Chiết xuất, phân lập và xác định cấu trúc của một số hợp chất từ rễ cốt toái bổ (drynaria bonii h christ), họ dương xỉ (polypodiaceae)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC  - - ĐẶNG THỊ HỒNG NHUNG CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ RỄ CỐT TOÁI BỔ (Drynaria bonii H.Christ), HỌ DƯƠNG XỈ (Polypodiaceae) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2023 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC  - - ĐẶNG THỊ HỒNG NHUNG CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ RỄ CỐT TOÁI BỔ (Drynaria bonii H.Christ), HỌ DƯƠNG XỈ (Polypodiaceae) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa : QH.2018Y Người hướng dẫn : TS Nguyễn Thị Hà Ly ThS Lê Hồng Dương HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Khóa luận kết trình học tập, rèn luyện em Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội trình nghiên cứu, thực hành Khoa Hóa Phân tích – Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu Trong q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận, em nhận nhiều giúp đỡ quý báu từ Thầy Cô Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội nghiên cứu viên Viện Dược liệu gia đình bạn bè Đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biết sâu sắc tới PGS.TS Đỗ Thị Hà, TS Nguyễn Thị Hà Ly ThS Lê Hồng Dương hết lịng tận tình, bảo em q trình làm khóa luận Em xin gửi lời cám ơn chân thành đến ThS Nguyễn Thị Thu DS Nguyễn Trà My cán nghiên cứu Khoa Hóa Phân tích – Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu giúp đỡ hướng dẫn em trình thực hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn Ban Chủ nhiệm Khoa Y Dược, Bộ môn Dược liệu & Dược học cổ truyền Thầy Cô trường Đại học Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em học tập rèn luyện suốt năm học, đồng thời trực tiếp tham gia thực khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đề tài “Nghiên cứu phân lập, phát triển phương pháp định lượng chất đánh dấu dấu vân tay hóa học HPLC dược liệu Cốt tối bổ (Drynaria bonii)” - Đề tài nghiên cứu cấp sở, Viện Dược liệu, Bộ Y tế tạo điều kiện hỗ trợ kinh phí để em thực đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cám ơn tới gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ em trình học tập làm đề tài tốt nghiệp Do vốn kiến thức hạn chế, q trình làm khóa luận em khơng tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận lời nhận xét, góp ý Thầy Cơ để khóa luận tốt nghiệp em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Sinh viên Đặng Thị Hồng Nhung MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC SƠ ĐỒ MỞ ĐẦU 1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Một số loài thuộc chi Drynaria tìm thấy giới 1.1.3 Phân bố 1.2 Tổng quan loài Drynaria bonii 1.2.1 Danh pháp 1.2.2 Đặc điểm thực vật 1.2.3 Phân bố sinh thái 1.2.4 Thành phần hóa học 1.2.5 Tác dụng dược lý 1.2.6 Tính vị công dụng CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.2 Dung mơi, hóa chất thiết bị 2.2.1 Dung mơi, hóa chất 2.2.2 Thiết bị 10 2.3 Phương pháp nghiên cứu 10 2.3.1 Phương pháp định tính nhóm chất phản ứng hóa học 11 2.3.2 Phương pháp chiết xuất phân lập 14 2.3.3 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 14 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 15 3.1 Định tính nhóm chất hữu phản ứng hóa học 15 3.2 Chiết xuất phân lập hợp chất 16 3.1.1 Chiết xuất cao tổng cao phân đoạn 16 3.1.2 Phân lập hợp chất 17 3.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 18 3.3.1 Hợp chất DBB-1 18 3.3.2 Hợp chất DBB-2 19 3.3.3 Hợp chất DBB-3 20 3.3.4 Hợp chất DBB-4 21 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 23 4.1 Định tính nhóm chất hữu phản ứng hóa học 23 4.2 Chiết xuất cao tổng cao phân đoạn 23 4.3 Phân lập xác định cấu trúc hợp chất 24 4.3.1 Hợp chất DBB-1 (acid p-hydroxybenzoic) 24 4.3.2 Hợp chất DBB-2 (acid protocatechuic, PCA) 25 4.3.3 Hợp chất DBB-3 (acid caffeic, CA) 27 4.3.4 Hợp chất DBB-4 (acid ferulic, FA) 28 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 30 Kết luận 30 Đề xuất 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT Ký hiệu, Chữ viết đầy đủ STT viết tắt C-NMR Carbon 13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13) H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) 13 Atopic Dermatitis - Viêm da dị ứng AD BuOH CA CAT CD3OD DCM Dicloromethane DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer Phổ DEPT 10 DL / DM 11 DMSO Dimethyl sulfoxide 12 DNCB 2,4-Dinitrochlorobenzene 13 DPPH 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl 14 EtOAc Ethyl acetate 15 EtOH Ethanol 16 FA 17 HPLC Butanol Caffeic acid Catalase Deuterated methanol Tỉ lệ dược liệu / dung môi Ferulic acid High-performance liquid chromatography - Sắc ký lỏng hiệu cao 18 IL Interleukin 19 MeOH Methanol 20 MMP Matrix Metalloproteinase 21 PCA Protocatechuic acid 22 RA Rheumatoid Arthritis - Viêm khớp dạng thấp 23 ROS Reactive Oxygen Species (Các gốc oxy hóa hoạt động) 24 SAR Superoxide anion 25 SC50 50% Stimulation Concentration (Nồng độ kích thích 50%) 26 STZ Steptozotocin 27 TLC Thin Layer Chromatography (Sắc ký lớp mỏng) 28 TNF-α 29 v/v 30 v/v/v Tumor Necrosis Factor-α (Yếu tố hoại tử khối u alpha) Volume by volume (Thể tích/ thể tích) Thể tích/ thể tích/thể tích DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cây cốt tối bổ – Drynaria bonii H.Chirst [6] Hình 1.2 Cấu trúc số hợp chất phân lập từ rễ Cốt tối bở Hình 2.1 Dược liệu Cốt tối bở (Drynaria bonii) Hình 3.1 Cấu trúc hợp chất DBB-1 19 Hình 3.2 Cấu trúc hợp chất DBB-2 20 Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất DBB-3 21 Hình 3.4 Cấu trúc tương tác HMBC (→) hợp chất DBB-4 22 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Một số loài thuộc chi Drynaria giới Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất rễ loài D bonii 15 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ hợp chất DBB-1 acid p-hydroxybenzoic 18 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ hợp chất DBB-2 acid protocatechuic 19 Bảng 3.4 Dữ liệu phổ hợp chất DBB-3 acid caffeic 20 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ hợp chất DBB-4 acid ferulic 21 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 3.1: Quá trình chiết xuất cao tởng cao phân đoạn Cốt tối bở 17 Sơ đồ 3.2: Q trình phân lập hợp chất từ phân đoạn BuOH 18 MỞ ĐẦU Dược liệu Cốt tối bở phần thân rễ phơi sấy khô Cốt tối bở cịn thường gọi Tắc kè đá biết tới với hai lồi có tên khoa học Drynaria fortunei (Kunze ex Mett.) J.Sm Drynaria bonii H Christ thuộc họ Dương xỉ (Polypodiaceac) Theo Dược điển Việt Nam, phần thân rễ Cốt toái bổ vị thuốc cổ truyền phổ biến y học sử dụng để bổ thận, liền xương thống [6] Loài D fortunei phân bố chủ yếu Trung Quốc có nhiều nghiên cứu thành phần hoá học tác dụng sinh học Loài qui định Dược điển Trung Quốc Tuy nhiên loài D bonii lại phân bố tự nhiên nhiều nước ta chưa có nhiều nghiên cứu thành phần hố học, tác dụng sinh học tiêu chuẩn chất lượng riêng Do cần thiết có nghiên cứu nhằm xác định thành phần hố học lồi D bonii để có sở khoa học cho nghiên cứu tiêu chuẩn hóa chất lượng phát triển sản phẩm từ dược liệu Đề tài “Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc số hợp chất từ rễ Cốt toái bổ (Drynaria bonii H.Christ), họ Dương xỉ (Polypodiaceae)” thực với mục tiêu sau: Định tính nhóm chất có rễ Cốt tối bở Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc số hợp chất từ rễ Cốt tối bở 1 1.1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN Tổng quan chi 1.1.1 Vị trí phân loại Vị trí phân loại chi Drynaria giới thực vật [1] theo “Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam” sau: Giới: Thực vật (Plantea) Ngành: Dương Xỉ (Pteridophyta) Lớp: Dương Xỉ (Pteridopsida) Bộ: Dương Xỉ (Polypodiales) Họ: Dương xỉ (Polypodiaceae) Chi: Drynaria 1.1.2 Một số loài thuộc chi Drynaria tìm thấy giới Trên giới, có khoảng 20 lồi thuộc chi Drynaria phát định danh, loài thuộc chi thực vật liệt kê theo bảng 1.1: Bảng 1.1 Một số loài thuộc chi Drynaria giới STT Tên khoa học STT Tên khoa học D bonii H.Christ D delavayi Christ D descensa Copel D fortunei (Kunze ex Mett.) J Sm D involuta Alderw D laurentii (Christ) Hieron D mollis Bedd D sinica Diels D parishii (Bedd.) Bedd 10 D leuridioides C.Presl 11 D propinqua (Wall ex Mett.) J.Sm ex Bedd 12 D quercifolia (L.) J.Sm 13 D rigidula (Sw.) Bedd 14 D sparsisora (Desv.) T.Moore 15 D volkensii Hieron 16 D willdenowii (Bory) T.Moore Phụ lục 2.1.2: Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) hợp chất DBB-1 Phụ lục 2.1.3 Phổ DEPT hợp chất DBB-1 PHỤ LỤC 2.2 DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT DBB-2 Cấu trúc hóa học hợp chất DBB-2 Phụ lục 2.2.1 Phổ 1H-NMR (600 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-2 Phụ lục 2.2.2 Phổ 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-2 Phụ lục 2.2.1 Phổ 1H-NMR (600 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-2 Phụ lục 2.2.2 Phổ 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-2 PHỤ LỤC 2.3 DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT DBB-3 Cấu trúc hóa học hợp chất DBB-3 Phụ lục 2.3.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-3 Phụ lục 2.3.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-3 Phụ lục 2.3.3 Phổ DEPT hợp chất DBB-3 Phụ lục 2.3.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-3 Phụ lục 2.3.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-3 Phụ lục 2.3.3 Phổ DEPT hợp chất DBB-3 PHỤ LỤC 2.4 DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT DBB-4 Cấu trúc hóa học hợp chất DBB-4 Phụ lục 2.4.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-4 Phụ lục 2.4.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-4 Phụ lục 2.4.3 Phổ HMBC hợp chất DBB-4 Phụ lục 2.4.4 Phổ HSQC hợp chất DBB-4 Phụ lục 2.4.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-4 Phụ lục 2.4.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất DBB-4 Phụ lục 2.4.3 Phổ HMBC hợp chất DBB-4 Phụ lục 2.4.4 Phổ HSQC hợp chất DBB-4 PHỤ LỤC HÌNH ẢNH KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH Drynaria bonii CHẤT BÉO PHYTOSTEROL ACID AMIN + Ninhydrin Chứng FLAVONOID Cyanidin Chứng PỨ Cyanidin Chứng Chứng + FeCl3 5% ĐƯỜNG KHỬ Chứng Phản ứng với kiềm FeCl3 5% + NaOH 10% POLYSACCHARID + TT Fehling Chứng + TT Lugol TANNIN FeCl3 5% Chứng + FeCl3 5% Pb(CH3COO)2 10% Chứng + Pb(CH3COO)2 10% Gelatin 1% Chứng + Gelatin 1%