CHẨN ĐOÁN VÀ SÀNG LỌC TRƯỚC SINH

Làm giàu cffDNA xét nghiệm NIPT: giải pháp cho thai phụ FF thấp TS.BS Đặng Tiến Trường HỘI NGHỊ KHOA HỌC SÀNG LỌC CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH VÀ SƠ SINH KHU VỰC BẮC TRUNG BỘ - LẦN THỨ I Dị tật bẩm sinh bất thường nhiễm sắc thể thai nhi Không rõ nguyên nhân trẻ em sinh với Dị tật bẩm sinh biết nguyên nhân mang bất thường NST mang bất thường di truyền mang bất thường kết hợp chất độc HỘI NGHỊ KHOA HỌC SÀNG LỌC CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH VÀ SƠ SINH KHU VỰC BẮC TRUNG BỘ - LẦN THỨ I Nền tảng xét nghiệm NIPT ccfDNA 02 NIPT Carbone L et al 2020 Genes (Basel) 12(1):15 NGS 03 Kim K (2015) J Genet Med.12(2) pp 66-71 https://embryoplus.gr/en/cell-free-dna-nipt/ So sánh phương pháp sàng lọc trước sinh Harraway J (2017) Aust Fam Physician 46(10) pp 735-739 NIPT giúp giảm thiểu thủ thuật xâm lấn không cần thiết Rose N C et al (2022) Genetics in Medicine 24 1pp 379-1391 Cơ sở xét nghiệm NIPT - DNA tự do: + Cell free DNA, cfDNA + Các đoạn DNA ngắn máu loại dịch thể khác + Nguồn gốc: tế bào chết apoptosis - DNA tự thai nhi: + cell free DNA, cffDNA + Nguồn gốc: tế bào túi phôi chết apoptosis HỘI NGHỊ KHOA HỌC SÀNG LỌC CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH VÀ SƠ SINH KHU VỰC BẮC TRUNG BỘ - LẦN THỨ I Fetal fraction yếu tố ảnh hưởng - Fetal fraction (FF): Tỷ lệ phần trăm cffDNA tổng số cfDNA máu mẹ - FF tuần thai thứ 10-20: - 30% - Các yếu tố ảnh hưởng đến FF + BMI: BMI tăng => FF giảm + Thai IVF: FF thấp2 + Thai đôi: FF thấp3 https://doi.org/10.1159/000337373 https://doi.org/10.1093/humrep/dey033 https://sci-hub.se/10.1016/j.bpobgyn.2020.07.004 https://doi.org/10.1002/uog.15851 Fetal fraction yếu tố ảnh hưởng HỘI NGHỊ KHOA HỌC SÀNG LỌC CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH VÀ SƠ SINH KHU VỰC BẮC TRUNG BỘ - LẦN THỨ I 12/2022 Làm giàu cffDNA - Trong liệu giải trình tự có (FF=10%): + 10% liệu phôi thai + 90% liệu mẹ => Yêu cầu giải trình tự nhiều để đảm bảo kết => Khắc phục: tăng tỷ lệ cffDNA mẫu giải trình tự HỘI NGHỊ KHOA HỌC SÀNG LỌC CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH VÀ SƠ SINH KHU VỰC BẮC TRUNG BỘ - LẦN THỨ I Làm giàu cffDNA - Kích thước cffDNA: tập trung khoảng < 200 bp ngắn cfDNA mẹ Shi, J., et al., Size profile of cell-free DNA: A beacon guiding the practice and innovation of clinical testing 2020 10(11): p 4737 Phương pháp Nghiên cứu Tinh gel Hệ thống E-gel SizeSelect II S1: 140 - 160 bp S2: 120 - 140 bp HỘI NGHỊ KHOA HỌC SÀNG LỌC CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH VÀ SƠ SINH KHU VỰC BẮC TRUNG BỘ - LẦN THỨ I S0 Khơng làm giàu S1 S2 Kích thước thư viện làm giàu 230- 250 bp 210- 230 bp Khoảng kích thước giải trình tự 100 bp - 300 bp 100 bp - 200 bp 100 bp - 200 bp Kích thước cfDNA làm giàu 140 - 160 bp 120 - 140 bp Tỷ lệ phần trăm số đầu đọc NST Y trước sau làm giàu Chú thích: S0 - Thư viện khơng làm giàu S1 - Thư viện làm giàu khoảng kích thước 230 - 250 bp S2 - Thư viện làm giàu khoảng kích thước 210 - 230 bp HỘI NGHỊ KHOA HỌC SÀNG LỌC CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH VÀ SƠ SINH KHU VỰC BẮC TRUNG BỘ - LẦN THỨ I So sánh NIPT thông thường NIPT cải tiến Liang B et al (2018) Scientific Reports 8(1) pp 17675 Phương pháp làm giàu Bo Liang cs (2018) Ying Xue cs (2020) E-gel CloneWell Agarose Gel E-gel Ex 2% 0,8% mẫu huyết tương thai phụ mẫu cho kết âm mang thai nam tính giả Loại mẫu Kích thước làm giàu tối ưu Số lần FF tăng lên Kết NIPT 125 - 135 bp 115 - 132 bp 2,87 - 5/8 trường hợp cho kết dương tính kiểm chứng phương pháp NST đồ - HỘI NGHỊ KHOA HỌC SÀNG LỌC CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH VÀ SƠ SINH KHU VỰC BẮC TRUNG BỘ - LẦN THỨ I Phương pháp làm giàu Loại mẫu Kết NIPT Bo Liang cs (2018) Ping Hu cs (2019) Hạt từ Hạt từ 2153 mẫu huyết tương thai phụ 1404 mẫu huyết tương thai phụ mang mang thai nam - 2023 trường hợp bình thường 130 trường hợp mang bất thường NST xác minh - 22 mẫu khơng có kết với quy trình truyền thống cho kết với quy trình làm giàu - Tỷ lệ xét nghiệm thất bại giảm: từ 0.7% xuống 0,1% (P