Tạo tấm tế bào sừng từ tế bào máu cuống rốn trên giá thể màng ối

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  HỒ ĐIỀN TẠO TẤM TẾ BÀO SỪNG TỪ TẾ BÀO MÁU CUỐNG RỐN TRÊN GIÁ THỂ MÀNG ỐI LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  HỒ ĐIỀN TẠO TẤM TẾ BÀO SỪNG TỪ TẾ BÀO MÁU CUỐNG RỐN TRÊN GIÁ THỂ MÀNG ỐI Chuyên ngành: MÔ PHÔI Mã số: 60 72 01 02 Luận văn Thạc sĩ Y học NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS TRẦN CÔNG TOẠI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2017 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng đƣợc hƣớng dẫn khoa học PGS.TS Trần Công Toại Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực Những số liệu bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá đƣợc tác giả thu thập từ nguồn khác có ghi rõ phần tài liệu tham khảo Ngoài ra, luận văn sử dụng số nhận xét, đánh giá nhƣ số liệu tác giả khác, quan tổ chức khác có trích dẫn thích nguồn gốc Nếu phát có gian lận tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung luận văn TP Hồ Chí Minh, ngày 12 tháng năm 2017 HỒ ĐIỀN MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ .1 MỤC TIÊU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Máu cuống rốn 1.1.1 Nguồn gốc cấu trúc cuống rốn .5 1.1.2 Tế bào gốc máu cuống rốn 1.2 Tế bào sừng 1.2.1 Lớp biểu bì mô da 1.2.2 Tế bào sừng tái tạo da .8 1.2.3 Một số phƣơng pháp định danh tế bào sừng 1.2.4 Khả biệt hóa tế bào gốc thành tế bào sừng .10 1.3 Màng ối 12 1.3.1 Cấu trúc giải phẫu mô học màng ối 13 1.3.2 Đặc tính màng ối 13 1.3.3 Màng ối dùng làm giá thể cho nuôi cấy tế bào .18 1.4 Tình hình nghiên cứu liên quan đến đề tài .19 1.4.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 19 1.4.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc .20 Chƣơng PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Thiết kế nghiên cứu 22 2.2 Đối tƣợng nghiên cứu .22 2.3 Tiêu chuẩn chọn mẫu 22 2.4 Tiêu chuẩn loại trừ 22 2.5 Vật liệu 23 2.5.1 Dụng cụ - Thiết bị 23 2.5.2 Hóa chất thí nghiệm 24 2.6 Phƣơng pháp nghiên cứu: .25 2.6.1 Thu nhận máu cuống rốn ngƣời 26 2.6.2 Phân lập, nuôi cấy tế bào đơn nhân từ MCR 26 2.6.3 Định danh tế bào gốc từ MCR ngƣời qua q trình ni cấy 28 2.6.4 Thu nhận xử lí màng ối ngƣời thành màng collagen 31 2.6.5 Tạo tế bào sừng 33 2.6.5.1 Cấy chuyền tế bào gốc trung mô máu cuống rốn lên màng collagen 33 2.6.5.2 Biệt hóa TBG MCR màng collagen thành tế bào sừng 33 2.6.5.3 Tạo lớp cho tế bào sừng phƣơng pháp airlifting 34 2.6.6 Đánh giá tế bào sừng 34 Chƣơng KẾT QUẢ .36 3.1 Đặc điểm chung mẫu 36 3.2 Thu nhận tế bào gốc trung mô từ máu cuống rốn 37 3.2.1 Phân lập nuôi cấy tế bào gốc trung mô từ máu cuống rốn 37 3.2.2 Xác định tính gốc TBG MCR 40 3.3 Thu nhận xử lý màng ối thành màng collagen nuôi tế bào 45 3.4 Tạo tế bào sừng nhiều lớp tế bào giá thể collagen 46 3.4.1 Biệt hóa tế bào sừng giá thể collagen 46 3.4.2 Tạo tế bào sừng nhiều lớp tế bào giá thể collagen .48 Chƣơng BÀN LUẬN 52 4.1 Đặc điểm chung mẫu 52 4.2 Thu nhận tế bào gốc trung mô từ máu cuống rốn 53 4.2.1 Phân lập nuôi cấy tế bào gốc trung mô từ máu cuống rốn 53 4.2.2 Xác định tính gốc TBG MCR 62 4.3 Thu nhận xử lý màng ối thành giá thể collagen nuôi tế bào 68 4.4 Tạo tế bào sừng nhiều lớp tế bào giá thể collagen 70 4.4.1 Biệt hóa tế bào sừng giá thể collagen 70 4.4.2 Tạo tế bào sừng giá thể collagen phƣơng pháp airlifting 72 KẾT LUẬN .79 KIẾN NGHỊ 81 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ Viết Tắt Tiếng Anh AEC Amniotic Epithelial Cells bFGF Fibroblast Growth Factor – basic CEA Cultured Epidermal Autograft CK DMEM Tiếng Việt Tế bào biểu mô màng ối Yếu tố phát triển nguyên bào sợi – Cytokeratine Dulbecco’s Modification of Eagle’s Medium ECM Extracellular Matrix EDTA Ethylene Diaminetetraacetic Acid Chất ngoại bào EGF Epidermal Growth Factor FAK Focal Adhesion Kinase FBS Fetal Bovine Serum Huyết bò FCS Fetal Calf Serum Huyết bò FISH Fluorescence In Situ Hybridization HEPES 4-(2-hydroxyelthyl)-1-piperazineethanesulfonic acid HE Hematocylin & Eosin HGF Human Growth Factor HLA Human Leukocyte Antigen IMDM KGF KGFR Yếu tố phát triển biểu mô Yếu tố phát triển ngƣời Kháng nguyên kháng bạch cầu ngƣời Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium Keratinocyte Growth Factor Yếu tố phát triển tế bào sừng Keratinocyte Growth Factor Receptor Thụ thể yếu tố phát triển tế bào sừng KHV MAPK Kính hiển vi Mitogen-Activated Protein Kinases Máu Cuống Rốn MCR MMP Matrix metalloproteinase MSC Mesenchymal Stem Cell PAS Periodic acid-Schiff PBS Phosphate Buffered Salin PCM Primary Culture Medium PGA Polyglycolic acid pHEMA PLLA PPS RT–PCR SFM SLPI Tế bào gốc trung mô Môi trƣờng nuôi sơ cấp Polyhydroxyethyl methacrylate Poly-lactic acid Poly (p-phenylene sulfide) Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction Serum Free Medium Môi trƣờng nuôi không huyết Seretory Leucocyte Proteinase Inhibitor Tế bào gốc TBG TEM Transmission Electron Microscopy Kính hiển vi điện tử xuyên TGF Transforming Growth Factor Yếu tố chuyển dạng VDRL Veneral Disease Research Laboratory Xét nghiệm giang mai WBC White blood cell Tế bào bạch cầu DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu 23 Bảng 2.2 Một số marker cần đƣợc xác định MSC phân lập từ MCR 30 Bảng 4.1 Kết nghiên cứu tác giả Karen Bieback cộng 54 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phân nhóm MCR sau thu nhận 36 Biểu đồ 3.2 Kết phân lập MSC từ MCR 37 Biểu đồ 4.1 Kết phân lập MSC Tangni Gómez-Leduc cộng 53 80 Kết TEM có liên kết tế bào sừng sau biệt hóa với màng collagen tạo từ màng ối tế bào liền kề có liên kết với Kết luận chung: Chúng thực thành công đề tài nghiên cứu tạo thành cơng tế bào sừng có nhiều lớp tế bào giá thể màng ối 81 KIẾN NGHỊ Sau trình thực nhƣ kết thu đƣợc từ đề tài nghiên cứu chúng tơi có số kiến nghị nhƣ sau: Loại bỏ mẫu máu cuống rốn tích thu đƣợc ban đầu nhỏ 30ml nhằm tiết kiệm thời gian kinh phí thực Do hạn chế kinh phí thời gian nên số lƣợng mẫu phƣơng pháp thực bƣớc chƣa đƣợc triển khai đối chiếu đồng để chọn quy trình tối ƣu Chúng tơi đề xuất tiếp tục triển khai đề tài nghiên cứu nhằm so sánh phƣơng pháp khâu quy trình Tiếp tục nghiên cứu tiến tới ghép đánh giá thực nghiệm mơ hình động vật tính an toàn sinh học, hiệu ứng dụng điều trị tế bào sừng nhiều lớp đƣợc tạo từ máu cuống rốn giá thể nuôi màng ối TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Cao Mộng Phi An (2014), Nghiên cứu tạo tế bào sừng từ tế bào gốc máu cuống rốn, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh Dƣơng Thị Bạch Tuyết, Phạm Văn Phúc, Trần Thanh Đây (2007), Thu nhận tế bào gốc trung mô (mesenchymal stem cell) ngƣời từ máu cuống rốn, Tạp Chí Khoa Học ĐHSP TP.HCM, Số 12 – 2007 Lê Thế Trung, Trần Văn Hanh, Nơng Ích Dong, Nong Ich Giong (1988), Trƣờng hợp thành công nôi cấy tế bào sừng điều trị vết thƣơng bỏng sâu, Tạp chí Y học thảm họa bỏng, 1988, Số 1, Tr 67 – 69 Nguyễn Minh Phƣơng (2016), Phân lập, nuôi cấy tế bào gốc trung mô từ mô mỡ, Luận vă thạc sĩ, Trƣờng Đại học Y Dƣợc TP Hồ Chí Minh Phan Kim Ngọc, Phạm Văn Phúc, Trần Lê Bảo Hà (2007), Thu nhận biệt hóa tế bào gốc trung mơ từ máu cuống rốn ngƣời, Tạp Chí Phát Triển KH&CN, Tập 10, Số 12 – 2007 Trần Công Toại, Huỳnh Duy Thảo, Phan Kim Ngọc, Nguyễn Phƣơng Thảo (2009), Biệt hóa tế bào gốc máu cuống rốn ngƣời thành nguyên bào xƣơng, Tạp chí Y dƣợc học Quân sự, 1: 73 – 80 Trần Cơng Toại, Nguyễn Quang Hƣng, Nguyễn Hồng Viễn Thanh (2008), Nghiên cứu quy trình phân lập tế bào gốc máu cuống rốn ứng dụng nuôi cấy biệt hóa, Tạp chí Y học thành phố Hồ Chí Minh, 12 (1): 3642 Trần Lê Bảo Hà, Trần Cơng Toại, Hồng Nghĩa Sơn, Tạo tế bào sừng nhiều lớp màng collangen từ màng ối ngƣời (2009), Tạp chí Cơng nghệ sinh học, 7: 155-160 Trần Lê Bảo Hà, Trần Cơng Toại, Hồng Nghĩa Sơn, Đánh giá đặc điểm tế bào sừng ngƣời đƣợc nuôi cấy in vitro (2009), Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 7(3): 307 – 312 10 Trần Lê Bảo Hà (2010), Nghiên cứu xác lập quy trình ni cấy tế bào sừng ngƣời màng collagen từ màng ối ngƣời hƣớng tới ứng dụng ghép tự thân điều trị tổn thƣơng da, Luận án tiến sĩ sinh học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh 11 Trần Thị Thanh Thủy (2012), Phân lập, ni cấy biệt hóa tế bào gốc trung mô từ tủy xƣơng ngƣời thành tạo cốt bào giá thể san hô hƣớng đến ghép điều trị bệnh lý tổn thƣơng xƣơng, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh TÀI LIỆU TIẾNG ANH 12 A.A Martins, A Paiva, J.M Morgado, A Gomes, and M.L Pais (2009), Quantification and Immunophenotypic Characterization of Bone Marrow and Umbilical Cord Blood Mesenchymal Stem Cells by Multicolor Flow Cytometry, Transplantation Proceedings, 41, 943–946 13 A C Mamede, M J Carvalho, A M Abrantes, M Laranjo, C J Maia, M F.Botelho (2012), Amniotic membrane: from structure and functions to clinical applications, Cell and Tissue Research, 349: 447 – 458 14 Aditi Chopra and Betsy S Thomas (2013), Amniotic membrane: A novel materal for regeneration and repair, Biomaterials and Tissue Engineering, 18(1) 15 Akira Seo, Norio Kitagawa, Takashi Matsuura, Hironobu Sato, Tetsuichiro Ina (2016), Formation of keratinocyte multilayers on flters under airlifted or submerged culture conditions in medium containing calcium, ascorbic acid, and keratinocyte growth factor, Histochem Cell Biol 16 Alam, H., Sehgal, L., Kundu, S T., Dalal, S N., Vaidya, M M (2011), Novel function of keratins and 14 in proliferation and differentiation of stratified epithelial cells, Molecular cell Biology, 22(21): 4068-4078 17 Alex JS, Genevieve AS, Richard JL, Stacy PW, Jonh NK, Stephen JT, Julie TD (2009), The effect of amniotic membrance preparation method on its ability to serve as a subtrate for the ex-vivo expansion of limbal epithelial cells, Biomaterials, 30:1056-1065 18 Alvin Wen Choong Chua, Yik Cheong Khoo, Bien Keem Tan, Kok Chai Tan, Chee Liam Foo and Si Jack Chong (2016), Skin tissue engineering advances in severe burns: review and therapeutic applications, Burns & Trauma, 4:3 19 Áron Szepesi, Zsolt Matula, Anna Szigeti, Grgy Várady, József Szalma, Gyula Szabó, Ferenc Uher, Balázs Sarkadi, and Katalin Német (2016), In Vitro Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells Isolated from Different Tissues with a Potential to Promote Complex Bone Regeneration, Stem Cells International, Volume 2016 20 Ayaka Toda, Motonori Okabe, Toshiko Yoshida and Toshio Nikaido, The potential of amniotic membrane/amnion-derived cells for regeneration of various tissues (2007), Journal of Pharmacological sciences, 105: 215 – 228 21 Broxmeyer, H E., Smith, F O.,(2009), Cord Blood Hematopoietic Cell Transplantation, In Thomas' Hematopoietic Cell Transplantation, 559-576 22 Charles J Di Como, Marshall J Urist, Irina Babayan, et al (2002), p63 Expression Profiles in Human Normal and Tumor Tissues, Clinical cancer research, 8: 494 – 501 23 Chunkui Shao, Jing Sima, Sarah X Zhang, Ji Jin, Peter Reinach, Zheng Wang and Jian-xing Ma (2004), Suppression of Corneal Neovascularization by PEDF Release from Human Amniotic Membranes, Investigative Ophthalmology & Visual Science, Vol 45, No 24 Daniel Meller and Scheffer C G Tsen (1999), Conjunctival Epithelial Cell Differentiation on Amniotic Membrane, Investigative Ophthalmology & Visual Science, Vol 40, No 5, pp 878 – 886) 25 David Garrod, Martyn Chidgey (2008), Desmosome structure, composition and function, Biochimica et Biophysica Acta, 1778: 572 – 587 26 Dennopporn Sudjai MD, Teera Wacharaprechanont MD (2002), Comparison of Three Methods in Umbilical Cord Blood Collection for Hematopoietic Stem Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Cell Transplantation, Thai Journal of Obstetrics and Gynaecology, Vol 14, pp 183-192 27 Doina Ivan, Jason W.Nash, Victor G.Prieto, Eduard Calonje, Stephen Lyle, A.Hafeez Diwan, And AlexanderJ.F.Lazar (2007), Use of p63 expression in distinguishing primary and metastatic cutaneous adnexal neoplasms from metastatic adenocarcinoma to skin, Cutaneous Pathology, 34:474–480 28 E Kenneth Parkinson and W Andrew Yeudall (2002), The Epidermis, Culture of Epithelial Cells, Second Edition, Page 66 – 67 29 Eun Ji Gang, Seung Hyun Hong, Ju Ah Jeong, Soo Han Hwang, Seong Whan Kim, Il Ho Yang, Chiyoung Ahn, Hoon Han, Hoeon Kim (2004), In vitro mesengenic potential of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells, Biochemical and Biophysical Research Communications, 321: 102–108 30 Fu Guo Chen, Wen Jie Zhang, Dan Bi, Wei Liu, Xian Wei, Fan Fan Chen, Lian Zhu, Lei Cui and Yilin Cao (2007), Clonal analysis of nestin– vimentin+ multipotent fibroblasts isolated from human dermis, Journal of Cell Science 120, 2875-2883 31 Fu, X., Fang, L., Li, X., Cheng, B., Sheng, Z (2006), Enhanced wound-healing quality with bone marrow mesenchymal stem cells autografting after skin injury, Wound Repair and Regeneration, 14(3): 325-335 32 Fu, X., Sun, X (2009), Can hematopoietic stem cells be an alternative source for skin regeneration?, Ageing Research Reviews, 8(3): 244-249 33 Gabrielis Kundrotas (2012), Surface markers distinguishing mesenchymal stem cells from fibroblast, Acta medica lituanica, 19: 75 – 79 34 Gluckman, E., Broxmeyer, H A., Auerbach, A D., Friedman, H S., Douglas, G W., Devergie, A., et al (1989), Hematopoietic reconstitution in a patient with Fanconi's anemia by means of umbilical-cord blood from an HLA identical sibling, New England Journal Medicine, 321(17): 1174-1178 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn 35 Goodwin H S., Bicknese A R., Chien S N., Bogucki B D., Quinn C O., Wall D A (2001), Multilineage differentiation activity by cells isolated from umbilical cord blood: expression of bone, fat, and neural markers, Biology of Blood and Marrow Transplantation, 7(11): 581-588 36 Hans Törmä, Regulation of keratin expression by retinoids, DermatoEndocrinology, 3(3): 136-140 37 Hassan Niknejadl, Habibollah Peirovi, Masoumeh Jorjani, Abolhassan Ahmadiani, Jalal Ghanavi, Alexander M Seifalian (2008), Properties of the amniotic membrane for potential use in tissue engineering, European Cells and Materials, 15: 88 – 99 38 Hernandez-Quintero, M., Kuri-Harcuch, W., Gonzalez CastroMunozledo, F (2006), Interleukin-6 promotes human Robles, A., epidermal keratinocyte proliferation and keratin cytoskeleton reorganization in culture, Cell Tissue Research, 325(1): 77-90 39 Hi-Jin You and Seung-Kyu Han, Cell Terapy for Wound Healing (2014), J Korean Med Sci, 29: 311-319 40 Hussain I, Magd SA, Eremin O, El-Sheemy M (2012), New approach to isolate mesenchymal stem cell (MSC) from human umbilical cord blood, Cell Biol, 36:595–600 41 Irfan Z Qureshi, Fareeha A and Wajid A Khan (2010), Technique for Processing and Preservation of Human Amniotic Membranefor Ocular Surface Reconstruction, Engineering and Technology, 45 42 Jiad N Mcheik, Christine Barrault, Guillaume Levard, Franck Morel, FranỗoisXavier Bernard, Jean-Claude Lecron (2014), Epidermal Healing in Burns: Autologous Keratinocyte Transplantation as a Standard Procedure: Update and Perspective, PRS Global Open, DOI: 10.1097/GOX.0000000000000176 43 Kamolz L P., Kolbus A., Wick N., Mazal P R., Eisenbock B., Burjak S., et al (2006), Cultured human epithelium: human umbilical cord blood stem cells differentiate into keratinocytes under in vitro conditions, Burns, 32(1): 16-19 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn 44 Karen Bieback, Susanne Kern, Harald Kluter, Hermann Eichler (2004), Critical Parameters for the Isolation of Mesenchymal Stem Cells from Umbilical Cord Blood, Stem Cells, 22:625–634 45 Kerry Rennie, Andrée Gruslin, Markus Hengstschläger, Duanqing Pei, Jinglei Cai, Toshio Nikaido, and Mahmud Bani-Yaghoub (2012), Applications of amniotic membrane and fluid in stem cell biology and regenerative medicine, Hindawi publishing corporation stem cells international, (12) 46 Kim J W., Kim S Y., Park S Y., Kim Y M., Kim J M., Lee M H., et al (2004), Mesenchymal progenitor cells in the human umbilical cord, Annals Hematology, 83(12): 733-738 47 Kim, S W., Han, H., Chae, G T., Lee, S H., Bo, S., Yoon, J H., et al (2006), Successful stem cell therapy using umbilical cord blood-derived multipotent stem cells for Buerger's disease and ischemic limb disease animal model, Stem Cells, 24(6): 1620-1626 48 Kögler Gesine, Wernet Peter, (2006), Pluripotent Stem Cells from Umbilical Cord Blood, In Stem Cell Transplantation, 73-89 49 L Boo, BSc, S Sofiah, MMed (O & G), L Selvaratnam, PhD, CC Tai, FRCS, Pingguan-Murphy B, PhD, T Kamarul, MS Ortho (2009), A Preliminary Study of Human Amniotic Membrane as a Potential Chondrocyte Carrier, Malaysian Orthopaedic Journal, 50 Lingying Liu., Yonghui Yu., Yusen Hou., Jiake Chai, Hongjie Duan, Wanli Chu, Haijun Zhang, Quan Hu, Jundong Du (2014), Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells Transplantation Promotes Cutaneous Wound Healing of Severe Burned Rats, PLoS ONE 9(2): e88348 doi:10.1371/journal.pone.0088348 51 Lujun Yang, Yuji Shirakata, Masachika Shudou, Xiuju Dai, Sho Tokumaru, Satoshi Hirakawa, Koji Sayama, Junji Hamuro, Koji Hashimoto (2006), New skin-equivalent model from de-epithelialized amnion membrane, Cell Tissue Res, 326: 69–77 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn 52 M F Rasulov, V T Vasilenko, V A Zaidenov, and N A Onishchenko (2006), Cell Transplantation Inhibits Inflammatory Reaction and Stimulates Repair Processes in Burn Wound, Cell Technologies in Biology and Medicine, Vol 2, No 3, pp 127 – 131 53 M Loss, V Wedler, W KuÈnzi, C Meuli-Simmen, V.E Meyer (2000), Artificial skin, split-thickness autograft and cultured autologous keratinocytes combined to treat a severe burn injury of 93% of TBSA, Burns, 26: 644 – 652 54 Ma Esther Rendal-Vázquez, Anahí San-Luis-Verdes, Ma Teresa Yebra PimentelVilar, Isabel López-Rodríguez, Nieves Domenech-García, Candido AndiónNúnez, Francisco Blanco García (2012), Culture of limbal stem cells on human amniotic membrane, Cell Tissue Bank, 13: 513 – 519 55 Markowicz M., Koellensperger E., Neuss S., Pallua N., (2005), Adult Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells as Feeder Cells for Human Keratinocytes: New Approaches in Bilayered Skin Replacements, In N Ashammakhi, R L Reis (Eds.), Topics in Tissue Engineering 2: 1-12 56 Mehrnoosh Saghizadeh, Michael A Winkler, Andrei A Kramerov, David M Hemmati, Chantelle A Ghiam, Slobodan D Dimitrijevich, Dhruv Sareen, Loren Ornelas, Homayon Ghiasi, William J Brunken, Ezra Maguen, Yaron S Rabinowitz, Clive N Svendsen, Katerina Jirsova, Alexander V Ljubimov (2013), A Simple Alkaline Method for Decellularizing Human Amniotic Membrane for Cell Culture, PLoS ONE, 8(11) 57 Mikako Sasaki, Riichiro Abe, Yasuyuki Fujita, Satomi Ando, Daisuke Inokuma and Hiroshi Shimizu (2008), Mesenchymal Stem Cells Are Recruited into Wounded Skin and Contribute to Wound Repair by Transdifferentiation into Multiple Skin Cell Type, The Journal of Immunology, 180:2581-2587 58 Miklús D Resch, Ursula Schloătzer-Schrehardt, Carmen Hofmann Rummelt, Renate Sauer, Claus Cursiefen, Friedrich E Kruse, Matthias W.Beckmann, and Berthold Seitz (2006), Adhesion structure of amniotic membranes Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn integrated into human corneas, Investigative ophthalmology & Visual science, 47 59 Nicholas E O’Connor, John B Mulliken (1981), Grafting Of Burns With Cultured Epithelium Prepared From Autologous Epidermal Cells, The Lancet, January 10, 1981, pp 75 – 78 60 Noriko Koizumi, Tsutomu Inatomi, Andrew J Quantock, Nigel J Fullwood, Atsuyoshi Dota, and Shigeru Kinoshita (2000), Amniotic Membrane as a Substrate for Cultivating Limbal Corneal Epithelial Cells for Autologous Transplantation in Rabbits, Cornea, 19(1): 65 – 71 61 Nousbeck, J., Sarig, O., Avidan, N., Indelman, M., Bergman, R., Ramon, M., et al (2010), Insulin-like growth factor-binding protein regulates keratinocyte proliferation, differentiation and apoptosis, Journal Investigative Dermatology, 130(2): 378-387 62 R A Musina, E S Bekchanova, A V Belyavskii, T S Grinenko, and G T Sukhikh (2007), Umbilical Cord Blood Mesenchymal Stem Cells, Bulletin of Experimental Biology and Medicine, Vol 143, No 1, 2007 63 R Barthel, D Aberdam (2005), Epidermal stem cells, JEADV , 19:405–413 64 Rheinwald, J G., Green, H (1975), Formation of a keratinizing epithelium in culture by a cloned cell line derived from a teratoma, Cell, 6(3): 317-330 65 Sam M Janes, Sally Lowell and Caroline Hutter (2002), Epidermal stem cells, Journal of Pathology, 197: 479–491 66 Silvia Díaz - Prado, Ma Esther Rendal -Vázquez, Emma Muinos - López, Tamara Hermida - Go1mez, Margarita Rodríguez - Cabarcos, Isaac Fuentes Boquete, Francisco J de Toro, Francisco J Blanco (2010), Potential use of the human amniotic membrane as scaffold in human articular cartilage repair, Cell Tissue Bank, 11: 183 – 195 67 Stacy-paul wilshaw, John Kearney, John fisher and Eileen Ingham (2008), Biocompatibility and Potential of Acellular Human Amniotic Membrane to Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Support the Attachment and Proliferation of Allogeneic Cells, Tissue engineering, 14 68 Tangni Gómez-Leduc, Magalie Hervieu, Florence Legendre, Mouloud Bouyoucef, Nicolas Gruchy, Laurent Poulain, Claire de Vienne, Michel Herlicoviez, Magali Demoor,& Philippe Galéra (2016), Chondrogenic commitment of human umbilical cord bloodderived mesenchymal stem cells in collagen matrices for cartilage engineering, Scientific Reports, 6:32786 69 Tatiana Taı´s Sibov, P Severino, L C Marti, L F Pavon, D M Oliveira, P R Tobo, A H Campos, A T Paes, E Amaro Jr, L F Gamarra, C A MoreiraFilho (2012), Mesenchymal stem cells from umbilical cord blood: parameters for isolation, characterization and adipogenic differentiation, Cytotechnology, 64:511–521 70 Tran CT, Huynh DT, Gargiulo C, Nguyen PT, Tran TT, Huynh MT, Nguyen TT, Filgueira L, Strong DM, (2011), In vitro culture of Keratinocytes from human umbilical cord blood mesenchymal stem cells: the Saigonese culture, Cell Tissue Bank, 12 (2), 125-33 71 Watt, F M (1983), Involucrin and other markers of keratinocyte terminal differentiation, Journal of Investigative Dermatology, 81(1) 100-103 72 Wu, Y., Chen, L., Scott, P G., Tredget, E E (2007), Mesenchymal stem cells enhance wound healing through differentiation and angiogenesis, Stem Cells, 25(10): 2648-2659 73 Yoshikawa, T., Mitsuno, H., Nonaka, I., Sen, Y., Kawanishi, K., Inada, Y., et al (2008), Wound therapy by marrow mesenchymal cell transplantation, Plastic Reconstructive & Aesthetic Surgery, 121(3),: 860-877 74 Yu M1, Xiao Z, Shen L, Li L (2004), Mid-trimester fetal blood-derived adherent cells share characteristics similar to mesenchymal stem cells but fullterm umbilical cord blood of Haematology, 124 : 666–675 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn does not, British Journal 75 Yu Qi, Dongsheng Jiang, Anca Sindrilaru, Agatha Stegemann, Susanne Schatz, Nicolai Treiber, Markus Rojewski, Hubert Schrezenmeier, Seppe Vander Beken, Meinhard Wlaschek, Markus Boă hm, Andreas Seitz, Natalie Scholz, Lutz Duă rselen, Juă rgen Brinckmann, Anita Ignatius, Karin ScharffetterKochanek (2013), TSG-6 Released from Intradermally Injected Mesenchymal Stem Cells Accelerates Wound Healing and Reduces Tissue Fibrosis in Murine Full-Thickness Skin Wounds, Journal of Investigative Dermatology 76 Wteve Navran, Colin McGuckin, Nicolas Forraz, Marc-Olivier Baradez, Christina Basford, Anne M Dickinson, Jeffrey D Hartgerink (2006), Embryonic-like stem cells from umbilica cord blood and potential for neural modeling, Acta Neurobiologiae Experimentalis, 66: 321–329 77 Xiaohong Zhang, Masako Hirai, Susana Cantero, Rodica Ciubotariu, Ludy Dobrila, Allen Hirsh, Koichi Igura, Hitoshi Satoh, Izuru Yokomi, Toshihide Nishimura, Satoru Yamaguchi, Kotaro Yoshimura, Pablo Rubinstein, and Tsuneo A Takahashi (2011), Isolation and Characterization of Mesenchymal Stem Cells From Human Umbilical Cord Blood: Reevaluation of Critical Factors for Successful Isolation and High Ability to Proliferate and Differentiate to Chondrocytes as Compared to Mesenchymal Stem Cells From Bone Marrow and Adipose Tissue, Journal of Cellular Biochemistry 112:1206–1218 TÀI LIỆU INTERNET (WEBSITE) 78 http://www.collaslab.com/research.php 79 http://www.hocvienquany.vn/Portal/BT351-nuoi cay da dieu tri vet thuong.html Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PHỤ LỤC Phụ lục Thông tin mẫu MCR màng ối thu nhận TT Số hiệu mẫu Ngày Thể tích máu (ml) MSC1 05/06/2016 X MSC2 21/06/2016 50 MSC3 25/07/2016 X Bánh rách MSC4 08/08/2016 X Không kẹp rốn MSC5 16/08/2016 50 MSC6 22/08/2016 20 MSC7 24/08/2016 X Máu đông MSC8 09/09/2016 X Cuống rốn nhỏ MSC9 12/09/2016 X Không kẹp rốn 10 MSC10 19/09/2016 30 11 MSC11 19/09/2016 50 12 MSC12 19/09/2016 45 13 MSC13 22/09/2016 45 14 MSC14 28/09/2016 35 15 MSC15 28/09/2016 30 16 MSC16 17/10/2016 X 17 MSC17 20/10/2016 40 18 MSC18 25/10/2016 50 19 MSC19 25/10/2016 50 20 MSC20 07/11/2016 20 21 MSC21 07/11/2016 35 22 MSC22 07/11/2016 X Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Ghi Bánh rách Không kẹp rốn Bánh rách 23 MSC23 10/11/2016 80 24 MSC24 16/11/2016 X 25 MSC25 16/11/2016 50 26 MSC26 23/11/2016 12 27 MSC27 23/11/2016 X 28 MSC28 01/12/2016 45 29 MSC29 23/12/2016 50 30 MSC30 17/04/2017 65 31 MSC31 25/04/2017 X 32 MSC32 12/05/2017 80 33 MSC33 17/05/2017 X 34 MSC34 04/07/2017 85 35 MSC35 04/07/2017 X 36 MSC36 04/07/2017 35 37 MSC37 11/07/2017 X Thể tích trung bình (n=23a) a Bánh rách Bánh rách Đông máu Bánh rách Cuống rốn nhỏ, trắng Cuống rốn nhỏ 45,7 ± 18,3 Loại trường hợp không thu MCR; X không thu nhận MCR Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Phụ lục Thông tin nuôi sơ cấp MSC TT Số hiệu mẫu Sơ cấp (ngày) MSC2 MSC5 27 MSC6 X MSC10 X MSC11 25 MSC12 29 MSC13 32 MSC14 20 MSC15 26 10 MSC17 20 11 MSC18 16 12 MSC19 13 MSC20 X 14 MSC21 17 15 MSC23 14 16 MSC25 17 MSC26 X 18 MSC28 11 19 MSC29 11 20 MSC30 X 21 MSC32 11 22 MSC34 23 MSC36 X Thời gian nuôi sơ cấp trung bình (n=17b) b Ghi Tán huyết Tán huyết Tán huyết 16 ± Loại trường hợp không phân lập MSC; X không phân lập MSC Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn