(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu sử dụng chế phẩm nano trong nhân nhanh in vitro cây hoa hồng pháp (rose gallica l )

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM DƯƠNG THỊ MẾN NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CHẾ PHẨM NANO TRONGNHÂN NHANH IN VITRO CÂY HOA HỒNG PHÁP (Rosa gallica L.) Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 Người hướng dẫn khoa học: TS Đồng Huy Giới NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NƠNG NGHIỆP - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn, thông tin trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Hà nội, ngày 10 tháng năm 2017 Tác giả luận văn Dương Thị Mến i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến TS.Đồng Huy Giới, người tận tình hướng dẫn, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ Môn sinh học, Khoa công nghệ sinh học – Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, Thầy Cô giáo khoa Công nghệ sinh học đặc biệt Thầy Cô Bộ môn Sinh học – Học viện nông nghiệp Việt Nam giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên, khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà nội, ngày 10 tháng năm 2017 Tác giả luận văn Dương Thị Mến ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract x Phần Mở đầu 1.1 Lý chọn đền tài 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Phạm vi nghiên cứu .2 1.4 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Giới thiệu hoa hồng pháp (Rosa gallica.L) 2.1.1 Nguồn gốc phân loại .3 2.1.2 Một số đặc tính sinh học hoa hồng yêu cầu ngoại cảnh .3 2.2 Các nghiên cứu nuôi cấy in vitro hoa hồng số trồng khác 2.2.1 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro hoa hồng số trồng khác 2.2.2 Nghiên cứu tạo mô sẹo .11 2.2.3 Giới thiệu công nghệ nano nano bạc, nano đồng 12 2.2.4 Cơ chế diệt khuẩn, nấm nano bạc, nano đồng ứng dụng 13 2.2.5 Công nghệ nano nuôi cấy in vitro 15 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu .19 3.1 Địa điểm nghiên cứu 19 3.2 Thời gian nghiên cứu 19 3.3 Đối tượng nghiên cứu 19 3.4 Nội dung nghiên cứu 19 iii 3.5 Phương pháp thí nghiệm 20 3.5.1 Thiết kế thí nghiệm .20 3.5.2 Các tiêu nghiên cứu .20 3.5.3 Bố trí thí nghiệm .21 3.5.4 Phân tích số liệu .26 Phần Kết thảo luận 27 4.1 Nghiên cứu khả khử trùng mẫu hoa hồng pháp hỗn hợp dung dịch nano bạc-đồng .27 4.1.1 Ảnh hưởng nồng độ hỗn hợp nano bạc-đồng đến hiệu khử trùng mẫu hoa hồng Pháp 27 4.1.2 Ảnh hưởng thời gian xử lý nano bạc-đồng đến hiệu khử trùng mẫu hoa hồng Pháp 28 4.2 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng ba nano bạc đến khả tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ hoa hồng pháp 30 4.2.1 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng BA đến khả tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ hoa hồng Pháp 30 4.2.2 Ảnh hưởng nano bạc đến khả tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ hoa hồng Pháp 31 4.3 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng iba nano bạc đến q trình tạo mơ sẹo (callus) hoa hồng pháp .33 4.3.1 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng IBA đến q trình tạo mơ sẹo hoa hồng Pháp .33 4.3.2 Ảnh hưởng nano bạc lên trình tạo mô sẹo hoa hồng Pháp 34 4.4 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng ba nano bạc đến trình nhân nhanh chồi in vitro hoa hống pháp 36 4.4.1 Ảnh hưởng của chất điều tiết sinh trưởng BA đến trình nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng Pháp .36 4.4.2 Ảnh hưởng nano bạc đến trình nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng Pháp 38 4.5 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng -naa nano bạc lên rễ chồi cấp hoa hồng pháp .40 iv 4.5.1 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng -NAA đến rễ chồi cấp hoa hồng Pháp .40 4.5.2 Ảnh hưởng nano bạc đến rễ chồi cấp hoa hồng Pháp 42 Phần Kết luận kiến nghị 44 5.1 Kết luận .44 5.2 Kiến nghị 44 Tài liệu tham khảo 45 Phụ lục 50 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng việt BA Bezyl adenine CS Cộng CT Cơng thức CV% Sai số thí nghiệm ĐC Đối chứng GA Gibberellin IAA Indole – – acetic acid IBA Indole – – butylic acid LSD0,05 Độ lệch tiêu chuẩn mức ý nghĩa 5% MS Murashige and Skoog α -NAA α – naphthalene acetic acid NĐ Nồng độ NXB Nhà xuất TB Trung bình TDZ Thidiazurol NS Nano bạc NS/NC Hỗn hợp nano bạc-đồng vi DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Ảnh hưởng nồng độ hỗn hợp nano bạc-đồng đến hiệu khử trùng mẫu hoa hồng Pháp (sau tuần) 27 Bảng 4.2 Ảnh hưởng thời gian xử lí hợp nano bạc -đồng đến hiệu khử trùng mẫu hoa hồng Pháp (sau tuần) .29 Bảng 4.3 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng BA đến khả tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ hoa hồng Pháp (sau tuần) 30 Bảng 4.4 Ảnh hưởng nano bạc đến tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ hoa hồng Pháp (sau tuần) .32 Bảng 4.5 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng IBA đến trình tạo mô sẹo hoa hồng Pháp (sau tuần) .33 Bảng 4.6 Ảnh hưởng nano bạc lên q trình tạo mơ sẹo hoa hồng Pháp (sau tuần) 35 Bảng 4.7 Ảnh hưởng của chất điều tiết sinh trưởng BA đến trình nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng Pháp (sau tuần) 37 Bảng 4.8 Ảnh hưởng nồng độ nano bạc lên trình nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng Pháp (sau tuần) .39 Bảng 4.9 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng -NAA đến rễ chồi cấp hoa hồng Pháp (sau tuần) 41 Bảng 4.10 Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến rễ chồi cấp giống hoa hồng Pháp (sau tuần) .42 vii DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Khả tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ mơi trường có nồng độ BA khác (sau tuần) 31 Hình 4.2 Khả tái sinh chồi từ mắt ngủ từ đoạn thân môi trường nuôi cấy với nồng độ nano bạc khác (sau tuần) 33 Hình 4.3 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng IBA đến q trình tạo mơ sẹo hoa hồng Pháp (sau tuần) 34 Hình 4.4 Ảnh hưởng nano bạc đến q trình tạo mơ sẹo hoa hồng Pháp (sau tuần) 36 Hình 4.5 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng BA đến trình nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng Pháp (sau tuần) 38 Hình 4.6 Ảnh hưởng nano bạc đến trình nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng Pháp (sau tuần) 40 Hình 4.7 Ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng -NAA đến rễ chồi cấp hoa hồng Pháp (sau tuần) .42 Hình 4.8 Ảnh hưởng nano bạc đến rễ chồi cấp giống hoa hồng Pháp (sau tuần) 43 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Dương Thị Mến Tên luận văn: Nghiên cứu sử dụng chế phẩm nano nhân nhanh in vitro hoa hồng pháp (Rosa gallica L.) Ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 Tên sở đào tạo: Học viện nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: Xác định nồng độ, thời gian xử lý chế phẩm nano thích hợp cho việc khử trùng mẫu đoạn thân mang mắt ngủ hoa hồng Pháp (Rosa gallica L.) Xác định nồng độ dung dịch nano bạc chất điều tiết sinh trưởng thích hợp cho nuôi cấy in vitro hoa hồng Pháp Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu thực theo phương pháp ni cấy mơ hành, thí nghiệm bố trí cơng thức, cơng thức 20 mẫu, lần lặp lại Số liệu xử lý phần mềm Microsoft Excel 2007, IRRISTAT 5.0 Kết kết luận: Đã bố trí thí nghiệm theo mục đích đề xác định được: i) Nồng độ hỗn hợp nano bạc – đồng thời gian thích hợp để khử trùng mẫu đoạn thân mang mắt ngủ 200 ppm 60 phút với tỷ lệ mẫu sống 90%, ii) Nồng độ BA nano bạc thích hợp cho tái sinh chồi đoạn thân mang mắt ngủ mg/l ppm với tỷ lệ bật chồi 91,7% , iii) Nồng độ IBA nano thích hợp cho q trình tạo mơ sẹo từ in vitro 0,5 mg/l ppm với tỷ lệ tạo mô sẹo đạt 86,7%, iv) Nồng độ BA nano thích hợp cho trình nhân chồi 1,5 mg/l BA 2ppm cho hệ số nhân chồi 5,23 lần v) Xác định nồng độ NAA nano thích hợp cho rễ tương ứng mg/l ppm cho tỷ lệ rễ 76,67%, số rế trung bình chồi 4.23 ix