Bước đầu sản xuất cụm chồi và hạt nhân tạo của cây blueberry vaccinium ashei reade trong điều kiện in vitro

BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU BƯỚC ĐẦU SẢN XUẤT CỤM CHỒI VÀ HẠT NHÂN TẠO CỦA CÂY BLUEBERRY (Vaccinium ashei Reade) TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO TS Cao Đình Hùng Thành phớ Hờ Chí Minh, tháng 01/2018 BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đờng nghiệm thu) BƯỚC ĐẦU SẢN XUẤT CỤM CHỒI VÀ HẠT NHÂN TẠO CỦA CÂY BLUEBERRY (Vaccinium ashei Reade) TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên, đóng dấu xác nhận) CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI (Ký tên) Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 01/2018 TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Blueberry Vaccinium ashei loài thân bụi giới ưa chuộng nhờ trái chín có chứa nhiều dược chất qúi, có lợi cho sức khỏe người, chất chống ơ-xy hóa Nhân giống blueberry phương pháp truyền thống trước tỏ khơng hiệu qủa, khó đáp ứng nhu cầu sản xuất giống theo hướng qui mô công nghiệp, hạt giống mang đặc tính dị hợp tử cao cành giâm có hệ số nhân giống thấp Cơng nghệ nuôi cấy mô thực vật cho phép sản xuất cực nhanh giống trồng đồng nên đưa vào sử dụng, sản xuất cụm chồi chìa khóa then chốt để khắc phục nhược điểm Vì vậy, đề tài tập trung khảo sát yếu tố hóa học dinh dưỡng khống nhằm tạo cụm chồi blueberry tối ưu điều kiện in vitro, cách thực thí nghiệm liên tiếp Ở thí nghiệm thứ nhất, chất điều hòa sinh trưởng thực vật khảo sát BA, 2-ip Zeatin nồng độ 0; 0,25; 0,5; mg/l Kết qủa cho thấy Zeatin nồng độ mg/l phù hợp kích thích tạo cụm chồi có trung bình 5,9 ± 0,2 chồi đơn sinh trưởng khỏe mạnh Ở thí nghiệm thứ 2, loại mơi trường nuôi cấy khảo sát MS, M3W7, M5W5, M7W3 WPM với giá trị pH = 4,8 5,2 Kết qủa cho thấy môi trường M3W7 pH = 5,2 phù hợp cho tái sinh phát triển cụm chồi blueberry in vitro Bên cạnh đó, đề tài cịn nghiên cứu sản xuất hạt giống nhân tạo từ cụm chồi blueberry V ashei để ứng dụng bảo quản trao đổi mầm giống, cách tiến hành thí nghiệm Ở thí nghiệm 3, chất điều hòa sinh trưởng thực vật khảo sát thuộc nhóm cytokinin (BA, 2-ip Zeatin) auxin (IAA, IBA NAA) Kết qủa cho thấy nhóm cytokinin, Zeatin tỏ hiệu qủa hẳn so với BA 2-ip khả kích thích hạt nảy mầm phát triển chồi tái sinh từ hạt sau 1–6 tuần gieo in vitro, chất thuộc nhóm auxin khơng có tác dụng Ở thí nghiệm 4, hai ngưỡng nhiệt độ oC 25oC sử dụng để bảo quản hạt nhân tạo thời gian 0, 1, 2, 4, 16 tuần Kết qủa cho thấy 4oC nhiệt độ phù hợp trì tỉ lệ nảy mầm hạt đến 95,3 ± 2,5% sinh trưởng tốt chồi tái sinh sau 16 tuần bảo quản, cịn nhiệt độ 25oC trì hạt nảy mầm đạt tối đa 12,0 ± 2,8% sau tuần bảo quản Các kết qủa nghiên cứu ứng dụng để chuyển giao mầm giống, đồng thời làm sở cho nghiên cứu sau nuôi cấy mô sản xuất hạt nhân tạo loài blueberry khác i SUMMARY Vaccinium ashei (blueberry) is a shrub being highly interested by the world owing to its ripen fruits containing many valuable medicinal compounds beneficial for human health, particularly the anti-oxidants Previously, traditional methods of blueberry propagation are inefficient and difficult to meet high demands on industrial-scale seedling production, due to seeds with high rates of heterozygosity and cuttings with low rates of multiplication Plant tissue culture technology which allows the extremely rapid production of plant cultivars with high uniformity is employed, in which multiple-shoot production is the key to overcome the above-mentioned disadvantages For these reasons, our project concentrated on investigating the chemical and nutrient elements for producing the best multiple-shoots of blueberry under in vitro conditions, by conducting two consecutive experiments In the experiment 1, investigated plant hormones included BA, 2-ip and Zeatin at the concentrations of 0, 0.25, 0.5, and mg/l Results showed that Zeatin at mg/l was the most suitable for inducing multiple-shoots each with 5.9 ± 0,2 healthy single shoots In the experiment 2, investigated culture media consisted of MS, M3W7, M5W5, M7W3 and WPM with pH at 4.8 and 5.2 Results indicated that M3W7 medium with pH at 5.2 proved the most suitable for the regeneration and development of in vitro-cultured blueberry multiple-shoots Besides, our project also studied the production of artificial seeds from multipleshoots of V ashei blueberry for germplasm preservation and exchange applications, by performing experiments and In the experiment 3, investigated plant hormones included cytokinin (BA, 2-ip and Zeatin) and auxin (IAA, IBA and NAA) Results revealed that Zeatin was the most effective, as compared with BA and 2-ip of the cytokinin group, for germination of artificial seeds as well as the development of shoots regenerated from seeds after 1–6 weeks of in vitro sowing, whereas plant hormones of the auxin group were irresponsive In the experiment 4, two temperatures, namely 4oC and 25oC, were used for preserving artificial seeds for 0, 1, 2, 4, and 16 weeks Results showed that temperature at 4oC was suitable for maintaining the germination frequency of artificial seeds at 95.3 ± 2.5% together with the high capacity of shoot re-growth after 16 weeks of storage, whereas temperature at 25oC could only maintain the germination frequency of artificial seeds at 12.0 ± 2.8% atmost after weeks of storage These findings can be used for transferring plant germplasm, and also pave the way for future studies on tissue culture and artificial seed production of other blueberry species ii MỤC LỤC Trang Tóm tắt nội dung nghiên cứu (gồm tiếng Việt tiếng Anh) i Mục lục iii Danh sách chữ viết tắt v Danh sách bảng vii Danh sách hình viii CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Thông tin chung đề tài 1.3 Mục tiêu đề tài 1.4 Sản phẩm đề tài CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu blueberry 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Nguồn gốc phân bố 2.1.3 Đặc điểm nông-sinh học 2.1.4 Khả trồng trọt 2.1.5 Giá trị dược liệu 2.2 Giới thiệu nuôi cấy mô thực vật công nghệ sản xuất hạt nhân tạo 2.2.1 Nuôi cấy mô thực vật 2.2.1.1 Khái niệm 2.2.1.2 Phương thức nuôi cấy 2.2.1.3 Thành phần môi trường nuôi cấy 2.2.1.4 Chất kích thích sinh trưởng 10 2.2.1.5 pH môi trường nuôi cấy 13 2.2.2 Công nghệ sản xuất hạt nhân tạo 14 2.2.2.1 Khái niệm 14 2.2.2.2 Cấu trúc hạt nhân tạo 14 2.2.2.3 Kỹ thuật đúc hạt nhân tạo 15 2.2.2.4 Ứng dụng công nghệ hạt nhân tạo 17 2.2.2.5 Một số nghiên cứu công nghệ hạt nhân tạo 17 2.3 Nghiên cứu vi nhân giống sản xuất hạt nhân tạo blueberry 19 iii 2.3.1 Chất kích thích sinh trưởng 19 2.3.2 Mơi trường dinh dưỡng khống 19 2.3.3 Các điều kiện nuôi cấy khác (ánh sáng, nhiệt độ, độ ẩm, CO2, pH, ) 20 2.3.4 Môi trường gieo hạt 20 2.3.5 Môi trường nội nhũ 21 2.3.6 Nhiệt độ thời gian bảo quản 21 CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1 Vật liệu nghiên cứu 23 3.1.1 Vật liệu để sản xuất cụm chồi 23 3.1.2 Vật liệu để sản xuất hạt nhân tạo 23 3.2 Phương pháp nghiên cứu 23 3.2.1 Thiết kế thí nghiệm 23 3.2.2 Điều kiện nuôi cấy 28 3.2.3 Thu thập số liệu 28 3.2.4 Xử lý số liệu 29 CHƯƠNG 4: KẾT QỦA VÀ THẢO LUẬN 31 4.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng nồng độ đến khả gia tăng số lượng chồi blueberry V ashei in vitro 31 4.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng mơi trường nuôi cấy độ pH đến sinh trưởng chồi blueberry V ashei in vitro 36 4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng thời gian gieo hạt đến khả nảy mầm hạt nhân tạo blueberry V ashei in vitro 41 4.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian bảo quản đến khả nảy mầm hạt nhân tạo blueberry V ashei in vitro 49 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 56 5.1 Kết luận 56 5.2 Đề nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT µmol.m-2.s-1 2,4-D THUẬT NGỮ TIẾNG VIỆT Micrơmole/mét vng/giây Axít 2,4-dichlorophenoxyacetic 2-ip 6-γ-γdimethyl-aminopurine ABA Axít abscisic AN ANOVA Atm Môi trường nuôi cấy hoa đỗ quyên Anderson Phân tích phương sai Átmốtphe B5 Mơi trường Gamborg (1968) BA 6-benzyladenin BAP 6-benzylaminopurine CaCl2.2H2O CNSH CO2 Canxi chlorua (ngậm phân tử nước) Cơng nghệ Sinh học Cacbon điơxít CPPU N-2-chloro-4-puridyl-N-phenyl urea DMRT Phép thử Duncan DPU N,N’-diphenylurea ĐC Đối chứng GA3 Axít gibberellic HCl Axít chlohydric IAA Axít indole-3-acetic IBA Axít indole-3-butyric Kinetin N-(2-furfurylamino)-1-H-purine-6amine KOH Kali hyđrơxít KTST Kích thích sinh trưởng LED Ánh sáng đơn sắc M3W7 30% MS + 70% WPM M5W5 50% MS + 50% WPM M7W3 70% MS + 30% WPM mg/l Miligam/lít mM Milimole v MS Môi trường Murashige Skoog (1962) N Số cỡ mẫu n/a Kí hiệu biểu thị khơng có giá trị nghiệm thức NAA NNCNC NT Axít 1-naphthaleneacetic Nông nghiệp công nghệ cao Nghiệm thức P Xác suất sai lầm liệu Ph Độ axít hay bazơ RITA Hệ thống chìm ngập tạm thời SD Độ lệch chuẩn SE Sai số chuẩn SPSS Phần mềm thống kê Statistical Package for the Social Sciences TDZ Thidiazuron TTNC Trung tâm nghiên cứu Tukey Phép thử Tukey’s HSD WPM Môi trường Lloyd McCown (1980) Zeatin 6-(4-hydroxy-3-methyl-trans-2-butanylamino)purine vi DANH SÁCH BẢNG SỐ TÊN BẢNG TRANG 2.1 Các thành phần dinh dưỡng khống mơi trường MS WPM 2.2 Kết qủa nghiên cứu hạt nhân tạo số loài 18 3.1 Khảo sát ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng nồng độ đến tái sinh cụm chồi từ chồi đơn blueberry V ashei 24 sau tuần nuôi cấy in vitro 3.2 Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy độ pH đến sinh trưởng in vitro chồi blueberry V ashei 3.3 25 Khảo sát ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng thời gian gieo hạt đến khả nảy mầm hạt nhân tạo blueberry V 26 ashei in vitro 3.4 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ thời gian bảo quản đến khả nảy mầm hạt nhân tạo blueberry V ashei gieo in 28 vitro 4.1 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng nồng độ đến sinh trưởng chồi blueberry V ashei sau tuần nuôi cấy 35 in vitro 4.2 Ảnh hưởng mơi trường khống độ pH đến sinh trưởng chồi blueberry V ashei sau tuần nuôi cấy in vitro 4.3 39 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến sinh trưởng chồi blueberry V ashei hình thành từ hạt nhân tạo sau 47 1, 2, tuần gieo in vitro 4.4 Ảnh hưởng nhiệt độ (4oC 25oC) đến sinh trưởng chồi blueberry V ashei hình thành từ hạt nhân tạo sau 0, 1, 2, 4, và16 tuần bảo quản vii 53 DANH SÁCH HÌNH SỐ TÊN HÌNH ẢNH/ĐỒ THỊ TRANG 2.1 Cây trái blueberry V Ashei 2.2 Cấu trúc hạt nhân tạo điển hình 15 2.3 Qui trình sản xuất hạt nhân tạo điển hình 16 4.1.1 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng nồng độ đến số lượng chồi blueberry V ashei hình thành sau tuần ni 32 cấy in vitro 4.1.2 Hình thái chồi blueberry V ashei sau tuần nuôi cấy in vitro mơi trường có bổ sung chất kích thích sinh trưởng (BA, 33 2-ip, Zeatin) nồng độ khác (0; 0,25; 0,5; 1; mg/l) 4.1.3 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng nồng độ đến trọng lượng tươi chồi blueberry V ashei sau tuần nuôi cấy in 34 vitro 4.2.1 Ảnh hưởng mơi trường khống độ pH đến tỉ lệ sống chồi blueberry V ashei sau tuần nuôi cấy in vitro 4.2.2 36 Chồi blueberry V ashei bị hoại tử (hình bên trái) khơng bị hoại tử (hình bên phải) ni cấy mơi trường M3W7 có 37 pH = 4,8 4.2.3 Ảnh hưởng mơi trường khoáng độ pH đến số lượng chồi blueberry V ashei hình thành sau tuần ni cấy in vitro 4.2.4 Ảnh hưởng mơi trường khống độ pH đến trọng lượng tươi chồi blueberry V ashei sau tuần nuôi cấy in vitro 4.2.5 38 38 Hình thái chồi blueberry V ashei sau tuần nuôi cấy in vitro loại môi trường khống (MS, M3W7, M5W5, M7W3 40 WPM) có độ pH khác (4,8 5,2) 4.3.1 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến tỉ lệ nảy mầm hạt nhân tạo blueberry V ashei sau 1, 2, tuần gieo in vitro viii 42 33 Lisek A, Orlikowska T (2004) In vitro storage of strawberry and raspberry in calciumalginate beads at 4oC Plant Cell Tissue Organ Cult 78:167–172 34 Liu C, Callow P, Rowland LJ, Hancock JF, Song G (2010) Adventitious shoot regeneration from leaf explants of southern highbush blueberry cultivars Plant Cell Tissue Organ Cult 103:137–144 35 Lloyd G, McCown B (1980) Commercially feasible micropropagation of mountain laurel, Kalmia latifolia, by use of shoot-tip culture Comb Proc Int Plant Prop Soc 30:421–427 36 Luckman of GA, Menary RC (2002) Eucalyptus nitens by delayed Increased auxin root initiation application in cuttings Plant Growth Regul 38:31–35 37 Ma Y, Byrne DH, Chen J (1996) Propagation of rose species in vitro In Vitro Cell Dev Biol Plant 32:103–108 38 Maruyama E, Kinoshita I, Ishii K, Ohba K, Saito A (1997) Germplasm conservation of the tropical forest trees, Cedrela odorata L., Guazuma crinita Mart., and Jacaranda mimosaefolia D Don., by shoot tip encapsulation in calcium-alginate and storage at 12–25oC Plant Cell Rep 16:393–396 39 Meiners J, Schwab M, Szankowski I (2007) Efficient in vitro regeneration systems for Vaccinium species Plant Cell Tissue Organ Cult 89:169–176 40 Mondal TK, Bhattacharya A, Sood A, Ahuja of tea (Camellia sinensis (L.) O Kuntze) of alginate-encapsulated axillary buds stored 83:941–944 PS (2002) Propagation by shoot proliferation at 4oC Curr Sci 41 Muir WH, Hildebrandt AC, Riker AJ (1958) The preparation, isolation, and growth in culture of single cells from higher plants Am J Bot 45:589–597 42 Murashige T (1977) Plant cell and organ culture as horticultural practice Acta Hort 78:17–30 43 Murashige T, Skoog F (1962) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture Physiol Plant 15:473–497 44 Nassar AH (2003) Slow growth storage of encapsulated germplasm of Coffea arabica L Int J Agric Biol 5:517–520 62 45 Parra-Vega V, Seguí-Simarro JM (2016) Anther culture in pepper (Capsicum annuum L.) Methods Mol Biol 1359:467–474 46 Power JB, Davey MR (1990) Protoplasts of higher and lower plants: isolation, culture, and fusion Methods Mol Biol 6:237–259 47 Prodorutti D, Pertot I, Giongo L, Gessler C (2007) Highbush blueberry: Cultivation, protection, breeding and biotechnology Eur J Plant Sci Biotech 1:44–56 48 Quiroz KA, Berríos M, Carrasco B, Retamales JB, Caligari PDS, García-Gonzáles R (2017) Meristem culture and subsequent micropropagation of Chilean strawberry (Fragaria chiloensis (L.) Duch.) Biol Res 50:20–27 49 Rai MK, Asthana P, Singh SK, Jaiswal VS, Jaiswal U (2009) The encapsulation technology in fruit plants–a review Biotechnol Adv 27:671–679 50 Rai MK, Jaiswal VS, Jaiswal U (2008) Encapsulation of shoot tips of guava (Psidium guajava L.) for short-term storage and germplasm exchange Sci Hort 118:33–38 51 Reddy MC, Murthy KSR, Pullaiah T (2012) Synthetic seeds: A review in agriculture and forestry Afr J Biotecnol 11:14254–14275 52 Redenbaugh K, Paasch BD, Nichol JW, Kossler ME, Viss PR, Walker KA (1986) Somatic seeds: Encapsulation of asexual plant embryos Nat Biotechnol 4:797–801 53 Reed BM (1991) The use of zeatin to initiate in vitro culture of Vaccinium species and cultivars HortSci 26:1320–1322 54 Rowland LJ, Ogden EL (1992) Use of a cytokinin conjugate for efficient shoot regeneration from leaf sections of highbush blueberry HortSci 27:1127–1129 55 Ružić D, Vujović T, Libiakova G, Cerović R, Gajdošova A (2012) Micropropagation in vitro of highbush blueberry (Vaccinium corymbosum L.) J Berry Res 2:97–103 56 Saiprasad GVS (2001) Artificial seeds and their applications Resonance 1:39–47 57 Sedlak J, Paprstein F (2009) In vitro multiplication of highbush blueberry (Vaccinium corymbosum L.) cultivars Acta Hort 810:575–580 58 Shekafandeh A (2010) The effects of pH levels and plant growth regulators on in vitro regeneration of almond (Prunus dulcis Mill.) World Appl Sci J 8:1322–1326 63 59 Singh SK, Rai MK, Asthana P, Sahoo L (2010) Alginate-encapsulation of nodal segments for propagation, short-term conservation and germplasm exchange and distribution of Eclipta alba (L.) Acta Physiol Plant 32:607–610 60 Skirvin RM, Chu MC, Mann ML, Young H, Sullivan J, Fermanian T (1986) Stability of tissue culture medium pH as a function of autoclaving, time, and cultured plant material Plant Cell Rep 5:292–294 61 Standardi technology A, Piccioni using E (1998) Recent non-embryogenic perspectives in on vitro-derived synthetic seed explants Int J Plant Sci 159:968–978 62 Sudarsono GRG, Goldy RG (1991) Growth regulator and axillary bud position effects on in vitro establishment of Vitis rotundifolia HortSci 26:304–307 63 Sundararaj vitro SG, Agrawal short-term storage A, Tyagi and RK (2010) exchange Encapsulation of ginger for in (Zingiber officinale Rosc.) germplasm Sci Hort 125:761–766 64 Tetsumura T, Kajiwara Y, Honsho C, Yamauchi MS, Sugimoto Y, Kunitake H (2012) Effective micropropagation of rabbiteye blueberries for leaf tea production Environ Control Biol 50:289–296 65 Tetsumura T, Matsumoto Y, Sato M, Honsho C, Yamashita K, Komatsu H, Sugimoto Y, Kunitake H (2008) Evaluation of basal media for micropropagation of four highbush blueberry cultivars Sci Hort 119:72–74 66 Yadong L, Shuying L, Zhidong Z, Lin W (2003) The induction and regeneration of rabbiteye blueberry buds Acta Hort 626:259–264 67 Yang X, Zhang X (2010) Regulation of somatic embryogenesis in higher plants Crit Rev Plant Sci 29:36–57 68 Withers LA (1991) In vitro conservation Biol J Linn Soc 43:31–42 64 PHỤ LỤC Thống kê mô tả (descriptive statistics) thí nghiệm 1: BA: Tỉ lệ hình thành chồi (%) Chiều cao chồi (mm) Số chồi đơn Số đốt Số Chiều dài (mm) Chiều rộng (mm) Nghiệm thức Mean SD n BA=0,25mg/l 100,00 ,000 30 BA=0,5mg/l 100,00 ,000 30 BA=0mg/l 100,00 ,000 30 BA=1mg/l 100,00 ,000 30 BA=2mg/l 100,00 ,000 30 Total 100,00 ,000 150 BA=0,25mg/l 41,15 8,330 150 BA=0,5mg/l 36,11 8,083 150 BA=0mg/l 32,83 8,711 150 BA=1mg/l 35,53 7,938 150 BA=2mg/l 30,32 8,027 150 Total 35,19 8,967 750 BA=0,25mg/l 1,14 ,348 150 BA=0,5mg/l 1,60 ,492 150 BA=0mg/l 1,10 ,301 150 BA=1mg/l 2,07 ,532 150 BA=2mg/l 1,27 ,447 150 Total 1,44 ,564 750 BA=0,25mg/l 5,80 1,817 150 BA=0,5mg/l 6,91 1,638 150 BA=0mg/l 5,48 1,737 150 BA=1mg/l 7,06 1,727 150 BA=2mg/l 5,41 1,672 150 Total 6,13 1,856 750 BA=0,25mg/l 11,51 2,669 150 BA=0,5mg/l 12,87 2,260 150 BA=0mg/l 11,22 2,433 150 BA=1mg/l 12,59 2,482 150 BA=2mg/l 9,72 2,315 150 Total 11,58 2,676 750 BA=0,25mg/l 5,841 ,8986 150 BA=0,5mg/l 5,714 ,9517 150 BA=0mg/l 5,560 ,9176 150 BA=1mg/l 5,724 ,8828 150 BA=2mg/l 5,604 ,8816 150 Total 5,689 ,9098 750 BA=0,25mg/l 2,60 ,577 150 BA=0,5mg/l 2,58 ,618 150 Trọng lượng tươi (mg) BA=0mg/l 2,62 ,665 150 BA=1mg/l 2,63 ,563 150 BA=2mg/l 2,61 ,584 150 Total 2,61 ,601 750 BA=0,25mg/l 18,49 5,440 150 BA=0,5mg/l 18,59 5,144 150 BA=0mg/l 17,84 5,104 150 BA=1mg/l 18,50 5,263 150 BA=2mg/l 17,63 5,334 150 Total 18,21 5,259 750 2-ip: Tỉ lệ hình thành chồi (%) Chiều cao (mm) Số chồi đơn Số đốt Số Chiều dài (mm) Nghiệm thức Mean SD n 2-ip=0,25mg/l 100,00 ,000 30 2-ip=0,5mg/l 100,00 ,000 30 2-ip=0mg/l 100,00 ,000 30 2-ip=1mg/l 100,00 ,000 30 2-ip=2mg/l 100,00 ,000 30 Total 100,00 ,000 150 2-ip=0,25mg/l 32,59 7,578 150 2-ip=0,5mg/l 41,31 8,808 150 2-ip=0mg/l 32,70 7,137 150 2-ip=1mg/l 43,18 8,214 150 2-ip=2mg/l 30,87 6,425 150 Total 36,13 9,184 750 2-ip=0,25mg/l 2,09 ,510 150 2-ip=0,5mg/l 2,41 ,696 150 2-ip=0mg/l 1,15 ,355 150 2-ip=1mg/l 3,09 ,785 150 2-ip=2mg/l 2,19 ,702 150 Total 2,19 ,885 750 2-ip=0,25mg/l 6,56 1,709 150 2-ip=0,5mg/l 7,19 1,318 150 2-ip=0mg/l 5,41 1,372 150 2-ip=1mg/l 9,73 2,649 150 2-ip=2mg/l 6,11 1,555 150 Total 7,00 2,320 750 2-ip=0,25mg/l 12,15 2,608 150 2-ip=0,5mg/l 12,31 2,460 150 2-ip=0mg/l 11,29 2,633 150 2-ip=1mg/l 21,27 3,813 150 2-ip=2mg/l 10,79 2,414 150 Total 13,56 4,815 750 2-ip=0,25mg/l 5,753 ,8517 150 2-ip=0,5mg/l 5,755 ,8439 150 2-ip=0mg/l 5,677 ,8228 150 2-ip=1mg/l 5,758 ,8486 150 Chiều rộng (mm) Trọng lượng tươi (mg) 2-ip=2mg/l 5,670 ,8594 150 Total 5,723 ,8441 750 2-ip=0,25mg/l 2,59 ,598 150 2-ip=0,5mg/l 2,59 ,528 150 2-ip=0mg/l 2,59 ,610 150 2-ip=1mg/l 2,61 ,542 150 2-ip=2mg/l 2,59 ,533 150 Total 2,59 ,562 750 2-ip=0,25mg/l 18,33 4,780 150 2-ip=0,5mg/l 19,38 5,108 150 2-ip=0mg/l 17,81 5,174 150 2-ip=1mg/l 21,75 4,962 150 2-ip=2mg/l 18,21 5,393 150 Total 19,10 5,271 750 Zeatin: Tỉ lệ hình thành chồi (%) Chiều cao chồi (mm) Số chồi đơn Số đốt Số Nghiệm thức Mean SD n Zea=0,25mg/l 100,00 ,000 30 Zea=0,5mg/l 100,00 ,000 30 Zea=0mg/l 100,00 ,000 30 Zea=1mg/l 100,00 ,000 30 Zea=2mg/l 100,00 ,000 30 Total 100,00 ,000 150 Zea=0,25mg/l 26,02 5,160 150 Zea=0,5mg/l 27,13 4,894 150 Zea=0mg/l 32,84 9,839 150 Zea=1mg/l 27,87 5,266 150 Zea=2mg/l 22,76 4,394 150 Total 27,32 7,025 750 Zea=0,25mg/l 3,52 1,073 150 Zea=0,5mg/l 5,26 1,287 150 Zea=0mg/l 1,13 ,341 150 Zea=1mg/l 5,92 1,930 150 Zea=2mg/l 4,11 1,362 150 Total 3,99 2,108 750 Zea=0,25mg/l 10,41 2,744 150 Zea=0,5mg/l 17,29 4,530 150 Zea=0mg/l 5,51 1,360 150 Zea=1mg/l 20,39 4,274 150 Zea=2mg/l 10,18 2,611 150 Total 12,76 6,301 750 Zea=0,25mg/l 20,29 2,948 150 Zea=0,5mg/l 28,35 4,836 150 Zea=0mg/l 11,17 2,402 150 Zea=1mg/l 37,99 5,226 150 Zea=2mg/l 22,11 2,445 150 Total 23,98 9,672 750 Chiều dài (mm) Chiều rộng (mm) Trọng lượng tươi (mg) Zea=0,25mg/l 2,990 ,7616 150 Zea=0,5mg/l 3,076 ,7185 150 Zea=0mg/l 5,666 ,8852 150 Zea=1mg/l 3,095 ,7152 150 Zea=2mg/l 3,027 ,7504 150 Total 3,571 1,2992 750 Zea=0,25mg/l 1,17 ,422 150 Zea=0,5mg/l 1,17 ,401 150 Zea=0mg/l 2,64 ,578 150 Zea=1mg/l 1,20 ,345 150 Zea=2mg/l 1,17 ,382 150 Total 1,47 ,728 750 Zea=0,25mg/l 147,29 13,080 150 Zea=0,5mg/l 176,90 9,491 150 Zea=0mg/l 17,82 5,463 150 Zea=1mg/l 199,53 14,364 150 Zea=2mg/l 162,67 6,047 150 Total 140,84 64,738 750 Thống kê mô tả (descriptive statistics) thí nghiệm 2: pH = 4,8: Tỉ lệ hình thành chồi (%) Chiều cao (mm) Số chồi đơn Số đốt Nghiệm thức Mean SD n M3W7-pH4,8 84,00 17,734 30 M5W5-pH4,8 75,33 27,635 30 M7W3-pH4,8 72,67 28,999 30 MS-pH4,8 62,00 32,526 30 WPM-pH4,8 70,67 32,688 30 Total 72,93 28,954 150 M3W7-pH4,8 30,33 7,449 126 M5W5-pH4,8 29,23 6,055 113 M7W3-pH4,8 27,16 5,858 109 MS-pH4,8 24,02 6,724 93 WPM-pH4,8 22,43 6,188 106 Total 26,87 7,151 547 M3W7-pH4,8 8,93 3,020 126 M5W5-pH4,8 6,65 1,812 113 M7W3-pH4,8 4,17 1,643 109 MS-pH4,8 2,16 1,321 93 WPM-pH4,8 2,85 1,542 106 Total 5,18 3,248 547 M3W7-pH4,8 29,76 7,419 126 M5W5-pH4,8 17,27 5,969 113 M7W3-pH4,8 13,83 5,558 109 MS-pH4,8 7,05 3,405 93 WPM-pH4,8 9,18 3,944 106 Số Chiều dài (mm) Chiều rộng (mm) Trọng lượng tươi (mg) Total 16,16 9,929 547 M3W7-pH4,8 59,36 8,807 126 M5W5-pH4,8 34,78 7,217 113 M7W3-pH4,8 26,32 4,655 109 MS-pH4,8 14,30 4,655 93 WPM-pH4,8 18,17 5,124 106 Total 32,05 17,682 547 M3W7-pH4,8 3,564 ,6968 126 M5W5-pH4,8 3,297 ,7011 113 M7W3-pH4,8 3,325 ,6939 109 MS-pH4,8 3,192 ,7283 93 WPM-pH4,8 3,207 ,7130 106 Total 3,329 ,7166 547 M3W7-pH4,8 1,687 ,6412 126 M5W5-pH4,8 1,484 ,7431 113 M7W3-pH4,8 1,506 ,5525 109 MS-pH4,8 1,396 ,4823 93 WPM-pH4,8 1,413 ,5737 106 Total 1,506 ,6178 547 M3W7-pH4,8 335,06 42,761 126 M5W5-pH4,8 247,85 15,517 113 M7W3-pH4,8 201,22 32,190 109 MS-pH4,8 111,74 15,263 93 WPM-pH4,8 123,13 23,792 106 Total 211,34 88,600 547 pH = 5,2: Tỉ lệ hình thành chồi (%) Chiều cao (mm) Số chồi đơn Số đốt Nghiệm thức Mean SD n M3W7-pH5,2 100,00 ,000 30 M5W5-pH5,2 100,00 ,000 30 M7W3-pH5,2 100,00 ,000 30 MS-pH5,2 100,00 ,000 30 WPM-pH5,2 100,00 ,000 30 Total 100,00 ,000 150 M3W7-pH5,2 26,59 7,290 150 M5W5-pH5,2 27,80 8,086 150 M7W3-pH5,2 26,07 6,107 150 MS-pH5,2 28,48 7,032 150 WPM-pH5,2 21,66 6,649 150 Total 26,12 7,439 750 M3W7-pH5,2 7,71 2,428 150 M5W5-pH5,2 5,89 1,941 150 M7W3-pH5,2 4,22 1,896 150 MS-pH5,2 3,18 1,341 150 WPM-pH5,2 3,71 1,815 150 Total 4,94 2,530 750 M3W7-pH5,2 29,13 6,363 150 Số Chiều dài (mm) Chiều rộng (mm) Trọng lượng tươi (mg) M5W5-pH5,2 20,40 5,794 150 M7W3-pH5,2 14,86 5,199 150 MS-pH5,2 13,66 3,397 150 WPM-pH5,2 10,48 3,440 150 Total 17,71 8,228 750 M3W7-pH5,2 52,83 12,135 150 M5W5-pH5,2 38,12 7,782 150 M7W3-pH5,2 25,74 4,751 150 MS-pH5,2 22,65 6,263 150 WPM-pH5,2 17,05 5,217 150 Total 31,28 14,934 750 M3W7-pH5,2 3,111 ,8057 150 M5W5-pH5,2 3,056 ,6318 150 M7W3-pH5,2 3,127 ,7075 150 MS-pH5,2 3,031 ,6836 150 WPM-pH5,2 2,976 ,5594 150 Total 3,060 ,6829 750 M3W7-pH5,2 1,275 ,4468 150 M5W5-pH5,2 1,338 ,4035 150 M7W3-pH5,2 1,261 ,4802 150 MS-pH5,2 1,214 ,3592 150 WPM-pH5,2 1,181 ,4371 150 Total 1,254 ,4296 750 M3W7-pH5,2 253,19 33,633 150 M5W5-pH5,2 199,42 43,865 150 M7W3-pH5,2 175,00 25,666 150 MS-pH5,2 149,36 53,128 150 WPM-pH5,2 108,81 20,561 150 Total 177,16 61,097 750 Thống kê mơ tả (descriptive statistics) thí nghiệm 3: tuần gieo hạt: Tỉ lệ hạt nảy mầm (%) Nghiệm thức Mean SD n 2-ip=1 tuần BA=1 tuần IAA=1 tuần IBA=1 tuần Không KTST=1 tuần NAA=1 tuần Zea=1 tuần Total 6,00 5,33 ,00 ,00 ,00 ,00 12,67 3,43 14,044 13,830 ,000 ,000 ,000 ,000 25,989 12,965 30 30 30 30 30 30 30 210 Chiều cao (mm) Nghiệm thức Mean SD n 2-ip=1 tuần 6,78 ,833 BA=1 tuần 6,25 1,035 Số chồi đơn Số đốt Số Chiều dài (mm) Chiều rộng (mm) Trọng lượng tươi (mg) Zea=1 tuần 9,53 1,577 19 Total 8,11 1,997 36 2-ip=1 tuần 1,00 ,000 BA=1 tuần 1,00 ,000 Zea=1 tuần 1,26 ,452 19 Total 1,14 ,351 36 2-ip=1 tuần 1,00 ,000 BA=1 tuần 1,00 ,000 Zea=1 tuần 1,79 ,787 19 Total 1,42 ,692 36 2-ip=1 tuần 2,00 ,000 BA=1 tuần 2,00 ,000 Zea=1 tuần 3,11 ,994 19 Total 2,58 ,906 36 2-ip=1 tuần 2,089 ,2261 BA=1 tuần 2,075 ,2121 Zea=1 tuần 2,121 ,1903 19 Total 2,103 ,1993 36 2-ip=1 tuần ,911 ,1167 BA=1 tuần ,888 ,1246 Zea=1 tuần ,889 ,1595 19 Total ,894 ,1393 36 2-ip=1 tuần 6,44 1,130 BA=1 tuần 5,38 ,916 Zea=1 tuần 17,74 2,257 19 Total 12,17 6,236 36 tuần gieo hạt: Tỉ lệ hạt nảy mầm (%) Nghiệm thức Mean SD n 2-ip=2 tuần BA=2 tuần IAA=2 tuần IBA=2 tuần Không KTST=2 tuần NAA=2 tuần Zea=2 tuần Total 87,33 80,67 ,00 ,00 ,00 ,00 93,33 37,33 25,452 28,999 ,000 ,000 ,000 ,000 19,179 46,221 30 30 30 30 30 30 30 210 Chiều cao (mm) Số chồi đơn Nghiệm thức Mean SD n 2-ip=2 tuần 25,73 3,843 131 BA=2 tuần 9,12 1,694 121 Zea=2 tuần 10,28 2,139 140 Total 15,08 8,044 392 2-ip=2 tuần 2,12 ,702 131 BA=2 tuần 1,12 ,321 121 Zea=2 tuần 2,41 ,795 140 Total 1,91 ,848 392 Số đốt Số Chiều dài (mm) Chiều rộng (mm) Trọng lượng tươi (mg) 2-ip=2 tuần 3,94 1,257 131 BA=2 tuần 1,44 ,498 121 Zea=2 tuần 5,23 1,542 140 Total 3,63 1,970 392 2-ip=2 tuần 6,24 1,645 131 BA=2 tuần 2,64 ,837 121 Zea=2 tuần 8,41 2,176 140 Total 5,90 2,897 392 2-ip=2 tuần 2,93 ,398 131 BA=2 tuần 2,50 ,330 121 Zea=2 tuần 2,44 ,332 140 Total 2,62 ,418 392 2-ip=2 tuần 1,292 ,3733 131 BA=2 tuần 1,176 ,2739 121 Zea=2 tuần 1,109 ,2807 140 Total 1,191 ,3214 392 2-ip=2 tuần 9,11 1,935 131 BA=2 tuần 6,72 1,598 121 Zea=2 tuần 38,24 3,584 140 Total 18,78 14,785 392 tuần gieo hạt: Tỉ lệ hạt nảy mầm (%) Nghiệm thức Mean SD n 2-ip=4 tuần BA=4 tuần IAA=4 tuần IBA=4 tuần Không KTST=4 tuần NAA=4 tuần Zea=4 tuần Total 100,00 100,00 ,00 ,00 ,00 ,00 100,00 42,86 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 49,605 30 30 30 30 30 30 30 210 Chiều cao (mm) Số chồi đơn Số đốt Số Nghiệm thức Mean SD n 2-ip=4 tuần 29,19 3,775 150 BA=4 tuần 17,57 3,033 150 Zea=4 tuần 17,41 3,275 150 Total 21,39 6,468 450 2-ip=4 tuần 2,19 ,564 150 BA=4 tuần 1,23 ,420 150 Zea=4 tuần 3,80 1,264 150 Total 2,41 1,350 450 2-ip=4 tuần 4,63 1,354 150 BA=4 tuần 2,68 ,951 150 Zea=4 tuần 8,31 2,189 150 Total 5,21 2,823 450 2-ip=4 tuần 8,71 2,379 150 BA=4 tuần 4,90 1,514 150 Chiều dài (mm) Chiều rộng (mm) Trọng lượng tươi (mg) Zea=4 tuần 14,62 2,758 150 Total 9,41 4,603 450 2-ip=4 tuần 3,67 ,337 150 BA=4 tuần 3,30 ,344 150 Zea=4 tuần 2,58 ,288 150 Total 3,18 ,558 450 2-ip=4 tuần 1,734 ,3313 150 BA=4 tuần 1,600 ,2875 150 Zea=4 tuần 1,209 ,3415 150 Total 1,514 ,3903 450 2-ip=4 tuần 13,61 2,517 150 BA=4 tuần 8,31 1,911 150 Zea=4 tuần 128,53 2,882 150 Total 50,15 55,585 450 tuần gieo hạt: Tỉ lệ hạt nảy mầm (%) Nghiệm thức Mean SD n 2-ip=6 tuần BA=6 tuần IAA=6 tuần IBA=6 tuần Không KTST=6 tuần NAA=6 tuần Zea=6 tuần Total 100,00 100,00 ,00 ,00 ,00 ,00 100,00 42,86 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 ,000 49,605 30 30 30 30 30 30 30 210 Chiều cao (mm) Số chồi đơn Số đốt Số Chiều dài (mm) Nghiệm thức Mean SD n 2-ip=6 tuần 35,90 3,069 150 BA=6 tuần 23,23 2,558 150 Zea=6 tuần 21,83 3,694 150 Total 26,99 7,067 450 2-ip=6 tuần 2,21 ,651 150 BA=6 tuần 1,23 ,420 150 Zea=6 tuần 4,90 1,779 150 Total 2,78 1,914 450 2-ip=6 tuần 5,80 1,563 150 BA=6 tuần 3,11 ,998 150 Zea=6 tuần 12,52 3,198 150 Total 7,14 4,499 450 2-ip=6 tuần 10,29 2,592 150 BA=6 tuần 5,80 1,461 150 Zea=6 tuần 22,54 3,031 150 Total 12,88 7,493 450 2-ip=6 tuần 4,808 ,3216 150 BA=6 tuần 4,397 ,3807 150 Zea=6 tuần 2,939 ,2719 150 Total 4,048 ,8671 450 Chiều rộng (mm) Trọng lượng tươi (mg) 2-ip=6 tuần 2,176 ,2756 150 BA=6 tuần 2,085 ,2834 150 Zea=6 tuần 1,284 ,2943 150 Total 1,848 ,4915 450 2-ip=6 tuần 18,93 2,702 150 BA=6 tuần 12,38 3,191 150 Zea=6 tuần 165,79 3,524 150 Total 65,70 70,976 450 Thống kê mơ tả (descriptive statistics) thí nghiệm 4: 4oC: Tỉ lệ hạt nảy mầm (%) Nghiệm thức Mean SD n 4oC=0 tuần 100,00 ,000 30 4oC=1 100,00 ,000 30 95,33 13,578 30 tuần 100,00 ,000 30 4oC=4 tuần 100,00 ,000 30 4oC=8 tuần 100,00 ,000 30 Total 99,22 5,737 180 tuần 21,52 2,644 150 4oC=1 tuần 20,11 2,982 150 4oC=16 15,92 2,715 143 4oC=2 Số chồi đơn Số đốt Số tuần 4oC=2 4oC=0 Chiều cao (mm) tuần 4oC=16 tuần tuần 19,20 3,254 150 4oC=4 tuần 17,29 3,086 150 4oC=8 tuần 16,71 2,986 150 Total 18,48 3,547 893 4oC=0 tuần 4,80 1,198 150 4oC=1 tuần 4,73 1,230 150 4oC=16 tuần 4,50 1,080 143 4oC=2 tuần 4,71 1,297 150 4oC=4 tuần 4,63 1,234 150 4oC=8 tuần 4,61 1,175 150 Total 4,67 1,205 893 4oC=0 tuần 12,49 2,985 150 4oC=1 12,33 3,002 150 4oC=16 tuần tuần 8,81 8,962 143 4oC=2 tuần 10,71 2,745 150 4oC=4 tuần 10,63 2,587 150 4oC=8 tuần 8,93 7,624 150 Total 10,66 5,472 893 4oC=0 tuần 22,31 3,158 150 4oC=1 21,42 2,890 150 4oC=16 tuần tuần 16,62 1,910 143 4oC=2 tuần 19,89 3,058 150 4oC=4 tuần 19,71 2,874 150 Chiều dài (mm) Chiều rộng (mm) Trọng lượng tươi (mg) 4oC=8 tuần 16,79 2,330 150 Total 19,48 3,470 893 4oC=0 tuần 2,831 ,2951 150 4oC=1 tuần 2,785 ,2736 150 4oC=16 tuần 2,493 ,3128 143 4oC=2 tuần 2,728 ,2244 150 4oC=4 tuần 2,633 ,3014 150 4oC=8 tuần 2,637 ,2784 150 Total 2,686 ,3024 893 4oC=0 tuần 1,425 ,1668 150 4oC=1 1,329 ,2301 150 4oC=16 tuần tuần 1,241 ,3158 143 4oC=2 tuần 1,299 ,2860 150 4oC=4 tuần 1,195 ,2918 150 4oC=8 tuần 1,218 ,3010 150 Total 1,285 ,2801 893 4oC=0 tuần 164,19 6,080 150 4oC=1 164,13 5,699 150 4oC=16 tuần tuần 133,62 5,097 143 4oC=2 tuần 147,91 5,096 150 4oC=4 tuần 142,79 5,983 150 4oC=8 tuần 138,51 5,070 150 Total 148,64 13,062 893 25oC: Tỉ lệ hạt nảy mầm (%) Nghiệm thức Mean SD n 25oC=0 tuần 25oC=1 tuần 25oC=16 tuần 25oC=2 tuần 25oC=4 tuần 25oC=8 tuần Total 100,00 100,00 ,00 66,00 12,00 ,00 46,33 ,000 ,000 ,000 35,681 15,403 ,000 46,820 30 30 30 30 30 30 180 Nghiệm thức Mean SD n 25oC=0 Chiều cao (mm) tuần 21,58 2,890 150 25oC=1 tuần 18,55 3,231 150 25oC=2 tuần 15,43 2,572 99 25oC=4 tuần 11,61 1,914 18 Total 18,60 4,017 417 25oC=0 Số chồi đơn tuần 4,83 1,219 150 25oC=1 tuần 3,92 1,223 150 25oC=2 tuần 3,24 1,205 99 25oC=4 tuần 2,11 ,900 18 Total 4,01 1,408 417 tuần 12,41 3,226 150 25oC=1 tuần 11,93 2,365 150 25oC=0 Số đốt 25oC=2 tuần 7,73 2,079 99 25oC=4 tuần 4,11 1,231 18 Total 10,77 3,521 417 25oC=0 Số tuần 22,38 3,145 150 25oC=1 tuần 20,20 2,913 150 25oC=2 tuần 14,47 1,865 99 25oC=4 tuần 7,06 1,305 18 Total 19,06 4,811 417 25oC=0 Chiều dài (mm) tuần 2,789 ,2545 150 25oC=1 tuần 2,727 ,2775 150 25oC=2 tuần 2,614 ,2980 99 25oC=4 tuần 2,617 ,1978 18 Total 2,718 ,2795 417 25oC=0 Chiều rộng (mm) Trọng lượng tươi (mg) tuần 1,431 ,1983 150 25oC=1 tuần 1,331 ,2430 150 25oC=2 tuần 1,292 ,2877 99 25oC=4 tuần 1,200 ,2196 18 Total 1,352 ,2469 417 25oC=0 tuần 164,32 6,300 150 25oC=1 tuần 138,75 4,916 150 25oC=2 tuần 92,42 5,111 99 25oC=4 tuần 19,22 2,390 18 Total 131,79 36,679 417 ***