(LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitron và trồng cây sâm cau (curculigo orchioids gaertn ) trong vườm ươm

HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ BÌNH NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG IN VITRO VÀ TRỒNG CÂY SÂM CAU (CURCULIGO ORCHIOIDES GAERTN.) TRONG VƯỜN ƯƠM Ngành; Khoa học trồng Mã số: 8620110 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Ích Tân TS Phạm Hương Sơn NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 download by : skknchat@gmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Bình i download by : skknchat@gmail.com LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Ích Tân TS Phạm Hương Sơn tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho suốt trình học tập thực đề tài! Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, môn Canh tác học, khoa Nông học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình thực đề tài hồn thành luận văn! Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức Phịng thí nghiệm Phát triển Ứng dụng Y sinh công nghệ cao, Viện Ứng dụng Công nghệ, Bộ Khoa học Công nghệ giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình thực đề tài! Tơi xin trân trọng cảm ơn TS Nguyễn Thị Lài tận tâm giúp đỡ, hướng đẫn động viên suốt trình thực đề tài! Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi q trình học tập mình./ Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Bình ii download by : skknchat@gmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Trích yếu luận văn viii Thesis abstract x Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Giới thiệu sâm cau 2.1.1 Vị trí phân bố phân loại 2.1.2 Đặc điểm thực vật học 2.1.3 Đặc điểm sinh thái học 2.1.4 Thành phần hóa học 2.1.5 Giá trị sử dụng 2.1.6 Thực trạng khai thác loài Sâm cau Việt Nam 2.2 Một số kết nghiên cứu sâm cau giới việt nam 2.2.1 Tình hình nghiên cứu Sâm cau giới 2.2.2 Tình hình nghiên cứu Sâm cau nước 12 2.3 Các nhân tố ảnh hưởng tới trình nhân giống ni cấy mơ tế bào 14 2.3.1 Môi trường nuôi cấy 14 2.3.2 Các chất điều hòa sinh trưởng 15 2.3.3 Môi trường vật lý 16 2.3.4 Vật liệu nuôi cấy 17 2.3.5 Điều kiện vô trùng 17 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 18 3.1 Địa điểm nghiên cứu 18 3.2 Thời gian nghiên cứu 18 iii download by : skknchat@gmail.com 3.3 Đối tượng/vật liệu nghiên cứu 18 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 18 3.3.2 Vật liệu nghiên cứu 18 3.4 Nội dung nghiên cứu 20 3.5 Phương pháp nghiên cứu 20 3.5.1 Phương pháp nhân giống in vitro 20 3.5.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 21 3.5.3 Các tiêu theo dõi 25 3.5.4 Phương pháp xử lý số liệu 26 Phần Kết thảo luận 27 4.1 Nghiên cứu khử trùng tạo vật liệu khởi đầu cho nuôi cấy in vitro sâm cau 27 4.1.1 Ảnh hưởng chất khử trùng tới tỷ lệ sống mẫu cấy 27 4.1.2 Ảnh hưởng chất chất kích thích sinh trưởng TDZ đến khả tạo vật liệu khởi đầu 30 4.2 Nghiên cứu nhân nhanh chồi sâm cau 32 4.2.1 Ảnh hưởng tổ hợp chất điều tiết sinh trưởng (TDZ + IBA) đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau 33 4.2.2 Ảnh hưởng phloroglucinol (PG) đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau 35 4.2.3 Ảnh hưởng AgNO3 đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau 37 4.2.4 Ảnh hưởng tảo Spirulina đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau 38 4.3 Nghiên cứu tạo in vitro hoàn chỉnh 41 4.3.1 Ảnh hưởng iba đến tạo in vitro hoàn chỉnh 41 4.4 Nghiên cứu kỹ thuật trồng sâm cau vườn ươm 45 4.4.1 Ảnh hưởng giá thể khác đến sinh trưởng phát triển Sâm cau in vitro vườn ươm 46 4.4.2 Ảnh hưởng số loại phân bón khác đến sinh trưởng phát triển Sâm cau in vitro vườn ươm 51 Phần Kết luận kiến nghị 57 5.1 Kết luận 57 5.2 Kiến nghị 57 Tài liệu tham khảo 59 Phụ lục 63 Phụ lục Thành phần loại môi trường nuôi cấy 63 iv download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt CT Công thức CV% Hệ số biến động (Correlation of Variants) Đ/C Đối chứng IBA Indolbutyride acid LSD0,05 So sánh theo giá trị khác biệt có ý nghĩa nhỏ mức α  0,05 MS Murashige and Skoog PG phloroglucinol TDZ Thidiazuron v download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Phân loại Sâm sau Bảng 3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng H2O2 NaOCl 22 Bảng 4.1 Ảnh hưởng chất khử trùng H2O2 lên mẫu cấy Sâm cau 27 Bảng 4.2 Ảnh hưởng chất khử trùng NaOCl lên mẫu cấy Sâm cau 29 Bảng 4.3 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng TDZ đến khả tạo chồi từ mẫu cấy ban đầu (sau tuần nuôi cấy) 31 Bảng 4.4 Ảnh hưởng tổ hợp (TDZ + IBA) đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau (sau tuần nuôi cấy) 34 Bảng 4.5 Ảnh hưởng phloroglucinol (PG) đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau (sau tuần nuôi cấy) 36 Bảng 4.6 Ảnh hưởng AgNO3 đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau (sau tuần nuôi cấy) 37 Bảng 4.7 Ảnh hưởng tảo Spirulina đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau (sau tuần nuôi cấy) 39 Bảng 4.8 Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ sinh trưởng chồi Sâm cau in vitro (6 tuần nuôi cấy) 42 Bảng 4.9 Ảnh hưởng giá thể trồng khác đến chiều cao Sâm cau in vitro giai đoạn vườn ươm 47 Bảng 4.10 Ảnh hưởng giá thể trồng khác đến số Sâm cau in vitro giai đoạn vườn ươm 49 Bảng 4.11 Ảnh hưởng giá thể trồng khác đến sinh trưởng phát triển Sâm cau in vitro giai đoạn vườn ươm (sau 10 tuần) 50 Bảng 4.12 Ảnh hưởng phân bón khác đến chiều cao Sâm cau in vitro giai đoạn vườn ươm 52 Bảng 4.13 Ảnh hưởng phân bón khác đến số Sâm cau in vitro giai đoạn vườn ươm 54 Bảng 4.14 Ảnh hưởng phân bón khác đến đến sinh trưởng phát triển Sâm cau in vitro giai đoạn vườn ươm 55 vi download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Thân rễ Sâm cau Hình 2.2 Lá Sâm cau Hình 2.3 Hoa Sâm cau .6 Hình 2.4 Quả hạt Sâm cau Hình 3.1 Mẫu Sâm cau đưa vào nuôi cấy in vitro 18 Hình 3.2 Growmore (N: P: K = 30: 10: 10) 19 Hình 3.3 B1 Thái Lan 19 Hình 3.4 Atonik 1.8 SL 19 Hình 4.1 Ảnh hưởng chất khử trùng H2O2 đến tỷ lệ mẫu sống .28 Hình 4.2 Ảnh hưởng chất khử trùng NaOCl đến tỷ lệ mẫu sống 29 Hình 4.3 Mẫu nảy chồi sau tuần nuôi cấy 30 Hình 4.4 Ảnh hưởng nồng độ TDZ đến số chồi 32 mẫu cấy ban đầu .32 Hình 4.5 Ảnh hưởng tổ hợp nồng độ (TDZ+IBA) đến 34 số chồi Sâm cau 34 Hình 4.6 Ảnh hưởng tổ hợp (TDZ + IBA) đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau 35 Hình 4.7 Ảnh hưởng AgNO3 đến số chồi Sâm cau 38 Hình 4.8 Ảnh hưởng tảo Spirulina đến số chồi Sâm cau 39 Hình 4.9 Kết nhân nhanh chồi Sâm cau 41 Hình 4.10 Ảnh hưởng IBA đến tạo in vitro hoàn chỉnh .44 Hình 4.11 Cây in vitro hoàn chỉnh 44 Hình 4.12 Cây Sâm cau đưa vườn ươm .46 Hình 4.13 Ảnh hưởng giá thể trồng khác đến tỷ lệ sống .51 Sâm cau in vitro giai đoạn vườn ươm 51 Hình 4.14 Sâm cau giai đoạn vườn ươm 56 vii download by : skknchat@gmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Bình Tên luận văn: Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitro trồng Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn.) vườn ươm Ngành: Khoa học trồng Mã số: 8620110 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitro trồng Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn.) vườn ươm nhằm cung cấp giống Sâm cau phục vụ phát triển sản xuất Phương pháp nghiên cứu Nội dung nghiên cứu: - Nghiên cứu khử trùng tạo vật liệu khởi đầu cho nuôi cấy in vitro Sâm cau - Nghiên cứu nhân nhanh chồi Sâm cau - Nghiên cứu tạo in vitro hoàn chỉnh - Nghiên cứu kỹ thuật trồng Sâm cau vườn ươm Vật liệu nghiên cứu bao gồm: Cây Sâm cau thu thập Sơn La Phương pháp nghiên cứu: Phương pháp bố trí thí nghiệm phịng thí nghiệm: Các thí nghiệm bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên (CRD) với lần nhắc lại Phương pháp bố trí thí nghiệm vườn ươm: Các thí nghiệm bố trí theo khối ngẫu nhiên đầy đủ (RCBD) với lần nhắc lại Kết thảo luận Khử trùng mẫu Sâm cau nuôi cấy thích hợp sử dụng NaOCl nồng độ 2% khoảng thời gian 15 phút, tỷ lệ mẫu sống đạt tới 81,0% Môi trường khởi động tạo vật liệu khởi đầu thích hợp mơi trường MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + g/l than hoạt tính + 1,5 mg/l TDZ, pH 5,5 cho số chồi đạt 3,1 chồi; số lá/chồi đạt 2,7 lá, chồi sinh trưởng mức độ sau tuần nuôi cấy Môi trường nhân nhanh chồi thích hợp mơi trường MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + g/l than hoạt tính + 1,5 mg/l TDZ + 0,5 mg/l IBA + 1,0 mg/l AgNO3 + 50 mg/l tảo Spirulina, pH 5,5 cho tỷ lệ mẫu tạo chồi đạt 80,9%; số chồi đạt viii download by : skknchat@gmail.com 20,8 chồi; số lá/chồi đạt 5,2 lá, chồi mập, cứng, xanh bóng sau tuần ni cấy Tạo hồn chỉnh in vitro thích hợp môi trường MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + g/l than hoạt tính + 0,5 mg/l IBA, pH 5,5 cho cho tỷ lệ chồi rễ đạt 100%, chiều cao đạt cao 11,8cm; số 7,2 lá; số rễ đạt 10,3 rễ chiều dài rễ đạt 5,1cm sau tuần nuôi cấy Khả sống phát triển Sâm cau đưa từ ống nghiệm nuôi cấy mô vườn ươm phụ thuộc chặt chẽ vào giá thể trồng loại phân bón + Giá thể thích hợp giá thể Mùn rừng + Vụn xơ dừa (70:30) cho tỷ lệ sống tiêu sinh trưởng phát triển đạt cao đạt 97,8%; chiều cao đạt 16,4cm; số đạt 6,6 lá; số rễ xuất 6,4 rễ; khỏe, mập, to xanh đậm sau 10 tuần trồng + Ở giai đoạn vườn ươm dùng phân bón Growmore Mỹ (30:10:10) phun 1lần/tuần cho sinh trưởng phát triển tốt nhất, mập khỏe màu xanh bóng Chiều cao đạt cao 22,6 cm; số đạt 11,0 số rễ đạt cao 9,7 rễ ix download by : skknchat@gmail.com PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Trong trình nghiên cứu nhân nhanh lồi dược liệu Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn.) quý Việt Nam, từ kết thu cho kết luận bước đầu: Khử trùng mẫu Sâm cau ni cấy thích hợp sử dụng NaOCl nồng độ 2% khoảng thời gian 15 phút, tỷ lệ mẫu sống đạt 81,0% Môi trường khởi động tạo vật liệu khởi đầu thích hợp môi trường MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + g/l than hoạt tính + 1,5 mg/l TDZ, pH 5,5 cho tỷ lệ mẫu tạo chồi đạt 80,9%; số chồi đạt 3,1 chồi; số lá/chồi đạt 2,7 lá, chồi sinh trưởng mức độ sau tuần nuôi cấy Mơi trường nhân nhanh chồi thích hợp mơi trường MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + g/l than hoạt tính + 1,5 mg/l TDZ + 0,5 mg/l IBA + 1,0 mg/l AgNO3 + 50 mg/l tảo Spirulina, pH 5,5 cho số chồi đạt 20,8 chồi; số lá/chồi đạt 5,2 lá, chồi mập, cứng, xanh bóng sau tuần ni cấy Tạo hồn chỉnh in vitro thích hợp môi trường MS + 30 g/1 sucrose + 5,5 g/1 agar + 200 ml/l nước dừa + g/l than hoạt tính + 0,5 mg/l IBA, pH 5,5 cho cho tỷ lệ chồi rễ đạt 100%, chiều cao đạt cao 11,8cm; số 7,2 lá; số rễ đạt 10,3 rễ chiều dài rễ đạt 5,1cm sau tuần nuôi cấy Khả sống phát triển Sâm cau đưa từ ống nghiệm nuôi cấy mô vườn ươm phụ thuộc chặt chẽ vào giá thể trồng loại phân bón + Giá thể thích hợp giá thể Mùn rừng + Vụn xơ dừa (70:30) cho tỷ lệ sống tiêu sinh trưởng phát triển đạt cao 97,8%; chiều cao đạt 16,4cm; số đạt 6,6 lá; số rễ xuất 6,4 rễ; khỏe, mập, to xanh đậm sau 10 tuần trồng + Ở giai đoạn vườn ươm dùng phân bón Growmore Mỹ (30:10:10) phun 1lần/tuần cho sinh trưởng phát triển tốt nhất, mập khỏe màu xanh bóng Chiều cao đạt cao 22,6 cm; số đạt 11,0 số rễ đạt cao 9,7 rễ 5.2 KIẾN NGHỊ Trên sở kết nghiên cứu thu được, bước đầu đề xuất ứng dụng kết thu nhân giống in vitro cho loài Sâm cau 57 download by : skknchat@gmail.com (Curculigo orchioides Gaertn.), đồng thời làm tiền đề cho nghiên cứu nhân giống loài Sâm cau dược liệu khác Tiếp tục nghiên cứu giai đoạn sinh trưởng vườn ươm Sâm cau phục vụ cho phát triển sản xuất 58 download by : skknchat@gmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt: Bộ Khoa học Công nghệ, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam (2007) Sách Đỏ Việt Nam Nhà xuất KHTN&CN, Hà Nội tr 396-397 Lê Văn Chi (1992) Cách sử dụng chất điều hoà sinh trưởng vi lượng hiệu cao NXB Khoa học - Kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Bích Ngọc, Nguyễn Mạnh Tuyển, Phương Thiện Thương, Vũ Văn Tuấn, Nguyễn Văn Khiêm Vũ Duy Hồng (2015) Ba hợp chất phenolic glycosid phân lập từ thân rễ sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn.) thu hái Tây Nguyên Tạp chí Dược học Nguyễn Đức Thành (2000) Nuôi cấy mô, tế bào thực vật, Nghiên cứu ứng dụng Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Quang Thạch (1995) Công nghệ sinh học thực vật NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Quang Thạch Nguyễn Thị Hương (2010) Kết nghiên cứu nhân giống Khoai môn sọ phương pháp in vitro Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam Nguyễn Thị Cúc, Nguyễn Văn Kết, Dương Tấn Nhựt, Nguyễn Thị Kim Lý (2014) Nghiên cứu số hợp chất hữu lên qúa trình sinh trưởng phát triển lan hài Hồng (Paphiopedilum delenatii) in vitro Tạp chí sinh học 36(1se) tr 250-256 Nguyễn Thị Lài, Phạm Hương Sơn, Bùi Thị Thanh Phương, Phạm Minh Duy, Đỗ Thị Thơm, Nguyễn Thị Bình Nguyễn Ích Tân (2018) Nghiên cứu nhân giống in vitro Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn.) từ nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Việt Nam 60 (12) tr 50-54 Phan Thị Hồng Thủy nhóm nghiên cứu Phịng Hỗ trợ Cơng nghệ Tế bào Thực vật (2016) Nhân giống Sâm cau (Curculigo orchioides) - loại dược liệu quý, phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao 10 Trần Mai Hương (2016) Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học số dịch chiết thân rễ sâm cau tỉnh Quảng Ngãi Luận Văn Thạc sỹ Khoa học Đại học Đà Nẵng 59 download by : skknchat@gmail.com 11 Trần Văn Minh (1994) Nuôi cấy mô tế bào thực vật Phân viện Công nghệ sinh học Thành phố Hồ Chí Minh tr 58-97 12 Trương Thị Bích Phượng, Đỗ Thị Hoa Thắm, Bùi Lê Thanh Nhàn Nguyễn Đức Tuấn (2018) Nghiên cứu tạo chồi in vitro Sâm cau (Curculigo orchiodes Gaertn.) Thừa Thiên Huế Tạp chí Y dược học 1(8) Tr 37-46 13 Viện Dược liệu (2006) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam Tập NXB Khoa Học Kỹ Thuật, Hà Nội tr 693 14 Võ Châu Tuấn, Nguyễn Thị Út Trần Quang Dần (2011) Nhân giống in vitro Sâm cau (Curculigo orchiodes Gaertn.) - Một loài thuốc q Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Đại học Đà Nẵng 6(47) tr 163-169 15 Võ Hà Giang Ngơ Xn Bình (2010) Nghiên cứu nhân giống phong lan đuôi Chồn (Rhynchotylis rotunda (L.) Blume) phương pháp ni cấy mơ tế bào Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nông thôn (5) tr 25-30 II Tài liệu tiếng Anh: 16 Adiyecha P and Jasrai Y (2012) Histological evidences for de novo shoot formation in an endangered medicinal herb - Curculigo orchioides Gaertn An International Quarterly Journal of Life Sciences 7(1) pp 39-41 17 Adiyecha P Roshni, Jignasa Joshi, Pradeep U Verma and Yogesh T Jasrai (2013) Direct And Indirect Organogenesis For Mass Multiplication Of An important - Medicinal But Endangered herb - Curculigo Orchioides Gaertn International Journal of Innovative Research in Science, Engineering and Technology (12) pp 7205-7209 18 Agrawal VS (1997) Drugs plants of India New Delhi: Kalyani Publisher 19 Dagral (2013) Global herbal market pp 38 20 Dal B., Gerencsér Zs., Szendrő Zs., Mugnai C., Cullere M., Ruggeri S., Mattioli S., Castellini C., Dalle Zotte A., (2014) Effect of dietary supplementation of Spirulina (Arthrospira platensis) and Thyme (Thymus vulgaris) on rabbit meat appearance, oxidative stability and fatty acid profile during retail display Meat Sci 96 (1) pp 114-119 21 Dutta Gupta and T.K.Sahoo (2015) Light emitting diode (LED) - induced alteration of oxidative events during in vitro shoot organogenesis of Curculigo orchioides Gaertn Acta Physiologiae Plantarum 37 pp 233 60 download by : skknchat@gmail.com 22 IUCN, 2012 Red List of IUCN 23 Malviya Zhen - Hui Wang, Jian Huang, Xiao - Ci Ma, Guo - Yu Li, Yue - Ping Ma, Ning Li and Jin - Hui Wang (2013) Phenolic glycosides from Curculigo orchioides Gaertn Fitoterapia 86 pp 64-69 24 Nagesh KS (2008) High frequency multiple shoot induction of Curculigo orchioides Gaertn Shoot tip v/s rhizome disc Taiwania Vol 53(3) pp 242-247 25 Nagesh KS and Shanthamma C (2016) Encapsulation of somatic embryoids of Curculigo orchioides Gaertn and its germination European Journal of Biotechnology and Bioscience (6) pp 38-42 26 Nahid Babaei, Nur Ashikin Psyquay Abdullah, Ghizan Saleh and Thohirah Lee Abdullah (2014) An Efficient In Vitro Plantlet Regeneration from Shoot Tip Cultures of Curculigo latifolia, a Medicinal Plant The Scientific World Journal Vol 2014 pp.9 27 P.E Rajasekharan, S Ganeshan and Sunitha Bhaskaran (2016) In vitro plantlet regeneration study for in vitro conservation in Curculigo orchioides - an endangered medicinal plant Electronic Journal of Plant Breeding 7(4) pp 1056-1061 28 Rajagopalan K, Sivarajan VV, Varier PR, Warrier PK, Nambier VPK, Ramankutty C and Eds (1995) Indian Medicinal Plants Orient Longman Ltd, Chennai pp 245 29 Samaneh Zokae, Tahmineh Esfandiyari Sabzevar and Raheleh Ahmadzadeh Ghavidel (2016) Effect of Plant Hormone on Micropropagation and Callogenesis of Medicinal Plant (Curculigo orchioides) Journal of Agricultural Science and Engineering (5) pp 36-39 30 Sharma A., Kumar V., Parvatam G., Ravishankar G., A (2008) Induction of in vitro flowering in Capsicum frutescens under the influence of silver nitrate and cobalt chloride and pollen transformation.of multiple shoots and plant regeneration from leaf segments of fig tree (Ficus carica L.) Journal of Plant Biology 50 p 440-446 31 Shende CB, Undal VS and Chaudhari US (2012) In vitro propagation of Curculigo orchioides from rhizome bud Journal of Agricultural Technology 8(1) pp 353-362 32 Sudha Sahay and Vincent J Braganza (2017) Low Cost Multiplication of Curculigo orchioides in Shake Flask Culture Biosiences Biotechnology Research Asia 14 (3) pp 1089-1093 61 download by : skknchat@gmail.com 33 Swati Patel, Chaudhari US and Ayu nazreena, (2011) Induction of somatic embryogenesis and genetic fidelity of endangered medicinal herb Curculigo orchioides Gaertn Research in Plant Biology 1(3).pp 48-52 34 T Pham, M.D Tran, T Nguyen, Q.C Pham1 and Q.T Nguyen (2018) Rapid Vegetative Propagation of Curculigo orchioides Gaertn using Rhizome Cutting Endangered Medicinal Herb International Journal of Agriculture Innovations and Research Vol (2) pp 2319-1473 35 Zuraida A.R., Fatin liyana izzati K and Ayu nazreena O (2014) In vitro plant propagation for rapid multiplication of Melicope lunuankenda: a plant species of high medicinal value International Journal of Pharma and Bio Sciences (1) pp 1148-1156 III Nguồn từ Internet: 36 Tra cứu dược liệu (2017) Hình ảnh nhận dạng sâm cau, truy cập ngày 25/06/2019 http://tracuuduoclieu.vn/hinh-anh-nhan-dang-cay-sam-cau.html 62 download by : skknchat@gmail.com PHỤ LỤC PHỤ LỤC THÀNH PHẦN CƠ BẢN CỦA CÁC LOẠI MƠI TRƯỜNG NI CẤY Bảng Mơi trường Murashige & Skoog (1962) Đa lượng Vi lượng Thành phần Nồng độ (mg/l) CaCl2.2H2O 440 KH2PO4 170 KNO3 1900 MgSO4.7H2O 370 NH4NO3 1650 MnSO4.4H2O 22,3 ZnSO4.7H2O 8,6 H3BO3 6,2 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 FeSO4.7H2O 27,8 Na2EDTA 37,5 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 Glyxin Vitamin thành phần hữu Myo-inositol 100 Acid nicotinic (Niaxin) 0,5 Thiamin HCl (vitamin B1) 0,1 Pyridoxine HCl (vitamim B6) 0,5 63 download by : skknchat@gmail.com PHỤ LỤC KẾT QUẢ PHÂN TÍCH THỐNG KÊ 1) Ảnh hưởng TDZ đến khả tạo vật liệu khởi đầu BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO CHOI FILE TDZ **/**/18 21:50 :PAGE Anh huong cua TDZ VARIATE V002 SO CHOI CHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 9.70267 2.42567 191.50 0.000 * RESIDUAL 10 126666 126666E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 9.82933 702095 BALANCED ANOVA FOR VARIATE LA/CHOI FILE TDZ **/**/18 21:50 :PAGE Anh huong cua TDZ VARIATE V003 LA/CHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3.69600 924000 92.40 0.000 * RESIDUAL 10 100000 100000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.79600 271143 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TDZ **/**/18 21:50 :PAGE Anh huong cua TDZ MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SO CHOI 1.10000 2.00000 2.86667 3.10000 1.30000 LA/CHOI 1.50000 2.10000 2.50000 2.70000 1.50000 SE(N= 3) 0.649785E-01 0.577350E-01 5%LSD 10DF 0.204750 0.181925 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TDZ **/**/18 21:50 :PAGE Anh huong cua TDZ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SO CHOI LA/CHOI GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.0733 15 2.0600 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.83791 0.11255 5.4 0.0000 0.52071 0.10000 4.9 0.0000 | | | | 2) Ảnh hưởng (TDZ +IBA) đến khả nhân nhanh BALANCED ANOVA FOR VARIATE SC FILE BANG1 **/**/18 22:56 :PAGE Anh huong cua TDZ + IBA den kha nang nhan nhanh 64 download by : skknchat@gmail.com VARIATE V003 SC So choi LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 15.9240 3.98100 79.62 0.000 * RESIDUAL 10 499999 499999E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 16.4240 1.17314 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE BANG1 **/**/18 22:56 :PAGE Anh huong cua TDZ + IBA den kha nang nhan nhanh VARIATE V005 SL So la /choi LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3.74400 936000 16.71 0.000 * RESIDUAL 10 560000 560000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.30400 307429 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG1 **/**/18 22:56 :PAGE Anh huong cua TDZ + IBA den kha nang nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT CT NOS SC 3 3 SL 4.90000 6.10000 8.00000 6.30000 5.60000 2.60000 2.90000 3.90000 3.50000 2.70000 SE(N= 3) 0.129099 0.136626 5%LSD 10DF 0.406797 0.430514 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG1 **/**/18 22:56 :PAGE Anh huong cua TDZ + IBA den kha nang nhan nhanh VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | SC 15 6.1800 1.0831 0.22361 3.6 0.0000 SL 15 3.1200 0.55446 0.23664 4.6 0.0003 | 3) Ảnh hưởng PG đến khả nhân nhanh BALANCED ANOVA FOR VARIATE SC FILE BANG2 **/**/18 22:07 :PAGE Anh huong cua PG den kha nang nhan nhanh VARIATE V003 SC LN So choi SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 53.7240 13.4310 191.87 0.000 * RESIDUAL 10 699992 699992E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 54.4240 3.88743 - 65 download by : skknchat@gmail.com BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE BANG2 **/**/18 22:07 :PAGE Anh huong cua PG den kha nang nhan nhanh VARIATE V005 SL LN So la /choi SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1.99067 497667 14.36 0.000 * RESIDUAL 10 346666 346666E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.33733 166952 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG2 **/**/18 22:07 :PAGE Anh huong cua PG den kha nang nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 SC 7.90000 10.8000 13.1000 10.1000 8.20000 SL 3.93333 4.20000 4.50000 3.90000 3.40000 SE(N= 3) 0.152752 0.107497 5%LSD 10DF 0.481326 0.338726 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG2 **/**/18 22:07 :PAGE Anh huong cua PG den kha nang nhan nhanh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SC SL GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 10.020 15 3.9867 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.9717 0.26457 2.6 0.0000 0.40860 0.18619 4.7 0.0005 | | | | 4) Ảnh hưởng AgNO3 đến khả nhân nhanh BALANCED ANOVA FOR VARIATE SC FILE BANG3 **/**/18 22:58 :PAGE Anh huong cua AGNO3 den kha nang nhan nhanh VARIATE V003 SC LN So choi SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 169.356 42.3390 529.23 0.000 * RESIDUAL 10 800006 800006E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 170.156 12.1540 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE BANG3 **/**/18 22:58 :PAGE Anh huong cua AGNO3 den kha nang nhan nhanh VARIATE V005 SL LN So la/choi SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2.96400 741000 14.82 0.000 * RESIDUAL 10 500000 500000E-01 66 download by : skknchat@gmail.com * TOTAL (CORRECTED) 14 3.46400 247429 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG3 **/**/18 22:58 :PAGE Anh huong cua AGNO3 den kha nang nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SC 7.80000 15.1000 17.8000 12.0000 7.70000 SL 3.90000 4.60000 4.90000 4.10000 3.60000 SE(N= 3) 0.163300 0.129099 5%LSD 10DF 0.514564 0.406797 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG3 **/**/18 22:58 :PAGE Anh huong cua AGNO3 den kha nang nhan nhanh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SC SL GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 13.160 15 4.3200 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 3.4863 0.28284 2.1 0.0000 0.49742 0.22361 5.0 0.0004 | | | | 5) Ảnh hưởng tảo Spirulina đến khả nhân nhanh BALANCED ANOVA FOR VARIATE SC FILE BANG4 **/**/18 22:00 :PAGE Anh huong cua tao spirulina den nhan nhanh VARIATE V003 SC LN So choi SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 210.684 52.6710 478.82 0.000 * RESIDUAL 10 1.10001 110001 * TOTAL (CORRECTED) 14 211.784 15.1274 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE BANG4 **/**/18 22:00 :PAGE Anh huong cua tao spirulina den nhan nhanh VARIATE V005 SL LN So la /choi SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2.10000 525000 11.41 0.001 * RESIDUAL 10 460000 460000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.56000 182857 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG4 **/**/18 22:00 :PAGE Anh huong cua tao spirulina den nhan nhanh MEANS FOR EFFECT CT CT NOS SC SL 67 download by : skknchat@gmail.com 3 3 17.6000 20.8000 18.9000 14.0000 10.7000 4.80000 5.20000 4.90000 4.50000 4.10000 SE(N= 3) 0.191486 0.123828 5%LSD 10DF 0.603380 0.390186 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG4 **/**/18 22:00 :PAGE Anh huong cua tao spirulina den nhan nhanh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SC SL GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 15.520 15 4.7000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 3.8894 0.33166 2.1 0.0000 0.42762 0.21448 4.6 0.0011 | | | | 6) Ảnh hưởng IBA đến tạo hoàn chỉnh BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE BANG5 **/**/18 23: :PAGE Anh huong cua IBA den tao cay hoan chinh VARIATE V003 CCC Chieu cao cay LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 56.5440 14.1360 440.65 0.000 * RESIDUAL 10 320799 320799E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 56.8648 4.06177 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE BANG5 **/**/18 23: :PAGE Anh huong cua IBA den tao cay hoan chinh VARIATE V004 SL So la LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 8.94000 2.23500 19.61 0.000 * RESIDUAL 10 1.14000 114000 * TOTAL (CORRECTED) 14 10.0800 720000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE BANG5 **/**/18 23: :PAGE Anh huong cua IBA den tao cay hoan chinh VARIATE V005 SR So re LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 68.0760 17.0190 135.07 0.000 * RESIDUAL 10 1.26001 126001 * TOTAL (CORRECTED) 14 69.3360 4.95257 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE BANG5 **/**/18 23: :PAGE Anh huong cua IBA den tao cay hoan chinh VARIATE V006 CDR Chieu dai re 68 download by : skknchat@gmail.com LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 12.6360 3.15900 169.84 0.000 * RESIDUAL 10 186000 186000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 12.8220 915857 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG5 **/**/18 23: :PAGE Phan tich ket qua thi nghiem bo tri kieu CRD MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 CCC 7.50000 11.8000 9.60000 7.80000 6.20000 SL 6.30000 7.20000 7.00000 6.50000 5.00000 SR 4.10000 10.3000 8.20000 7.10000 5.60000 CDR 2.70000 5.10000 4.30000 3.40000 2.80000 SE(N= 3) 0.103408 0.194936 0.204940 0.787402E-01 5%LSD 10DF 0.325844 0.614250 0.645772 0.248113 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG5 **/**/18 23: :PAGE Phan tich ket qua thi nghiem bo tri kieu CRD F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION (N= 15) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | CCC 15 8.5800 2.0154 0.17911 SL 15 6.4000 0.84853 0.33764 SR 15 7.0600 2.2254 0.35497 CDR 15 3.6600 0.95700 0.13638 C OF V |CT | | | 2.1 0.0000 5.3 0.0001 5.0 0.0000 3.7 0.0000 | 7) Ảnh hưởng giá thể đến sinh trưởng phát triển Sâm cau in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE GIATHE5 **/**/19 12:32 :PAGE ANH HUONG CUA GIA THE VARIATE V002 CHIEUCAO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 23.0225 7.67417 45.59 0.000 * RESIDUAL 1.34667 168333 * TOTAL (CORRECTED) 11 24.3692 2.21538 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO LA FILE GIATHE5 **/**/19 12:32 :PAGE ANH HUONG CUA GIA THE VARIATE V003 SO LA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2.53667 845556 15.37 0.001 * RESIDUAL 440000 550000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.97667 270606 - 69 download by : skknchat@gmail.com BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO RE FILE GIATHE5 **/**/19 12:32 :PAGE ANH HUONG CUA GIA THE VARIATE V004 SO RE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 8.35583 2.78528 43.41 0.000 * RESIDUAL 513333 641666E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 8.86917 806288 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE GIATHE5 **/**/19 12:32 :PAGE ANH HUONG CUA GIA THE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 CHIEU CAO 12.9000 13.1333 14.0000 16.4000 SO LA 5.46667 5.70000 6.26667 6.63333 SO RE 4.30000 4.56667 5.56667 6.40000 SE(N= 3) 0.236878 0.135401 0.146249 5%LSD 8DF 0.772435 0.441528 0.476904 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE GIATHE5 **/**/19 12:32 :PAGE ANH HUONG CUA GIA THE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CHIEUCAO SO LA SO RE GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 14.108 12 6.0167 12 5.2083 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.4884 0.41028 2.9 0.0000 0.52020 0.23452 3.9 0.0013 0.89794 0.25331 4.9 0.0001 | | | | 8) Ảnh hưởng phân bón đến sinh trưởng phát triển Sâm cau in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE PB **/ */19 0:22 :PAGE anh huong cua phan bon la VARIATE V002 CCC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 164.310 54.7700 49.23 0.000 * RESIDUAL 8.90002 1.11250 * TOTAL (CORRECTED) 11 173.210 15.7464 BALANCED ANOVA FOR VARIATE LA FILE PB **/ */19 0:22 :PAGE anh huong cua phan bon la VARIATE V003 LA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 37.8825 12.6275 107.47 0.000 * RESIDUAL 940000 117500 * TOTAL (CORRECTED) 11 38.8225 3.52932 - 70 download by : skknchat@gmail.com BALANCED ANOVA FOR VARIATE RE FILE PB **/ */19 0:22 :PAGE anh huong cua phan bon la VARIATE V004 RE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 23.0625 7.68750 68.33 0.000 * RESIDUAL 899999 112500 * TOTAL (CORRECTED) 11 23.9625 2.17841 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE PB **/ */19 0:22 :PAGE anh huong cua phan bon la MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 CCC 12.8000 19.7000 22.6000 20.7000 LA 6.30000 9.80000 11.0000 10.0000 RE 6.00000 7.60000 9.70000 8.80000 SE(N= 3) 0.608962 0.197906 0.193649 5%LSD 8DF 1.98576 0.645350 0.631470 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE PB **/ */19 0:22 :PAGE anh huong cua phan bon la F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CCC LA RE GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 18.950 12 9.2750 12 8.0250 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 3.9682 1.0548 5.6 0.0000 1.8786 0.34278 3.7 0.0000 1.4759 0.33541 4.2 0.0000 | | | | 71 download by : skknchat@gmail.com ... đích nghiên cứu Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitro trồng Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn. ) vườn ươm nhằm cung cấp giống Sâm cau phục vụ phát triển sản xuất Phương pháp nghiên cứu Nội... dung nghiên cứu: - Nghiên cứu khử trùng tạo vật liệu khởi đầu cho nuôi cấy in vitro Sâm cau - Nghiên cứu nhân nhanh chồi Sâm cau - Nghiên cứu tạo in vitro hoàn chỉnh - Nghiên cứu kỹ thuật trồng Sâm. .. trình nhân giống in vitro trồng C.orchioides sau ống nghiệm Với vấn đề thiết trên, tiến hành đề tài: ? ?Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitro trồng Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn. ) vườn ươm? ??