Nghiên cứu sàng lọc hệ nấm rễ nội cộng sinh endomycorrhizas trong vườn cà phê hướng đến phát triển chế phẩm nấm rễ nội cộng sinh

SỞ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ Tên nhiệm vụ: Nghiên cứu sàng lọc hệ nấm rễ nội cộng sinh (endomycorrhizas) vườn cà phê hướng đến phát triển chế phẩm nấm rễ nội cộng sinh Mã số: VS02/15-17 Đơn vị chủ trì nhiệm vụ: Phịng Cơng nghệ Vi sinh Chủ nhiệm nhiệm vụ: ThS Đặng Hoàng Quyên Cán tham gia: ThS Đặng Hoàng Quyên TS Phạm Nguyễn Đức Hoàng ThS Vũ Thuỳ Dương Hình thức thực hiện:
Nghiên cứu bản;  Nghiên cứu ứng dụng;
Dự án sản xuất thử nghiệm;
Nghiệp vụ thường xuyên Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 07 năm 2019 MỤC LỤC   MỤC LỤC i  DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iv  DANH MỤC HÌNH v  DANH MỤC BẢNG vi  PHẦN THÔNG TIN CHUNG 1  PHẦN NỘI DUNG KHOA HỌC 3  1.  TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3  1.1 Tính cấp thiết đề tài 3  1.2 Ý nghĩa tính khoa học thực tiễn 4  1.2.1 Ý nghĩa 4  1.2.2 Tính khoa học thực tiễn 4  1.3 Cây cà phê tình hình sản xuất cà phê nước 4  1.4 Nấm rễ nội cộng sinh endomycorrhizas 6  1.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến hình thành phát triển nấm rễ nội cộng sinh 9  1.6 Lợi ích nấm rễ nội cộng sinh 10  1.6.1 Tăng khả huy động nước chất dinh dưỡng cho 10  1.6.2 Tăng khả chống chịu cho 11  1.6.3 Tác động lên hệ sinh thái cải thiện cấu trúc đất 12  1.7 Phân loại nấm rễ nội cộng sinh 13  1.7.1 Phân loại dựa vào hình thái 14  1.7.2 Phân loại phương pháp sinh học phân tử 20  1.8 Nhân nuôi nấm rễ nội cộng sinh 21  1.9 Một số nghiên cứu nấm rễ nội cộng sinh nước 22  2.  VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25  2.1 Vật liệu 25  2.2 Phương pháp nghiên cứu 26  2.2.1 Thực địa 26  2.2.2 Phương pháp nhuộm rễ 27  i 2.2.3 Xác định tỷ lệ rễ nhiễm nấm nội cộng sinh 28  2.2.4 Thu nhận bào tử nấm rễ nội cộng sinh 29  2.2.5 Định danh nấm rễ AMF dựa vào hình thái 30  2.2.6 Định danh bào tử AMF kỹ thuật sinh học phân tử 30  2.2.7 Thử nghiệm khả cộng sinh nấm rễ cà phê số chủ khác 34  2.2.8 Bảo quản bào tử AMF ex-situ 35  2.2.9 Nhân nuôi bào tử nấm rễ quy mô pilot 37  2.2.10 Thử nghiệm ảnh hưởng nấm rễ AMF đến sinh trưởng chủ 37  2.2.11 Thử nghiệm theo dõi thời gian lưu trữ chế phẩm dạng bột 38  2.2.12 Xử lý số liệu 38  3.  KẾT QUẢ - THẢO LUẬN 39  3.1 Hệ nấm rễ nội cộng sinh tỉnh thuộc Tây Nguyên – Đông Nam Bộ 39  3.1.1 Hệ nấm rễ nội cộng sinh vườn cà phê tỉnh Đăk Lăk 39  3.1.2 Hệ nấm rễ nội cộng sinh vườn cà phê tỉnh Lâm Đồng 41  3.1.3 Hệ nấm rễ nội cộng sinh vườn cà phê tỉnh Đồng Nai Bà Rịa Vũng Tàu 44  3.1.4 Hệ nấm rễ nội cộng sinh vườn cà phê tỉnh Gia Lai 47  3.1.5 Hệ nấm rễ nội cộng sinh vườn cà phê tỉnh Đăk Nông 49  3.1.6 Độ ẩm pH mẫu đất thu từ vườn cà phê khu vực Tây Nguyên Đông Nam Bộ 51  3.1.7 Tương quan P dễ tiêu hệ nấm rễ vườn cà phê 56  3.1.8 Hệ nấm rễ vườn cà phê vùng Tây Nguyên – Đông Nam Bộ 57  3.2 Định danh bào tử dựa vào đặc điểm hình thái 60  3.3 Định danh bào tử AMF phương pháp sinh học phân tử 69  3.4 Khảo sát chủ có khả cộng sinh tốt với nấm rễ nội cộng sinh 71  3.5 Bảo quản bào tử nấm rễ nội cộng sinh ex-situ 74  3.6 Nhân nuôi bào tử nấm rễ quy mô pilot 78  3.7 Ảnh hưởng nấm rễ đến sinh trưởng chủ 79  3.8 Quy trình sản xuất chế phẩm thử nghiệm 80  3.9 Bảo quản chế phẩm nấm rễ AMF 81  4.  ĐÁNH GIÁ CHUNG 82  ii 4.1 Nhận xét đánh giá kết đạt so với yêu cầu 82  4.2 Các nội dung công việc chưa hồn thành lý (nếu có) 83  5.  ĐỀ NGHỊ 83  PHẦN SẢN PHẨM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ 83  PHẦN TÀI LIỆU THAM KHẢO 85  I.  TIẾNG VIỆT 85  II.  TIẾNG ANH 86  PHỤ LỤC Error! Bookmark not defined.  iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT AMF Arbuscular mycorrhizal fungi INVAM International cuture collection of (vesicular) arbuscular mycorrhizal fungi TERI The energy and resources institute GINCO Glomeromycota in vitro collection (Belgium, Canada) CICG Coleỗóo Internacional de Cultura de Glomeromycota IFOAM The International Federation of Organic Agriculture Movements GW Germinal wall SW spore wall (outer wall) DGGE Denaturing Gradient Gel Electrophoresis TGGE Temperature gradient gel electrophoresis ARISA Automated rRNA intergenic spacer analysis Pcr Polymerase Chain Reaction GPS Global Positioning System iv DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc AMF rễ cỏ ba sau nhuộm với trypan blue (Deacon, 2006) 7  Hình 1.2 Bề mặt bào tử quan sát kính hiển vi (Brundrett cs, 1996) 15  Hình 1.3 Quá trình hình thành bào tử chi Glomus (Brundrett cs, 1996) 15  Hình 1.4 Quá trình hình thành bào tử hai chi Acaulospora Entrophospora (Brundrett cs, 1996) 16  Hình 1.5 Quá trình hình thành bào tử chi Gigaspora Scutellospora 18  Hình 1.6 Sơ đồ phương pháp phân tích sinh học phân tử hệ nấm nội cộng sinh (Yuko, 2012) 20  Hình 2.1 Rễ cà phê trước sau nhuộm 28  Hình 2.2 Đĩa petri với hệ thống ô vuông 1cm rễ cà phê nhuộm bố trí ngẫu nhiên đĩa 28  Hình 2.3 Cách tính tỷ lệ rễ nhiễm nấm (Theo Brundrette cs, 1996) 29  Hình 2.4 a) Giấy lọc kẻ 0,5 cm; Bào tử giấy lọc rây có kích thước lỗ khác R3 (b), R2 (c), R1 (d) 30  Hình 2.5 Quy trình bảo quản bào tử AMF ex-situ 36  Hình 3.1 pH, độ ẩm trung bình mẫu đất 51  Hình 3.2 Sự tương quan pH hệ nấm rễ nội cộng sinh cà phê 54  Hình 3.3 Tương quan độ ẩm hệ nấm rễ nội cộng sinh cà phê 55  Hình 3.4 Sự tương quan hàm lượng P dễ tiêu hệ nấm rễ nội cộng sinh cà phê 57  Hình 3.5 Kết PCR với AML1, AML2 70  Hình 3.6 Kết PCR khuẩn lạc 70  Hình 3.7 Tỷ lệ rễ nhiễm nấm AMF chủ khác 73  Hình 3.8 Hỗn hợp đất, bào tử rễ AMF 78  Hình 3.9 Nhân ni bào tử AMF bắp 78  Hình 3.10 Mật độ bào tử AMF tỷ lệ rễ nhiễm nấm theo thời gian 78  Hình 3.11 Ảnh hưởng nấm rễ đến sinh trưởng bắp có khơng có bổ sung bào tử AMF 79  Hình 3.12 Ảnh hưởng nấm rễ đến sinh trưởng cà phê có khơng bổ sung bào tử AMF 80  Hình 3.14 Sơ đồ quy trình sản xuất thử nghiệm chế phẩm AMF 80  Hình 3.15 Mật độ bào tử AMF theo thời gian bảo quản 82  v DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Những loại nấm rễ ý nghĩa sinh thái chúng (Deacon, 2006) 6  Bảng 2.1.Thành phần phản ứng nối 32  Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR khuẩn lạc 32  Bảng 2.3 Mơ tả hình thái hỗn hợp bào tử sử dụng thí nghiệm thử nghiệm khả cộng sinh bào tử nấm rễ 34  Bảng 3.1 Các thông số hệ AMF mẫu đất thu từ vườn cà phê tỉnh Đăk Lăk 39  Bảng 3.2 Tần suất xuất số lượng bào tử ứng với loại 16 mẫu đất thu tỉnh Đăk Lăk 40  Bảng 3.3 Các thông số hệ AMF mẫu đất thu từ vườn cà phê tỉnh Lâm Đồng 41  Bảng 3.4 Tần suất xuất số lượng bào tử ứng với loại 30 mẫu đất thu tỉnh Lâm Đồng 43  Bảng 3.5 Các thông số hệ AMF mẫu đất thu từ vườn cà phê tỉnh Đồng Nai tỉnh Bà Rịa Vũng Tàu 44  Bảng 3.6 Tần suất xuất số lượng bào tử ứng với loại 20 mẫu đất thu tỉnh Đồng Nai tỉnh Bà Rịa Vũng Tàu 46  Bảng 3.7 Các thông số hệ AMF mẫu đất thu từ vườn cà phê tỉnh Gia Lai 47  Bảng 3.8 Tần suất xuất số lượng bào tử ứng với loại 20 mẫu đất thu tỉnh Gia Lai 48  Bảng 3.9 Các thông số hệ AMF mẫu đất thu từ vườn cà phê tỉnh Đăk Nông 49  Bảng 3.10 Tần suất xuất số lượng bào tử ứng với loại 20 mẫu đất thu tỉnh Đăk Nông 50  Bảng 3.11 Độ ẩm pH 101 mẫu đất thu từ vườn cà phê tỉnh Đăk Lăk (ĐL), Lâm Đồng (LĐ), Đồng Nai Bà Rịa Vũng Tàu (ĐV), Gia Lai (GL), Đăk Nông 52  Bảng 3.12 Số lượng số vườn xuất kiểu hình bào tử vùng Tây Nguyên – Đông Nam Bộ 58  Bảng 3.13 Hệ nấm rễ tỉnh thuộc Tây Nguyên – Đông Nam Bộ 59  Bảng 3.14 Hình ảnh số bào tử kết định danh tới lồi dựa vào hình thái 61  Bảng 3.15 Hình ảnh số bào tử kết định danh tới chi dựa vào hình thái 65  Bảng 3.16 Kết BLAST so sánh độ tương đồng trình tự 70  Bảng 3.17 Số bào tử AMF/50g đất trước sau tháng cộng sinh với cà phê 72  Bảng 3.18 Số bào tử AMF/50g đất trước sau tháng cộng sinh với chủ khác 72  Bảng 3.19 Bào tử AMF sau tháng bảo quản bắp 74  Bảng 3.20 Bào tử AMF sau tháng bảo quản lúa 76  Bảng 3.21 Bào tử AMF sau tháng bảo quản bahia, xuyến chi mã đề 76  Bảng 3.22 Mật độ bào tử AMF theo thời gian bảo quản 81  vi TÓM TẮT Đề tài thực thu mẫu sàng lọc hệ nấm rễ nội cộng sinh 101 vườn cà phê thuộc tỉnh Tây Nguyên – Đông Nam Bộ bao gồm Đăk Lăk, Gia Lai, Lâm Đồng, Đăk Nông, Đồng Nai, Bà Rịa Vũng Tàu Số lượng bào tử, tỷ lệ rễ nhiễm nấm khơng có mối tương quan quan trọng với độ ẩm, pH, hàm lượng P dễ tiêu ghi nhận Tổng số loại bào tử ghi nhận có 59 kiểu hình, Đăk Lăk có 51 loại, Lâm Đồng có 38 loại Đồng Nai - Bà Rịa Vũng Tàu có 38 loại, Gia Lai có 27 loại, Đăk Nơng có 33 loại Bằng phương pháp hình thái định danh tới lồi 19 loại bào tử gồm W2: Dentiscutata heterogama, W3: Gigaspora magarrita, W4: Acaulospora cavernata, W6: Acaulospora scrobiculata, W10: Fuscutata savannicola, Y1: Gigaspora gigantea, Y10: Gigaspora rosea, B2, B3, B4, B6, B9: Diversispora tortuosa, B15: Glomus coremioides, B16, RE2, RE10, O3: Dentiscutata reticulata, RE1: Glomus ambisporum, O1: Racocetra coralloidea Định danh tới chi 21 loại bào tử khác thuộc chi Acaulospora, Glomus, Gigaspora, Scutellospora Qua thí nghiệm khảo sát chủ nhân nuôi, lưu giữ bào tử AMF cho thấy bắp phù hợp với nhiều loại bào tử so với chủ khác lúa, mã đề, xuyến chi,… Cây bắp phù hợp nhân nuôi loại bào tử RE10, O10, Y3, Y5, Y1, W1, W2, W3, W6, RE2, O3 thuộc chi Dentiscutata, Gigaspora, Acaulospora Với hỗn hợp bào tử sử dụng nhân nuôi bắp sau tháng lượng AMF tăng từ 1-2 bào tử/50 g đất lên tới 165 bào tử/50 g đất Trong khảo sát ảnh hưởng đến sinh trưởng bắp cà phê có khơng bổ sung hỗn hợp AMF cho thấy khác biệt chiều cao cây, chiều dài rễ, trọng lượng số Sử dụng than bùn làm phụ gia, với mật độ ban đầu 14 bào tử AMF/g chế phẩm, độ ẩm nhỏ 15%, sau tháng mật độ bào tử giữ 10 bào tử/g vii PHẦN THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Nghiên cứu sàng lọc hệ nấm rễ nội cộng sinh (endomycorrhizas) vườn cà phê hướng đến phát triển chế phẩm nấm rễ nội cộng sinh (Mã số: VS02/15-17) Đơn vị chủ trì: Phịng Cơng nghệ Vi sinh Đơn vị phối hợp chính: (nếu có) Chủ nhiệm nhiệm vụ: ThS Đặng Hoàng Quyên Cán tham gia thực hiện: 1/ ThS Đặng Hoàng Quyên 2/ TS Phạm Nguyễn Đức Hoàng 3/ ThS Vũ Thuỳ Dương Thời gian thực hiện: 36 tháng (01/2015 – 12/2017) Kinh phí: - Tổng dự tốn: 590.000.000 VNĐ - Kinh phí sử dụng: 590.000.000 VNĐ Mục tiêu nhiệm vụ: Mục tiêu tổng quát: Nghiên cứu, sàng lọc hệ nấm rễ nội cộng sinh cà phê tỉnh khu vực Tây Nguyên Đông Nam Bộ hướng đến sản xuất thử nghiệm chế phẩm nấm rễ nội cộng sinh Mục tiêu cụ thể: - Nắm phân bố nấm rễ nội cộng sinh cà phê số tỉnh khu vực Tây Nguyên Đông Nam Bộ - Thu thập, định danh bảo tồn ex – situ nấm rễ nội cộng sinh cà phê - Chọn chủ nhân nuôi phù hợp với nấm rễ - Hướng đến sản xuất thử nghiệm chế phẩm nấm rễ nội cộng sinh Các nội dung công việc thực so với đăng ký Thời gian (bắt STT Nội dung đăng ký đầu – kết thúc) Nội dung 1: Nghiên cứu Từ tháng sàng lọc hệ nấm rễ nội cộng 01/2015 đến sinh vườn cà phê 10/2016 Thực Đánh giá Tháng 01/2015 đến Đúng tiến độ tháng Thu mẫu đất từ vườn cà phê Đo pH, độ ẩm mẫu đất Xác định hàm lượng P dễ tiêu mẫu đất Sàng lọc hệ bào tử AMF Xác định tỷ lệ rễ nhiễm nấm Nội dung 2: Định danh, thử nghiệm khả cộng sinh nấm rễ nội cộng sinh chủ cà phê Bảo quản nấm rễ nội cộng sinh thu thập Định danh bào tử AMF hình thái Định danh bào tử AMF kỹ thuật sinh học phân tử Chọn chủ phù hợp để nhân nuôi AMF Bảo quản bào tử AMF chủ phù hợp Nội dung 3: Thử nghiệm sản xuất chế phẩm nấm rễ nội cộng sinh qui mô pilot Nhân nuôi bào tử AMF quy mô pilot Tạo chế phẩm dạng bột Theo dõi thời gian bảo quản chế phẩm 09/2016 Từ tháng Tháng Không tiến 10/2015 đến 05/2016 đến độ 04/2017 06/2018 Từ tháng Tháng 12/2016 đến 12/2016 đến Đúng tiến độ 12/2017 12/2017 28 Acaulospora O5 29 Glomus O6 30 Chưa định danh O7 31 Chưa định danh O8 32 Acaulospora O9 33 Acaulospora O10 34 Gigaspora gigantean R2 100x160 R2 100x120 R2 160 R3 300 R1 100 R1 75x120 R3 Y1 360-400 35 Glomus Y2 36 Acaulospora Y3 37 Glomus Y4 38 Chưa định danh Y5 39 Acaulospora Y6 40 Chưa định danh Y7 41 Entrophospora Y8 R1 120 R3 120x150 R2 70x150 R3 300 R2 150x100 R1 80 R2 120 42 Gigaspora rosea Y10 43 Chưa định danh Y11 44 Acaulospora Y12 45 Chưa định danh Y13 46 Scutellospora Y14 47 Chưa định danh Y15 48 Glomus Y17 R2 200 R1 80-100 R1 50x90 R1 80 R3 450 R1 100 R1 50-60 49 Glomus Yc 50 Chưa định danh W1 51 Scutellospora heterogama (Dentiscutata heterogama) W2 52 Giagaspora margarita W3 53 Acaulospora cavernata W4 54 Chưa định danh W5 55 Acaulospora scrobiculata W6 R1 60-80 R1 100 R3 200 R3 450 R2 150 R2 100x120 R2 120-140 56 Chưa định danh W7 57 Chưa định danh W10 58 Chưa định danh W11 59 Chưa định danh Rex R1 75 R3 300x450 R3 300x450 R3 450-500 Phụ lục Kết trình tự blast trình tự mẫu bào tử AMF Kết Blast mẫu W3 Gigaspora margarita: TCAACTTTCGATGGTAGGCATAGAGGCCTACCATTGGTTTTAACGGGTAACG GGGGAAATTAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGTAGCCTGCAGAAATGAGCTACC ACATCCAAGGAAGGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATTCCCGATACGGG GAGGTAGTGACAATAAATAACAATACAGGGCTCTTATGGGTCTTGTAATTGG AATGAGTACAATTTAAATCCCTTATCGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGG TGCCAGCAGCCGCGGTAATTCTAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGCA GTTAAAAAGCTCGTAGTTGAATTTCGGAGTTCTACCGTTGGTCGGGCAATAGT CTGTACTGGCGTGTAGAATTTCTACCTTCTGGGGAACTATCATGTTATTTATTT AGCGTGGTAGGAAACCAGGACCTTTATCTTGAAAAAATTAGAGTGTTCAAAG CAGGCTTACGTCTGAATACATTAGCATGGAATAATAAAATAGGACGGTGGTC CTGTTTTGTTGGTTTCTGAATCACCGTAATGATTAATAGGGATAGCTGGGGGC ATTAGTATTCAATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATTGAAGACTAACTT CTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAAGAACGAAAGCTAGG GGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCGGTAGTCTTAACCCATAAACTATGCC GACTAGGGATTGGACCGATGTTAATTTTTTTCTTGACTCGTTCGGCGCCCTTC GGGAAACCAAAGTGTTTGGTTTC Kết Blast mẫu O1 Glomeromycota sp GACCCAAACACTTTGGGGTTTCCTGTAAGGGTGCCGAATGAGGTCAAGAAAA GCTTAAACATCCGTCCGATCCCTAGTTCGGGCATAGTTTTATGGTTAAGGACC ACGACGGTATCTGATTCGTCTTCGATCCCCCTAACTTTCGTTTTTGATTAATGA AACCATCCTTGGCAAATGCTTTTTGCAGAAAGTTAGTCTTCAATAAATCCAAG AATTTCACCTCTGACAATTGAATACTAATGCCCCCAACTATCCCTATTAATCA TTATGGTGATTCAGAAACCAACAAAACAGGACCACCATCCTATTTTATTATTC CATACTAATGTATTCAGACGTAAGCCTGCTTTGAACACTCTAATTTTTTCAAG GTAAAGGTCCTGGTTTCCCACCACACTAAATTAATAGCATGATGGTTCCCCAG AAGGTAGAAATTCCACACGCCAGTACAGACTATTGCCCGACCAACGGTAGAA CCCCGAAATTCAACTACGAGCTTTTTAACTGCAACAACTTTAATATACGCTAT TGGAGCTGGAATTACCGCGGCTGCTGGCACCAGACTTGCCCTCCAATTGTTCC TCGTTAAGGGATTTAAATTGTACTCATTCCAATTACAAGACCCATAAGAGCCC TGTATTGTTATTTATTGTCACTACCTCCCCCGTATCGGGATTGGGTAATTTGCG CGCCTGCTGCCTTCCTTGGATGTGGTAGCCGTTTCTACAGGCTCCCTCTCCGG AATCGAACCCTAATTCCCCCGTTCCCCGTTAAAACCATGGTAGGCCTCTATCC TACCAATCGAAAGTTG Kết Blast mẫu Y1 Gigaspora gigantea GAACCCAAACACTTTGGTTTCCCCCAAAAGGCGCCGAACGAGTCAAGAAGAA AATTAACATCGTCCGATTCCCTAGTCGGCATAGTTTATGGTTAAGACTACGAC GGTATCTGATCGTCTTCGATCCCCCTAACTTTCGTTCTTGATTAATGAAAACA TCCTTGGCAAATGCTTTCGCAGAAGTTAGTCTTCAATAAATCCAAGAATTTCA CCTCTGACAATTGAATACTAATGCCCCCAACTATTCCTATTAATCATTACGGT GATTCAGAAACCAACAAAACAGGACCACCGTCCTATTTTATTATTGCATACT AATGTATTCAGACGTAAGCCTGCTTTGAACACTCTAATTTTTTCAAGGTAAAG GTCCTGGTTTCCCACCACGCTAAATTAATAACATGATGGTTCCCCAGAAGGTA GAAATTCCACACGCTAGTACAGTACAATTGTCCGACCAACGGTGGAACCCCG AAATTCAACTACGAGCTTTTTAACTGCAACAACTTTAATATACGCTATTGGAG CTAGAAATTACCGCGGCTGCTGGCACCAGACTTGCCCTCCAATTGTTCCTTGT TAAGGGATTTAAATTGTACTCATTCCAATTTACAAGACCCATAAGAGCCCCTG TATTGTTATTTATTGTCACTACCTCCCCCGTAATCGGGATTGGGTAATTTGCG CGCCTGCTACCTTTCCTTGGAATGTGGTAGCCGTTTACTACAGGCTTCCCTCT CCAGAATCGAACCCTAATTTCTCCGCTTACCCGT Kết Blast mẫu Y10 Gigaspora rosea TATCAACTTTCGATGGTACGGATAGAGACCTACCATGGTTTTAATGGGTAAC GGGGGAATTAGAGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCAC ATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCTCGATACGGGGGAG GTAGTGACAATAAATAACAATACAGGGCTCTTATGGGTCTTGTAATTGGAAT GAGCACAATTTAAATTCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGC CAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGCAGTT AAAAAGCTCGTAGTTGAATTTCGGGGTTCTACCGTTGGTCGGACATGTCTGTA CTGGCGTGTGGAATTTCTACCTTCTGGGGAACTATCACGCTATTAATTTAGTG TGGTGGGAAACCAGGACCTTTACCTTGAAAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGG CTTACGTCTGAATACATTAGCATGGAATAATAAAAATAGGATGGTGGTCCTG TTTTGTTGGTCTCTGAATCACCATAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCATT AGTATTCAATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATTGAAGACTAACTTCTG CAAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAAAAACGAAAGTTAGGGGA TCGAAGACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAG GGGATCGGACGTCGTTAATTTTTTCTTGACTCATTCGGCACCCTTAAGGAAAC CAAAGTGTTTGGGTTC Kết Blast mẫu W2 Scutellospora heterogama TATCAACTTTCGGATGGTAGGATAGGAGGCCTACCATGGTTTTAACCGGGTA ACCGGGGAATTAGGGTTCGATTCCGGAGAAGGGAGCCTGAGAAAACGGGCT ACCACATTCCAAGGGAAGGCAGCAAGCGCGCAAATTTACCCCAATTCCCGAC ACGGGGGAGGTAGTGACCAATAAATAACAATACAGGGCTTTTTCGGGTCTTG TAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAAGGCA AGTCTGGTGCCAGCAGCCGTGGTAATTCTAGCTCCAATAGCGTATATTAAAG TTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAATTTCGGGGTTCCCTCGTCGGTTAT GTTGATGTGGGTGTACTAGCGTGTGGAAATACTGCATATTTACGGAACTATC ATGTTATTAATTTAGCGTGGTAGGAAACCAGGACATTTACCTTGAAAAAATT AGAGGGTTCAAAGCAGGCTTATGTGAGAATACAAAAGCATGGAATAAGAAA ATTGGACAGTGGTTCTGTTTTGTTGGTTTTTGAATCACTGTAGGTGATTAATA TAGATAGTTGGGGGCATTAGTATTCAATTCTAAGAGGTGAAATTCTAGGATTT ATCGAAGAATAACTACTGCGAAAACATTTTCCTATGATGTTTTACTTAATCAA GAACGAAAGTTAAGCGATCGAAGACGATCAGATCCATCGTAGTCTACCCATA ATCTATGCCGACTAGGGATCACGATTTTCTTTTCTTGACTCGTTCAGCGCCTT ACGGGAAACCCAAAAGTGTT Kết Blast mẫu RE2 Dentiscutata reticulata ATTCAAATTTCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGG TTTTAACGGGTAACGGGGAATTAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGA AACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCC ACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATAACAATACAGGGCTCTTACGGGTCTTG TAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCA AGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAG TTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAATTTCGGGATTCTACCGTTGGTCGG GCTATCCAGTCTGTACTAGCGTGTAGAATTTCTACCTTCTGGGGAACCATCAT GTTATTAATTTGGCGTGGTGGGAAACCAGGACCTTTACCTTGAAAAAATTAG AGTGTTTAAAGCAGGCTTACGTCTGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATA GGACGGTGGTCCTGTTTTGTTGGTTTCTGAATCACCGTAATGATTAATAGGGA TAGTTGGGGGCATTAGTATTCAATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATTG AAGACTAACTTCTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAAGAA CGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAA ACTATGCCGACTAGGGATCGGACGATGTTAAATATTATTGACTCGTTCGGCG CCTTACGGGAAACCAAAGTGTTTGGGTTCCGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGC TGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGGGTGGAGCCTGCGG CTTAATTTGACTCAACACGGGGAAACTCACCAGGTCCAGACATAGTAAGGAT TGACAGAT Kết Blast mẫu W10 Scutellospora savannicola AACCCAAACACTTTGGTTTCCCGTAAGGCGCCGAACGAGTCAAGAAAAGT TAACATCGTCCGATCCCTAGTCGGCATAGTTTATGGTTAARACWACGACGG TATTTGATCGTCTTCGATCCCCTAACTTTCGTTCTGTGATTAATGAAAACAT CCTTGGCAAATGCTTTCGCAGAAGTTACTGTCGTTCAATAAATCCAAGAAT TTCACCTCTGACAATTGAATACTAATGCCCCCAACTATTCCTATTAATCATT ACGGTGATTCATAATCACCAACAAAACAGGACCACCGTCCTATTTTATTAT TCCATACTAATGTATTCACACGTAAGCCCTGCTTTGAACACTCTAATTTTTT AATGGTAAAGGTCCTGGTTTCACTACCATGCTAAATTAGTAACATGACAGT ATCCCCAGAAGGTAGAAATTCCACACGCCAGTACAAACAATAGCCCGACC AGCGGTGGAACCCCGAAATTCAACTACGAGCTTTTTAACTGCAACAACTTT AATATACACTATTGGAGCTGGAATTACCGCGGCTGCTGGCACTAGACTTGC CCTCCAATTGTTCCTCGTTAAGAGATTTAAATTGTACTCATTCCAATTACAA GACCTGAAAGAGCCCTGTATTGTTATTTATTGTCACTACCTCCCCGTGTCGG AATTGGGTAATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTTGGATGTGGTAGCCGTTTCT CAGGCTCCCTCTCCAGAATCGAACCCTAATTCCCCGTTACCCCATTAAAAA CCATGGTAGGCCTCTACCCTACCATCGAAAGGTTGATA Phụ lục Địa tọa độ vườn cà phê thu mẫu vườn địa Toạ độ GPS ĐN1 Tổ Nghĩa Trung Gia Nghĩa Đăk Nông N 11.58.701 E 107.41.804 ĐN2 Tổ Nghĩa Trung Gia Nghĩa Đăk Nông N 11.58.824 E 107.41.884 ĐN3 Tổ Nghĩa Trung Gia Nghĩa Đăk Nông N 11.58.565 E 107.41.983 ĐN4 Tổ Nghĩa Trung Gia Nghĩa Đăk Nông N 11.58.589 E 107.42.005 ĐN5 Tổ Nghĩa Trung Gia Nghĩa Đăk Nông N 11.58.286 E 107.42.069 ĐN6 Thôn 10 Xã Đăk Nia, Gia Nghĩa Đăk Nông N 11.58.905 E 107.42.369 ĐN7 Thôn Xã Quảng Khê, Dak Glong, Dak Nông N 11.54.225 E 107.47.292 ĐN8 Thôn Xã Quảng Khê, Dak Glong, Dak Nông N 11.54.243 E 107.47.227 ĐN9 Thôn Xã Quảng Khê, Dak Glong, Dak Nông N 11.53.701 E 107.46.638 ĐN10 Thôn Xã Quảng Khê, Dak Glong, Dak Nông N 11.53.715 E 107.46.784 ĐN11 Thôn 11, Dak Lang, Dak Glong, Dak Nông N 11.53.226 E 107.46.342 ĐN12 Thôn 9, Dak Lang, Dak Glong, Dak Nông N 11.53.416 E 107.45.157 ĐN13 Thôn 8, Xã Quảng Khê, Dak Glong Dak Nông N 11.53.723 E 107.49.325 ĐN14 Thôn Xã Quảng Khê, Dak Glong, Dak Nông N 11.53.564 E 107.49.418 ĐN15 Thôn 8, Xã Quảng Khê, Dak Glong Dak Nông N 11.53.522 E 107.50.194 GL1 Thơn Bình Minh, Xã Dun, Chư Sê N 13.41.162 E 108.05.563 GL2 Thôn 7, Xã Dun, Chư Sê N 13.41.106 E 108.05.816 GL3 Thôn 4, Xã Dun, Chư Sê N 13.40.730 E 108.05.609 GL4 Thôn 1, Xã Iapal, Chư Sê N 13.40.421 E 108.06.608 GL5 Thôn 2, Xã Iapal, Chư Sê N 13.40.283 E 108.06.694 GL6 Phú Cường, Iapal, Chư Sê N 13.39.864 E 108.07.718 GL7 Tịnh Xá Phú Cường, Iapal, Chư Sê N 13.39.698 E 108.07.444 GL8 Làng Kê, Tt Chư Sê, Chư Sê N 13.41.136 E 108.04.032 GL9 Phan Đình Giót, Tt Chư Sê, Chư Sê N 13.41.555 E 108.03.776 GL10 KP9, Ts Chư Sê, Chư Sê N 13.42.199 E 108.04.631 GL11 Iabang, Chư Prông, N 13.46.758 E 107.59.122 GL12 Thôn 3, Iabang, Chư Prông N 13.46.895 E 107.59.192 GL13 Làng Phun, Iabang, Chư Prông N 13.47.439 E 107.59.585 GL14 Thôn 2, Iabang, Chư Prông N 13.44.959 E 107.57.512 GL15 Thôn 10, Iabang, Chư Prông N 13.45.246 E 107.57.500 GL16 Làng Ipoha, Iator, Chư Prông N 13.45.656 E 107.57.795 GL17 Làng Thái, Iator, Chư Prông N 13.45.724 E 107.57.979 GL18 iator, chư prông N 13.45.641 E 107.57.840 GL19 iator chư prông N 13.48.204 E 108.00.563 GL20 iabang, chư prông N 13.48.140 E 108.00.477 LĐ Tà Nung Tp Đà Lạt N11 55.490 E108 21.118 LĐ2 Tà Nung Tp Đà Lạt N11 55.475 E108 21.114 LĐ Tà Nung Tp Đà Lạt N11 55.509 E108 21.122 LĐ Tà Nung Tp Đà Lạt N11 55.526 E108 20.855 LĐ Tà Nung Tp Đà Lạt N11 55.111 E108 20.717 LĐ Tà Nung Tp Đà Lạt N11 54.336 E108 20.590 LĐ Tà Nung Tp Đà Lạt N11 54.099 E108 20.708 LĐ Tà Nung Tp Đà Lạt N11 53.796 E108 20.876 LĐ Mê Linh Lâm Hà Lâm Đồng N11 52.123 E108 20.473 LĐ 10 Mê Linh Lâm Hà Lâm Đồng N11 52.126 E108 20.450 LĐ 11 Mê Linh Lâm Hà Lâm Đồng N11 52.193 E108 20.477 LĐ 12 Mê Linh Lâm Hà Lâm Đồng N11 52.498 E108 20.518 LĐ 13 Mê Linh Lâm Hà Lâm Đồng N11 55.553 E108 20.896 LĐ 14 Tà Nung Tp Đà Lạt N11 55.555 E108 20.897 LĐ 15 Măng Linh Đà Lạt N11 58.145 E108 23.581 LĐ 16 Tả Lộc Xuân Thọ Đà lạt N11 56.631 E108 31.313 LĐ 17 Tuy Sơn Xuân Thọ Đà Lạt N11 55.553 E108 20.898 LĐ 18 Đa Thọ Xuân Thọ Đà Lạt N11 56.172 E108 31.930 LĐ 19 Đa Thọ Xuân Thọ Đà Lạt N11 56.131 E108 31.850 LĐ 20 Đa Thọ Xuân Thọ Đà Lạt N11 56.131 E108 31.850 LĐ 21 Đa Thọ Xuân Thọ Đà Lạt N11 56.107 E108 31.836 LĐ 22 Đa Thọ Xuân Thọ Đà Lạt N11 56.127 E108 31.857 LĐ 23 Đa Thọ Xuân Thọ Đà Lạt N11 56.129 E108 31.823 LĐ 24 Đa Thọ Xuân Thọ Đà Lạt N11 56.092 E108 31.815 LĐ 25 Trường Thọ Trạm Hành Đà Lạt N11 52.586 E108 33.329 LĐ 26 Xuân Trường Đà Lạt N11 52.536 E108 33.142 LĐ 27 Xuân Trường Đà Lạt N11 53.642 E108 32.333 LĐ 28 Xuân Trường Đà Lạt N11 54.276 E108 31.810 LĐ 29 đa Thọ Xuân Thọ Đà lạt N11 55.545 E108 31.923 LĐ 30 đa Thọ Xuân Thọ Đà lạt N11 55.599 E108 31.917 DL1 Thị xã Buôn Hồ, Huyện Krông Buk, T Đăk Lăk N 12 49.1034 E 108 15.4579 DL2 Thị xã Buôn Hồ, Huyện Krông Buk, T Đăk Lăk N 12 49.1597 E 108 16.0008 DL3 Thị xã Buôn Hồ, Huyện Krông Buk, T Đăk Lăk N 12 48.5551 E 108 15.5797 DL4 Xã Krông buk, huyện Krông Păk, T ĐăK Lăk N12 47.2840 E 108 24.3491 DL5 Xã Krông buk, huyện Krông Păk, T ĐăK Lăk N 12 47.2343 E 108 24.2605 DL6 Xã Krông buk, huyện Krông Păk, T ĐăK Lăk N 12 47.4410 E 108 24.1092 DL7 Xã Krông buk, huyện Krông Păk, T ĐăK Lăk N 12 47.4925 E 108 24.0248 DL8 Xã Krông buk, huyện Krông Păk, T ĐăK Lăk N 12 47.2577 E 108 23.3924 DL9 Xã EaKênh, Huyện Krông Pak, T Đăk Lăk N12 42.3289 E 108 14.2308 DL10 Xã EaKênh, Huyện Krông Pak, T Đăk Lăk N 12 42.4520 E 108 14.3381 DL11 Xã EaKênh, Huyện Krông Pak, T Đăk Lăk N 12 42.3919 E 108 15.0471 DL12 EaTu, Buôn Ma thuột, T Đăk Lăk N12 42.1141 E 108 08.5855 DL13 EaTu, Buôn Ma thuột, T Đăk Lăk N 12 42.2475 E 108 08.4363 DL14 EaTu, Buôn Ma thuột, T Đăk Lăk N12 42 0640 E 108 08 4598 DL15 EaTu, Buôn Ma thuột, T Đăk Lăk N 12 42.1466 E 108 08.2524 DL16 EaTu, Buôn Ma thuột, T Đăk Lăk N12 41.5341 E 108 08 5064 ĐV1 Châu Đức- Bà Rịa Vũng Tàu N10 40.101 E107 14.552 ĐV2 Châu Đức- Bà Rịa Vũng Tàu N 10 40.93 E 107 14.583 ĐV3 Châu Đức- Bà Rịa Vũng Tàu N 10 40 153 E 107 15.77 ĐV4 Châu Đức- Bà Rịa Vũng Tàu N 10 40.371 E 107 15.211 ĐV5 Châu Đức - Bà Rịa Vũng Tàu N 10 40.367 E 107 15.301 ĐV6 Kim Long - Châu Đức - Vũng Tàu N10 43.29 E 107 13.285 ĐV7 Kim Long - Châu Đức - Vũng Tàu N 10 43.12 E 107 12.578 ĐV8 Kim Long - Châu Đức - Vũng Tàu N 10 42.574 E 107 13.333 ĐV9 Kim Long - Châu Đức - Vũng Tàu N 10 42.496 E 107 13.339 ĐV10 Kim Long - Châu Đức - Vũng Tàu N 10 42 418 E 107 13.139 ĐV11 Bảo Bình - Cẩm Mỹ - Đồng Nai N 10 48.596 E 107 18.178 ĐV12 Bảo Bình - Cẩm Mỹ - Đồng Nai N 10 48.467 E 107 18.185 ĐV13 Bảo Bình - Cẩm Mỹ - Đồng Nai N 10 48.539 E 107 18.205 ĐV14 Bảo Bình - Cẩm Mỹ - Đồng Nai N 10 49.09 E 107 18.229 ĐV15 Bảo Bình - Cẩm Mỹ - Đồng Nai N 10 49.22 E 107 18.242 ĐV16 Xuân Định- Xuân Lộc- Đồng Nai N 10 53.548 E 107 14.522 ĐV17 Nhân Nghĩa - Cẩm Mỹ - Đồng Nai N 10 51.128 E 107 14.592 ĐV18 Hàng Gòn-Long Khánh- Đồng Nai N 10 51.506 E 107 13.108 ĐV19 Hàng Gòn-Long Khánh- Đồng Nai N10 51.35 E 107 12.36 ĐV20 Hàng Gòn-Long Khánh- Đồng Nai N10 51.421 E 107 12.375