(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu phân lập, xác định cấu trúc và tính chất phổ của hợp chất tách từ cây lá giang (aganonerion polymorphum pierre ex spire) thuộc họ trúc đào (apocynaceae) ở bình định

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN PHAN THỊ KIỀU DUYÊN NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ TÍNH CHẤT PHỔ CỦA HỢP CHẤT TÁCH TỪ CÂY h LÁ GIANG (Aganonerion polymorphum Pierre ex Spire) THUỘC HỌ TRÚC ĐÀO (Apocynaceae) Ở BÌNH ĐỊNH LUẬN VĂN THẠC SĨ HĨA HỌC Bình Định, 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN PHAN THỊ KIỀU DUYÊN NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ TÍNH CHẤT PHỔ CỦA HỢP CHẤT TÁCH TỪ CÂY LÁ GIANG (Aganonerion polymorphum Pierre ex Spire) THUỘC HỌ TRÚC ĐÀO (Apocynaceae) Ở BÌNH ĐỊNH h Chun ngành: Hóa lý thuyết Hóa lý Mã số: 8440119 Người hướng dẫn 1: TS Diệp Thị Lan Phương Người hướng dẫn 2: TS Nguyễn Lê Tuấn Bình Định, 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, thực hướng dẫn khoa học TS Diệp Thị Lan Phương TS Nguyễn Lê Tuấn Các số liệu, kết luận nghiên cứu trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố hình thức Tơi xin chịu trách nhiệm nghiên cứu Học viên Phan Thị Kiều Duyên h LỜI CẢM ƠN Luận văn hồn thành Khoa Hóa - Trường Đại học Quy Nhơn Trong thời gian thực luận văn, em nhận nhiều giúp đỡ, đóng góp ý kiến bảo tâm huyết, nhiệt tình thầy cơ, gia đình bạn bè Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Diệp Thị Lan Phương, TS Nguyễn Lê Tuấn NCS Hồ Văn Ban tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, tạo điều kiện cho em hoàn thành luận văn tốt nghiêp Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô Khoa Hóa, trường Đại học Quy Nhơn quan tâm, tạo điều kiện thuận lợi để em thực luận văn Xin gửi lời cảm ơn đến bạn, anh chị em tập thể lớp Cao học Hóa K20 trường ĐH Quy Nhơn hỗ trợ, động viên suốt thời gian qua Cuối em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè người h thân quan tâm, động viên giúp đỡ em hoàn thành luận văn Mặc dù cố gắng thời gian thực luận văn, cịn hạn chế kiến thức thời gian, kinh nghiệm nghiên cứu nên không tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận thơng cảm ý kiến đóng góp q báu từ quý thầy cô để luận văn em hoàn thiện Em xin trân trọng cảm ơn! MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN I LỜI CẢM ƠN II MỤC LỤC III DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VI DANH MỤC CÁC HÌNH VII DANH MỤC CÁC BẢNG IX MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu thực vật 1.1.1 Giới thiệu họ Trúc Đào (Apocynaceae) 1.1.2 Mô tả Lá giang (Aganonerion polymorphum Pierre ex Spire) 1.1.3 Công dụng Lá giang y học đời sống h 1.2 Giới thiệu lớp chất có thực vật 1.2.1 Terpene Terpenoid 1.2.2 Steroid 11 1.2.3 Alkaloid 12 1.2.4 Flavonoid 13 1.2.5 Hợp chất phenol 14 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 16 2.1 Phương pháp nghiên cứu 16 2.1.1 Phương pháp chiết 16 2.1.2 Phương pháp định tính lớp chất có Lá giang 19 2.1.3 Phương pháp hóa lý nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất thu cao chiết từ Lá giang 20 2.1.4 Phương pháp sắc ký 21 2.1.5 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất phân lập 25 2.1.6 Phương pháp thử hoạt tính kháng vi khuẩn nấm 27 2.2 Hóa chất thiết bị 28 2.2.1 Hóa chất 28 2.2.2 Thiết bị 29 2.3 Thực nghiệm 29 2.3.1 Nguyên liệu 29 2.3.2 Đánh giá thành phần cao chiết MeOH từ Lá giang 30 2.3.3 Đánh giá thành phần cao chiết EA từ Lá giang 30 2.3.4 Định tính lớp chất 31 2.3.5 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất thu cao chiết MeOH 32 2.3.6 Nghiên cứu phân lập hợp chất từ cao chiết EA 35 2.3.7 Thử hoạt tính kháng vi khuẩn nấm 36 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 h 3.1 Nguyên liệu xử lý nguyên liệu 38 3.2 Đánh giá sơ thành phần hóa học từ cao chiết MeOH EA 38 3.3 Định tính lớp chất có Lá giang 42 3.3.1 Phát triterpenoid 42 3.3.2 Phát alkaloid 43 3.3.3 Phát hợp chất phenol 43 3.3.4 Phát Steroid 44 3.3.5 Phát flavonoid 45 3.4 Khảo sát yếu tố ảnh đến hiệu suất thu cao chiết MeOH Lá giang 46 3.4.1 Phương pháp ngâm chiết 46 3.4.2 Phương pháp chiết soxhlet 49 3.4.3 Phương pháp chiết siêu âm 51 3.5 Nghiên cứu phân lập hợp chất từ cao chiết ethyl acetate 56 3.6 Xác định cấu trúc tính chất phổ chất rắn phân lập 59 3.6.1 Phổ 1H NMR chất rắn thu 59 3.6.2 Phổ 13 C NMR chất rắn thu 62 3.6.3 Phổ DEPT chất rắn thu 64 3.6.4 Phổ MS chất rắn thu 65 3.7 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng vi khuẩn nấm cao chiết MeOH 66 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 h DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu 13 Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt C NMR Carbon-13 Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance cacbon 13 DCM Dichloromethan Điclometan DEPT Distortionless Enhancement Kỹ thuật xác định số proton by Polarisation Transfer đính với cacbon EA Ethyl acetate Etyl axetat IC50 Inhibitory concentration 50% Nồng độ ức chế 50% cá thể Hx Hexane Hexan Proton H NMR Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton MS Mass spectrum Phổ khối lượng MeOH Methanol Metanol TLC Thin Layer Chromatography Sắc ký mỏng h Resonance DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hoa, Lá giang Hình 1.2 Một số terpene 10 Hình 1.3 Một số terpenoid 10 Hình 1.4 Bộ khung steroid 11 Hình 1.5 Một số alkaloid 12 Hình 1.6 Bộ khung flavonoid 13 Hình 2.1 Thiết bị chiết soxhlet 19 Hình 2.2 Mẫu sắc ký mỏng 22 Hình 2.3 Buồng soi UV 29 Hình 2.4 Máy quay chân không 29 Hình 2.5 Lá Lá giang tươi 29 Hình 2.6 Lá Lá giang khô 29 h Hình 2.7 Chiết dịch nước với dung môi EA Lá giang 31 Hình 2.8 Hệ thống chiết soxhlet dùng thí nghiệm 33 Hình 2.9 Thiết bị chiết siêu âm dùng thí nghiệm 34 Hình 2.10 Thiết bị sắc ký cột cao EA 35 Hình 2.11 Quy trình tách chiết hợp chất từ Lá giang 36 Hình 3.1 Bột Lá giang 38 Hình 3.2 Dịch chiết MeOH Lá giang 39 Hình 3.3 Cao chiết MeOH Lá giang 39 Hình 3.4 Cao chiết EA Lá giang 40 Hình 3.5 TLC cao chiết MeOH UV (a) màu với Ce(SO4)2 (b) 40 Hình 3.6 TLC cao chiết EA màu với Ce(SO4)2 41 Hình 3.7 Kết định tính triterpenoid thuốc thử Liebermann Burchard 42 Hình 3.8 Kết định tính alkaloid thuốc thử Wagner 43 Hình 3.9 Kết định tính hợp chất phenol thuốc thử FeCl3 44 Hình 3.10 Kết định tính Steroid phản ứng Salkowski 45 Hình 3.11 Kết định tính hợp chất Flavonoid 45 Hình 3.12 Đồ thị biễu diễn sự ảnh hưởng tỉ lệ bột Lá giang (g) : thể tích MeOH (mL) đến hàm lượng cao chiết MeOH ngâm chiết 47 Hình 3.13 Đồ thị biễu diễn sự ảnh hưởng thời gian ngâm chiết đến hàm lượng cao chiết MeOH 49 Hình 3.14 Đồ thị biễu diễn sự ảnh hưởng thời gian đun mẫu đến hàm lượng cao chiết MeOH chiết soxhlet 50 Hình 3.15 Đồ thị biễu diễn sự ảnh hưởng tỉ lệ bột Lá giang (g) : thể tích MeOH (mL) đến hàm lượng cao chiết MeOH chiết siêu âm 52 Hình 3.16 Đồ thị biễu diễn sự ảnh hưởng thời gian siêu âm đến hàm h lượng cao chiết MeOH chiết siêu âm 54 Hình 3.17 Cao chiết EA tẩm silica gel 57 Hình 3.18 Các chất phân đoạn 57 Hình 3.19 TLC phân đoạn chạy cột lần thứ 58 Hình 3.20 TLC chất rắn 58 Hình 3.21 Quy ước đánh số công thức methyl-3,4dihydroxybenzoate 59 Hình 3.22 Phổ 1H NMR chất rắn phân lập CD3OD 60 Hình 3.23 Phổ 1H NMR chất rắn phân lập kéo giãn đoạn 7,5 - 6,8 ppm 61 Hình 3.24 Sơ đồ tương tác spin - spin proton C-2, C-5, C-6 61 Hình 3.25 Phổ 13C NMR chất rắn phân lập CD3OD 63 Hình 3.26 Phổ DEPT chất rắn phân lập CD3OD 65 Hình 3.27 Phổ MS chất rắn phân lập 66