Nghiên cứu hoàn thiện kỹ thuật chiết tách tế bào gốc tạo máu từ máu cuống rốn để điều trị bệnh lý về máu

THÀNH I"HỐ HỒ CHÍ MINH Sở khoa học cơng nghệ BV.Truyén máu Huyết học NGHIÊN CỨU HOÀN THIỆN KỸ THUẬT CHIẾT TÁCH TẾ BÀO GỐC TẠO MÁU TỪ MAU CUỐNG RỐN ĐỂ ĐIỀU TRỊ BỆNH LÝ VỀ MÁU Đề tài cấp Thành phế Chủ nhiệm để tài : PGS.BS Trần Văn Bé Năm 2002 - 2004 MỤC Tóm tắt tiếng Việt Tóm tắt tiếng Anh Nhập đề Mục tiêu để tài Tổng quan tài liệu Nội dung nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Kết Bàn luận Tài liệu tham khảo Phụ lục LỤC TÓM TẮT TIẾNG VIỆT Nghiên cứu hoàn thiện kỹ thuật chiết tách tế bào gốc tạo máu từ máu cuống rốn để điều trị bệnh lý máu ` PGS.BS Trần Văn Bé Chúng tiến hành nghiên cứu 315 mẫu máu cuống rốn thu thập Bệnh viện Hùng Vương từ năm 2002 đến năm 2004 Nhận thấy thể tích máu cuống rốn > 40ml chiếm 99,37% cao so với thể tích máu cuống rốn thực năm 1997 - 2000 có 89,54% Kết sang loc mẫu máu cuống rốn virus, vi khuẩn yếu tố di truyền Thalassemia loại bỏ 33/315 mẫu = 10,48% loại bổ nhiễm virus viêm gan B (HBsAg) 2,86% nhiễm vi khuẩn thu thập máu cuống rốn 2,54% Kết số trung bình sắn phẩm tế bào gốc tạo máu: tế bào đơn nhân là: 23,57x10°%ml, tế bào CD34+ 28,00x10°/ml, tế bào CD45+ 25,24x10/ml, tế bào BFU-E (0,046 + 0,056)xL0”, tế bào CFU-GM (2,45 + 1,33)x10Š, tế bào CFU- Mix (2,73 1,32)x10Ÿ Tế bào gốc tạo máu (CD34+) sau chiết tách từ máu cuống rốn đạt 95,2% Ứng dụng sắn phẩm tế bào gốc tạo máu chiết tách từ máu cuống rốn để ghép cho 05 bệnh nhân có:2 nam, nữ tuổi từ — 16 tuổi với 03 bệnhwhân bị bệnh bạch cầu cấp 02 bệnh nhân bị bệnh Thalassemia Kết mọc tuỷ xương thể bệnh nhân với trị số trung bình bạch cầu hạt trung tính (ANC) > 0,5x10°/lít 39,40 ngày số lượng tiểu cầu trung bình > 20x10”/lít 60,60 ngày so với mẫu máu cuống rốn Tokyo cho khơng có khác biệt (ANC = 34,50 ngày, SLTC đáng khích lệ = 67,50 ngày) kết SUMMARY Nature research separate hemato poietic stem cell from cord Blo od for blood disease treatment Professor Tran Van Be We studied charateristics of 315 cord Blood samples collected at Hung Vuong Hospital from 2002 year to 2004 year The results were the following: volume of newborn’s cord blood > 40m1 was 99,37%, author’s results stud ied from 1997 year to 2000 year: 89,54% The incidence of infectious diseases was 10,48% while HbsAg(+): 2,86% and bact erial infection 2,54% The results of blood cell were CD34+ cell = 28,09x 10°/ml; Mononuclear cel] = 23,57x10 /ml; CD45 cell = 25,24x10/ml, BEU-E cell = (0,046 0,056)x1 0°: CFU-GM cell (2,45 1,33)x10°; CFU-Mix cell (2,731,32)x10° After separati on of cord blood had 95,2% CD34+ cell We perfromed 05 cases of stem cell transplantation from cord blood Patients were diagnosed of acute leukemia diseases and Thalassemia disease All patients were engrafted with the median time to recover ANC > 0,5x10°/ and platelet count > 20x10°/ were 39,40 days and 60,60 days Four patients stem cell tranplan tation of cord blood samples from Tokyo were engrafted with ANC > 0,5x10°/ = 34,50 days and platelet count > 20x109/1 = 67,50 days Our research and cord blood bank Tokyo were engrafted the approximate NHẬP ĐỀ Phương pháp ghép tuỷ xương đầu kỷ 20 thực để ghép súc vật Những năm 50 phát hệ phù hợp mơ phương pháp ghép tủy xương bắt đầu ý năm 1970 người ta dùng tuỷ xương người anh ruột để ghép cho người em để điều trị bệnh máu ác tính Ngày phương pháp ghép tuỷ xương phát triển rộng rãi toàn giới Phương pháp ghép tuỷ xương có hai phương pháp ghép dị ghép tự ghép Dị ghép tuỷ ghép sản phẩm người khác cho bệnh nhân Còn tự ghép ghép sản phẩm bệnh nhân ghép lại cho bệnh nhân Các sản phẩm để thực ghép tuỷ xương có tuỷ xương toàn phần, tế bào tuỷ xương, tế bào gốc máu ngoại vi máu cuống rốn tế bào gốc máu cuống rốn Khoảng gần thập kỷ phát triển dị ghép tuỷ ngày cằng nhiều sắn phẩm để ghép khơng đủ đáp ứng có trường hợp phải chờ từ 612 tháng có đủ sản phẩm để ghép Do người ta ý đến sản phẩm máu cuống rốn Năm 1988 máu cuống rốn ghép cho bệnh nhân thiếu máu Faneoni có kết tốt Đến có 15.000 bệnh nhân ghép máu cuống rốn để điều trị bệnh lý ác tính, bệnh lý di truyển bẩm sinh Đối với Thành phố Hồ Chí Minh nói riêng hay nước ta nói chung, ngn máu cuống rốn sản phụ sau sanh chất thải bệnh viện Nhưng nhu cầu dị ghép để điểu trị bệnh lý ác tính, bệnh lý truyền bẩm sinh ngày cao tìm nguồn sắn phẩm từ tuỷ xương hay tế bào gốc máu ngoại vi gặp nhiều khó khăn, khơng tìm người cho Chính mà chúng tơi thực để tài hoàn chỉnh kỹ thuật để chiết tách tế bào gốc tạo máu từ máu cuống rốn nhằm có sản phẩm để điều trị bệnh lý máu MỤC TIÊU ĐỀ TÀI 1- MỤC TIÊU CHUNG : gốc 1- Chuẩn hoá kỹ thuật chiết tách máu cuống rốn để tạo sẵn phẩm tế bào tạo máu cho 2- Ứng dụng sản phẩm tế bào gốc tạo máu từ mấu cuống rốn để điều trị 05 bệnh nhân mắc bệnh máu II- MỤC TIÊU CỤ THỂ : 1- Hoàn thiện hệ thống thu thập máu cuống rốn từ sản phụ sinh, sau trẻ chào đời 2- Hoàn thiện hệ thống sàng lọc máu bà mẹ trước sinh máu cuống rến sau sinh bệnh lý lây nhiễm virus, vi khuẩn 3- Hoàn thiện xử lý máu cuống rốn để tạo sản phẩm tế bào gốc tạo máu 4- Đánh giá hiệu lâm sàng sử dụng tế bào gốc tạo máu từ máu cuống rốn TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1- LỊCH SỬ GHÉP TUỶ XƯƠNG (Ngày gọi ghép tế bào gốc tạo máu) - Năm 1891, Brown Séquard D'arsonaval lần đâu tiên sử dụng tuỷ xương đường uống để điều trị bệnh thiếu máu - Năm 1923, Leake dung dich chiết xuất tuỷ xương lách môi trường dung dịch muối chất kích thích tạo máu để điều trị - Năm 1937, Schretzemayr truyền tế bào sống tuỷ xương vào thể cách tiêm vào thể dịch tuỷ tự thân dịch tuỷ người khác cho bệnh nhân bị nhiễm ký sinh trùng, kết thu bạn chế - Năm , 1939, Osgood người truyền dịch tuỷ xương vào đường tĩnh mạch - Năm 1952, Lorenz cộng thực thành công phục hồi tạo máu súc vật phương pháp ghép tuỷ xương - Từ đó, ghép tuỷ xương thực nhiều lâm sàng, nhằm phục hổi lại tạo máu cho bệnh nhân bị bệnh lý suy tuỷ, sau hoá trị liệu tia xạ bệnh lý ác tính : - Năm 1957, Thomas cộng ghép tuỷ xương để điểu trị cho bệnh nhân bệnh ác tính - Năm 1959, Mathé tiến hành ghép cho bệnh nhân suy tuỷ hậu tai biến chất phóng xạ, kết xương - Năm 1968, Mathé báo cáo kinh nghiệm 21 trường hợp ghép tuỷ - Từ thập niên 1950 cuối thập niên 1960 kỹ thuật ghép tuỷ xương thu vài kết đáng khích lệ Trong thời gian này, phẩn lớn bệnh nhân có xác định HLA - Từ cuối thập niên 1970, ghép tuỷ xương trở thành định điều trị lâm sàng cho bệnh suy tuỷ, bạch câu cấp thiếu hụt miễn dịch - Đến thập niên 1980, ghép tuỷ xương tiến hành nhiều nơi giới định ghép tuỷ xương rộng rãi bao gồm: + Các loại leucemie cấp hay kinh + Bệnh lý ác tinh lymphocyte; lymphoma; Hodgkin, đa u tuý bệnh lý globulin miễn địch + Bệnh suy tuỷ xương bẩm sinh hay mắc phải + Các bệnh lý bẩm sinh: bệnh Thalassemia, bénh thiếu hụt miễn dịch bẩm sinh + Rối loạn tạo sinh tuỷ Hemoglobin, bénh + Các loại ung thư: phổi, da, thần kinh, vú, buồng trứng, tỉnh hoàn Trong năm 70 nhà nghiên cứu y học xác định máu cuống rốn chứa dồi tế bào gốc tương tự tuỷ xương 2- CÁC NGUỒN GỐC TẾ BÀO DÙNG ĐỂ GHÉP : Có nguồn tế bào gốc tạo máu dùng cho mục đích ghép a) Tuỷ xương người trưởng thành nguồn sử dụng lâu hiểu biết đầy đủ b) Tế bào gốc CD34(+) máu ngoại vị: huy động vào máu ngoại vi từ tuỷ xương sau phục hổi giai đoạn suy tuỷ đo hoá trị liệu sau cho yếu tố tăng trưởng ©) Tế bào gốc máu cuống rốn : Đây nguồn tế bào gốc ứng dụng vào ghép thập niên 90 Việc sử dụng ghép tuỷ xương từ người cho anh em ruột phù hợp HLA sử dụng thành công việc điểu trị bệnh nhân mắc bệnh ác tính rối loạn chuyển hoá di truyền Tuy nhiên, phương pháp có nhiều hạn chế như: - Khó tìm người cho không liên hệ huyết thống phù hợp HLA - Bệnh lý ghép chống chủ tương đối cao - TỈ lệ nhiễm trùng hội sau ghép đáng kể Chính lý mà nhà khoa học giới khơng ngừng nghiên cứu tìm tế bào gốc từ mội nguồn cung cấp khác Và họ tìm tế bào gốc chứa máu cuống rốn dùng thay tuỷ xương hay tế bào gốc máu ngoại vi cách có hiệu Ngoài tiêu chuẩn tế bào học, sinh học, miễn dịch học đáp ứng cho việc ghép, máu cuống rốn cịn có thuận lợi thực tiễn ghép - Có thể lưu trữ lâu đài sẵn sàng sử dụng nhanh chóng cẩn - Có thể lấy từ người cho không liên hệ họ hàng huyết thống - Việc thu thập máu cuống rốn không gây nguy cho mẹ trẻ sơ sinh - Nguy lây nhiễm virus thường thấy tuỷ CMV Epstein — Barr virus thap Do d6, việc sử dụng máu cuống rốn để ghép phát triển nhanh chóng khắp giới Đến nay, giới có trên#5 ,000 trường hợp ghép máu cuống rốn thực 3- ĐẶC ĐIỂM MÁU CUỐNG RỐN (MCR) : 3.1 Đặc tính sinh học: - Máu cuống rốn giàu tế bào gốc (CFU-GM, BFU-E CFU-GEMM) nhiều máu ngoại vi người trưởng thành 5-10 lần so sánh với tuỷ xương; có tinh tăng sinh cao mang dấu ấn CD34(+); CD38- Thyl+ xem giai đoạn sớm trình phát triển - Nhưng tế bào thường tình trạng nghỉ ngơi với giai đoạn F1 kéo đài - Đáp ứng tăng sinh nhanh chóng với chất GM-CSE; G-CSF; M-CSF; IL-3, erythropoietin kết hợp với FLT3/FLK-2 Ligand số yếu tế khác, người ta chưa biết tác dụng tương tác chất tăng sinh tế bào - Huyết tương máu cuống rốn giàu yếu tố tăng trưởng, cố khoảng 50 cytokinos tham gia vào việc diéu hoà tăng trưởng tế bào gốc 3.2 Đặc tính miễn dịch học: Một đặc tính quan trọng máu cuống rốn lĩnh vực ghép tuỷ tỉ lệ mức độ phần ứng GVHD xảy thấp so với ghép tuý ghép tế bào gốc khác Lý tượng tế bào Tc MCR đáp ứng thấp kháng ngun dị loại, từ tạo nên tình trạng không đáp ứng tăng sinh tế bào lympho T sau tiếp xúc với kháng nguyên Mặt khác tế bào “siết tự nhiên” (Natural killer) MCR thấp Mặc dù diện nhóm tế bào NK biểu thị CD16+56+ CD16-56+ có hay khơng khả ly giải tế bào nói lên mức độ chưa trưởng thành chúng Tuy nhiên chúng đáp ứng tốt IL-2 IL~12 Tất kiện phản ánh tình trạng thiếu hụt miễn dịch làm sáng tỏ nhờ vào kết thực nghiệm mà chế sau: - Việc sản xuất hormon tuyến yên làm ức chế tăng trưởng tế bào T giảm kích dịch giảm giai đoạn thai nhi ngày đầu sống MCR có rõ rệt tế bào T2H4-4B4 (hỗ trợ/cảm ứng) Có suy giảm chức hoạt chức làm tăng sinh tế bào phụ hệ thống miễn mà hậu làm giảm khả trình điện kháng nguyên, kéo theo suy sản xuất IL~1 Sự kiện đo xuất sai lệch phân tử MHC II tế bào miễn dịch phụ rối loạn sẩn xuất [FN-y tế bào T chưa trưởng thành gây nên - Hiện tượng ức chế khơng đặc hiệu tăng bình thường kích thích mức tế bào T ức chế đại thực bào phức hợp miễn dich tao nén cdc IgG me 3.3 Đặc điểm đấu ấn CD34(+) CD34 glycoprotein màng tế bào, trọng lượng phân tử 105-120 Kda điện trên: ~ Các tế bào tiền thân tạo máu (Immature Hematopoietic precursor cel]s) tế bào CFU tạo máu (Hematopoietic colony Froming unit) bao gém ca hai loai don va da tiém nang: CFU-GM: Blast BFU.E/CFU-GEMM; CFU.Mix, CFU, Các tế bào CD34(+) chưa biệt hố dịng khơng biểu CD38 vắng mặt kháng nguyên CD7I (dòng hổng cầu), CD33 (dòng tuỷ), CD10 (dòng lympho B), CD5 (ding lympho T) Trong tế bào CD34(+) biệt hod dong sé biểu mạnh CD38 - Các tế bào đầu dịng lympho T, B có TdT+, tế bào đầu dịng dịng tuỷ có CD33+ CD14/CD15 Tế bào đầu dòng dòng hồng cầu có CD71+ CD45- Các tế bào nội mạc mao mạch khoảng 1% thymocyte Các tế bào hồng cầu, bạch cầu tiểu cầu bình thường ngoại vi khơng mang CD34(+) - Nói chung mật độ CD34(+) điện cao tế bào gốc tạo máu; giảm tế bào trưởng thành dân, biến tế bào hồn tất biệt hố - Tuỷ bình thường diện < 0,5% tế bào gốc tạo máu ~ Trường hợp bệnh lý: 60% ung thư máu cấp dòng Iympho B ung thư máu cấp dòng hạt, 1-5% ung thư máu cấp dịng lympho T có biểu CD34(+) - CD45 có trọng lượng phân tử 180-220 Kda, diện toàn loại bạch cầu người biểu yếu tế bào gốc tạo máu - DNA/RNA-specific dye giúp phát loại tế bào nhân bao gồm bạch cầu hồng cầu nhân 3.4 Một số đặc điểm khác : Việc sử dụng máu cuống rốn đòi hỗi trước tiên cẩn có ngân hàng máu cuống rốn Để thành lập ngân hàng cần phải có đầy đủ phương tiện tổ chức thực cách khoa học: trước hết phải trang bị hệ thống lưu trữ nhiệt độ lạnh sâu có khả lưu trữ số lượng lớn máu cuống rốn Số lượng nhiều tốt phải chọn mẫu phù hợp HLA không quan hệ huyết thống bệnh nhân cần ghép phải cần số lượng lớn có khả m mẫu cuống rốn thích hợp Trước cho vào hệ thống này, cần phải tiến hành xác định HLA tất mẫu máu cuống rốn Một thành lập ngân hàng máu cuống rốn với số lớn mẫu máu cuống rốn việc m mẫu máu cuống rốn phù hợp ghép thực hiệu Và ưu điểm lớn so với nguồn tế bào lấy từ tuỷ xương 4- GHÉP TẾ BÀO GỐC MÁU CUỐNG RỐN : 4.1 Chỉ định ghép tế bào gốc mắu cuống rốn: - Trường hợp ghép tế bào gốc máu cuống rốn thực vào tháng 10 năm 1988 bé trai tuổi bệnh thiếu máu Fanconi, từ máu cuống rốn em gái sơ sinh bệnh nhân bệnh nhân tinh trạng sức khoẻ tốt - Đến năm 2004 có 15.000 trường hợp ghép tế bào gốc máu cuống rốn giới - Chỉ định ghép tế bào gốc máu cuống rốn : + Bệnh bạch cầu cấp dòng Iympho giai đoạn lui bệnh hay tái phát + Bệnh bạch cầu cấp dòng tuỷ giai đoạn lui bệnh hay tái phát + Bệnh bạch cầu kinh dòng hạt chuyển cấp + Hội chứng tăng sinh tuỷ ác tính + Suy giảm miễn dịch kết hợp trầm trọng + Hội chứng Wishott— Aldrich Phụ lục KẾT QUÁ XÉT NGHIỆM CAC DONG BFU-E, CFU-GM, CFU-Mix STT BFU -c_ CFU ~ GM 22 | 23 33 CFU ~ Mix ° 275 : ay! 32] ol 3 57 27 51 19 46 45 | 49 34 65 10 il 0 10 ia| 27| 13 14 15 16 18 19 0 0 0 39 57 15 42 35 42 24| ; 5] 594 a 42 63! 23 | 34 lì 59 | 62) 0| 24 33, 29 36 16 | 12 20 3Ị 22 | 24 | 25 i 26 | | 2? 28 | 29 30 | ải 32 33 34 35 36 0| 4Í 0{ 0j | 0, 2: 36 31 20 Wl 52 36 26 10 47 291 44 | 31 | 46, 43) 43) 19! 13) l8! 57 31 31 12] 46| 34 See WN ENE WA s< bì CC KH RR œ EDAD L3) | 38 ¡39 40 41 42 | 43 ' 4d ; đỗ :46 47 i 48 ! 49 : ¡ _ | ` (nh bà OO} 15| 16| 13 25 33 26 § 40 37 17 53 127 TT : mw | 50 51 52 53 54 55 56 yi 58 59 60 6I ó2 al 56| 34 27} 40 ^ ¡ 64 65 66| 67 6s | 16) " 7I ;.1?2 74 75 ¡T6 77 one 73 " 8Lj 83 i gs 86 87 88 £89 90 | | | | 91 92 93 95 96 98 10 | T01 | 102 | | 103| 104} 105 i Hs: | 16| BR A ww bạ HI S OY XS oo mo 112) 1131 114 RPwR CHỊ Ce ° 107 ¡108 ¿109 „110 t ON 106| Vi 33 Ụ Lis QO 119 Ụ 40 44 120 Kết : - BFU-E - CFU-GM - CPU-Mix (0,046 + 0,056) x 10° (2 45 1,33)x 10° 73132)x10° Phụ lục QUI TRÌNH KỸ THUẬT CHIẾT TÁCH TẾ BÀO GỐC TẠO MÁU TỪ MAU CUONG RON TAI BV TRUYEN MAU & HUYET HOC I CHUẨN BỊ PHƯƠNG TIÊN : ˆ Máy móc: Máy ly tâm lạnh Clean bench có đèn gas Máy trộn (Orbital mixer) Máy ép plasma tự động (Anto-volume expressor) May 6p tay piasma (Separation stand) Máy bơm ty dong (Syringe pump) May han dfy (Tube seater) Máy hàn overwrap (Overwrap sealer, Faji) Tả lạnh 4°C Dung cu: Bộ ti xử lý MCR Cân điện tử (độ xác 0,1g} gel packs 6.5” 3.5” The Advanced Overwrap System (AOS system) Đồng hồ (bấm giây) Canister Overwrap bag Dung cy mé canister Tube 5™ (dung mau XN) Cryotube sm Cryombe 2™ Injection plugs (gắn vào miệng tái máu để rút mẫu XN) Ống chích 20™ Ống chích 5" Ống chích 3"! Ống chích 1™ Kim 18G Kim 21G Gịn hấp tiệt trùng Nhấn barcode Hồ sơ chiết tách máu cuống rốn (HSCTMCR) “Thuếc thử ; HESPAN (6% hetastarch 0,9% NaCI): 20/ống DMSO / Dextran 40 (6™lo) Côổn 75” (sất khuẩn) Lọ cấy vi trùng (BACTEC) Lọ cấy vi nấm (BACTEBC) II TIẾN HÀNH: 1) Thu thập tế bào (Giai doan PRE): Lau tối thu thập MCR côn 7z chuyển vào phòng xử lý Cân túi MRC trừ bì (65g : gồm túi chất chống đơng) ghi vào hổ sơ chiết tách MRC (HSCTMCR) Dán barcode vào HSCTMCR Ghi tiết cần thiết vào HSCTMCR Hàn tối thu thập MCR , cất bỏ đoạn không cẩn thiết Đặt túi MCR lên trộn (orbital mixer), tn déu phối Đưa túi MCR vào clean bench, ding gon tim cồn 75° lau bên tấi mầu Gắn injection plug vào miệng túi mấu Dùng ống chích 11, kim 18G rút 0,5™ cho vao lo cdy vi nấm Dùng ống chích 1" kìm 18G rút 0,8”U cho vào lọ cấy ví trùng Dang ống chích 5”", kim 18G rút 4”' mầu cho vào : « - 0,5"'-> microiube để thử HLA ¢ 0,5" > tube thi huyết đổ © 2,5”! > mbe thử HB,A g, HCV, CMV © 0,5™ > tbe phân loại ABO/Rh Cân lại (trừ bì) ghi trọng lượng vào mục Pre@ HSCTMCR Lấy trọng lượng PreØ chia = thể tích HES cẩn dùng, ghỉ vào HSCTMCR phẩn lượng HES (Pre2⁄5) Dùng ống chích 20”! kim 21G bơm HES vào ti thu thập MCR Trộn rứi mầu máy trộn từ ¡0 đến 15 phút Quay ly tâm lin J theo tiêu chuẩn 150G, phút, 10°C (Acc 9, Dec 0) Dé tính trọng lượng RBC cần thêm vào, theo bầng đưới : 40 kg b) Đứa trẻ: không bị dị tật, không mắc bệnh lý truyền bẩm sinh ©) Tiêu chuẩn loại trừ lấy máu cuống rốn : - Tuổi thai < 37 tuần - Vũ ối > 24 - Mẹ sốt > 38"C - Cân nặng thai nhi lúc sinh < 2600 gam - Thể tích máu cuống rốn < 60m] 2- Tiêu chuẩn sinh học : - Kháng thể giang mai huyết : âm tính - Kháng nguyên bê mặt virus viêm gan B (HỔsAg) : âm tính - Kháng thể lơi viêm gan B (anti HBc): âm tính - Kháng thể virus viêm gan C (anti HCV): âm tính - Khang thé virus HIV - Khang thé HTLV] (anti HIV): 4m tinh (anti HTLV 1): âm tính - Khang thé CMV-IeM ‘anti CMV-1gM): 4m tinh Phụ lục : QUI TRÌNH THU THẬP MÁU CUỐNG RỐN 1- Phương tiện, dung cu: - Khung để trao bánh - Máy lắc túi máu - Cân ~ Dụng cụ hàn nhiệt hàn tay - Kẹp, kéo kểm - Khay võ trùng - BO kit thu thập túi lấy máu có chất chống đơng - Ống nghiệm, ống tiêm - Cần, cên lod - Bông, gạc vô trùng 2- Phương pháp tiến hành : - Ngay sau đứa trế sinh kẹp dây rốn cách rốn trể sơ sinh - cm Nhau thai số cho vào khay vô trùng treo lên khung thu thập, đặt kit thu thập lên máy lắc, rửa toàn dây rốn cổn sát trùng lại cổn lod, đâm kim kit hay túi lấy máu vào tĩnh mạch rốn với góc 20 độ đế máu cuống rốn hết chảy theo trọng lực, co bóp gián đoạn, xoay, nâng, thay đổi vị trí bánh Nếu máu cuống rốn hết chảy đâm kim lần 2,3 vào tĩnh mạch rốn phía gần bánh để lấy hết máu cuống rốn Nếu hết máu cuống rốn tiến hành kẹp hàn dây túi máu cắt bỏ kim, đem cân túi thu thập Đưa túi thu thập nơi điều chế, điểu kiện chuyển nhiệt độ 20 — 24C, Thời gian lưu trữ túi máu cuống rốn tối ưu — 16 tối đa 24 Phụ lục CỘNG HOÀ Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM - Độc lập — Tự - Hạnh phúc GIẤY CAM KẾT Ho tên: Năm sinh: Địa chí cư trú : Đân tộc : Tôi nghe Bác sĩ, Điều dưỡng trình bày cần thiết máu cuống tốn để phục vụ cho người bệnh, sau hoàn tất khâu điểu chế máu cuống rốn Tôi biết lấy máu cuống rốn khơng bị ảnh hưởng đến sức khoẻ tơi trẻ sinh Nếu máu cuống rốn khơng sử dụng bị bổ theo bánh trở thành chất thải bệnh viện Tôi đồng ý cho máu cuống rốn để phục vụ lợi ích cho bệnh nhân khơng u cầu, khiếu nại điều Ngày tháng năm Người cho máu cuống rốn Họ tên: Phụ lục 8: CÁC CHỮ VIẾT TẮT -ALL = Acute lymphoblastic leukemia, bệnh bạch cầu cấp dòng lympho - AML = Acute Myeloid leucemia, bénh bach cầu cấp dòng tuỷ - Anti HBc = Khang thé chống lõi virus viêm gan B - - Anti HCV = Kháng thể chống virus viêm gan C Anti HIV = Khdng thé chéng virus HIV (Human Immuno deficiency vinus) Anti HTLVI = kháng thể chống virusl lymphocyte T ngudi (Human T lymphoid 1) virus - Anti CMV = khang thé chống virus cytomegalose (Cytomegalose virus) - Anti Syphilis = Kháng thể bệnh giang mai -ANC = Absolute Neutrophile count, số lượng bạch cầu trung tính tuyệt đối BFU-E = Burt Forming Unit Erythroid, cụm tế bào đầu dòng, hồng cầu CD = Cluster of differenciation, cum khác Ý để cập đến kháng nguyên -_ - hay dấu ấn bể mặt tế bào CD34+ = Dấu ấn tế bào gốc tạo máu CD45+= Dấu ấn bạch cầu CFU ~ GEMM = Clony Forming Unit - Gramlocyte Erythroid, Macophage, cụm :ế bào đồng hat, hồng cầu, đơn nhân, đại thực bào CFU-GM Monocyte = Clony Forming Unit — Granulocyte Macophage, cụm tế bào dòng hạt, đại thực bào > CFU ~ Mix = Clony Forming Unit— Mix, cụm tế bào hổn hợp - G-CSF GVHD = = = - HCMC = - HHsAg = - HLA = - MCR_ = Máu cuống rốn - M-CSF = ;- - MNC IL SLTC = = Macophage clony Stimulation Factor, yếu tố tăng trưởng đại thực bào Mononuelear cell, tế bào đơn nhân Interleukine - Thal = Bénh - DMSO — = Dimethylsulphoxide Granulocyte — Clony Stimulation Factor yếu tố tăng trưởng dong hat Graft versus Host Disease, bénh ly ghép chéng ký chủ Thành phố Hồ Chí Minh Kháng nguyên bể mặt viêm gan virus B Human leukocyte Antigen, kháng nguyên phù hợp mô Số lượng tiểu cầu Thalassemia