Nghiên cứu xây dựng công nghệ vi nhân giống quang tự dưỡng bán tự động để sản xuất cây cấy mô lan dendrobium và hồng paulownia

TĨM TẮT Cơng nghệ vi nhân giống truyền thống để sản xuất giống trồng chưa đáp ứng yêu cầu người trồng trọt chất lượng lợi nhuận mang lại cho nhà sản suất sử dụng phương pháp vi nhân giống nhiều hạn chế Nhằm hướng đến việc xây dựng công nghệ ứng dụng sản xuất giống cấy mô sạch, chất lượng cao có giá trị kinh tế thuộc loại hoa cắt cành, kiểng, ăn trái, hay cho gỗ, đề tài Nghiên cứu xây dựng công nghệ vi nhân giống quang tự dƣỡng bán tự động để sản xuất cấy mô (lan Dendrobium hông Paulownia) thực Đề tài tiến hành thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng diện nguồn carbon hữu (đường vitamin) môi trường nuôi cấy lên tăng trưởng lan (Dendrobium Burana White) hông (Paulownia spp.) chứng minh khả tăng trưởng tự dưỡng mơi trường có thành phần chủ yếu khoáng đa lượng vi lượng MS Các điều kiện cường độ ánh sáng, thời gian chiếu sáng độ thơng thống khí bình ni cấy khảo sát xác định mức độ thích hợp, điều kiện cho phép, giúp lan Dendrobium Burana White hông tăng trưởng tốt theo phương pháp nuôi cấy quang tự dưỡng Đề tài tiến hành thí nghiệm so sánh tăng trưởng lan hông hệ thống nuôi cấy quang tự dưỡng khác nhau: trao đổi khí tự nhiên bơm khí trực tiếp Hệ thống bơm khí trực tiếp chứng minh tính chất ưu việt lên tăng trưởng hai loại trồng Cách phân phối khí khác mật độ mẫu cấy khác hệ thống bơm khí trực tiếp kích thước hộp thay đổi nghiên cứu nhằm hướng đến tăng trưởng tốt cho nuôi cấy hệ thống bán tự động giai đoạn đề tài Việc xây dựng hệ thống nuôi cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp bán tự động với hai hộp ni lớn (V=100 lít) thực với thông số nhiệt độ ẩm độ kiểm soát Nồng độ CO2 kiểm soát điều khiển, qua chứng minh nồng độ CO2 hộp ni gia tăng có ảnh hưởng rõ rệt đến gia tăng chất lượng giống cấy mô lan (Dendrobium Burana White) hông (Paulownia spp.), dẫn đến tiếp tục tăng trưởng tốt cấy mô giai đoạn vườn ươm Chi phí cho giống cấy mơ phương pháp nuôi cấy mô quang tự dưỡng hệ thống bơm khí trực tiếp bán tự động ước tính so sánh với chi phí từ phương pháp nuôi cấy dị dưỡng (truyền thống) cho thấy hiệu cao phương diện kinh tế hai lan hông nuôi cấy in vitro phương pháp nuôi cấy mô quang tự dưỡng áp dụng vào quy trình nhân giống I SUMMARY With the aim of establishing a new technology for producing clean, highly quality and economic in vitro plants of cut flower, ornamental, fruit or woody species, the project entitled ‘Study of establishing a semi-automated photoautotrophic micropropagation system for production of in vitro plants (Dendrobium and Paulownia)’ was carried out Effects of different organic carbon sources, including sucrose and vitamins, on the growth of Dendrobium Burana White and Paulownia spp in vitro plants were investigated and these experiments verified that these plants could grow autotrophically on the medium supplemented with only minerals The study also emphasized the roles of appropriate PPF levels, photoperiods and ventilation rates of culture containers played on the photoautotrophic growth of in vitro plants The growth comparison of Dendrobium or Paulownia plants in different methods of photoautotrophic culture was highly taken into account, which proved that forced ventilation method was superior to natural ventilation method in terms of plant vigor in both in vitro and ex vitro stages The air distribution and explant density were also considered in application of forced ventilation method with respect to the better growth of in vitro plants A semi-automated system for photoautotrophic micropropagation of Dendrobium Burana White and Paulownia spp was constructed with two large culture boxes (V=100 l) Relative humidity and temperature inside of the box were displayed on screen during the experiment, while CO2 concentration was controlled The operation of the system proved that the increase in CO2 concentration under an appropriate PPF level increased plant growth both in in vitro and ex vitro stages Production costs for both plant species were estimated and compared with those of the conventional micropropagation; which showed an economically significant aspect of this system if applied to the production process II MỤC LỤC Trang Tóm tắt đề tài/dự án (gồm tiếng Việt tiếng Anh) I Mục lục III Danh sách chữ viết tắt X Danh sách bảng XI Danh sách hình XV PHẦN MỞ ĐẦU Tên đề tài, dự án Chủ nhiệm đề tài/dự án Cơ quan chủ trì Thời gian thực Kinh phí duyệt Kinh phí cấp Mục tiêu Nội dung Sản phẩm đề tài/dự án CHƢƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU A Cây lan Dendrobium Burana White B Cây hông Paulownia spp C Phương pháp vi nhân giống quang tự dưỡng CHƢƠNG II: NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 10 Nội dung 10 A III 2.1 Xác định ảnh hƣởng mơi trƣờng ni cấy (loại khống, nồng độ đƣờng) lên tăng trƣởng lan Dendrobium Paulownia in vitro 10 2.1.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy nồng độ đường lên tăng trưởng chồi lan Dendrobium Burana White 10 2.1.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ đường giá thể lên tăng trưởng lan Dendrobium Burana White 11 2.1.3 Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy lên tăng trưởng quang tự dưỡng lan Dendrobium Burana White 12 2.1.4 Ảnh hưởng nồng độ đường lần nuôi cấy chồi trước lên tăng trưởng lan Dendrobium Burana White nuôi cấy quang tự dưỡng 12 2.1.5 Ảnh hưởng nồng độ đường giá thể lên tăng trưởng hông (Paulownia spp.) nuôi cấy in vitro 2.2 14 Nghiên cứu ảnh hƣởng yếu tố vật lý môi trƣờng nuôi cấy (tốc độ trao đổi khí bình ni cấy, cƣờng độ ánh sáng, thời gian chiếu sáng, nồng độ CO2, loại giá thể) lên sinh trƣởng nuôi cấy giai đoạn in vitro ex vitro 16 lan Dendrobium Burana White nuôi cấy quang tự dưỡng 16 2.2.1 2.2.2 Khảo sát ảnh hưởng cường độ ánh sáng độ thống khí hộp ni lên tăng truởng lan Dendrobium Burana White nuôi cấy quang tự dưỡng 17 2.2.3 Khảo sát tăng trưởng lan Dendrobium Burana White nuôi cấy quang tự dưỡng bao nylon có gắn màng lọc trao đổi khí 18 2.2.4 Ảnh hưởng thời gian chiếu sáng thống khí lên tăng trưởng hông (Paulownia spp.) điều kiện nuôi cấy quang tự dưỡng IV 20 2.2.5 Ảnh hưởng nồng độ đường thống khí môi trường lên tăng trưởng hông (Paulownia spp.) nuôi cấy bao nylon 21 2.2.6 Ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên tăng trưởng hông (Paulownia spp.) nuôi cấy điều kiện quang tự dưỡng 2.3 22 So sánh tăng trƣởng in vitro nuôi cấy quang tự dƣỡng quang dị dƣỡng hai hệ thống trao đổi khí: khuyếch tán qua màng Millipore bơm khí trực tiếp vào hộp ni cấy kích thƣớc khác giai đoạn in vitro ex vitro 23 2.3.1 Khảo sát tăng trưởng lan Dendrobium Burana White ảnh hưởng điều kiện vi nhân giống quang tự dưỡng trao đổi khí tự nhiên bơm khí trực tiếp 23 2.3.2 Khử trùng hộp nuôi nhựa Acrylic (45x25x15 cm; V=17 l) không dùng autoclave 25 2.3.3 Khảo sát tăng trưởng hông (Paulownia spp.) nuôi cấy mơi trường khơng đường bơm khí trực tiếp hay mơi trường có đường trao đổi khí tự nhiên 2.4 27 Xây dựng hệ thống nhân giống in vitro quang tự dƣỡng với hộp ni cấy lớn có bơm khí trực tiếp với sức chứa 200-2000 cấy mô/hộp 29 2.4.1 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện ni cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp với hộp nuôi chứa 100-200 lên tăng trưởng lan Dendrobium Burana White 29 2.4.2 Khảo sát ảnh hưởng lưu lượng khí lên tăng trưởng lan Dendrobium Burana White nuôi cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp hộp ni có sức chứa 500-600 30 2.4.3 Khảo sát tăng trưởng hông (Paulownia spp.) nuôi cấy quang tự dưỡng mật độ cao bơm khí trực tiếp với lưu lượng khí lớn V 33 2.4.4 Khảo sát ảnh hưởng lưu lượng khí lên tăng trưởng hơng (Paulownia spp.) ni cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp hộp ni có sức chứa 500-600 2.5 35 Ứng dụng cơng nghệ tự động hóa vào việc lựa chọn chế độ tối ƣu kiểm sốt q trình ni cấy mô hộp nuôi cấy lớn, bao gồm việc đo nhiệt độ, ẩm độ, đo điều khiển nồng độ CO2 38 2.5.1 Xây dựng hệ thống ni bơm khí trực tiếp điều khiển bán tự động 38 2.5.2 Khử trùng hộp nuôi làm nhựa polycacbonat (V = 100 lít) khơng dùng autoclave 39 2.5.3 Khảo sát ảnh hưởng ni cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp điều kiện nồng độ CO2 nồng độ khơng khí cao nồng độ khơng khí lên tăng trưởng lan Dendrobium Bruna White ni hộp ni có sức chứa 1000 40 2.5.4 Khảo sát ảnh hưởng nuôi cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp điều kiện nồng độ CO2 nồng độ khơng khí cao nồng độ khơng khí lên tăng trưởng hơng (Paulownia spp.) ni hộp ni có sức chứa 1000 42 B Phƣơng pháp 46 2.6 Phƣơng pháp đo tính tiêu 46 2.7 Quan sát hình thái giải phẫu rễ 48 2.8 Phân tích thống kê 48 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 49 3.1 Xác định ảnh hƣởng mơi trƣờng ni cấy (loại khống, nồng độ đƣờng) lên tăng trƣởng lan Dendrobium Paulownia in vitro VI 49 3.1.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy nồng độ đường lên tăng trưởng chồi lan Dendrobium Burana White 49 3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ đường giá thể lên tăng trưởng lan Dendrobium Burana White 50 3.1.3 Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy lên tăng trưởng quang tự dưỡng lan Dendrobium Burana White 52 3.1.4 Ảnh hưởng nồng độ đường lần nuôi cấy chồi trước lên tăng trưởng lan Dendrobium Burana White nuôi cấy quang tự dưỡng 53 3.1.5 Ảnh hưởng nồng độ đường giá thể lên tăng trưởng hông (Paulownia spp.) nuôi cấy in vitro 3.2 57 Nghiên cứu ảnh hƣởng yếu tố vật lý môi trƣờng ni cấy (tốc độ trao đổi khí bình nuôi cấy, cƣờng độ ánh sáng, thời gian chiếu sáng, nồng độ CO2, loại giá thể) lên sinh trƣởng nuôi cấy giai đoạn in vitro ex vitro 59 lan Dendrobium Burana White nuôi cấy quang tự dưỡng 59 3.2.1 3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng cường độ ánh sáng độ thống khí hộp ni lên tăng truởng lan Dendrobium Burana White nuôi cấy quang tự dưỡng 62 3.2.3 Khảo sát tăng trưởng lan Dendrobium Burana White nuôi cấy quang tự dưỡng bao nylon có gắn màng lọc trao đổi khí 63 3.2.4 Ảnh hưởng thời gian chiếu sáng thống khí lên tăng trưởng hông (Paulownia spp.) điều kiện nuôi cấy quang tự dưỡng 69 3.2.5 Ảnh hưởng nồng độ đường thoáng khí mơi trường lên tăng trưởng hơng (Paulownia spp.) nuôi cấy bao nylon 70 3.2.6 Ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên tăng trưởng hông (Paulownia spp.) nuôi cấy điều kiện quang tự dưỡng VII 73 3.3 So sánh tăng trƣởng in vitro nuôi cấy quang tự dƣỡng quang dị dƣỡng hai hệ thống trao đổi khí: khuyếch tán qua màng Millipore bơm khí trực tiếp vào hộp ni cấy kích thƣớc khác giai đoạn in vitro ex vitro 74 3.3.1 Khảo sát tăng trưởng lan Dendrobium Burana White ảnh hưởng điều kiện vi nhân giống quang tự dưỡng trao đổi khí tự nhiên bơm khí trực tiếp 74 3.3.2 Khử trùng hộp nuôi nhựa Acrylic (45x25x15 cm; V=17 l) không dùng autoclave 79 3.3.3 Khảo sát tăng trưởng hông (Paulownia spp.) ni cấy mơi trường khơng đường bơm khí trực tiếp hay mơi trường có đường trao đổi khí tự nhiên 3.4 80 Xây dựng hệ thống nhân giống in vitro quang tự dƣỡng với hộp nuôi cấy lớn có bơm khí trực tiếp với sức chứa 200-2000 cấy mô/hộp 82 3.4.1 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp với hộp ni chứa 100-200 lên tăng trưởng lan Dendrobium Burana White 82 3.4.2 Khảo sát ảnh hưởng lưu lượng khí lên tăng trưởng lan Dendrobium Burana White nuôi cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp hộp ni có sức chứa 500-600 87 3.4.3 Khảo sát tăng trưởng hông (Paulownia spp.) nuôi cấy quang tự dưỡng mật độ cao bơm khí trực tiếp với lưu lượng khí lớn 91 3.4.4 Khảo sát ảnh hưởng lưu lượng khí lên tăng trưởng hông (Paulownia spp.) nuôi cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp hộp ni có sức chứa 500-600 3.5 94 Ứng dụng cơng nghệ tự động hóa vào việc lựa chọn chế độ tối ƣu kiểm sốt q trình nuôi cấy mô hộp nuôi cấy lớn, bao gồm việc đo nhiệt độ, ẩm độ, đo điều khiển nồng độ CO2 VIII 98 3.5.1 Xây dựng hệ thống ni bơm khí trực tiếp điều khiển bán tự động 98 3.5.2 Khử trùng hộp nuôi làm nhựa polycarbonat (V = 100 lít) khơng dùng autoclave 102 3.5.3 Khảo sát ảnh hưởng nuôi cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp điều kiện nồng độ CO2 nồng độ khơng khí cao nồng độ khơng khí lên tăng trưởng lan Dendrobium Burana White ni hộp ni có sức chứa 1000 103 3.5.4 Khảo sát ảnh hưởng nuôi cấy quang tự dưỡng bơm khí trực tiếp điều kiện nồng độ CO2 nồng độ khơng khí cao nồng độ khơng khí lên tăng trưởng hơng (Paulownia spp.) ni hộp ni có sức chứa 1000 3.6 108 Đánh giá hiệu kinh tế việc sử dụng công nghệ lên giá thành cấy mô so với công nghệ vi nhân giống truyền thống (xem phụ lục 2) 3.7 114 Quy trình nhân giống lan Dendrobium Burana White hông (Paulownia spp.) 115 3.7.1 Quy trình nhân giống lan Dendrobium Burana White 115 3.7.2 Quy trình nhân giống hông (Paulownia spp.) 116 CHƢƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 117 TÀI LIỆU THAM KHẢO 118 PHỤ LỤC IX DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT THUẬT NGỮ TIẾNG VIỆT QTD Quang tự dưỡng QDD Quang dị dưỡng cs cộng TĐKTN Trao đổi khí tự nhiên BKTT Bơm khí trực tiếp CCC Chiều cao chồi CDR Chiều dài rễ GTTLT Gia tăng trọng lượng tươi GTTLK Gia tăng trọng lượng khô % CK Phần trăm chất khô RGR/ngày Tốc độ tăng trưởng tương đối /ngày X Hình Sơ đồ ngun lý hệ thống buồng ni quang tự dưỡng Hình Hình ảnh hệ thống buồng nuôi quang tự dưỡng +12V 1.4616V + U1 - 39K +12V Det R12 39K OP07 OUT+ Ref R8 -12V Green R3 200 +12V 200 22K CO2 Sensor + U3 OP07 + U2 OP07 R9 R11 -12V 39K 39K R10 39K 2K 1K OUT- R2 R6 Org -12V R7 22K +12V R20 10K R16 10K 10K R17 10K + U4 - OP07 R22 10K R18 10K R15 10K R21 10K -12V R14 -12V R4 R19 200K 200K 100K + U5A 4558 R15 R5 10K R10 39K +12V Signal OUT+ Signal OUT- + U5B 4558 Hình Sơ đồ nguyên lý khuếch đại tín hiệu cho cảm biến nồng độ CO2 Hình Bộ điều khiển khả trình PLC Comm.connection for PC GND I0.0 I0.1 I0.2 I0.3 I0.4 BOX2 CO2 Moisture W.speed +24V Q0.4 Q0.5 Q0.6 3L+ Q0.7 Q1.0 Q1.1 Q0.7 Q1.0 Q1.1 RL7a GND Wind Speed Sensor & Transducer RL7b Amp RL7c Temp.Sensor & Transducer RL7d Moisture Sensor & Transducer Wind Speed Sensor & Transducer +24V +24V 16 15 14 13 12 11 EV-1 RL1 EV-2 RL2 U2 ULN2003 RA A+ A- EV-3 RL3 RB B+ B- EV-4 RL4 RC C+ C- MO IO VO RD D+ D- U1A U1B LM339 +5V GND M L+ RL5 L +5V 10K 10K POT1 POT2 ALARM H RL6 RL7 +24V 220VAC Moisture Sensor & Transducer S3 +24V EM-235 DISPLAY Strobe 2L+ Q0.4 Q0.5 Q0.6 CPU-224: DC/DC/DC Amp Temp.Sensor & Transducer CO2 Sensor Q0.0 Q0.1 Q0.2 Q0.3 + - CO2 Sensor 1L+ Q0.0 Q0.1 Q0.2 Q0.3 +24V Temp +5V +5V S2 1M I0.0 I0.1 I0.2 I0.3 I0.4 I0.5 I0.6 I0.7 2M I1.0 I1.1 I1.2 I1.3 I1.4 I1.5 M L+ Data S1 + - BOX1 +24V PLC S7-200 R2 +5V 7805 R FUSE 104 - 104 + + 10.000uF 50V + 100uF 16V Hình Sơ đồ nguyên lý điều khiển - xử lý cho hệ thống quang tự dưỡng Hình 6a Bố trí khí cụ hệ cấp khí Hình 6b Bố trí khí cụ hệ cấp khí Hình Bố trí điều khiển - xử lý cho hệ thống quang tự dưỡng Hình Các cảm biến đo lường sử dụng cho hệ thống quang tự dưỡng Phụ lục Chi phí sản xuất Chi phí cho 10800 Paulownia spp ni cấy in vitro quang dị dưỡng Chi phí điện Thiết bị Đèn máy lạnh tủ cấy nồi hấp Tỷ lệ hao hụt Số lượng Công suất Giờ/ngày Số ngày 60 0,04 12 40 0,75 12 40 1 25 2,5 18 Tổng chi phí/10800 Chi phí/cây lý thuyết 10% Chi phí/cây thực tế Giá điện 1150 1150 1150 1150 Thành tiền 1.324.800 414.000 230.000 362.250 2.331.050 216 240 Chi phí hóa chất Hóa chất Hóa chất MS 1/2 (lít) Đường (kg) Agar (kg) Nước cất (lít) Cồn (lít) Nước (lít) Tỷ lệ hao hụt Đơn giá 5000 23000 370000 3000 18000 Tổng chi phí/10800 Chi phí/cây lý thuyết 10% Số lượng 117 2,34 0,8775 117 10 3000 Thành tiền 585.000 53.820 324.675 351.000 180.000 12.000 1.506.495 139 155 Chi phí/cây thực tế Khấu hao thiết bị Thiết bị Đèn Máy lạnh Tủ cấy Nồi hấp Bình tam giác Nút cao su Tỷ lệ hao hụt Số lượng Giờ/ngày Số ngày Khấu hao 60 12 40 12 12 40 313 25 2.083 2,5 18 3.472 1800 24 40 0,27 1800 24 40 0,12 Tổng chi phí/10800 Chi phí/cây lý thuyết 10% Chi phí/cây thực tế Thành tiền 345.600 150.000 416.667 156.250 466.560 207.360 1.742.437 161 179 Chi phí nhân cơng Cơng Cơng cấy Rửa bình Pha hấp mơi trường Tỷ lệ hao hụt Đơn giá 100000 70000 70000 Tổng chi phí/10800 Chi phí/cây lý thuyết 10% Ngày cơng 25 10 10 Chi phí/cây thực tế Thành tiền 2.500.000 700.000 700.000 3.900.000 361 401 Tổng chi phí Điện Tổng chi phí/cây Hóa chất 240 155 Thiết bị 179 Nhân cơng 401 Tổng 975 Chi phí cho 10800 Paulownia spp ni cấy in vitro quang tự dưỡng trao đổi khí tự nhiên Chi phí điện Thiết bị Đèn máy lạnh tủ cấy nồi hấp Số lượng 80 1 Công suất Giờ/ngày Số ngày 0,04 12 28 0,75 12 28 25 2,5 18 Tổng chi phí/10800 Chi phí/cây lý thuyết 90% Chi phí/cây thực tế Tỷ lệ sống Giá điện 1150 1150 1150 1150 Thành tiền 1.236.480 289.800 230.000 362.250 2.118.530 196 218 Chi phí hóa chất Đơn giá Số lượng 4500 3000 18000 33000 Tổng chi phí/10800 Chi phí/cây lý thuyết 90% Chi phí/cây thực tế Hóa chất Hóa chất MS 1/2 (lít) Nước cất (lít) Cồn (lít) Nước (lít) Perlite (kg) Tỷ lệ sống 117 117 10 3000 1,8 Thành tiền 526.500 351.000 180.000 12.000 59.400 1.128.900 105 116 Khấu hao thiết bị Thiết bị Đèn Máy lạnh Tủ cấy Nồi hấp Hộp Magenta Màng millipore Số lượng giờ/ngày Số ngày Khấu hao Thành tiền 80 12 28 12 322.560 12 28 313 105.000 25 2.083 416.667 2,5 18 3.472 156.250 1800 24 40 1,46 2.522.880 3600 24 40 0,36 1.244.160 4.767.517 Tổng chi phí/10800 441 Chi phí/cây lý thuyết 90% 490 Chi phí/cây thực tế Tỷ lệ sống Chi phí nhân cơng Đơn giá Ngày cơng 100000 70000 70000 Tổng chi phí/10800 Chi phí/cây lý thuyết 90% Chi phí/cây thực tế Cơng Cơng cấy Rửa bình Pha hấp mơi trường Tỷ lệ sống 25 10 10 Thành tiền 2.500.000 700.000 700.000 3.900.000 361 401 Tổng chi phí Điện Tổng chi phí/cây Hóa chất 218 Thiết bị Nhân công Tổng 116 490 401 1.226 Chi phí cho 14000 (20 hộp 100 L) Paulownia spp nuôi cấy in vitro quang tự dưỡng bán tự động Chi phí điện Thiết bị Đèn máy lạnh tủ cấy nồi hấp Hệ thống tự động hóa Tỷ lệ hao hụt Số lượng Công suất Giờ/ngày Số ngày 140 0,04 12 28 0,75 12 28 1 10 2,5 15 10 1,5 15 Tổng chi phí/14000 Chi phí/cây lý thuyết 10% Chi phí/cây thực tế Giá điện 1150 1150 1150 1150 1150 Thành tiền 2.163.840 289.800 92.000 301.875 517.500 3.365.015 240 267 Chi phí hóa chất/vật liệu Hóa chất Hóa chất MS 1/2 (lít) Nước cất (lít) Cồn (lít) Nước (lít) CO2 (kg) Perlite (kg) Găng tay khử trùng (cặp) Tỷ lệ hao hụt Đơn giá 4.500 3.000 18.000 208.000 33.000 5.000 Tổng chi phí/14000 Chi phí/cây lý thuyết 10% Số lượng Thành tiền 1.080.000 720.000 180.000 12.000 1.664.000 66.000 100.000 3.822.000 273 303 240 240 10 3000 20 Chi phí/cây thực tế Khấu hao thiết bị Thiết bị Đèn Máy lạnh Tủ cấy Nồi hấp Hệ thống tự động hóa Hộp 100 L Tỷ lệ hao hụt Số lượng giờ/ngày Số ngày 140 12 28 12 28 10 2,5 15 10 15 24 28 Tổng chi phí/14000 Chi phí/cây lý thuyết 10% Chi phí/cây thực tế Khấu hao 12 313 2.083 3.472 694 1.135 Thành tiền 564.480 105.000 166.667 130.208 312.500 762.417 2.041.272 146 162 Chi phí nhân cơng Cơng Cơng cấy Chuẩn bị Tỷ lệ hao hụt Đơn giá 100.000 70.000 Tổng chi phí/14000 Chi phí/cây lý thuyết 10% Ngày cơng 10 30 Chi phí/cây thực tế Thành tiền 1.000.000 2.100.000 3.100.000 221 246 Tổng chi phí Điện Chi phí/cây Hóa chất 267 303 Thiết bị 162 Nhân cơng 246 Tổng 978 Chi phí cho 12600 lan Dendrobium Burana White nuôi cấy in vitro quang dị dưỡng Chi phí điện Thiết bị Đèn máy lạnh tủ cấy nồi hấp Tỷ lệ hao hụt Số lượng Công suất Giờ/ngày Số ngày 40 0,04 12 60 0,75 12 60 1 25 2,5 18 Tổng chi phí/12600 Chi phí/cây lý thuyết 5% Chi phí/cây thực tế Giá điện 1150 1150 1150 1150 Thành tiền 1.324.800 621.000 230.000 362.250 2.538.050 201 212 Chi phí hóa chất/vật liệu Hóa chất Hóa chất MS 1/2 (lít) Đường (kg) Agar (kg) Nước cất (lít) Cồn (lít) Nước (lít) Tỷ lệ hao hụt Đơn giá Số lượng 5000 117 23000 2,34 370000 0,8775 3000 117 18000 10 3000 Tổng chi phí/12600 Chi phí/cây lý thuyết 5% Chi phí/cây thực tế Thành tiền 585.000 53.820 324.675 351.000 180.000 12.000 1.506.495 120 126 Khấu hao thiết bị Thiết bị Đèn Máy lạnh Tủ cấy Nồi hấp Bình tam giác Nút cao su Tỷ lệ hao hụt Số lượng Giờ/ngày Số ngày 40 12 60 12 60 25 2,5 18 1800 24 60 1800 24 60 Tổng chi phí/12600 Chi phí/cây lý thuyết 5% Chi phí/cây thực tế Khấu hao 12 313 2.083 3.472 0,27 0,12 Thành tiền 345.600 225.000 416.667 156.250 699.840 311.040 2.154.397 171 180 Chi phí nhân cơng Cơng Cơng cấy Rửa bình Pha hấp môi trường Tỷ lệ hao hụt Đơn giá 100000 70000 70000 Tổng chi phí/12600 Chi phí/cây lý thuyết 5% Ngày cơng 18 10 10 Chi phí/cây thực tế Thành tiền 1.800.000 700.000 700.000 3.200.000 254 267 Tổng chi phí Tổng chi phí/cây Điện 212 Hóa chất 126 Thiết bị 180 Nhân công 267 Tổng 785 Chi phí cho 12600 lan Dendrobium Burana White ni cấy in vitro quang tự dưỡng trao đổi khí tự nhiên Chi phí điện Thiết bị Đèn máy lạnh tủ cấy nồi hấp Số lượng 80 1 Tỷ lệ sống 95% Công suất Giờ/ngày Số ngày 0,04 12 40 0,75 12 40 25 2,5 18 Tổng chi phí/12600 Chi phí/cây lý thuyết Chi phí/cây thực tế Giá điện 1150 1150 1150 1150 Thành tiền 1.766.400 414.000 230.000 362.250 2.772.650 220 232 Chi phí hóa chất/vật liệu Hóa chất Hóa chất MS 1/2 (lít) Nước cất (lít) Cồn (lít) Nước (lít) Perlite (kg) Tỷ lệ sống Đơn giá Số lượng 5000 3000 18000 33000 Tổng chi phí/12600 Chi phí/cây lý thuyết 95% Chi phí/cây thực tế 117 117 10 3000 1,8 Thành tiền 585.000 351.000 180.000 12.000 59.400 1.128.000 90 94 Khấu hao thiết bị Thiết bị Đèn Máy lạnh Tủ cấy Nồi hấp Hộp Magenta Màng millipore Số lượng giờ/ngày Số ngày Khấu hao Thành tiền 80 12 40 12 460.800 12 40 313 150.000 25 2.083 416.667 2,5 18 3.472 156.250 1800 24 40 1,46 2.522.880 3600 24 40 0,36 1.244.160 4.950.757 Tổng chi phí/12600 393 Chi phí/cây lý thuyết 95% 414 Chi phí/cây thực tế Tỷ lệ sống Chi phí nhân cơng Cơng Cơng cấy Rửa bình Pha hấp mơi trường Tỷ lệ sống Đơn giá Ngày cơng 100000 70000 70000 Tổng chi phí/12600 Chi phí/cây lý thuyết 95% Chi phí/cây thực tế 18 10 10 Thành tiền 1.800.000 700.000 700.000 3.200.000 254 267 Tổng chi phí Điện Chi phí/cây Hóa chất 232 94 Thiết bị 414 Nhân cơng 267 Tổng 1.007 Chi phí cho 20000 (20 hộp 100 L) lan Dendrobium Burana White nuôi cấy in vitro quang tự dưỡng bán tự động Chi phí điện Thiết bị Đèn máy lạnh tủ cấy nồi hấp Hệ thống tự động hóa Tỷ lệ hao hụt Số lượng Công suất Giờ/ngày Số ngày 140 0.04 12 40 0.75 12 40 1 10 2.5 15 10 1.5 30 Tổng chi phí/20000 Chi phí/cây lý thuyết 5% Chi phí/cây thực tế Giá điện 1150 1150 1150 1150 1150 Thành tiền 3,091,200 414,000 92,000 301,875 1,035,000 4,934,075 247 260 Chi phí hóa chất/vật liệu Hóa chất Hóa chất MS 1/2 (lít) Nước cất (lít) Cồn (lít) Nước (lít) CO2 (kg) Perlite (kg) Găng tay khử trùng (cặp) Tỷ lệ hao hụt Đơn giá 4500 3000 18000 208000 33000 5000 Tổng chi phí/20000 Chi phí/cây lý thuyết 5% Số lượng 280 280 10 3000 20 Chi phí/cây thực tế Thành tiền 1,260,000 840,000 180,000 12,000 1,664,000 66,000 100,000 4,122,000 206 217 Khấu hao thiết bị Thiết bị Đèn Máy lạnh Tủ cấy Nồi hấp Hệ thống tự động hóa Hộp 100 L Tỷ lệ hao hụt Số lượng giờ/ngày Số ngày 100 140 12 1 12 1 1 2.5 10 10 1 24 Tổng chi phí/20000 Chi phí/cây lý thuyết 5% Chi phí/cây thực tế Khấu hao 40 40 10 15 15 40 Thành tiền 12 313 2,083 3,472 694 1,135 2,550,775 128 134 Chi phí nhân cơng Cơng Cơng cấy Chuẩn bị Tỷ lệ hao hụt Đơn giá 100000 70000 Tổng chi phí/20000 Chi phí/cây lý thuyết 5% Ngày cơng 10 30 Chi phí/cây thực tế Thành tiền 1.000.000 2.100.000 3.100.000 155 163 Tổng chi phí Điện Chi phí/cây Hóa chất 260 217 Thiết bị 134 Nhân cơng 163 Tổng 774