Báo cáo thực tập độc chất đề tài độc tố aflatoxin

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÁI BÌNH BỘ MƠN HĨA DƯỢC- KIỂM NGHIỆM BÁO CÁO THỰC TẬP ĐỘC CHẤT ĐỀ TÀI: ĐỘC TỐ AFLATOXIN Nhóm 1: Lớp Dược K15A Nguyễn Thị Bích Phạm Thái Bình Dương Lê Thị Liên Bùi Duy Linh THÁI BÌNH - 2023 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .1 NỘI DUNG I.Tổng quan 1.Nguồn gốc aflatoxin 2 Tính chất lý hóa II, Độc tính .6 Độc tính chế gây ngộ độc Động học Triệu chứng ngộ độc .8 Điều trị ngộ độc Dự phòng ngộ độc 10 III, Kiểm nghiệm 12 Các phương pháp định tính 12 Các phương pháp định lượng 14 IV, Tình hình thực tế Việt Nam giới 16 ĐẶT VẤN ĐỀ Lương thực, thực phẩm nhu yếu phẩm thiếu đời sống hàng ngày người, nguồn dinh dưỡng để trì sống Thế nhưng, lương thực, thực phẩm nguồn truyền bệnh nguy hiểm cho người khơng đảm bảo vệ sinh an tồn Trong năm gần đây, vấn đề ngộ độc thực phẩm xảy ngày nhiều không loại trừ vùng miền nào, từ nông thôn đến thành thị, từ bếp ăn tập thể đến hộ gia đình nhỏ lẻ Có nhiều ngun nhân dẫn đến vụ ngộ độc, chẳng hạn thực phẩm chất lượng, thực phẩm không bảo quản quy định thực phẩm bị nhiễm bẩn,… Một nguyên nhân gây nên ngộ độc ăn phải thức ăn có nấm mốc chứa độc tố Aflatoxin Chính vậy, đảm bảo vệ sinh an tồn thực phẩm vấn đề quan trọng Độc tố Aflatoxin chủ yếu loài vi nấm Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus tạo ra, độc tố nguy hiểm thường nhiễm nông sản, gây độc cho người gia súc, gây tác dụng cấp tính, gây tổn thương gan (ung thư gan…), gây quái thai, gây đột biến,…thậm chí với liều lượng cao dẫn tới tử vong Ở nước ta, với đặc điểm khí hậu nhiệt đới nóng ẩm, độ ẩm khơng khí thường cao, thời vụ canh tác , thu hoạch thường vào mùa mưa phương tiện thu hoạch phơi sấy nông sản kém, kho chứa không đảm bảo khơ thống mát điều kiện thuận lợi cho nấm mốc phát triển gây nhiễm độc tố cho thực phẩm thức ăn chăn ni Do việc kiểm soát dư lượng aflatoxin cần thiết quan trọng Giới hạn mức nhiễm aflatoxin tiêu chuẩn an toàn vệ sinh thực phẩm Để có nhìn tổng quan aflatoxin, ảnh hưởng độc tố lên thể người biện pháp phòng tránh việc nhiễm aflatoxin, nhóm chúng em chọn đề tài : “Độc tố Aflatoxin” Do kiến thức thời gian tìm hiểu chúng em cịn hạn chế nên làm khơng tránh khỏi thiếu sót, nhóm chúng em mong bạn thơng cảm đóng góp ý kiến để làm sau chúng em hoàn thiện NỘI DUNG I.Tổng quan 1.Nguồn gốc aflatoxin Aflatoxin chất độc, sinh từ trình trao đổi chất nấm mốc Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus thực phẩm hay loại thức ăn gia súc Nó độc tố khơng tích lũy thể gia súc mà người, gan chuyển hóa thành dạng trung gian epoxit hoạt hóa thuỷ phân trở thành M1 độc Theo nhà khoa học, aflatoxin phát lần vào năm 1960, đồng loạt 100.000 gà tây số vịt Anh chết bệnh chưa thấy trước Trải qua nhiều nghiên cứu truy tìm ngun nhân, người ta phát nguyên nhân vấn đề đến từ nguồn thức ăn chúng Theo đó, gà tây vịt "xấu số" ăn phải loại đậu có chứa nấm mốc aspergillus flavus aspergillus parasiticus, thứ sản sinh độc tố aflatoxin Hiện có 18 loại aflatoxin khác phát aflatoxin có dẫn xuất quan trọng B1,B2,G1,G2; aflatoxin B1 chiếm nhiều nơng sản gây tác hại nhiều nhất, gây ngộ độc nhanh phổ biến -Aflatoxin B1, B2 sinh A.flavus A.parasiticus -Aflatoxin G1, G2 sinh A.parasiticus -Aflatoxin M1,M2 sản sinh phát sữa bò ăn phải thức ăn nhiễm nấm mốc Aflatoxin B1, B2, G1, G2 đặt tên đặc tính hấp thụ phát ánh sáng chúng Do đó, B1 B2 hiển thị huỳnh quang màu xanh lam (B:Blue) ánh sáng cực tím bước sóng 425 nm, G1 G2 xuất màu xanh lục (G:Green) ánh sáng tia cực tím bước sóng 540 nm Bảng 1: Các sản phẩm nhiễm Aflatoxin Các hạt ngũ cốc Hạt có dầu Ngơ, thóc gạo, lúa mì Lạc , dừa, đậu tương, hướng dương… Củ Sữa Sắn , khoai tây,… Sữa tươi, mát,… Thủy sản Cá , tôm,… Sản phẩm lên men Bia, nước giải khát, rượu vang,… Các loại hạt, ngũ cốc Trong số loại hạt, ngũ cốc ngơ thực phẩm dễ nhiễm aflatoxin Khi thấy ngô đổi màu, xuất lớp mốc quanh hạt chứng tỏ độc tố nấm aflatoxin hình thành Thực phẩm chứa tinh bột Hầu hết loại thực phẩm chứa tinh bột để lâu ngày thấy xuất lớp màng trắng bề mặt Đây dấu hiệu cho thấy thực phẩm nhiễm aflatoxin Vì vậy, tuyệt đối không dùng loại thực phẩm bảo quản lâu ngày Các loại thực phẩm mọc mầm Nấm aflatoxin tồn loại thực phẩm dễ mọc mầm khoai tây, khoai lang, khoai sọ Hàm lượng aflatoxin loại thực phẩm cao gấp nhiều lần so với loại thực phẩm khác mọc mầm Tính chất lý hóa 2.1 Tính chất vật lý  Là chất khơng mùi, khơng vị, khơng màu  Có thể chịu nhiệt tốt Nhiệt độ để phá hủy chất 280°C phương pháp nấu chế biến thơng thường khơng thể tiêu diệt hồn tồn độc tính Tuy nhiên khơng bền ánh sáng mặt trời tia tử ngoại nên việc khử độc thực phẩm có nhiều biện pháp  Aflatoxin hịa tan dung môi phân cực cloroform, metanol, aceton, acetonitril tan nước (10-20mg/l)  Aflatoxin khơng tan dung mơi hịa tan chất béo n-hexan, ether ethylic, ether dầu hỏa,…  Phát quang mạnh ánh sáng cực tím sóng dài, điều cho phép phát hợp chất nồng độ thấp (0,5ng vết sắc ký mỏng) nhiên khơng ổn định có diện khơng khí mơi trường có độ phân cực cao 2.2 Tính chất hóa học Cơng thức cấu tạo: Phân tử Aflatoxin gồm gốc coumarin, nhân furan, vịng lacton Aflatoxin nhóm B nhóm G khác chỗ nhóm B có vịng lacton nhóm G có vịng lacton Hai aflatoxin B2,G2 có cơng thức hóa học giống aflatoxin B1,G1 khác nối đơi vịng hidrofuran bị khử Sự có mặt vịng Lacton phân tử Aflatoxin làm chúng nhạy cảm với việc thủy phân môi trường kiềm Tuy nhiên xử lý kiềm nhẹ việc axit hóa phản ứng ngược trở lại để tạo Aflatoxin ban đầu Ở nhiệt độ cao ( khoảng 100̊C) mở vòng decarboxylation xảy phản ứng tiến xa hơn, dẫn đến nhóm methoxy từ vịng thơm Khi có acid vơ bổ sung nước, Aflatoxin B1 G1 chuyển hóa thành Aflatoxin B2A, G2A Các aflatoxin có phổ hấp thụ UV đặc trưng có nối đơi liên hợp Có C bất đối nên có góc quay cực riêng, áp dụng đo góc quay cực để định tính loại aflatoxin Bảng 2: Tính chất lý hóa số loại aflatoxin Cơng thức nguyên Trọng lượng phân tử Điểm nóng chảy Huỳnh quang Độ quay cực Hấp thụ tia UV Aflatocin C17H12O6 B1 312 268-269 Xanh lam -558° Aflatocin C17H14O6 B2 314 286-289 Xanh lam -492° 430° Aflatocin C17H12O7 G1 328 244-246 Lục -556° Aflatocin C17H14O7 G2 330 229-231 Lục -473° Aflatocin C17H12O7 M1 328 299 Xanh lam tím -280° Aflatocin C17H14O7 M2 330 293 Tím 223 265 362 222 265 362 243 257 264 362 221 245 265 365 226 265 357 221 264 357 II, Độc tính Độc tính chế gây ngộ độc Độc tính aflatoxin tương đương gấp 10 lần lượng kali xyanua và gấp 68 lần so với asen Khi nhiễm độc aflatoxin có đặc điểm lâm sàng gây ngộ độc cấp tính, ngộ độc mãn tính gây ung thư Ngồi gây dị dạng gây đột biến Aflatoxin chất gây ung thư gan mạnh nhất, hấp thu lượng 2,5mg thời gian ngắn( khoảng tháng) dẫn đến ung thư gan sau năm Aflatoxin gây tác hại sau đây: - Phá hủy tế bào gan, thận phận khác - Ức chế lên hệ miễn dịch gây đột biến, quái thai - Ăn mòn thành ruột dày - Suy dinh dưỡng, chậm lớn, chết - Gây ung thư gan người gia súc Nghiêm trọng nguy hiểm khả gây xơ gan, ung thư gan Cơ chế tác động: -AFB1 độc tố mạnh nhất, có liên quan mạnh mẽ đến phát triển ung thư biểu mô tế bào gan (HCC) -AFB1 chuyển hóa enzym cytocrom P450 gan thành chất có hoạt tính AFB1-8,9-epoxide (AFB1-E) để tạo thành chất gây ung thư cách phá vỡ trình sửa chữa DNA AFB1-E xen vào DNA hình thành sản phẩm cộng hợp AFB1-E-N7-Gua phản ứng với nguyên tử N7 Guanin Sự đan xen epoxide gây chuyển G thành T codon 249 gen p53 gan Gen mã hóa cho phosphoprotein có hoạt tính tăng cường kiềm chế phiên mã số gen kiểm sốt chu trình nhân lên tế bào, để ngăn ngừa tế bào tăng sinh thành tổ chức bất thường, dẫn đến hình thành khối u Khi AFB1 tác động vào gen p53 làm protein p53 bị biến đổi, hoạt tính, hậu tế bào tăng trưởng khơng kiểm sốt dẫn đến hình thành khối u - AFB1 ức chế enzyme glycogen synthetase transglycosylase làm giảm glycogen gan tăng glucose máu Động học Aflatoxin chất độc nguy hiểm loài gia súc, gia cầm người Tuy nhiên mức độ độc hoàn toàn khác nhau, phụ thuộc vào giống loài, lứa tuổi, giới tính, đường xâm nhập, trạng thái sức khỏe thể, môi trường hàm lượng chất độc ăn phải Hấp thu qua đường tiêu hóa giai đoạn xâm nhập AFB1 vào thể với kiểu hấp thu qua niêm mạc ruột: khuếch tán, hòa tan lipid vận chuyển nhờ protein mang Sau đó, AFB1 vận chuyển hệ tuần hồn nhờ liên kết với tế bào máu protein huyết tương (90% dạng liên kết với albumin) Sau vào gan qua hệ thống tĩnh mạch cửa, AFB1 tập trung chủ yếu gan Tại đây, AFB1 có chuyển hóa phức tạp: Các chất chuyển hóa thể cố gắng thải AFM1 AFM2 qua sữa; AFP1 AFQ1 qua nước tiểu Việc chuyển hóa aflatoxin diễn nhanh Một nghiên cứu cho thấy, cho bò ăn lượng (0,5mg/kg) hỗn hợp aflatoxin B1 (44%), B2 (2%), G1(44%) phân tích đặn sữa, người ta thấy 85% lượng aflatoxin phát thấy sữa nước tiểu tiết vòng 48h; ngày sau sữa ngày sau nước tiểu, phân không phát vết Triệu chứng ngộ độc  Hoàn cảnh ngộ độc: Ăn phải thức ăn có chứa độc tố aflatoxin  Độc tính cấp aflatoxin bao gồm: Sốt cao, nôn mửa, xuất huyết, tổn thương gan cấp với biểu nhiễm độc gan nặng (tỷ lệ tử vong 25%), phù, rối loạn tiêu hóa, rối loạn hấp thu chuyển hóa chất dinh dưỡng, chí gây tử vong Aflatoxic nguyên phát cấp tính xuất phơi nhiễm với lượng trung bình đến lượng lớn aflatoxin  Độc tính mạn Thường xảy nhiều so với nhiễm độc cấp tính có tác động dài thể chịu đựng mức phần Khi có nhiễm độc mãn tính, triệu chứng thấy ăn; gan chịu ảnh hưởng nhiều nhất: gan tụ huyết, xuất huyết, thoái mỡ gan Nhiễm độc kéo dài gây đột biến, ung thư gan Aflatoxin cho nguyên nhân gây 25 200- 155 000 trường hợp ung thư gan hàng năm, chiếm – 28% tổng số ca mắc ung thư gan toàn giới  Liều độc : Liều gây chết người vào khoảng 20mg Chết xảy đột ngột sau thời gian ngắn , thường 72h Giải phẫu bệnh cho thấy hoại tử chảy máu nhu mô gan, viêm tiểu cầu thận cấp, tụ máu phổi Đối với động vật: Loài động vật LD50 (mg/kg thể trọng ) Vịt 0,3 – 0,6 Heo 0,6 Chó 1,0 Chuột lang 1,4 – 2,0 Khỉ 2,2 Chuột bạch 9,0 Bảng 3: LD50 Aflatoxin B1 cho uống lần động vật Điều trị ngộ độc Hiện chưa có thuốc điều trị đặc hiệu cho bệnh nhiễm Aflatoxin Người bệnh điều trị triệu chứng hỗ trợ điều trị bệnh gan mức độ nghiêm trọng - Nguyên tắc điều trị: + Hạn chế hấp thu, tăng đào thải chất độc + Duy trì chức sống điều trị triệu chứng + Điều trị bệnh lí kèm theo - Điều trị cụ thể: +Gây nôn bệnh nhân chưa nơn, rửa dày +Uống than hoạt tính với liều 30g cho người lớn, 1g/kg thể trọng trẻ em +Sử dụng dịch truyền tĩnh mạch với dextrose, vitamin B, vitamin K nhằm điều trị nước nôn, tiêu chảy,tăng sức đề kháng cho thể Chế độ ăn uống đầy đủ loại rau củ cải vàng, rau mùi tây, cà rốt, cần tây làm giảm nguy ung thư Dự phòng ngộ độc Hiện thuốc chữa bệnh đặc hiệu , biện pháp phịng bệnh quan trọng Aflatoxin độc tố bền vững với nhiệt, biện pháp đun sơi thơng thường khơng có tác dụng độc tố Để đề phòng ngộ độc, biện pháp áp dụng vấn đề bảo quản tốt loại lương thực, thực phẩm: Đối với thực phẩm khô lạc, đậu hay gạo bị mốc, thường rửa mốc, vo rửa kỹ đem phơi, sấy khô để dùng lại Tuy nhiên việc giúp làm nấm mốc, độc tố Aflatoxin ngấm vào thực phẩm khơng thể loại bỏ nguy nhiễm độc Nên mua thực phẩm tươi, bảo quản nơi thoáng mát, nhiệt độ thấp, tránh tiếp xúc trực tiếp với ánh mặt trời Ngoài ra, phải bảo đảm thực phẩm khơ, mơi trường ẩm ướt dễ sản sinh nấm aspergillus flavus Muốn dự trữ lạc, đậu hay gạo, … cần phải phơi khô, loại bỏ hết hạt dập vỡ, hạt nhăn nheo, hạt nghi mốc Bởi trình bảo quản có hạt chớm mốc bào tử mốc nhanh chóng lây lan sang hạt lành Ozone hóa có hiệu việc kiểm sốt tổng số nấm giảm nồng độ độc tố hầu hết aflatoxin điều kiện tối ưu hóa 10 Aflatoxin đậu phộng độ ẩm 5% nhạy cảm với ozone dễ bị phân hủy phản ứng với 6.0 mg/l ozone 30 phút nhiệt độ phòng Tỷ lệ giải độc tổng aflatoxin AFB1 65,8% 65,9% Người dân: chọn sử dụng thực phẩm có nguồn gốc rõ ràng, khơng sử dụng thực phẩm xuất mốc, lưu ý hạn sử dụng đáo hạn thực phẩm bảo quản gia đình khơng để lâu loại gia vị Ngoài ra, người dân cần tiêm ngừa viêm gan siêu vi B để ngăn ngừa ung thư gan Biện pháp hạn chế giảm hàm lượng aflatoxin cho nơng sản áp dụng xử lí nhiệt với muối amoni, monomethylamin, natri hydroxid, natri hypoclorit, H2O2 FDA đưa mức khuyến cáo về hàm lượng aflatoxin thực phẩm thức ăn chăn nuôi nhằm bảo vệ sức khoẻ người tiêu dùng sức khoẻ động vật Các giới hạn tối đa: Hàm lượng, ppb Tiêu chí 20 Đối với ngô loại hạt dùng cho vật nuôi chưa trưởng thành (kể gia cầm chưa trưởng thành) vật nuôi cho sữa dùng cho mục đích khác khơng cơng bố; thức ăn chăn nuôi ngoại trừ ngô bột từ hạt 100 Đối với ngô loại hạt dùng cho giống vật ni (bị, lợn) gia cầm trưởng thành 200 Đối với ngô loại hạt dùng cho lợn thịt từ 100 pound trở lên 300 Đối với ngơ loại hạt dùng cho bị giai đoạn cuối (ví dụ vỗ béo) bột hạt bơng dùng cho bị, lợn gia cầm 11 Các giới hạn tối đa (ML) theo quy định Bộ Y tế Việt Nam sau: ML (microgam/kg) Tiêu chí Đối với Aflatoxin B1 trong thực phẩm nói chung 15 Đối với Aflatoxin B1, B2, G1, G2 trong thực phẩm nói chung 0,5 Đối với Aflatoxin M1 trong sữa sản phẩm sữa Hiện tại, có hai phương pháp thường sử dụng để phát mức độ nhiễm aflatoxin người + Phương pháp tính lượng phức AFB1-guanine nước tiểu Sự có mặt phân tử nhỏ có tồn aflatoxin vòng 24 Tuy nhiên, phương pháp dựa thời gian bán hủy chuyển hóa, mức độ AFB1-guanine tính thay đổi theo ngày, chắn khơng phải phương pháp tốt để xác định hàm lượng aflatoxin phơi nhiễm thời gian dài + Một phương pháp khác tính lượng phức AFB1-albumin huyết Cách tiếp cận tính lượng aflatoxin phơi nhiễm sau thời gian vài tuần đến vài tháng III, Kiểm nghiệm Lưu ý: Các aflatoxin chất độc gây ung thư Cần thực thao tác tủ hút độc Phải đặc biệt lưu ý độc tố dạng bột khơ chúng có tính chất hút tĩnh điện khuynh hướng phát tán vào môi trường làm việc; trường hợp thao tác hộp kín có găng tay Cần tuân thủ Quy trình khử nhiễm aflatoxin cho chất thải phịng thí nghiệm Cơ quan nghiên cứu ung thư quốc tế (IARC) xây dựng 12 Các phương pháp định tính 1.1 Phương pháp sinh học Phương pháp dựa vào tính mẫn cảm số loài sinh vật thử nghiệm với aflatoxin Đây phương pháp không chuyên biệt với độc tố đơn giản dễ thực Thử nghiệm độc tính phơi gà: chiết mẫu cloroform đặc có nồng độ khoảng 200- 300 ng/ml, sau tiêm vào buồng khí lịng đỏ trứng gà Leghorn trắng thụ tinh ấp ngày, phơi gà chết vịng ngày có aflatoxin Ngồi độc tính aflatoxin cịn thử nghiệm vịt sinh, ấu trùng lồi giáp xác , tế bào động thực vật ni cấy, vi khuẩn Bacillus megaterium, cá hồi,… 1.2 Dựa vào phương pháp hóa lí Các phương pháp dùng để phát định lượng aflatoxin nhanh, xác có tính chun biệt cao so với phương pháp sinh học, dùng chủ yếu phịng thí nghiệm - Đo góc quay cực riêng có C bất đối - Dựa vào tính chất phát huỳnh quang bước sóng tử ngoại - Phương pháp quang phổ IR: sử dụng xạ hồng ngoại để chiếu xạ phân tử sau đo độ rung liên kết phân tử Vì kích thước, chiều dài độ bền liên kết khác phân tử nên độ hấp thụ xạ thay đổi tùy theo liên kết tần số dao động chúng khác - Phản ứng với di-O-anzidin-tetrazolium clorua để tạo thành hợp chất xanh-tím với AFB1,AFB2 nâu AFG2 1.3 Tách sắc ký Aflatoxin chiết tách từ mẫu thử cloroform Dịch chiết lọc phần dịch lọc làm qua cột silicagen Làm bay dung dịch rửa giải hòa cặn với cloroform hỗn hợp benzen – acetonitril Sau 13 chấm phần xác định mẫu thử lên mỏng chạy sắc ký so sánh Rf, màu sắc vết sắc ký mẫu phân tích với vết aflatoxin chuẩn đèn tử ngoại có bước sóng 365nm + Ưu điểm :  Có thể phát số loại aflatoxin khác mẫu nghiệm  Có độ nhạy cao + Nhược điểm :  Đòi hỏi kĩ thuật viên lành nghề  Tiền xử lí mẫu,thiết bị đắt tiền Các phương pháp định lượng 2.1 Sắc kí lỏng cao áp (HPLC) - Phương pháp sử dụng hai pha pha động pha tĩnh , dựa hấp thụ thia UV xác định cường độ huỳnh quang Các chất khác tự tách theo thời gian khác cột tách Mẫu phân tích tách cloroform nước, ly tâm tách chất làm qua silicagen , pha tĩnh thường sử dụng cột nhồi silicagen micromet pha động sử dụng benzen:acetonitrit:acid formic , sau aflatocin phát nhờ đầu dị huỳnh quang - Giới hạn phát thấp tới 0,1ng/kg + Ưu điểm : • Phương pháp cung cấp kết nhanh • Độ xác cao, độ nhạy cao tự động hóa cao • Cột sắc kí sử dụng nhiều lần • Thời gian ngắn + Nhược điểm : Yêu cầu tinh chế mẫu nghiêm ngặt cột miễn dịch 2.2 Sắc kí lớp mỏng hiệu suất cao (HPTLC) - Đây phương pháp cải thiện TLC HPTLC có tính thuyết phục cao TLC khía cạnh : đưa mẫu lên mỏng cách tự động , cải thiện đồng lớp hấp phụ, chạy mỏng dung mơi có kiểm 14 sốt Q trình đưa mẫu vào mỏng đươch tự động hóa ,do vết định vị trí đo lường độ huỳnh quang vết máy densitometers.Thể tích mẫu dùng 1ul so với 5-10ul mẫu phương pháp TLC giảm nhiều diện tích vết Nồng độ chất chuẩn cần 5pg phân tích HPTLC , xác định tới 30pg AFB1 lạc - Giới hạn phát : 1ug/kg(ppb) + Ưu điểm : Hiệu xác + Nhược điểm : • Yêu cầu người vận hành phải lành tính • Thiết bị cồng kềnh , chi phí thiết bị lớn • Tiền xử lí mẫu rộng giới hạn HPTLC phịng thí nghiệm • Khó áp dụng tình thực địa 2.3 Xác định hàm lượng aflatoxin tổng số máy đo huỳnh quang Giới hạn phát phương pháp ug/kg(ppb) Nếu kết phân tích vượt q tiêu chuẩn vệ sinh sử dụng phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao để xác định aflatoxin riêng biệt tính tốn aflatoxin tổng số -Hiệu chuẩn máy đo huỳnh quang dung dịch chuẩn Bật khởi động máy vòng 20 phút Cho mẫu trắng vào chỉnh Cho tiếp dung dịch chuẩn 20 ng/g aflatoxin sau chỉnh 20 Chỉnh máy thật cẩn thận để đảm bảo máy cho kết mẫu trắng 20 mẫu chuẩn Chỉnh máy trước đọc mẫu thử để tránh sai số -Định lượng aflatoxin tổng số : Cho vào cuvet có chứa sẵn ml dung dịch tăng cường brom , 1ml dung dịch aflatoxin làm Cho cuvet vào máy đo huỳnh quang sau 60 giây đọc kết aflatoxin tổng số (ng/g) 2.4 Phương pháp miễn dịch học ELISA -ELISA trực tiếp : Dựa nguyên lý kháng thể đặc hiệu phủ đĩa chuẩn độ Mẫu tách hay aflatoxin chuẩn ủ hay tách 15 thành hai bước Sau rửa dung dịch thích hợp Lượng men gắn vào đĩa xác định dung dịch đặc biệt Phản ứng màu đo quang phổ so sánh mắt thường với đĩa tiêu chuẩn Phương pháp chiếm thời gian sai số lớn mẫu phân tích xâm nhập chất ngoại lai có mẫu tách -ELISA gián tiếp : Trong phương pháp aflatoxin gắn vào protein phủ đĩa chuẩn độ Mẫu tách aflatoxin chuẩn đưa vào đĩa , kháng thể thứ cấp Lượng kháng thể gắn vào đĩa xác định thêm IgG kháng thể gắn với photphataza kiềm phản ứng màu xảy với Pnitrophenyl photphat.Lượng độc tố xác định cách so sánh với đường độc tố chuẩn Tồn q trình chiếm khoảng => So sánh với phương pháp ELISA trực tiếp , phương pháp ELISA gián tiếp trải qua nhiều bước cần kháng thể thứ cấp , khả sai số cao chiếm nhiều thời gian Ưu điểm phương pháp thực dễ dàng, việc phân tích lúc nhiều mẫu làm giảm chi phí cho xét nghiệm Tuy nhiên, độ nhạy khả lặp lại phương pháp cịn kém, địi hỏi nhiều cơng sức thời gian IV, Tình hình thực tế Việt Nam giới Theo kết nghiên cứu từ năm 2018 bệnh nhân ung thư gan nguyên phát điều trị bệnh viện Hữu Nghị (Hà Nội) cho thấy: - Có Aflatoxin B1 tổ chức gan 83% số bệnh nhân - 17% bệnh nhân có lúc yếu tố nguy Aflatoxin B1 viêm gan virus - 13% mang lúc yếu tố nguy Aflatoxin B1, rượu thuốc Vào ngày 5/10/2020, Wang Mou, cư dân thị trấn Xingnong, huyện Jidong, thành phố Jixi, tỉnh Hắc Long Giang, Trung Quốc có người thân ăn tối nhà Họ ăn gọi suantangzi - đặc sản phía đơng Hắc Long Giang Đây ăn làm bột ngơ lên men nên có vị 16 chua.Q trình điều tra cho thấy ngun liệu nấu ăn để đông lạnh tủ lạnh năm, người ta nghi ngờ ngun liệu gây ngộ độc Sau xét nghiệm phịng thí nghiệm bệnh viện, chất aflatoxin phát suantangzi vượt ngưỡng nghiêm trọng, đánh giá sơ ngộ độc aflatoxin Đại học Georgia (Mỹ) thống kê, có đến 4,5 tỷ người giới phơi nhiễm với Aflatoxin Ngộ độc cấp tiêu thụ lượng lớn loại chất độc xảy gây tử vong cao Tại Kenya, năm 2004 ghi nhận 317 ca ngộ độc aflatoxin, có 125 ca tử vong Năm 2013, nhiễm aflatoxin sữa ghi nhận số nước châu Âu Romania, Serbia Croatia Aflatoxin cho nguyên nhân gây 25.200 - 155.000 trường hợp ung thư gan hàng năm, chiếm - 28% tổng số ca mắc ung thư gan giới Trong sở liệu RASFF (Hệ thống cảnh báo nhanh thực phẩm thức ăn chăn nuôi), vào năm 2020, hầu hết ô nhiễm aflatoxin báo cáo đậu phộng, gạo, loại hạt (quả hồ trăn, phỉ hạnh nhân), gia vị sung khô, lên tới 1000µg/kg Sự tập trung cao độ chủ yếu thực hành quản lý thực phẩm tình hình đại dịch COVID-19 Điều cuối dẫn đến việc động vật người ăn nhiều thực phẩm bị nhiễm aflatoxin Ô nhiễm aflatoxin phổ biến châu Á châu Phi, nơi điều kiện khí hậu thuận lợi cho phát triển chủng aflatoxin điều kiện đồng ruộng điều kiện bảo quản Trung Quốc phải đối mặt với vấn đề ô nhiễm aflatoxin hàng nơng sản Do biến đổi khí hậu tồn cầu, aflatoxin mối đe dọa khu vực trước khơng có mối đe dọa Gần đây, có số báo cáo aflatoxin khu vực khác Châu Âu 17 KẾT LUẬN Bằng chứng nghiên cứu từ năm trước cho thấy tác động tiêu cực Aflatoxin nông sản, thực phẩm sức khỏe người Vì mà trước sau thu hoạch nơng sản thực phẩm cần có sẵn lựa chọn phù hợp để giảm việc lây nhiễm Aflatoxin vào thể người Sàng lọc nguyên liệu đổi màu, hư hỏng thực điều kiện bảo quản thích hợp (nhiệt độ, độ ẩm, thơng gió…) số bước quan trọng để hạn chế lây lan Aflatoxin Tùy thuộc vào hoàn cảnh, điều kiện để lựa chọn sử dụng phương pháp vật lí, hóa học, sinh học cho việc giải độc Aflatoxin phù hợp, cần xem xét cẩn trọng để đưa đến điều kiện tối ưu nhất, giảm xuống mức thấp lượng Aflatoxin, khơng ảnh hưởng lớn đến giá trị dinh dưỡng thực phẩm hay khơng để xảy việc dư lượng hóa chất gây biến chứng sau cho người 18 TÀI LIỆU THAM KHẢO https://amp.vov.vn/suc-khoe/bo-y-te-khuyen-cao-du-phong-ngo-docnam-317684.vov https://luanvan.co/luan-van/doc-to-aflatoxin-an-toan-va-ve-sinh-thucpham-3024 https://cafef.vn/7-nguoi-trong-gia-dinh-dot-ngot-tu-vong-sau-bua-antoi-thu-pham-la-chat-ung-thu-hang-nhat-thuong-an-nap-trong-mamcom-ma-who-canh-bao-tu-lau-20201014090327787.chn https://tschem.com.vn/aflatoxin-la-gi/ https://luanvan.net.vn/luan-van/khoa-luan-danh-gia-kha-nang-bataflatoxin-g1-cua-cot-sac-ki-ai-luc-mien-dich-do-vien-pasteur-tp-hcmsan-xuat-21192/ https://vi.wikipedia.org/wiki/Aflatoxin FDA (US Food & Drug Adminitrtaion) CPG Sec 683.100 Action Levels for Aflatoxins in Animal Feeds 2019 Available online: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidancedocuments/cpg-sec-683100-action-levels-aflatoxinsanimal-feeds (accessed on 19 December 2021) https://yhocbandia.vn/aflatoxin-cau-truc-tinh-chat-doc-tinh-co-chehoat-dong-phuong-phap-phat-hien-va-phuong-phap-khu-doc.html https://duocdienvietnam.com/xac-dinh-ham-luong-aflatoxin-b1-trongduoc-lieu/ 10.https://www.studocu.com/vn/document/dai-hoc-kinh-te-quoc-dan/ quan-ly-hoc/khoa-luan-xay-dung-phuong-phap-dinh-luong-aflatoxintrong-duoc-lieu-bang-lc-ms-ms/45390397 19