MỤC LỤC Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http //www lrc tnu edu vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM MA THỊ BÍCH VÂN TỔNG HỢP, NGHIÊN CỨU PHỨC CHẤT CỦA HONMI VÀ ERBI VỚI L[.]
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM MA THỊ BÍCH VÂN TỔNG HỢP, NGHIÊN CỨU PHỨC CHẤT CỦA HONMI VÀ ERBI VỚI L- METHIONIN, L- HISTIDIN VÀ BƢỚC ĐẦU THĂM DỊ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HÓA HỌC THÁI NGUYÊN - 2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM MA THỊ BÍCH VÂN TỔNG HỢP, NGHIÊN CỨU PHỨC CHẤT CỦA HONMI VÀ ERBI VỚI L- METHIONIN, L- HISTIDIN VÀ BƢỚC ĐẦU THĂM DỊ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CHÚNG Chun ngành: HĨA VƠ CƠ Mã số: 60.44.25 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HÓA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ HỮU THIỀNG THÁI NGUYÊN - 2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả Ma Thị Bích Vân Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Lê Hữu Thiềng người thầy tận tình chu đáo giúp đỡ em suốt trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, Khoa sau Đại học, Khoa Hóa học Trường ĐHSP Thái Nguyên, Viện Hóa học - Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, phịng Hóa lý trường Đại Học Sư Phạm I Hà Nội, phòng Vi sinh trường Đại Học Y - Dược Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập nghiên cứu đề tài Em xin chân thành cảm ơn Thầy, Cô giáo cán phịng thí nghiệm Khoa Hóa học, Khoa Sinh - KTNN Trường ĐHSP Thái Nguyên bạn bè đồng nghiệp giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành luận văn Cùng với biết ơn sâu sắc xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, tổ tự nhiên Trường THPT Cao Bình - Thị xã Cao Bằng giúp đỡ động viên tơi q trình học tập nghiên cứu Thái Nguyên, tháng năm 2012 Tác giả Ma Thị Bích Vân Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt .v Danh mục bảng vi Danh mục hình viii MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu nguyên tố đất (NTĐH) 1.1.1 Đặc điểm cấu tạo tính chất chung NTĐH 1.1.2 Giới thiệu số hợp chất NTĐH .6 1.1.3 Giới thiệu nguyên tố honmi ecbi 1.1.4 Trạng thái tự nhiên tầm quan trọng NTĐH 10 1.2 Giới thiệu aminoaxit, L-methionin L-histidin 12 1.2.1 Giới thiệu aminoaxit 12 1.2.2 Giới thiệu L - methionin L- histidin .13 1.3 Khả tạo phức NTĐH aminoaxit .16 1.3.1 Khả tạo phức NTĐH 16 1.3.2 Khả tạo phức aminoaxit với NTĐH 18 1.4 Hoạt tính sinh học phức chất NTĐH với aminoaxit 19 1.5 Một số phương pháp nghiên cứu phức chất 20 1.5.1 Phương pháp phân tích nhiệt 20 1.5.2 Phương pháp phổ hấp thụ hồng ngoại .21 1.5.3 Phương pháp đo độ dẫn điện 22 1.6 Đối tượng thăm dị hoạt tính sinh học phức chất .24 1.6.1 Giới thiệu vi khuẩn Salmonella vi khuẩn Escherichia coli 24 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iv 1.6.2 Giới thiệu đậu tương 25 1.6.3 Giới thiệu protein, proteaza α- amilaza 26 Chương 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 28 2.1 Hóa chất thiết bị 28 2.1.1 Hóa chất 28 2.1.2 Thiết bị .29 2.2 Tổng hợp phức chất rắn 30 2.2.1 Phức chất Ln3+ với methionin 30 2.2.2 Phức chất Ln3+ với histidin 30 2.2.3 Xác định thành phần phức chất 30 2.3 Nghiên cứu phức chất phương pháp phân tích nhiệt .32 2.4 Nghiên cứu phức chất phương pháp phổ hấp thụ hồng ngoại 36 2.5 Nghiên cứu phức chất phương pháp đo độ dẫn điện .41 2.6 Bước đầu thăm dị hoạt tính sinh học số phức chất NTĐH với L - methionin L-Histidin .43 2.6.1 Hoạt tính kháng khuẩn phức Ho(Met)3Cl3.4H2O phức Ho(His)3Cl3.5H2O 43 2.6.2 Thăm dò ảnh hưởng hàm lượng phức Ho(His)3Cl3.5H2O Ho(Met)3Cl3.4H2O đến nảy mầm phát triển mầm hạt đậu tương 47 2.6.3 Thăm dò ảnh hưởng phức chất đến số tiêu sinh hóa có mầm hạt đậu tương 56 KẾT LUẬN .62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 63 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ NTĐH Nguyên tố đất Ln Lantanit Ln3+ Ion Lantanit His Histidin Met Methionin IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry DTPA Đietylen triamin pentaaxetic IR Infared (hồng ngoại) DTA Differential thermal analysis 10 TGA Thermogravimetry or Thermogravimetry analysis 11 NTA Nitrilotriaxetic 12 IMDA Iminođiaxetic 13 dixet -đixetonat 14 leu Lơxin 15 ADN Acid Deoxyribo Nucleic Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các phân nhóm dãy nguyên tố đất .3 Bảng 2.1 Kết phân tích thành phần (%) nguyên tố (Ln, C, N) phức chất 31 Bảng 2.2 Kết giản đồ phân tích nhiệt phức chất 34 Bảng 2.3 Các tần số hấp thụ đặc trưng (cm-1) L - methionin, L-histidin phức chất 39 Bảng 2.4 Độ dẫn điện mol phân tử (μ) L - methionin, L - histidin, ion Ho3+, Er3+và phức chất 25 ± 0,50C 42 Bảng 2.5 Kết thử nghiệm tác dụng kháng khuẩn phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O phức Ho(His)3Cl3.5H2O đến vi khuẩn Salmonella 44 Bảng 2.6 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O phức Ho(His)3Cl3.5H2O đến vi khuẩn E coli .44 Bảng 2.7 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn Ho(Met)3Cl3.4H2O, HoCl3, L - methionin với khuẩn Salmonella khuẩn E coli 45 Bảng 2.8 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn Ho(His)3Cl3.5H2O, HoCl3, L - histidin với khuẩn Salmonella khuẩn E coli .46 Bảng 2.9 Ảnh hưởng hàm lượng phức Ho(His)3Cl3.5H2O Ho(Met)3Cl3.4H2O đến nảy mầm hạt đậu tương 47 Bảng 2.10 Ảnh hưởng nồng độ phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O đến phát triển mầm hạt đậu tương 48 Bảng 2.11 Ảnh hưởng nồng độ phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O đến phát triển mầm hạt đậu tương 49 Bảng 2.12 Ảnh hưởng hàm lượng phức Ho(His)3Cl3.5H2O , HoCl3 L-histidin đến nảy mầm hạt đậu tương .50 Bảng 2.13 Ảnh hưởng hàm lượng phức Ho(Met)3Cl3.4H2O , HoCl3 L-methionin đến nảy mầm hạt đậu tương 51 Bảng 2.14 Kết so sánh ảnh hưởng phức Ho(His)3Cl3.5H2O , HoCl3 L-histidin đến phát triển mầm hạt đậu tương 51 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn vii Bảng 2.15 Kết so sánh ảnh hưởng phức Ho(Met)3Cl3.4H2O , HoCl3 L-methionin đến phát triển mầm hạt đậu tương 52 Bảng 2.16 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang vào khối lượng protein 54 Bảng 2.17 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang vào nồng độ tyrosin .55 Bảng 2.18 Bảng phụ thuộc độ hấp thụ quang vào khối lượng tinh bột 56 Bảng 2.19 Ảnh hưởng phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O đến hàm lượng protein hạt đậu tương 57 Bảng 2.20 Ảnh hưởng phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O đến hàm lượng protein hạt đậu tương .58 Bảng 2.21 Ảnh hưởng phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O đến hàm lượng proteaza hạt đậu tương .59 Bảng 2.22 Ảnh hưởng phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O đến hàm lượng proteaza hạt đậu tương .59 Bảng 2.23 Ảnh hưởng phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O đến hàm lượng α-amilaza mầm hạt đậu tương 61 Bảng 2.24 Ảnh hưởng phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O đến hàm lượng α-amilaza mầm hạt đậu tương 61 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Giản đồ phân tích nhiệt phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O 32 Hình 2.2 Giản đồ phân tích nhiệt phức chất Er(Met)3Cl3.4H2O .32 Hình 2.3 Giản đồ phân tích nhiệt phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O .33 Hình 2.4 Giản đồ phân tích nhiệt phức chất Er(His)3Cl3.6H2O 33 Hình 2.5 Phổ hấp thụ hồng ngoại L - methionin .36 Hình 2.6 Phổ hấp thụ hồng ngoại phức chất Ho(Met)3.Cl3.4H2O .37 Hình 2.7 Phổ hấp thụ hồng ngoại phức chất Er(Met)3Cl3.4H2O .37 Hình 2.8 Phổ hấp thụ hồng ngoại L - histidin 38 Hình 2.9 Phổ hấp thụ hồng ngoại phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O .38 Hình 2.10 Phổ hấp thụ hồng ngoại phức chất Er(His)3Cl3.6H2O 39 Hình 2.11 Tác dụng kháng khuẩn phức Ho(Met)3Cl3.4H2O đến vi khuẩn Salmonella .43 Hình 2.12 Tác dụng kháng khuẩn phức Ho(His)3Cl3.5H2O đến vi khuẩn Salmonella .43 Hình 2.13 Tác dụng kháng khuẩn phức Ho(Met)3Cl3.4H2O đến vi khuẩn E Coli 44 Hình 2.14 Tác dụng kháng khuẩn phức Ho(His)3Cl3.5H2O đến vi khuẩn E Coli 44 Hình 2.15 Tác dụng kháng khuẩn Ho(Met)3Cl3.4H2O, HoCl3, L - methionin với khuẩn Salmonella 45 Hình 2.16 Tác dụng kháng khuẩn Ho(Met)3Cl3.4H2O, HoCl3, L - methionin với khuẩn E coli 45 Hình 2.17 Tác dụng kháng khuẩn Ho(His)3Cl3.5H2O , HoCl3, L-histidin với khuẩn E coli 46 Hình 2.18 Tác dụng kháng khuẩn Ho(His)3Cl3.5H2O , HoCl3, L-histidin với khuẩn Salmonella 46 Hình 2.19 Ảnh hưởng nồng độ phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O đến phát triển mầm hạt đậu tương 48 Hình 2.20 Ảnh hưởng nồng độ phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O đến phát triển mầm hạt đậu tương 49 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 50 Nhận xét: Từ kết bảng 2.10, 2.11, hình 2.19, 2.20 cho thấy phức chất có tác dụng ức chế phát triển mầm hạt đậu tương Sự ức chế làm giảm chiều cao mầm độ dài rễ Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30 ÷ 240 ppm, phức chất có tác dụng ức chế phát triển mầm hạt đậu tương Sự ức chế rõ rệt nồng độ 60 ppm tăng theo nồng độ Phức Ho(His) 3Cl3.5H2O ức chế tới phát triển mầm hạt đậu tương tốt phức Ho(Met)3Cl3.4H2O 2.6.2.4 So sánh ảnh hưởng phức chất, ion kim loại phối tử đến nảy mầm hạt đậu tương ● So sánh ảnh hưởng phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O , HoCl3 L-histidin đến nảy mầm hạt đậu tương Để so sánh ảnh hưởng phức Ho(His)3Cl3.5H2O , HoCl3 L-histidin đến nảy mầm hạt đậu tương, tiến hành thí nghiệm với mẫu : Mẫu 1: H2O Mẫu 2: Dung dịch phức Ho(His)3Cl3.4H2O nồng độ 120 ppm Mẫu 3: Dung dịch muối HoCl3 nồng độ 120 ppm Mẫu 4: Dung dịch L-histidin nồng độ 360 ppm Thời gian ủ hạt ngày Kết trình bày bảng 2.12 Bảng 2.12 Ảnh hƣởng hàm lƣợng phức Ho(His)3Cl3.5H2O , HoCl3 L-histidin đến nảy mầm hạt đậu tƣơng STT Mẫu Nồng độ (ppm) Tỷ lệ nảy mầm (%) H2 O 89 Ho(His)3Cl3.5H2O 120 74 HoCl3 120 82 L-histidin 360 71 ● So sánh ảnh hưởng phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O , HoCl3 L-methionin đến nảy mầm hạt đậu tương Để so sánh ảnh hưởng phức Ho(Met)3Cl3.4H2O , HoCl3 L-methionin đến nảy mầm hạt đậu tương, chúng tơi tiến hành thí nghiệm với mẫu : Mẫu 1: H2O Mẫu 2: Dung dịch phức Ho(Met)3Cl3.4H2O nồng độ 120 ppm Mẫu 3: Dung dịch muối HoCl3 nồng độ 120 ppm Mẫu 4: Dung dịch L-methionin nồng độ 360 ppm Thời gian ủ hạt ngày Kết trình bày bảng 2.13 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 51 Bảng 2.13 Ảnh hƣởng hàm lƣợng phức Ho(Met)3Cl3.4H2O , HoCl3 L-methionin đến nảy mầm hạt đậu tƣơng STT Mẫu H2 O Ho(Met)3Cl3.4H2O HoCl3 L-methionin Nồng độ (ppm) 120 120 360 Tỷ lệ nảy mầm(%) 90 75 82 73 Nhận xét: Từ kết bảng 2.13, 2.14 cho thấy phức chất, phối tử L-methionin muối HoCl3 có tác dụng ức chế nảy mầm hạt đậu tương Phức chất có tác dụng ức chế phối tử tốt muối HoCl3 phức Ho(His)3Cl3.5H2O ức chế tốt phức Ho(Met)3Cl3.4H2O phối tử L-histidin ức chế tốt phối tử L-methonin 2.6.2.5 So sánh ảnh hưởng phức chất, ion kim loại phối tử đến phát triển mầm hạt đậu tương ● So sánh ảnh hưởng phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O , HoCl3 L-histidin đến phát triển mầm hạt đậu tương Khi mầm hạt phát triển ngày tuổi tiến hành đo chiều cao mầm độ dài rễ Kết trình bày bảng 2.14 hình 2.21 Bảng 2.14 Kết so sánh ảnh hƣởng phức Ho(His)3Cl3.5H2O, HoCl3 L-histidin đến phát triển mầm hạt đậu tƣơng Mẫu Dung dịch H2 O Ho(His)3Cl3.4H2O HoCl3 L-histidin Nồng độ (ppm) 120 120 360 Thời gian (ngày) d T (cm) 4,30 3,45 3,62 3,20 d R (cm) 3,62 2,73 2,86 2,69 AT (%) 100 80.23 82,34 79,54 AR (%) 100 75.41 78,67 74,02 n Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 52 Hình 2.21 Ảnh hưởng nồng độ phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O, HoCl3 L-histidin đến phát triển mầm hạt đậu tương STT Mẫu H2 O Ho(His)3Cl3.5H2O HoCl3 L-histidin ● So sánh ảnh hưởng phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O , HoCl3 L - methionin đến phát triển mầm hạt đậu tương Kết trình bày bảng 2.15, hình 2.22 Bảng 2.15 Kết so sánh ảnh hƣởng phức Ho(Met)3Cl3.4H2O , HoCl3 L-methionin đến phát triển mầm hạt đậu tƣơng Mẫu Dung dịch H2 O Ho(Met)3Cl3.4H2O HoCl3 L-methionin Nồng độ (ppm) 120 120 360 Thời gian (ngày) d T (cm) 4,51 3,54 3,76 3,34 d R (cm) 3,78 2,93 3,25 2,70 AT (%) 100 84,02 85,42 80,24 AR (%) 100 77.56 79,58 75,68 n Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 53 Hình 2.22 Ảnh hƣởng nồng độ phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O, HoCl3 L-methionin đến phát triển mầm hạt đậu tƣơng Mẫu Dung dịch H2 O Ho(Met)3Cl3.4H2O HoCl3 L-methionin Nhận xét: Từ kết bảng 2.14, 2.15, hình 2.21, 2.22 cho thấy phức chất, phối tử ion kim loại có tác dụng ức chế phát triển mầm hạt đậu tương Phức chất có tác dụng ức chế phối tử tốt muối HoCl3, Phức Ho(His)3Cl3.5H2O ức chế tốt phức Ho(Met)3Cl3.4H2O phối tử L-histidin ức chế tốt phối tử L-methonin 2.6.2.6 Thăm dò ảnh hưởng phức chất đến số tiêu sinh hóa có mầm hạt đậu tương Để xác định số tiêu sinh hóa : protein theo phương pháp Lowry, hoạt độ proteaza theo phương pháp Anson cải tiến, hoạt độ α-amilaza theo phương pháp Wohlgemuth tiến hành xây dựng đường chuẩn: * Xây dựng đường chuẩn xác định protein: Dùng ống hút lấy 0,1 ÷ 0,5 ml dung dịch protein huyết bò (0,5 mg/ml) cho vào ống nghiệm đánh số từ đến Cho vào ống ml dung dịch D (gồm 48 ml dung dịch Na 2CO3 2% NaOH 0,1N, ml dung dịch CuSO4 0,5% 1ml dung dịch NaKC4H4O6 1%), thêm nước cất đến thể tích ml Lắc đều, để yên 15 phút, bổ sung vào ống ml dung dịch E (thuốc thử Folin-Ciocalto pha loãng với nước cất tỉ lệ 1:1), lại lắc để yên 30 phút Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 54 Mẫu so sánh khơng có protein: ml dung dịch D, ml nước ml dung dịch E Đo độ hấp thụ quang A dung dịch bước sóng 750 nm [5] Kết trình bày bảng 2.16, hình 2.23 Bảng 2.16 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang vào khối lƣợng protein Mẫu Khối lượng protein (huyết bò) (mg) A750 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,0601 0,0986 0,1331 0,1821 0,2153 y = 0.7878x + 0.0197 R2 = 0.9968 0.25 quang thụquang hấpđộ ĐộMật 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 mg protein Hình 2.23 Đƣờng chuẩn xác định protein * Xây dựng đường chuẩn xác định hoạt độ proteaza: Dùng ống hút lấy thể tích xác định dung dịch chuẩn tyrosin 1μmol/ml cho vào bình định mức cỡ 25 ml Dùng dung dịch HCl 0,2N pha loãng đến vạch để dung dịch tyrosin có nồng độ 0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,1 μmol/ml Lấy 1ml ống nghiệm cho vào ống nghiệm có đánh số thứ tự, thêm vào ống ml dung dịch Na2CO3 6% Lắc đều, thêm vào 1ml thuốc thử Folin-Ciocalteu pha loãng lần, để yên 30 phút nhiệt độ phòng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn 55 Mẫu so sánh khơng có tyrosin: ml nước cất, ml dung dịch Na2CO3 6% ml thuốc thử Folin-Ciocalteu Đo độ hấp thụ quang dung dịch bước sóng 750 nm [5] Kết trình bày bảng 2.17, hình 2.24 Bảng 2.17 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang vào nồng độ tyrosin Tyrosin (μmol/ml) 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 A750 0,0504 0,0917 0,1377 0,1866 0,2421 Độ hấp thụ quang Mẫu µmol tyrosin Hình 2.24 Đƣờng chuẩn xác định proteaza * Xây dựng đường chuẩn xác định hoạt độ α-amilaza Dùng ống hút lấy 2, 4, 6, 8, 10ml dung dịch tinh bột 1% cho vào ống nghiệm đánh số thứ tự từ đến 5, thêm nước cất đến 10ml Lấy 0,1ml dung dịch tinh bột ống nghiệm cho vào ống nghiệm khác, thêm vào 0,1ml dung dịch NaCl 0,1%, 0,2ml dung dịch đệm pH=6, 0,1ml nước cất 0,5ml dung dịch axit sunfosalisilic 20% Lắc thêm vào 3ml dung dịch iot pha lỗng 150 lần Dung dịch so sánh có thành phần tương tự khơng có tinh bột Đo độ hấp thụ quang dung dịch bước sóng 560nm [5] Kết trình bày bảng 2.18, hình 2.25 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 56 Bảng 2.18 Bảng phụ thuộc độ hấp thụ quang vào khối lƣợng tinh bột Mẫu Khối lượng tinh bột (mg) 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 A560 0,08 0,19 0,28 0,37 0,48 y = 0.49x - 0.014 R2 = 0.9983 0.6 mật độ quang 0.5 Độ hấp thụ quang 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.2 mg tinh bột Hình 2.25 Đƣờng chuẩn xác định α- amilaza 2.6.3 Thăm dò ảnh hưởng phức chất đến số tiêu sinh hóa có mầm hạt đậu tương 2.6.3.1 Ảnh hưởng phức chất đến hoạt độ protein mầm hạt đậu tương Phương pháp thí nghiệm: Cân mẫu gam đậu tương, nghiền cối chày sứ, thêm vào mẫu 10ml dung dịch đệm photphat có pH = 10, trộn đều, chiết 10 4oC lọc li tâm, lấy phần dịch Lấy mẫu 0,2 ml dịch chiết cho vào ống nghiệm có đánh số, thêm vào ống nghiệm ml dung dịch D, bổ sung thêm nước cất đến thể tích ml, lắc đều, để yên 15 phút Sau lại thêm vào ống ml dung dịch E, lắc tiếp tục để yên 30 phút Mẫu so sánh khơng có dịch chiết: ml dung dịch D, ml nước ml dung dịch E Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 57 Đo mật độ quang mẫu thí nghiệm bước sóng 750 nm Đối chiếu với đường chuẩn protein, tính số mg protein có mẫu Hàm lượng protein tính theo cơng thức: X= a HSPL 100 % m Trong đó: X: Hàm lượng protein (% khối lượng khô) a: Nồng độ thu đo máy (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng m: Khối lượng mẫu (mg) Kết phân tích hàm lượng protein hạt đậu tương tác động phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O (dựa theo công thức đường chuẩn hình 2.23) trình bày bảng số 2.19 Bảng 2.19 Ảnh hƣởng phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O đến hàm lƣợng protein hạt đậu tƣơng Nồng độ phức (ppm) Hàm lƣợng protein (%) % so với đối chứng 25,02 100 30 25,58 102,23 60 27,65 110,51 120 28,46 113,75 180 28,89 115,47 240 29,35 117,32 Kết phân tích hàm lượng protein hạt đậu tương tác động phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O (dựa theo công thức đường chuẩn hình 2.23) trình bày bảng số 2.20 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 58 Bảng 2.20 Ảnh hƣởng phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O đến hàm lƣợng protein hạt đậu tƣơng Nồng độ phức (ppm) Hàm lƣợng protein (%) % so với đối chứng 27,68 100 30 29,16 105,35 60 30,88 111,56 120 31,07 112,25 180 32,49 117,38 240 33,07 119,47 Nhận xét: Qua bảng 2.19, 2.20 thấy rằng: khoảng nồng độ khảo sát từ 30 ppm đến 240ppm, phức chất có tác dụng làm tăng hàm lượng protein Hàm lượng protein tăng theo nồng độ phức Ho(His)3Cl3.5H2O làm tăng hàm lượng protein nhiều phức Ho(Met)3Cl3.4H2O 3.6.3.2 Ảnh hưởng phức chất đến hoạt độ enzim proteaza mầm hạt đậu tương Phương pháp thí nghiệm: Cân mẫu gam đậu tương, nghiền cối chày sứ, thêm vào mẫu 10ml dung dịch đệm photphat xitrat có pH = 6,5, trộn đều, chiết 4oC lọc li tâm, lấy phần dịch Cho vào ống nghiệm có đánh số thứ tự ml tyrosin, ml dịch chiết mẫu, lắc đều, để yên 300C 10 phút Thêm vào ống ml axit tricloaxetic 5%, lắc đều, tiếp tục giữ 300C 30 phút Mẫu kiểm tra làm tương tự cho dung dịch axit tricloaxetic 5% vào trước Mẫu so sánh thay ml tyrosin nước cất Cho vào ống nghiệm khác ml dung dịch lọc mẫu thí nghiệm, mẫu kiểm tra mẫu so sánh, thêm vào ống ml dung dịch Na2CO3 6% ml thuốc thử FolinCiocalto pha loãng lần, lắc giữ 30 phút nhiệt độ phòng Đo độ hấp thụ quang mẫu thí nghiệm mẫu kiểm tra bước sóng 750 nm Lấy hiệu số giá trị độ hấp thụ quang mẫu kiểm tra mẫu thí nghiệm Dựa vào đồ thị chuẩn proteaza tính lượng μmol tyrosin tương ứng Từ tính đơn vị hoạt độ (ĐVHĐ) proteaza Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 59 Hoạt độ proteaza tính theo công thức: ĐVHĐ/mg = (n k ) HSPL T m Trong đó: n: Số đo máy mẫu thí nghiệm (mg/ml) k: Số đo máy mẫu kiểm tra (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng T: Thời gian ủ enzim với chất m: Khối lượng mẫu (mg) Kết phân tích hàm lượng proteaza hạt đậu tương tác động phức chất (dựa theo công thức đường chuẩn hình 2.24) trình bày bảng số 2.21, 2.22 Bảng 2.21 Ảnh hƣởng phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O đến hàm lƣợng proteaza hạt đậu tƣơng Nồng độ phức chất (ppm) Đơn vị hoạt độ (mg/ml) % so với đối chứng 0,489 100 30 60 120 0,501 0,512 0,526 102,45 104,70 107,57 180 240 0,558 0,582 114,11 119,02 Bảng 2.22 Ảnh hƣởng phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O đến hàm lƣợng proteaza hạt đậu tƣơng Nồng độ phức chất (ppm) Đơn vị hoạt độ (mg/ml) % so với đối chứng 0,492 100 30 0,511 103,86 60 0,520 105,69 120 0,546 110.98 180 0,563 114,43 240 0,588 119,51 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 60 Qua bảng 2.21 2.22 thấy rằng: Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30 ppm đến 240 ppm, phức chất có tác dụng làm tăng hàm lượng proteaza Hàm lượng proteaza tăng theo nồng độ phức Ho(His)3Cl3.5H2O làm tăng hàm lượng proteaza nhiều phức Ho(Met)3Cl3.4H2O 2.6.3.3 Ảnh hưởng phức chất đến hoạt độ enzim α- amilaza mầm hạt đậu tương Phương pháp thí nghiệm: Cân mẫu gam đậu tương, nghiền cối chày sứ, thêm vào mẫu 10ml dung dịch đệm photphat có pH = 6, trộn đều, chiết 40C lọc li tâm, lấy phần dịch Cho vào ống nghiệm có đánh số thứ tự 1ml dung dịch tinh bột 1%, 1ml dung dịch NaCl 0,1%, 2ml dung dịch đệm phốt phát 0,05M (pH= 10), lắc giữ 30oC 15 phút , thêm vào hỗn hợp 1ml dung dịch chiết mẫu, lắc tiếp tục giữ 30oC 30 phút sau cho 5ml dung dịch axit sunfusalisilic 20% - Mẫu so sánh : gồm 1ml dung dịch chiết mẫu thí nghiệm, 9ml dung dịch iốt pha loãng 150 lần Đo độ hấp thụ quang A dung dịch bước sóng 560 nm Từ tính đơn vị hoạt độ (ĐVHĐ) α-amilaza Hoạt độ α-amilaza tính theo cơng thức: ĐVHĐ/mg = (k n) HSPL m Trong đó: n: Số đo máy mẫu thí nghiệm (mg/ml) k: Số đo máy mẫu kiểm tra (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng m: Khối lượng mẫu (mg) Kết phân tích hàm lượng α-amilaza hạt đậu tương tác động phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O trình bày bảng số 2.23 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 61 Bảng 2.23 Ảnh hƣởng phức chất Ho(Met)3Cl3.4H2O đến hàm lƣợng α-amilaza mầm hạt đậu tƣơng Nồng độ phức chất (ppm) Đơn vị hoạt độ (mg/ml) % so với đối chứng 0,382 100 30 0,401 104,97 60 0,428 112,04 120 0,445 116,49 180 0,450 117,80 240 0,461 120,68 Kết phân tích hàm lượng α-amilaza hạt đậu tương tác động phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O trình bày bảng số 2.24 Bảng 2.24 Ảnh hƣởng phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O đến hàm lƣợng α-amilaza mầm hạt đậu tƣơng Nồng độ phức chất (ppm) Đơn vị hoạt độ (mg/ml) % so với đối chứng 0,411 100 30 0,426 103,65 60 0,458 111,44 120 0,475 115,57 180 0,484 117,76 240 0,493 119,95 Qua bảng 2.23, 2.24 thấy rằng: Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30 ppm đến 240 ppm, phức chất có tác dụng làm tăng hàm lượng α-amilaza Hàm lượng α-amilaza tăng theo nồng độ Và phức Ho(His) 3Cl3.5H2O làm tăng hàm lượng α-amilaza nhiều phức Ho(Met)3Cl3.4H2O Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 62 KẾT LUẬN Đã tổng hợp phức rắn Ln3+ với L - histidin L- methionin (Ln3+: Ho3+, Er3+) Bằng phương pháp: phân tích nguyên tố, phân tích nhiệt, đo độ dẫn điện quang phổ hồng ngoại kết luận: Các phức rắn có thành phần Ho(Met)3Cl3.4H2O, Er(Met)3Cl3.4H2O Ho(His)3Cl3.5H2O Er(His)3Cl3.6H2O Mỗi phân tử L - histidin L- methionin chiếm vị trí phối trí phức chất, liên kết với ion Ln3+ qua nguyên tử nitơ nhóm -NH2 qua nguyên tử oxi nhóm cacboxyl -COO- Phức chất nước chất điện li Đã thử hoạt tính kháng khuẩn phức chất Ho(His) 3Cl3.5H2O, Ho(Met)3Cl3.4H2O, muối HoCl3, phối tử L - histidin L- methionin hai loại vi khuẩn Salmonella E Coli Kết cho thấy: ● Trong khoảng nồng độ phức từ 1000÷10000 μ g/ml phức có hoạt tính kháng khuẩn với hai loại khuẩn kiểm tra Salmonella E coli, hoạt tính kháng khuẩn tăng theo nồng độ phức phức Ho(His)3Cl3.5H2O có hoạt tính kháng khuẩn tốt phức Ho(Met)3Cl3.4H2O ● Các phối tử hoạt tính kháng khuẩn, phức chất có hoạt tính kháng khuẩn thấp muối clorua tương ứng Đã xác định phức chất Ho(His)3Cl3.5H2O Ho(Met)3Cl3.4H2O có tác dụng ức chế phát triển mầm hạt đậu tương làm tăng hàm lượng protein, proteaza α-amilaza Trong khoảng nồng độ khảo sát 30 ÷ 240 ppm, phức chất có tác dụng ức chế rõ rệt nồng độ 60 ppm với mầm đậu tương, phức chất có tác dụng muối clorua tương ứng tốt so với phối tử Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiếng việt Đàm Anh (2010) Đất gì, http:// lao dong.com.vn/tin tuc/Dat-hiem-lagi/19140, ngày 03/11/2010 Nguyễn Trọng Biểu, Từ Văn Mặc (1978), Thuốc thử hữu cơ, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Phạm Thị Trân Châu, Trần Thị Áng (1992), Hóa sinh học, NXB Giáo dục Ngơ Thế Dân, Trần Đình Long, Trần Văn Lài, Đỗ Thị Dung, Phạm Thị Đào (1999), đậu tương, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng (2001), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, tập III, NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, tr 107 - 235 Vũ Thị Anh Đào (2009), Nghiên cứu đa dạng di truyền số giống đậu tương (Glycine Max (L.) merrill) địa phương, luận văn thạc sỹ sinh học, Đại học sư phạm Thái Nguyên Trần văn Điền (2007), Giáo trình đậu tương, NXB Nơng nghiệp Hà Nội Nguyễn Được (2011), Đất - nguyên liệu kỷ, http:// www.tapchicongnghiep.vn, ngày 25/04/2011 Nguyễn Hoàng Hà, Nguyễn Thị Tuyết Trinh, Ca Thị Thuý, Nguyễn Thành Trung (2005) “Góp phần nghiên cứu tạo phức methionin với nguyên tố vi lượng đồng (Cu)”, Y Học TP Hồ Chí Minh* Tập 9* Phụ san số 1, tr 1-5 10 Trần Ích (1978), Hóa sinh học, NXB Giáo dục, Hà Nội, Tr 12-20 11 Nguyên Khê (2008), Phân bón vi lượng đất hiếm, http:// www.baomoi.com, ngày 22/12/2008 12 Lê Chí Kiên (2007), Hóa học phức chất, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội 13 Hoàng Nhâm (2001), Hóa học vơ tập 3, Nxb Giáo dục 14 R.A.Lidin, V.A.Molosco, L.L.Andreeva, Tính chất lí hóa học chất vơ cơ, người dịch Lê Kim Long Hồng Nhâm, NXB Khoa học kĩ thuật 15 Đỗ Đình Rãng, Đặng Đình Bạch, Lê Thị Anh Đào, Nguyễn Mạnh Hà, Nguyễn Thị Thanh Phong (2009), Hóa học hữu tập III, NXB Giáo dục Việt Nam 16 Phan Tống Sơn, Trần Quốc Sơn, Đặng Như Tại (1980), Cơ sở hóa học hữu cơ, tập 2, NXB ĐH THCN, Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 64 17 Lê Hữu Thiềng (2002), Nghiên cứu tạo phức số nguyên tố đất với axit L - phenylalanin thăm dị hoạt tính sinh học chúng, Luận án tiến sĩ Hóa học, Hà Nội 18 Nguyễn Trọng Uyển (1979), Giáo trình chuyên đề nguyên tố hiếm, Trường Đại học Tổng hợp Hà Nội, Hà Nội 19 Nguyễn Viết (2010), Đất có ý nghĩa người, http://dantri.com.vn, ngày 01/11/2010 20 Nguyễn Khắc Vinh, Bùi Đức Thắng (2010), Đất hiếm, tiềm lớn Việt Nam, http://nld.com.vn, ngày 24/10/2010 21 Tầm quan trọng nguyên tố đất hiếm, www.hoahocngaynay.com, ngày 18/10/2010 22 http://dictionary.bachkhoatoanthu.gov.vn II Tiếng Anh 23 R Celia Carubelli, Ana M G Massabni and Sergio R de A.l eite (1998), ''L-Histidine-europium(III) complex: a spectroscopical study'', J Brazil Chem 24 Hirayama, Ohto, Mizogudi, Shinozakik (1995), A gene enconding a fosphatidy linosiol- specific photpholipase is induced by dehydration and salt streess in arabidipris thaliana, Proceedings of the national acedemy of the United of America, 92 (9), pp 3903-0907 25 Krystyna Bukietyfiska, Zofia Karwecka and Halina Podsiadty (1996), Vanadium(Ill) complexes with L-histidine in aqueous solution, Poland, pp 2613-2619 26 Yang li (1998), Synthesis and Disinfectant activity test of the solid complexes of histicle with lanthanide nitrates, Journal of Baoji Collecge of Atrs and siances (Natural Scince) Vol 18 No1 27 Yang Zupei, Zhang Banglao, Yu Yueying, Zhang Houngyu (1998), ''Synthesis and characterazation on solid compounds of L-histisine with light rare earth chlrorides '', Journal of shaanxi normal University, Vol 26, No1 28 Wo Boneng (1991), Sunthesis and properties of aminiacid with Neodymium (III) and Wrbium (III), Ziran Kexueban, pp 117-121 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn