Nghiên cứu đặc điểm hình thái và phân tử sán lá ruột nhỏ trên người ở một số tỉnh và hiệu quả điẻu trị tại cộng đồng năm 2010 2013

BỘ Y TẾ Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN SĨT RÉT - KÝ SINH TRÙNG - CƠN TRÙNG TRUNG ĐỎ TRUNG DŨNG NGHIÊN cúư ĐẶC ĐIÉM HÌNH THÁI VÀ PHÂN TỦ SÁN LÁ RUỘT NHỎ TRÊN NGƯỜI Ỏ MỘT SĨ TỈNH VÀ HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ TẠI CỘNG ĐỊNG, NĂM 2010-2013 Chuyên ngành: Ký sinh trùng-Côn trùng Y học Mã số: 62 72 01 16 LUẬN ÁN TIÉN SỸ Y HỌC Giáo viên hướng dẩn khoa học: GS.TS Nguyễn Văn Đồ PGS.TS Lê Thanh Hồ I ĩêơ V4n-; • ỈPUầÊiÕ Đ/.i HỌO yĨÍÂ KỊ! I _ Hà Nội, 2014 -ãc ô4 ugc V Hl i LềI CM ON Tụi xin bày tò lòng biết ơn sâu sắc tới thầy hướng dẫn GS.TS Nguyền Vãn Đề PGS.TS Lè Thanh Hoà, thầy giáo thực tâm huyết tận tình hướng dần, dành nhiều thời gian truyền dạt kiến thức, trao dổi, định huướng, động viên giúp dở tơi q trình thực luận án Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS TS Nguyền Mạnh Hùng, nguyên Viện trường, TS Trần Thanh Dương, Viện trưởng; Ban Lành dạo Viện sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng Trung ương cán bộ, dồng nghiệp cùa khoa, phòng Viện sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng Trung ương dà tạo diều kiện giúp dờ suốt trinh học tập Tôi xin chân thành câm ơn BS Nguyền Thị Hợp, CN Nguyễn Thu Hiền, bạn dồng nghiệp cùa Khoa Ký sinh trùng, Viện sốt rél-Ký sinh trùng-Côn trùng Trung ương, chân thành cảm ơn Ths Nguyền Thị Khuê cán Phịng Miễn dịch, Viện Cơng nghệ sinh học dã giúp dờ thực công việc thu mẫu, thi nghiệm nghiên cứu hình thái học, sinh học phân từ cho nghiên cứu Tôi xin gừi lời cảm ơn sâu sắc tới GS Jitra Waikagul, TS Urusa Thcnkham dã tài trợ giúp dờ tiến hành thí nghiệm phịng thí nghiệm Bộ mơn Ký sinh trùng, khoa Y học nhiệt dới, trường Đại học Mahidol, Bangkok, Thái Lan Tôi xin chân thành càm ơn tài trợ phần kinh phí dể thực thâm định sinh học phân tử, cùa Quỳ phát triển khoa học công nghệ quốc gia (NAFOSTED) dề tài mã số 106.06-2012.05 “Nghiên cứu xác định loài dặc điểm phân từ ký sinh trùng gáy bệnh động vật lây sang người thuộc họ Heterophyidae Echinostomatidae Việt Nam” PGS.TS Le Thanh Hòa chù nhiệm Xin chân thảnh câm ơn Dự án ‘‘Ký sinh trùng có nguồn gổc Thuỳ sàn Việt Nam - FIBOZOPA” chinh ph an Mch ti -ãc ô4 ugc V Hl ii trợ hỗ trợ phần kinh phi nghiên cứu dành giá hiệu diều trị sán nhô cộng dồng Xin chân thành câm ơn Hội dồng tạo sau dại học, TS Cao Bá Lợi, Phó trưởng Phịng Khoa học tạo, phụ trách tạo sau dại học cán cùa Phòng Khoa học tạo, Viện sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng Trung iromg dà tạo diều kiện thuận lợi nhiệt tình giúp dờ tơi suốt thời gian nghiên cứu, học tập bào vệ luận án Tôi xin gửi lời câm ơn chân thành đến lãnh dạo, cán y tế cùa Trung tâm Phòng Chống sốt rét-Ký sinh trùng-Cơn trùng/Trung tâm Y tế dự phịng tình cán y tế cùa điềm nghiên cứu dà tạo diều kiện, hợp tác giúp dờ tơi suổt q trình thu mầu thực địa Tôi xin câm ơn người bạn thân dồng nghiệp dã dộng viên, khuyến khích hỗ trợ tơi q trình học tập nghiên cứu Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc den tới toàn thể gia dinh, vợ tơi dà ln ln khuyến khích động viên, giúp dờ chia sè khó khăn truyền nhiệt huyết giúp tơi hồn thành q trình học tập nghiên cứu Tác già iii LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan dây cơng trình nghiên cứu tơi thực Các số liệu, kết luận án hồn tồn trung thực, xác chưa dược công bố công trình khác Nấu có sai sót tơi xin hon ton chu trỏch nhim Tỏc gi -ãc ô4 ugc V Hl iv MỤC LỤC Nội dung Mục Trang Lởi câm ơn i Lời cam đoan iii Mục lục ìv Danh mục chừ viết tắt ix Danh mục bàng X Danh mục hình xiii ĐẶT VÂN ĐẺ CHƯƠNG TỎNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số dặc điểm chung cùa sán 1.1.1 Đặc điểm sinh học cùa sán 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Đặc điểm phân loại hình thái học sán ruột nhỏ trưởng thành 1.1.4 Đặc điểm trứng sán ruột nhỏ họ Hetcrophyidac họ 10 Echinostomatỉdac 1.1.5 Đặc diem ấu trùng sán họ ruột nhỏ họ Hcterophyidae 11 họ Echinostomatidae 1.1.6 Đặc điểm chu kỳ phát triển (vòng dời) 12 1.1.7 Một số nghiên cứu số loài sán ruột nhỏ họ 16 Hctcrophyidae Echinostomatidac giới 1.1.8 Tình hình nghiên cửu số lồi sán ruột nhỏ họ 20 I ỉcterophyidae Echinostomatidac động vật người Việt Nam 1.2 Tổn thương giải phẫu bệnh, triệu chửng làm sàng, chẩn đoán, diều trị phịng chống sán ruột nhỏ ĨXT ,:i; íị: ■: 41ÍỂ-: 23 V 1.2.1 Tổn thương giâi phẫu bệnh 23 i 2.2 Triệu chứng lâm sàng 25 1.2.3 Chẩn đoán 26 1.2.4 Điều trị 28 1.2.5 Phòng bệnh 29 1.3 Một số kỳ thuật sinh học phân tử ứng dụngtrong nghiên 29 cứu ký sinh trùng 1.3.1 Tầm quan trọng việc nghiên cứu giãimà hệ gen ty thê 30 lồi sán ruột nhơ chi thị phân từ cùa hệ gcn ti thể thường gặp 1.3.2 Đặc diem sinh học phân tử hệ gen nhân vả chi thị phân tử 31 hệ gcn nhân tế bào 1.3.3 Phương pháp nhân gen bang kỷ thuật Polymerase chain 33 reaction (PCR) 1.3.4 Một số ứng dụng phương pháp sinh học phân từ 34 nghiên cứu định loại, di truyền quần the phả hệ ký sinh trùng CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN củu 40 2.1 Đối tượng, địa diem thời gian nghiên cứu 40 2.1.1 Đối tượng nghiên cửu 40 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 40 2.1.3 Thời gian nghiên cứu 41 2.2 Phương pháp nghiên cứu 43 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 43 2.2.2 Cờ mầu nghiên cứu 44 2.2.3 Quy trình thu thập mầu sán trường thành 47 2.2.4 Nội dung nghiên cứu dặc điểm hình tháisán ruột nhị 48 trường thành vi 2.2.5 Nội dung ghiên cứu đặc diem sinh học phàn từ cùa 50 số lồi sán nhị 2.2.6 Nội dung nghiên cứu đánh giá hiệu quà điều trị sán nhỏ 57 người cộng dồng 2.3 Y dức nghiên cứu 59 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 59 2.4.1 Xử lý số liều hỉnh thái học 59 2.4.2 Xừ lý số liệu sinh học phân lử 60 2.4.3 Phân lích sổ liệu nghiên cửu đánh giá hiệu quà diềutrị sán 63 nhò cộng dồng CHƯƠNG KÉT QUẢ NGHIÊN Ư 64 3.1 Kết quà diều tra xác định đổi lượng nghiên cứu tình 3.1.1 Kết quà diều tra căt ngang đánh giá tình hình nhiễm giun 64 64 sán tinh 3.1.2 Kcl quà thu thập mẫu sán ruột nhò trưởng thành 65 tinh 3.1.3 Đặc diềm hình thái học số loài sán ruột thu dược 68 nghiên cứu 3.2 Kết thầm định phân từ loài sán lánhỏ thu dược 77 3.2.1 Thu nhận chuồi gen ty thể coxỉ 77 3.2.2 Thu nhận chuồi gen nhân 28S 78 3.2.3 Kết quà thẩm định loài sán ruộtnhỏ họHclcrophyidac 82 Kốl thẩm định lồi sán ruột nhị họ I ỉctcrophyidac 88 Echinostomatidac sử dụng chi thị gcn ty thề coxỉ 3.2.4 Echinostomatidac sử dụng chi thị gcn nhân 28S ribosome 3.2.5 Nghiên cứu gen coxl Haplorchis taỉchuì lại tinh 87 Hà Giang, Thanh Hoá Quảng Trị 3.3 Kết dành giá hiệu diều trị sán nhị cộng dồng •nu XỆKọ: HJCV 41 Mftĩ 97 vii 106 CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Đặc điểm hình thái học số lồi sán láthu dirợc 106 4.1.1 Đặc điểm hình thái cùa H taichui 106 4.1.2 Đặc điểm hình thái cúa H pumilio 108 4.1.3 Đặc điểm hình thái cùa falcatus 109 4.1.4 Đặc điểm hỉnh thái c fonnosanus 110 4.1.5 Đặc điềm hình thái cùa Echinochasmus japonicus 111 4.2 Thẩm định lồi sán ruột nhị trưởng thành họ 113 Heterophyidac Echinostomatidae phương pháp sinh học phân tử 4.2.1 So sánh trình tự nucleotide cùa chuỗi gen cox thu nhận với 115 chuồi gen tương ứng cùa loài sán ruột nhỏ khác 4.2.2 Mối quan hệ phả hệ loài chùng sán ruột nhỏ 117 cùa Việt Nam giới dựa trình tự gcn coxl 4.2.3 So sánh trình tự nucleotide cúa gen 28S chủng nghiên 119 cứu với chuỗi gen tương ứng loài sán lả khác 4.2.4 Mối quan hệ phả hộ cúa câc chùng sán nghiên cứu dựa 120 phần trình tự gen 28S 4.2.5 Đặc điểm sinh học phân tử quần thể sán ruột nhò H 122 taichui Hà Giang, Thanh Hoá Quàng Trị 4.3 Hiệu diều trị sán nhỏ cộng dồng 126 4.3.1 Nhiễm phối hợp sán ruột nhò sán gan nhỏ người ỉ 26 Việt Nam 4.3.2 Chẩn dốn nhiễm sán gan nhị sán ruột nhỏ 4.3.3 Hiệu quà diều trị sán nhò cộng đồng sử dụng 129 liều 131 Praziquantel 50mg/kg chia lần KÉT LUẬN 136 KIẾN NGHỊ 138 -•c «4 ugc V Hl viii Những đóng góp mói luận án 139 Danh sách báo khoa học liên quan đến luận án công bố 140 Những hạn chế cùa luận án 141 Tài liệu thana khào 142 Ph lc 163 -ãc ô4 ugc V Hl ix DANH MỤC CH Ũ* VI ÉT TÁT Nội dung Chữ viết tắt ADN Acid Deoxyribonucleic bp Cặp bazơ (Base pair) CI Khoảng tin cậy (Confidence Interval) COI, coxl Gen ti the Cytochrome c oxidase cs cộng EPG Số trứng gram phân (Egg per gram) et al người khác ETS External Transcribed Spacer ITS Internal Transcribed Spacer kb Kilobase Phát thuốc diều trị cộng dồng (Mass Drug MDA Administration) Viện sổt rél-Ký sinh trùng-Côn trùng Trung ương NIMPE (National Institute of Maỉariology, Parasitology and Entomology) OR PCR RAPD RFLP Ti xuất chênh (Odds ratio) Phàn ứng chuỗi trùng hợp (Polymerase Chain Reaction) Đa hình doạn nhân bàn ngẫu nhiên (Random Amplified Polymorphic ADN) Đa hình doạn phân cắt giới hạn (Restriction Fragment Length Polymorphism spp Species WHO Tổ chức Y tế giới (World Health Organization) -U'