Đồ án tốt nghiệp nghiên cứu ảnh hưởng của dung môi tách chiết đến hoạt tính kháng khuẩn của cây elephantopus sp

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP u iệ il Tà NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA DUNG MÔI TÁCH CHIẾT ĐẾN HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CÂY ELEPHANTOPUS SP TE U H CÔNG NGHỆ SINH HỌC CH Ngành: Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : ThS Phạm Minh Nhựt TS Lương Tấn Trung Sinh viên thực MSSV: 1151110379 : Dương Minh Trí Lớp: 11DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2015 Đồ án tốt nghiệp NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… Tà iệ il ……………………………………………………………………………………… u ……………………………………………………………………………………… TE U H ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… CH ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… i Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đồ án nghiên cứu riêng thực sở lý thuyết, tiến hành nghiên cứu thực tiễn hướng dẫn ThS Phạm Minh Nhựt Các số liệu, kết nêu đồ án trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng năm 2015 Sinh viên u iệ il Tà CH TE U H Dương Minh Trí ii Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám Hiệu Trường Đại học Cơng Nghệ Tp Hồ Chí Minh, q thầy giảng dạy Khoa Công nghệ Sinh học - Thực phẩm - Môi trường tất thầy cô truyền dạy kiến thức quý báu cho em suốt năm học vừa qua Qua em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy Phạm Minh Nhựt, người định hướng nghiên cứu, quan tâm, tận tình hướng dẫn giúp đỡ em suốt thời gian làm khoá luận tốt nghiệp Bên cạnh em xin cảm ơn thầy Phịng Thí nghiệm Khoa Cơng nghệ sinh học - Thực phẩm - Môi trường anh chị, bạn bè nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn il Tà thành tốt đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình ln bên cạnh, động viên iệ u lúc khó khăn, nản lịng suốt thời gian học tập, nghiên cứu U H sống CH TE Tp Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng năm 2015 Sinh viên Dương Minh Trí iii Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC TRANG BÌA LỜI CAM ĐOAN ii LỜI CẢM ƠN iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT viii DANH SÁCH CÁC BẢNG ix DANH SÁCH CÁC HÌNH x Tà MỞ ĐẦU il u iệ Đặt vấn đề U H Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu TE CH Phạm vi nghiên cứu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Elephantopus sp 1.1.1 Nguồn gốc Elephantopus sp 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Đặc điểm thực vật học 1.1.4 Một số thành phần hóa học Elephantopus sp 1.1.5 Tính chất dược lý 1.2 Tổng quan hợp chất kháng khuẩn từ thực vật 1.2.1 Khái niệm phân loại iv Đồ án tốt nghiệp 1.2.2 Cơ chế kháng khuẩn hợp chất từ thực vật 1.2.3 Một số hợp chất kháng khuẩn thực vật 1.2.4 Tình hình nghiên cứu hợp chất kháng khuẩn từ thực vật giới Việt Nam 16 1.3 Phương pháp tách chiết hợp chất kháng khuẩn 18 1.3.1 Nguyên lý trình tách chiết 18 1.3.2 Cơ sở trình tách chiết 18 1.3.3 Các phương pháp tách chiết số hợp chất kháng khuẩn 18 1.4 Giới thiệu số nhóm vi sinh vật gây bệnh 22 Tà 1.4.1 Nhóm vi sinh vật gây bệnh tiêu chảy 22 il u iệ 1.4.2 Nhóm vi sinh vật gây bệnh hội da 26 1.5 Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 30 U H 1.5.1 Khái niệm 30 TE CH 1.5.2 Ý nghĩa 30 1.5.3 Cách xác định số MIC 31 CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 32 2.1.1 Địa điểm 32 2.1.2 Thời gian nghiên cứu 32 2.2 Vật liệu 32 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 32 2.2.2 Vật liệu nghiên cứu 32 2.2.3 Mơi trường ni cấy hóa chất 33 v Đồ án tốt nghiệp 2.2.4 Dụng cụ thiết bị 33 2.3 Phương pháp nghiên cứu 34 2.3.1 Phương pháp tách chiết hợp chất từ thực vật 34 2.3.2 Phương pháp tăng sinh 34 2.3.3 Phương pháp bảo quản giữ giống vi sinh vật 35 2.3.4 Phương pháp xác định mật độ tế bào 36 2.3.5 Phương pháp pha loãng mẫu 36 2.3.6 Phương pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn cao chiết 36 2.3.7 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 37 Tà 2.3.8 Phương pháp xác định thành phần hóa học 37 il u iệ 2.3.9 Phương pháp xử lý số liệu 38 U H 2.4 Bố trí thí nghiệm 38 2.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hiệu suất thu TE hồi cao từ Elephantopus sp 39 CH 2.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Elephantopus sp 43 2.4.3 Thí nghiệm 3: Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết ethanol 70% từ Elephantopus sp 44 2.4.4 Thí nghiệm 4: Định tính số thành phần hóa học loại cao chiết từ Elephantopus sp 45 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 53 3.1 Kết khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hiệu suất thu hồi cao từ Elephantopus sp 53 vi Đồ án tốt nghiệp 3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hoạt tính kháng khuẩn cao chiết từ Elephantopus sp 54 3.2.1 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Escherichia coli 55 3.2.2 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Salmonella spp 56 3.2.3 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Shigella spp 58 3.2.4 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Vibrio spp 60 Tà 3.2.5 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết il iệ nhóm vi sinh vật cịn lại 63 u 3.3 Kết xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết ethanol H U 70% từ Elephantopus sp 68 CH TE 3.4 Kết định tính số thành phần hóa học loại cao chiết từ Elephantopus sp 69 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 70 4.1 Kết luận 70 4.2 Đề nghị 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 PHỤ LỤC vii Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT TSB: Trypton Soya Broth TSA: Trypticase Soya Agar DMSO: Dimethyl Sulfoxide MIC: Minimum Inhibitory Concentration u iệ il Tà CH TE U H viii Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 3.1 Hiệu suất thu hồi cao từ loại dung môi khác 53 Bảng 3.2 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết khác từ Elephantopus sp 20 chủng vi sinh vật thị 64 Bảng 3.3 Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết từ dung môi ethanol 70% chủng vi sinh vật đối kháng 66 Bảng 3.4 Kết định tính số thành phần hóa học Elephantopus sp 68 u iệ il Tà CH TE U H ix Đồ án tốt nghiệp Naveed Ahmad et al, 2011 Antioxidant and antimicrobial attributes of different solvent extracts from leaves and flowers of Calotropis procera (Ait.) Ait F Journal of Medicinal Plants Research Vol 5(19), pp 4879-4887 Lin CC, Tsai CC, Yen MH, 1995 The evaluation of hepatoprotective effects of Taiwan folk medicine 'Teng-Khia-U' Journal of Ethnopharmacology, 45(2):113123 Lorenzi H, 1982 Weeds of Brazil, terrestrial and aquatic, parasitic, poisonous and medicinal (Plantas daninhas de Brasil, terrestres, aquaticas, parasitas, toxicas e medicinais.) Nova Odessa, Brazil: H Lorenzi, 425 pp Missouri Botanical Garden, 2013 Tropicos database St Louis, USA: Missouri il Tà Botanical Garden http://www.tropicos.org/ Ngueguim FT, Khan MP, Donfack JH, Siddiqui JA, Tewari D, Nagar GK, Tiwari iệ plants towards experimental H Cameroonian u SC, Theophile D, Rakesh Maurya, Chattopadhyay N, 2012 Evaluation of bone regeneration Journal of TE U Ethnopharmacology, 141(1):331-337 pastures Hawaii Farm Science, 21(1):3-5 CH Nicholls DF, Plucknett DL, 1972 Control of Elephantopus in Hawaii's Ooi KhengLeong, Tengku Sifzizul TM, Tan MeiLan, Shaida Fariza Sulaiman, 2011 Cytotoxic, apoptotic and anti-alpha-glucosidase activities of 3,4-di-Ocaffeoyl quinic acid, an antioxidant isolated from the polyphenolic-rich extract of Elephantopus mollis Kunth Journal of Ethnopharmacology, 135(3):685-695 O O Igbinosa et al, 2009 Antimicrobial activity and phytochemical screening of stem bark extracts from Jatropha curcas (Linn) African Journal of Pharmacy and Pharmacology Vol 3(2) pp 058-062 Queensland Government, 2013 Tobacco weed (Elephantopus mollis) Queensland, Australia: Queensland Government, Department of Agriculture, Fisheries and Forestry 76 Đồ án tốt nghiệp Radulovíc ctv (2013) “Antimicrobial Plant Metabolites: Structural Diversity and Mechanism of Action” Current Medicinal Chemistry, 20, 932-952 Rayes A A.H (2012), Screening of some natural and cultivated plants in sudia arabia fight infections and inhibit growth of pathogenic bacteria, Faculty of Applied Sciences, Umm A1 – Qura University Makkah Saudi Arabia Study on the chemical constituents of Elephantopus mollis / Liang N1, Yang XX, Wang GC, Wu X, Yang YT, Luo HJ, Li YL / Zhong Yao Cai 2012 Nov;35(11):1775-8 Tabopda TK, Ngoupayo J, Liu JiaWei, Ali MS, Khan SN, Ngadjui BT, Luu B, 2008 Further cytotoxic sesquiterpene lactones from Elephantopus mollis Tà Kunth Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 56(2):231-233 iệ il Topoclimate Australia, 2013 Elephantopus (Elephantopus mollis) Coffs Harbour, New South Wales, Australia: Topoclimate Australia Inhibitory Effect of u Elephantopus mollis H.B and K Extract on Melanogenesis in B16 Murine H TE U Melanoma Cells by Downregulating Microphthalmia-Associated Transcription Factor Expression / Kiyotaka Hasegawa, Rikako Furuya et al / Bioscience, CH Biotechnology, and Biochemistry, Vol 74 (2010) , No pp.1908-1912 Chemoprevention Bioactivity of Elephantopus mollis / David Sheng Yang Wang, Hsing-Ning Chang et al, 2007/ Poster / American Society of Plant Biologists Wendakoon C., Calderon P., Gagnon D (2012), Evaluation of selected medicinal plants extracted in different ethanol concentrations for antibacterial activity against human pathogens, Journal of Medicinally Active Plants 77 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC A: KẾT QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA DUNG MÔI TÁCH CHIẾT ĐẾN HIỆU SUẤT THU HỒI CAO TỪ CÂY ELEPHANTOPUS SP A.1 Kết khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hiệu suất thu hồi cao từ Elephantopus sp Dung môi tách chiết Hiệu suất thu hồi cao (%) L1 L2 L3 14.728 15.638 15.092 17.408 17.366 17.602 17.908 17.596 18.194 13.568 13.878 13.802 Nước Ethanol 50% Ethanol 70% Ethanol 90% Tà Mean Square F-Ratio 11.5017 134.84 0.0852993 CH Df 11 TE Sum of Squares 34.5052 0.682395 35.1876 U Source Between groups Within groups Total (Corr.) H Bảng One – Way ANOVA u iệ lý thống kê il A.2 Kết hiệu suất thu hồi loại cao tất lần lặp lại xử Bảng Multiple Range Tests Method: 95.0 percent Tukey HSD Dung moi Count Mean Homogeneous Groups Ethanol 90 13.7493 X X Nuoc 15.1527 X Ethanol 50 17.4587 X Ethanol 70 17.8993 P-Value 0.0000 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC B: KẾT QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA DUNG MÔI TÁCH CHIẾT ĐẾN HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CAO CHIẾT TỪ CÂY ELEPHANTOPUS SP B.1 Kết hoạt tính kháng khuẩn cao chiết nước (100 mg/ml) từ Elephantopus sp đối chủng vi sinh vật thị Chủng Escherichia coli 0157:H7 Escherichia coli 0208 Escherichia coli (K) Enterotoxigenic E coli - ETEC Listeria innocua Listeria monocytogenes Salmonella dublin Salmonella enteritidis Salmonella typhi (K) Salmonella typhimurium Shigella boydii Shigella flexneri Shigella sonnei Vibrio alginolyticus Vibrio cholerae Vibrio harveyi Vibrio parahaemolyticus Pseudomonas (K) Staphylococcus aureus Enterococcus feacalis u iệ il Tà L1 12 - CH TE U H STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 L2 12 - L3 12.5 - Đồ án tốt nghiệp B.2 Kết hoạt tính kháng khuẩn cao chiết ethanol 50% (100 mg/ml) từ Elephantopus sp đối chủng vi sinh vật thị Chủng Escherichia coli 0157:H7 Escherichia coli 0208 Escherichia coli (K) Enterotoxigenic E coli - ETEC Listeria innocua Listeria monocytogenes Salmonella dublin Salmonella enteritidis Salmonella typhi (K) Salmonella typhimurium Shigella boydii Shigella flexneri Shigella sonnei Vibrio alginolyticus Vibrio cholerae Vibrio harveyi Vibrio parahaemolyticus Pseudomonas (K) Staphylococcus aureus Enterococcus feacalis u iệ il Tà L1 13 13.5 10 12 - CH TE U H STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 L2 12 14 10 11.5 - L3 12.5 14.5 11 11.5 - Đồ án tốt nghiệp B.3 Kết hoạt tính kháng khuẩn cao chiết ethanol 70% (100 mg/ml) từ Elephantopus sp đối chủng vi sinh vật thị Chủng Escherichia coli 0157:H7 Escherichia coli 0208 Escherichia coli (K) Enterotoxigenic E coli - ETEC Listeria innocua Listeria monocytogenes Salmonella dublin Salmonella enteritidis Salmonella typhi (K) Salmonella typhimurium Shigella boydii Shigella flexneri Shigella sonnei Vibrio alginolyticus Vibrio cholerae Vibrio harveyi Vibrio parahaemolyticus Pseudomonas (K) Staphylococcus aureus Enterococcus feacalis u iệ il Tà L1 12 15 12.5 18 13 11 16 17.5 13 - CH TE U H STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 L2 12 13 11.5 17 13 12 16 17.5 11.5 - L3 12.5 12.5 11.5 17 13.5 12 15 17 11 - Đồ án tốt nghiệp B.4 Kết hoạt tính kháng khuẩn cao chiết ethanol 90% (100 mg/ml) từ Elephantopus sp đối chủng vi sinh vật thị Chủng Escherichia coli 0157:H7 Escherichia coli 0208 Escherichia coli (K) Enterotoxigenic E coli - ETEC Listeria innocua Listeria monocytogenes Salmonella dublin Salmonella enteritidis Salmonella typhi (K) Salmonella typhimurium Shigella boydii Shigella flexneri Shigella sonnei Vibrio alginolyticus Vibrio cholerae Vibrio harveyi Vibrio parahaemolyticus Pseudomonas (K) Staphylococcus aureus Enterococcus feacalis u iệ il Tà L1 16 11 - CH TE U H STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 L2 15 12 - L3 16 12 - Đồ án tốt nghiệp B.5 KẾT QUẢ KHÁNG KHUẨN CỦA ĐỐI CHỨNG CIPROFLOXACIN ĐỐI VỚI CÁC CHỦNG VI SINH VẬT CHỈ THỊ STT Escherichia coli O157:H7 Escherichia coli 0208 Escherichia coli (K) Enterotoxigenic E.coliETEC Listeria innocua Listeria monocytogenes Salmonella dublin Salmonella enteritidis Salmonella typhi (K) Salmonella typhimurium Shigella boydii Shigella flexneri Shigella sonnei Vibrio alginolyticus Vibrio cholerae Vibrio harveyi Vibrio parahaemolyticus Pseudomonas (K) Staphylococcus aureus Enterococcus feacalis u iệ il Tà L3 13.5 12.5 13.5 31.5 0 0 0 0 15 16.5 13 17.5 11.5 0 12.5 12.5 13 12.5 12.5 11 13.5 32.5 34 22 33.5 28.5 12.5 12.5 12.5 0 0 0 0 14.5 16 13 18 11.5 0 0 0 0 0 15.5 16 14 18.5 11 0 CH TE U H 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Chủng Ciprofloxacin µg/ml 500 µg/ml L1 L2 L3 L1 L2 0 13 13 0 12.5 12 0 13 13 0 30.5 31 11.5 12 12 13.5 13 11 13 33.5 34 22.5 32.5 28 12.5 12 12 12 12 11.5 13 12 11 13 33 34.5 22.5 33 28 11.5 12 11.5 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC C: XỬ LÝ THỐNG KÊ KẾT QUẢ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CÁC LOẠI CAO CHIẾT TỪ CÂY ELEPHANTOPUS SP C.1 Xử lý thống kê kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết từ Elephantopus sp nhóm Escherichia coli C.1.1 Xử lý thống kê kết hoạt tính kháng khuẩn chủng E coli O157:H7 ANOVA Table for DK vong KK by Dung moi Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 166.067 41.5167 Within groups 0.833333 10 0.0833333 Total (Corr.) 166.9 14 F-Ratio 498.20 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for DK vong KK by Dung moi Tà u iệ il Method: 95.0 percent Tukey HSD Dung moi Count Mean Homogeneous Groups Ethanol 50 6.0 X Nuoc 6.0 X Ethanol 90 6.0 X Ethanol 70 12.1667 X Ciprofloxacin 13.3333 X CH TE U H C.1.2 Xử lý thống kê kết hoạt tính kháng khuẩn chủng E coli ANOVA Table for dkinh by dung moi Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 183.767 45.9417 Within groups 4.66667 10 0.466667 Total (Corr.) 188.433 14 F-Ratio 98.45 P-Value 0.0000 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests for dkinh by dung moi Method: 95.0 percent Tukey HSD dung moi Count Mean Homogeneous Groups X ethanol 90 6.0 X nuoc 6.0 X ethanol 50 12.5 cipro 13.3333 X X ethanol 70 13.5 C.1.3 Xử lý thống kê kết hoạt tính kháng khuẩn chủng Lis Innocua u iệ il Tà ANOVA Table for duong kinh kk by Dung moi Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 133.6 33.4 250.50 0.0000 Within groups 1.33333 10 0.133333 Total (Corr.) 134.933 14 U H Multiple Range Tests for duong kinh kk by Dung moi CH TE Method: 95.0 percent Tukey HSD Dung moi Count Mean Homogeneous Groups ethanol 50 6.0 X nuoc 6.0 X ethanol 90 6.0 X ethanol 70 11.8333 X cipro 12.3333 X Đồ án tốt nghiệp C.1.4 Xử lý thống kê kết hoạt tính kháng khuẩn chủng Pseudomonas ANOVA Table for dkkk by Dung moi Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 133.733 33.4333 111.44 Within groups 3.0 10 0.3 Total (Corr.) 136.733 14 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for dkkk by Dung moi iệ il Tà Method: 95.0 percent Tukey HSD Dung moi Count Mean Homogeneous Groups X Ethanol 90 6.0 X Nuoc 6.0 X Ethanol 50 11.6667 X Ethanol 70 11.8333 X Ciprofloxacin 12.6667 u C.1.5 Xử lý thống kê kết hoạt tính kháng khuẩn chủng S dublin H U ANOVA Table for dkkk by dung moi Source Sum of Squares Df Between groups 247.067 Within groups 1.83333 10 Total (Corr.) 248.9 14 CH TE Mean Square F-Ratio P-Value 61.7667 336.91 0.0000 0.183333 Multiple Range Tests for dkkk by dung moi Method: 95.0 percent Tukey HSD dung moi Count Mean Homogeneous Groups X Nuoc 6.0 X Ethanol 70 6.0 X Ciprofloxacin 12.3333 X Ethanol 50 14.0 X Ethanol 90 15.6667 C.1.6 Xử lý thống kê kết hoạt tính kháng khuẩn chủng Shi flexneri ANOVA Table for Dkkk by Dung moi Đồ án tốt nghiệp Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 290.733 1.5 292.233 Df Mean Square F-Ratio P-Value 10 14 72.6833 0.15 484.56 0.0000 Multiple Range Tests for Dkkk by Dung moi Method: 95.0 percent Tukey HSD Dung moi Count Mean Ethanol 90 6.0 Ethanol 50 6.0 Nuoc 12.1667 Ciprofloxacin 13.3333 Ethanol 70 17.3333 Homogeneous Groups X X X X X Tà u iệ il C.1.7 Xử lý thống kê kết hoạt tính kháng khuẩn chủng V alginolyticus CH TE U H ANOVA Table for dkkk by Dung moi Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1666.73 416.683 2777.89 0.0000 Within groups 1.5 10 0.15 Total (Corr.) 1668.23 14 Multiple Range Tests for dkkk by Dung moi Method: 95.0 percent Tukey HSD Dung moi Count Mean Homogeneous Groups X Ethanol 90 6.0 X Nuoc 6.0 Ethanol 50 10.3333 X X Ethanol 70 13.1667 X Ciprofloxacin 34.3333 10 Đồ án tốt nghiệp C.1.8 Xử lý thống kê kết hoạt tính kháng khuẩn chủng V cholerae ANOVA Table for Dkkk by Dung moi Source Sum of Squares Df Between groups 630.4 Within groups 1.33333 10 Total (Corr.) 631.733 14 Mean Square F-Ratio 157.6 1182.00 0.133333 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for Dkkk by Dung moi il Tà Method: 95.0 percent Tukey HSD Dung moi Count Mean Homogeneous Groups X Ethanol 50 6.0 X Nuoc 6.0 X Ethanol 90 6.0 X Ethanol 70 11.6667 X Ciprofloxacin 22.6667 u iệ C.1.9 Xử lý thống kê kết hoạt tính kháng khuẩn chủng V harveyi CH TE U H ANOVA Table for dkkk by Dung moi Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 1525.73 381.433 1907.17 Within groups 2.0 10 0.2 Total (Corr.) 1527.73 14 Multiple Range Tests for dkkk by Dung moi Method: 95.0 percent Tukey HSD Dung moi Count Mean Homogeneous Groups X Ethanol 50 6.0 X Nuoc 6.0 X Ethanol 90 11.6667 X Ethanol 70 15.6667 X Ciprofloxacin 33.3333 11 P-Value 0.0000 Đồ án tốt nghiệp C.1.10 Xử lý thống kê kết hoạt tính kháng khuẩn chủng V parahaemolyticus ANOVA Table for dkkk by Dung moi Source Sum of Squares Df Between groups 1201.6 Within groups 0.833333 10 Total (Corr.) 1202.43 14 Mean Square F-Ratio P-Value 300.4 3604.80 0.0000 0.0833333 Multiple Range Tests for dkkk by Dung moi u iệ il Tà Method: 95.0 percent Tukey HSD Dung moi Count Mean Homogeneous Groups X Ethanol 50 6.0 X Nuoc 6.0 X Ethanol 90 6.0 Ethanol 70 17.3333 X X Ciprofloxacin 28.3333 CH TE U H 12 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC D: CÁC THUỐC THỬ DÙNG TRONG ĐỊNH TÍNH THÀNH PHẦN HĨA HỌC CÁC LOẠI CAO CHIẾT TỪ CÂY ELEPHANTOPUS SP D.1 Các thuốc thử dùng định tính thành phần carbohydrate - Thuốc thử Molisch: hòa tan 5g α- napthol vào ethanol 95% pha loãng thành 100 ml - Fehling A: hòa tan 34,6 g CuSO4.5H2O vào 500ml nước cất - Fehling B: hòa tan 125g KOH 173g Kali Natri tartrate.7H2O vào 500 ml nước cất - Barfoed: cho 10 ml acid acetic glacial vào 1000ml nước cất, thêm 66,5 g il Tà Copper (II) acetate monohydrate, đun khuấy đến tan hoàn toàn u iệ D.2 Các thuốc thử dùng định tính thành phần alkaloid H - Mayer: hịa tan 1,358g HgCl2 60ml nước, sau đổ vào dung TE U dịch g KI pha 10ml nước, định mức lên 100 ml CH - Dragendoff: gồm dung dịch: dung dịch A: hòa tan 0,5 g Bismuth nitrate (Bi(NO3)3.5H2O) 20 ml acid acetic 20%; dung dịch B: dung dịch KI 40% pha nước Khi sử dụng, trộn 20 ml dung dịch A với ml dung dịch B 70ml nước - Hager: hòa tan g acid picric vào 100ml nước cất - Wagner: hòa tan 2g iodine 6g KI vào 100ml nước cất D.3 Thử nghiệm định tính thành phần amino acid Thử nghiệm Ninhydrin: 0,5 g bổ sung 10 ml n- butanol Gia nhiệt 70 – 800C, khuấy cá từ tan hoàn toàn Định mức n – butanol lên 100 ml 13