Điều tra chọn lọc giống bạch tật lê tribullus terrestris l có hàm lượng tribulosin cao phân bố ở việt nam và nhân giống chọn lọc từ hạt

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo ý kiến Hội đồng nghiệm thu) ĐỀ TÀI: ĐIỀU TRA, CHỌN LỌC GIỐNG BẠCH TẬT LÊ (TRIBULUS TERRESTRIS L.) CÓ HÀM LƯỢNG SAPONIN STEROID CAO PHÂN BỐ Ở VIỆT NAM VÀ NHÂN GIỐNG CHỌN LỌC TỪ HẠT TÊN CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI (Ký tên) BÙI ĐÌNH THẠCH CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 10/ 2012 MỤC LỤC Trang Tóm tắt đề tài/dự án (gồm tiếng Việt tiếng Anh)…………… I Mục lục………………………………………………………… II Danh sách chữ viết tắt…………………………………… III Danh sách bảng………………………………………………… IV Danh sách hình………………………………………………… V Bảng tốn ……………………………………………… VI MỞ ĐẦU (– 2) CHƢƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU…………………… Vị trí Bạch tật lê hệ thống phân loại…………… 1.1.1 Phân loại…………………………………………………… 1.1.2 Đặc tính phân bố………………………………………… 1.1.3 Đặc điểm thực vật………………………………………… 1.1.4 Thành phần hóa học……………………………………… 1.1.5 Công dụng………………………………………………… 1.1 1.2 1.2.1 1.2.1.1 Đa dạng sinh học……………………………………………… Các phân mức đa dạng sinh học……………………… Sự đa dạng hệ sinh thái……………………………… II 1.2.1.2 Đa dạng loài……………………………………………… 1.2.1.3 Sự đa dạng di truyền…………………………………… Một số phương pháp nghiên cứu đa dạng di truyền ………… 1.2.2.1 Phương pháp sử dụng marker hình thái………………… 1.2.2.2 Phương pháp sử dụng marker isozyme ………………… 10 1.2.2.3 Phương pháp sử dụng marker phân tử ………………… 10 1.2.2.4 Marker RAPD (Random Amplifided Polymorphic DNA)… 11 1.2.2.5 Cây phát sinh loài…………………………………………… 12 1.2.2 1.2.2.5.1 Những cách vẽ phát sinh loài………………………… 12 1.2.2.5.2 Các phương pháp chủ yếu tạo phát sinh loài……… 13 CHƢƠNG II: NỘI DUNG NGHIÊN CỨU………………… 14 2.1 Nội dung……………………………………………………… 14 2.2 Phƣơng pháp………………………………………………… 14 2.2.1 Nội dung 1: Điều tra phân bố Bạch tật lê Việt Nam 14 2.2.1.1 Phương pháp kế thừa 14 2.2.1.2 Phương pháp nghiên cứu thực địa 14 2.2.1.3 Phương pháp nghiên cứu phịng thí nghiệm 15 Nội dung 2: Xác định hàm lượng tribulosin Bạch tật 15 2.2.2 lê phân bố vùng khác nhau……………………… II 2.2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng tribulosin HPLC…… 16 2.2.2.2 Định lượng Tribulosin mẫu HPLC…………… 17 2.2.3 Nội dung 3: Đa dạng di truyền giống thông qua đa 18 dạng DNA 2.2.4 Nội dung 4: nhân giống chọn lọc từ hạt trồng thử nghiệm 20 ………………………………… 2.2.4.1 Mục tiêu …………………………………………………… 20 2.2.4.2 Nhân giống chọn lọc từ hạt………………………………… 20 2.2.4.3 Trồng thử nghiệm ………………………………………… 22 Vật liệu nghiên cứu………………………………………… 22 2.2.4.3.1.1 Giống trồng…………………………………… 22 2.2.4.3.1.2 Phân bón…………………………………………… 22 2.2.4.3.1.3 Nước tưới…………………………………………… 22 2.2.4.3.2 Thời gian thực hiện………………………………………… 22 2.2.4.3.3 Phương pháp nghiên cứu…………………………………… 22 2.2.4.3.4 Điều kiện tự nhiên khu vực nghiên cứu……………… 22 2.2.4.3.4.1 Vị trí địa lý……………………………………… 22 2.2.4.3.4.2 Khí hậu – thủy văn………………………………… 23 2.2.4.3.5 Thổ nhưỡng…………………………………………… 23 2.2.4.3.6 Nội dung nghiên cứu…………………………………… 24 2.2.4.3.1 II 2.2.4 3.7 Các tiêu theo dõi…………………………………… 25 CHƢƠNG III: KẾT QỦA VÀ THẢO LUẬN……………… 26 3.1 Nội dung 1: Điều tra phân bố Bạch tật lê Việt Nam 26 3.1.1 Sự phân bố Bạch tật lê Việt Nam………………… 26 3.1.1.1 Cây Bạch tật lê phân bố Đà Nẵng……………………… 30 3.1.1.2 Cây Bạch tật lê phân bố Phú Yên……………………… 33 3.1.1.3 Cây Bạch tật lê phân bố Bình Thuận…………………… 36 3.1.2 Đặc điểm Bạch tật lê……………………………………… 37 3.2 Nội dung 2: Xác định hàm lƣợng tribulosin Bạch 38 tật lê đƣợc phân bố vùng khác nhau………………… 3.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng HPLC………… 38 3.2.2 Định lượng tribulosin mẫu HPLC………… 41 3.3 Nội dung 3: Đa dạng di truyền giống thông qua đa 3.4 dạng DNA 44 Nội dung 4: Nhân giống từ hạt trồng thử nghiệm giống 54 chọn lọc ………………………………… 3.4.1 Nhân giống chọn lọc từ hạt………………………………… 54 3.4.2 Trồng thử nghiệm giống chọn lọc…………………………… 57 II CHƢƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ………………… 61 4.1 Kết luận……………………………………………………… 61 4.2 Đề nghị………………………………………………………… 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………………………… 62 PHỤ LỤC……………………………………………………… 68 II DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT THUẬT NGỮ TIẾNG VIẾT TẮT GAO Enzym glycolic acid oxydase HPLC Sắc ký lỏng cao áp-High-Performance Liquid Chromatography DAD Photodiode Array Detector LCMS Liquid chromatography–mass spectrometry TTDLMT Trung tâm dược liệu Miền Trung V1 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Phú Yên V2 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Phú Yên V3 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Phú Yên PYl1 Mẫu Bạch tật lê trồng TTDL Miền Trung, kích thước hoa lớn PYl2 Mẫu Bạch tật lê trồng TTDL Miền Trung, kích thước hoa lớn PYl3 Mẫu Bạch tật lê trồng TTDL Miền Trung, kích thước hoa lớn PYm1 Mẫu Bạch tật lê trồng TTDL Miền Trung, kích thước hoa trung bình PYm2 Mẫu Bạch tật lê trồng TTDL Miền Trung, kích thước hoa trung bình PYm3 Mẫu Bạch tật lê trồng TTDL Miền Trung, kích thước hoa trung bình III PYs1 Mẫu Bạch tật lê trồng TTDL Miền Trung, kích thước hoa nhỏ PYs2 Mẫu Bạch tật lê trồng TTDL Miền Trung, kích thước hoa nhỏ PYs3 Mẫu Bạch tật lê trồng TTDL Miền Trung, kích thước hoa nhỏ BT1 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Bình Thuận BT2 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Bình Thuận BT3 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Bình Thuận DNm1 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Đà Nẵng, kích thước hoa trung bình DNm2 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Đà Nẵng, kích thước hoa trung bình DNm3 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Đà Nẵng, kích thước hoa trung bình DNs1 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Đà Nẵng, kích thước hoa nhỏ DNs2 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Đà Nẵng, kích thước hoa nhỏ DNs3 Mẫu Bạch tật lê tự nhiên Đà Nẵng, kích thước hoa nhỏ OTU operational taxonomic unit UPGMA TLK CL1,2,3 Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Trọng lượng khô Thứ tự số nhóm kết hợp với III DANH SÁCH BẢNG SỐ TÊN BẢNG SỐ LIỆU TRANG 2.1 Trình tự primer 18 2.2 Khảo sát điều kiện nảy mầm hạt Bạch tật lê 21 2.3 Một sô tiêu phân tích đất TTNCDLMT 23 2.4 Bảng bố trí thí nghiệm trồn thực nghiệm TTDLMT 24 3.1 Tính tương thích hệ thống 38 3.2 Kết khảo sát độ xác 3.1 Bảng ký hiệu mẫu phân tích tribulosin 3.2 Phân tích hàm lượng tribulosin có thu nhận 31 vùng khác 40 3.3 Kết tỉ lệ phục hồi phương pháp 40 3.4 Bảng ký hiệu mẫu phân tích tribulosin 41 3.5 Phân tích hàm lượng tribulosin có thu nhận 42 vùng khác 3.6 Bảng ký hiệu mẫu chạy PCR 3.7 Kết RAPD 21 mẫu Bạch tật lê với 20 cặp mồi 3.8 44 chọn lọc 46 Hệ số đồng dạng di truyền giống Bạch tật lê 48 IV 3.9 Phân nhóm di truyền độ tương đồng phân nhóm di truyền giống Bạch tật lê 51 3.10 Ảnh hưởng yếu tố lên nảy mầm hạt 54 3.11 Phân tích ANOVA nảy mầm hạt 55 3.12 Tương tác hai yếu tố H L ảnh hưởng lên nảy mầm 56 hạt 3.13 Ảnh hưởng yếu tố đến nảy mầm hạt 57 3.14 Thông số mẫu trồng thử nghiệm TTDLMT 59 IV 3.00 261.800 87.267 0.25 0.27 3.00 265.900 88.633 0.25 0.27 3.00 267.600 89.200 0.20 0.27 -Total 18.00 1595.800 Within 88.656 1.37 0.46 Bartlett's test Chi-square = 6.067 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 Data File : Keyboard Function : RANGE Error Mean Square = 0.2130 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.8210 Original Order Mean = 87.33 at alpha = 0.050 Ranked Order C Mean = 91.07 A 134 0.32 Mean = 88.43 B Mean 6= 89.20 B Mean = 91.07 A Mean 5= 88.63 B Mean = 87.27 Mean = 88.63 B Mean 1= 87.33 C Mean = 89.20 B Mean 4= 87.27 C C Mean Data file: CHIEU = 88.43 B Title: than Function: ANOVA-1 Data case no to 18 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to Variable (CDai) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between Within 3.131 0.626 12 0.167 0.014 45.088 0.0000 Total 17 3.298 Coefficient of Variation = 8.35% 135 Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 2.700 0.900 0.10 0.07 3.00 3.500 1.167 0.06 0.07 3.00 5.300 1.767 0.06 0.07 3.00 3.200 1.067 0.12 0.07 3.00 4.400 1.467 0.21 0.07 3.00 6.300 2.100 0.10 0.07 -Total 18.00 25.400 Within 1.411 0.44 0.12 Bartlett's test Chi-square = 4.042 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 Data File : Keyboard Function : RANGE Error Mean Square = 0.01400 136 0.10 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.2105 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean = 0.9000 E Mean D 6= 2.100 A Mean 3= 1.767 B Mean 5= 1.467 Mean = 1.167 Mean = 1.767 B Mean = 1.067 DE Mean Mean = 1.467 C Mean = 2.100 A 2= 1.167 Mean 4= 1.067 Mean = 0.9000 137 C D DE E Phụ lục 7: khảo sát khả nảy mầm hạt SO HAT NAY MAM The GLM Procedure Class Level Information Class Levels Values T 50 60 70 80 H 468 L 01 Number of Observations Read 56 Number of Observations Used 56 SO HAT NAY MAM The GLM Procedure Dependent Variable: Y Sum of Source DF Squares Model 23 7274.137148 Error 32 Corrected Total Mean Square 316.266833 266.454950 55 F 8.326717 R-Square Source F Value Type III SS Mean Square 370.927606 Y Mean 49.55982 F Value Pr > F 44.55