Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http //www lrc tnu edu vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ THỊ TUYẾN TỔNG HỢP, NGHIÊN CỨU PHỨC CHẤT CỦA GADOLINI, TECBI, DYSPROSI VỚI L[.]
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ THỊ TUYẾN TỔNG HỢP, NGHIÊN CỨU PHỨC CHẤT CỦA GADOLINI, TECBI, DYSPROSI VỚI L - TYROSIN VÀ BƢỚC ĐẦU THĂM DỊ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HOÁ HỌC Thái Nguyên - Năm 2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ THỊ TUYẾN TỔNG HỢP, NGHIÊN CỨU PHỨC CHẤT CỦA GADOLINI, TECBI, DYSPROSI VỚI L - TYROSIN VÀ BƢỚC ĐẦU THĂM DỊ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG Chun ngành : Hố vơ Mã số: 60 44 25 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HOÁ HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Lê Hữu Thiềng Thái Nguyên - Năm 2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Luận văn hồn thành khoa Hóa học, trường Đại học Sư phạm, Đại học Thái Nguyên Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Lê Hữu Thiềng, giao đề tài, hướng dẫn tận tình, chu đáo giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn ban Giám hiệu, khoa Sau đại học, khoa Hóa học- trường Đại học Sư phạm, Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập nghiên cứu thực đề tài Xin chân thành cảm ơn thầy giáo, cô giáo khoa Hóa Học, trường ĐHSP Thái Nguyên bạn bè đồng nghiệp giúp đỡ, động viên, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực nghiệm hoàn thành luận văn Cùng với biết ơn sâu sắc xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu, tổ Lý- Hoá trường THPT Điềm Thụy giúp đỡ, động viên tơi suốt q trình học tập hoàn thành luận văn Thái Nguyên, tháng 05 năm 2012 Tác giả Hà Thị Tuyến Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi, số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tác giả Hà Thị Tuyến Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn i MỤC LỤC Trang Trang bìa phụ Lời cảm ơn Lời cam đoan Mục lục i Danh mục ký hiệu, từ viết tắt iii Danh mục bảng iv Danh mục hình vi MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược nguyên tố đất khả tạo phức chúng 1.1.1 Đặc điểm cấu tạo tính chất chung NTĐH 1.1.2 Giới thiệu số hợp chất NTĐH 1.1.3 Sơ lược nguyên tố gadolini , tecbi , dysprosi 1.2 Giới thiệu L - tyrosin 11 1.2.1 Sơ lược L- tyrosin 11 1.2.2 Sơ lược hoạt tính L - tyrosin 13 1.3 Khả tạo phức NTĐH với aminoaxit 13 1.3.1 Khả tạo phức NTĐH 13 1.3.2 Khả tạo phức NTĐH với aminoaxit 16 1.4 Hoạt tính sinh học phức chất NTĐH với aminoaxit 18 1.5 Một số phương pháp nghiên cứu phức chất 19 1.5.1 Phương pháp phân tích nhiệt 19 1.5.2 Phương pháp phổ hấp thụ hồng ngoại 20 1.5.3 Phương pháp đo độ dẫn điện 21 1.6 Đối tượng thăm dị hoạt tính sinh học phức chất 23 1.6.1 Giới thiệu vi khuẩn Salmonella E.coli 23 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ii 1.6.2 Giới thiệu lạc, protein, proteaza α-amilaza 25 Chƣơng THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 28 2.1 Hóa chất thiết bị 28 2.1.1 Hóa chất 28 2.1.2 Thiết bị 30 2.2 Tổng hợp phức chất rắn xác định thành phần chúng 30 2.2.1 Tổng hợp phức chất rắn 30 2.2.2 Xác định thành phần phức chất 30 2.3 Nghiên cứu phức chất phương pháp phân tích nhiệt 32 2.4 Nghiên cứu phức chất phương pháp phổ hấp thụ hồng ngoại 36 2.5 Nghiên cứu phức chất phương pháp đo độ dẫn điện 40 2.6 Bước đầu thăm dị hoạt tính sinh học số phức chất NTĐH với L - tyrosin 41 2.6.1 Hoạt tính kháng khuẩn phức Tb(Tyr)3.3H2O 41 2.6.2 Ảnh hưởng hàm lượng phức Tb(Tyr)3.3H2O đến nảy mầm phát triển mầm hạt lạc 43 2.6.3 Ảnh hưởng phức chất đến số tiêu sinh hóa có mầm hạt lạc 48 KẾT LUẬN 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ NTĐH Nguyên tố đất Ln Lantanit Ln3+ Ion Lantanit Tyr Tyrosin DTPA Đietylen triamin pentaaxetic EDTA Đietylen điamin tetraaxetic IMDA Iminođiaxetic dixet -đixetonat NTA Nitrilotriaxetic 10 ADN Axit đeoxyribo Nucleic 11 DMSO Đimetyl sunphoxit 12 IR Infared (hồng ngoại) 13 DTA 14 TGA Differential thermal analysis (phân tích nhiệt vi phân) Thermogravimetry or Thermogravimetry analysis (phân tích trọng lượng nhiệt) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iv DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Các phân nhóm dãy nguyên tố đất .2 Bảng 1.2 Một số thông số vật lí nguyên tố gadolini , tecbi , dysprosi Bảng 1.3 Một số đặc điểm L - tyrosin 12 Bảng 2.1 Kết phân tích thành phần (%) nguyên tố (Ln, C, N) phức chất .31 Bảng 2.2 Kết giản đồ phân tích nhiệt phức chất 34 Bảng 2.3 Các tần số hấp thụ đặc trưng (cm-1) L - tyrosin phức chất (tỉ lệ Ln3+ : Tyr = : 3) 39 Bảng 2.4 Độ dẫn điện mol phân tử (μ) L - Tyrosin phức chất DMSO 25 ± 0,50C .40 Bảng 2.5 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn phức chất Tb(Tyr)3.3H2O 42 Bảng 2.6 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn Tb(Tyr)3.3H2O, TbCl3, L - tyrosin 43 Bảng 2.7 Ảnh hưởng hàm lượng phức Tb(Tyr)3.3H2O đến nảy mầm hạt lạc .44 Bảng 2.8 Ảnh hưởng nồng độ phức chất Tb(Tyr)3.3H2O đến phát triển mầm hạt lạc 45 Bảng 2.9 Ảnh hưởng hàm lượng phức Tb(Tyr)3.3H2O, Tb3+, Tyr đến nảy mầm hạt lạc 47 Bảng 2.10 Kết so sánh ảnh hưởng phức Tb(Tyr)3.3H2O, Tb3+, Tyr đến phát triển mầm hạt lạc 47 Bảng 2.11 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang vào khối lượng protein 49 Bảng 2.12 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang vào nồng độ tyrosin 50 Bảng 2.13 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang vào khối lượng tinh bột 51 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn v Bảng 2.14 Ảnh hưởng phức chất Tb(Tyr)3 3H2O đến hàm lượng protein mầm hạt lạc 52 Bảng 2.15 Ảnh hưởng phức chất Tb(Tyr)3 3H2O đến hàm lượng proteaza mầm hạt lạc .54 Bảng 2.16 Ảnh hưởng phức chất Tb(Tyr)3 3H2O đến hàm lượng αamilaza mầm hạt lạc 55 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn vi DANH MỤC HÌNH ẢNH Trang Hình1.1 Hình thái vi khuẩn Salmonella 24 Hình 1.2 Hình thái vi khuẩn Escherichia coli 24 Hình 2.1 Giản đồ phân tích nhiệt phức chất Gd(Tyr)3.3H2O 32 Hình 2.2 Giản đồ phân tích nhiệt phức chất Tb(Tyr)3.3H2O 33 Hình 2.3 Giản đồ phân tích nhiệt phức chất Dy(Tyr)3.3H2O 33 Hình 2.4 Phổ hấp thụ hồng ngoại L - tyrosin 37 Hình 2.5 Phổ hấp thụ hồng ngoại phức chất Gd(Tyr)3.3H2O 37 Hình 2.6 Phổ hấp thụ hồng ngoại phức chất Tb(Tyr)3.3H2O 38 Hình 2.7 Phổ hấp thụ hồng ngoại phức chất Dy(Tyr)3.3H2O 38 Hình 2.8 Kết thử nghiệm kháng khuẩn với khuẩn Salmonella phức Tb(Tyr)3.3H2O 41 Hình 2.9 Kết thử nghiệm kháng khuẩn với khuẩn E.coli phức Tb(Tyr)3.3H2O 41 Hình 2.10 Kết thử nghiệm kháng khuẩn với khuẩn Salmonella Tb(Tyr)3.3H2O, TbCl3, L - tyrosin 43 Hình 2.11 Kết thử nghiệm kháng khuẩn với khuẩn E.coli Tb(Tyr)3.3H2O, TbCl3, L - tyrosin 43 Hình 2.12 Ảnh hưởng nồng độ phức chất Tb(Tyr)3.3H2O đến phát triển mầm hạt lạc 46 Hình 2.13 Ảnh hưởng phức Tb(Tyr)3.3H2O, Tb3+, Tyr đến phát triển mầm hạt lạc 48 Hình 2.14 Đường chuẩn xác định protein 49 Hình 2.15 Đường chuẩn xác định proteaza 50 Hình 2.16 Đường chuẩn xác định hoạt độ -amilaza 51 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 44 Chọn mẫu hạt lạc, mẫu 50 hạt kích thước tương đối đồng (khối lượng 30,15±0,01 g ) Ngâm hạt dung dịch phức chất có nồng độ 30, 60, 120, 180, 240 ppm (mẫu so sánh ngâm nước cất) Thể tích dung dịch phức chất nước cất đem ngâm 100 ml, sau thời gian 24 vớt ủ hạt cốc cỡ 500 ml, lót đậy giấy lọc, để tủ ấm 300C Các dung dịch ngâm thu hồi để tưới lại lần sau Hàng ngày tưới hạt dung dịch phức nước cất theo thứ tự mẫu, ngày tưới lần, lần 30 phút Sau mầm hạt phát triển số ngày tuổi định, tiến hành xác định tỷ lệ nảy mầm hạt, đo độ dài thân rễ mẫu thí nghiệm Các thí nghiệm lặp lại lần 2.6.2.2 Ảnh hưởng phức chất đến nảy mầm hạt lạc Sau ủ hạt ngày, đếm số hạt nảy mầm từ tính tỷ lệ nảy mầm hạt Kết trình bày bảng 2.7 Bảng 2.7 Ảnh hƣởng hàm lƣợng phức Tb(Tyr)3.3H2O đến nảy mầm hạt lạc Mẫu Nồng độ phức chất (ppm) 0(H2O) Tỷ lệ nảy mầm (%) 88,00 30 60 120 180 240 83,67 80,00 74,03 n 68,02 62,13 Nhận xét: Phức chất có tác dụng ức chế nảy mầm hạt lạc Sự ức chế làm giảm tỷ lệ nảy mầm hạt lạc Sự ức chế rõ rệt nồng độ 120 ppm ức chế tăng theo nồng độ 2.6.2.3 Ảnh hưởng phức chất đến phát triển mầm hạt lạc Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 45 Khi mầm hạt phát triển ngày tuổi, tiến hành đo chiều cao mầm độ dài rễ Kết trình bày bảng 2.8, hình 2.12 Bảng 2.8 Ảnh hƣởng nồng độ phức chất Tb(Tyr)3.3H2O đến phát triển mầm hạt lạc Mẫu Nồng độ phức chất 0(H2O) 30 60 120 180 240 (ppm) Thời gian (ngày) d T (cm) 3,65 3,34 3,10 2,87 2,52 2,02 d R (cm) 3,45 3,23 2,77 2,50 2,21 1,74 AT (%) 100 91,50 84,93 78,63 69,04 55,34 AR (%) 100 93,62 80,29 72,40 64,06 50,43 n n : độ lặp lại d T: độ dài trung bình thân mầm lạc d R : độ dài trung bình rễ mầm lạc AT % độ dài thân so với đối chứng AR % độ dài rễ so với đối chứng AT, AR = dX d SS 100 (%) d SS: Độ dài trung bình thân, rễ mầm lạc mẫu so sánh (đối chứng) d X: Độ dài trung bình thân, rễ mẫu xử lý Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 46 Hình 2.12 Ảnh hƣởng nồng độ phức chất Tb(Tyr)3.3H2O đến phát triển mầm hạt lạc Trong đó: Mẫu Nồng độ phức chất (ppm) 0(H2O) 30 60 120 180 240 Nhận xét: Từ kết bảng 2.8, hình 2.12 cho thấy phức chất có tác dụng ức chế phát triển mầm hạt lạc Sự ức chế làm giảm chiều cao mầm độ dài rễ, mầm phát triển mập hơn, nhiều rễ phụ Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30 ÷ 240 ppm, phức chất có tác dụng ức chế phát triển mầm hạt lạc Sự ức chế rõ rệt nồng độ 120 ppm tăng theo nồng độ 2.6.2.4 So sánh ảnh hưởng phức chất, ion kim loại phối tử đến nảy mầm hạt lạc Để so sánh ảnh hưởng phức Tb(Tyr)3.3H2O, ion kim loại phối tử đến nảy mầm hạt lạc, chúng tơi tiến hành thí nghiệm với mẫu : Mẫu 1: H2O Mẫu 2: Dung dịch phức Tb(Tyr)3.3H2O nồng độ 120 ppm Mẫu 3: Dung dịch muối Tb3+ nồng độ 120 ppm Mẫu 4: Dung dịch tyrosin nồng độ 360 ppm Thời gian ủ hạt ngày Kết trình bày bảng 2.9 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 47 Bảng 2.9 Ảnh hƣởng hàm lƣợng phức Tb(Tyr)3.3H2O, Tb3+, Tyr đến nảy mầm hạt lạc STT Mẫu H2O Tb(Tyr)3.3H2O Tb3+ Tyr Nồng độ (ppm) 120 120 360 74,03 81,25 69,92 Tỷ lệ nảy mầm(%) 88,00 n Nhận xét: Cũng phức chất, phối tử ion trung tâm có tác dụng ức chế nảy mầm hạt lạc Phức chất có tác dụng ức chế phối tử tốt ion trung tâm 2.6.2.5 So sánh ảnh hưởng phức chất, ion kim loại phối tử đến phát triển mầm hạt lạc Khi mầm hạt phát triển ngày tuổi (ở thí nghiệm 3.3.1.4), chúng tơi tiến hành đo chiều cao mầm độ dài rễ Kết trình bày bảng 2.10, hình 2.13 Bảng 2.10 Kết so sánh ảnh hƣởng phức Tb(Tyr)3.3H2O, Tb3+, Tyr đến phát triển mầm hạt lạc Mẫu Dung dịch H2O Tb(Tyr)3.3H2O Tb3+ Tyr Nồng độ (ppm) 120 120 360 Thờigian (ngày) d T (cm) 3,65 2,94 3,17 2,25 d R (cm) 3,45 2,66 2,93 1,78 AT (%) 100 80,55 86,84 61,64 AR (%) 100 77,10 84,93 51,59 n Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 48 Hình 2.13 Ảnh hƣởng phức Tb(Tyr)3.3H2O, Tb3+, Tyr đến phát triển mầm hạt lạc Trong đó: Mẫu Dung dịch H2O Tb(Tyr)3.3H2O Tb3+ Tyr Nồng độ (ppm) 120 120 360 Nhận xét: Từ kết bảng 2.10, hình 2.13 cho thấy phức chất, phối tử ion kim loại có tác dụng ức chế phát triển mầm hạt lạc Phức chất có tác dụng ức chế phối tử tốt ion kim loại 2.6.3 Ảnh hưởng phức chất đến số tiêu sinh hóa có mầm hạt lạc - Phương pháp thí nghiệm: Cân mẫu gam giá lạc nghiền cối chày sứ, thêm vào 50 ml dung dịch đệm photphat có pH = 10 Trộn đều, sau để tủ lạnh 10 oC lọc li tâm, lấy phần dịch Dịch đem xác định hàm lượng protein, làm tương tự thay dung dịch đệm photphat có pH = 6,5 để xác định hàm lượng proteaza dung dịch đệm photphat có pH = để xác định hàm lượng α- amilaza có mầm lạc - Để xác định hàm lượng protein theo phương pháp Lowry, hoạt độ proteaza theo phương pháp Anson cải tiến, tiến hành xây dựng đường chuẩn: Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 49 * Xây dựng đường chuẩn xác định protein: Dùng ống hút lấy 0,1 ÷ 0,5 ml dung dịch protein huyết bò (0,5 mg/ml) cho vào ống nghiệm đánh số từ đến Cho vào ống ml dung dịch D (gồm 48 ml dung dịch Na2CO3 2% NaOH 0,1N, ml dung dịch CuSO4 0,5% 1ml dung dịch NaKC4H4O6 1%), thêm nước cất đến thể tích ml Lắc đều, để yên 15 phút, bổ sung vào ống ml dung dịch E (thuốc thử Folin-Ciocalto pha loãng với nước cất tỉ lệ 1:1), lại lắc để yên 30 phút Mẫu so sánh protein: ml dung dịch D, ml nước ml dung dịch E Đo độ hấp thụ quang A dung dịch bước sóng 750 nm [3] Kết trình bày bảng 2.11, hình 2.14 Bảng 2.11 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang vào khối lƣợng protein Mẫu Khối lượng protein (huyết bò) (mg) A750 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,0601 0,0986 0,1331 0,1821 0,2153 y = 0.7878x + 0.0197 R2 = 0.9968 0.25 Mật độ quang 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 mg protein Hình 2.14 Đƣờng chuẩn xác định protein Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 50 * Xây dựng đường chuẩn xác định hoạt độ proteaza: Dùng ống hút lấy thể tích xác định dung dịch chuẩn tyrosin 1μmol/ml cho vào bình định mức cỡ 25 ml Dùng dung dịch HCl 0,2N pha loãng đến vạch để dung dịch tyrosin có nồng độ 0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,1 μmol/ml Lấy ml ống nghiệm cho vào ống nghiệm có đánh số thứ tự, thêm vào ống ml dung dịch Na2CO3 6% Lắc đều, thêm vào 1ml thuốc thử Folin-Ciocalteu pha loãng lần, để yên 30 phút nhiệt độ phịng Mẫu so sánh khơng có tyrosin: ml nước cất, ml dung dịch Na2CO3 6% ml thuốc thử Folin-Ciocalteu Đo độ hấp thụ quang dung dịch bước sóng 750 nm [3] Kết trình bày bảng 2.12, hình 2.15 Bảng 2.12 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang vào nồng độ tyrosin Mẫu Tyrosin (μmol/ml) 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 A750 0,0454 0,0903 0,1410 0,1772 0,2212 µmol tyrosin Hình 2.15 Đƣờng chuẩn xác định proteaza Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 51 * Xây dựng đường chuẩn xác định hoạt độ -amilaza: Dùng ống hút lấy 2, 4, 6, 8, 10ml dung dịch tinh bột 1% cho vào ống nghiệm đánh số thứ tự từ đến 5, thêm nước cất đến 10ml Lấy 0,1ml dung dịch tinh bột ống nghiệm cho vào ống nghiệm khác, thêm vào 0,1ml dung dịch NaCl 0,1%, 0,2ml dung dịch đệm pH=6, 0,1ml nước cất 0,5ml dung dịch axit sunfosalisilic 20% Lắc thêm vào 3ml dung dịch iot pha lỗng 150 lần Dung dịch so sánh có thành phần tương tự khơng có tinh bột Đo độ hấp thụ quang dung dịch bước sóng 560nm [3] Kết trình bày bảng 2.13, hình 2.16 Bảng 2.13 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang vào khối lƣợng tinh bột Mẫu Khối lượng tinh 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 0,08 0,19 0,28 0,37 0,48 bột (mg) A560 y = 0.49x - 0.014 R2 = 0.9983 0.6 mật độ quang 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.2 mg tinh bột Hình 2.16 Đƣờng chuẩn xác định hoạt độ -amilaza Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 52 2.6.3.1 Ảnh hưởng phức chất đến protein mầm hạt lạc Lấy mẫu 0,2 ml dịch chiết cho vào ống nghiệm có đánh số, thêm vào ống nghiệm ml dung dịch D, bổ sung thêm nước cất đến thể tích ml, lắc đều, để yên 15 phút Sau lại thêm vào ống ml dung dịch E, lắc tiếp tục để n 30 phút Mẫu so sánh khơng có dịch chiết: ml dung dịch D, ml nước ml dung dịch E Đo độ hấp thụ quang mẫu thí nghiệm bước sóng 750 nm Đối chiếu với đường chuẩn protein, tính số mg protein có mẫu Hàm lượng protein tính theo công thức : X= a HSPL 100 % m Trong đó: X: Hàm lượng protein (% khối lượng khô) a: Nồng độ thu đo máy (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng m: Khối lượng mẫu (mg) Kết phân tích hàm lượng protein hạt đậu tương tác động phức chất Tb(Tyr)3 3H2O (dựa theo cơng thức đường chuẩn hình 2.14) trình bày bảng số 2.14 Bảng 2.14 Ảnh hƣởng phức chất Tb(Tyr)3 3H2O đến hàm lƣợng protein mầm hạt lạc Nồng độ phức (ppm) Hàm lượng protein (%) % so với đối chứng 23,12 100 30 23,94 103,55 60 24,57 106,27 120 25,46 110,12 180 26,08 112,76 240 26,97 116,65 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 53 Qua bảng 2.14 thấy rằng: Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30 ppm đến 240 ppm, phức chất Tb(Tyr)3 3H2O có tác dụng làm tăng hàm lượng protein Hàm lượng protein tăng theo nồng độ 2.6.3.2 Ảnh hưởng phức chất đến hoạt độ proteaza mầm hạt lạc Cho vào ống nghiệm có đánh số thứ tự ml tyrosin, ml dịch chiết mẫu, lắc đều, để yên 300C 10 phút Thêm vào ống ml axit tricloaxetic 5%, lắc đều, tiếp tục giữ 300C 30 phút Mẫu kiểm tra làm tương tự cho dung dịch axit tricloaxetic vào trước Mẫu so sánh thay ml tyrosin nước cất Cho vào ống nghiệm khác ml dung dịch lọc mẫu thí nghiệm, mẫu kiểm tra mẫu so sánh, thêm vào ống ml dung dịch Na2CO3 6% ml thuốc thử Folin-Ciocalto pha loãng lần, lắc giữ 30 phút nhiệt độ phòng Đo độ hấp thụ quang mẫu thí nghiệm mẫu kiểm tra bước sóng 750 nm Lấy hiệu số giá trị độ hấp thụ quang mẫu thí nghiệm mẫu kiểm tra Dựa vào đồ thị chuẩn proteaza tính lượng μmol tyrosin tương ứng Từ tính đơn vị hoạt độ proteaza Hoạt độ proteaza tính theo cơng thức: ĐVHĐ/mg = (n k ) HSPL T m Trong đó: n: Số đo máy mẫu thí nghiệm (mg/ml) k: Số đo máy mẫu kiểm tra (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng T: Thời gian ủ enzim với chất m: Khối lượng mẫu (mg) Kết phân tích hàm lượng proteaza hạt đậu tương tác động phức chất Tb(Tyr)3 3H2O (dựa theo công thức đường chuẩn hình 2.15) trình bày bảng số 2.15 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 54 Bảng 2.15 Ảnh hƣởng phức chất Tb(Tyr)3 3H2O đến hàm lƣợng proteaza mầm hạt lạc Nồng độ phức chất Đơn vị hoạt độ (ppm) (mg/ml) 0,465 100 30 0,478 102,80 60 0,496 106,67 120 0,510 109,68 180 0,523 112,47 240 0,551 118,49 % so với đối chứng Qua bảng 2.15 thấy rằng: Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30 ppm đến 240 ppm, phức chất Tb(Tyr)3 3H2O có tác dụng làm tăng hàm lượng proteaza Hàm lượng proteaza tăng theo nồng độ 2.6.3.3 Ảnh hưởng phức chất đến hoạt độ α-amilaza mầm hạt lạc: - Cho vào ống nghiệm có đánh số thứ tự 1ml dung dịch tinh bột 1%, 1ml dung dịch NaCl 0,1%, 2ml dung dịch đệm phốt phát 0,05M ( pH= 10), lắc giữ 30oC 15 phút , thêm vào hỗn hợp 1ml dung dịch chiết mẫu, lắc tiếp tục giữ 30oC 30 phút sau cho 5ml dung dịch axit sunfosalisilic 20% - Mẫu so sánh : gồm 1ml dung dịch chiết mẫu thí nghiệm, 9ml dung dịch iốt pha loãng 150 lần Đo độ hấp thụ quang A dung dịch bước sóng 560 nm Lấy hiệu số giá trị độ hấp thụ quang mẫu kiểm tra mẫu thí nghiệm Dựa vào đồ thị chuẩn hoạt độ -amilaza tính khối lượng tinh bột tương ứng Từ tính đơn vị hoạt độ α-amilaza Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 55 Hoạt độ α-amilaza tính theo cơng thức: ĐVHĐ/mg = (k n) HSPL m Trong đó: n: Số đo máy mẫu thí nghiệm (mg/ml) k: Số đo máy mẫu kiểm tra (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng m: Khối lượng mẫu (mg) Kết phân tích hàm lượng α-amilaza hạt đậu tương tác động phức chất Tb(Tyr)3 3H2O (dựa theo cơng thức) trình bày bảng số 2.16 Bảng 2.16 Ảnh hƣởng phức chất Tb(Tyr)3 3H2O đến hàm lƣợng α-amilaza mầm hạt lạc Nồng độ phức chất Đơn vị hoạt độ (ppm) (mg/ml) 0,368 100 30 0,376 102,17 60 0,389 105,70 120 0,407 110,59 180 0,420 114,13 240 0,431 117,12 % so với đối chứng Qua bảng 2.16 thấy rằng: Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30 ppm đến 240 ppm, phức chất Tb(Tyr)3 3H2O có tác dụng làm tăng hàm lượng αamilaza Hàm lượng α-amilaza tăng theo nồng độ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 56 KẾT LUẬN Đã tổng hợp phức rắn Ln3+ với L - tyrosin (Ln3+: Gd3+, Tb3+, Dy3+) Bằng phương pháp: phân tích nguyên tố, phân tích nhiệt, đo độ dẫn điện quang phổ hồng ngoại kết luận: Các phức rắn có thành phần Ln(Tyr)3.nH2O (n: 3) Mỗi phân tử L - tyrosin chiếm vị trí phối trí phức chất, liên kết với ion Ln3+ qua nguyên tử nitơ nhóm amin -NH2 qua nguyên tử oxi nhóm cacboxyl -COO- Phức chất đimetyl sunphoxit chất khơng điện li Đã thử hoạt tính kháng khuẩn phức chất Tb(Tyr) 3.3H2O, muối TbCl3, phối tử L - tyrosin loại vi khuẩn Salmonella E.Coli Kết cho thấy phối tử hoạt tính kháng khuẩn, phức chất có hoạt tính kháng khuẩn thấp muối clorua tương ứng Bước đầu thăm dò ảnh hưởng phức Tb(Tyr)3.3H2O đến nảy mầm, phát triển mầm hàm lượng protein, proteaza , α- amilaza mầm hạt lạc đến kết luận: + Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30÷240 ppm phức chất Tb(Tyr)3.3H2O có tác dụng ức chế nảy mầm phát triển mầm hạt lạc, ức chế tăng theo nồng độ Phức chất có tác dụng ức chế phối tử tốt ion trung tâm + Phức chất làm tăng hàm lượng protein, proteaza α- amilaza có mầm hạt lạc Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Đàm Anh (2010), Đất gì, http:// lao động.com.vn/ tin tức/ Đathiem-la-gi/ 19140, ngày 03/11/2010 Phạm Thị Trân Châu, Trần thi Áng, (1999), Hoá sinh học NXB Giáo dục, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng , Phạm Thị Trân Châu, Nguyễn Thanh Hiền, Lê Đình Lương, Đồn Xn Mượu, Phạm Văn Tý (1978), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, tập III, NXB KH KT, Hà Nội Trần Ích (1978), Hóa sinh học, NXB Giáo dục, Hà Nội, Tr 12-20 Lê Chí Kiên (2007), Hóa học phức chất , NXB Giáo dục, Hà Nội Koroxotelev P P (1974), Chuẩn bị dung dịch cho phân tích hóa học, NXB KH & KT, Hà Nội Hồng Nhâm (2001), Hóa học vơ tập 3, Nxb Giáo dục Hồ Viết Quí (2009), Các phương pháp phân tích cơng cụ hóa học đại, Nxb Đại học Sư pham Lê Hữu Thiềng (2002), Nghiên cứu tạo phức số nguyên tố đất với axit L - phenylalanin thăm dò hoạt tính sinh học chúng, Luận án tiến sĩ Hóa học, Hà Nội 10 Nguyễn Trọng Uyển (1979), Giáo trình chuyên đề nguyên tố hiếm, Trường Đại học Tổng hợp Hà Nội, Hà Nội Tài liệu tiếng Anh 11 http://dictionary.bachkhoatoanthu.gov.vn 12 Greenwood N N, Earnshaw A (1984), Chemistry of the elements, Pergamon Press, Oxford-New York-Toronto-Sydney-Paris-Frankfurt Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 58 13 Gschnerdner KA.et al (1989), Handbook on the physics and chemistry of rare earths, Vol 13, North-Holland, tr 213-230 14 Haoxu, Liang Chen (2003), ''Study on the complex site of L - tyrosin with rare - earth element Eu3+'', Spectrochim Acta Part 59, 657 - 662 15 Iaximitxki KB (1996), Complex of rare earth element, A N Uocain, Kiev 16 Indrasenan P, Lakshmy M (1997), ―Synthesis and infraed spectral studies of some lanthanide complexes with leucine‖, Indian Journal of Chemistry, Vol 36A, pp 998-1000 17 Moamen S.Refat, Sabry A.El-Korashy, Ahmed S.Ahmed (2008), ''Preparation, structural characterization and biological evaluation of L - tyrosinate metal ion complex'', Journal of Molecular Structure 881, 28-45 18 http:// pure bulk.com/L-tyrosine 19 R Celia Carubelli, Ana M G Massabni and Sergio R de A.l eite (1997), ''Study of the binding of Eu3+ and Tb3+ to L - phenylalanin and L - triptophan'', J Brazil Chem Soc, Vol8, No6, Brazil, pp 597 - 602 20 Xie Higuand, Chang, Qing zhong (1985), ― Study on the effect of rare earth elements on yield of wheat‖, New front rare earth, Proc, Int, Conf, Rare Earth Dev, Appl 2, England Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn