Thông tin tài liệu
TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC & CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM BÁO CÁO THÍ NGHIỆM HÓA SINH Họ tên SV: Nguyễn Thị Thảo Lớp: KTTP – 02– K64 MSSV: 20190569 Mã lớp: 705035 Giảng viên hướng dẫn: TS Đỗ Biên Cương THS Lê Thị Huyền h h BÁO CÁO THÍ NGHIỆM BÀI : XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NITO TỔNG SỐ BẰNG PHƯƠNG PHÁP KJELDAHL I Nguyên tắc phương pháp Kjeldahl Khi đốt nóng phẩm vật đem phân tích với H2SO4 đậm đặc, hợp chất hữu bị xi hóa.Cácbon hidro tạo thành CO2 H2O cịn Nito giải phóng dạng NH3 kết hợp với H2SO4 tạo thành (NH4)2SO4 tan dung dịchH2SO4 Mẫu +H2SO4 CO2 + H2O +NH3 +SO2 NH3 +H2SO4 (NH4)2SO4 Đuổi NH3 khỏi dung dịch NaOH, đồng thời cất thu NH3 H3BO3 dư: (NH4)2SO4 + 2NaOH = 2NH3+2H2O +Na2SO4 2NH3 + 4H3BO3 = (NH4)2B4O7 + 5H2O Định phân lượng (NH4)2B4O7 H2SO4 chuẩn , qua dễ dàng tính lượng Nito có mẫu vật: (NH4)2B4O7 + H2SO4 = H3BO3 + (NH4)2SO4 Xanh Tím hồng Tím II Các bước thí nghiệm: Bước 1: Cất đạm: Mẫu thí nghiệm: - Chuẩn bị bình hấp thụ NH3: Cho vào bình tam giác (cỡ 100ml, miệng rộng): 20 ml H3BO3 3% (dùng ống đong) 2-3 giọt thị Tashiro Lắp bình vào cất đạm h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 -Cho vào bầu cất: ml NaOH 40% (dùng ống đong) ml H2O (để tráng phễu) (dùng micropipet) ml dịch vơ hóa mẫu (dùng micropipet hút dịch -Đóng khóa bầu cất -Tiến hành cất (khoảng 5-7 phút) Sau thấy dung dịch ình hấp thụ NH3 chuyển từ màu tím hồng thành màu xanh đợi khoảng phút Hạ bình, dùng giấy quỳ tím hứng giọt nước ngưng chảy từ ống sinh hàn Thấy giấy đổi màu, đặt bình hứng vào vị trí cũ Khi khơng thấy đổi màu, lấy bình hấp thụ khỏi cất, tia nước cất tráng đuôi ống sinh hàn Mẫu kiểm chứng: - Chuẩn bị bình hấp thụ NH3: Cho vào bình tam giác (cỡ 100 ml): 20 ml H3BO3 3% (dùng ống đong) 2-3 giọt thị Tashiro Lắp bình vào cất đạm (đuôi ống sinh hàn ngập dung dịch) - Cho vào bầu cất: ml NaOH 40% ( dùng ống đong) ml H2O (5 ml thay cho dịch vơ hóa) Đóng khóa bầu cất Bước 2: Định phân: Định phân lượng (NH4)2B4O7 tạo bình hấp thụ NH3 H2SO4 0,1N Ghi lượng H2SO4 0,1N dùng định phân cho mẫu thí nghiệm mẫu kiểm chứng 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 III Xử lí kết quả: Khối lượng mẫu ban đầu m=5g; Thể tích dịch vơ hóa mẫu: V=5 ml; Thể tích H2SO4 dùng cho mẫu thí nghiệm: V=4,75 ml; Thể tích H2SO4 dùng cho mẫu kiểm chứng: V=0,25 ml; Thể tích H2SO4 dùng để định phân mẫu: 4,75-0,25=4,5 ml; 1ml tiêu tốn cho định phân tương ứng cho 1,4mg Nito mẫu 4,5 ml H2SO4 định phân mẫu có 4,5*1,4=6,3 mg Vậy ml dung dịch vơ hóa mẫu có chứa 6,3 mg Nito 100 ml dung dich vơ hóa mẫu chứa : 6,3×100 = 126 mg =0,126 g Ni tơ Vậy mẫu Nitơ chiếm: 0,126×100 = 2,52 % IV Nhận xét kết quả: - Kết có sai lệch vì: -Khi đun vơ hóa mẫu dung dịch sơi bám thành bình khơng vơ hóa mẫu hồn tồn -Trong q trình cất đạm khí bị bay ngồi lắp đặt thiết bị bị lệch -Lượng H2SO4 đem hấp thụ dư không đủ lớn nên không hấp thụ triệt để lượng NH3 bay Các phương pháp giảm thiểu sai số: -Rửa cất đạm trước sử dụng mẫu thí nghiệm cịn sót lại cất -Khi cho hóa chất vào bình cất cần mở khóa van từ từ tránh mở đột ngột khiến áp suất thay đổi gây thất thoát đạm 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 -Khi đun lắc nhẹ vết đen trôi xuống dung dịch -Lắp thiết bị chắn, không bị nghiêng để khí khơng ngồi -Khi lắp bình hấp thụ ống sinh hàn phải ngập bình hấp thụ Nếu khơng NH3 bị thất ngồi mơi trường 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 BÁO CÁO THÍ NGHIỆM BÀI : XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN HÒA TAN BẰNG PHƯƠNG PHÁP LOWRY I Nguyên tắc: - Phương pháp dựa sở phản ứng tạo màu protein thuốc thử folin Cường độ màu hỗn hợp phản ứng tỷ lệ thuận với nồng độ protein phạm vi định Biết mật độ quang dung dịch protein nghiên cứu với thuốc thử folin, dựa theo đường chuẩn protein tinh khiết với thuốc thử này, dễ dàng tính hàm lượng protein mẫu nghiên cứu - Đây phương pháp nhạy xác, dùng phổ biến việc xác định protein Phương pháp dùng protein hòa tan - Bao gồm giai đoạn: + Phản ứng biure: Đây phản ứng đặc trưng liên kết peptide (CO- NH-) Trong môi trường kiềm, hợp chất có chứa từ hai liên kết peptide trở lên phản ứng với CuSO4 tạo thành phức chất màu xanh tím, tím, tím đỏ hay đỏ Cường độ màu thay đổi tùy thuộc vào độ dài mạch peptide + Phản ứng với thuốc thử folin: Thuốc thử folin có chứa axit phosphomolipdic axit phos-phovolframic Các chất mặt làm tăng độ nhạy phản ứng biure, mặt khác phản ứng với gốc Tyr Trp phân tử protein Các axitamin tham gia q trình tạo phức chất có màu xanh da trời, hấp thụ cực đại bước sóng 750 nm 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 - Đo mật độ quang OD Định luật Lamba – Beer A = OD = logIoI =εLC C : nồng độ chất hấp thụ ánh sáng (mg/ml , mmol/ml) L : chiều dày lớp dung dịch ε : hệ số hấp phụ phân tử ( đặc trưng cho loại chất) => OD = εLC = kC (k: const) => OD = f(C) => quan hệ tuyến tính -> xác định lượng protein thơng qua C II Các bước thí nghiệm: Chuẩn bị ống nghiệm sạch: Ống falcon Dung dịch BSA gốc (ml) Nước cất (ml) 0,2 0,4 0,6 0,8 1 0,8 0,6 0,4 0,2 Lấy vào ống nghiệm (khô, sạch): 0,2 ml dịch BSA pha (dùng micropipet) ml dung dịch C (hỗn hợp dung dịch A:B=50:1 pha) (dùng micropipet) Trộn Để yên 10 phút Cho tiếp 0,2 ml dung dịch Folin Trộn (bằng tay máy trộn Voltex) Để phản ứng 20 phút Đo độ hấp thụ dung dịch màu bước sóng 750nm với dung dịch đối sánh mẫu ống nghiệm Mẫu thí nghiệm: Mẫu thực phẩm xúc xích Chuẩn bị dịch protein phân tích - Dùng ống đong chuẩn bị 20 ml NaOH 0,1N vào cốc dung tích 100 ml - Cân xác 0,3 g mẫu; chuyển mẫu vào cối, cho dung dịch NaOH 0,1N từ cốc vào để làm ẩm - Nghiền nhuyễn mẫu; chuyển tồn mẫu vào bình tam giác dung tích 100 ml - Tráng cối chày dung dịch NaOH 0,1N cịn lại - Đặt bình mẫu vào nồi đun cách thuỷ để chiết protein 15 phút 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 - Lấy mẫu ra, làm nguội, trung hoà (tới pH 7) HCl 0,1N (dùng đũa thủy tinh chấm dịch lên miếng giấy thử pH so với dải màu chuẩn) - Chuyển mẫu sang bình định mức 100 ml, định mức nước cất tới vạch Trộn - Lọc trong, thu dịch lọc protein phân tích Tiến hành phản ứng đo độ hấp thụ Mẫu thí nghiệm: Lấy vào ống nghiệm (khơ, sạch): 0,2 ml dịch lọc protein (dùng micropipet) ml dung dịch C (hỗn hợp dung dịch A:B=50:1 pha) (dùng micropipet) Trộn Để yên 10 phút Cho tiếp 0,2 ml dung dịch Folin Trộn (bằng tay máy trộn Voltex) Để phản ứng 20 phút Mẫu kiểm chứng (làm song song với mẫu thí nghiệm ): Lấy vào ống nghiệm(khô,sạch): 0,2 ml H2O (dùng micropipet) ml dung dịch C (dùng micropipet) Trộn Để yên 10 phút Cho tiếp 0,2 ml dung dịch Folin Trộn (bằng tay máy trộn Voltex) Để phản ứng 20 phút Đo độ hấp thụ ánh sáng Đọc kỹ Hướng dẫn sử dụng máy đo quang PTN, SV đề nghị Kỹ thuật viên PTN hướng dẫn sử dụng máy Đo độ hấp thụ dung dịch màu ống thí nghiệm bước sóng 750 nm, với dung dịch đối sánh mẫu kiểm chứng Ghi kết Sử dụng đường chuẩn protein để tính hàm lượng protein dung dịch nghiên cứu 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 III Kết thí nghiệm: khối lượng mẫu xúc xích m=0,55 g Ống thí nghiệm Nồng độ protein Ci (mg/ml) OD750 nm MẪU 0,2 0,4 0,6 0,8 0,001 0,163 0,241 0,348 0,444 0,526 0,175 Xây dựng đường chuẩn: Từ đồ thị đường chuẩn ta có y = 0.5114x + 0.0313 với R^2 = 0.9878 Ta đo kết OD mẫu thí nghiệm y=0,175 từ tính được: x=(0,1750,0313)/0,5114=0,281mg/ml Từ thực nghiệm ml dịch lọc chứa 0,281 mg protein -> 100 ml dịch lọc chứa: 100*0,281=28,1 mg=0,0281 g; Vậy tỉ lệ phần trăm protein mẫu là: 0,0281/0,55=5.11% IV Nhận xét kết ý: Chuẩn bị dịch phân tích 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Khi cho dư I2 lúc dung dịch xuất màu xanh (với chất thị hồ tinh bột) Phương trình phản ứng: Chuẩn độ xuất màu xanh : lúc ta tính lượng I2, từ xác định nồng độ Vitamin C, cuối suy nồng độ DCIP CN( DCIP) × VDCIP = CN( vitamin C) × Vvitamin C = CN( KIO3) × VKIO3 CN( DCIP) = ? II Hóa chất cách tiến hành: Mẫu thí nghiệm: loại rau, hoa quả, mẫu vitamin Chuẩn bị 1.1 Dung dịch 2,6 DCIP (KTV PTN chuẩn bị) Xác định hệ số hiệu chỉnh nồng độ dung dịch 2,6 DCIP Bình tam giác (cỡ 50ml): ml dịch vitamin C tinh khiết (PTN pha sẵn) 2,5 ml Oxalatamon bão hồ Chuẩn 2,6 DCIP (phân tích) xuất màu hồng bền phút, a1 ml Bình tam giác (cỡ 50ml): ml dịch vitamin C tinh khiết Vài hạt tinh thể KI giọt hồ tinh bột Chuẩn KIO3 0,001N dung dịch xuất màu xanh, b1 ml Tính hệ số f dung dịch 2,6 DCIP dùng phân tích : f = b1 / a1 1.2 Dịch phân tích: 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Cân xác 10 g mẫu, cho vào cối, nghiền ngập axit metaphosphoric 5% (hoặc HCl 5%) Chuyển mẫu vào bình định mức cỡ 100 ml Định mức tới vạch axit metaphosphoric 5% (hoặc HCl 5%) Lắc đều, lọc thu dịch lọc vitamin C phân tích Tiến hành phản ứng Mẫu thí nghiệm: Cho vào bình tam giác (sạch, khơ, cỡ 50 ml, bình số 3): 10 ml dịch lọc vitamin C phân tích (dùng micropipet) ml dung dịch oxalatamon bão hoà (dùng micropipet) Chuẩn 2,6 DCIP (phân tích) xuất màu hồng bền phút Mẫu kiểm chứng: Cho vào bình tam giác (sạch, khơ, cỡ 50 ml, bình số 4): 10 ml HCl 1% (dùng pipet) ml Oxalatamon bão hồ Chuẩn 2,6 DCIP (phân tích) xuất màu hồng bền phút Tính hàm lượng vitamin C mẫu thí nghiệm theo mg% III Kết thí nghiệm: - mẫu chanh m=4,68 g; -Tính hệ số f: 1ml 2,6 DCIP 0,001N tương ứng với 0,088mg vitain C; 1ml KIO3 0,001N tương ứng với 0,088mg vitamin C +Định phân vitamin C tinh khiết dung dịch 2,6 DCIP 1,65ml a = 1,65 ml +Định phân vitamin C tinh khiết dung dịch KIO3 0.001N: 1,5 ml b = 1,5 ml f= 1,5 = 1,65 = 0,91 - kết định phân: Thể tích DCIP định phân VTM C dịch lọc : 1.24 ml Thể tích DCIP định phân mẫu kiểm chứng: 0,00 ml 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 → thể tích DCIP cần dùng là: 1,24 - 0= 1,24 ml +Cứ 1ml DCIP ta xác định 0,088 mg Vitamin C →vậy 1,24 ml DCIP xác định Vitamin C: M=0,088×1,24×0,91=0,0993 mg +Ta có từ thực nghiệm: 10ml dịch lọc vitamin C phân tích chứa 0,0993 mg vtmC →100 ml dịch lọc chứa 0,993 mg vtm C Vậy hàm lượng vitamin C −3 mẫu chanh là: %= 𝑣𝑚 = 0,993×10 4,68 × 100=0,0212 % IV Nhận xét thí nghiệm: Vitamin C chất khử mạnh , dễ bị oxi hóa nên phải trì trạng thái khử Chiết môi trường axit: bền vitamin C, kết tủa Protein Axit metaphosphoric axit oxalic có tác dụng khử màu, liên kết nhẹ với Fe2+, Cu2+, kiềm chế khả oxi hóa enzym vitamin C Nghiền nhanh , ngập axit , tránh vitamin C tác dụng với oxi Tránh dùng dụng cụ Fe, Cu Fe,Cu cofactor nhiều enzym oxi hóa khử thể sống , cân dụng cụ Fe,Cu kích hoạt enzym oxi hóa khử oxi hóa Vitamin C , sai số Hiệu chỉnh nồng độ DCIP: Không dùng KIO3 định phân vitamin C mẫu dịch thí nghiệm vì: + KIO3 chất oxh mạnh , tác dụng với tạp chất dịch axit amin, protein, saccarit .nên kết khơng xác + DCIP thuốc thử đặc trưng phản ứng với Vitamin C Phải hiệu chỉnh DCIP DCIP không bền , nồng độ thay đổi theo thời gian 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 BÀI 9: XÁC ĐỊNH CHỈ SỐ AXIT CỦA DẦU THỰC VẬT I NGUYÊN TẮC Xác định số axit: Chỉ số axit số mg KOH cần để trung hịa axit béo tự có 1g chất béo - Chỉ số axit cho biết độ tươi chất béo Thông qua số axit biết thời gian bảo quản Chỉ số axit cao thời gian bảo quản lâu, số axit thấp mẫu tươi Mặt khác , ta biết chất béo bảo quản cách khơng? Chất béo có bị thủy phân không? Điều kiện để chất béo thủy phân H2O Nguyên tắc: Trung hòa chất béo dung dịch KOH chuẩn độ, KOH axit béo tự có chất béo xảy phản ứng RCOOH + KOH RCOOK + H2O Dựa vào lượng KOH dùng để trung hòa axit, tính số axit II CÁCH TIẾN HÀNH: Mẫu thí nghiệm: dầu thực vật Tường An phịng thí nghiệm cung cấp, tồn dạng chất rắn (do bỏ vào tủ lạnh) Đun nóng cho dầu chuyển từ dạng rắn dạng lỏng bắt đầu tiến hành thí nghiệm Chất béo gồm hợp chất no hay dài có nhiệt độ nóng chảy cao Ngược lại chất béo gồm hợp chất không no hay mạch ngắn có nhiệt độ nóng chảy thấp *Mẫu Thí nghiệm - Cân xác 3-5g chất béo (cân cân phân tích) bình tam giác 250ml có nút nhám - Thêm 30-50ml hỗn hợp ete- rượu 96% ( 1:1) để hòa tan chất béo (chú ý thêm tủ hút, sau đậy nút bình lại) - Lắc cẩn thận, đun cách thủy chất béo chưa tan hết (có thể mang khỏi tủ hút để lắc.) - Làm nguội - Định phân hỗn hợp KOH 0,1N rượu với chất thị phenolphtalein (5 giọt dung dịch 1% rượu) - Chuẩn độ đến xuất màu hồng tươi *Mẫu kiểm chứng - Cho 2-3 ml nước cất vào bình tam giác 250ml có nút nhám 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 - Thêm 30-50ml hỗn hợp ete- rượu 96% ( 1:1) (chú ý thêm tủ hút, sau đậy nút bình lại) - Lắc cẩn thận, đun cách thủy mẫu thí nghiệm đun - Làm nguội - Định phân hỗn hợp KOH 0,1N rượu với chất thị phenolphtalein (x giọt dung dịch 1% rượu) - Chuẩn độ đến xuất màu hồng tươi III CHÚ Ý - KOH 0,1N rượu sử dụng để tránh sai sót xảy thủy phân xà phòng, trường hợp hỗn hợp chứa nhiều nước từ 20% trở lên - Trường hợp chất béo có màu sẫm dùng thị timolphtalein (1ml dung dịch 1% rượu) định phân màu xanh, dùng ankali xanh 6B (1ml dung dịch 1% rượu) - Nồng độ kiềm sử dụng thấp thí nghiệm xà phịng để tránh thủy phân - Mẫu kiểm chứng để xem dung dịch mẫu không chứa chất béo có chất mẫu có chất tác dụng với KOH 0,1N không IV XỬ LÝ SỐ LIỆU: - Khối lượng dầu thực vật lấy : m= 3.19 g Số ml KOH 0,1N dùng định phân : 0.6 ml 5.611×× Chỉ số axit tính theo cơng thức: Ax = Trong đó: 𝑚 b số ml KOH 0,1N dùng để định phân m khối lượng mẫu thí nghiệm (gam) f hệ số hiệu chỉnh nồng độ dung dịch K0H 0,1N đem dùng 5.611 số mg KOH có 1ml KOH 0,1N *Tính tốn Chỉ số axit mẫu dầu thực vật là: Ax= ( 5.611 × 0,6 ×1) / 3.19= 1.0554 * Nhận xét: Mẫu dầu thực vật bị thuỷ phân phần trình bảo quản sử dụng 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 BÀI 10: XÁC ĐỊNH CHỈ SỐ XÀ PHÒNG CỦA DẦU THỰC VẬT I NGUN TẮC Xác định số xà phịng hóa: Chỉ số xà phịng hóa lượng mg KOH cần để trung hòa axit béo tự liên kết có 1g chất béo Nói cách khác lượng mg KOH ần để xà phịng hóa glixerit để trung hòa axit béo tự có 1g chất béo (là số mg KOH dùng để dịnh phân axit béo tự axit béo glixerit (bằng cách thủy phân chất béo), nói cách khác số mg KOH dùng để định phân axit béo có cấu trúc chất béo 1g chất béo.) - - Thơng qua số xà phịng, ta dự đốn khối lượng trung bình axit béo có mẫu , từ biết thành phần axit béo ( số xà phòng lớn khối lượng trung bình axit béo nhỏ) Chỉ số xà phịng bị thay đổi, hay không thay đổi Nguyên tắc: Đun sôi chất béo với lượng dư dung dịch KOH chuẩn độ chất béo bị thủy phân Các axit béo giải phóng phản ứng với KOH RCOOH + KOH RCOOK + H2O Các chất béo tự phản ứng với KOH sơ đồ Lượng kiềm dư, không tham gia phản ứng với axit béo định phân HCl chuẩn Dựa vào lượng kiềm tiêu tốn để trung hòa loại axit béo chất béo, tính số xà phịng II CÁCH TIẾN HÀNH 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Mẫu thí nghiệm: mẫu dầu thực vật Tường An phịng thí nghiệm cung cấp *Mẫu thí nghiệm: - Lấy 2-3g chất béo vào bình tam giác 250ml - Cho 20ml KOH 0,5N rượu (dùng pipet buret) (Cách điều chế KOH 0,5N rượu: 30g KOH tinh khiết hồ tan lít rượu etylic tinh khiết đun nóng có lắp ống sinh hàn thu hồi, dung dịch để yên đêm để ổn định nồng độ, sau lọc bảo quản bình đựng màu nâu.) - Đậy bình ống sinh hàn khí đun sơi cách thủy hỗn hợp 1giờ - Làm nguội hỗn hợp, thêm x giọt phenolphtalein timolphtalein 1% rượu định phân dung dịch HCl 0,5N (x 2,3,4,5,6,… giọt số giọt thêm vào mẫu thí nghiệm phải giống mẫu kiểm chứng) - Chuẩn độ đến dung dịch màu hồng *Mẫu kiểm chứng: - Lấy 2-3ml nước cất vào bình tam giác 250ml - Cho 20ml KOH 0,5N rượu ( dùng pipet buret) - Đậy bình ống sinh hàn khí đun sơi cách thủy hỗn hợp - Làm nguội hỗn hợp, thêm x giọt phenolphtalein timolphtalein 1% rượu định phân dung dịch HCl 0,5N - Chuẩn đến dung dịch màu hồng III CHÚ Ý - Nếu xà phịng khó tan thêm khoảng 20ml dung mơi có nhiệt độ sơi cao toluen, rượu propilic, butylic amilic - Song song làm thí nghiệm kiểm chứng, thay chất béo lượng nước cất tương ứng (cần làm thí nghiệm kiểm chứng nồng độ kiềm bị biến đổi) IV XỬ LÝ SỐ LIỆU: - Số gam dầu thực vật lấy 2.32 g Ban đầu cho 20ml KOH 0.5N Thể tích HCl 0,5N tiêu tốn sau định phân là: Mẫu thí nghiệm: 2.8 ml Mẫu kiểm chứng: 10.6 ml Chỉ số xà phòng ( Xp ) tính theo cơng thức: Xp = Trong đó: − ×1×28.05×2 𝑚 a số ml HCl 0,5N dùng để định phân mẫu kiểm chứng b số ml HCl 0,5N dùng để định phân mẫu thí nghiệm m khối lượng mẫu chất béo (gam) f hệ số hiệu chỉnh nồng độ dung dịch HCl đem dùng f hệ số hiệu chỉnh nồng độ dung dịch K0H đem dùng 28.05 số mg KOH có 1ml KOH 0,5N 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 * Tính tốn: Chỉ số xà phịng hố mẫu thí nghiệm là: Xp= 10,6−2,8 ×1×28.05×1 2,32 =94,31 Với 28.05 lượng mg KOH có 1ml KOH 0.5N 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 BÀI 11: XÁC ĐỊNH CHỈ SỐ PEROXIT CỦA DẦU THỰC VẬT I NGUYÊN TẮC Xác định số peroxit Chỉ số peroxit số gam iot phản ứng với hydro hoạt động peroxit chứa 100g chất béo, nói cách khác, số peroxit số gam iot giải phóng cho dung dịch KI tác dụng với 100g chất béo nhờ tác dụng peroxit (sản phẩn hóa chất béo) có chất béo Ý nghĩa: - Peroxyt sản phẩm q trình hóa chất béo Chỉ số peroxyt đăch trưng cho mức độ hóa chất béo, tăng suốt thời gian bảo quản ( nhiệt độ, oxi nên khó kiềm chế) Nguyên tắc: Xác định số peroxit dựa nguyên tắc: peroxit chất béo (tạo thành trình hóa chất béo) mơi trường axit có khả phản ứng với KI thải I2 theo phản ứng: Iot tạo thành định phân dung dịch tiosunfat: 2Na2S2O3 + I2 2NaI + Na2S4O6 Dựa vào lượng tiosunfat tiêu tốn định phân iot tính số peroxit II CÁCH TIẾN HÀNH: Mẫu thí nghiệm: Mẫu dầu thực vật Tường An phịng thí nghiệm cung cấp * Mẫu thí nghiệm: - Lấy 3-5g dầu thực vật vào bình tam giác 250ml có nút nhám - Thêm vào bình 5-10ml cloroform để hồ tan chất béo, thực tủ hút cloroform chất độc dễ bay - Thêm vào bình 10-20ml CH3COOH băng ( hỗn hợp axit axetic băng clorofocm 2:1)., thực tủ hút 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 - Thêm tinh thể KI ( hạt đỗ) sau đóng nút nhám lại - Lắc hỗn hợp thật cẩn thận 5-10 phút - Thêm vào hỗn hợp 25ml nước cất - Định phân iot tạo thành dung dịch Na2S2O3 0,01N với chất thị hồ tinh bột ( 0,5 ml dung dịch hồ tinh bột 1%) - Chuẩn độ màu xanh (nâu tím) * Mẫu kiểm chứng: - Lấy 3-5ml nước cất vào bình tam giác 250ml có nút nhám - Thêm vào 5-10ml clorofocm, thực tủ hút - Thêm 10-20ml CH3COOH băng ( hỗn hợp axit axetic băng clorofocm 2:1), thực tủ hút - Thêm tinh thể KI (bằng hạt đỗ), sau đóng nút nhám lại - Lắc hỗn hợp thật cẩn thận 5-10 phút - Thêm vào hỗn hợp 25ml nước cất - Định phân iot tạo thành dung dịch Na2S2O3 0,01N với chất thị hồ tinh bột ( 0,5 ml dung dịch hồ tinh bột 1%) - Chuẩn độ màu xanh (nâu tím) III.CHÚ Ý Phải cho clorofocm chiết chất béo, tập trung chất béo chỗ làm cho I nằm ngồi lớp clorofocm dẫn đến khơng tác dụng với chất béo làm I2 dễ tác dụng với thuốc thử Lắc hỗn hợp thật cẩn thận I phân bố nước để dễ tác dụng với thuốc thử IV XỬ LÝ SỐ LIỆU: -Khối lượng mẫu dầu thực vật lấy 3,32 g -Thể tích Na2S2O3 0,01N tiêu tốn cho mẫu thí nghiệm 10 ml -Thể tích Na2S2O3 tiêu tốn cho mẫu kiểm chứng là: ml -Chỉ số peroxit ( P ) tính theo cơng thức: Trong đó: a – Số ml dung dịch Na2S2O3 0.01N dùng định phân mẫu thí nghiệm b – Số ml dung dịch Na2S2O3 0.01N dùng định phân mẫu kiểm chứng f – Hệ số hiệu chỉnh nồng độ Na2S2O3 0.01N đem dùng m – Lượng mẫu cân chất béo, gam 0.001269 số gam iot tương ứng với 1ml Na2S2O3 0.01N 100 hệ số quy chuyển theo 100g chất béo * Tính tốn: -Chỉ số peroxit là: = (10−0)×1×0,001269×100 =0,3823 3,32 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 NHẬN XÉT CHUNG: - Mẫu dầu thực vật cho PTN cung cấp dầu Tường An, có thành phần: dầu olein, dầu đậu nành, dầu hạt cải tinh luyện, Ester Polyglycerol với acid béo (475), Vitamin A - Chỉ số axit: Ax = 1,0554 - Chỉ số xà phòng: Xp = 94,31 - Chỉ số peroxit: P = 0.3823 Mẫu dầu thực vật bị thuỷ phân phần trình sử dụng, tiêu chuẩn quốc tế lipit thực phẩm lipit không bị thuỷ phân, tức số axit = Mẫu dầu thực vật trình hố số peroxit > Trong thực phẩm, ban đầu có peroxit q trình hố diễn nhanh nên số peroxit mong muốn thực phẩm 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 h 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99
Ngày đăng: 08/09/2023, 00:24
Xem thêm:
