Thông tin tài liệu
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - lu an Trần Thị Nga n va gh tn to p ie XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VILDAGLIPTIN TRONG HUYẾT TƯƠNG NGƯỜI BẰNG SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ ad o nl w nf a nv a lu l ul oi m LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC at nh z z om l.c gm @ an Lu Hà Nội – 2021 n va ac th si BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - lu Trần Thị Nga an n va p ie gh tn to XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VILDAGLIPTIN TRONG HUYẾT TƯƠNG NGƯỜI BẰNG SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ ad o nl w a lu a nv Chun ngành: Hố phân tích nf Mã số: 8440118 l ul oi m at nh LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC z z NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: @ Hướng dẫn 2: TS Tạ Mạnh Hùng om l.c gm Hướng dẫn 1: TS Dương Tuấn Hưng an Lu Hà Nội – 2021 n va ac th si i Lời cam đoan Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết luận văn trung thực Những kết luận luận văn chưa công bố cơng trình khác Hà Nội, ngày 20 tháng 05 năm 2021 Tác giả lu an n va Trần Thị Nga p ie gh tn to ad o nl w nf a nv a lu l ul oi m at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th si ii Lời cảm ơn Tơi xin bày tỏ kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Dương Tuấn Hưng TS Tạ Mạnh Hùng tận tình hướng dẫn quan tâm giúp đỡ tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn thầy cô công tác Học Viện Khoa Học Công Nghệ giúp đỡ thời gian học tập trường Tôi xin cảm ơn Ban giám đốc – Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương lu an tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu Viện n va Tôi xin chân thành cảm ơn tới toàn thể cán Trung tâm đánh giá tn to Tương đương sinh học – Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương chia sẻ gh giúp đỡ tơi q trình thực luận văn p ie Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, đồng nghiệp giúp đỡ động viên để tơi có đủ nghị lực, tâm hoàn thành luận văn ad o nl w nf a nv a lu Hà Nội, ngày 20 tháng 05 năm 2021 Học viên l ul oi m at nh Trần Thị Nga z z om l.c gm @ an Lu n va ac th si iii Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Từ viết tắt Tên tiếng Anh Tên tiếng việt lu an n va Analyte Chất phân tích AUC Area Under the Curve Diện tích đường cong CC Calibration Curve Đường chuẩn CV Coefficient of Variation Hệ số biến thiên Cmax Maximum Concentration Nồng độ đỉnh CTPT Molecular Formula Công thức phân tử DĐH Pharmacokinetics Dược động học European Medicines Agency Cơ quan quản lý thuốc Châu Âu Electrospray Ionization Ion hóa kiểu phun điện gh tn to AN p ie EMA ad o nl w ESI Thực hành tốt phịng thí Good Laboratory Practices a lu GLP nf a nv nghiệm oi m High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao at nh HPLC Hạn dùng l ul HD om l.c Plasma HT Mẫu kiểm tra độ ổn định nồng độ cao gm High Quality Control Stability Mẫu kiểm tra nồng độ cao @ HQCS z High Quality Control z HQC Huyết tương an Lu n va ac th si iv HTT Blank Plasma Huyết tương trắng KLPT Molecular Weight Khối lượng phân tử IS Internal Standard Chất chuẩn nội Liquid Chromatography – LC-MS Sắc ký lỏng khối phổ Mass spectrometry Liquid Chromatography – LC-MS/MS Sắc ký lỏng hai lần khối phổ Tandem Mass Spectrometry lu an n va Liquid – Liquid Extraction Chiết lỏng – lỏng LLOQ Lower Limit of Quantification Giới hạn định lượng Low Quality Control Mẫu kiểm tra nồng độ thấp Low Quality Control Mẫu kiểm tra độ ổn định Stability nồng độ thấp gh tn to LLE p ie LQC a nv MeOH Acetonitril a lu MeCN ad o nl w LQCS Methanol nf l ul Mass to charge ratio MF Matrix Factor Khối lượng/điện tích oi m m/z at nh Hệ số mẫu Đo chọn lọc đa ion om l.c Monitoring gm Multiple Reaction trung bình @ Người tình nguyện an Lu NTN Samples Mẫu kiểm tra nồng độ z MRM Middle Quality Control z MQC n va ac th si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã v Nucleoside Reverse Thuc c ch enzyme Transcriptase Inhibitor chép ngược nucleosid PPT Protein Precipitation Technique Kỹ thuật kết tủa protein hay Kết tủa protein PTHQ Regression Equation Phương trình hồi quy QC Quality Control Mẫu kiểm tra QCP Quality Control Plan Kế hoạch quản lý chất lượng NRTI lu SĐK an Số đăng kí n va Bioavailability Sinh khả dụng SDS Sodium Dodecyl Sulfate Natri dodecyl sulfat gh tn to SKD Sắc ký đồ p ie SKĐ Solid Phase Extraction Chiết pha rắn o nl w SPE Tert butyl methyl ether Bioequivalence Tương đương sinh học nf a nv l ul TĐSH System Suitablity Test a lu TBME Độ thích hợp hệ thống ad SST oi m Thời gian đạt nồng độ thuốc tối đa máu at nh Tmax Mean Thời gian lưu gm @ TB z Retention Time z tR Trung bình Giới hạn định lượng an Lu Quantification om Upper Limit of l.c ULOQ n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã vi The United States The US-FDA C quan Quản lý Thực phẩm Food and Drug Dược phẩm Hoa Kỳ Administration VKNTTW National Institute of Drug Quality Control Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung Ương WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới WSS Working Standard Solutions Dung dịch chuẩn làm việc lu an n va p ie gh tn to ad o nl w nf a nv a lu l ul oi m at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã vii Danh mc bảng Bảng 1.1 Một số nghiên cứu định lượng VDG huyết tương người Bảng 2.1 Các chất chuẩn sử dụng 19 Bảng 2.2 Cách chuẩn bị đường chuẩn huyết tương 25 Bảng 2.3 Cách chuẩn bị mẫu LLOQ huyết tương 25 Bảng 2.4 Cách chuẩn bị mẫu QC huyết tương 26 Bảng 3.1 Điều kiện nguồn ion hoá 35 Bảng 3.2 Điều kiện sắc ký 41 lu Bảng 3.3 Điều kiện khối phổ định lượng VDG IS 42 an n va Bảng 3.4 Kết đánh giá phù hợp hệ thống 44 tn to Bảng 3.5 Ảnh hưởng mẫu trắng thời điểm trùng tR VDG IS 47 p ie gh Bảng 3.6 Kết khảo sát đường chuẩn theo mơ hình weighting 1/x2 48 Bảng 3.7 Tín hiệu đo pic mẫu LLOQ mẫu Zero tR VDG 50 o nl w Bảng 3.8 Độ đúng, độ xác mẫu LLOQ 50 ad Bảng 3.9 Kết đánh giá ảnh hưởng mẫu 52 a lu Bảng 3.10 Kết đánh giá độ nhiễm chéo 53 a nv nf Bảng 3.11 Độ đúng, độ xác ngày khác ngày 54 l ul Bảng 3.12 Độ lặp lại tiêm lại 55 oi m Bảng 3.13 Độ đúng, độ xác pha loãng 57 nh at Bảng 3.14 Kết khảo sát độ thu hồi IS 58 z z Bảng 3.15 Kết khảo sát độ thu hồi VDG 59 @ gm Bảng 3.16 Kết độ ổn định dung dịch chuẩn gốc VDG theo thời gian 61 om l.c Bảng 3.17 Kết độ ổn định dung dịch nội chuẩn gốc theo thời gian 62 Bảng 3.18 Kết độ ổn định dung dịch chuẩn gốc thời gian ngắn 62 an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã viii Bng 3.19 Kt qu n nh dung dịch chuẩn nội gốc thời gian ngắn 63 Bảng 3.20 Độ ổn định mẫu huyết tương sau chu kỳ đông – rã 64 Bảng 3.21 Kết độ ổn định mẫu huyết tương thời gian ngắn 66 Bảng 3.22 Độ ổn định mẫu huyết tương không kiềm hoá thời gian ngắn bảo quản thùng đá (~ 4°C) 68 Bảng 3.23 Độ ổn định huyết tương thời gian dài (77 ngày) 70 Bảng 3.24 Kết độ ổn định mẫu bảo quản autosampler 71 lu Bảng 3.25 Kết nồng độ VDG huyết tương 01 NTN 74 an n va p ie gh tn to ad o nl w nf a nv a lu l ul oi m at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 71 27255693 9791200 2,784 484,40 28408363 9659290 2,941 511,76 27919711 10530809 2,651 461,36 28432493 9886244 2,876 500,44 lu TB 480,65 CV (%) 4,6 % Độ ổn định 100,6 an n va Kết thực nghiệm cho thấy: Nồng độ VDG mẫu bảo quản tn to điều kiện -70°C 77 ngày nằm khoảng 85 – 115% so với mức nồng độ pha lý thuyết Như vậy, VDG ổn định HT bảo quản điều kiện -70°C gh p ie vòng 77 ngày w Độ ổn định của mẫu sau xử lý (bảo quản auto – sampler) ad o nl - Khảo sát hai nồng độ LQC HQC - Chuẩn bị mẫu QC huyết tương người nồng độ LQC HQC a lu nf a nv Xử lý mẫu theo quy trình xác nhận giá trị sử dụng phương pháp Mẫu sau xử lý bảo quản autosampler nhiệt độ phòng Sau 75 giờ, phân tích sắc ký để xác định nồng độ chất phân tích có mẫu so sánh với nồng độ l ul oi m pha lý thuyết Quá trình phân tích mẫu độ ổn định phân tích song song nh với mẫu QC mẫu đường chuẩn at Kết trình bày Bảng 3.24 z z Bảng 3.24 Kết độ ổn định của mẫu bảo quản autosampler gm @ om LQCS: 8,96 ng/mL l.c Thời gian ổn định: 75 h an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 72 T l tín Nồng độ Tín hiệu pic Tín hiệu pic VDG IS 431083 8248988 0,052 9,05 447229 8269695 0,054 9,34 433630 8288427 0,052 9,06 442997 8573892 0,052 8,96 447694 8315012 0,054 9,30 470706 8228292 0,057 9,84 STT hiệu pic (ng/mL) VDG/IS lu an n va tn to 9,26 CV (%) 3,5 % Độ ổn định 103,3 p ie gh TB ad o nl w HQCS: 477,70 ng/mL a nv a lu nf STT Tín hiệu pic VDG Tỷ lệ tín hiệu pic l ul Tín hiệu pic IS VDG/IS oi m 27172787 8711397 26680587 8929802 26537916 8650347 26804884 8859071 27492035 9132407 at nh Nồng độ (ng/mL) z 496,12 2,988 475,26 3,068 487,96 z 3,119 481,27 3,010 478,84 om l.c gm @ 3,026 an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 73 31491773 12645181 2,490 396,26 TB 469,29 CV (%) 7,8 % Độ ổn định 98,2 Kết Bảng 3.24 cho thấy, nồng độ VDG mẫu LQC HQC xử lý theo quy trình xác nhận giá trị sử dụng phương pháp thực tiêm sắc ký sau bảo quản 75 autosampler nhiệt lu độ phịng khác khơng q 15% giá trị CV ≤ 15% Do vậy, mẫu an huyết tương sau xử lý ổn định vòng 75 autosampler nhiệt n va độ phòng tn to Như vậy, nói quy trình xử lý mẫu phân tích định lượng VDG p ie gh mẫu huyết tương người xây dựng có độ thu hồi cao ổn định, 90% khoảng nồng độ thấp, trung bình cao (Bảng 3.14 Bảng 3.15) Quá trình xử lý mẫu đơn giản, kinh tế phù hợp với điều kiện trang thiết bị w o nl phịng thí nghiệm có Việt Nam Do vậy, triển khai phương pháp ad chiết để xử lý hàng loạt mẫu nghiên cứu SKD/TĐSH nf a nv a lu 3.2 KẾT QUẢ ĐỊNH LƯỢNG VDG TRONG HUYẾT TƯƠNG NGƯỜI TÌNH NGUYỆN l ul Để đánh giá khả ứng dụng phương pháp cho nghiên cứu oi m SKD TĐSH chế phẩm thuốc chứa VDG lưu hành thị trường at nh áp dụng phương pháp LC-MS/MS xây dựng xác nhận giá trị sử dụng để xác định nồng độ VDG huyết tương 23 NTN với 736 mẫu huyết tương nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học chế z z @ gm phẩm viên nén bao phim Vildagliptin 50 mg sản xuất Việt Nam om l.c SKĐ phân tích mẫu huyết tương số NTN thời điểm trước sau dùng thuốc trình bày Hình 3.19 đến Hình 3.22 Mặc dù số người an Lu tình nguyện tham gia vào nghiên cứu 23 người mục đích đánh giá thông số dược động học VDG mà nhằm xác nhận n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 74 giỏ tr s dng v tớnh khả thi phương pháp phân tích xây dựng nên luận văn trình bày kết nồng độ VDG huyết tương 01 NTN (01 giai đoạn) Bảng 3.25 Bảng 3.25 Kết nồng độ VDG huyết tương 01 NTN Tỷ lệ STT Thời gian (h) Tín hiệu pic Tín hiệu tín hiệu Nồng độ VDG pic IS pic (ng/mL) VDG/IS 0 3877974 0,000 0,0 0,25 991144 3176727 0,312 34,1 0,5 5220754 3069280 1,701 184,3 0,75 8581218 2931320 2,927 316,9 gh 11550467 2960969 3,901 422,1 1,33 14310296 3068712 4,663 504,5 1,67 12853375 2943971 4,366 472,4 o nl 11317745 2916461 3,881 419,9 2,5 10093229 3134933 3,220 348,5 10 2974747 2,708 293,2 11 2934883 2,124 230,0 12 3795682 2621006 1,448 156,9 13 2077215 0,779 84,6 14 12 449601 0,158 17,5 15 15 110889 2856774 @ 0,039 4,6 16 24 9093 2942873 0,003 0,7* l.c 504,5 lu an n va tn to p ie w ad a nv a lu 8056870 nf l ul 6234188 oi m nh 2666146 at z 2842672 z om 1,33 an Lu Tmax (h) gm Cmax (ng/mL) n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 75 T1/2 (h) 1,67 AUClast (ng/mL*h) 2132,7 AUCinf (ng/mL*h) 2143,7 % AUClast/AUCinf 99,5% Ghi chú: (*): Dưới giới hạn định lượng XIC of +MRM (2 pairs): 304.000/154.000 Da ID: Vil Max 1270.0 cps 1.23e6 Intensity, 1.00e6 5.00e5 lu 0.01 an 0.00 0.0 0.16 0.27 0.2 0.400.42 0.57 0.61 0.4 0.72 0.6 0.86 0.8 0.96 1.07 1.18 1.22 1.34 1.38 1.0 Time, 1.2 1.56 1.59 1.4 1.6 XIC of +MRM (2 pairs): 237.000/194.000 Da ID: Car 1.8 Max 1.2e6 cps n va 0.47 1.23e6 5.00e5 p ie gh tn to Intensity, 1.00e6 0.00 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Time, 1.2 1.4 1.6 XIC of +MRM (2 pairs): 304.000/154.000 Da ID: Vil 0.57 500 0.42 0.27 0.49 0.4 1.07 1.18 1.22 1.34 1.38 1.56 0.6 0.8 1.0 Time, 1.2 1.4 1.6 1.8 nf a nv 0.2 0.86 0.72 1.59 a lu 0.0 0.16 0.96 0.61 0.01 ad Intensity, o nl 1000 0.40 w 1270 1.8 Max 1270.0 cps l ul Hình 3.19 Sắc ký đồ mẫu huyết tương NTN trước uống thuốc oi m at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 76 XIC of +MRM (2 pairs): 304.000/154.000 Da ID: Vild Max 4.4e6 cps 0.53 Intensity, 4.0e6 3.0e6 2.0e6 1.0e6 0.0 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Time, 1.2 1.4 1.6 XIC of +MRM (2 pairs): 237.000/194.000 Da ID: Car 1.8 Max 1.3e6 cps 0.47 1.3e6 Intensity, 1.0e6 5.0e5 0.0 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Time, 1.2 1.4 1.6 XIC of +MRM (2 pairs): 304.000/154.000 Da ID: Vild 1.8 Max 4.4e6 cps 0.53 4.0e6 Intensity, lu an 3.0e6 2.0e6 n va 1.0e6 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Time, 1.2 1.4 1.6 1.8 Hình 3.20 Sắc ký đồ mẫu huyết tương NTN sau uống thuốc 1,33 p ie gh tn to 0.0 0.0 XIC of +MRM (2 pairs): 304.000/154.000 Da ID: Vild Max 1.4e5 cps 1.17e6 4.00e5 2.00e5 0.2 0.53 a lu 0.00 0.0 ad Intensity, 6.00e5 o nl 8.00e5 w 1.00e6 0.4 0.6 0.8 1.0 Time, 1.2 1.4 1.6 0.47 1.17e6 nf Intensity, 1.00e6 l ul 8.00e5 6.00e5 oi m 4.00e5 2.00e5 0.2 0.4 0.6 nh 0.00 0.0 Max 1.2e6 cps a nv XIC of +MRM (2 pairs): 237.000/194.000 Da ID: Car 1.8 0.8 1.0 Time, 1.2 1.4 1.6 z 0.53 1.4e5 1.8 Max 1.4e5 cps at XIC of +MRM (2 pairs): 304.000/154.000 Da ID: Vild z 5.0e4 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Time, 1.2 1.4 1.6 1.8 om l.c 0.0 0.0 gm @ Intensity, 1.0e5 an Lu Hình 3.21 Sắc ký đồ mẫu huyết tương NTN sau uống thuốc 12 n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 77 XIC of +MRM (2 pairs): 304.000/154.000 Da ID: Vil Max 2900.0 cps 1.21e6 Intensity, 1.00e6 5.00e5 0.05 0.00 0.0 0.19 0.27 0.2 0.52 0.40 0.4 0.65 0.6 0.76 0.79 0.8 0.94 1.04 1.17 1.20 1.33 1.0 Time, 1.2 1.38 1.51 1.60 1.4 1.6 XIC of +MRM (2 pairs): 237.000/194.000 Da ID: Car 1.8 Max 1.2e6 cps 0.47 1.21e6 Intensity, 1.00e6 5.00e5 0.00 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Time, 1.2 1.4 1.6 XIC of +MRM (2 pairs): 304.000/154.000 Da ID: Vil 1.8 Max 2900.0 cps 0.52 lu 2900 n va Intensity, an 2500 2000 1500 0.40 1000 0.05 0.19 0.27 0.76 0.79 0.94 1.04 1.17 1.20 1.33 1.38 1.51 1.60 500 tn to 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Time, 1.2 1.4 1.6 1.8 p ie gh Hình 3.22 Sắc ký đồ mẫu huyết tương NTN sau uống thuốc 24 600 o nl w a lu 400 nf a nv 300 l ul oi m 200 at nh Nồng độ VDG (ng/mL) ad 500 100 z z 10 12 14 16 18 Thời gian (h) 20 22 24 om l.c gm @ Hình 3.23 Đường cong nồng độ VDG mẫu huyết tương của NTN theo an Lu thời gian n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 78 ng dng phng phỏp xây dựng để định lượng VDG huyết tương người tình nguyện cho thấy: Trên sắc ký đồ mẫu huyết tương NTN trước uống thuốc (Hình 3.19), khơng có mảnh ion đặc trưng VDG (m/z 304 → 154) IS (m/z 237 → 194) mẫu huyết tương không ảnh hưởng đến độ chọn lọc phương pháp Sau NTN sử dụng 01 viên VDG 50 mg, sắc ký đồ mẫu huyết tương NTN xuất pic tương ứng đặc trưng VDG IS mẫu chuẩn Pic VDG IS mẫu huyết tương NTN sau dùng thuốc có hình dạng cân đối (Hình 3.20, Hình 3.21, Hình 3.22) Như vậy, phương pháp LC-MS/MS nghiên cứu có tính đặc hiệu – lu chọn lọc cao, sử dụng để định lượng VDG huyết tương người an n va tn to Hầu hết mẫu có nồng độ VDG giới hạn định lượng (LLOQ) Giá trị Cmax (504,5 ng/mL) gần nồng độ cao đường chuẩn (600 ng/mL) nên tiến hành pha lỗng mẫu q trình gh p ie phân tích Giá trị LLOQ (3 ng/mL) khoảng 1/100 lần giá trị Cmax với mức liều 50 mg Đa số mẫu nằm khoảng tuyến tính xác nhận giá ad o nl w trị sử dụng (3 – 600 ng/mL) Do đó, khoảng tuyến tính xây dựng phù hợp để định lượng nồng độ VDG huyết tương người a lu Tỷ lệ phần trăm giá trị AUClast/AUCinf 99,49% (lớn 80%) chứng nf a nv tỏ thời điểm lấy mẫu đáp ứng yêu cầu US-FDA [30, 31] EMA [32] nghiên cứu tương đương sinh học l ul oi m Có nồng độ mẫu QC (LQC MQC) nằm khoảng nồng độ NTN làm tăng độ đúng, độ xác kết định lượng đáp ứng yêu cầu US-FDA EMA phân tích thuốc dịch sinh học [1618], hồn tồn phù hợp để áp dụng phân tích mẫu NTN at nh z z gm @ Giá trị Cmax, Tmax, T1/2 AUC phù hợp với tài liệu cơng bố [7, om l.c 12, 36, 37] Vì vậy, phương pháp phân tích VDG xây dựng xác nhận giá trị sử dụng áp dụng để nghiên cứu dược động học, sinh khả dụng tương đương sinh học chế phẩm cha VDG an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 79 CHNG KT LUN V KIN NGH 4.1 KẾT LUẬN Đề tài nghiên cứu luận văn xây dựng thành công phương pháp định lượng VDG huyết tương người kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS) sử dụng nguồn ion hóa kiểu phun điện dương (ESI +) theo chế độ đo chọn lọc đa ion (MRM) Quy trình phân tích xác nhận giá trị sử dụng đầy đủ đạt yêu cầu phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học theo hướng dẫn hành US-FDA EMA Phương pháp có độ nhạy, độ chọn lọc độ xác cao, thời gian phân tích ngắn (2 lu phút cho mỡi mẫu) có giá trị thực tiễn khả thi để áp dụng định lượng nồng độ VDG mẫu huyết tương NTN, đánh giá tương đương sinh học cho an n va tn to chế phẩm chứa VDG Mẫu huyết đương xử lý kỹ thuật kết tủa protein sử dụng dung dịch MeCN sau rã đơng nhiệt độ phịng Phương pháp có độ chọn lọc cao với VDG; có giới hạn định lượng (LLOQ) thấp gh p ie ng/mL (khoảng 1/100 Cmax mức liều 50 mg); khoảng nồng độ tuyến tính rộng (3 – 600 ng/mL) khoảng từ 1/100 – 1/50 Cmax đến – 3Cmax; không ad o nl w bị ảnh hưởng mẫu với giá trị CV đạt yêu cầu (< 15%); không bị nhiễm chéo; độ cao, độ lặp lại tốt với CV ≤ 15%; độ thu hồi hoạt chất cao ổn a lu định (trên 92,7%) ổn định điều kiện bảo quản khác (5 nf a nv nhiệt độ phòng, thùng đá (~ 4°C), 75 autosampler, sau chu kì đơng – rã 77 ngày nhiệt độ -70°C) l ul oi m Đề tài áp dụng phương pháp để xác định nồng độ VDG mẫu huyết tương NTN thời điểm khác với liều 50 mg Kết cho thấy phương pháp phân tích xây dựng có tính chọn lọc cao, khoảng tuyến tính phù hợp để định lượng nồng độ VDG mẫu huyết tương người at nh z z gm @ 4.2 KIẾN NGHỊ l.c Sau thực đề tài này, có số kiến nghị sau: om - Tiếp tục triển khai áp dụng phương pháp nghiên cứu SKD TĐSH chế phẩm có chứa dược chất VDG với hàm lượng khác nhau, Lu an chế phẩm đa thành phần có chứa VDG theo dõi nồng độ VDG điều trị n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 80 - K thut LC-MS/MS cú ưu điểm vượt trội độ nhạy, tính đặc hiệu chọn lọc Do vậy, cần tiếp tục mở rộng ứng dụng kỹ thuật nghiên cứu SKD TĐSH, đặc biệt cho chế phẩm có hàm lượng, liều dùng thấp lu an n va p ie gh tn to ad o nl w nf a nv a lu l ul oi m at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 81 TI LIU THAM KHẢO [1] M.F Abdel-Ghany, O Abdel-Aziz, M.F Ayad, M.M Tadros, 2014, Validation of different spectrophotometric methods for determination of vildagliptin and metformin in binary mixture, Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 125, pp 175-182 [2] T Boovizhikannan, V.K Palanirajan, 2013, RP-HPLC determination of vildagliptin in pure and in tablet formulation, Journal of Pharmacy Research, 7(1), pp 113-116 [3] A.A El-Zaher, H.A Hashem, E.F Elkady, M.A Allam, 2019, A validated LC-MS/MS bioanalytical method for the simultaneous determination of dapagliflozin or saxagliptin with metformin in human plasma, Microchemical Journal, 149, p 104017 lu an n va tn to [4] R Pontarolo, A.C Gimenez, T.M.G de Francisco, R.P Ribeiro, F.L.D Pontes, J.C Gasparetto, 2014, Simultaneous determination of metformin and vildagliptin in human plasma by a HILIC–MS/MS method, Journal of Chromatography B, 965, pp 133-141 p ie gh [5] Trần Tử An, 2007, Hố Phân Tích, Nhà Xuất Bản Y Học, Bộ Y Tế o nl w [6] National Center for Biotechnology Information, PubChem Compound Summary for CID 6918527, Vildagliptin, https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Galvus, Accessed 2021 ad [7] Y.-L He, D Serra, Y Wang, J Campestrini, G.-J Riviere, C.F Deacon, J.J Holst, S Schwartz, J.C Nielsen, M Ligueros-Saylan, 2007, Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of Vildagliptin in Patients with Type Diabetes Mellitus, Clinical Pharmacokinetics, 46(7), pp 577-588 a nv a lu nf [8] A Shakoor, A Adnan, M Ahmed, 2019, Simultaneous Determination of Metformin and Vildagliptin by HPLC in Human Plasma: Application to Pharmocokinetic Studies, Latin American Journal of Pharmacy, 38(7), pp 1416-1423 l ul oi m nh at [9] A Pharne, B Santhakumari, A.S Ghemud, H Jain, M Kulkarni, 2012, Bioanalytical method development and validation of vildagliptin a novel dipeptidyl peptidase iv inhibitor by RP-HPLC method, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 4, pp 119-123 z z gm @ om l.c [10] C Hess, F Musshoff, B Madea, 2011, Simultaneous identification and validated quantification of 11 oral hypoglycaemic drugs in plasma by electrospray ionisation liquid chromatography–mass spectrometry, Analytical and Bioanalytical Chemistry, 400(1), pp 33-41 an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 82 [11] M Attimarad, S.H Nagaraja, B.E Aldhubaib, A Al-Najjar, 2014, Development of a rapid reversed phase-high performance liquid chromatography method for simultaneous determination of metformin and vildagliptin in formulation and human plasma, Journal of Young Pharmacists, 6(4), pp 40-46 [12] R.I ElBagary, H.M.E Azzazy, E.F ElKady, F Farouk, 2016, Simultaneous determination of metformin, vildagliptin, and 3-amino-1adamantanol in human plasma: Application to pharmacokinetic studies, Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 39(4), pp 195202 lu [13] P Hu, Q Yin, F Deckert, J Jiang, D Liu, L Kjems, W.P Dole, Y.-L He, 2009, Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of Vildagliptin in Healthy Chinese Volunteers, The Journal of Clinical Pharmacology, 49(1), pp 39-49 an n va [14] T.M Annesley, 2003, Ion suppression in mass spectrometry, Clin Chem, 49(7), pp 1041-1044 gh tn to [15] Phạm Luận, 2014, Phương Pháp Phân Tích Sắc Ký Và Chiết Tách, Nhà xuất Bách Khoa Hà Nội p ie [16] The United States Pharmacopeia 38 and National Formulary 33, 2015, Volume 1, In Vivo and In Vitro Evaluation of Dosage Forms, The United States Pharmacopoeial Convention, Rockville, MD 20852, pp w ad o nl [17] The United States Pharmacopeia 38 and National Formulary 33, 2015, Volume 1, In Vivo Bioequivalence Guidances, The United States Pharmacopoeial Convention, Rockville, MD 20852, pp a lu nf a nv [18] The United States Pharmacopeia 38 and National Formulary 33, 2015, Volume 1, Assessment of Drug Product Performance Bioavailability, Bioequivalence, and Dissolution, The United States Pharmacopoeial Convention, Rockville, MD 20852, pp l ul oi m at nh [19] Bộ Y Tế, 2017, Dược Điển Việt Nam V, PL4, Nhà Xuất Bản Y Học, Hà Nội z [20] Somenath Mitra, 2003, Sample Preparation Techniques in Analytical Chemistry, 162, John Wiley & Sons, Hoboken, New Jersey z @ gm [21] Wilfried M A Niessen, 2006, Liquid Chromatography - Mass Spectrometry, Third ed., CRC/Taylor & Francis, LLC om l.c [22] David A Wells, 2003, 5, Chapter Protein precipitation: High throughput techniques and strategies for method development, Progress in Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Elsevier, 199-254 an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 83 [23] E Rogatsky, D Stein, 2005, Evaluation of Matrix Effect and Chromatography Efficiency: New Parameters for Validation of Method Development, Journal of the American Society for Mass Spectrometry, 16(11), pp 1757-1759 [24] R.R Burgess, 2009, 463, Chapter 20 Protein Precipitation Techniques, in: R.R Burgess, M.P Deutscher (Eds.), Methods in Enzymology, Academic Press, 331-342 [25] R dos Santos, A.L Carvalho, A.C.A Roque, 2017, Renaissance of protein crystallization and precipitation in biopharmaceuticals purification, Biotechnology Advances, 35(1), pp 41-50 lu [26] S Liu, Z Li, B Yu, S Wang, Y Shen, H Cong, 2020, Recent advances on protein separation and purification methods, Advances in Colloid and Interface Science, 284, p 102254 an n va tn to [27] P.L Kole, G Venkatesh, J Kotecha, R Sheshala, 2011, Recent advances in sample preparation techniques for effective bioanalytical methods, Biomedical Chromatography, 25(1‐2), pp 199-217 p ie gh [28] O.S Ahmed, Y Ladner, C Bousquet, J Montels, P Dubský, L Philibert, C Perrin, 2020, Direct salting-out assisted liquid–liquid extraction (SALLE) from human blood: Application for the analysis of tyrosine kinase inhibitors, Microchemical Journal, 155, p 104791 w ad o nl [29] N Li, T Zhang, G Chen, J Xu, G Ouyang, F Zhu, 2021, Recent Advances in Sample Preparation Techniques for Quantitative Detection of Pharmaceuticals in Biological Samples, TrAC Trends in Analytical Chemistry, p 116318 a nv a lu nf [30] FDA, 2003, Guidance for Industry - Bioavailability and Bioequivalence Studies for Orally Administered Drug Products - General Considerations, U.S Department of Health and Human Services l ul oi m at nh [31] FDA, 2018, Bioanalytical Method Validation: Guidance for Industry, U.S Department of Health and Human Services z [32] European Medicines Agency, 2012, Guideline on Bioanalytical Method Validation z @ om l.c gm [33] The Pharmacopoeia of the People’s Republic of China, 2005, Volume II, Guidances in vivo Bioavailability and Bioequivalence Studies for Drug Preparations, in: C.P Commission (Ed.), People's Medical Publishing House,, A207-A210 an Lu [34] ASEAN, 2015, ASEAN Guideline for The Conduct of Bioequivalence Studies n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã 84 [35] N Kumar, S.R Devineni, G Singh, A Kadirappa, S.K Dubey, P Kumar, 2016, Identification, isolation and characterization of potential process-related impurity and its degradation product in vildagliptin, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 119, pp 114-121 [36] Y.-L He, R Sabo, G Sunkara, M.-N Bizot, G.-J Riviere, S Leon, M Ligueros-Saylan, W.P Dole, D Howard, 2007, Evaluation of Pharmacokinetic Interactions Between Vildagliptin and Digoxin in Healthy Volunteers, The Journal of Clinical Pharmacology, 47(8), pp 998-1004 [37] K Sakthimanigandan, M Ganesh, V Kanthikiran, T Sivakumar, H Jang, 2015, Liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for the determination of Vildagliptin in rat plasma, Acta Chromatographica, 27(2), pp 295-307 lu an n va p ie gh tn to ad o nl w nf a nv a lu l ul oi m at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã si (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã (Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã(Luỏưn.vn).xÂy.dỏằng.phặặĂng.phĂp.ỏằnh.lặỏằÊng.vildaglitin.trong.huyỏt.tặặĂng.ngặỏằãi.bỏng.sỏc.kẵ.lỏằãng.khỏằi.phỏằã
Ngày đăng: 28/10/2023, 21:48
Xem thêm:
