Nghiên cứu chế tạo bộ kit phát hiện nhanh hàn the trong thực phẩm trung tâm phát triển khoa học công nghệ trẻ

g SỞ KH & CN TP.HCM THÀNH ĐOÀN TP.HCM CHƯƠNG TRÌNH VƯỜN ƯƠM SÁNG TẠO KHCN NGHỆ TRẺ BÁO CÁO NGHIỆM THU Đề tài: NGHIÊN CỨU CHẾ TẠO BỘ KÍT PHÁT HIỆN NHANH HÀN THE TRONG THỰC PHẨM (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu) MỤC LỤC Cơ quan chủ trì: TT Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Chủ nhiệm đề tài: ThS Phùng Văn Trung THÁNG - 2007 Báo cáo nghiệm thu Trang I GIỚI THIỆU II TOÅNG QUAN 7 II.1 Tính chất lý hoá hàn the II.2 Phương pháp phân tích hàn the thực phẩm 13 II.3 Các nghiên cứu “Kít thử hàn the nhanh” 13 II.3.1 Một số phương pháp phân tích phát triển thành 13 kít thử nhanh trường II.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 14 II.3.3 Tình hình nghiên cứu nước 15 II.3.4 Lợi ích kinh tế-xã hội “Kít thử hàn the 16 nhanh“ 17 III THỰC NGHIỆM III.1 Khảo sát sơ phản ứng màu chất thị 18 III.2 Khảo sát dạng sản phẩm 21 III.3 Khảo sát giới hạn phát sản phẩm 24 III.4 Khảo sát thời gian màu giấy thử 28 III.5 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến kết phân tích 30 III.6 Đánh giá độ tin cậy sản phẩm 34 III.7 Sản phẩm 39 IV KẾT LUẬN 43 V KIẾN NGHỊ 45 VI TÀI LIỆU THAM KHAÛO 46 Báo cáo nghiệm thu DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1: Độc tính borax bacteria, protozoa algae 10 Bảng 2: Xuất hợp chất Bo Mỹ Thổ Nhó Kỳ 11 Bảng 3: Xuất hợp chất Bo Argentina, Chile Peru Bảng 4: Lượng tiêu thụ hợp chất Bo Mỹ (1992) EU (1993) 12 Bảng 5: Kết khảo sát chuyển màu giấy tẩm Curcumin 22 Bảng 6: Kết khảo sát sơ giới hạn phát sản phẩm 24 Bảng 7: Kết khảo sát giới hạn phát sản phẩm 25 Bảng 8: Kết phân tích hàm lượng Bo tự nhiên AAS 27 Bảng 9: Hàm lượng Bo tự nhiên công bố Bảng 10: Kết khảo sát thời gian màu giấy thử dung dịch hàn the có nồng độ khác Bảng 11: Kết khảo sát thời gian màu giấy thử mẩu thật Bảng 12: Kết khảo sát ảnh hưởng anion Bảng 13: Kết khảo sát ảnh hưởng cation Bảng 14: Kết phân tích hàn the thực phẩm phương pháp quang phổ Kít thử hàn the nhanh 27 29 29 31 32 37 42 Baûng 15: Baûng chiết tính chi phí cho 01 hộp “Kít thử hàn the nhanh“ Báo cáo nghiệm thu DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH Trang Hình 1: Cấu tạo hàn the Hình 2: “Test kit for borax” Thái Lan “Giấy nghệ” Đức 15 Hình 3: Giấy tẩm Curcumin Carmine 19 Hình 4: Sự chuyển màu giấy Curcumin giấy Carmine 19 Hình 5: Sự chuyển màu dung dịch Curcumin Carmine 19 Hình 6: Các phản ứng tạo phức màu cam đỏ để nhận biết hàn the 21 Hình 7: Sự chuyển màu giấy theo nồng độ Curcumin 23 Hình 8: Sự chuyển màu dd Curcumin có nồng độ khác 23 Hình 9: Sự chuyển màu giấy Curcumin theo nồng độ hàn the 25 31 Hình 10: nh hưởng pH dung dịch 32 Hình 11: nh hưởng anion 33 Hình 12: nh hưởng cation Hình 13: Phân biệt chuyển màu Fe3+, Fe2+, pH hàn the Hình 14: Đường biểu diễn tương quan ∆A số µgB Hình 15: Một số hình ảnh kiểm tra mẫu mua thị trường Hình 16: Sản phẩm “Kít thử hàn the nhanh” 33 37 39 42 Báo cáo nghiệm thu I GIỚI THIỆU Hàn the loại hóa chất biết nhiều tên gọi khác Tinhal, Borax, Bồng sa, Bàng sa, Nguyên thạch… Tên khoa học Hàn the hay Natrium biboricum (Borate hydraté de sodium), công thức hóa học Na B O 10H O Hàn the có tính sát trùng kích ứng nhẹ nên công nghiệp dược phẩm dùng để pha thuốc súc miệng, thuốc đánh răng, thuốc mỡ chống nấm da (10-15%) Trong đông y dùng Bồng sa (dung dịch 12%) để súc miệng trừ hôi miệng, viêm họng… Từ lâu, hàn the nhiều người biết đến chất phụ gia thực phẩm có tác dụng “thần kỳ” Hàn the vừa làm cho thực phẩm trở nên dai, giòn, ngon miệng vừa tăng thời gian bảo quản kể với thực phẩm tươi sống Thế biết rõ hàn the gây nôn mửa, ỉa chảy, co cứng cơ, ban đỏ da, màng niêm dịch, sốc trụy tim… ăn nhiều gây tử vong thời gian ngắn Về lâu dài gây khô da, rối loạn dày, suy thận mãn tính, giảm sút trí tuệ chí bị ung thư Theo Cục quản lý vệ sinh an toàn thực phẩm (thuộc Bộ Y tế) sử dụng đồ ăn có hàn the có 81% lượng hàn the đào thải qua nước tiểu, 1% qua phân, 3% qua mồ hôi, lại phần lớn hàn the tích lũy mô mỡ, mô thần kinh Đây chất khó đào thải vào thể tích lũy từ từ nên khó phát hiện, có phải thời gian dài sau hàn the có dấu hiệu ngộ độc Do tính chất độc hại mà từ năm 1970 trở lại đây, nước tiên tiến giới không xem hàn the chất phụ gia thực phẩm Báo cáo nghiệm thu (trong nhóm bảo quản) không phép dùng để chế biến thực thực phẩm Đặc biệt từ năm 1951, Hội đồng tiêu chuẩn thực phẩm quốc tế (FSC) cấm triệt để việc dùng hàn the chế biến bảo quản thực phẩm Từ năm 1998, Bộ Y tế nước ta lên tiếng cảnh báo, ngăn cấm sản xuất, kinh doanh hàn the Trong pháp lệnh Vệ sinh an toàn thực phẩm bắt đầu có hiệu lực từ tháng 11/2003 cấm sử dụng hàn the với hàm lượng hay cách thức Qui định việc sử dụng hàn the thả khó bề kiểm soát Nguyên nhân việc phần lớn thói quen ý thức thấp nên người ta sử dụng hàn the bất chấp cảnh báo tổ chức y tế nghiêm cấm pháp luật, phần việc phát chọn lựa thực phẩm hàn the khó khăn người tiêu dùng phải đối diện với thị trường thực phẩm đa dạng Để bảo vệ quyền lợi người tiêu dùng tránh trường hợp đáng tiếc xảy song song với quản lý chặt chẻ quan chức cần nâng cao ý thức vệ sinh an toàn thực phẩm cho tất người dân Tuy nhiên, hoàn cảnh nay, nhiều sở sản xuất thực phẩm lút vi phạm, gây nhiều khó khăn cho việc kiểm tra, kiểm soát quan chức vốn có lực lượng mỏng Giải pháp tối ưu để hạn chế tình trạng đưa tận tay người tiêu dùng công cụ để họ tự bảo vệ Như vậy, việc tạo kít phát nhanh chất phụ gia độc hại, dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nguyên nhân gây ngộ độc nói chung hàn the nói riêng thực phẩm việc làm cấp thiết, giúp cho người tiêu dùng chọn lựa cho thực phẩm an toaøn Báo cáo nghiệm thu Vì vậy, năm 2006 Sở Khoa học Công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh Trung Tâm Phát Triển Khoa Học Công Nghệ Trẻ giao cho thực đề tài “Nghiên cứu, chế tạo kít phát nhanh hàn the thực phẩm ” Báo cáo nghiệm thu II TỔNG QUAN II.1 Tính chất lý hoá hàn the a Cấu tạo: Hình 1: Cấu tạo hàn the (Na B O 10 H O) b Tính chất trạng thái tự nhiên Trạng thái tự nhiên có dạng đơn tinh thể, màu trắng ngà, tan nước cồn, có tính kiềm Điểm tan chảy (m p ): 75oC Điểm sôi: 320oC Tỉ trọng : 1,73 g/cm3 Hàn the điều chế cách kết tinh phản ứng hóa học từ nguồn khoáng hàn the tự nhiên như: Borac, Kecnit, Colemanit, Idecnit Báo cáo nghiệm thu c Tác dụng sinh học hàn the Nhiều nghiên cứu cho thấy hàn the gây khô da, rối loạn dày, suy thận mãn tính, giảm sút trí tuệ, teo tinh hoàn, chí bị ung thư… Dưới số số liệu độc tính hàn the [3,4,5] - Hoạt tính kháng khuẩn: Bảng 1: Độc tính borax bacteria, protozoa algae Chủng loại Pseudomonas putida Thời Kết gian Chỉ số Nồng độ (mg/l) 30 p Ức chế sinh trưởng EC 10 340 16g Ức chế sinh trưởng EC 10 7.6 72g Ức chế sinh trưởng - 291 EC 290 72g Ức chế sinh trưởng Photobacterium phosphoreum 30p Mất màu EC 20 18 Entosiphon sulcatum 72g Ức chế sinh trưởng EC 0.3 72g Ức chế sinh trưởng - 70 72g Ức chế sinh trưởng - 18 Algae, Scenedesmus quadricauda 8n Ức chế sinh trưởng EC 0.16 Algae, Scenedesmus subspicatus 72g Ức chế sinh trưởng EC 10 Paramecium caudatum Báo cáo nghiệm thu 72g 72g 72g Algae, Scenedesmus subspicatus Algae, Microcystis aeruginosa - 8n Ức chế sinh trưởng EC 10 Ức chế sinh trưởng EC 50 Ức chế sinh trưởng EC 100 Ức chế sinh trưởng EC 10 24 Ức chế sinh trưởng EC 50 52 Ức chế sinh trưởng EC 90 Ức chế sinh trưởng EC 24 34 100 109 20.3 (ghi chuù: p-phuùt; g-giờ; n-ngày; EC: Effected Concentration) - Liều gây chết chuột nhắt LD 50 - Tiêm tỉnh mạch: 1320 mg kg-1 - Cho uống: 2711 mg kg-1 - Nồng độ gây chết thấp ăn vào trẻ em công bố: 1000 mg kg-1 - Nồng độ gây chết thấp ăn vào người lớn công bố: 709 mg kg-1 d Ứng dụng hàn the Hàn the muối Bo khác có khả tẩy làm trắng tốt muối phản ứng với nước để sinh hydroxiperoxit Khi hoà tan nước cho môi trường kiềm (0.01M, 30oC, pH 9,2), hiệu làm tẩy trắng gia tăng Trong số trường hợp, hàn the hoạt động Báo cáo nghiệm thu Hình 11: nh hưởng anion nồng độ 100mg/l c nh hưởng cation: Thực nghiệm: Pha dung dịch muối clorua nồng độ100 3000 mg/l cation bảng đây, nhúng ½ tờ giấy thử, để khô sau phút quan sát màu Kết quả: Bảng 13: Kết khảo sát ảnh hưởng cation Cation 100mg/l Fe3+ Fe2+ Al3+ Cu2+ Ca2+ Ba2+ Mg2+ + - - - - - - + - - - - - Maøu 3000mg/l 32 Baùo caùo nghiệm thu Kết luận: Ion Fe3+, Fe2+ gây tượng dương tính giả Chuyển pH môi trường acid không loại trừ tượng Tuy nhiên, để khô sau 15 phút giấy thử có màu nâu đen nên phân biệt Hình 12: nh hưởng cation nồng độ 100 mg/l Fe3+ Fe2+ pH HT Hình 13: Phân biệt chuyển maøu Fe3+, Fe2+, pH vaø haøn the 33 Báo cáo nghiệm thu III.6 Đánh giá độ tin cậy sản phẩm Để đánh giá độ tin cậy sản phẩm cần phải so sánh với phương pháp chuẩn Tuy nhiên, Kít thử hàn the nhanh tạo dựa phương pháp so màu công bố tài liệu [1, 2,7], phương pháp chuẩn dùng để phân tích hàn the thực phẩm Vì dùng phương pháp để đánh cần phải chọn phương pháp có độ nhạy cao hơn, phù hợp với điều kiện có phương pháp dùng quang phổ kế (Không có phương pháp phân tích hàn the quang phổ kế thực phẩm, phương pháp áp dụng để phân tích định lượng acid boric Caviar) Tên phương pháp: AOAC 969.26 Hóa chất: - Dung dịch Curcumin 0.125% (hoà tan 125mg curcumin 100ml CH COOH) - NaOH 10% - H SO -CH COOH 1:1 - EtOH khan - Các dung dich boron chuẩn: Cân 57±3 mg H BO cho vào bình định mức 100ml, thêm 50ml nước siêu sạch, lắc cho tan hoàn toàn Thêm nước siêu đến vạch mức, lắc thu dung dịch đầu 100 µgB/ml Lấy 1ml dung dịch đầu cho vào bình định mức 100ml, thêm nước siêu đến vạch, lắc thu dung dịch µgB/ml 34 Báo cáo nghiệm thu Tiến hành: - Thử sơ hàn the mẫu “Kít thử hàn the nhanh” Đánh giá sơ hàm lượng hàn the mẫu - Cân 270±25mg mẫu thực phẩm cho vào bình cầu cổ 250ml Gắn ống sinh hàn vào cổ thẳng đứng, đậy nút nhám vào cổ của bình cầu Thêm 1ml H SO vào bình cầu Đun nóng bình cầu đèn cồn đến mẫu phân hủy (khoảng 20 phút) Làm lạnh bình cầu nước đá (cho đến không khói bình Dùng syringe lấy 1ml H O 30% cho nhanh vào bình cầu gia nhiệt đến sôi Làm lạnh nước đá Rữa ồng sinh hàn cách dội nước siêu từ đầu ống xuống bình cầu Tháo sinh hàn khỏi bình Gom toàn nước rữa định mức 100ml - Pha loãng dung dịch mẫu xử lí khoảng nồng độ thích hợp - Lấy 1ml H O cho vào điã petri làm mẫu trắng Lấy 1; 2; 3; 4; 5ml dd 1µgB/ml cho vào điã petri khác Lấy 1ml dd mẫu xử lí cho vào điã petri nưã (các điã petri phải chủng loại) Đánh dấu điã petri tương ứng với dung dịch Thêm vào điã 1ml dd NaOH 10% Đuổi nước từ từ bếp điện đến cạn (không sôi mạnh, dd bắn ngoài) Cho tất điã petri vào lò, nung 105oC 30 phút Lấy điã petri ra, để nguội Hòa tan hoàn toàn hỗn hộp điã 3ml dung dịch Curcumin 0,125% (đun nhẹ cần) Thêm 3ml dd CH COOH – H SO 1:1 Khuấy đến không ánh vàng thành điã Để yên 15 phút Rữa hỗn hợp điã EtOH khan, gom toàn nước rưã vào bình định 35 Báo cáo nghiệm thu mức 100ml Lọc dung dịch bình Đo độ hấp thu A 700 555nm Tính toán: - Tính ∆A =(A 555 -A 700 ) tất mẫu - Lấy ∆A mẫu chuẩn (từ dd 1µgB/ml) để dựng đường chuẩn - Chiếu ∆A mẫu kiểm tra lên đường chuẩn để suy hàm lượng B mẫu o Công thức tính: Hàm lượng hàn the (mg/kg)= µgB (suy từ đồ thị)*100*k*35,4/mg mẫu Trong đó: k : hệ số pha loãng (lưu ý mẫu không pha loảng mà không phát định mức 10 25 ml, tương ứng với hệ số pha loảng 0.1 0.25) 35,4: tỉ lệ khối lượng hàn the/B 36 Baùo caùo nghiệm thu Kết quả: Đường chuẩn: ∆Α y = 0.0547x 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 µgB Hình 14: Đường biểu diễn tương quan ∆A số µgB Kết phân tích mẫu: Bảng 14: Kết phân tích hàn the thực phẩm phương pháp quang phổ Kít thử hàn the nhanh Đối tượng Thử Kít Thử pp quang phổ (mg/kg) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Thịt heo + - - 1311,1 26,2 32,8 Cá viên + + + 1835,6 2818,9 2425,6 Bò viên + + + 2925,0 2360,6 3081,1 Chả lụa + + + 3212,2 3933,3 3277.8 37 Báo cáo nghiệm thu Bánh ñuùc + + - 3605,6 2753,3 39,3 Nem chua - + + 45,9 1770,0 2687,8 Bánh su sê + + + 3933,3 4261,1 2556,7 Bánh ướt - - - 39,3 32,8 45,9 Nhận xét: Đối với mẩu kiểm định, 100% mẩu dương tính phát Kít thử hàn the nhanh; mẩu có hàm lượng thấp mẫu có chứa B tự nhiên không phát 38 Baùo cáo nghiệm thu Hình 15: Một số hình ảnh kiểm tra mẫu mua thị trường III.7 Sản phẩm a Các yêu cầu sản phẩm - Giấy lọc Whatman No.1 tẩm dung dịch bảo hòa cucurmin, gọi tắt Giấy thử - Dung dịch loại trừ yếu tố ảnh hưởng, gọi tắt Dung dịch màu - Dụng cụ lấy mẫu nhựa thép không rỉ 39 Báo cáo nghiệm thu b Qui trình tiến hành Dựa kết khảo sát, để tiến hành thí nghiệm phân tích hàn the mẫu thực phẩm Kít thử hàn the nhanh cần thực bước sau: - Bước 1: dùng dao thìa (muỗng) inox lấy khoaûng 0,5g thực phẩm (nhỏ hạt bắp) cho vào dĩa nhỏ - Bước 2: nhỏ 2-3 giọt Dung dịch màu lên miếng thực phẩm Nghiền kỹ miếng thực phẩm để hàn the (nếu có) thực phẩm tan hoàn toàn vào Dung dịch màu - Bước 3: thấm ướt đầu tờ Giấy thử lên hỗn hợp đđã nghiền Để khô phút, Giấy thử chuyển sang màu cam đỏ mẫu thực phẩm có chứa hàn the Lưu ý: - Với mẫu không làm Giấy thử đổi màu, giữ lại Giấy thử thêm 15 phút nữa, không đổi màu kết luận không chứa hàn the, đổi sang màu cam mẫu có chứa hàn the hàm lượng thấp (thực phẩm không sử dụng) - Với thực phẩm ngâm chua (cải chua, kiệu ngâm, hành ngâm…), cần nhúng ướt đầu Giấy thử vào nước ngâm, sau nhỏ giọt Dung dịch màu lên phần thấm ướt, để khô phút xem màu Bước - Đối với mẫu thực phẩm tươi sống (thịt, cá…) phải lấy mẫu bề mặt miếng thực phẩm chổ nghi ngờ chứa nhiều hàn the nhaát 40 Báo cáo nghiệm thu d Bảo quản, hạn dùng: - Bảo quản nơi khô ráo, tránh ánh sáng (Mẫu lưu bảo quản hộp kín, nơi khô từ 4/2006 trước đến 4/2007 không thay đổi chất lượng Mẫu để tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng tự nhiên tác dụng hoàn toàn sau tháng) - Hạn dùng: 01 năm với điều kiện bảo quản e Thiết kế sản phẩm mẫu Trình bày: Kít thử hàn the nhanh gồm 01 lọ nhựa chống ánh sáng đựng 100 tờ Giấy thử 01 lọ dung tích 25ml đựng Dung dịch màu đủ dùng cho 100 mẫu thử, tất chứa hộp giấy cứng có in tên nhà sản xuất, hướng dẫn sử dụng, điều kiện bảo quản, hạn dùng… GIẤY THỬ Hình 16: Sản phẩm “Kít thử hàn the nhanh” 41 Báo cáo nghiệm thu f Chi phí, giá thành, giá bán Bảng 15: Bảng chiết tính chi phí cho 01 hộp “Kít thử hàn the nhanh“ Chi Phí Số tiền (đ) Vật tư, hóa chất: Nhân công Khấu hao máy móc, thiết bị Tỉ lệ(%) 17.760 71.04 1.000 300 1.2 3.000 12 Giá thành 22.060 88.24 Giá bán đề nghị (chưa có VAT) 25.000 100 Lợi nhuận 2.940 11.76 Chi khác (quản lý, vận chuyển, phân phốiù ) 42 Báo cáo nghiệm thu IV KẾT LUẬN - Hàn the có nhiều ứng dụng đời sống sinh hoạt Tuy nhiên, sử dụng không mục đích, chức nên gây nhiều hậu nghiêm trọng - Từ phương pháp chuẩn, Hiệp hội nhà phân tích (AOACAssociation of Official Analytical Chemists) nghiên cứu áp dụng để phân tích hàn the thực phẩm, phát triển thành dụng cụ phân tích nhanh hàn the thực phẩm (Kít thử hàn the nhanh) với tiêu khảo sát sau: o Phương pháp áp dụng: so màu o Chất thị sử dụng: cucurmin 95% (Merck, PA) o Giới hạn phát hiện: 50 mg/kg o Thời gian màu: mẫu thật (hàm lượng hàn the ≥n500mg/kg) vòng phút; mẫu có hàm lượng hàn the thấp (Giấy thử không đổi màu sau phút), phải giữ lại giấy thử thêm 15 phút có kết luận xác o nh hưởng pH: pH < không ảnh hưởng đến kết phân tích o nh hưởng anion: Đã khảo sát loại trừ ảnh hưởng anion thông thường NO3-, NO2-, SO 2-, CO 2-, HCO -, PO 3-, Glutamat -, oxalat - 43 Báo cáo nghiệm thu o nh hưởng cation: cation Fe2+, Al3+, Cu2+, Ca2+, Ba2+, Mg2+ không ảnh hưởng đến kết phân tích Riêng ion Fe3+ nồng độ lớn 0,7mg/kg làm giấy thử chuyển sang màu nâu đen, dễ phân biệt với màu cam đỏ hàn the - Đã tạo 50 sản phẩm Kít thử hàn the nhanh với tính chất sau: o Trình bày: Kít thử hàn the nhanh gồm 01 lọ đựng 100 tờ Giấy thử 01 lọ dung tích 25ml đựng Dung dịch màu đủ dùng cho 100 mẫu thử, tất chứa hộp giấy cứng có in tên nhà sản xuất, hướng dẫn sử dụng, điều kiện bảo quản, hạn dùng… o Qui trình thực hiện: Đơn giản, dể thực Chỉ cần bước thực xác định hàn the có hay không mẩu o Độ tin sản phẩm: Các kết thử nghiệm so sánh Kít thử hàn the nhanh phương pháp dùng quang phổ kế hoàn toàn phù hợp o Giá đề nghị: 25.000/ hộp 100 lần thử - Về hiệu kinh tế – Xã hội: o Sản phẩm “Kít thử hàn the nhanh” phổ biến rộng rãi giúp người tiêu dùng chọn lựa thực phẩm an toàn 44 Baùo cáo nghiệm thu V KIẾN NGHỊ - Để sản phẩm nhanh chóng đến tận tay người tiêu dùng, góp phần ngăn chặn tình trạng sử dụng phụ gia độc hại thực phẩm, cần có hỗ trợ quan chức năng, quan truyền thông, báo chí để sản phẩm lưu thông phân phối dễ dàng - Nên phát triển đề tài thành dự án sản xuất thử nghiệm để sản xuất lượng lớn sản phẩm cung cấp kịp thời cho người sử dụng 45 Báo cáo nghiệm thu TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] 28 TCN 183 : 2003, Bộ Thủy sản [2] TCVN 6635-2000 {3] Human health and ecologycal risk assessment for borax, Forest Health Protection, 2006 [4 Environmental health criteria 204 - Boron, International programme on chemical safety (IPCS), WHO, 1998 [5] Safety (MSDS) data for borax decahydrate, Chemical and Other Safety Information, The Physical and Theoretical Chemistry Laboratory, Oxford University [6] Guidelines for Canadian drinking water quality, Department of National Health and welfare (Canada), 1978 [7] AOAC Official method 959.09 [8] AOAC Official method 970.33 [9] AOAC Official method 970.34 [10] AOAC Official method 975.26 [11] ASTMD 3082 [12] Mazza B et al, The boron content of industrially produced organ and lemon juices, Essenze derivati agrumari, 1982 [13] Tartari G, Camusso M., Boron content in freshwaters of Northern Italy, Water, air and soil pollution, 1988 46