Đồ án tốt nghiệp cải thiện điều kiện nuôi cấy serratia marcescens sh1 và phương pháp thu hồi sắc tố prodigiosin từ canh trường

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH H ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP o C hi M h in Đề tài “CẢI THIỆN ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY SERRATIA MARCESCENS SH1 VÀ PHƯƠNG PHÁP THU HỒI SẮC TỐ PRODIGIOSIN TỪ CANH TRƯỜNG” ity C ve ni U CÔNG NGHỆ SINH HỌC ity rs Ngành: Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC of gy lo no ch Te Giảng viên hướng dẫn : TS Nguyễn Hoài Hương Sinh viên thực MSSV: 1151100246 : Hồ Thị Bích Phương Lớp: 11DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2015 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi đƣợc thực phịng thí nghiệm khoa Cơng nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trƣờng, trƣờng đại học Công nghệ TP.Hồ Chí Minh Các số liệu kết trung thực, chƣa công bố Tôi xin chịu hồn tồn trách nhiệm lời cam đoan trƣớc quý thầy cô H nhà trƣờng o C Tp Hồ Chí Minh, tháng 8, năm 2015 hi h in M Sinh viên thực ity C U ity rs ve ni Hồ Thị Bích Phƣơng of gy lo no ch Te Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Tận đáy lòng xin gửi vạn lời cảm ơn đến cha mẹ, cha mẹ gian lao nuôi dạy thành ngƣời ngƣời thầy đầu đời Cha mẹ chỗ dựa vững con, ngƣời giúp đứng vững sau lần vấp ngã, nguồn động viên, động lực để tiếp tục phấn đấu sống H Với lòng biết ơn sâu sắc Em xin chân thành cảm ơn tồn thể q Thầy Cơ Khoa o C Cơng nghệ sinh học – Môi trƣờng – Thực phẩm, tồn thể Thầy Cơ Trƣờng Đại hi học Cơng nghệ TP Hồ Chí Minh nhiệt tình giảng dạy truyền đạt cho em M giảng đƣờng đại học h in kiến thức quý báu sở ngành nhƣ chuyên ngành từ ngày em bƣớc chân vào C ity Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn Nguyễn Hồi Hƣơng ngƣời ln tận rs ve đồ án ni U tình dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành phần thực nghiệm ity Em xin chân thành cảm ơn thầy Huỳnh Văn Thành thầy Nguyễn Trung Dũng of tạo điều kiện thuận lợi cho em thực đồ án phịng thí nghiệm Khoa Cơng lo no ch Minh Te nghệ sinh học - Môi trƣờng – Thực phẩm, Trƣờng Đại học Cơng nghệ TP Hồ Chí Cảm ơn tất bạn lớp 11DSH04 bạn làm đồ án phịng thí nghiệm gy Khoa Cơng nghệ sinh học - Môi trƣờng – Thực phẩm ln khích lệ, động viên giúp đỡ suốt trình học tập trƣờng trình làm đồ án tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn! TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2015 SVTH: Hồ Thị Bích Phƣơng Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi MỤC LỤC BẢNG viii H LỜI MỞ ĐẦU o C CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 12 hi in M 1.1 Tổng quan hợp chất thứ cấp từ vi sinh vật 12 h 1.1.1 Hợp chất thứ cấp 12 C ity 1.1.2 Triển vọng tiềm sản xuất hợp chất thứ cấp từ vi sinh vật 12 U Tổng quan prodigiosin 15 ve ni 1.2 1.2.1 Khái niệm prodigiosin 15 rs ity 1.2.2 Cấu trúc đặc điểm prodigiosin 16 of 1.2.3 Hoạt tính sinh học prodigiosin 18 Te ch 1.3 Tổng quan Serratia marcescens 24 lo no 1.3.1 Phân loại Serratia marcescens 24 gy 1.3.2 Đặc điểm Serratia marcescens 25 1.3.4 Một số hợp chất đƣợc tổng hợp Serratia marcescens 29 1.3.5 Tổng quan quorum sensing S marcescens 31 1.4 Cơ chế sinh tổng hợp prodigiosin 32 1.4.1 Cơ chế tổng hợp prodigiosin 32 1.4.2 Yếu tố ảnh hƣởng đến tổng hợp prodigiosin 34 i Đồ án tốt nghiệp 1.4.3 Điều kiện tổng hợp prodigiosin 38 1.4.4 Thu nhận, tinh định lƣợng prodigiosin 39 1.5 Tiềm sản xuất prodigiosin Serratia marcescens 42 CHƢƠNG VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU45 2.1 Thời gian địa điểm 45 H o 2.1.1 Thời gian 45 C hi 2.1.2 Địa điểm 45 M h in 2.2 Vật liệu 45 ity C 2.2.1 Nguồn vi sinh vật 45 2.2.2 Mơi trƣờng ni cấy hóa chất sử dụng 45 U ve ni 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 46 ity rs 2.4 Bố trí thí nghiệm 47 2.5.1 Khảo sát chủng nuôi cấy 49 of Te 2.5.1 Kiểm tra độ khiết 49 lo no ch 2.5.2 Kháng sinh đồ 49 2.6 Xác định điều kiện lên men 49 gy 2.7.1 Khảo sát vận tốc lắc nuôi cấy 52 2.7.2 Xác định pH tối ƣu cho môi trƣờng lên men 53 2.7.3 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ muối NaCl 53 2.7.4 Khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp đồng nuôi cấy 54 2.7.5 Khảo sát ảnh hƣởng sản phẩm Quorum sensing 55 2.8 Thu hồi sản phẩm thô 56 ii Đồ án tốt nghiệp 2.8.1 Xác định tỷ lệ trích ly dung mơi đồng thời khảo sát thể tích lên men 56 2.8.2 Cải thiện q trình trích ly nhờ gia tăng nhiệt độ 56 2.9 Các phƣơng pháp phân tích 56 2.9.1 Xác định protein có mẫu 57 2.9.2 Xác định lipid có mẫu 57 H o 2.10 Sắc ký mỏng TLC 57 C 2.11 Phƣơng pháp phân tích 59 hi in M 2.11.1 Phƣơng pháp định lƣợng hợp chất prodigiosin 59 h 2.11.2 Phƣơng pháp xử lý số liệu thống kê 59 C ity Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 60 U ve ni 3.1 Kết kiểm tra độ khiết 60 ity rs 3.2 Xác định điều kiện lên men thu prodigiosin 65 3.2.1 Ảnh hƣởng thể tích lên men lên hàm lƣợng prodigiosin tổng hợp 65 of Te 3.2.2 Xác định vận tốc lắc 67 lo no ch 3.2.3 Kết xác định pH tối ƣu cho môi trƣờng MT3 69 3.2.4 Ảnh hƣởng nồng độ muối lên hàm lƣợng prodigiosin tổng hợp 71 gy 3.2.5 Kết thí nghiệm đồng ni cấy 73 3.2.6 Sử dụng dịch nuôi cấy 76 3.3 Thu hồi sản phẩm lên men từ canh trƣờng 77 3.3.1 Ảnh hƣởng tỷ lệ canh trƣờng: dung mơi trích ly lên hàm lƣợng prodigiosin thu hồi 77 3.3.2 Cải thiện trình trích ly nhờ gia nhiệt canh trƣờng 78 iii Đồ án tốt nghiệp 3.4 Xác định thành phần hóa học mẫu 84 3.4.1 Phản ứng Biuret’s test 84 3.4.2 Xác định lipid có mẫu 86 3.5 Sắc ký mỏng TLC 88 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 91 Kết luận 91 o C Kiến nghị 92 hi 4.2 H 4.1 M h in TÀI LIỆU THAM KHẢO 93 ity C PHỤ LỤC ity rs ve ni U of gy lo no ch Te iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT EPN: Entomopathogenic nematodes OD: mật độ quang (Optical Density) λmax : bƣớc sóng hấp thụ cực đại H TLC: Thin Layer Chromatogarphy o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Các chất đại diện prodigiosin (Furstner, 2003) 19 Hình 1.2 Cấu trúc hóa học prodigiosin (Krishna,2008) 20 H Hình 1.3 Cơ chế kháng tế bào ung thƣ prodigiosin (Chia-Che cộng sự,2011) 23 o C Hình 1.4 Serratia marcescens dƣới kính hiển vi (Gillen and Gibbs, 2011) 29 hi in M Hình 1.5 Khuẩn lạc Serratia marcescens môi trƣờng nutrient agar 250C sau 48 (David, 2012) 28 h C ity Hình 1.6 So sánh cụm sinh tổng hợp prodigiosin (cụm pig) tử Serratia ATCC U 39.600, Sma 274 cụm sunh tổng hợp undecylprodigiosin (cụm màu đỏ) tử ve ni Streptomyces coelicolor A3(2) (Cerdeno cộng sự, 2001) 35 ity rs Hình 1.7 Một số yếu tố ảnh hƣởng đến trình sinh tổng hợp prodigiosin Serratia marcescens (Sundaramoorthy cộng sự, 2009) 37 of ch Te Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 51 Hình 2.2 Sơ đồ trích ly 54 lo no Hình 2.3 Cách chuẩn bị giấy chạy sắc ký 61 gy Hình 3.1 Khuẩn lạc chủng SH1 nuôi cấy môi trƣờng NA 63 Hình 3.2 Hình thái khuẩn lạc soi thằng soi nghiêng dƣới kính hiển vi vật kính 10X 64 Hình 3.3 Kết nhuộm Gram chủng SH1 65 Hình 3.4 Kết kháng kháng sinh chủng SH1 65 vi Đồ án tốt nghiệp Hình 3.5 Ảnh hƣởng thể tích lên men lên hàm lƣợng prodigiosin tổng hợp 69 Hình 3.6 Hàm lƣợng prodigiosin thay đổi vận tốc lắc 71 Hình 3.7 Ảnh hƣởng pH lên tổng hợp prodigiosin S marcescens SH1 73 Hình 3.8 Kết hàm lƣợng prodigiosin bổ sung NaCl 75 H Hình 3.9 Đồng ni cấy Serratia marcescens SH1 Bacillus sp 77 o C Hình 3.10 Kết đồng nuôi cấy E coli 78 hi M Hình 3.11 Hàm lƣợng prodigiosin thu hồi sau trích ly nhờ tỷ lệ canh trƣờng: dung môi h in khác 81 ity C Hình 3.12 Canh trƣờng sau ly tâm 82 ni U Hình 3.13 Sắc tố đỏ sau trích ly với dung mơi Etanol:HCl (95:5) 83 rs ve Hình 3.14 Vi khuẩn S marcescens đƣợc cấy môi trƣờng NA 84 ity Hình 3.15 Hàm lƣợng prodigiosin so với đối chứng 85 of Hình 3.16 Kết quét quang phổ sắc tố canh trƣờng không đun đun 1000C 86 Te lo no ch Hình 3.17 Biuret’s test dịch sau ly tâm dịch trích ly prodigiosin thơ 87 Hình 3.18 Ninhydrin test dịch sau ly tâm dịch trích ly prodigiosin thơ gy thí nghiệm đun khơng đun canh trƣờng 88 Hình 3.19 Kết mẫu phản ứng Coomassie brilliant blue trƣớc sau phun thuốc thử 90 Hình 3.20 Kết sắc ký mỏng sử dụng hệ dung môi Petrolium ether: Ether : Acetic acid (70 : 40 : 2, v : v :v) 92 Hình 3.21 Sơ đồ quy trình S marcescens SH1 tổng hợp prodigiosin 93 vii Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC ĐƢỜNG CHUẨN SẮC TỐ Đƣờng chuẩn Sắc tố 0.4 y = 1.100x + 0.004 R² = 0.999 0.35 H 0.3 o 0.25 C hi 0.2 M 0.15 in O D 53 h 0.1 C 0.05 ity 0.05 0.1 U 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 ni ity rs ve Nồng độ sắc tố (mg/ml) of lo no ch Ảnh hƣởng pH đến hàm lƣợng sắc tố Te PHỤ LỤC SỐ LIỆU THỐNG KÊ ANOVA Table for Prodigiosin by pH gy Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 2.4576 2.4576 Within groups 0.193979 0.0484949 50.68 0.0021 Đồ án tốt nghiệp Total (Corr.) 2.65158 Summary Statistics for Prodigiosin pH Count Average Standard Coeff of Minimum Maximum Range deviation variation H o 7.2 3.3012 0.19277 3.1055 3.4909 0.3854 0.244601 12.1017% 1.7763 2.2655 0.4892 1.7763 3.4909 1.7146 C 5.83939% hi 2.0212 in M không chỉnh h 2.6612 0.728228 27.3646% ity C Total ni U rs ve Multiple Range Tests for Prodigiosin by pH Method: 95.0 percent LSD ity Count of pH Homogeneous Groups không chỉnh 2.0212 X 7.2 3.3012 X gy lo no ch Te Mean Khảo sát ảnh hƣờng nồng độ muối NaCl Summary Statistics for Prodigiosin % NaCl Count Averag Standard Coeff e of Minimum Maximum Range Stnd deviation variation skewness Đồ án tốt nghiệp 12.103 0.750165 6.19816% 11.3091 12.8 1.4909 -0.4044 1% 18.460 2.53651 13.7402% 15.5454 20.1636 4.6182 -1.1733 2% 12.987 4.71475 36.3012% 8.0727 17.4727 9.4 3% 7.7454 3.82559 49.3915% 4.6909 12.0363 7.3454 0.9209 38.0596% 4.6909 20.1636 15.472 -0.0849 H 0% -0.2880 o C 12.824 4.88085 hi Total 12 M h in ANOVA Table for Prodigiosin by % NaCl C Sum of Squares Df ity Source U P-Value 58.1094 0.0264 5.30 87.7213 Total (Corr.) 262.049 11 10.9652 ity Within groups rs ve ni Between groups 174.328 Mean Square F-Ratio of lo no ch Te Multiple Range Tests for Prodigiosin by % NaCl Method: 95.0 percent LSD gy % NaCl Count Mean Homogeneous Groups 3 7.74543 X 12.103 X Đồ án tốt nghiệp 12.9879 XX 18.4606 X Đồng nuôi cấy S marcescens Bacillus subtilis tỷ lệ S/B 2:1 ANOVA Table for Prodigiosin by đồng nuôi cấy H o C Source Sum of Df P-Value 0.101873 0.8848 hi Mean Square F-Ratio Squares in M h Between groups 0.101873 0.02 Total (Corr.) 17.1979 4.27399 Summary Statistics for Prodigiosin ity rs ve ni U 17.096 ity C Within groups of m um skewness lo no S/B 2:1 deviation variation ch cay of Minimu Maxim Range Stnd Te dong nuoi Count Average Standard Coeff 7.53333 1.71541 22.7709% 5.9091 9.3273 3.4182 0.31176 Đối chứng 7.79403 2.36773 30.3787% 5.9818 10.473 4.4912 1.00872 Total 7.66368 1.8547 10.473 4.5639 0.76131 gy 24.2011% 5.9091 Đồng nuôi cấy S marcescens Bacillus subtilis tỷ lệ S/B 1:1, S/B 1:2 Summary Statistics for Prodigiosin Đồ án tốt nghiệp NT Count Average Standard deviation Coeff of Minimum Maximum Rang Stnd variation e skewness 16.8545 7.40232 43.9189% 9.05455 23.7818 14.72 -0.36993 1:2 17.4273 9.00178 51.6534% 7.03636 22.8545 15.81 -1.22109 26.0818 13.2061 50.6335% 11.6727 37.6091 25.93 -0.6613 49.0997% 7.03636 37.6091 30.57 0.38955 o ĐC H 1:1 C hi 20.1212 9.87946 h in M Total ity C ANOVA Table for prodigiosin by nghiệm thức Sum of Squares Df Mean Square Between groups 160.372 80.1859 Within groups 620.458 103.41 Total (Corr.) 780.829 F-Ratio P-Value 0.78 0.5017 ity rs ve ni U Source of gy Method: 95.0 percent LSD NT Count Mean Homogeneous Groups 1:1 16.8545 lo no ch Te Multiple Range Tests for prodigiosin by nghiệm thức X Đồ án tốt nghiệp 1:2 17.4273 X DC 26.0818 X Sử dụng dịch trong nuôi cấy ANOVA Table for prodigiosin by nghiệm thức H o C Source Sum of Squares Df F-Ratio P-Value 1.24992 0.01 96.5702 hi Mean Square M Between groups 2.49983 0.9872 h in 579.421 Total (Corr.) 581.921 ity C Within groups U ve ni ity rs Table of Means for PRO by NT with 95.0 percent LSD intervals Count Mean DC 26.0818 5.67363 ch Stnd error (pooled s) Lower limit Upper limit 35.8985 E coli 26.7182 5.67363 16.9015 36.5349 S 27.3727 5.67363 17.556 26.7242 of NT Te 16.2651 gy lo no marcescens Total Multiple Range Tests for Prodigiosin by nghiệm thức 37.1894 Đồ án tốt nghiệp NT Count Mean Homogeneous Groups DC 26.0818 X Dịch 26.7182 X nuôi H o C cấy E hi coli 27.3727 X h in M Dịch C ity S U ve ni marces cens ity rs of Xác định vận tốc lắc of Df Mean Squares P-Value 8.89 0.0161 Square Between groups 48.365 24.1825 Within groups 2.72145 16.3287 F-Ratio 10 gy Sum lo no ch ANOVA Table for Prodigiosin by TN Source Te So sánh kết thí nghiệm với Đồ án tốt nghiệp Total (Corr.) 64.6937 Multiple Range Tests for Prodigiosin by TN Method: 95.0 percent LSD TN Count Mean Homogeneous Groups H o 5.185 X C TNC hi M 8.8848 TNA 10.7653 X h in TNB ity C X U Summary Statistics for Prodigiosin of Minimum Maximum Range ity deviation Coeff rs Count Average Standard ve ni TN variation of 8.376 TNB 8.8848 1.42031 15.9859% TNC 5.185 1.33464 25.7405% 3.736 Total 8.27838 2.84372 34.3511% 3.736 11 3.874 7.2545 9.8545 2.6 lo no Summary Statistics for Prodigiosin 12.25 gy 19.409% ch 10.7653 2.08945 Thí nghiệm xử lý nhiệt canh trƣờng Te TNA 6.364 2.628 12.25 8.514 Đồ án tốt nghiệp NT DC Count Average Standard DUN Coeff of Minimum Maximum Range variation 10.168 4.34639 42.7458% 6.291 14.8 8.509 26.15 5.89949 22.5602% 18.655 33.054 14.399 18.159 9.79748 53.9538% 6.291 33.054 26.763 H deviation o Total C hi Sum of Df Mean Squares F-Ratio P-Value 19.03 0.0048 Square ity C Source h in M ANOVA Table for Prodigiosin by NT ni U 510.849 Within groups 161.085 26.8475 Total (Corr.) 671.934 ity rs ve Between groups 510.849 of gy lo no Method: 95.0 percent LSD ch Te Multiple Range Tests for Prodigiosin by NT NT Count Mean Homogeneous Groups DC 10.16 X 12 Đồ án tốt nghiệp DUN 26.15 X PHỤ LỤC BẢNG Bảng Tiêu chuẩn biện luận kháng sinh đồ theo Enterobacteriaceae Tiêu chuẩn biện luận kháng sinh đồ theo Enterobacteriaceae Ký H Kháng sinh S I Hàm lƣợng R o Đĩa C hiệu ≥ 17 14 – 16 ≤ 13 10μg Ge ≥ 15 13 – 14 ≤ 12 10 μg Cu ≥ 18 15 – 17 ≤ 14 30 μg Cn ≥ 18 15 – 17 ≤ 14 30 μg Cefotaxime Ct ≥ 26 23 – 25 ≤ 22 30 μg Amoxicillin-clavulanic Ac 14 – 17 ≤ 13 20 μg /10 μg 15 – 16 ≤ 14 30 μg ≤ 17 100 μg /10 μg ≤ 15 μg hi Am Ampicillin h Cefuroxime in M Gentamicin ity C Cefoxitin ni U Amikacin Ak ≥ 17 Piperacillin/tazobactam Pt ≥ 21 of ity rs ve acid ≥ 18 Ciprofloxacin Ci ≥ 21 16 – 20 Ertapenem En ≥ 22 19 – 21 Ceftazidime Cz ≥ 21 18 – 20 Chloramphenicol Cl ≥ 18 13 – 17 ≤ 12 Imipenem Im ≥ 23 20 – 22 ≤ 19 10 μg Trimethoprim / Bt ≥ 16 11 – 15 ≤ 10 1.25 μg 18 – 20 ch Te 10 μg ≤ 17 30 μg gy lo no ≤ 18 30 μg /23.75 μg sulfamethoxazole Cefepime Cm ≥ 18 15 – 17 ≤ 14 30 μg Tetracycline Te ≥ 15 12 – 14 ≤ 11 30 μg 13 Đồ án tốt nghiệp Bảng Đánh giá nồng độ oxy hòa tan Nồng độ O2 Đánh giá H Nguy hiểm, oxy nƣớc không đủ cho cá, tôm o mg/l C Nƣớc đủ oxy cung cấp ch0 cá, tôm hi mg/l h in M -8 mg/l Tốt, nƣớc có nhiều oxy ity C Bảng Hàm lƣợng prodigiosin thu hồi trích ly tỷ lệ canh trƣờng:dung môi U ve ni (mg/ ml canh trƣờng) quy mô lên men khác Tỷ lệ canh trƣờng: men 20 ity rs A (thể tích lên B (thể tích lên C (thể tích ml/ men 200 ml/ lên men 400 of bình) bình) Tỷ lệ 2:3 8,4 7,3 Tỷ lệ 1:2 12,3 9,9 Tỷ lệ 2:5 11,7 9,5 ml/ bình) 3,7 lo no 6,4 gy 14 ch Te dung môi 5,5 Đồ án tốt nghiệp Bảng Kết hàm lƣợng prodigiosin đồng nuôi cấy S marcescens SH1 với Bacillus sp Đối chứng S/B = 2:1 Nghiệm thức Đối chứng S/B = 1:1 26,1 ± 13,2 (a) 16,9 ± 7,4 17,4 ± 9,0 S/B = 1:2 H o lƣợng 7,8 ± 2,4(a) C Hàm 7,5 ± 1,7 (a) hi prodigiosin tổng (a) (a) h trƣờng) in M hợp (mg/ml canh prodigiosin 100 ity C % ± 96,7 ± 22 % 64,6 28,4 % PHỤ LỤC HÌNH ẢNH ity rs ve ni đối chứng (%) U tổng hợp so với 30,4% 100 ± 50,6 % of gy lo no ch Te Thí nghiệm đo oxy hòa tan DO 15 ± 66,8 34,5% ± Đồ án tốt nghiệp Hình Chai DO chứa canh trƣờng MT3 thí nghiệm đo oxy hịa tan H o C hi h in M Hình Mẫu đo oxy hòa tan lên men 24h lắc 200 vòng/phút ity C Môi trƣờng PG; 2.Môi trƣờng MT3 ity rs ve ni U of gy lo no ch Te Canh trƣờng MT3 (6 mg/l) Mơi trƣờng PG (4 mg/l) Hình Đo oxy hòa tan sử dụng kit đo oxy hòa tan bán sẵn thị trƣờng Thí nghiệm đồng ni cấy S marcescens Bacillus subtilis 16 Đồ án tốt nghiệp H o C hi h in M C A.Đối chứng; B S/B = 1:1; C S/B = 1:2 ity A Đối chứng; B Nghiệm thức S/B = 2:1 U ve ni Hình Thí nghiệm lên men đồng ni cấy S marcescens SH1 với Bacillus sp ity rs Thí nghiệm ni cấy có bổ sung dịch S marcescens SH1 E coli of gy lo no ch Te Hình Sử dụng dịch trong ni cấy 17 Đồ án tốt nghiệp A Đối chứng; B Dịch S marcescens; C Dịch loại bỏ tế bào E coli H o C hi h in M ity C Hình Canh trƣờng đun 1000C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te 18