(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu kỹ thuật bảo tồn tinh dịch gà đông tảo

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMN NÔNG NGHIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMP VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAMT NAM NGUYỄN THỊ LÀNH NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT BẢO TỒN TINHU KỸ THUẬT BẢO TỒN TINHT BẢO TỒN TINHO TỒN TINHN TINH DỊCH GÀ ĐÔNG TẢOCH GÀ ĐÔNG TẢO TỒN TINHO Ngành: Chăn nuôi Mã số:: 8620105 Người hướng dẫn khoa học:i hướng dẫn khoa học:ng dẫn khoa học:n khoa học:c: TS Đỗ Văn Thu Văn Thu NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày… tháng… năm 2019 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Lành i LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực đề tài này, ngồi nỗ lực thân, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Đỗ Văn Thu tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi để tơi hồn thành tốt đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn tới cán phòng Sinh học tế bào sinh sản - Viện công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm khoa học Công nghệ Việt Nam, hộ nông dân chăn nuôi gà thuộc xã Đông Tảo - huyện Khoái Châu - tỉnh Hưng Yên giúp đỡ tạo điều kiện thí nghiệm tốt suốt q trình tơi nghiên cứu hồn thành đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến tồn thầy thuộc khoa Chăn nuôi - Học viện Nông nghiệp Việt Nam cho môi trường học tập tốt, với tri thức bổ ích giúp cho tơi vững vàng sống Đồng thời xin chân thành cảm ơn thầy dìu dắt, dạy dỗ tơi suốt thời gian học Học viện, thầy khoa Chăn ni nhiệt tình giúp đỡ, dạy bảo, truyền đạt cho kinh nghiệm kỹ chuyên môn Đặc biệt xin cảm ơn PGS.TS Nguyễn Bá Mùi người giúp đỡ, hướng dẫn tơi để hồn thành tốt đề tài Cuối cùng, tơi xin cảm ơn tới gia đình, bạn bè đóng góp ý kiến, khích lệ, giúp đỡ tơi hoàn thành đề tài luận văn Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày… tháng… năm 2019 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Lành ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn .ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt .Error! Bookmark not defined Danh mục bảng .vi Danh mục hình .vii Trích yếu luận văn .viii Thesis abstract .ix Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .2 Phần Tổng quan tài liệu .3 2.1 Cơ sở khoa học sinh lý sinh sản gia cầm 2.2 Kỹ thuật lấy tinh cho gia cầm 11 2.3 Mơi trường pha lỗng, bảo tồn tinh dịch điều kiện bảo tồn tinh dịch gà đông tảo 12 2.4 Tình hình nghiên cứu kỹ thuật bảo tồn tinh dịch gà đông tảo nước 19 2.4.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 19 2.4.2 Tình hình nghiên cứu nước 25 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu .26 3.1 Đối tượng địa điểm, thời gian nghiên cứu .26 3.2 Nội dung nghiên cứu 26 3.3 Phương pháp nghiên cứu 27 3.3.1 Phương pháp đánh giá số tiêu sinh học tinh dịch gà 27 3.3.2 Phương pháp xác định tính chất lý - hóa tinh dịch môi trường bảo tồn 29 3.3.3 Phương pháp pha lỗng bảo tồn tinh dịch gà đơng tảo 30 3.3.4 Phương pháp đông lạnh tinh dịch gà đông tảo -196 c 33 3.3.5 Phương pháp xử lý số liệu .35 o Phần Kết thảo luận .36 iii 4.1 Một số tiêu sinh học tinh dịch gà 36 4.2 Một số tiêu lý - hóa học tinh dịch gà .39 4.3 Kỹ thuật pha loãng tinh dịch gà .39 4.3.1 Một số tiêu lý - hóa học số mơi trường pha loãng tinh dịch gà 39 4.3.2 Ảnh hưởng mơi trường pha lỗng lên chất lượng tinh dịch thời gian bảo tồn 40 4.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ pha loãng tinh dịch với môi trường lên chất lượng tinh dịch 43 4.3.4 Ảnh hưởng tỷ lệ pha lỗng (tinh dịch: mơi trường) lên hoạt lực tinh trùng thời gian bảo tồn 44 4.3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ bảo tồn lên hoạt lực tinh trùng gà thời gian bảo tồn 45 4.4 Kỹ thuật đông lạnh tinh dịch gà .46 4.4.1 Một số tính chất lý, hóa học mơi trường đơng lạnh 46 4.4.2 Ảnh hưởng môi trường đông lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh 47 4.4.3 Ảnh hưởng chất bảo vệ lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh 48 4.4.4 Ảnh hưởng nồng độ glycerol môi trường lên phẩm chất tinh dịch 49 4.4.5 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung glycerol lên chất lượng tinh dịch đông lạnh 50 4.4.6 Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh lên chất lượng tinh trùng sau đông lạnh 51 4.4.7 Ảnh hưởng tốc độ đông lạnh lên chất lượng tinh trùng sau đông lạnh 52 4.4.8 Ảnh hưởng nhiệt độ giải đông lên chất lượng tinh đông lạnh sau giải đông 53 4.4.9 Đánh giá chất lượng tinh đông lạnh thời gian bảo tồn -196 c 54 4.5 Kết thụ tinh nhân tạo cho gà 58 4.5.1 Kết thụ tinh nhân tạo cho gà sử dụng tinh pha loãng 58 4.5.2 Kết thụ tinh nhân tạo cho gà sử dụng tinh đông lạnh 59 o Phần Kết luận kiến nghị 61 5.1 Kết luận 61 5.2 Kiến nghị .61 Phụ lục 65 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt  Năng lực đệm  Độ nhớt A Hoạt lực C Nồng độ tinh trùng D Tỷ trọng DMA Dimethylacetamide DMSO Dimethyl sulfoxide K Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình LS Tỷ lệ tinh trùng sống MT Môi trường MTĐL Mơi trường đơng lạnh MTPL Mơi trường pha lỗng Posm Áp lực thẩm thấu TTNT Thụ tinh nhân tạo V Lượng tinh dịch (Thể tích tinh dịch) V.A.C Tổng số tinh trùng tiến thẳng v DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Kết số tiêu sinh học tinh dịch gà Đông Tảo 36 Bảng 4.2 Một số tiêu tính chất lý - hóa học tinh dịch gà Đông Tảo 39 Bảng 4.3 Một số tính chất lý - hóa học mơi trường pha lỗng tinh dịch gà 40 Bảng 4.4 Ảnh hưởng mơi trường pha lỗng lên chất lượng tinh dịch gà Đông Tảo o thời gian bảo tồn C (n= 30) 41 Bảng 4.5 Ảnh hưởng nhiệt độ pha môi trường với tinh dịch .43 lên hoạt lực tinh trùng thời gian bảo tồn (n= 30) 43 Bảng 4.6 Kết ảnh hưởng tỷ lệ pha lỗng tinh dịch mơi trường .44 lên hoạt lực tinh trùng thời gian bảo tồn (n= 30) 44 Bảng 4.7 Ảnh hưởng nhiệt độ bảo tồn lên hoạt lực tinh trùng gà thời gian bảo tồn (n= 30) 45 Bảng 4.8 Một số tính chất lý, hóa học mơi trường đơng lạnh .47 Bảng 4.10 Ảnh hưởng chất bảo vệ lạnh lên chất lượng tinh sau đông lạnh .48 Bảng 4.11 Ảnh hưởng nồng độ glycerol môi trường lên phẩm chất tinh đông lạnh 49 Bảng 4.13 Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh .52 lên phẩm chất tinh đông lạnh 52 Bảng 4.14 Ảnh hưởng nhiệt độ đông lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh (n= 30) 53 Bảng 4.15 Ảnh hưởng tốc độ giải đông lên chất lượng tinh đông lạnh sau giải đông 54 o Bảng 4.17 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tinh đơng lạnh thời gian bảo tồn -196 C 56 o Bảng 4.18 Tỷ lệ sống tinh trùng thời gian bảo tồn -196 C 57 Bảng 4.19 Kết TTNT gà Đông Tảo sử dụng tinh pha loãng 58 Bảng 4.20 Kết thu tinh nhân tạo cho gà sử dụng tinh đông lạnh 59 vi DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Ảnh hưởng mơi trường pha loãng lên hoạt lực tinh trùng 43 Hình 4.2 Ảnh hưởng tỷ lệ pha lỗng lên chất lượng tinh dịch .45 Hình 4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ bảo tồn lên chất lượng tinh dịch 46 Hình 4.4 Ảnh hưởng môi trường đông lạnh lên chất lượng tinh dịch 48 Hình 4.5 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung glycerol lên chất lượng tinh dịch 51 Hình 4.6 Ảnh hưởng nhiệt độ đông lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh 53 vii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Lành Tên luận văn: “Nghiên cứu kỹ thuật bảo tồn tinh dịch gà Đông Tảo” Ngành: Chăn nuôi Mã số: 8620105 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: - Pha lỗng, bảo tồn tinh dịch gà Đông Tảo phục vụ thụ tinh nhân tạo - Đông lạnh tinh dịch gà Đông Tảo góp phần bảo tồn nguồn gen Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành 15 gà trống Đông Tảo nuôi hộ chăn nuôi tham gia đề tài Thu thập tiêu lượng tinh dịch, hoạt lực tinh trùng, nồng độ tinh trùng, tổng số tinh trùng lần lấy tinh, tổng số tinh trùng tiến thẳng, pH, áp lực thẩm thấu, tỷ trọng, độ nhớt Nghiên cứu xác định số tính chất lý - hóa học hai mơi trường pha lỗng, đơng lạnh tinh dịch gà Kết kết luận - Kết nhận được, chọn MTPL để pha loãng bảo tồn tinh o dịch gà C Tuy nhiên, tinh dịch sau 06 pha loãng bảo tồn sử dụng MTPL (hoạt lực tinh trùng 65,24%; tỷ lệ tinh trùng sống 70,62%) cao sử dụng MTPL (hoạt lực tinh trùng 50,51%; tỷ lệ tinh trùng sống 60,53%) Sau 09 bảo tồn, tinh dịch MTPL tiếp tục trì hoạt lực tinh trùng đạt tiêu chuẩn thụ tinh (50,18%); đó, hoạt lực tinh trùng sử dụng mơi trường 36,72% Thời điểm sau 10 bảo tồn, tỷ lệ tinh trùng sống MTPL đạt 55,95%, MTPL cịn 40,73% Với kết nhận được, chọn MTĐL dùng để đông lạnh tinh dịch gà Tinh dịch đông lạnh MTĐL (hoạt lực tinh trùng: 39,90%; tỷ lệ sống tinh trùng 68,95%) sau đông lạnh cao so với tinh dịch đông lạnh MTĐL (hoạt lực tinh trùng: 32,76%; tỷ lệ sống tinh trùng: 54,59%) Chất lượng tinh đông lạnh o ổn định thời gian bảo tồn -196 C viii THESIS ABSTRACT Master candidate: Nguyen Thi Lanh Thesis title: Research on techniques of preserving semen of Dong Tao chicken Major: Animal science Code: 8620105 Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) Research Objectives - Diluting and preserving Dong Tao chicken semen for artificial insemination resources Frozen Dong Tao chicken semen contributes to the conservation of genetic Materials and Methods The study was conducted on 15 Dong Tao roosters raised at breeding households participating in the project Collecting indicators of semen volume, sperm motility, sperm concentration, total sperm count in sperm collection, total sperm count going straight, pH, osmotic pressure, density, viscosity The study has identified a number of physical and chemical properties of diluted, frozen chicken semen media Main findings and conclusions - Results obtained, we selected diluted medium to dilute and preserve chicken o semen at C However, semen after 06 hours of dilution was conserved when using diluted medium (sperm motility 65.24%; sperm survival rate 70.62%) was higher than when using diluted medium (sperm motility 50, 51%; live sperm percentage 60.53%) After 09 hours of preservation, semen in diluted medium continued to maintain sperm motility meeting sperm fertilization standards (50.18%); meanwhile, sperm motility when using environment is only 36.72% After 10 hours of preservation, the percentage of sperm living in diluted medium still reached 55.95%, while diluted medium was only 40.73% With the results received, we have selected frozen environment to freeze chicken semen Frozen semen at frozen environment (sperm motility: 39.90%; sperm survival rate 68.95%) after freezing was higher than frozen semen at frozen environment (sperm motility: 32, 76%; sperm survival rate: 54.59%).The quality of o frozen semen was stable during the preservation period of -196 C ix