Ứng dụng di truyền phân tử tạo cá sóc medaka oryzias curvinotus chuyển gen phát sáng huỳnh quang phục vụ chương trình phát triển cá cảnh

SỞ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN TP HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO NGHIỆM THU ỨNG DỤNG DI TRUYỀN PHÂN TỬ TẠO CÁ SÓC – MEDAKA (Oryzias curvinotus) CHUYỂN GEN PHÁT SÁNG HUỲNH QUANG PHỤC VỤ CHƢƠNG TRÌNH PHÁT TRIỂN CÁ CẢNH Mã số: TS01/13-15 Chủ nhiệm đề tài: ThS Mai Nguyễn Thành Trung Cán thực hiện: ThS Mai Nguyễn Thành Trung ThS Nguyễn Thành Vũ ThS Nguyễn Thị Diễm Phƣơng Cố vấn chun mơn: TS Nguyễn Quốc Bình TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2016 MỤC LỤC I THÔNG TIN CHUNG VỀ ĐỀ TÀI II ĐẶT VẤN ĐỀ III TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3.1 Tình hình nghiên cứu cá cảnh chuyển gen giới Việt Nam 3.2 Tổng quan cá sóc Oryzias sp 3.2.1 Đặc điểm phân loại hình thái: 3.2.2 Sơ lƣợc cá sóc Việt Nam (Oryzias curvinotus) 11 3.3 Công nghệ chuyển gen cá 12 3.3.1 Chọn lọc cá dùng chuyển gen 12 3.3.2 Cấu trúc gen chuyển 13 3.3.3 Phƣơng pháp chuyển gen 16 3.3.4 Promoter dùng đề tài 17 3.4 Thiết lập trì dịng cá chuyển gen 18 3.4.1 Các khả xảy gen chuyển vào tế bào trứng thụ tinh 18 3.4.2 Xác định hòa nhập DNA gen chuyển vào gen 19 3.4.3 Xác định gen chuyển phƣơng pháp PCR 21 IV VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 22 4.1 Cá sóc 22 4.2 Chủng vi sinh vật 22 4.3 Thức ăn cho cá 22 4.4 Hóa chất 23 4.5 Thiết bị nghiên cứu 23 V PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 5.1 Phƣơng pháp thu thập, vận chuyển cá sóc 29 5.2 Phƣơng pháp hóa, sinh sản nhân tạo, theo dõi thời gian phát triển phơi vịng đời cá sóc (O curvinotus) 29 5.3 Phân lập đoạn DNA 16S từ cá sóc (Oryzias curvinotus) 31 5.3.1 Tách DNA tổng số cá sóc 31 5.3.2 Thiết kế mồi phân lập đoạn DNA mục tiêu từ cá sóc(O curvinotus) 31 5.3.3 Phản ứng PCR khuếch đại đoạn promoter mong muốn 32 5.3.4 Phƣơng pháp hóa biến nạp 34 i 5.3.5 Tạo dòng đoạn DNA đƣợc khuếch đại v o vector pJET1.2 35 5.3.6 Tinh plasmid kit GeneAll ExprepTM Plasmid SV (GeneAll) 37 5.4 Tạo vector tái tổ hợp mang gen phát hu nh quang đƣợc điều khiển promoter đặc hiệu cá sóc 38 5.4.1 Quy tr nh c t vector enzyme c t giới hạn 38 5.4.2 Tạo vector tái tổ hợp mang gen phát hu nh quang đƣợc điều khiển promoter đặc hiệu cá sóc 39 5.5 Vi tiêm tạo cá chuyển gen 40 5.5.1 Chuẩn bị trứng cho vi tiêm cá sóc 40 5.5.2 Chuẩn bị kim vi ti m 41 5.5.3 Thu trứng v tách trứng trƣớc vi ti m 43 5.5.4 Vi tiêm tạo cá sóc chuyển gen 43 5.6 Kiểm tra biểu trứng sau vi ti m 45 5.7 Kiểm tra di truyền gen chuyển đến hệ sau 46 VI KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 48 6.1 Thu thập, vận chuyển cá sóc 48 6.2 Thuần hóa, sinh sản nhân tạo, theo dõi thời gian phát triển phơi v vịng đời cá sóc (O curvinotus) 51 6.3 Phân lập đoạn DNA 16S từ cá sóc 54 6.4 Tạo vector tái tổ hợp mang gen phát hu nh quang đƣợc điều khiển promoter đặc hiệu cá sóc 57 6.5 Vi tiêm với plasmid pOCactaCFP tạo cá chuyển gen 61 6.6 Kiểm tra biểu cá chuyển gen thê hệ F0 62 6.7 Kiểm tra di truyền gen chuyển (phát hu nh quang) đến hệ sau 64 6.7.1 Di truyền gen chuyển từ hệ F0 đến hệ F1 64 6.7.2 Di truyền gen chuyển từ hệ F1 đến hệ F2 65 VII KẾT LUẬN V ĐỀ NGH 69 VIII TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 PH L C 76 ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Acta: alpha actin CFP: Cyan fluorescent protein Eukaryote: tế bào nhân chuẩn FPs: Fluorescent proteins Gen phát hu nh quang: gen mã hóa cho protein có khả phát hu nh quang GFP: Green fluorescent protein GMO: Genetically modified organism OTC: Oxytetracilin Prokaryote: tế b o nhân sơ RFP: Red fluorescent protein YFP: Yellow fluorescent protein iii DANH MỤC HÌNH Hình 3.1: Phân biệt cá sóc medaka (O latipes) v cá đực 11 Hình 3.2: Cấu tr c protein hu nh quang 16 Hình 4.1: Vector pOCactaCFP 24 Hình 4.2: Các loại thức ăn cho ấu trùng cá sóc 24 Hình 4.3: Hệ thống ấp trứng v ƣơng ni ấu trùng cá sóc Việt Nam (O curvinotus) 26 Hình 5.1: Sơ đồ bƣớc thực qui trình chuyển gen tạo cá sóc chuyển gen ban đầu hệ F0 mang gen chuyển acta 28 Hình 5.2: Sơ đồ mơ tả qui tr nh cho lai để tạo dòng cá chuyển gen F1 F2 29 Hình 5.3: Hệ thống bể cá sóc Việt Nam (O curvinotus) bố mẹ bố trí sinh sản 31 H n 4: ể nuôi cá sóc cho đ 41 H n 5: Cấu tạo máy k o kim PC-Puller 10 43 H n 6: Thiết bị vi ti m 44 H n 7: Phôi cá phát triển qua nhiều giai đoạn phát triển khác 45 Hình 6.1: Thu thập cá sóc Quảng Trị, Việt Nam 51 Hình 6.2: Phân biệt giới tính cá sóc (O curvinotus) đực 51 Hình 6.3: Các giai đoạn phát triển phơi cá sóc Việt Nam (O curvinotus) 54 Hình 6.4: Điện di tr n gel agarose kiểm tra sản phẩm PCR với DNA cá sóc cặp mồi F 16S-OC/R 16S-OC 54 Hình 6.5: Điện di tr n gel agarose kiểm tra sản phẩm PCR khuẩn lạc E coli DH5 mang vector pJET:OC16S cặp mồi F 16S-OC/R 16S-OC 55 Hình 6.6: Kết so sánh giải trình tự mẫu cá sóc (O curvinotus) Quảng Trị tạo dòng vào PJET1.2 với cá sóc (O curvinotus) Hồng Kơng 56 iv Hình 6.7: Kết so sánh giải trình tự mẫu cá sóc Quảng Trị tạo dịng cá sóc Cầu Diễn (Hà Nội) 57 H n 8: Điện di tr n gel agarose kiểm tra sản phẩm PCR phân lập promoter acta từ DNA cá sóc cặp mồi F OCacta/R Ocacta 58 H n 9: Điện di tr n gel agarose kiểm tra sản phẩm PCR khuẩn lạc E coli DH5 mang vector pJET:acta cặp mồi F OCacta R Ocacta 59 Hình 6.10: C t vector pJET:acta v vector pAmCyan1-C1 enzyme c t giới hạn NheI AgeI 60 Hình 6.11: Điện di tr n gel agarose kiểm tra sản phẩm PCR khuẩn lạc E coli DH5 mang vector pOCactaCFP cặp mồi F OCacta R CFP 61 Hình 6.12: Biểu phát hu nh quang cá sóc hệ F0 đƣợc vi tiêm với vector pOCactaCFP 63 Hình 6.13: Biểu phát hu nh quang cá sóc (O curvinotus) chuyển gen hệ F1 65 Hình 6.14: Cá sóc chuyển gen phát hu nh quang hệ F2 68 v DANH MỤC BẢNG Bảng 6.1: Tỉ lệ sống cá sóc (O curvinotus) sau đánh b t, dƣỡng, vận chuyển ni phịng thí nghiệm với xử lý khơng xử lý kháng sinh Oxytetracycline 50 Bảng 6.2: Sức sinh sản, tỉ lệ nở trứng cá sóc đƣợc bố trí độ mặn, xử lý hóa chất khác 53 Bảng 6.3: Thống kê tỉ lệ di truyền gen chuyển dòng cá từ hệ F0 đến F1 64 Bảng 6.4: Thống kê tỉ lệ di truyền gen chuyển dòng cá từ hệ F1 đến F2 67 vi TÓM TẮT Cá cảnh Việt Nam v phát triển cách đa dạng với phƣơng pháp lai tạo cá khác Trong phƣơng pháp chuyển gen cá phát sáng hu nh quang phƣơng pháp vi ti m mang lại nhiều hứa hẹn cho ngành cá cảnh Việt Nam Cá sóc Việt Nam (Oryzias curvinotus) đƣợc hóa cho sinh sản nhân tạo thành cơng phịng thí nghiệm Trung tâm Cơng nghệ Sinh học TP HCM Sau phân lập đƣợc promoter alpha actin (acta) cá sóc tạo đƣợc vector pOCactaCFP đƣợc điều khiển promoter Nhóm nghiên cứu thực phƣơng pháp vi tiêm vector pOCactaCFP vào phơi trứng cá sóc tế bào, tạo cá hệ F0 (sau vi tiêm) biểu ánh sáng hu nh quang màu lục lam Phép lai phân tích cá biểu phát hu nh quang hệ F0 tạo đƣợc cá chuyển gen hệ F1, F2 có biểu mạnh tồn thân với hệ số phân li 1:1 Tính trạng gen chuyển đƣợc trì bền vững đến hệ F2 cho thấy dòng cá chuyển gen mang copy genome cá thể hệ sau dịng chuyển gen có biểu phát hu nh quang giống Thành công đề tài tiền đề phát triển đ n cá chuyển gen quy mô thƣơng mại phục vụ ngành công nghiệp cá cảnh cỉa Thành Phố vii viii I THÔNG TIN CHUNG VỀ ĐỀ TÀI T n đề tài: Ứng dụng di truyền phân tử tạo cá sóc – Medaka (Oryzias curvinotus) chuyển gen phát sáng hu nh quang phục vụ chƣơng tr nh phát triển cá cảnh (Mã số: TS01/13-15) Cơ quan quản lý: Trung tâm Công nghệ Sinh học TP.HCM Đơn vị chủ trì: Phịng Cơng Nghệ Sinh học Thủy sản Cơ quan phối hợp chính: (nếu có) Chủ nhiệm đề tài: ThS Mai Nguyễn Thành Trung Cán bộ/Nhóm thực hiện: ThS Mai Nguyễn Thành Trung, ThS Nguyễn Thành Vũ, ThS Nguyễn Thị Diễm Phƣơng Cố vấn chuyên môn: TS Nguyễn Quốc Bình Thời gian thực hiện: năm (Từ 2013 đến 2015) Kinh phí đƣợc duyệt: 650.000.000 VNĐ Kinh phí sử dụng: 650.000.000 VNĐ 10 Các nội dung nghiên cứu thực đƣợc so với đề cƣơng đăng ký zebrafish (Danio rerio) using a green fluorescent protein (GFP) and growth hormone cDNA transgene co-injection strategy Genet Mol Biol 30:31–36 13 Gómez-Chiarri M, Kirby V, Powers D (1999) Isolation and Characterization of an Actin Promoter from the Red Abalone (Haliotis rufescens) Mar Biotechnol (NY) 1:269–278 14 Gong Z, Ju B, Wan H (2001) Green fluorescent protein (GFP) transgenic fish and their applications Genetica 111:213–25 15 Gong Z, Wan H, Tay TL, et al (2003) Development of transgenic fish for ornamental and bioreactor by strong expression of fluorescent proteins in the skeletal muscle Biochem Biophys Res Commun 308:58–63 16 Gunning P, Ponte P, Blau H, Kedes L (1983) alpha-skeletal and alpha-cardiac actin genes are coexpressed in adult human skeletal muscle and heart Mol Cell Biol 3:1985–95 17 Hallerman E (2004) Glofish, the first GM animal commercialized: profits amid controversy Inf Syst Biotechnol http://www.isb.vt.edu/articles/jun0405.htm 18 Hellweg M (2013) The Ricefish: An Odd and Interesting Group Trop Fish Hobbyist http://www.tfhmagazine.com/details/articles/the–ri 19 Herman IM (1993) Actin isoforms Curr Opin Cell Biol 5:48–55 20 Hew Choy L, Fletcher Garth L (2001) Gene construct for production of transgenic fish 1–42 21 Higashijima S, Okamoto H, Ueno N, et al (1997) High-Frequency Generation of Transgenic Zebrafish Which Reliably Express GFP in Whole Muscles or the Whole Body by Using Promoters of Zebrafish Origin Dev Biol 192:289–299 22 Hsiao CD, Hsieh FJ, Tsai HJ (2001) Enhanced expression and stable transmission of transgenes flanked by inverted terminal repeats from adeno-associated virus in zebrafish Dev Dyn 220:323–36 23 Huber JH (1996) Updated checklist of taxonomic names, collecting localities and bibliographic references of oviparous Cyprinodont fishes (Atherinomorpha, Pisces) Sociộtộ Franỗaise d Ichtyologie Mus um Natl d'Histoire Nat Paris Fr 399 24 Iwamatsu T (1965) On fertilizability of pre-ovulation eggs in the medaka, Oryzias latipes Embryologia (Nagoya) 8:327–336 25 Iwamatsu T (2004) Stages of normal development in the medaka Oryzias latipes Mech Dev 121:605–18 26 Khrestchatisky M, Fontes M (1987) There is an alpha-actin skeletal muscle-specific gene in a salamander (Pleurodeles waltlii) J Mol Biol 193:409–412 71 27 Kinoshita M (1995) Cytoplasmic microinjection of DNA into fertilized medaka (Oryzias latipes) eggs Fish Biol J Medaka 7:59–64 28 Kinoshita M, Murata K, Naruse K, Tanaka M (2009) Medaka: Biology, Management, and Experimental Protocols 1–445 29 Kottelat M (2001) Freshwater fishes of northern Vietnam A preliminary check-list of the fishes known or expected to occur in northern Vietnam with comments on systematics and nomenclature 1–184 30 Lõhmus M, Raven P a, Sundström LF, Devlin RH (2008) Disruption of seasonality in growth hormone-transgenic coho salmon (Oncorhynchus kisutch) and the role of cholecystokinin in seasonal feeding behavior Horm Behav 54:506–13 31 Maclean N, Laight RJJ (2000) Transgenic fish: an evaluation of benefits and risks Fish Fish 1:146–172 32 Marini NJ, Benbow RM (1991) Differential compartmentalization of plasmid DNA microinjected into Xenopus laevis embryos relates to replication efficiency Mol Cell Biol 11:299–308 33 Mayer Y, Czosnek H, Zeelon PE, et al (1984) Expression of the genes coding for the skeletal muscle and cardiac actins in the heart Nucleic Acids Res 12:1087–1100 34 Morita T (2000) Amino acid sequences of alpha-skeletal muscle actin isoforms in two species of rattail fish, Coryphaenoides acrolepis and Coryphaenoides cinereus Fish Sci 66:1150–1157 35 Nam YK, Maclean N, Hwang G, Kim DS (2008) Autotransgenic and allotransgenic manipulation of growth traits in fish for aquaculture: a review J Fish Biol 72:1– 26 36 Ngô Sỹ Vân (2009) Quản Lý Nguồn Lợi Thủy Sản Ở Hồ Ba Bể Dựa Trên Cộng Đồng 1–10 37 Nguyễn Văn Cƣờng, Thẩm Thị Thu Nga Đậu Hùng Anh (2005) Nghiên cứu tạo cá Chép (Cyprinus carpio) mang gen hormone sinh trƣởng tái tổ hợp có tốc độ lớn nhanh, hiệu suất sử dụng thức ăn cao 1–123 38 Nhật Linh (2013) Tình hình ni tiêu thụ cá nƣớc ngọt, cá biển Việt Nam, 10 tháng đầu năm 2013 http: www.fistenet.gov.vn/ 39 Niemann H, Kues WA (2007) Transgenic farm animals: an update Reprod Fertil Dev 19:762 doi: 10.1071/RD07040 40 Pan X, Zhan H, Gong Z (2008) Ornamental expression of red fluorescent protein in transgenic founders of white skirt tetra (Gymnocorymbus ternetzi) Mar Biotechnol 10:497–501 doi: 10.1007/s10126-008-9094-9 41 Parenti L (2012) Oryzias curvinotus IUCN 2013 IUCN Red List Threat Species Version 20132 www.iucnredlist.org 72 42 Parenti LR (2008) A phylogenetic analysis and taxonomic revision of ricefishes, Oryzias and relatives (Beloniformes, Adrianichthyidae) Zool J Linn Soc 154:494–610 doi: 10.1111/j.1096-3642.2008.00417.x 43 Porazinski SR, Wang H, Furutani-Seiki M (2010) Microinjection of medaka embryos for use as a model genetic organism J Vis Exp 5–8 doi: 10.3791/1937 44 Sasado T, Tanaka M, Kobayashi K, et al (2010) The National BioResource Project Medaka (NBRP Medaka): an integrated bioresource for biological and biomedical sciences Exp Anim 59:13–23 45 Schwartz K, Bastie D De, Bouveret P, et al (1986) Alpha-skeletal muscle actin mRNA s accumulate in hypertrophied adult rat hearts Circ Res 551–555 doi: 10.1161/01.RES.59.5.551 46 Sin FYT (1997) Transgenic fish Rev Fish Biol Fish 7:417–441 doi: 10.1023/A:1018452214763 47 Song HY, Nam YK, Bang IC, Kim DS (2009) Embryogenesis and early ontogenesis of a marine medaka, Oryzias dancena Korean J Ichthyol 21:227–238 doi: 2010.07.21/2010.07.21 48 Stewart CN (2006) Go with the glow: fluorescent proteins to light transgenic organisms Trends Biotechnol 24:155–62 49 Stuart GW, McMurray J V, Westerfield M (1988) Replication, integration and stable germ-line transmission of foreign sequences injected into early zebrafish embryos Development 103:403–12 50 Tan A, Tanaka H, Tamura T, Shiotsuki T (2005) Precocious metamorphosis in transgenic silkworms overexpressing juvenile hormone esterase Proc Natl Acad Sci U S A 102:11751–6 51 Tsai H (2008) Use of Transgenic Fish Possessing Special Genes as Model Organisms and Potential Applications J Genet Mol Biol 9:22–38 52 Uwa H, Parenti L (1988) Morphometric and meristic variation in ricefishes, genus Oryzias: a comparison with cytogenetic data Japanese J Ichthyol 35:159–166 53 Vandekerckhove J, Bugaiskyv G, Buckingham M (1986) Simultaneous expression of skeletal muscle and heart actin proteins in various striated muscle tissues and cells Society 1838–1843 54 Vandekerckhove J, Weber K (1978) At least six different actins are expressed in a higher mammal: an analysis based on the amino acid sequence of the aminoterminal tryptic peptide J Mol Biol 126:783–802 doi: 10.1016/00222836(78)90020-7 55 Vũ Cẩm Lƣơng (2011) Đánh giá tiềm mặt h nh thái để phát triển th nh đối tƣợng nuôi cảnh lo i cá nƣớc hoang dã Hội nghị khoa học thủy sản lần Trƣờng Đại học Cần Thơ Hồ Chí Minh, pp 417–427 73 56 Vu NT, Kim BS, Kim DS, Nam YK (2011) Phenotypic characteristics of transgenic marine medaka (Oryzias dancena) models carrying different fluorescent transgenes Symp Korea Fed Fish Sci 2011 p 27 57 Wikipedia (2013) Ricefish Wikipedia® http://en.wikipedia.org/wiki/Ricefish 58 Zhu H, Wang G, Li G, et al (2005) Ubiquitous expression of mRFP1 in transgenic mice Genesis 42:86–90 TP Hồ Chí Minh, ngày 74 tháng năm 2016 PHĨ GIÁM ĐỐC CHUN MƠN TRƢỞNG PHỊNG CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI (chữ ký, họ tên) (chữ ký, họ tên) (chữ ký, họ tên) TS Nguyễn Đăng Quân TS Võ Nguyễn Thanh Thảo ThS Mai Nguyễn Thành Trung GIÁM ĐỐC (chữ ký, đóng dấu) TS ƣơng Ho Xô 75 PHỤ LỤC P ụ lục 1: So sánh tƣơng đồng promoter acta lo i Oryzias latipes (AB015886) v Oryzias dancena (JQ905608) Range 1: 422 to 2466 Score Expect Identities Gaps Strand 1602 bits(867) 0.0 1742/2143(81%) 146/2143(6%) Plus/Plus AB015886 61 AATATGTAAAGTGTTCAACCATGGCCAGGCACTGCTTAACCAAAGATTTTAGTTCAT-AT |||||| ||||| ||||||||||| ||| |||||||| | 119 |||| ||| |||| || || JQ905608 422 AATATGAAAAGTATTCAACCATGGTCAGTCACTGCTTCATAAAAGTTTTAAGTT-ATAAT 480 AB015886 120 TTGTTATGAGGATGAGGGCAAATTGTGCAtttttgatca-tttttctgcatccagctttg 178 |||||||||||| || |||||||| || || |||| | |||||||| | | JQ905608 481 TTGTTATGAGGAAGAAGGCAAATTATGTATATTTGTAAAGTTTTTCTG G -T- 530 AB015886 179 attttagttcttttttgttttATTCTGATAAAATTGACATTTAATTGTCAATTTAAATGT 238 |||| ||| ||| |||||||||||||||||| ||||||||||| || | ||| JQ905608 531 -TTTTGGTT-TTTATTGTTTTATTCTGATAAAGTTGACATTTAA ATGT -TGT 579 AB015886 239 T-AGGCCTTGTGGTACTTTCATCAAAAGCTTAAACTTGTTCCTAGATGTCATCATAATTG 297 | ||| | ||| ||||||||||||||||| |||||||||| ||| |||||||||||||| JQ905608 580 TCAGGAC-TGTAGTACTTTCATCAAAAGCCCAAACTTGTTCATAGTTGTCATCATAATTG 638 AB015886 298 TCATATTTTGTGTATTTGCTCCCAATTAAATATTTCCATTGACCAAATCAGACATGCGTC 357 | | || ||||||||| | ||||||||||| |||||||||||||||||||| | || JQ905608 639 TAAAATGTTGTGTATTCTCCCCCAATTAAATGGACCCATTGACCAAATCAGACATACCTC 698 AB015886 358 TGCCTGCTCCTCTGAGACTCCTCCCTACTTTGAGTTTATAATAACCACATTGGCATCTCC 417 |||||||||||| | ||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||| JQ905608 699 TGCCTGCTCCTCCGTGACTCCTCCCTTCTTTGAGTTTATAATAACCACATTGGCATCTCC 758 AB015886 418 ACTTCCACCAATGCCCTCACACTGCAACACACCAGCATGGACACAAATAGCCACACCCTC 477 |||||||||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| JQ905608 759 ACTTCCACCAATGCCCTCGCACTGCAACACACCAGCATGGACACAAATAGCCACACCCTC 76 818 AB015886 478 CCCAATTCTCTCTCACACGCACGCACGCGCAACAGCACCCCTCCTGCATAAGAGTTATAA |||||||||||| | || |||||| | 537 |||| ||||||||||||||||||||||| JQ905608 819 CCCAATTCTCTC-C-CA CACGCA -G -CAGCCCCCCTCCTGCATAAGAGTTATAA 868 AB015886 538 TTAATCCAATCGCT-CTGTGACAGGGCAGAGCACCCCCTGCACATATGGTTTCAGCTGCT 596 |||||||| |||| | ||||||| ||||||||||||||||||| |||| |||||||||| JQ905608 869 TTAATCCAGCCGCTCCAGTGACAGAGCAGAGCACCCCCTGCACACATGGCTTCAGCTGCT 928 AB015886 597 GGCAGTACAAACTCTGACCAGTCACTGTTAGGAGCCATGTGCTCTGCAGATCTGCAAGCT 656 ||||||||||||||||||||||| |||| ||||||||| |||||||||| | ||||| | JQ905608 929 CGCAGTACAAACTCTGACCAGTCAGTGTTGGGAGCCATGCGCTCTGCAGAACAGCAAGAT 988 AB015886 657 TTGGAGGTAATTAACGGATAGTGCGTCAAAAAACGCAGAAGAGTTTGTGATAAATATGTG 716 |||| ||||||| ||| ||||||| || |||| || ||||| |||| |||| |||| JQ905608 989 TTGGGTGTAATTACAGGAGAGTGCGT-AATAAACTTGGAGGAGTTGGTGAAAAATCTGTG 1047 AB015886 717 CACAATGATTGGTGTGGTAATGATTTGTTGTGGGTTAAATAGACTGATGGTTTTCTCATA 776 | |||| | | | || | ||| | | || |||| | ||||||||||| |||||| JQ905608 1048 CGCAAT-A -AT-G AT-AATTG-T-T-GGCTAAACACACTGATGGTTTGCTCATA 1094 AB015886 777 GACTGCAGTTACATTCAAAGTCATCTACTTGCAATATTTAGTTAATGCTGCCATTCTGAA 836 |||||||| |||| || |||||||| | |||||||| |||||| || ||||||||| JQ905608 1095 GACTGCAGCAACATAAAATGTCATCTATTCACAATATTTGCTTAATGTTGTCATTCTGAA 1154 AB015886 837 ACACAATAGATTAAACAATTTAGCAGTTAAATAAACCACGTGATTACGTGCATAATGAGG 896 ||| | ||| |||||||| || || |||| |||||| || |||||||| ||| | | JQ905608 1155 ACA-GAGAGACTAAACAATCCAGTGGTGAAATGAACCACTTGTTTACGTGCGTAAAAACG 1213 AB015886 897 CTCAAACTGGATCACTG-TTT-GTCATTGATCAGCATTAATCAGGAATCATGGGTTGTTT 954 | |||| |||| || | ||| ||||| ||||||||||||||| ||| | ||| | || JQ905608 1214 CACAAATTGGA ACGGTTTTAGTCATGGATCAGCATTAATCATGAAACCTGGCCT-CTT 1270 AB015886 955 AATTGGGACCT-GTCAGTCACCGCCTCTCATTAGCTCTCTGTGTGGCCTAAATCTGTTCA 1013 ||||||| ||| ||| |||||||||||||||||||||||| |||| |||||||||||||| JQ905608 1271 AATTGGG-CCTCGTCCGTCACCGCCTCTCATTAGCTCTCTCTGTGTCCTAAATCTGTTCA 1329 AB015886 1014 GATGAGGGAAGCGTTTTCCCATTTTAAGGCTCCATAAGGCCTACAAGCCGCAAATCCATA 1073 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| JQ905608 1330 GATGAGGGAAGCGTTTTCCCATTTTAAGGCTCCATAAGGCCTACAAGCCGCAAATCCATA 77 1389 AB015886 1074 ACCCCGCTGGCCAGCAACTGGCGTCTCCCCTAGAAAcccccccAGTGGAGTGTGCACACC |||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||| ||| 1133 ||||||||| JQ905608 1390 ACCCCGCTGGCCAGCAACTGGCGTCTCCCCTAGAAA-CCCCCCAGCGGACCGTGCACACC 1448 AB015886 1134 TTATACGGCCGTTTAGGTGGGACGACGAGGCTTGATGGGAGGTCAAAGCGACAGTTCCAT 1193 |||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| JQ905608 1449 TTATACGGCCGTCTAGGTGGGACGACGAGGCTTGATGGGAGGTCAAAGCGACAGTTCCAT 1508 AB015886 1194 TTATGGAATCACGTTTGATCACCCCAACCCCCTCCCATGGAAGCTGATGGACGGAGCTTC 1253 |||||||||||||||||||| ||||| || |||||| |||||||||| |||||||||||| JQ905608 1509 TTATGGAATCACGTTTGATC-CCCCA-CCACCTCCC-TGGAAGCTGACGGACGGAGCTTC 1565 AB015886 1254 CTCCTTGCGCACAGTGGGGCGCGCCTCCTTACTGCACCCCACATCCA CCCACCCACCC 1311 ||| |||| | | |||||||||||||| ||| ||||||||| ||| ||||||||| | JQ905608 1566 CTCTACGCGCTCTGAGGGGCGCGCCTCCTCACTACACCCCACAGCCACCCCCACCCACTC 1625 AB015886 1312 GGCCTGCAGCGGCCTGTCAGCATCCTAATATGGCAGAGGGCCGGGATGGGGGCCAGTGCT 1371 || |||| | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||| JQ905608 1626 GGGCTGCCTCTGCCTGTCAGCATCCTAATATGGCAGAGGGCCGGGATGGGGGCCATTGCT 1685 AB015886 1372 GAGGGCAATGAATGGTGGAAGTCGGGTATAAAAGGCGGAGAGGCTGCAGCTGGGACCGTA 1431 ||||||| ||||||||||||||||||||||||||| ||| ||||||||| ||||| ||| JQ905608 1686 GAGGGCAGTGAATGGTGGAAGTCGGGTATAAAAGGTGGACAGGCTGCAGTCGGGACGGTA 1745 AB015886 1432 GCTGGTTCAGCAGCAGCACTGGTTGGGTCGTTCTCTCCGAGCCGCAGACAAAAACACCTA 1491 ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||| |||||||||| JQ905608 1746 GCTGGTTCAGCAGCAGCACTGGTTGGGTCGTTCTCTCCGAGACGCAGAC-AAAACACCTA 1804 AB015886 1492 AGGTAAGAGACCCTGCAGGGACCTGCCACTCAGGAAGGAAGCCAGAGGAGGCCGTAGGCA 1551 ||||| |||||||||||||||| ||| ||||||| ||||||||||||||| JQ905608 1805 AGGTA AGACCCTGCAGGGACCCGCCGCTCAGGA AGGAGGCCGTAGGCA 1852 AB015886 1552 GAGCAGCTCACCCACAGGAGAAAAGGGCCAGGCACAGGTGGACTACAGGACCAGATACTG 1611 |||||| ||| |||||| || ||||||||||||||||||||||||||||||||||||| JQ905608 1853 GAGCAGTTCATCCACAGAGGAGAAGGGCCAGGCACAGGTGGACTACAGGACCAGATACTC 1912 AB015886 1612 CTCAAAGGGAATATATAGTCAACAGGATAGGAAAGCTTGAAGACATCTGAGGAGAAGAAA 1671 ||||| |||| |||||||| ||||||||| 78 | |||||||||||||||||| ||| JQ905608 1913 CTCAA-GGGA ATATAGTCCGCAGGATAGGCCAATTTGAAGACATCTGAGGAGGAGAGG 1969 AB015886 1672 CTGACTGATAGGATTTACAGATCTGGAAATCAATACAATAATGTG-TTCCTCAAGTTCAG 1730 |||||||||| |||||||| | |||||| |||| |||||||||||||| JQ905608 1970 CTGACTGATA CTGGAAATTACTACAATTATGTTATTCCTCAAGTTCAG 2017 AB015886 1731 TTTTCCTTTGCATAACTGGAAAATAATCATAAATTATTTTTA-TTT -C-AA-TTTaaa 1784 | ||| |||| || |||| | || ||| | || ||| ||| | || ||| || JQ905608 2018 TCTTCTTTTGTGAAAGTGGAGATTACTCAGGATTTGTTTCACGTTTTAGCTAACTTTCAA 2077 AB015886 1785 aaaaaGTTTGTATGTGTCGTAGAGAAAGCGTGTA GTTTGGTTGTGTAGAGTAAGTTGG 1842 | | | | | |||| | |||||||| ||||| ||||||| ||||| | | ||| JQ905608 2078 ACTTA-TAT-T-TGTGGGGAAGAGAAAGTGTGTATAGTTTGGTGATGTAGTG-AT-TTGA 2132 AB015886 1843 GAAA-TA AT CCATTTAGCTCACAAAATAAGAGAA -G A-AAAAAG-G 1884 ||| || || |||| | ||||||||| ||| || | | |||||| | JQ905608 2133 AAAAATATTGGATGTCCATATTTCTCACAAAAGCAGATAAATTCTGCGAGAAAAAGAGGA 2192 AB015886 1885 CTTACTATAATTTTGGTTGAGTTTTTAAATGTTGTATTTTTTATGAATTAGGCGTGATGC 1944 |||| | | ||||||||| | | | || | || | | || || | || ||||||||||| JQ905608 2193 CTTAATTTCATTTTGGTTAAATGT AA-T-TT-TCTGTTATA-G-ATCAGGCGTGATGC 2245 AB015886 1945 TGCCAGTTTATTGTTTACACAAC AAACCAAGATGTTCCTCTTCTTTT-GGCATT 1997 || |||||| ||||||||||||| |||||||||||||| || || |||||| JQ905608 2246 TGTCAGTTTGTTGTTTACACAACAAACCAAAACCAAGATGTTCAAATTTTTGGGGGCATT 2305 AB015886 1998 ATTTATTTT-TAATGCATGTTAATGATACAGC-ATTGCTTAAATGAAATGGATTTGATTT 2055 ||| |||| || |||| |||| || ||| |||| | |||| ||| |||| | ||| JQ905608 2306 GTTTGTTTTCTAGAGCATATTAAATATGTAGCTATTGTTAAAATTAAAAAGATTAGGTTT 2365 AB015886 2056 AGTTTAGGTTTAGAAGTGTGGCACATTTCTT-T-CTGGA-GACATTTGTGCTGTCCAGCT 2112 ||||| ||||||||||||||||||||| ||| | | | ||| | | | | || JQ905608 2366 AGTTTGGGTTTAGAAGTGTGGCACATT-CTTGTTCCAAAAGACTGTCAAAC-GCGCGCCT AB015886 2113 CACACCTTCCATCTTCTTCCTCTCTTCTCCCATAGAAGCCATC 2155 |||| |||||||||| |||||||||||| ||| |||||||||| JQ905608 2424 CACATCTTCCATCTTTTTCCTCTCTTCTTCCACAGAAGCCATC 79 2466 2423 P ụ lục 2: Kết giải tr nh tự promoter acta phân lập từ cá sóc (Acession number KF764703) GACTCCTCCCTACTTTGAGTTTATAATAACTACATTGGCATCTCCACTTCCACCAATGCCCTCACACTGCGACACACCAGCATGGA CACAAATAGCCACACCCTCCCTGATTCTCTCTCACACGCACGCACACGCAACAGCACCCCTCCTGCATAAGAGTTATAATTAATCC AATCGCTCTGTGACAGGGCAGAGCACCCCCTGCACATATGGTTTCAGCTGCTGGCAGTACAAACTCTGACCAGTCAGTGTTAGGAG CCATGTGCTCTGCAGATCCGCAAGCTTTGGAGGTAAATAACGGATAGTGCGTAAAAAACGCGGAGGAGTTTGTGAAAAATCAGTGC ACAATCTTAGTGTGATAATGATTTCCTGTGGATTAAATAACTGATGGTTTTCTCATAGACTGCAGCTACATGAAATGTCATCAACT TACAATATTTACTTAATTCTGCCATTCTGAAACGCCAAAGATGAAACAATCAGTTAAATAAACCATGTGATTATGTGCGTAATGAG GCTTAAATTGGATCAGTTTTGGTCGTGGATCAGCATTAATCAGGAATCATGGGCTCTTAATTGGGACCTGTCAGTCACCGCCTCTC ATTAGCTCTCTCTGTGGCCTAAATCTGTTCAGATGATGGAAGCGTTTTCCCATTTTAAGGCTCCATAAGGCCTACAAGCCGCAAAT CCATAACCCCGCTGGCCAGCAACTGGCGTCTCCCCTAGAAACCCCCCAGTGGACCGTGCACACCTTATACGGCCGTTTAGGTGGGA CGACGAGGCTTGATGGGAGGTCAAAGCGACAGTTCCATTTATGGAATCACGTTTGATCCCCCCCCCCCACACACACCCACCCCTGG AAGCTGACGGACGGAGCTTCCTCCTCGCGCACTGTGGGGCGCGCCTCTTCACTGCACCCCACATCCACCCACCCACCCACCCGGGC TGCAGCGGCCTGTCAGCATCCTAATATGGCAGAGGGCCGGGATGGGGGCCAGTGCTGAGGGCAGTGAATGGTGGAGGTCGGGTATA AAAGGTGGAGAGGCTGCAGCCGGGACGGTAGCTGGTTCACCACCACACTGGTT P ụ lục 3: So sánh tƣơng đồng promoter acta lo i cá sóc (Oryzias curvinotus) (KF764703) v cá medaka (Oryzias latipes) (AB015886) Range 1: 373 to 1455 Score Expect Identities Gaps 1531 bits(829) 0.0 1010/1095(92%) 22/1095(2%) Plus/Plus KF764703 Strand GACTCCTCCCTACTTTGAGTTTATAATAACTACATTGGCATCTCCACTTCCACCAATGCC 60 |||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||| AB015886 373 GACTCCTCCCTACTTTGAGTTTATAATAACCACATTGGCATCTCCACTTCCACCAATGCC 432 KF764703 61 CTCACACTGCGACACACCAGCATGGACACAAATAGCCACACCCTCCCTGATTCTCTCTCA 120 |||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||| AB015886 433 CTCACACTGCAACACACCAGCATGGACACAAATAGCCACACCCTCCCCAATTCTCTCTCA 492 KF764703 121 CACGCACGCACACGCAACAGCACCCCTCCTGCATAAGAGTTATAATTAATCCAATCGCTC 180 ||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AB015886 493 CACGCACGCACGCGCAACAGCACCCCTCCTGCATAAGAGTTATAATTAATCCAATCGCTC 552 KF764703 181 TGTGACAGGGCAGAGCACCCCCTGCACATATGGTTTCAGCTGCTGGCAGTACAAACTCTG 240 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AB015886 553 TGTGACAGGGCAGAGCACCCCCTGCACATATGGTTTCAGCTGCTGGCAGTACAAACTCTG 80 612 KF764703 241 ACCAGTCAGTGTTAGGAGCCATGTGCTCTGCAGATCCGCAAGCTTTGGAGGTAAATAACG 300 |||||||| ||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||| ||||| AB015886 613 ACCAGTCACTGTTAGGAGCCATGTGCTCTGCAGATCTGCAAGCTTTGGAGGTAATTAACG 672 KF764703 301 GATAGTGCGT-AAAAAACGCGGAGGAGTTTGTGAAAAATCAGTGCACAAT-CTTAGTGTG 358 |||||||||| ||||||||| || |||||||||| |||| ||||||||| || ||||| AB015886 673 GATAGTGCGTCAAAAAACGCAGAAGAGTTTGTGATAAATATGTGCACAATGATTGGTGTG 732 KF764703 359 ATAATGATTTCCTGTGGATTAAATA-ACTGATGGTTTTCTCATAGACTGCAGCTACATGA 417 ||||||||| ||||| ||||||| |||||||||||||||||||||||||| ||||| AB015886 733 GTAATGATTTGTTGTGGGTTAAATAGACTGATGGTTTTCTCATAGACTGCAGTTACATTC 792 KF764703 418 AATGTCATCAACTTACAATATTTACTTAATTCTGCCATTCTGAAACGCCAAAGATGAAAC 477 || |||||| |||| ||||||||| ||||| ||||||||||||||| | | |||| |||| AB015886 793 AAAGTCATCTACTTGCAATATTTAGTTAATGCTGCCATTCTGAAACACAATAGATTAAAC 852 KF764703 478 AA T CAGTTAAATAAACCATGTGATTATGTGCGTAATGAGGCTTAAATTGGATCAGT 533 || | ||||||||||||||| ||||||| |||| |||||||||| ||| ||||||| | AB015886 853 AATTTAGCAGTTAAATAAACCACGTGATTACGTGCATAATGAGGCTCAAACTGGATCACT 912 KF764703 534 TTTGGTCGTGGATCAGCATTAATCAGGAATCATGGGCT-CTTAATTGGGACCTGTCAGTC 592 || ||| | |||||||||||||||||||||||||| | |||||||||||||||||||| AB015886 913 GTTTGTCATTGATCAGCATTAATCAGGAATCATGGGTTGTTTAATTGGGACCTGTCAGTC 972 KF764703 593 ACCGCCTCTCATTAGCTCTCTCTGTGGCCTAAATCTGTTCAGATGATGGAAGCGTTTTCC 652 ||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||| ||||||||||||| AB015886 973 ACCGCCTCTCATTAGCTCTCTGTGTGGCCTAAATCTGTTCAGATGAGGGAAGCGTTTTCC 1032 KF764703 653 CATTTTAAGGCTCCATAAGGCCTACAAGCCGCAAATCCATAACCCCGCTGGCCAGCAACT 712 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AB015886 1033 CATTTTAAGGCTCCATAAGGCCTACAAGCCGCAAATCCATAACCCCGCTGGCCAGCAACT 1092 KF764703 713 GGCGTCTCCCCTAGAAA-CCCCCCAGTGGACCGTGCACACCTTATACGGCCGTTTAGGTG 771 ||||||||||||||||| |||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||| AB015886 1093 GGCGTCTCCCCTAGAAACCCCCCCAGTGGAGTGTGCACACCTTATACGGCCGTTTAGGTG 1152 KF764703 772 GGACGACGAGGCTTGATGGGAGGTCAAAGCGACAGTTCCATTTATGGAATCACGTTTGAT 831 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AB015886 1153 GGACGACGAGGCTTGATGGGAGGTCAAAGCGACAGTTCCATTTATGGAATCACGTTTGAT 81 1212 KF764703 832 cccccccccccACACACACCCACCCCTGGAAGCTGACGGACGGAGCTTCCTCCTCGCGCA | |||| 891 | || | ||| ||| |||||||||| ||||||||||||||||| ||||| AB015886 1213 CACCCC -A-AC-C-CCCTCCCATGGAAGCTGATGGACGGAGCTTCCTCCTTGCGCA 1264 KF764703 892 CTGTGGGGCGCGCCTCTTCACTGCACCCCACATCCACCCACCCACCCACCCGGGCTGCAG 951 | |||||||||||||| | |||||||||||||| |||||||||||||||| |||||| AB015886 1265 CAGTGGGGCGCGCCTCCTTACTGCACCCCACAT CCACCCACCCACCCGGCCTGCAG 1320 KF764703 952 CGGCCTGTCAGCATCCTAATATGGCAGAGGGCCGGGATGGGGGCCAGTGCTGAGGGCAGT 1011 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| | AB015886 1321 CGGCCTGTCAGCATCCTAATATGGCAGAGGGCCGGGATGGGGGCCAGTGCTGAGGGCAAT 1380 KF764703 1012 GAATGGTGGAGGTCGGGTATAAAAGGTGGAGAGGCTGCAGCCGGGACGGTAGCTGGTTCA 1071 |||||||||| ||||||||||||||| |||||||||||||| ||||| |||||||||||| AB015886 1381 GAATGGTGGAAGTCGGGTATAAAAGGCGGAGAGGCTGCAGCTGGGACCGTAGCTGGTTCA KF764703 1072 CCACCA-CACTGGTT 1440 1085 || || |||||||| AB015886 1441 GCAGCAGCACTGGTT 1455 P ụ lục 4: So sánh tƣơng đồng promoter acta lo i cá sóc (Oryzias curvinotus) (KF764703) v cá marine medaka (Oryzias dancena) (JQ905608) Range 1: 714 to 1769 Score Expect Identities Gaps Strand 1223 bits(662) 0.0 957/1093(88%) 45/1093(4%) Plus/Plus KF764703 GACTCCTCCCTACTTTGAGTTTATAATAACTACATTGGCATCTCCACTTCCACCAATGCC 60 ||||||||||| |||||||||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||| JQ905608 714 GACTCCTCCCTTCTTTGAGTTTATAATAACCACATTGGCATCTCCACTTCCACCAATGCC 773 KF764703 61 CTCACACTGCGACACACCAGCATGGACACAAATAGCCACACCCTCCCTGATTCTCTCTCA 120 ||| |||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||| | JQ905608 774 CTCGCACTGCAACACACCAGCATGGACACAAATAGCCACACCCTCCCCAATTCTCTC-C- 831 KF764703 121 CACGCACGCACACGCAACAGCACCCCTCCTGCATAAGAGTTATAATTAATCCAATCGCT- 179 || JQ905608 832 |||| || | |||| ||||||||||||||||||||||||||||||| |||| CA CACG CA-G -CAGCCCCCCTCCTGCATAAGAGTTATAATTAATCCAGCCGCTC 82 883 KF764703 180 CTGTGACAGGGCAGAGCACCCCCTGCACATATGGTTTCAGCTGCTGGCAGTACAAACTCT 239 | ||||||| ||||||||||||||||||| |||| |||||||||| |||||||||||||| JQ905608 884 CAGTGACAGAGCAGAGCACCCCCTGCACACATGGCTTCAGCTGCTCGCAGTACAAACTCT 943 KF764703 240 GACCAGTCAGTGTTAGGAGCCATGTGCTCTGCAGATCCGCAAGCTTTGGAGGTAAATAAC 299 |||||||||||||| ||||||||| |||||||||| | ||||| ||||| |||| || JQ905608 944 GACCAGTCAGTGTTGGGAGCCATGCGCTCTGCAGAACAGCAAGATTTGGGTGTAATTACA 1003 KF764703 300 GGATAGTGCGTAAAAAACGCGGAGGAGTTTGTGAAAAATCAGTGCACAATCTTAGTGTGA 359 ||| ||||||||| |||| ||||||||| |||||||||| |||| |||| | ||| JQ905608 1004 GGAGAGTGCGTAATAAACTTGGAGGAGTTGGTGAAAAATCTGTGCGCAAT -A ATGA 1058 KF764703 360 TAATGATTTCCTGTGGATTAAATA-ACTGATGGTTTTCTCATAGACTGCAGCTACATGAA 418 | | | || | ||| |||| | ||||||||||| ||||||||||||||| |||| || JQ905608 1059 T-A A-TT-GT-TGG-CTAAACACACTGATGGTTTGCTCATAGACTGCAGCAACATAAA 1111 KF764703 419 ATGTCATCAACTTACAATATTTACTTAATTCTGCCATTCTGAAACGCCAAAGATGAAACA 478 |||||||| | | ||||||||| |||||| || ||||||||||| | ||| ||||| JQ905608 1112 ATGTCATCTATTCACAATATTTGCTTAATGTTGTCATTCTGAAAC-AGAGAGACTAAACA 1170 KF764703 479 AT-CAGT T-AAATAAACCATGTGATTATGTGCGTAATGAGGCTTAAATTGGATCAGTT 534 || |||| | |||| ||||| || ||| |||||||| | || |||||||| | ||| JQ905608 1171 ATCCAGTGGTGAAATGAACCACTTGTTTACGTGCGTAAAAACGCACAAATTGGAACGGTT 1230 KF764703 535 TTGGTCGTGGATCAGCATTAATCAGGAATCATGGGCTCTTAATTGGGACCT-GTCAGTCA 593 || ||| ||||||||||||||||| ||| | ||| |||||||||||| ||| ||| |||| JQ905608 1231 TTAGTCATGGATCAGCATTAATCATGAAACCTGGCCTCTTAATTGGG-CCTCGTCCGTCA 1289 KF764703 594 CCGCCTCTCATTAGCTCTCTCTGTGGCCTAAATCTGTTCAGATGATGGAAGCGTTTTCCC 653 ||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||| |||||||||||||| JQ905608 1290 CCGCCTCTCATTAGCTCTCTCTGTGTCCTAAATCTGTTCAGATGAGGGAAGCGTTTTCCC 1349 KF764703 654 ATTTTAAGGCTCCATAAGGCCTACAAGCCGCAAATCCATAACCCCGCTGGCCAGCAACTG 713 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| JQ905608 1350 ATTTTAAGGCTCCATAAGGCCTACAAGCCGCAAATCCATAACCCCGCTGGCCAGCAACTG 1409 KF764703 714 GCGTCTCCCCTAGAAACCCCCCAGTGGACCGTGCACACCTTATACGGCCGTTTAGGTGGG 773 |||||||||||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||| |||||||| JQ905608 1410 GCGTCTCCCCTAGAAACCCCCCAGCGGACCGTGCACACCTTATACGGCCGTCTAGGTGGG 83 1469 KF764703 774 ACGACGAGGCTTGATGGGAGGTCAAAGCGACAGTTCCATTTATGGAATCACGTTTGATcc 833 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| JQ905608 1470 ACGACGAGGCTTGATGGGAGGTCAAAGCGACAGTTCCATTTATGGAATCACGTTTGATCC 1529 KF764703 834 cccccccccACACACACCCACCCCTGGAAGCTGACGGACGGAGCTTCCTCCTCGCGCACT 893 ||| || ||| | ||||||||||||||||||||||||||||| ||||| || JQ905608 1530 CCC AC-CAC-CT -CCCTGGAAGCTGACGGACGGAGCTTCCTCTACGCGCTCT 1578 KF764703 894 GTGGGGCGCGCCTCTTCACTGCACCCCACATCCACCCACCCACCCACCCGGGCTGCAGCG 953 | |||||||||||| ||||| ||||||||| ||||| ||||||||| |||||||| | JQ905608 1579 GAGGGGCGCGCCTCCTCACTACACCCCACAGCCACC CCCACCCACTCGGGCTGCCTCT 1636 KF764703 954 GCCTGTCAGCATCCTAATATGGCAGAGGGCCGGGATGGGGGCCAGTGCTGAGGGCAGTGA 1013 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||| JQ905608 1637 GCCTGTCAGCATCCTAATATGGCAGAGGGCCGGGATGGGGGCCATTGCTGAGGGCAGTGA 1696 KF764703 1014 ATGGTGGAGGTCGGGTATAAAAGGTGGAGAGGCTGCAGCCGGGACGGTAGCTGGTTCACC 1073 |||||||| ||||||||||||||||||| ||||||||| ||||||||||||||||||| | JQ905608 1697 ATGGTGGAAGTCGGGTATAAAAGGTGGACAGGCTGCAGTCGGGACGGTAGCTGGTTCAGC KF764703 1074 ACCA-CACTGGTT 1085 | || |||||||| JQ905608 1757 AGCAGCACTGGTT 1769 Phụ lục 5: Thống kê tỉ lệ phân li di truyền cá chuyển gen hệ F0 Dòng cá I II Dòng cá chuyển gen hệ F0 Phân li Thực Lí Kiểm tế thuyết định chi test square 0,12 Chuyển gen 153 150 Không chuyển gen 147 150 Chuyển gen 12 75 105,84 Không chuyển gen 138 75 84 Ngƣỡng chấp nhận 3.84 3.84 1756 Phụ lục 6: Thống kê tỉ lệ phân li di truyền cá chuyển gen hệ F1 Dòng cá C1 C2 C3 C4 C5 C6 Dòng cá chuyển gen hệ F1 Phân li Thực Lí Kiểm tế thuyết định chi test square Chuyển gen 28 27,5 0,02 Không chuyển gen 27 27,5 Chuyển gen 20 22,0 0,36 Không chuyển gen 24 22,0 Chuyển gen 17 19,5 0,64 Không chuyển gen 22 19,5 Chuyển gen 13 11,5 0,39 Không chuyển gen 10 11,5 Chuyển gen 52 44,0 2,91 Không chuyển gen 36 44,0 Chuyển gen 22 21,5 0,02 Không chuyển gen 21 21,5 85 Ngƣỡng chấp nhận 3,84 3,84 3,84 3,84 3,84 3,84