báo cáo thực hành độc chất học: thử nghiệm độc tính của atropin alkaloid codein strychnine Các phản ứng định tính alkaloid bằng các thuốc thử chung phải chuyển alkaloid từ dạng base sang dạng muối tan trong nước vì các thuốc thử chung alkaloid kém bền trong môi trường kiềm và alkaloid tạo tủa không tan với các thuốc thử trong môi trường trung tính hoặc acid yếu.
Khoa Dược THỰC TẬP ĐỘC CHẤT BÀI 2: CODEINE, STRYCHNINE, ATROPINE, QUININE I CÁC PHẢN ỨNG CHUNG CỦA ALKALOID Lưu ý: Các phản ứng định tính alkaloid thuốc thử chung phải chuyển alkaloid từ dạng base sang dạng muối tan nước thuốc thử chung alkaloid kém bền môi trường kiềm và alkaloid tạo tủa không tan với thuốc thử môi trường trung tính acid yếu PHẢN ỨNG VỚI THUỐC THỬ BOUCHARDAT a Nguyên tắc - Thuốc thử Bouchardat (I2-Iodine, KI, H2O) - Alkaloid cho tủa nâu periodur alkaloid với thuốc thử iod iodid (thuốc thử Bouchardat) Tủa periodur alkaloid tan rượu và dung dịch KI - Phản ứng nhạy trừ caffein cho màu đen không cho tủa, nicotin cho tủa vàng b Cách tiến hành 1ml dịch chiết ether chloroform Đun cách thủy Khô cắn 0.5 ml HCl 0.5% Dịch acid giọt TT Bouchardat Tủa nâu đen c Giải thích - Acid HCl 0.5% giúp hòa tan cắn và chuyển alkaloid dạng phân tử sang dạng muối - Thuốc thử bouchardat có chứa I2 tạo kết tủa periodur alkaloid với alkaloid có mặt KI Phức periodur alkaloid khơng tan có màu nâu d Kết - Hiện tượng: tủa màu nâu - Kết luận: dương tính PHẢN ỨNG VỚI THUỐC THỬ MAYER a Nguyên tắc - Thuốc thử Valse-Mayer (dung dịch muối kim loại nặng Hg dipotassium tetraiodomercurate- K2[HgI4]) - Các alkaloid cho với thuốc thử Mayer kết tủa iodid thủy ngân alkaloid có màu trắng hay vàng, kết tinh hay vơ định hình ether, cồn b Cách tiến hành 1ml dịch chiết ether chloroform Đun cách thủy Khô cắn 0.5 ml HCl 0.5% Dịch acid giọt TT Valse-Mayer Tủa vàng c Giải thích - Phản ứng xảy nguyên tử kim loại nặng (Hg) thuốc thử với nguyên tử nitrogen alkaloid tạo kết tủa iodid thủy ngân alkaloid có màu trắng vàng, kết tinh hay vơ định hình ether, cồn HgCl2 + 2KI -> HgI2 + 2KCl HgI2 + 2KI -> K2[HgI4] [HgI4]2- + [HNR3]+ -> [HNR3+]2.[HgI4]2- Phản ứng nhạy, kết tủa màu vàng phần lớn alkaloid nồng độ loãng, Solanin, d Kết trừ Caffein, Theobromin, với - Hiện tượng: tủa trắng - Kết luận: dương tính PHẢN ỨNG VỚI THUỐC THỬ DRAGENDORFF a Nguyên tắc - Thuốc thử Dragendorff (Bismuth nitrate, KI, H 2O) là dung dịch muối iodid kép bismuth và kali (KBiI4 – kali tetraiodobismutat III) Dùng để định tính amine bậc và vài amine bậc - Các alkaloid cho với thuốc thử Dragendorff kết tủa iodid bismuth alkaloid màu đỏ hay da cam, tan rượu và ether, bị phân hóa chất kiềm, NH4OH b Cách tiến hành 1ml dịch chiết ether chloroform Đun cách thủy Khô cắn 0.5 ml HCl 0.5% Dịch acid giọt TT Dragendorff Tủa cam c Giải thích - Phản ứng xảy nguyên tử kim loại nặng (Bi) thuốc thử Dragendorff với nguyên tử nitrogen alkaloid tạo kết tủa iodid bismuth alkaloid không tan có màu vàng cam đến đỏ BiI3+KI↔K[BiI4] – SPU [BiI4][HNR3]+n.[BiI4-]n + [HNR3]+ -> d Kết - Hiện tượng: tủa cam - Kết luận: dương tính II CODEIN Nguyên tắc - Que thử chân là dụng cụ thử màu để kiểm tra diện chất gây nghiện có nước tiểu MET (Methamphetamine): ma túy đá THC (Marijuana): cần sa MDMA (Methylenedioxymethamphetamine): Ecstasy, thuốc lắc MOP: morphine và chất thuộc nhóm morphin (heroin, codein, ) - Nguyên hoạt động que thử chân: Que thử phát sử dụng chất gây nghiện MOP nước tiểu là xét nghiệm sắc ký miễn dịch dựa vào nguyên lý phản ứng cạnh tranh Thuốc diện mẫu nước tiểu cạnh tranh với liên hợp thuốc vị trí gắn kết kháng thể Trong trình xét nghiệm, mẫu nước tiểu thấm lên dọc theo màng thấm kit thử nhờ mao dẫn MOP có mặt nước tiểu với nồng độ thấp 200ng/ml bão hoà vị trí gắn kết phần tử phủ kháng thể kit thử Những phần tử này bị bắt giữ sau liên hợp MOP bất động và hình thành vạch màu vùng kết (khu vực T) Vạch màu khơng hình thành vùng kết mức độ MOP từ 200ng/ml trở lên bão hoà tất vị trí gắn kết kháng thể kháng MOP Nhằm mục đích kiểm tra quy trình thao tác xét nghiệm, vạch màu luôn xuất vùng chứng (khu vực C) để chứng tỏ lượng mẫu đủ và lớp màng thấm tốt Dương tính: có vạch ngang màu hồng ngang khu vực C Âm tính: có vạch ngang màu hồng khu vực C và T Kết - Hiện tượng: xuất vạch ngang màu hồng MOP, hai vạch ngang màu hồng MET, THC, MDMA - Kết luận: dương tính với codein III STRYCHNINE PHẢN ỨNG OTTO (OXY HĨA TRONG MƠI TRƯỜNG ACID SULFURIC ĐẬM ĐẶC a Nguyên tắc - Strychnine là alkaloid có nhân indol, vị trí N số có khả tạo muối với H2SO4 và bị oxy hóa kalidicromat (K2Cr2O7) Vài giọt dịch chiết chứa Strychnine Đun cách thủy Khô cắn b Cách tiến hành giọt H2SO4 (đđ) Dịch không màu Vài hạt Kali bicromat Dùng đũa kéo hạt K2Cr2O7 Vệt tímđỏ camvàng c Kết - Hiện tượng: kéo vệt hạt kali dichrommate có màu vàng - Kết luận: dương tính CÁCH GIẢI ĐỘC STRYCHNINE - Kiểm sốt đường thở và hơ hấp Suy hô hấp co cứng hô hấp: đặt nội khí quản, thở máy - Điều trị tình trạng tăng thân nhiệt và toan chuyển hóa có - Hạn chế kích thích lên bệnh nhân: tiếng động, ánh sáng, thăm khám - Điều trị co cứng cơ: Diazepam: 5-10 mg tiêm tĩnh mạch, lặp lại sau 5-15 phút đến kiểm soát giật Trẻ em liều 0,3-0,5 mg/kg Chú ý kiểm soát đường thở và hô hấp Midazolam: 0,1-0,3 mg/kg cân nặng tiêm tĩnh mạch chậm 20-30 giây, lặp lại cần Thiopental: 150-300 mg tiêm tĩnh mạch chậm (3-4 mg/kg cân nặng) thời gian 20-40 giây Có thể truyền tĩnh mạch liên tục liều không 2g/24 giờ Thuốc giãn cơ: trường hợp nặng dùng pancuronium 0,06 – 0,1 mg/kg Bệnh nhân cần đặt nội khí quản và thở máy dùng thuốc giãn - Các biện pháp hạn chế hấp thu: Rửa dày bệnh nhân uống số lượng nhiều chưa tới giờ có nguy ngộ độc cao Than hoạt: liều 1g/kg cân nặng, kèm sorbitol liều gấp đôi liều than hoạt Nếu bệnh nhân có co cứng toàn thân, nguy sặc cần đặt nội khí quản trước rửa dày - Các biện pháp tăng cường đào thải chất độc: Lọc máu ngắt quãng, lọc máu liên tục và lọc hấp phụ khơng có hiệu Than hoạt đa liều chưa nghiên cứu - Thuốc giải độc đặc hiệu: Chưa có thuốc giải độc đặc hiệu cho ngộ độc strychnine IV ATROPIN PHẢN ỨNG VITALI-MORIN a Nguyên tắc: - Atropin là alkaloid có amin bậc ba, hóa trị - Atropin bị cắt đứt liên kết ester (alkaloid) tạo tropic acid và tropine base cho phản ứng với HNO3 đậm đặc - Tropic acid tác dụng với acid HNO3 đậm đặc vịng thơm tropic acid gắn nhóm NO2 vào vị trí para (chất I) Ngoài ra, nhóm NO gắn vào vòng thơm phân tử alkaloid sinh 4-nitroatropin (II) - Các hợp chất nitro này có màu vàng.Hịa tan cắn hợp chất nitro với acetone sau tác dụng với KOH 0.1N methanol Cả hợp chất nitro đều cho màu tím đặc trưng tác dụng với kiềm mạnh, tạo anion mesomeri bền vững (III) b Cách tiến hành 5ml atropin Đun cách thủy Khô cắn giọt HNO3 đun cách thủy Cắn thật khô 3ml aceton, Vài giọt KOH 1/10N methanol Màu tím kém bền c Kết - Hiện tượng: màu tím kém bền - Kết luận: dương tính V QUININE Quinine là alkaloid canh ki na, có chứa nhân quinolein và nhân quinuclidin nối với chức rượu bậc Quinin cho kết tủa với phản ứng tổng quát alkaloid: Valse-Mayer, Dragendorff PHẢN ỨNG HUỲNH QUANG: a Nguyên tắc: - Dung dịch muối quinine tác dụng với oxy acid (H 2SO4) cho huỳnh quang xanh dương đèn UV 365nm Huỳnh quang này cho thêm halogen acid nước chlor, nước brom b Cách tiến hành 1ml dung dich quinine + H2SO4 0.1% Soi UV 365nm Dung dịch phát huỳnh quang xanh dương Dd HCl đậm đặc Dung dịch phát quang c Kết - Hiện tượng Khi cho dung dịch sulfuric 0,1% vào dung dịch quinine và soi đèn UV 365nm thấy phát huỳnh quang xanh dương Tiếp tục thêm 1ml HCl đậm đặc vào dung dịch quinine phát quang - Kết luận: dương tính VI CHIẾT XUẤT VÀ TÌM CHẤT ĐỘC TRONG MẪU a Cách tiến hành: - Giai đoạn 1: loại khỏi môi trường chất làm cản trở chiết xuất chất độc - Giai đoạn 2: chiết xuất chất độc môi trường kiềm - Giai đoạn 3: định danh chất độc Đun cách thủy 50ml dung dịch mẫu đến 2/3 thể tích Kiềm hóa mẫu thử NH4OH đậm đặc Lắc với 10ml ether Dịch chiết ether Lớp nước chia vào chén sứ thực phản ứng định danh độc chất Lớp nước chiết lại chloroform Lắc với 10ml CHCl3 Dịch Chloroform Thực phản ứng định danh độc chất b Định danh: Mẫu Chén 1: Tìm codein que thử chân Dương tính: mẫu Âm tính: mẫu 2, Chén 2: Tìm quinine phản ứng huỳnh quang, sắc kí lớp mỏng Phản ứng huỳnh quang: dung dịch acid sulfuric 0,1% quinine cho huỳnh quang xanh dương đèn UV 365nm Quinin chuẩn Mẫu Mẫu Mẫu - Hiện tượng: có mẫu phát huỳnh quang xanh dương, mẫu và mẫu không phát huỳnh quang xanh dương - Kết luận Dương tính: mẫu Âm tính: mẫu và mẫu Sắc kí lớp mỏng C C - Nhận xét: Vết di chuyển xéo, phát quang UV 365nm - Ta thấy, vết phát quang màu xanh mẫu chuẩn và mẫu có số Rf gần Rf==0.54 - Kết luận: mẫu và mẫu chuẩn có chứa quinine Chén 3: Tìm strychnin phản ứng OTTO - Hiện tượng: xuất vệt màu tím đỏ cam vàng ( dịch chiết lẫn tạp cho màu tím nâu đen xanh) Mẫu Mẫu Mẫu - Kết luận: mẫu 1, 2, dương tính Chén 4: Tìm atropin phản ứng Vitali- Morin (phải tìm strynine trước, khơng có strychnine tìm atropin) Cả mẫu đều chứa strychnine => khơng tiến hành tìm atropin c Kết luận - Mẫu 1: Chứa Strychnine, Codein - Mẫu 2: Chứa Strychnine, Quinine - Mẫu 3: Chứa Strychnine