Thử nghiệm phương pháp chiết xuất precocen i và prococen ii từ cây cỏ hôi ageratum conyzoides

S! KHOA H"C VÀ CƠNG NGH# THÀNH $ỒN TP HCM CH%&NG TRÌNH V%'M %&M SÁNG T(O KH-CN TR) BÁO CÁO NGHI#M THU TH* NGHI#M PH%&NG PHÁP CHI+T XU,T PRECOCEN I VÀ PRECOCEN II T- CÂY C HÔI (AGERATUM CONYZOIDES) Ch/ nhi0m 12 tài: ThS Lê Ti!n D"ng Phân vi#n Hóa h$c H%p ch&t Thiên nhiên C3 quan ch/ trì: Trung tâm Phát tri'n Khoa h$c Công ngh# tr( 01 Ph)m Ng$c Th)ch, Qu*n 1, Tp H+ Chí Minh Thành ph4 H5 Chí Minh, tháng 12/2006 M!C L!C I "#t v$n %& trang II T'ng quan trang 2.1 S! l"#c v$ thu%c tr& sâu trang 2.2 Juvenile hormon anti juvenile hormon trang 2.3 Gi'i thi(u v$ C) hôi, Ageratum conyzoides L trang 2.4 Tình hình nghiên c*u n"'c trang 2.4.1 Tình hình nghiên c*u ngồi n"'c trang 2.4.2 Tình hình nghiên c*u n"'c trang III Nguyên li(u ph)*ng pháp nghiên c+u trang 12 3.1 Nguyên li(u trang 12 3.2 Hóa ch+t thi,t b- trang 12 3.2.1 Hóa ch+t trang 12 3.2.2 Thi,t b- trang 12 3.3 Ph"!ng pháp nghiên c*u trang 13 3.3.1 Ph"!ng pháp trích ly tinh d.u trang 13 3.3.2 Ph"!ng pháp xác /-nh thành ph.n hóa h0c tinh d.u trang 16 3.3.3 Ph"!ng pháp /-nh l"#ng precocen khô trang 16 3.4 1-a /i2m làm th3c nghi(m trang 18 IV K,t qu- Bi(n lu.n trang 20 4.1 Kh4o sát hàm l"#ng precocen tinh d.u trang 20 4.1.1 Tinh d.u thu hái mùa m"a mùa n5ng trang 20 4.1.2 Tinh d.u hoa thu hái vào mùa m"a trang 21 4.1.3 Thành ph.n hóa h0c c6a tinh d.u trang 21 4.2 Hàm l"#ng precocen d-ch chi,t hexan trang 24 4.3 Bi(n lu7n c+u trúc A32 A43 trang 27 V K,t lu.n "& ngh/ trang 32 Ph0 l0c Tài li(u tham kh-o DANH SÁCH B1NG S8 TÊN B9NG S8 LI:U TRANG Thành ph.n c+u t; tinh d.u C) Hôi < vùng khác Thành ph.n c+u t; tinh d.u C) Hôi, Hà N=i, Vi(t Nam H>ng s% v7t lý c6a tinh d.u C) hôi 10 Hàm l"#ng tinh d.u C) hôi b>ng ch"ng c+t c? /i2n 20 ch"ng c+t có h@ tr# vi sóng Hàm l"#ng tinh d.u hoa C) hôi vào tháng 8/2006 21 Thành ph.n hóa h0c tinh d.u C) thu hái vào 22 8/2006 Thành ph.n hóa h0c tinh d.u C) hôi thu hái vào 22 3/2006 Thành ph.n Hóa h0c tinh d.u hoa C) thu hái vào 23 8/2006 K,t qu4 s5c ký c=t cao hexan /ã xà phịng hóa 25 C) hôi 10 K,t qu4 s5c ký c=t l.n phân /oAn 25 11 So sánh ph? 13C-NMR DEPT c6a A32 v'i ph? 13C- 28 NMR DEPT c6a precocen I 12 So sánh ph? 13C-NMR DEPT c6a A43 v'i ph? 13CNMR DEPT c6a precocen II 30 DANH SÁCH HÌNH S2 TÊN HÌNH 1NH TRANG Các giai /oAn bi,n thái < côn trùng Cây C) hôi H( th%ng ch"ng c+t c? /i2n 14 H( th%ng ly trích có h@ tr# vi sóng 16 K,t qu4 s5c ký l'p m)ng silicagel c6a h#p ch+t A32 26 A43 DANH SÁCH S3 "4 S2 TÊN S3 "4 TRANG Ly trích tinh d.u b>ng ph"!ng pháp ch"ng c+t c? /i2n 13 Ly trích tinh d.u /i$u ki(n chi,u xA vi sóng 16 1i$u ch, cao hexan /ã xà phịng hóa 18 L!I C"M #N -!" #$ng ký th%c hi&n #'(c #) tài, #ã nh*n #'(c nhi)u s% h+ tr( giúp #, Các tác gi- xin g.i l/i c-m 0n sâu s1c #2n #0n v3 cá nhân sau: - C0 quan qu-n lý: Ban lãnh #4o S5 Khoa h6c Cơng ngh& Tp H7 Chí Minh #ã c8p kinh phí, ngu7n #9ng l%c khuy2n khích c0 s5 #:u tiên cho vi&c th%c hi&n #) tài - C0 quan ch; trì: Trung tâm Phát tri"n Khoa h6c Cơng ngh& tr< Thành #ồn Tp.H7 Chí Minh, #ã giúp #,, h+ tr( chúng tơi q trình #$ng ký, th%c hi&n b-o v& #) tài - Các thành viên H9i #7ng th=m #3nh #) tài #ã #óng góp nhi)u ý ki2n quý báu cho #) tài #'(c kh- thi - Ban lãnh #4o Phân vi&n Hóa h6c H(p ch8t Thiên nhiên #ã t4o #i)u ki&n giúp #, th%c hi&n #) tài - Cu>i cùng, xin g.i l/i c-m 0n #2n b4n bè Vi&n Khoa h6c Công ngh& Vi&t Nam #ã nhi&t tình h+ tr( trình th%c hi&n #) tài Ch; nhi&m #) tài Lê Ti2n D?ng Báo cáo nghi!m thu "# tài PH!N I: "#T V$N "% Sâu h$i rau màu gây h$i r%t l&n cho ngành nông nghi!p n'&c ta Nhi#u báo cáo th( gi&i cho th%y nh)m ng*n ng+a d,ch h$i, nông dân "ã s- d.ng thu/c tr+ sâu Hóa h0c m1t cách liên t.c kéo dài 2i#u làm t*ng kh3 n*ng kháng thu/c cho sâu h$i Cho "(n nay, không th4 ph5 nh6n vai trò r%t quan tr0ng c5a thu/c tr+ sâu vi!c phòng tr+ d,ch b!nh, nâng cao n*ng su%t tr7ng ph.c v nhu c8u ng'9i Tuy nhiên, "ó nh:ng nguy c; cho ng'9i s- d.ng, 3nh h'u t6p trung vào vi!c tìm h?p ch%t thiên nhiên có ho$t tính "1c, ngán *n, xua "u@i hoAc kháng hormon "/i v&i côn trùng v&i m.c tiêu t+ng b'&c thay th( thu/c tr+ sâu Hóa h0c Các cơng trình nghiên c>u cho th%y thBc v6t thu1c h0 Cúc (Asteraceae), Th8u d8u (Euphorbiaceae) ch>a nhi#u ho$t ch%t có tính di!t sâu Vi!c nghiên c>u ly trích >ng d.ng ho$t ch%t nơng nghi!p góp ph8n t+ng b'&c gi3m thi4u vi!c s- d.ng thu/c tr+ sâu G8n "ây có nhi#u th3o m1c "'?c nghiên c>u >ng d.ng làm thu/c tr+ sâu sinh h0c nh': Cây Neem (Azadiracta indica), Thu/c cá (Derris sp.), Th)n mát, Xe-va-"i (Sabadilla lily), Cúc Chrysanthemum sp.… Cây CC hôi, Ageratum conyzoides L., "ã "'?c xác nh6n ch>a hàm l'?ng precocen I II cao 2ây nh:ng ch%t có ho$t tính kháng hormon juvenile Tuy nhiên ch'a có cơng trình kh3o sát hàm l'?ng precocen theo ph';ng pháp ly trích khác Trong "# tài này, t6p trung kh3o sát hàm l'?ng precocen CC hôi b)ng ph';ng pháp ly trích khác nh)m tìm ph';ng pháp t/t nh%t ly trích precocen, >ng d.ng nơng nghi!p Báo cáo nghi!m thu "# tài PH!N II: T&NG QUAN 2.1 S' l()c v* thu+c tr, sâu Vi!c phòng tr+ sâu h$i hoa màu l';ng thBc "ã có t+ lâu "9i Ngồi vi!c phá ho$i mùa màng, trùng cịn nguyên nhân lan truy#n nhi#u b!nh nguy hi4m, loài ng'9i tìm m0i cách gi3m thi4u thi!t h$i trùng gây Loài ng'9i xu%t hi!n trái "%t kho3ng h;n tri!u n*m, côn trùng "ã t7n t$i nh%t 250 tri!u n*m Chúng ta có th4 dB "oán r)ng bi!n pháp "8u tiên "'?c s- d.ng bu l,ch s- "ã tìm th%y d%u v(t vi!c s- d.ng thu/c tr+ sâu kho3ng 1000 n*m tr'&c công nguyên Pliny the Elder (t+ n*m 23-79 sau công nguyên) "ã ghi l$i h8u h(t ph';ng th>c s- d.ng thu/c tr+ sâu tr'&c "ó cu/n Natural History, bao g7m vi!c s- d.ng ch%t "Dng t+ m6t th)n l)n "4 b3o v! táo khCi sâu Ti(p theo ph';ng th>c s- d.ng d,ch chi(t t+ tiêu thu/c lá; n'&c xà phịng d%m, d8u thơng … V# c; b3n, m0i hóa ch%t dùng "4 xua "u@i hoAc gây ch(t côn trùng "'?c g0i thu/c tr+ sâu Thu/c tr+ sâu bao g7m: • Nhóm Clo h:u c; ("ã b, c%m s- d.ng) • Nhóm phopho h:u c; • Nhóm carbamate • Pyrethroid • Nhóm ch%t "i#u hịa sinh tr't heo Tên khoa h0c c5a CC hôi Ageratum conyzoides, ch: ageratum bDt ngu7n t+ ti(ng Hy L$p “a geras” có nghJa không già, "# c6p "(n vi!c s/ng lâu c5a Trái l$i, conyzoides bDt ngu7n t+ ti(ng Hy L$p ‘konyz’ tên ",a ph';ng c5a Inula helenium, loài thBc v6t có hình thái gi/ng CC Cây CC hôi lo$i thân th3o, cao 25-50cm, phân cành nhi#u Thân có lơng m#m, màu xanh l.c hoAc tím "C Lá m0c "/i, hình b8u d.c, hoAc tam giác,"8u nh0n, dài 2-10cm, r1ng 0,5-5cm, mép có r*ng c'a trịn, hai mAt "#u có lơng, mAt d'&i nh$t h;n mAt trên, ba gân tCa t+ g/c lá, vò có mùi "At bi!t Hoa nhC màu tím hoAc trDng, t$o thành c.m hoa hình "8u < ng0n thân hoAc "8u cành Cu/ng c.m hoa có lơng m#m, t@ng bao hình "8u g7m nh:ng bDt x(p thành hai dãy; "8u nhC ch>a tồn hoa hình /ng bé "#u Tràng ngDn có n*m thùy tam giác Qu3 b( màu "en có n*m sóng d0c Cây có ngu7n g/c t+ châu MK, sau phát tán khDp vùng nhi!t "&i c6n nhi!t "&i nh': Nam Trung Qu/c, Thái Lan, Lào, Ln 21… M Vi!t Nam Báo cáo nghi!m thu "# tài CC hôi phân b/ hoang d$i t+ vùng núi cao 1500m "(n tNnh < "7ng b)ng ven bi4n Cây th'9ng m0c g8n nh' thu8n lo$i < n';ng ngô, bãi sông, ven "'9ng "i v'9n Cây CC hôi thu1c lo$i 'a Om, 'a sáng ch,u bóng mát H)ng n*m, m0c t+ h$t th'9ng th%y vào gi:a mùa xuân, sinh tr'a nhi#u h?p ch%t flavonoid, "ã có kho3ng 21 flavonoid "'?c phát hi!n [12] N*m 1977, Adesogan E Kayode c1ng sB "ã cô l6p "'?c tinh th4 t+ CC hôi "ã xác ",nh d'?c tên Stigmast-7-en-3-ol [1] H3C H3C CH3 CH3 CH3 H3C HO Stigmast-7-en-3-ol N*m 1978 Adesogan E Kayode c1ng sB[2] "ã xác ",nh "'?c m1t chromene m&i t+ CC hôi Conyzorigun 5’-methoxynobiletin O H 3C H 3C O CH O O O O O O O O CH H 3C Conyzorigun Ph! l!c 2: ! –Farnesene tinh d$u C% hôi 8/2006 Ph&'ng pháp c" (i)n Ph! l!c 2: Caryophyllene oxid tinh d$u C% hôi 8/2006 Ph&'ng pháp c" (i)n Precocen I Precocen II Ph! l!c 2: precocen I II tinh d$u C% hôi 8/2006 Ph&'ng pháp c" (i)n Precocen I Precocen II Ph! l!c 3: Ph" GC/MS c#a tinh d$u 3/2006_Ph&'ng pháp vi sóng Precocen I Precocen II Ph! l!c 4: Ph" GC/MS c#a tinh d$u 3/2006_Ph&'ng pháp c" (i)n Precocen I Precocen II Ph! l!c 5: Ph" GC/MS c#a tinh d$u hoa 3/2006_Ph&'ng pháp c" (i)n Precocen I Precocen II Ph! l!c 6: Ph" GC/MS tinh d$u hoa 8/2006_Ph&'ng pháp vi sóng Ph! l!c 7: Ph" DEPT c#a precocen I Ph! l!c 8: Ph" 13C NMR c#a precocen I Ph! l!c 9: Ph" 1H NMR c#a precocen I Ph! l!c 10: Ph" IR c#a precocen I Ph! l!c 11: Ph" DEPT c#a precocen II Ph! l!c 12: Ph" 13C NMR c#a precocen II Ph! l!c 13: Ph" IR c#a precocen II Ph! l!c 14: Ph" 1H NMR c#a precocen II