Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitro lan trầm rồng đỏ (dendrobium nestor o’brien)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP NGUYỄN QUỐC KHÁNH NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG IN VITRO LAN TRẦM RỒNG ĐỎ (DENDROBIUM NESTOR O’BRIEN) CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 8420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS BÙI VĂN THẮNG TS NGUYỄN THỊ HỒNG GẤM Gia Lai, 2023 i CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Kính gửi: - Hiệu trưởng Trường Đại học Lâm nghiệp; - Trưởng phịng Đào tạo sau đại học Tơi tên là: Nguyễn Quốc Khánh, Giới tính: Nam Sinh ngày: 09/3/1971 Ngành: Công nghệ sinh học Lớp: 28B2-CNSH Tôi xin cam đoan Luận văn Thạc sĩ “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitro lan Trầm rồng đỏ (Dendrobium nestor O’Brien)” cơng trình nghiên cứu khoa học độc lập Các số liệu nghiên cứu khoa học kết nghiên cứu luận văn trung thực tài liệu tham khảo ghi rõ nguồn trích dẫn Nếu phát chép từ kết nghiên cứu khác sai sót số liệu nghiên cứu, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước Nhà trường Hội đồng Gia Lai, ngày tháng năm 2023 Học viên Nguyễn Quốc Khánh ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp - Trường Đại học Lâm nghiệp tạo điều kiện cho tham gia thực đề tài luận văn tốt nghiệp “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitro lan Trầm rồng đỏ (Dendrobium nestor O’Brien)” Viện Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS TS Bùi Văn Thắng, Viện trưởng Viện Công nghệ sinh học TS Nguyễn Thị Hồng Gấm - Bộ môn Công nghệ tế bào - Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp trực tiếp hướng dẫn quan tâm, tạo điều kiện thuận lợi thân suốt q trình thực đề tài hồn thiện luận văn tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn Thầy Cô giáo thuộc Bộ môn Công nghệ tế bào Thầy Cô Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi q trình tơi học tập thực đề tài Viện Tuy cố gắng để hoàn thiện đề tài luận văn này, song kiến thức kinh nghiệm thân tơi cịn nhiều hạn chế, luận văn tốt nghiệp không tránh khỏi những sai sót, kính mong quý Thầy Cô đóng góp ý kiến để Luận văn tơi hồn thiện Trân trọng! Gia Lai, ngày tháng năm 2023 Học viên Nguyễn Quốc Khánh iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG BIỂU vi DANH MỤC HÌNH ẢNH vii ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1.TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU Chương MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 15 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.3 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 15 2.4 Phương pháp nghiên cứu 16 2.4.1 Phương pháp luận 16 2.4.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm cụ thể 16 2.5 Phương pháp thu thập xử lí số liệu 23 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 Kết nghiên cứu công thức khử trùng tạo mẫu in vitro từ chồi nhánh 25 3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo thể chồi 28 3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố môi trường đến khả nhân nhanh thể chồi (protocorm) 29 3.3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả nhân nhanh thể chồi 29 3.3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng ánh sáng đến khả nhân nhanh thể chồi 31 iv 3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố môi trường đến khả nhân nhanh chồi 33 3.4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi 33 3.4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng ánh sáng đến khả nhân nhanh chồi 36 3.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố môi trường đến khả rễ, tạo hoàn chỉnh 39 3.5.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả rễ, tạo hoàn chỉnh 39 3.5.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng ánh sáng đến khả rễ, tạo hoàn chỉnh 41 3.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến khả sống giai đoạn vườn ươm 43 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 46 Kết luận 46 Kiến nghị 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Viết đầy đủ BAP Benzyl amino purine-6 Cs Cộng CTTN Cơng thức thí nghiệm ĐHST Điều hòa sinh trưởng IAA Indol acetic acid IBA Indole-3- butyric acid Ki Furfury amino purine-6 MS Murashige &Skoog, 1962 NAA Naphthyl acetic acid Sig Mức ý nghĩa (Significant) TB Trung bình vi DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng chế độ khử trùng đến khả tạo mẫu 18 Bảng 2.2 Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh thể chồi 19 Bảng Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 20 Bảng 2.4 Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng chất ĐHST đến khả rễ in vitro21 Bảng 2.5 Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng giá thể đến khả sống con23 Bảng 3.1 Ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến khả tạo mẫu tỷ lệ tái sinh mẫu 26 Bảng 3.2 Kết ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo thể chồi (sau tuần nuôi cấy) 28 Bảng 3.3 Kết ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả nhân nhanh thể chồi sau tuần nuôi cấy 30 Bảng 3.4 Kết ảnh hưởng ánh sáng đến khả nhân nhanh thể chồi 32 Bảng 3.5 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả kích thích tăng trưởng nhân nhanh chồi lan Trầm rồng đỏ 34 Bảng 3.6 Ảnh hưởng ánh sáng đến khả nhân nhanh chồi 38 Bảng 3.7 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả rễ lan Trầm rồng đỏ sau tuần nuôi cấy 40 Bảng 3.8 Ảnh hưởng ánh sáng đến khả rễ Lan Trầm rồng đỏ 42 Bảng 3.9 Ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn giá thể đến khả sống mô giai đoạn vườn ươm sau tuần 43 Bảng 10 Ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn giá thể đến khả sống mô giai đoạn vườn ươm sau tuần 45 vii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Cây hoa lan Trầm rồng đỏ 16 Hình 3.1 Mẫu tái sinh chồi công thức KT2 28 Hình 3.2 Thể chồi công thức môi trường nhân nhanh sau tuần nuôi cấy 31 Hình 3.3 Thể chồi lan điều kiện ánh sáng khác 33 Hình 3.4 Chồi lan Trầm rồng đỏ môi trường nhân nhanh sau tuần nuôi cấy 35 Hình 3.5 Bình chồi lan Trầm rồng đỏ môi trường nhân nhanh sau tuần nuôi cấy 36 Hình 3.6 Chồi lan Trầm rồng đỏ ni cấy điều kiện tổ hợp ánh sáng AS3 (1 xanh : đỏ : trắng) sau tuần nuôi cấy 38 Hình 3.7 Bình chồi lan Trầm rồng đỏ điều kiện ánh sáng sau tuần nuôi cấy 39 Hình 3.8 Rễ lan Trầm rồng đỏ loại mơi trường khác 41 Hình 3.9 Cây lan Trầm rồng đỏ môi trường rễ R2 41 Hình 3.10 Ảnh hưởng ánh sáng đến khả rễ lan Trầm rồng đỏ 43 Hình 3.11 Cây mơ lan Trầm rồng đỏ giá thể khác sau tuần 44 Hình 3.12 Cây mô lan Trầm rồng đỏ giá thể khác sau tuần 45 ĐẶT VẤN ĐỀ Nghề trồng hoa Việt Nam có lịch sử từ lâu Trong "Ngũ bách viên" Vua Trần Nhân Tông lập nên, có 500 loài hoa quý sưu tập từ khắp địa phương nước, chủ yếu kiếm lan (lồi lan địa có nhiều hương) thuộc chi Cymbidium Ngày đó, chậu lan coi vật báu quốc gia Các lồi lan đó cịn tồn đến ngày nay, nhà nho, quan lại, gia đình giả thích chơi lồi lan phát triển dân gian Hiện nay, số loài lan quý tồn Thanh Ngọc, Mạc đen, Đại mạc biên, Đại mạc, Hoàng vũ, Thanh trường, Hoàng điểm , giá trị chậu lan nhỏ lên tới vài triệu đồng chí chục triệu đồng Tết đến xuân [12] Việc nghiên cứu lan Việt Nam thời gian đầu không thấy rõ rệt lắm, theo số tài liệu, có lẽ người đầu tiên có khảo sát lan Việt Nam Gioalas Noureiro - nhà truyền giáo Bồ Đào Nha, Ơng mơ tả lan Việt Nam lần đầu tiên vào năm 1789 Trong “Flora cochin chinensis” gọi tên lan hành trình đến Nam phần Việt Nam aerides, Phaius Sarcopodium Ben Tham Hooker ghi lại “Genera plante rum” (1862- 1883) Chỉ sau người Pháp đến Việt Nam có những cơng trình nghiên cứu cơng bố đáng kể F gagnepain A gnillaumin mô tả 70 chi gồm 101 lồi cho nước Đơng Dương "Thực vật Đông Dương chí" (Flora Genera Indochine) H Lecomte chủ biên, xuất từ những năm 1932 - 1934 Ở nước ta biết 897 loài thuộc 152 chi họ hoa lan Nguồn gen hoa phong lan Việt Nam phong phú, đó lan Hoàng Thảo chiếm khoảng 30 - 40% tổng số loài lan Việt Nam [12] Từ lâu, loài Hoa lan sử dụng làm loài cảnh quý giá, không những đẹp màu sắc mà hình dáng, từ đường nét tao nhã cánh hoa đến hình dạng thân, cành duyên dáng, có lồi hoa sánh nổi, số lồi cịn có hương thơm quyến rũ, tao Vì vậy, từ lâu ơng cha ta ln coi hoa lan biểu tượng thuần khiết, cao quí vương giả [12] Việt Nam những trung tâm khởi nguyên nhiều loài lan quý, nơi có nguồn quỹ gen trồng đa dạng vô phong phú Thời tiết khí hậu Việt Nam thuận lợi, mùa đông nước ta không lạnh, đất nước tràn đầy hoa Trong đó Châu Âu, Bắc Á, Bắc Mỹ mùa đông tuyết phủ, cịn nước phía Nam lại khơ, nóng khan hoa [12] Việt Nam có điều kiện tự nhiên thích hợp cho sinh trưởng, phát triển nhiều loài hoa lan, đó có lan Trầm rồng đỏ Lan Trầm rồng đỏ có tên khoa học là: Dendrobium nestor O’Brien (Gard.Chron.1892 (1): 718.1892) Loài lan lai tạo từ lan Giả hạc lan Song hồng, bắt nguồn từ rừng Myanma Loài hoa cịn có tên gọi lan trầm Đài Loan phân vào nhóm lan cao cấp Thân lan Trầm rồng đỏ dài so với giống lan trầm rừng Việt Nam, lồi lan có màu hoa sắc tím, đỏ đậm, đặc biệt có tên Trầm hoa thơm Lan Trầm rồng đỏ có thể sống nhiều vùng khí hậu, thường hoa nở vào mùa xuân với khí hậu ấm áp đó giới chơi lan ưa chuộng [20] Lan Trầm rồng đỏ loài hoa có giá trị kinh tế cao, chậu hoa có giá từ vài trăm ngàn đồng đến vài triệu đồng Là loài lan lai nên lan Trầm rồng đỏ có đầy đủ đặc tính ưu tú bố, mẹ từ mùi hương thơm đến sắc hoa đặc biệt, dáng hoa đẹp Loài nhập nội vào nước ta thời gian gần [20] Trong tự nhiên, việc nhân giống hoa lan chủ yếu đường sinh sản sinh dưỡng từ vật liệu thân, cành Tuy nhiên, việc nhân giống hình thức sinh sản thường cho hệ số nhân giống thấp ảnh hưởng lớn đến 42 vai trò quan trọng việc thúc sinh trưởng phát triển mẫu cấy Kết đánh giá thống kê sau tuần nuôi cấy bảng sau: Bảng 3.8 Ảnh hưởng ánh sáng đến khả rễ Lan Trầm rồng đỏ Nguồn ánh sáng Tỷ lệ chồi Chiều dài trung rễ (%) bình rễ (cm) Đặc điểm rễ (AS1) 94,60±0,18 3,93±0,05 Rễ ngắn, nhỏ, màu trắng (AS2) 97,25±0,20 4,72±0,06 Rễ ngắn, nhỏ, màu trắng (AS3) 99,33±0,22 5,34±0,08 Rễ dài, mập, màu xanh đậm Ánh sáng khơng tác động đến hình thái chồi lan mà cịn ảnh hưởng tới q trình phát triển rễ lan Trong cơng thức thí nghiệm, với điều kiện ánh sáng khác sinh trưởng điều kiện ánh sáng LED có số lượng rễ/cây khác rõ rệt có tỉ lệ số rễ chồi cao Qua kết bảng 3.8 cho thấy điều kiện ánh sáng khác tác động khác đến rễ trình nhân giống Ở nghiệm thức sử dụng (AS3) Đèn LED tổ hợp ánh sáng: sáng xanh: sáng đỏ: sáng trắng, tỉ lệ chồi rễ cao (99,33%) rễ phát triển dài nhất; rễ mập, xanh đậm khác so với nghiệm thức AS1 AS2 Điều chứng tỏ ánh sáng (AS3) có những bước sóng cần thiết cho phát triển rễ, rễ khỏe có màu xanh Bên cạnh đó lan in vitro (AS3) nhiều xanh hẳn so với nghiệm thức AS2 AS1 Với kết phần chứng minh ánh sáng tổ hợp đèn LED có tác động đến trình rễ lan Trầm rồng đỏ 43 AS1 AS2 AS3 Hình 3.10 Ảnh hưởng ánh sáng đến khả rễ lan Trầm rồng đỏ 3.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến khả sống giai đoạn vườn ươm Cây hoàn chỉnh có chiều cao - cm, rễ mập, có - rễ/cây huấn luyện ánh sáng tán xạ khoảng - tuần trước cấy vườn ươm Sau đó rửa thạch bám rễ cấy loại giá thể khác nhau, giá thể qua xử lý Kết sau tuần sau tuần thể bảng 3.9 bảng 3.10 Bảng 3.9 Ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn giá thể đến khả sống mô giai đoạn vườn ươm sau tuần Tỷ lệ giá thể Tổng số Tỷ lệ (phần) CTTN Đặc điểm mẫu cấy sống sót Vỏ Rêu (cây) (%) thơng rừng GT1 1 90 78,2±0,14 Cây yếu, rễ bám giá thể GT2 90 GT3 90 F F crit Cây khỏe, thân cứng, xuất mới, rễ bám giá thể tốt 83,1±0,17 Cây yếu, rễ bám giá thể 6,9 4,31 92,5±0,20 44 Qua bảng số liệu cho thấy, giá thể mô lan Trầm rồng đỏ có ảnh hưởng rõ rệt đến tỷ lệ sống giai đoạn vườn ươm Giá thể vỏ thông rêu rừng theo tỷ lệ 1:1 (GT1) cho tỷ lệ sống thấp (chỉ đạt 78,2 %), yếu, rễ bám vào giá thể Giá thể trộn vỏ thông rêu rừng theo tỷ lệ 1:2 (GT2) cho kết tốt với tỷ lệ sống sót 92,5%, khỏe, thân cứng, xuất mới, rễ bám vào giá thể tốt Nhưng tăng tỷ lệ rêu rừng công thức GT3 tỷ lệ sống giảm, yếu, rễ bám vào giá thể Có thể phối trộn rêu rừng với tỷ lệ cao làm cho nước khơng tốt, môi trường ẩm làm giảm sinh trưởng phát triển rễ GT1 GT2 GT3 Hình 3.11 Cây mô lan Trầm rồng đỏ giá thể khác sau tuần Sau tuần ngôi, giá thể mô lan Trầm rồng đỏ có ảnh hưởng đến tỷ lệ sống giai đoạn vườn ươm Giá thể vỏ thông rêu rừng theo tỷ lệ 1:1 (GT1) cho tỷ lệ sống thấp (chỉ đạt 74,4 %), yếu, thân nhỏ, rễ bám vào giá thể Giá thể trộn vỏ thông rêu rừng theo tỷ lệ 1:2 (GT2) cho kết tốt với tỷ lệ sống sót 90,8%, khỏe, thân cứng, xuất mới, rễ bám vào giá thể tốt 45 Ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn giá thể đến khả sống mô giai đoạn vườn ươm sau tuần dược thể bảng sau: Bảng 12 Ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn giá thể đến khả sống mô giai đoạn vườn ươm sau tuần Tỷ lệ giá thể (phần) CTTN Vỏ Rêu thông rừng Tổng Tỷ lệ số mẫu sống sót cấy (%) (cây) Đặc điểm Cây yếu, thân nhỏ, rễ bám giá thể Cây khỏe, thân cứng, xuất GT2 90 90,8±0,18 mới, rễ bám giá thể tốt Cây yếu, thân nhỏ, rễ bám GT3 90 80,2±0,16 giá thể F 6,9 F crit 4,31 Giá thể trộn vỏ thông rêu rừng theo tỷ lệ 1:3 (GT3) cho tỷ lệ GT1 1 90 74,4±0,14 sống sót 80,2%, yếu, thân nhỏ, rễ bám vào giá thể GT1 GT2 GT3 Hình 3.12 Cây mơ lan Trầm rồng đỏ giá thể khác sau tuần 46 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Dựa vào kết thu từ thí nghiệm trình thực luận văn tốt nghiệp: “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitro lan Trầm rồng đỏ (Dendrobium nestor red Dragon)” đưa kết luận sau: - Công thức khử trùng mẫu đạt tỷ lệ tái sinh cao là: Công thức KT2: Khử trùng cồn 70ᵒ thời gian phút, HgCl 0,1% thời gian phút Cefotaxime 400 mg/l thời gian 10 phút cho kết tốt - Công thức môi trường thích hợp để nhân nhanh thể chồi lan Trầm rồng đỏ là: Môi trường MS + 0,2 mg/l NAA + 0,3 mg/l BAP + 0,5 mg/l Kinetin + 100ml/l dịch chiết khoai tây + 20g/l đường sucrose + g/l agar - Công thức môi trường thích hợp để nhân nhanh chồi lan Trầm rồng đỏ là: Môi trường MS + 100ml/l dịch chiết khoai tây + 100ml/l dịch chuối + 20g/l đường sucrose + 5g/l agar + 0,1mg/l NAA + 0,5mg/l BAP + 0,5mg/l Kinetin - Công thức rễ tốt công thức môi trường R2 (MS + 100ml/l dịch chiết khoai tây + 100ml/l dịch chuối + 20g/l đường + 5g/l agar + 0,3 mg/l NAA) công thức rễ tốt cho số rễ trung bình/cây 5,41; chiều dài rễ 3,55 cm; rễ dài, mập, màu xanh đậm - Giá thể hỗn hợp phối trộn vỏ thông rêu rừng theo tỷ lệ 1:2 (GT2) cho kết tốt với tỷ lệ sống sót 92,5% (sau tuần) 90,8% (sau tuần), khỏe, thân cứng, xuất mới, rễ bám vào giá thể tốt Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng loại mơi trường dinh dưỡng, chất điều hịa sinh trưởng ảnh hưởng tổ hợp loại ánh sáng đèn LED đơn sắc khác đến khả tạo thể chồi rễ lan Trầm rồng đỏ 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2009) Nghiên cứu nhân giống lan Dendrobium anosmum, Dendrobium mini phương pháp nuôi cấy mô nghiên cứu loại giá thể trồng lan Dendrobium mini thích hợp Nguyễn Thị Hồng Gấm cộng (2007) Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống lan Ngọc Điểm Tai Trâu (Rhychostylis gigantea) phương pháp nuôi cấy in vitro Viện Công nghệ sinh học, Đại học Lâm nghiệp Phan Thị Kim Hạnh cộng (2008) Nghiên cứu nhân nhanh in vitro loài lan Đai Châu (Rhynchostylis gigantea) Vũ Ngọc Lan cs, 2010 Nghiên cứu ảnh hưởng giá thể trồng đến trinh sinh trưởng lan Hoàng thảo trúc đen loại giá thể: gỗ nhãn, than củi, xơ dừa Nguyễn Thị Loan (2010) Nghiên cứu hoàn thiện kỹ thuật nhân giống lan Kim Tuyến (Anoectochilus setaceus) qua phôi hạt phương pháp nhân giống in vitro Trường Đại học Lâm nghiệp Phạm Thị Liên (2002) Nghiên cứu nhân giống in vitro số loài địa lan Ngọc Minh cộng (2022) Nghiên cứu biện pháp thử nghiệm nhân giống trồng lan Trầm rồng đỏ (Dendrobium nestor O’Brien) Lê Minh Nguyệt cộng (2009) Nghiên cứu ảnh hưởng mơi trường chất điều hồ sinh trường đến khả tái sinh nhân nhanh giống Hoàng lan thuộc chi lan Kiếm (Cymbidium) Dương Tấn Nhựt cộng (2006) Nghiên cứu ảnh hưởng hệ thống ni cấy đến hình thành thể chồi rút ngắn thời gian sinh trường hai giống địa lan (cymbidium spp.) Vàng Mỳ Tím Hột 48 10 Vũ Thị Phan, Khuất Thị Hải Ninh, Nguyễn Thị Thơ (2019) Nghiên cứu nhân giống in vitro lan trầm tím (Dendrobium nestor) Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Lâm nghiệp, (1): 38- 43 11 Nguyễn Thị Thuận (2020) “Nghiên cứu tác động số yếu tố hóa - lý nhân giống ba dịng lan Cattleya phương pháp ni cấy in vitro” Khóa luận tốt nghiệp- Trường Đại học Lâm nghiệp 12 Nguyễn Đức Thuấn “Nghiên cứu tuyển chọn phát triển số loài địa lan kiếm địa có giá trị kinh tế cao vùng miền núi phía Bắc” 13 Lê Thị Thúy, Trần Thị Anh Thoa (2017) “Ảnh hưởng cuả đèn Led lên sinh trưởng Dendrobium lituiflorum Lindl Dendrobium Shavin White” Tạp chí Khoa học cơng nghệ Thực phẩm, 13 (1) 68-73 14 Khuất Hữu Trung cộng (2005) Nghiên cứu nhân nhanh phong lan Hồ Điệp từ phát hoa chóp rễ Viện Di truyền Nơng nghiệp Hà Nội 15 Nguyễn Văn Việt (2017) Ứng dụng kĩ thuật ni cấy in vitro nhân giống lan Hồng thảo kèn (Dendrobium lituiflorum Lindley) Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Lâm nghiệp, 4: 39 - 45 Tài liệu nước 16 Hahn et al (2000) Effect of light quality on stem elongation of Pelargonium Sci Hortic 45: 345-351 17 Kubota, S and K Yoneda 1993 Effect of light intensity preceding daynight temperatures on the sensitivity of Phalaenopsis to flower J Japan Soc Hort Sci 62:595-56 18 So-young, P., Hosakatte, N M Kee-yoeup, P (2002) Rapid propagation of Phalaenopsis from floral stalk-derived leaves In Vitro Cell Dev Biol.—Plant 38:168–172 WEBSITE 19 https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi 20 https://www.bluenanta.com/detail/hybrid/ 21 https:// www.trongraulamvuon.com 22 http://www.orchidkb.com/images/mapbig.gif 49 PHỤ LỤC 50 Phụ biểu Ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến khả tạo mẫu tỷ lệ tái sinh mẫu Thời gian khử trùng (phút) Tỉ lệ Tổng Số mẫu mẫu CTTN Cồn HgCl HgCl Cefotaxi số mẫu 2 sạch cấy 70ᵒ 0,1% 0,1% me 400 (%) mg/l Tỷ lệ Số mẫu mẫu sạch tái tái sinh sinh (%) KT1 10 90 67 74,4 ± 0,04 62 68,9 ± 0,03 KT2 10 90 77 85,6 ± 0,07 67 74,4 ± 0,05 KT3 10 90 82 91,1 ± 0,08 49 54,4 ± 0,02 51 Phụ biểu Kết ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả tạo thể chồi (sau tuần nuôi cấy) CTTN Chất điều hòa sinh trưởng (mg/l) NAA BAP Kinetin Tổng số Số mẫu Tỷ lệ mẫu mẫu cấy tạo thể tạo thể chồi chồi (%) CT1 0,2 0,1 0,5 90 54 CT2 0,2 0,3 0,5 90 70 CT3 0,2 0,5 0,1 90 67 CT4 0,2 0,5 0,3 90 81 Đặc điểm thể chồi 60,00 ± 0,03 77,78 ± 0,05 Thể chồi nhỏ, vàng Thể chồi nhỏ, xanh Thể chồi 74,44 ± nhỏ, xanh 0,04 nhạt Thể 90,00 ± mập, 0,11 đậm chồi xanh 52 Phụ biểu Kết ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả nhân nhanh thể chồi sau tuần nuôi cấy CTTN NN1 Chất điều hòa sinh Tổng Hệ số nhân Đặc điểm thể chồi trưởng (mg/l) số mẫu thể chồi (lần) NAA BAP Kinetin cấy 0,2 0,3 0,3 90 4,12 ± 0,04 Thể chồi nhỏ, vàng NN2 0,2 0,3 0,5 90 NN3 0,2 0,5 0,3 90 NN4 0,2 0,5 0,5 90 Thể chồi mập, xanh đậm Thể chồi nhỏ, xanh 4,55 ± 0,02 nhạt 6,62 ± 0,05 4,07 ± 0,04 Thể chồi nhỏ, vàng 53 Phụ biểu Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng đến khả kích thích tăng trưởng nhân nhanh chồi lan Trầm rồng đỏ Chất điều hòa sinh Tổng Chiều cao trưởng (mg/l) Đặc điểm số Hệ số nhân trung CTTN chồi Kineti mẫu chồi (lần) bình NAA BAP cấy chồi (cm) n Chồi nhỏ, ngắn, 0,1 0,3 0,3 90 2,42±0,06 2,23±0,05 NC1 vàng Chồi nhỏ, ngắn, 0,1 0,3 0,5 90 3,16±0,07 2,97±0,07 NC2 xanh Chồi nhỏ, ngắn, 0,1 0,5 0,3 90 3,64±0,09 3,46±0,08 NC3 xanh Chồi mập, dài, 0,1 0,5 0,5 90 4,53±0,12 4,33±0,10 NC4 xanh đậm 54 Phụ biểu Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến khả rễ lan Trầm rồng đỏ sau tuần nuôi cấy Tổng NAA số CTTN (mg/l) mẫu cấy Tỷ lệ Chiều dài Số rễ chồi trung trung rễ bình/rễ bình/cây (%) (cm) Đặc điểm rễ R1 0,1 90 100 3,83±0,08 3,11±0,07 Rễ ngắn, màu xanh R2 0,3 90 100 5,41±0,10 3,55±0,08 Rễ dài, mập, màu xanh đậm R3 0,5 90 100 4,50±0,08 2,78±0,07 Rễ dài, nhỏ, màu trắng R4 0,7 90 100 3,05±0,06 2,21±0,05 Rễ ngắn, nhỏ, màu trắng 55 Phụ biểu Ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn giá thể đến khả sống mô giai đoạn vườn ươm sau tuần Tỷ lệ giá thể Tổng số Tỷ lệ (phần) CTTN mẫu cấy sống sót Vỏ Rêu (cây) (%) thơng rừng GT1 1 Đặc điểm 90 78,2±0,14 Cây yếu, rễ bám giá thể GT2 90 Cây khỏe, thân cứng, xuất 92,5±0,20 mới, rễ bám giá thể tốt GT3 90 83,1±0,17 Cây yếu, rễ bám giá thể 56 Phụ biểu Ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn giá thể đến khả sống mô giai đoạn vườn ươm sau tuần Tỷ lệ giá thể Tổng số Tỷ lệ (phần) CTTN mẫu cấy sống sót Vỏ Rêu (cây) (%) thông rừng GT1 1 90 GT2 90 GT3 90 Đặc điểm Cây yếu, thân nhỏ, rễ bám giá thể Cây khỏe, thân cứng, xuất 90,8±0,18 mới, rễ bám giá thể tốt Cây yếu, thân nhỏ, rễ bám 80,2±0,16 giá thể 74,4±0,14