(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu sản xuất kháng thể igy tinh khiết dùng để phòng và trị bệnh newcastle (nd)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMN NÔNG NGHIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMP VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMT NAM KOULDKIENG VILAYVONG NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT KHÁNG THỂ IGY TINHU SẢN XUẤT KHÁNG THỂ IGY TINHN XUẤT KHÁNG THỂ IGY TINHT KHÁNG THỂ IGY TINH IGY TINH KHIẾT DÙNG ĐỂ PHÒNG VÀ TRỊ BỆNH NEWCASTLET DÙNG ĐỂ IGY TINH PHỊNG VÀ TRỊ BỆNH NEWCASTLE BỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAMNH NEWCASTLE (ND) Ngành: Thú y Mã số:: 8640101 Người hướng dẫn khoa học:i hướng dẫn khoa học:ng dẫn khoa học:n khoa học:c: PGS.TS Lê Văn Phan NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 LỜI CẢM ĐOAN Tơi xin cảm đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa công bố cơng trình khác Tơi xin cảm đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn KouldKieng Vilayvong i LỜI CẢM ƠN Qua thời gian học tập rèn luyện Học viện Nông nghiệp Việt Nam, giúp đỡ, dạy dỗ tận tình thầy, cô giảng viên Khoa Thú Y kiến thức chuyên môn tư cách đạo đức người Thạc sĩ thú y thời đại Tôi trưởng thành mặt nhận thức học thuật Nhân dịp hoàn thành luận văn tốt nghiệp chuyên ngành Thạc sĩ thú y, cho phép tơi bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới thầy, cô giảng viên Xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS TS Lê Văn Phan giảng viên môn Vi sinh vật-Truyền nhiễm, Phó trưởng Phịng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ sinh học Thú Y-Khoa Thú Y-Học viện Nông nghiệp Việt Nam, tạo điều kiện tận tình giúp đỡ, trang bị kiến thức chun mơn để tơi có đủ lực hồn thành khóa luận Xin cảm ơn tới tồn thể anh chị nhân viên Phịng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y-Khoa Thú Y-Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình hướng dẫn tạo điều kiện cho thực tập làm việc Bệnh viện Tôi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè, người động viên, sát cánh tơi suốt q trình học tập hồn thành luận văn tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn KouldKieng Vilayvong ii MỤC LỤC Lời cảm đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Danh mục biểu đồ ix Trích yếu luận văn x Thesis abstract xiii Phần Đặt vấn đề 1.1 Tính cấp thiết đề tài .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu .4 2.1 Lịch sử nghiên cứu bệnh Newcastle .4 2.1.1 Giới thiệu chung bệnh 2.1.2 Lịch sử bệnh tình hình bệnh giới Việt Nam 2.2 Một vài nét khái quát virus newcastle 2.2.1 Phân loại 2.2.2 Hình thái cấu trúc virus Newcastle 2.2.3 Đặc tính sinh học virus Newcastle 2.2.4 Dịch tễ học 13 2.2.5 Triệu chứng 17 2.2.6 Bệnh tích .18 2.2.7 Chẩn đoán 19 2.2.8 Phòng bệnh Newcastle .20 2.3 Đáp ứng miễn dịch chống virus newcastle 23 2.3.1 Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu 23 iii 2.3.2 Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu 23 2.3.3 Miễn dịch chống bệnh Newcastle 24 2.4 Kháng thể IGY 26 2.4.1 Kháng thể IgY gì? 27 2.4.2 Chuyển IgY vào lòng đỏ trứng 27 2.4.3 Cấu chúc kháng thể IgY 29 2.4.4 Tách chiêt IgY từ lòng đỏ trứng gà 31 Phần Đối tượng - nội dung - phương phápnghiên cứu 33 3.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 33 3.2 Nội dung nghiên cứu 33 3.3 Vật liệu nghiên cứu 33 3.4 Phương pháp nghiên cứu 34 3.4.1 Phương pháp gây miễn dịch gà .34 3.4.2 Phương pháp lấy bảo quản huyết 35 3.4.3 Phương pháp xác định hiệu giá kháng thể độ dài đáp ứng miễn dịch sau tiêm vaccine phản ứng HI .35 3.4.4 Phương pháp tách chiết kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà 42 3.4.5 Phương pháp xác định đặc tính kháng thể IgY 42 3.4.6 Phương pháp đánh giá hiệu phòng điều trị Newcastle .44 3.4.7 Phương pháp xử lý số liệu .45 Phần Kết thảo luận .46 4.1 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể Newcastle huyết gà trước gây miễn dịch 46 4.2 Khảo sát hiệu giá kháng thể newcastle huyết gà sau gây miễn dịch 47 4.2.1 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết gà sau gây miễn dịch 47 4.3 Khảo sát hiệu giá kháng thể newcastle lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch 49 4.3.1 Kết theo dõi tỷ lệ trứng gà .49 4.3.2 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể lòng đỏ trứng gà sau gây miễn dịch 51 iv 4.3.3 So sánh hàm lượng kháng thể lịng đỏ trứng lơ gà tiêm vaccine lô gà tiêm vaccine kết hợp với virus cường độc vô hoạt 53 4.4 Mối tương quan hiệu giá kháng thể gà qua huyết qua lòng đỏ trứng gà 53 4.5 Kết tách chiết kháng thể IgY 57 4.6 Khảo sát đánh giá hiệu phòng điều trị sản phẩm kháng thể IgY 58 4.6.1 Thông tin trại thử nghiệm 58 4.6.2 Kết phòng trị bệnh Newcastle chế phẩm kháng thể IgY .59 Phần Kết luận kiến nghị 62 5.1 Kết luận 62 5.2 Kiến nghị 62 Tài liêu tham khảo 63 Phụ lục 68 v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt APMV ARN CPE F FAO HA HGKT HI HN IgA IgD IgE IgY IgG IgM IPCI IVPI KDa L LD50 Nghĩa tiếng Việt Avian paramyxovirus Acid ribonucleic Cytophathic Effect Funsion protein Food Agriculture Organization Haemagglutination test Hiệu giá kháng thể Haemagglutination Inhibition test Haemagglutinin neuraminidase Immunoglobulins A Immunoglobulin d Immunoglobulin e Yolk Immunoglobulin Immuno Globulin G Immuno Globulin M Intracerebral pathogenicity index Intravenous pathogenicity index Kilodalton Large protein Lethal Dose 50 LĐT M MDT NK NP OIE PBS µl µg SDS Lòng đỏ trứng Matrix protein Mean Death Time Nature kill Nuclecapsid protein Office International Epizooties Phosphate buffered saline Microlit Microgarm Sodium Doecyl Sulfate TN Thí nghiệm vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 So sánh số đặc tính kháng thể (KT) sản xuất từ huyết động vật (IgG) kháng thể sản xuất từ trứng gia cầm (IgY) (Schade et al., 2005) .30 Bảng 3.1 Quy trình gây miễn dịch cho gà vaccine sau bắt 34 Bảng 3.2 Trình tự tiến hành phản ứng HA 37 Bảng 3.3 Trình tự phản ứng HA để chuẩn độ HA .38 Bảng 3.4 Trình tự tiến hành phản ứng HI để đánh giá kháng thể chủ động gà sau gây miễn dịch 39 Bảng 3.5 Trình tự tiến hành phản ứng HI để đánh giá kháng thể thụ động chuyền qua lòng đỏ trứng 40 Bảng 4.1 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể gà hậu bị bắt trước gây miễn dịch 46 Bảng 4.2 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết lơ gà thí nghiệm I, thí nghiệm II lơ đối chứng 47 Bảng 4.3 Theo dõi tình hình đẻ gà .49 Bảng 4.4 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể lịng đỏ trứng lơ gà thí nghiệm I, thí nghiệm II lơ đối chứng 51 Bảng 4.5 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết gà lịng đỏ trứng (trên lơ gà) lô TN I lô TN II 54 Bảng 4.6 Thông tin chế phẩm kháng thể IgY dùng để phòng trị bệnh Newcastle 60 Bảng 4.7 Kết phòng trị bệnh Newcastle chế phẩm kháng thể IgY 61 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu trúc virus Newcastle Hình 2.2 Phương thức lây lan chủ yếu bệnh Newcastle 15 Hình 2.3 Minh họa phân bố loại kháng thể trứng gà 28 Hình 2.4 Cấu trúc kháng thể IgG IgY 29 Hình 2.5 Quy trình cơng nghệ sản xuất chế phẩm kháng thể IgY Học viện Nơng Nghiệp Viêt Nam (Thú Y) 32 Hình 3.1 Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI 41 Hình 4.1 Điện di kháng thể IgY gel SDS-PAGE sau tách chiết 57 Hình 4.2 Kết mổ khám gà mắc bệnh Newcastle 58 Hình 4.3 Kết mổ khám gà mắc bệnh Newcastle 59 viii