa bằng bạc carbonat, và dung môi được loại bỏ hoàn toàn bằng khí N2 qua đêm Cuối cùng, hỗn hợp phản ứng được chiết xuất.
Nghiên cứu về đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loài toa đường (Balanophora laxiflora Hemsl) đã được thực hiện Qua quá trình chiết xuất, phần chloroform chứa aglycon và phần nước chứa đường đã được tách biệt Phần nước được xử lý trong chõn khụng, trong khi phần chloroform được hòa tan với 100 µL dung dịch L-cystein methyl ester hydrochloride (1,0 mg) trong pyridin và đun nóng ở 60°C trong 1 giờ Sau đó, 100 µL dung dịch o-tolyl isothiocyanat (1,0 mg) trong pyridin được thêm vào và tiếp tục đun nóng ở 60°C thêm 1 giờ Sản phẩm thiocarbamoylthiazolidin được phân tích bằng hệ thống Agilent Infinity II 1290 HPLC với cột Zorbax C18.
(50 ì 2,1 mm, 1,8 àm), tốc độ dũng 300 àL/phỳt, ACN/nước (20% ACN), detector
UV 250 nm So sánh thời gian lưu của dẫn xuất với thời gian lưu đường chuẩn D, L- glucose (dẫn xuất D-glucose có t R = 14,6 và L-glucose t R = 13,2)
➢ Xác định cấu hình tuyệt đối bằng phản ứng Mosher [112]
Phần aglycon của hợp chất BL9 sau khi được thủy phân và làm khô hoàn toàn sẽ được chia thành hai phần bằng nhau Mỗi phần sẽ được hòa tan trong 200 µL chloroform và phản ứng với R hoặc S-MTPA-Cl.
MTPA-Cl (10 àL) được phản ứng với chất xúc tác 4-DMAP (2 mg) ở nhiệt độ phòng Sau khi kết thúc phản ứng, thêm 200 àL chloroform và rửa hỗn hợp bằng HCl 5% (400 àL) và nước (400 àL) Lớp hữu cơ được bay hơi và sản phẩm được tinh chế bằng TLC với hệ n-hexan/aceton (2:1, v/v), thu được ester (S)-MTPA (3,4 mg) và ester (R)-MTPA (2,5 mg).
➢ Phương pháp tính toán phổ CD lý thuyết
Cấu dạng được tìm kiếm và tối ưu hóa trên chương trình Spartan 14, với tính toán lý thuyết thực hiện qua Gaussian 09 Phổ CD sẽ được thiết lập dựa trên các cấu dạng bền sau khi hiệu chỉnh theo hệ số phân bố Boltzmann, sử dụng phần mềm SpecDis v1.64.
2.4.3 Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý
2.4.3.1 Phương pháp đánh giá hoạt tính chống viêm in vitro
➢ Nuôi cấy tế bào: Tế bào RAW 264.7 được đặt mua từ trung tâm lưu trữ tế bào Hàn
Quốc (KCLB, Seoul, Hàn Quốc) được nuôi cấy ở nhiệt độ 37°C với điều kiện 95% O2 và 5% CO2 trong môi trường DMEM có bổ sung 10% FBS và 1% kháng sinh penicillin - streptomycin Trong tất cả các thí nghiệm, tế bào được nuôi đến mật độ 80% - 90% và không vượt quá 20 lần phân chia tế bào.
➢ Thử nghiệm khả năng sống sót của tế bào
Tế bào RAW 264.7 được nuôi cấy trong đĩa 96 giếng với mật độ 5×10^4 tế bào mỗi giếng Sau khi ủ qua đêm, các tế bào được xử lý bằng mẫu thử, cụ thể là hợp chất BL23, ở các nồng độ 1 và 3.
Trong nghiên cứu này, tế bào sống được ủ và nhuộm màu trong môi trường nuôi cấy chứa MTS trong vòng 2 giờ Tỷ lệ tế bào sống được xác định thông qua phương pháp đo quang ở bước sóng 490 nm, cho phép đánh giá hiệu quả của các tác nhân trong khoảng thời gian 24 giờ.
Phần trăm sống sót của tế bào được tính theo công thức:
VC (%) = OD thử /OD chứng x 100%
VC (%): Phần trăm sống sót của tế bào RAW 264.7
OD là mật độ quang ở bước sóng λ = 490 nm
➢ Chiết tách ARN và định lượng RT-PCR
Tế bào được cấy vào đĩa 35 mm với mật độ 1×10^6 tế bào/đĩa và ủ qua đêm Sau đó, tế bào được xử lý với LPS (100 ng/mL) có hoặc không có dung dịch mẫu thử và tiếp tục ủ trong 18 giờ Các tế bào sau đó được thu thập để thực hiện qRT-PCR theo quy trình đã mô tả trước đó ARN tổng số được chiết tách bằng miRNeasy Mini Kit (Qiagen, MD, USA) theo hướng dẫn của nhà sản xuất Xét nghiệm RT-qPCR được thực hiện với bộ kit QuantiFast SYBR Green RT-PCR trên hệ thống StepOnePlus Real-time PCR (Applied Biosystems, US) Phương pháp Ct so sánh (∆∆ Ct) được sử dụng để tính toán mức độ biểu hiện mRNA, với các đoạn mồi khuếch đại gen mục tiêu được cung cấp bởi Qiagen.
Gen Mồi xuôi Mồi ngược
INF-β GCCTTTGCCATCCAAGAGATGC ACACTGTCTGCTGGTGGAGTTC iNOS GAGACAGGGAAGTCTGAAGCAC CCAGCAGTAGTTGCTCCTCTTC
Luận án tiến sĩ nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loại toa đường Balanophora laxiflora Hemsl Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích các đặc tính sinh học và hóa học của Balanophora laxiflora, nhằm xác định khả năng chống viêm của loài thực vật này Kết quả nghiên cứu có thể cung cấp thông tin quý giá cho việc phát triển các sản phẩm y học từ thiên nhiên, đồng thời mở ra hướng đi mới trong việc ứng dụng các thành phần tự nhiên trong điều trị bệnh viêm.
➢ Đo hoạt tính của enzym NADPH oxidase (NOX)
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU THỰC VẬT HỌC
3.1.1 Đặc điểm hình thái thực vật
Trong quá trình nghiên cứu, mẫu cây Tỏa dương được khảo sát và thu hái thành
Vào tháng 11 năm 2015 và tháng 10 năm 2017, hai đợt khảo sát đã được thực hiện tại vùng núi thị xã Sa Pa, tỉnh Lào Cai Qua phân tích đặc điểm hình thái của rễ, thân, lá, hoa và quả, mẫu cây được xác định có tên khoa học là Balanophora laxiflora Hemsl., thuộc họ Dó đất (Balanophoraceae) Các quan sát về đặc điểm giải phẫu của các bộ phận cây được thực hiện cả tại thực địa và trong phòng thí nghiệm, đồng thời đối chiếu với khóa phân loại thực vật của chi Balanophora trong các tài liệu.
Cây cỏ Việt Nam của Phạm Hoàng Hộ [123] và thực vật chí Trung Quốc [13] đã được nghiên cứu và giám định bởi GS.TS Trần Thế Bách từ Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật, cùng với PGS.TS Phạm Thanh Huyền thuộc Khoa Tài nguyên dược liệu, Viện Dược liệu (Phụ lục 1).
Cây đơn tính khác gốc là loại cây sống ký sinh trên rễ một số loài cây khác, không có diệp lục và có màu sắc từ đỏ đến đỏ đậm hoặc hơi nâu vàng, đôi khi là đỏ tía Thân rễ của cây có dạng nạc, phân nhánh, gần giống hình cầu với kích thước 1 - 4 x 1 - 3,5 cm, bề mặt sần sùi màu nâu vàng và được bao phủ bởi nhiều đốm thô ráp màu vàng nhạt hình sao Lá cây từ 8 - 14 chiếc, mọc so le và ôm lấy gốc, có hình dạng thuôn dài khoảng 1,5 cm.
- 2,5 x 1 - 1,5 cm, đầu nhọn Cuống hoa 5 - 10 cm Cụm hoa đực hình trụ, kích thước 3
Cây có chiều cao từ 18 đến 20 cm với chóp nhọn, hoa đực gần như không cuống và đối xứng hai bên Hoa nhỏ được xếp thành các vòng đều đặn trên trục hoa, bao hoa có màu đỏ hoặc đỏ cam và chia thành 6 phần.
Cây có thùy 2 - 3 mm, với 2 thùy giữa lớn hơn và cụt đầu, các mảnh bên hình trứng hoặc tam giác; khối phấn bị ép ngang Hoa có dạng đĩa, đường kính 4,5 - 7 mm, bao phấn vỡ thành nhiều ô và mở bằng đường rạch ngắn Cụm hoa cái hình cầu hoặc trứng, kích thước 2 - 6 x 0,8 - 2 cm, có đỉnh nhọn Hoa cái gần chùy, dạng trứng ngược hoặc bầu dục thuôn, dài đến 1,5 mm, không có bao hoa, mọc quanh chân của vảy bảo vệ; vảy hình trứng lõm ở đỉnh, kích thước 0,1 - 0,2 x 0,2 mm; vòi nhụy dài 0,3 - 0,5 mm.
Sinh học và sinh thái của loài thực vật này thường được nhận diện khi chúng ra hoa, nổi bật trên mặt đất Chúng thường mọc thành từng cụm, bao gồm nhiều cá thể riêng lẻ hoặc có thể liên kết với nhau thông qua hệ rễ của cây chủ.
Ra hoa tháng 10 - 12 Sinh sản vô tính bằng cách đẻ nhánh Cây ưa ẩm, ưa bóng;
Balanophora laxiflora Hemsley, một loại thực vật ký sinh, thường xuất hiện trên rễ của một số cây thuộc họ Sterculiaceae và Tiliaceae Loại cây này phát triển dọc theo ven suối và dưới tán rừng kín thường xanh, tại các khu vực có độ cao từ 600 đến 2300 mét Điều kiện khí hậu nơi chúng sinh sống là khí hậu nhiệt đới gió mùa với nhiệt độ trung bình năm dao động từ 18 đến 22 độ C Nghiên cứu về đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của Balanophora laxiflora Hemsley đang được tiến hành để hiểu rõ hơn về tiềm năng ứng dụng của loài cây này.
Phân bố của các khu vực thiên nhiên nổi bật tại Việt Nam bao gồm: Hà Giang, Lào Cai (Fansipan), Ninh Bình (Cúc Phương), Hà Tĩnh (Hương Sơn), Kon Tum (Ngọc Guga, Ngọc Pan), Chư Mom Ray, Chư Yang Sin, Lâm Đồng (Bidoup - Núi Bà), Khánh Hòa (Khu BTTN Hòn Bà) và An Giang.
Thế giới: Trung Quốc, Đài Loan, Lào
Tình trạng: Loài có khu phân bố chia cắt, số cá thể gặp thường rất ít, thường bị khai thác lấy nguyên liệu làm thuốc
Hình 3.1 Hình thái cụm hoa đực
A1: Cây đực mang cụm hoa; A2: lá; A3: Lát cắt ngang cụm hoa; A4: Lát cắt dọc cụm hoa; A5: vảy hình sao; A6: Cắt dọc hoa đực; A7-A8: Hoa không cuống dạng đĩa
Hình 3.2 Hình thái cụm hoa cái
Cây cái có cụm hoa lớn, với vảy hình sao Cụm hoa cái phóng to cho thấy hoa cái non dạng chùy, được bảo vệ bởi các vảy màu trắng Khi hoa cái chín, chúng có hình dạng bầu dục và vảy bảo vệ màu vàng Các hoa cái đã già có thể được nhận diện rõ ràng, với vảy bảo vệ kèm theo vòi nhụy.
3.1.2.1 Đặc điểm vi phẫu thân, rễ, lá
Nghiên cứu và so sánh giữa cây đực và cây cái cho thấy không có sự khác biệt về đặc điểm vi phẫu Do đó, các mô tả về cấu trúc giải phẫu dưới đây sẽ áp dụng chung cho cả hai loại cây của loài Toả dương.
• Đặc điểm vi phẫu thân khí sinh
Thiết diện ngang thân hình tròn hoặc gần tròn Cấu tạo vi phẫu thân gồm chủ
Nghiên cứu về đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loài toa đường (Balanophora laxiflora Hemsley) cho thấy các mô mềm, mô mạch và mô nâng đỡ phát triển kém Biểu bì của cây gồm một hàng tế bào nhỏ xếp sát nhau, trong khi mô mềm ở vùng vỏ chứa nhiều chất tiết Bên trong mô mềm, có sự hiện diện của các giọt dầu và sợi cứng Hệ thống bó mạch bao gồm libe bao quanh các mạch gỗ, với mạch gỗ cấp I có dạng xoắn và phát triển rất kém.
Hình 3.3 Vi phẫu thân khí sinh
1 Biểu bì, 2 Mô mềm; 3 Libe cấp I; 4 Gỗ cấp I; A Vùng vỏ; B Vùng lõi; a Giọt dầu; b Mảnh mạch gỗ cấp I dạng xoắn; c Sợi
• Đặc điểm vi phẫu thân rễ
Lớp bần gồm các tế bào hình trứng hoặc hình cầu sắp xếp lộn xộn, trong khi mô mềm chiếm phần lớn thể tích thân rễ với các tế bào lớn, thành mỏng chứa chất tiết và giọt dầu, tập trung nhiều ở vùng ngoài Các bó mạch nằm rải rác trong mô mềm, được phân cách bởi 4-5 hàng tế bào hóa gỗ, với các tế bào thường hẹp dài và kích thước khác nhau Cấu tạo bó mạch tương tự như ở rễ, nhưng mạch gỗ cấp I có kích thước nhỏ hơn; libe cấp I có cấu trúc dạng kết tầng với các đám sợi phân bố trong libe Tia ruột tỏa ra từ tâm phân cắt các bó mạch, tạo thành hình nan quạt.
Hình 3.4 Cấu tạo vi phẫu thân rễ, bó mạch
1.Bần; 2 Chất tiết; 3 Mô mềm; 4 Gỗ; 5 Sợi; 6 Libe cấp I; 7 Gỗ cấp I;
A Bó mạch dạng vòng; B Bó mạch dạng xoắn
• Đặc điểm vi phẫu lá
Lá có thiết diện cắt ngang hình thuyền, không có mấu lồi do thiếu hệ gân Cấu tạo chủ yếu của lá là các tế bào mô mềm, trong đó mô nâng đỡ và mô mạch phát triển kém Biểu bì gồm một lớp tế bào nhỏ, xếp sát nhau, trong khi mô mềm chứa các tế bào kích thước không đều và sắp xếp so le Mô mềm còn có các giọt dầu rải rác cùng với các sợi.
Hình 3.5 Cấu tạo vi phẫu lá
1 Biểu bì trên; 2 Mô mềm; 3 Giọt dầu; 4 Biểu bì dưới; 5 Sợi; 6 Chất tiết
Luận án tiến sĩ nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loại toa đường Balanophora laxiflora Hemsl Nghiên cứu này nhằm làm rõ các đặc điểm sinh học và hóa học của loài thực vật này, đồng thời đánh giá khả năng chống viêm, góp phần vào việc phát triển các phương pháp điều trị mới trong y học Kết quả từ nghiên cứu sẽ cung cấp thông tin quý giá cho các nhà khoa học và chuyên gia trong lĩnh vực dược liệu.
• Đặc điểm vi phẫu rễ
Lát cắt vi phẫu của rễ tròn hoặc gần tròn cho thấy cấu trúc từ ngoài vào trong bao gồm lớp bần với 4 - 8 lớp tế bào hẹp dài, tiếp theo là lớp mô mềm gồm 2 - 4 lớp tế bào, xen lẫn các đám mô cứng Libe cấp I có cấu trúc dạng kết tầng với các sợi tập trung thành từng đám bao quanh libe Gỗ cấp I bao gồm các mạch lớn và nhỏ xếp thành hàng, với mạch lớn nằm ở ngoài và mạch nhỏ bên trong Libe và gỗ xếp nối tiếp nhau, tạo thành hệ thống hình nan quạt tỏa ra từ tâm, xen giữa các bó libe-gỗ là các tia ruột.
Hình 3.6 Cấu tạo vi phẫu rễ Tỏa dương
1 Bần; 2 Mô cứng; 3 Sợi; 4 Libe cấp I; 5 Gỗ cấp I
3.1.2.2 Đặc điểm bột dược liệu
Bột rễ màu vàng sậm hoặc vàng nâu, mùi thơm nhẹ
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC
Để xác định sự hiện diện của các nhóm hợp chất hữu cơ trong Tỏa dương, chúng tôi đã thực hiện các phản ứng hóa học với các thuốc thử đặc trưng Kết quả của nghiên cứu này được trình bày chi tiết trong bảng 3.1.
Luận án tiến sĩ nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loại toa dương Balanophora laxiflora Hemsl Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích các thành phần hóa học có trong Balanophora laxiflora và đánh giá hiệu quả chống viêm của chúng Kết quả sẽ cung cấp thông tin quý giá cho việc ứng dụng thực vật này trong y học và phát triển các sản phẩm điều trị mới.
Bảng 3.1 Kết quả định tính các nhóm chất trong Tỏa dương STT Nhóm chất Phản ứng định tính Kết quả Kết luận
Phản ứng với TT Mayer -
Phản ứng với TT Dragendorff - Phản ứng với TT Bouchardat -
2 Anthranoid Phản ứng Bomtrager - Không
Phản ứng với hơi NH 3 +++
5 Coumarin Phản ứng mở đóng vòng lacton +++ Có
6 Saponin Hiện tượng tạo bọt - Không
Phản ứng với gelatin 1% +++ Có Phản ứng với chì acetat 10% +++
8 Acid hữu cơ Phản ứng với Na 2 CO 3 + Có
9 Acid amin Phản ứng với TT Ninhydrin +++ Có
10 Đường khử Phản ứng với TT Fehling - Không
11 Chất béo Vệt mờ trên giấy lọc + Có
12 Sterol Phản ứng với H 2 SO 4 /anhydrid acetic + Có
13 Caroten Phản ứng với H 2 SO 4 - Không
Dựa trên kết quả định tính từ bảng 3.1, có thể sơ bộ kết luận rằng trong Tỏa dương chứa các hợp chất như flavonoid, courmarin, tannin, acid hữu cơ, acid amin, sterol và chất béo.
3.2.2 Chiết xuất và phân lập các hợp chất Quy trình 1: Phần trên mặt đất Tỏa dương khô (3,0 kg) được thái nhỏ, sấy khô, chiết hồi lưu với dung môi EtOH 80% (3 x 30 L x 3 h) Lọc, gộp dịch chiết và cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm thu được 895,8 g cao EtOH 80% (BLE) Phân tán cao EtOH 80% trong nước và lắc lần lượt với các dung môi có độ phân cực tăng dần: n- hexan và ethyl acetat Cất thu hồi dung môi thu được các cao tương ứng: n-hexan
(BLH: 59,6 g), ethyl acetat (BLEA: 124,1 g) và cặn H 2 O (BLW: 500,0 g)
Phân đoạn BLH được phân tách trên sắc ký cột pha thường hệ gradient Hx/Ace
Trong quá trình nghiên cứu, từ mẫu ban đầu (100 - 0%, v/v), chúng tôi đã thu được 5 phân đoạn (H1-H5) Phân đoạn H3 (4,50 g) được tinh chế bằng sắc ký cột hệ gradient Hx-Ace (35:1 – 10:1, v/v), dẫn đến việc thu được hợp chất kết tinh H3.1 (508,6 mg) Tiếp tục, phân đoạn H3.1 được tinh chế bằng sắc ký cột pha đảo với hệ EtOAc-ACN (3:2, v/v), cho ra 2 hợp chất là BL20 (30 mg) và BL21 (10 mg) Đối với phân đoạn H5 (1,70 g), chúng tôi đã phân tách thành 4 phân đoạn (H5.1-H5.4) bằng sắc ký cột pha thường với hệ Hx-EtOAc (10:1, v/v), trong đó phân đoạn H5.2 (130 mg) được kết tinh trong DCM, thu được hợp chất BL22 (48,2 mg).
Cao BLEA được xử lý bằng cách rửa giải trên cột silica gel bằng hệ Hx/EtOAc (100 - 0%, v/v), tạo ra 15 phân đoạn từ E1 đến E15 Phân đoạn E5 (590 mg) được tách trên cột pha đảo RP-C18 với hệ MeOH-H2O (2:3, v/v), cho ra 4 phân đoạn E5.1 đến E5.4 Tiếp theo, phân đoạn E5.1 (110 mg) được tinh chế thêm bằng sắc ký cột pha thường với hệ Hx-EtOAc (1:1, v/v), thu được 4 hợp chất là BL24 (11,3 mg), BL25 (4,8 mg), BL12 (1,4 mg) và BL13 (2,8 mg) Phân đoạn E10 (1,2 g) cũng được phân tách trên cột pha thường với hệ Hx.
Hợp chất BL8 (6 mg) được thu nhận từ EtOAc (1:1, v/v) Sau khi rửa tủa phân đoạn E9 bằng hệ Hx-EtOAc (3:1, v/v), thu được 2,26 g hợp chất BL23 Phân đoạn E8 (7,27 g) được phân tách trên cột pha thường với dung môi DCM, tạo ra 5 phân đoạn E8.1-E8.5 Phân đoạn E8.3 (3,25 g) tiếp tục được tách bằng sắc ký cột pha thường với dung môi DCM-MeOH (100:1 – 10:1, v/v), cho ra 4 phân đoạn E8.3A-E8.3D Phân đoạn E8.3A (605,4 mg) được phân lập bằng hệ MeOH-H2O (1:2 – 1:1, v/v), thu được 77,7 mg hợp chất BL1 Phân đoạn E8.3D (684,0 mg) được phân lập qua sắc ký cột pha đảo với dung môi MeOH-H2O (1:1, v/v), cho ra hợp chất BL26 (73,5 mg) Cuối cùng, phân đoạn E6 (1,35 g) được phân lập bằng sắc ký cột pha đảo với hệ MeOH-H2O-Aa (1:1:0,1, v/v/v), tạo ra 4 phân đoạn E6.1-E6.4, trong đó phân đoạn E6.3 (150 mg) được tách tiếp bằng hệ MeOH-H2O-Aa (1:1:0,1, v/v/v), thu được 59,5 mg hợp chất BL14.
Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loài toa đường (Balanophora laxiflora Hemsley) đã chỉ ra những tiềm năng ứng dụng trong y học Các phân tích cho thấy loài này chứa nhiều hợp chất sinh học có khả năng kháng viêm, mở ra hướng đi mới cho việc phát triển các sản phẩm hỗ trợ điều trị viêm Việc tìm hiểu sâu hơn về thành phần hóa học của Balanophora laxiflora sẽ giúp khai thác tối đa giá trị dược liệu của nó trong tương lai.
Phân đoạn E11 (2,6 g) được tách ra bằng sắc ký cột pha thường với hệ DCM-MeOH (8:1, v/v), cho ra 8 phân đoạn E11.1 đến E11.8 Tiếp theo, phân đoạn E11.4 (160 mg) được phân lập qua sắc ký cột pha đảo với hệ Ace-H2O (1:2, v/v), tạo ra hợp chất BL19 (15 mg) Cao BLW được tách bằng sắc ký trao đổi ion (Diaion, HP-20), rửa giải bằng nước cất để loại bỏ đường tự do và sử dụng hệ MeOH/H2O với các tỷ lệ 25%, 50%, 75%, 100%, và 1,5.
Sau khi thu được bốn phân đoạn W1-W4 từ mỗi hệ dung môi, phân đoạn W2 (52 g) được xử lý bằng cột sắc ký silica gel và rửa giải với hệ DCM/MeOH (0-100% MeOH), tạo ra 4 phân đoạn ký hiệu 1A-1D Phân đoạn 1B (12,0 g) được phân tách tiếp trên cột sắc ký pha đảo với hệ MeOH/H2O (tỉ lệ 1/7, 1/5, 1/3, 1/1, 1/0 theo thể tích), thu được 4 phân đoạn 2A1-2A4 Phân đoạn 2A1 (1,2 g) được tinh chế bằng sắc ký cột thường với hệ DCM-MeOH-H2O (4:1:0,1, v/v/v) và sau đó tinh chế thêm bằng sắc ký cột silica gel với hệ EtOAc-MeOH-H2O (10:1:0,1, v/v/v), thu được hợp chất BL15 (25 mg) Phân đoạn 2A2 (1,3 g) và 2A3 (1,5 g) cũng được tinh chế trên cột silica gel với hệ DCM-MeOH-H2O (tỉ lệ 5:1:0,1 và 4:1:0,1, v/v/v), lần lượt tạo ra hợp chất BL17 (17 mg) và BL16 (26 mg) Phân đoạn 2A4 (2,5 g) tiếp tục được phân tách trên cột silica gel với hệ DCM-.
Hệ thống MeOH-H2O (5:1:0,05, v/v/v) đã tạo ra 6 phân đoạn nhỏ từ 3A1 đến 3A6 Phân đoạn 3A2 (0,2 g) được tinh chế trên cột pha đảo, sử dụng hệ MeOH-H2O (1:2, v/v) và thu được hợp chất BL10 (18 mg) Phân đoạn 3A5 (0,7 g) được phân tách qua sắc ký cột với chất hấp phụ sephadex (LH-20), rửa giải bằng hệ MeOH-H2O (1:1, v/v) tạo ra 8 phân đoạn nhỏ từ 3B1 đến 3B8 Tinh chế phân đoạn 3B2 (0,2 g) trên cột sắc ký pha đảo với hệ MeOH-H2O (2:5, v/v) cho hai hợp chất BL4 (22 mg) và BL27 (14 mg) Phân đoạn 3B3 (0,4 g) được tách bằng sắc ký cột pha đảo sử dụng hệ MeOH-H2O (1:2, v/v), dẫn đến 4 phân đoạn từ 4A1 đến 4A4 Cuối cùng, phân đoạn 4A3 (0,2 g) được tinh chế trên cột sắc ký silica gel, với hệ DCM-MeOH-H2O (5:1:0,1, v/v/v), thu được hai hợp chất.
BL7 (21 mg) và BL3 (27 mg) Tinh chế phân đoạn 4A4 (0,1 g) trên cột sephadex LH-
Rửa giải hợp chất BL2 (18 mg) bằng hệ MeOH-H2O (1:1, v/v) từ mẫu 20 Phân đoạn W3 (28 g) được tách trên cột sắc ký pha đảo RP-C18, rửa giải với hệ MeOH-H2O (1:7 – 1:10, v/v) thu được 6 phân đoạn từ 5A1 đến 5A6 Tiếp theo, phân đoạn 5A2 (1,6 g) được phân tách thêm trên cột sắc ký silica gel với hệ DCM.
MeOH-H 2 O (5:1:0,1, v/v/v) thu được ba phân đoạn nhỏ hơn 6A1-6A3 Hợp chất BL11
Sau khi tinh chế phân đoạn 6A1 (120 mg) trên cột sắc ký silica gel bằng dung môi EtOAc-MeOH-H2O (7:1:0,1, v/v/v), thu được 9 mg sản phẩm Phân đoạn 5A3 (2,2 g) được xử lý trên cột sắc ký lọc gel sephadex LH-20 với dung môi MeOH-H2O (1:1, v/v), tạo ra hai phân đoạn nhỏ là 7A1 và 7A2 Tiếp tục, phân đoạn 7A2 (350 mg) được tinh chế trên cột sắc ký pha đảo RP-C18 với hệ MeOH-H2O (1:2, v/v), dẫn đến việc thu được hợp chất BL5.
Quy trình chiết xuất từ phần trên mặt đất Tỏa dương (4,0 kg) bắt đầu bằng việc thái nhỏ, sấy khô và chiết siêu âm với methanol (MeOH) trong 3 lần, mỗi lần 6 L và 3 giờ Sau khi lọc và gộp dịch chiết, dung môi được cất thu hồi dưới áp suất giảm, thu được 300 g cao MeOH Cao MeOH sau đó được phân tán trong nước và lắc với các dung môi có độ phân cực tăng dần: DCM và EtOAc, cho ra các cao tương ứng là 60,6 g DCM, 110,0 g EtOAc và 100,0 g cặn H2O Cao EtOAc (110,0 g) được đưa lên cột silica gel và rửa giải bằng hệ DCM-MeOH (100:1 – 1:10), tạo ra 6 phân đoạn từ 2E1 đến 2E6 Phân đoạn 2E3 (9,0 g) tiếp tục phân tách trên cột silica gel với hệ DCM-Ace (5:1), cho ra 5 phân đoạn từ 2E3.1 đến 2E3.5, trong đó phân đoạn 2E3.3 (120 mg) được tinh chế bằng sắc ký cột pha đảo RP.
Hợp chất BL18 (4 mg) được thu nhận từ quá trình tinh chế mẫu C 18 bằng hệ MeOH-H2O (3:1, v/v) và tiếp tục tinh chế bằng TLC Phân đoạn 2E5 (10,2 g) được tách trên cột pha thường với hệ Ace-DCM-H2O (2:1:0,1, v/v/v), tạo ra 4 phân đoạn 2E5.1-2E5.4 Trong đó, phân đoạn 2E5.2 (2,1 g) được phân tách tiếp trên cột pha thường với hệ DCM-MeOH-H2O (6:1:0,1, v/v/v), dẫn đến việc thu được 3 phân đoạn 2E5.2A-2E5.2C Cuối cùng, phân đoạn 2E5.2A được tinh chế để đạt được độ tinh khiết cao hơn.
(150 mg) trên sắc ký cột pha đảo RP-C 18 với hệ Ace-H 2 O (1:2, v/v) thu được hợp chất
BL9 (14 mg) Hợp chất BL6 (8 mg) được phân lập từ phân đoạn 2E5.2C (120 mg) sử dụng sắc ký cột pha đảo, hệ Ace-H 2 O (2:5, v/v)
Quy trình chiết xuất và phân lập các hợp chất từ Tỏa dương được thể hiện ở hình 3.8
KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA TỎA DƯƠNG
3.3.1.1 Kết quả sàng lọc tác dụng chống viêm in vitro của cao toàn phần ethanol và các phân đoạn Mẫu thử là cao toàn phần ethanol và các phân đoạn n-hexan, EtOAc, nước của Tỏa dương (quy trỡnh 1) ở nồng độ 30 àg/ml Kết quả sàng lọc tỏc dụng của cỏc mẫu thử lên mức độ biểu hiện gen COX-2 được biểu diễn ở hình 3.36
Nghiên cứu về đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loài toa đường (Balanophora laxiflora Hemsl.) đã chỉ ra những yếu tố quan trọng liên quan đến tính chất dược liệu của cây Các thành phần hóa học trong Balanophora laxiflora có khả năng chống viêm đáng kể, mở ra triển vọng trong việc phát triển các phương pháp điều trị mới Thông qua việc phân tích cấu trúc và hoạt tính sinh học, nghiên cứu này góp phần làm rõ giá trị y học của loài cây này trong y học cổ truyền và hiện đại.
Hình 3.36 Tác dụng ức chế mức độ biểu hiện gen COX-2 của cao toàn phần và cao phõn đoạn ở nồng độ 30 àg/ml
Trong đó: BLE: cao toàn phần ethanol; BLH: phân đoạn n-hexan; BLEA: phân đoạn ethyl acetat;
BLW: phân đoạn nước; ***: p < 0,001 khi so sánh với chứng trắng; #: p < 0,05 khi so sánh với chứng viêm LPS (100 ng/ml)
Kết quả sàng lọc cho thấy phân đoạn EtOAc (BLEA, nồng độ 30 µg/ml) ức chế mức độ biểu hiện gen COX-2 in vitro, cho thấy hiệu quả tốt nhất so với chứng viêm LPS trong các phân đoạn thử nghiệm Vì lý do này, phân đoạn EtOAc đã được chọn để tập trung nghiên cứu và phân lập các chất tinh khiết.
3.3.1.2 Tác dụng chống viêm in vitro của các hợp chất phân lập từ Tỏa dương
➢ Sàng lọc tác dụng chống viêm in vitro của các hợp chất phân lập từ phân đoạn
Các hợp chất BL1, BL8, BL12, BL13, BL14, BL19, BL23, BL24 và BL25 được phân lập từ phân đoạn EtOAc đã được đánh giá về khả năng ức chế mức độ biểu hiện gen COX-2 Kết quả sàng lọc cho thấy các hợp chất này (với nồng độ 10 àM) có tác dụng ức chế đáng kể mức độ biểu hiện gen COX-2 do LPS kích thích trong tế bào RAW 264.7, như thể hiện trong hình 3.37.
Hình 3.37 Tác dụng ức chế mức độ biểu hiện protein COX-2 của các hợp chất phân lập từ phõn đoạn EtOAc tại nồng độ 10 àM
***: p < 0,001 khi so sánh với chứng trắng; ##: p < 0,01 khi so sánh với chứng viêm LPS; #: p < 0,05 khi so sánh với chứng viêm LPS (100 ng/ml)
Kết quả từ hình 3.37 chỉ ra rằng, trong số 9 hợp chất được thử nghiệm ở nồng độ 10 àM, có 2 hợp chất là BL23 và BL25 có khả năng ức chế mức độ biểu hiện gen COX-.
Hợp chất BL23 ở nồng độ 10 µM cho thấy khả năng ức chế mạnh mẽ mức độ biểu hiện COX-2 mRNA do LPS kích thích trên đại thực bào RAW 264.7 Kết quả này cho thấy BL23 có tiềm năng cao trong các nghiên cứu sâu hơn về cơ chế tác động in vitro.
BL23 có ảnh hưởng đến khả năng sống sót của tế bào RAW 264.7, được đánh giá thông qua phương pháp MTS với các nồng độ thử nghiệm là 1, 3, 10 và 30 µM Kết quả của nghiên cứu được trình bày trong hình 3.38.
Hình 3.38 Ảnh hưởng của BL23 đến khả năng sống sót của tế bào RAW 264.7
Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của loài toa đường Balanophora laxiflora Hemsley đã được thực hiện Bài viết này cung cấp cái nhìn sâu sắc về các đặc tính sinh học và hóa học của loài thực vật này, đồng thời đánh giá hiệu quả chống viêm của nó Các kết quả nghiên cứu cho thấy Balanophora laxiflora có tiềm năng ứng dụng trong lĩnh vực y học, đặc biệt là trong việc điều trị các bệnh liên quan đến viêm.
Kết quả hình 3.38 chỉ ra rằng ở các nồng độ thử 1, 3, 10 và 30 µM, BL23 không ảnh hưởng đến khả năng sống sót của tế bào RAW 264.7, cả khi có và không có LPS.
Nghiên cứu đã chỉ ra rằng BL23, với nồng độ 10 àM, có hoạt tính tốt nhất trong số các hợp chất được sàng lọc Do đó, hợp chất này đã được thử nghiệm với các nồng độ khác nhau để đánh giá ảnh hưởng đến mức độ biểu hiện COX-2 khi bị kích thích viêm bởi LPS trong đại thực bào RAW 264.7 Kết quả của thí nghiệm này được trình bày trong hình 3.39.
Hình 3.39 Tác dụng của BL23 trên biểu hiện COX-2 phụ thuộc theo nồng độ
***: p < 0,001 khi so sánh với chứng trắng; ###: p < 0,001 khi so sánh với chứng viêm LPS ##: p <
0,01 khi so sánh với chứng viêm LPS; #: p < 0,05 khi so sánh với chứng viêm LPS
Kết quả hình 3.39 chỉ ra rằng ở nồng độ 1 - 10 àM, BL23 làm giảm mức độ biểu hiện của COX-2 theo nồng độ, với nồng độ 10 àM cho thấy hiệu quả ức chế tốt nhất Do đó, nồng độ 10 àM đã được chọn để tiến hành các thử nghiệm nghiên cứu tiếp theo đối với BL23.
➢ Ảnh hưởng của BL23 đến mức độ biểu hiện các gen tiền viêm khác (iNOS, IL-1β, IL-6, INF-β và TNFα) trên tế bào RAW 264.7
Hợp chất BL23 (10 àM) tiếp tục được đỏnh giỏ mức độ biểu hiện cỏc gen tiền viêm khác trên tế bào RAW 264.7 Kết quả được thể hiện ở hình 3.40
Hỡnh 3.40 Tỏc dụng của BL23 (10 àM) trờn mức độ biểu hiện gen iNOS, IL-1β, IL-6,
*: p < 0,05 khi so sánh với chứng trắng; #: p