Luận án tiến sĩ nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số hoạt tính sinh học của cây lãnh công rợt (fissistigma pallens (fin gagnep ) merr ), họ na (annonaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƢỢC LIỆU NGÔ SỸ THỊNH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY LÃNH CÔNG RỢT (Fissistigma pallens (Fin & Gagnep.) Merr.), Họ Na (Annonaceae) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƢỢC LIỆU NGÔ SỸ THỊNH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY LÃNH CÔNG RỢT (Fissistigma pallens (Fin & Gagnep.) Merr.), Họ Na (Annonaceae) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƢỢC LIỆU - DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 9720206 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Thị Bích Thu PGS TS Nguyễn Xuân Nhiệm HÀ NỘI, NĂM 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận án trung thực chƣa đƣợc sử dụng cơng trình khác Tơi xin cam đoan rằng, giúp đỡ việc hoàn thành luận án đƣợc cảm ơn thông tin trích dẫn luận án đƣợc ghi rõ nguồn gốc Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm số liệu luận án Tác giả Ngô Sỹ Thịnh LỜI CẢM ƠN Trong trình thực luận án Viện Dƣợc liệu, nhận đƣợc nhiều giúp đỡ quý báu thầy, cô, nhà khoa học thuộc nhiều lĩnh vực bạn bè đồng nghiệp gia đình Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Bích Thu PGS TS Nguyễn Xuân Nhiệm, ngƣời thầy tận tình hƣớng dẫn, hết lịng giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình học tập nghiên cứu thực luận án Xin bày tỏ lòng cảm ơn tới: PGS.TS Phạm Thanh Huyền, ThS Nguyễn Quỳnh Nga - Viện Dƣợc liệu; TS Nguyễn Thế Cƣờng - Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, PGS TS Đỗ Thị Thảo - Viện Công nghệ sinh học có ý kiến đóng góp q báu giúp tơi hồn thiện luận án Xin trân trọng cảm ơn đồng nghiệp Khoa Tài nguyên dƣợc liệu, Phòng Quản lý khoa học đào tạo - Viện Dƣợc liệu; Khoa Dƣợc - Bệnh viện Quân y 354 - TCHC; Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Hóa sinh biển, Viện Cơng nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam nhiệt tình giúp đỡ cộng tác để hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn Quỹ phát triển khoa học công nghệ Việt Nam (NAFOSTED) tài trợ kinh phí theo mã số đề tài 104.01-2015.79 Xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ngƣời thân gia đình ln ủng hộ, chia sẻ tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận án Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn tất giúp đỡ q báu đó! Tác giả Ngơ Sỹ Thịnh MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1- TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật phân bố chi Fissistigma Griff 1.1.1 Vị trí phân loại chi Fissistigma Griff 1.1.2 Phân bố thành phần loài chi Fissistigma Griff 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Fissistigma 1.2 Thành phần hóa học 1.2.1 Nhóm hợp chất alcaloid 1.2.2 Nhóm hợp chất flavonoid 14 1.2.3 Nhóm hợp chất terpen 17 1.2.4 Nhóm hợp chất steroid 20 1.2.5 Các nhóm hợp chất khác 21 1.3 Công dụng theo kinh nghiệm dân gian 22 1.4 Hoạt tính sinh học 23 1.4.1 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư kháng khối u 23 1.4.2 Hoạt tính chống viêm 25 1.4.3 Hoạt tính chống ngưng kết tiểu cầu 27 1.4.4 Hoạt tính ức chế miễn dịch 27 1.4.5 Hoạt tính hệ dẫn truyền thần kinh thực vật 28 1.4.6 Hoạt tính kháng khuẩn 29 1.4.7 Hoạt tính chẹn α-adrenoceptor 29 1.4.8 Một số hoạt tính khác 30 1.5 Vài nét Lãnh công rợt Việt Nam 30 1.5.1 Phân bố 31 1.5.2 Đặc điểm thực vật 31 1.5.3 Công dụng theo dân gian 31 1.5.4 Những nghiên cứu Lãnh công rợt Việt Nam 31 Chƣơng 2- ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 33 2.1.1 Mẫu nghiên cứu 33 2.1.2 Nguyên liệu chiết xuất thử hoạt tính sinh học 33 2.1.3 Thiết bị sử dụng nghiên cứu 33 2.1.4 Thuốc thử hóa chất 34 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 36 2.2.1 Thẩm định tên khoa học xác định đặc điểm vi học 36 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 37 2.2.3 Các phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học 39 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu 45 Chƣơng 3- KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 46 3.1 Kết nghiên cứu thực vật 46 3.1.1 Đặc điểm hình thái thực vật 46 3.1.2 Thẩm định tên khoa học 47 3.1.3 Đặc điểm giải phẫu 47 3.1.4 Đặc điểm bột thân, 49 3.2 Kết nghiên cứu thành phần hóa học 51 3.2.1 Định tính nhóm chất hữu 51 3.2.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ Lãnh công rợt 52 3.3 Kết thử hoạt tính sinh học 100 3.3.1 Kết xác định hoạt tính gây độc tế bào ung thư củ hợp chất phân lập từ Lãnh công rợt 100 3.3.2 Kết xác định hoạt tính chống oxy h củ hợp chất phân lập từ Lãnh công rợt 102 3.3.3 Kết xác định hoạt tính chống viêm củ hợp chất phân lập từ Lãnh công rợt 104 Chƣơng 4- BÀN LUẬN 107 4.1 Về thực vật học 107 4.2 Về thành phần hóa học 109 4.2.1 Kết định tính 109 4.2.2 ết phân ập xác định cấu tr c hợp chất 110 4.3 Về hoạt tính sinh học 118 4.3.1 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư củ hợp chất phân lập từ Lãnh công rợt 118 4.3.2 Hoạt tính chống oxy hóa củ hợp chất phân lập từ Lãnh công rợt 122 4.3.3 Hoạt tính chống viêm củ hợp chất phân lập từ Lãnh công rợt 127 4.4 Về mối liên quan thành phần hóa học hoạt tính sinh học 132 KẾT LUẬN 134 1.1 Về thực vật học 134 1.2 Về thành phần hóa học 134 1.3 Về hoạt tính sinh học 135 KIẾN NGHỊ 136 CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Tiếng Anh [α]D Specific Optical Rotation 13 C-NMR Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance HR-ESI- High-resolution electrospray MS ionization mass spectrometry 2,2′-azobis (2-amidinopropan) AAPH dihydrochlorid ABTS 2,2′-azino-bis(3ethylbenzothiazolin-6-sulfonat A-549 Lung adenocarcinoma epithelial cell APG Angiosperm Phylogeny Group System Catechin Flavan-3-ol cAMP Cyclic adenosin 3′,5′monophosphat CC Column Chromatography COX-2 Cyclooxygenase-2 CuCl2 CuCl2 DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer DMEM Dulbecco's modified Eagle's medium DMSO Dimethyl sulfoxid DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl FBS Fetal Bovine Serum FRAP Ferric Reducing Ability in Plasma fMLP formyl-L-methionyl-L-leucyl-Lphenylalanin Diễn giải Độ quay cực riêng Cộng hƣởng t hạt nhân carbon 13 Cộng hƣởng t hạt nhân proton Phổ khối lƣợng phân giải cao phun mù điện tử Tế bào ung thƣ phổi Hệ thống phân loại thực vật có hoa đại Sắc kí cột Đồng (II) clorua Phổ DEPT Huyết bị Khả khử Fe+3 huyết tƣơng Kí hiệu GC HEPES HeLa HepG2 HL-60 HMBC HSQC Kí hiệu iNOS IC50 IL-2 IL-6 IL-10 IFN-γ Ito KB LPS LD50 LNMMA MCF-7 NaNO2 NF-B Tiếng Anh Gas Chromatography 4-(2-hydroxyethyl)-1piperazineethanesulfonic acid Human cervical carcinoma Diễn giải Sắc ký khí Human breast carcinoma Natri nitrit Nuclear Factor-kappa B Tế bào ung thƣ vú ngƣời Tế bào ung thƣ cổ tử cung ngƣời Human hepatocellular carcinoma Tế bào ung thƣ biểu mô tế bào gan ngƣời Human acute myelocytic leukemia Tế bào ung thƣ bạch cầu cấp tính ngƣời Heteronuclear multiple Bond Phổ tƣơng tác dị hạt nhân Connectivity qua nhiều liên kết Heteronuclear Single-Quantum Phổ tƣơng tác dị hạt nhân Coherence qua liên kết Tiếng Anh Diễn giải Inducible nitric oxide synthase Tổng hợp nitric oxid Inhibitory concentration at 50% Nồng độ ức chế 50% đối tƣợng thử nghiệm Interleukin Interleukin Interleukin 10 Interferon gamma 4-aminopyridine-sensitive transient outward current Human mouth epidermoid Tế bào ung thƣ biểu mô carcinoma ngƣời Lipopolysaccharid Lethal dose 50 Liều gây chết 50% động vật thí nghiệm G N -Methyl-L-arginine acetat Yếu tố nhân kappa B Kí hiệu NO OD ORAC PGE2 RP-18 SRB TEAC TLC TMS TNF-α Trolox Tiếng Anh Diễn giải NO Nitric oxid Optical Density Mật độ quang học Oxygen radical absorbance capacity Khả hấp thụ gốc tự oxy Prostaglandin E2 Reserve phase C-18 Chất hấp thụ pha đảo C-18 Sulforhodamin B Trolox-Equivalent Antioxidant Phƣơng pháp xác định khả Capacity chống oxy hóa tƣơng đƣơng với Trolox Thin layer chromatography Sắc ký lớp mỏng Tetramethylsilan Tumor necrosis factor alpha Yếu tố hoạt tử khối u (±)-6-hydroxy-2,5,7,8tetramethylchroman-2-carboxylic acid PHỤ LỤC 19 PHỔ CỦA HỢP CHẤT FP17 (FISSFLAVOSIDE C) Phổ HR-ESI-MS hợp chất FP17 Phổ 1H-NMR hợp chất FP17 PL65 Phổ 13C-NMR hợp chất FP17 Phổ HSQC hợp chất FP17 PL66 Phổ HMBC hợp chất FP17 Phổ COSY hợp chất FP17 PL67 PHỤ LỤC 20 PHỔ CỦA HỢP CHẤT FP18 (KAEMPFEROL 3RUTINOSID) Phổ 1H-NMR hợp chất FP18 Phổ 13C-NMR hợp chất FP18 PL68 Phổ HSQC hợp chất FP18 Phổ HMBC hợp chất FP18 PL69 PHỤ LỤC 21 PHỔ CỦA HỢP CHẤT FP19 (RUTIN) Phổ 1H-NMR hợp chất FP19 Phổ 13C-NMR hợp chất FP19 PL70 HSQC hợp chất FP19 Phổ HMBC hợp chất FP19 PL71 PHỤ LỤC 22 PHỔ CỦA HỢP CHẤT FP20 (KAEMPFEROL 3-O-α-LRHAMNOPYRANOSYL (1→6)-β-D-GALACTOPYRANOSID) Phổ 1H-NMR hợp chất FP20 Phổ 13C-NMR hợp chất FP20 PL72 Phổ HSQC hợp chất FP20 Phổ HMBC hợp chất FP18 PL73 PHỤ LỤC 23 PHỔ CỦA HỢP CHẤT FP21 (ISORMANETIN 3ROBINOBIOSID) Phổ 1H-NMR hợp chất FP21 Phổ 13C-NMR hợp chất FP21 PL74 Phổ HSQC hợp chất FP21 Phổ HMBC hợp chất FP21 PL75 PHỤ LỤC 24 PHỔ CỦA HỢP CHẤT FP22 (KAEMPFEROL 3-O-α-LRHAMNOPYRANOSYL (1→2)-β-D-GALACTOPYRANOSID) Phổ 1H-NMR hợp chất FP22 Phổ 13C-NMR hợp chất FP18 PL76 Phổ HSQC hợp chất FP22 Phổ HMBC hợp chất FP22 PL77 PHỤ LỤC 24 PHỔ CỦA HỢP CHẤT FP23 (RHAMNETIN 3-O-α-LRHAMNOPYRANOSYL (1→2)-β-D-GALACTOPYRANOSID) Phổ 1H-NMR hợp chất FP23 Phổ 13C-NMR hợp chất FP13 PL78 Phổ HSQC hợp chất FP23 Phổ HMBC hợp chất FP23 PL79