Nghiên cứu sản xuất bán thành phẩm cao chiết chuẩn hóa và một vài chế phẩm từ actisô đà lạt có hàm lượng cynarin và acid clorogenic tương đương với chế phẩm của nước ngoài chophytol đang lưu thông ở thị trường trong nước

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP.HCM TRUNG TÂM KHCN DƢỢC SÀI GÕN BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT BÁN THÀNH PHẨM (CAO CHIẾT CHUẨN HÓA) VÀ MỘT VÀI CHẾ PHẨM TỪ ACTISƠ ĐÀ LẠT CĨ HÀM LƢỢNG CYNARIN VÀ ACID CLOROGENIC TƢƠNG ĐƢƠNG VỚI CHẾ PHẨM CỦA NƢỚC NGỒI (CHOPHYTOL) ĐANG LƢU THƠNG Ở THỊ TRƢỜNG TRONG NƢỚC Chủ nhiệm đề tài: TS Phạm Đông Phƣơng PGS.TS Nguyễn Thiện Hải Cán tham gia: ThS Nguyễn Thị Ánh Nguyệt ThS Lê Văn Huấn ThS Võ Ngọc Linh Giang Cơ quan chủ trì: TRUNG TÂM KHOA HỌC CƠNG NGHỆ DƢỢC SÀI GỊN Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2016 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP.HCM TRUNG TÂM KHCN DƢỢC SÀI GÕN BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT BÁN THÀNH PHẨM (CAO CHIẾT CHUẨN HÓA) VÀ MỘT VÀI CHẾ PHẨM TỪ ACTISƠ ĐÀ LẠT CĨ HÀM LƢỢNG CYNARIN VÀ ACID CLOROGENIC TƢƠNG ĐƢƠNG VỚI CHẾ PHẨM CỦA NƢỚC NGỒI (CHOPHYTOL) ĐANG LƢU THƠNG Ở THỊ TRƢỜNG TRONG NƢỚC CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI PGS.TS Nguyễn Thiện Hải CƠ QUAN QUẢN LÝ TS Phạm Đông Phƣơng CƠ QUAN CHỦ TRÌ GS.TS Lê Quan Nghiệm Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2016 TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Actisô (Cynara scolymus L ƣợc d ng phổ biến việc i u trị viêm gan, cao cholesterol Các tác dụng n y chủ yếu l d n xuất acid caffeoylquinic c biệt l cynarin acid clorogenic Hiện nay, Actisô ƣợc ngƣời dân d ng nhi u ể l m thực phẩm hay l m thuốc dƣới nhi u hình thức khác nhƣ viên nén, viên nang cứng, nang m m, viên sủi, tr Actisô hòa tan Tuy nhiên, qua khảo sát ánh giá h m lƣợng hoạt chất (cynarin v acid clorogenic cho thấy thuốc sản xuất nƣớc có chất lƣợng khơng ồng u, chí có sản phẩm hầu nhƣ khơng phát ƣợc hoạt chất Do ó, việc nghiên cứu ánh giá chất lƣợng nguyên liệu, chiết xuất cao, xây dựng phƣơng pháp ịnh lƣợng HPLC (thay phƣơng pháp o UV ể tiêu chuẩn hóa nguyên liệu, kiểm nghiệm th nh phẩm hay bán th nh phẩm v sản xuất thuốc có chất lƣợng hẳn sản phẩm sẵn có thị trƣờng l nhu cầu cấp bách v có ý nghĩa thiết thực Mục tiêu đề tài Xây dựng phƣơng pháp ịnh tính, ịnh lƣợng ồng thời cynarin, acid clorogenic lá, cao chiết v th nh phẩm ể ánh giá nguyên liệu, bán th nh phẩm v th nh phẩm Chiết xuất cao chuẩn hóa v xây dựng tiêu chuẩn sở Sản xuất th nh phẩm có chất lƣợng ho c chế phẩm Chophytol h ng Rosa – Pháp sản xuất Nguyên liệu Phƣơng pháp nghiên cứu Nguyên liệu: Lá tƣơi Actiso Đ Lạt, Cao chiết v th nh phẩm (tr , thuốc viên thu thập ang lƣu thông thị trƣờng nƣớc ƣợc Phương pháp nghiên cứu: - Chiết xuất, phân lập v thiết lập chất chuẩn theo hƣớng d n ICH Xác ịnh giá trị ấn ịnh v ộ không ảm bảo o theo ISO 13528 - Xây dựng phƣơng pháp ịnh tính, ịnh lƣợng ồng thời cynarin, acid clorogenic sở khảo sát i u kiện sắc ký, chuẩn bị m u v thẩm ịnh quy trình ịnh lƣợng xây dựng - Chiết xuất quy mô công nghệ, cô chân không v thu cao khô máy sấy phun sƣơng - Sản xuất viên bao phim v thuốc bột óng gói, ánh giá chất lƣợng so với Chophytol Kết Nghiên cứu Xây dựng phƣơng pháp ịnh tính, ịnh lƣợng ồng thời cynarin, acid clorogenic cho nguyên liệu, cho bán th nh phẩm v th nh phẩm Chiết xuất 16 chất tinh khiết, thiết lập chất chuẩn quan trong Actisô l cynarin, acid clorogenic v cynarosid Khảo sát i u kiện ổn ịnh l m tăng hoạt chất, chiết xuất 62,8 kg cao Sản xuất viên bao phim, thuốc bột óng gói, khảo sát h m lƣợng hoạt chất nguyên liệu, bán th nh phẩm v th nh phẩm thị trƣờng Thuốc viên v thuốc bột óng gói chứa 200 mg cao Actisơ nhóm nghiên cứu sản xuất có h m lƣợng acid clorogenic gấp 8,72 lần v h m lƣợng cynarin gấp 18,58 lần so với h m lƣợng chất viên Chophytol SUMMARY Introduction Artichoke (Cynara scolymus L.) has extensively been used as herbal medicines for the treatment of hepatitis and hypercholesterolemia Caffeoylquinic acids and flavonoids seem to play important roles in its pharmacological properties Recently, there have been many Artichoke‟s preparations in Vietnamese market but the quality control of these products using a limited selectivity assay as UV spectrophotometer Therefore, the method development of an assay which is more selective for the advanced standardization or quality assurance of herbal drugs was highly necessary Objectives The aim of this study was to extract of higher quality dry extracts from the fresh leaves of Artichoke and prepare two formulations (coated tablets, instant tea) that have higher quality than Chophytol and other products in Vietnamese domestic market and establish the method for simultaneous determination of cynarin and chlorogenic acid in leaves, extracts and products (Actichoke tea bag, instant tea, tablets by HPLC Materials and Methods Fresh and dry leaves of Artichoke, cynarin standard (≥98% , chlorogenic acid standard (≥98% , Phytolab (Germany ; Artichoke leaf dry extracts Extraction and isolation: The fresh leaves of Artichoke was extracted with methanol and removed solvent to liquid extract It was partitioned with chloroform, ethyl acetate and nbutanol respectively The n-butanol extract were subjected to column chromatography on silica gel (VLC, MPLC and HPLC) Quantitation: The method development for simultaneous quantitation of cynarin and chlorogenic acid in leaves, extract and preparations was performed on the HPLC system of Alliance 2695 XE Separations module (Waters), 2996 PDA detector using a Sunfire C18 analytical column (250 ì 4.6 mm; àm Some Artichoke‟s preparations available on the market were determined amounts of cynarin and chlorogenic acid Results 16 pure compounds were extracted and isolated, and compounds (cynarin, chlorogenic, cynaroside) were established as reference standard The method development for simultaneous quantitation of cynarin and chlorogenic acid in leaves, extract and preparations was performed on the HPLC HPLC conditions were established as follows: gradient elution with 0.1% formic acid and acetonitril, 25 oC column temperature, flow rate at ml/min, at the wavelength of 323 nm, 40 run time Validate the HPLC method: the system compatibility, specificity, repeatability, accuracy were conformed (RSD