Tổng hợp và thiết lập chất đối chiếu vildagliptin amid để sử dụng trong xây dựng và thẩm định quy trình thử tạp chất liên quan của viên nén bao phim chứa metformin hydroclorid và vildagliptin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHẠM LÊ NGỌC YẾN TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU VILDAGLIPTIN AMID ĐỂ SỬ DỤNG TRONG XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH THỬ TẠP CHẤT LIÊN QUAN CỦA VIÊN NÉN BAO PHIM CHỨA METFORMIN HYDROCLORID VÀ VILDAGLIPTIN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHẠM LÊ NGỌC YẾN TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU VILDAGLIPTIN AMID ĐỂ SỬ DỤNG TRONG XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH THỬ TẠP CHẤT LIÊN QUAN CỦA VIÊN NÉN BAO PHIM CHỨA METFORMIN HYDROCLORID VÀ VILDAGLIPTIN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS NGUYỄN ĐỨC TUẤN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan danh dự cơng trình nghiên cứu khoa học kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan Tác giả luận văn Phạm Lê Ngọc Yến Luận văn Thạc sĩ – Khóa: 2020 – 2022 Ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất – Mã số: 8720210 TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU VILDAGLIPTIN AMID ĐỂ SỬ DỤNG TRONG XÂY DỰNG VÀ THẨM QUY TRÌNH THỬ TẠP CHẤT LIÊN QUAN CỦA VIÊN NÉN BAO PHIM CHỨA METFORMIN HYDROCLORID VÀ VILDAGLIPTIN Phạm Lê Ngọc Yến Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Đức Tuấn Từ khóa: Vildagliptin amid, vildagliptin, metformin hydroclorid Mở đầu: Vildagliptin phối hợp metformin hydroclorid sử dụng để điều trị đái tháo đường type Dược điển Việt Nam dược điển tham chiếu hành chưa có chuyên luận quy định tiêu chuẩn chất lượng cho phối hợp Vildagliptin amid tạp chất vildagliptin tạp chuẩn gốc chưa thương mại hóa Mục tiêu: Tổng hợp thiết lập chất đối chiếu vildagliptin amid để sử dụng xây dựng thẩm định quy trình định lượng tạp 1-cyanoguanidin vildagliptin amid viên nén bao phim chứa metformin hydroclorid vildagliptin Phương pháp nghiên cứu: Tổng hợp, tinh chế, thử tinh khiết, xác định cấu trúc, xây dựng quy trình xác định độ tinh khiết thiết lập chất đối chiếu vildagliptin amid Xây dựng thẩm định quy trình định lượng tạp 1-cyanoguanidin vildagliptin amid chế phẩm chứa metformin hydroclorid vildagliptin HPLC-PDA Kết quả: Vildagliptin amid tổng hợp với hiệu suất toàn quy trình 78,62% Chất đối chiếu thiết lập có giá trị ấn định độ tinh khiết sắc ký 98,3%, độ khơng đảm bảo đo (k=2) 0,08% Quy trình định lượng tạp 1-cyanoguanidin vildagliptin amid phương pháp HPLC-PDA, sử dụng cột sắc ký pha đảo AlantisÒ dC18 (150 x 4,6 mm; µm) pha động acetonitril dung dịch acid orthophosphoric pH 3,0 chứa tác nhân tạo cặp ion natri hexasulfonat natri clorid, chương trình rửa giải gradient Quy trình thẩm định đạt độ đặc hiệu, độ đúng, độ xác, khoảng tuyến tính rộng, giới hạn định lượng phù hợp với mức giới hạn tạp chất theo quy định ICH Q2(R1) Kết luận: Quy trình định lượng tạp 1-cyanoguanidin vildagliptin amid viên nén bao phim chứa metformin hydroclorid vildagliptin xây dựng thẩm định, sử dụng vildaglitin amid tổng hợp thiết lập tạp đối chiếu Master’s Thesis – Academic course: 2020- 2022 Specialty: Drug Quality Control & Toxicology – Code: 8720210 SYNTHESIS AND ESTABLISHMENT OF VILDAGLIPTIN AMIDE REFERENCE SUBSTANCE USED IN DEVELOPMENT AND VALIDATION OF ANALYTICAL PROCEDURE FOR RELATED COMPOUND TEST OF FILM-COATED TABLETS CONTAINING METFORMIN HYDROCHLORIDE AND VILDAGLIPTIN Pham Le Ngoc Yen Supervisor: Prof Dr Nguyen Duc Tuan Keywords: Vildagliptin amide, vildagliptin, metformin hydrochloride Introduction: Vildagliptin in combination with metformin hydrochloride is used for treatment type diabetes The applicable Vietnamese and the reference pharmacopoeias not have a specifed monograph for this combination Vildagliptin amide is the major impurity of vildagliptin and this primary reference substance has not been commercialized Objectives: Synthesis and establishment of vildagliptin amide reference substance used in development and validation of analytical procedure for 1-cyanoguanidine and vildagliptin amide related compound test of film-coated tablets containing metformin hydrochloride and vildagliptin Methods: Synthesis, purification, purity testing, chemical structure elucidation, purity test procedure development, and reference substance establishment of vildagliptin amide Development and validation of analytical method for quantitative determination of 1-cyanoguanidine and vildagliptin amide related impurities in filmcoated tablets containing metformin hydrochloride and vildagliptin by HPLC-PDA Results: Vildagliptin amide was synthesized with a total yield of 78.62% The established reference substance had an assigned value of 98.3% chromatographic purity, and an uncertainty of measurement of 0.08% (k=2) The analytical procedure for quantification of 1-cyanoguanidine and vildagliptin amide was performed on reverse phase column AlantisỊ dC18 (150 x 4.6 mm; µm), mobile phase of acetonitrile and orthophosphoric acid solution pH 3.0 containing sodium hexasulfonate as an ion-pair agent and sodium chloride in gradient mode The validation results satisfied specificity, accuracy, precision, wide linearity, and limit of qualification was in accordance with the acceptance criteria of related substances in drug products by ICH Q2(R1) Conclusion: The HPLC-PDA method for quantitative determination of 1cyanoguanidine and vildagliptin amide related impurities in film-coated tablets containing metformin hydrochloride and vildagliptin, was successfully developed and validated, using the reference substance-established and synthesized vildagliptin amide LỜI CẢM ƠN Luận văn tốt nghiệp em thành vô quan trọng, đại diện cho trình học tập, nghiên cứu làm việc khoảng thời gian năm học Dược Để có kết ngày hôm nay, em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến Thầy GS.TS Nguyễn Đức Tuấn Em cảm ơn Thầy cho em hội học hỏi gắn bó với Thầy năm qua Từ ngày đầu em làm nghiệm chế viên, em cảm ơn Thầy tận tình bảo, truyền đạt cho em nhiều kiến thức kinh nghiệm khơng giảng đường mà cịn công việc thực tế Em biết ơn Thầy dành thời gian quý báu để góp ý, giúp em chỉnh sửa hoàn thành luận văn tốt nghiệp Em chân thành cảm ơn Quý Thầy Cô môn Phân tích – Kiểm nghiệm Quý Thầy, Quý anh chị Trung tâm Khoa học Công Nghệ Dược Sài Gòn quan tâm hỗ trợ em thời gian em nghiên cứu thực luận văn Em xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến Cô PGS.TS Hà Diệu Ly - Khoa Y, Đại học Quốc Gia TP.HCM Thầy PGS.TS.Phan Thanh Dũng, cảm ơn Cô Thầy nhận lời phản biện đề tài em, cho em góp ý giúp em hồn chỉnh đề tài Ngoài ra, em xin cảm ơn chị kỹ thuật viên chị lao công hỗ trợ cho tụi em hóa chất, dụng cụ, hướng dẫn cho tụi em thiếu sót ngày làm việc phịng thí nghiệm Khơng thể khơng nhắc đến đại gia đình Cơng ty Cổ phần Dược phẩm Boston Việt Nam, xin chân thành cảm ơn Chú TGĐ Lương Đăng Khoa, Anh PTGĐ Lê Ngọc Trình, cám ơn Chú Anh tạo điều kiện cho con/em đồng thời có trải nghiệm cơng việc thực tế có hội theo đuổi đam mê học tập nghiên cứu Em xin cảm ơn Anh ThS Phan Trọng Đạt, Chị Nguyễn Thị Kiều Hảo, cảm ơn bạn Nguyễn Thị Hạnh Giang toàn thể đồng nghiệp, cám ơn tất người nhiệt tình hỗ trợ tạo điều kiện cho em Em xin cảm ơn thơng cảm cho thiếu sót em khoảng thời gian năm vừa qua Em biết ơn Anh Nguyễn Minh Luân - Trung tâm Kiểm Nghiệm tỉnh Bình Dương, Anh ThS Trịnh Hoàng Dương, Anh Lê Thanh Hoàng - Viện Kiểm Nghiệm Thuốc TP.HCM nhiệt tình giúp đỡ, hỗ trợ dụng cụ, thiết bị cho em lời khuyên để hoàn chỉnh đề tài Cảm ơn “đồng đội” đồng hành quan tâm Yến suốt thời gian qua Đặc biệt cảm ơn bạn Tô Trần Bảo Ngọc, bạn Bùi Từ Khuê lớp CHKNTDC20 ln có mặt giúp đỡ Yến cần, Yến vượt qua khoảng thời gian khó khăn Cảm ơn em Bùi Thị Hồng Phương lớp CHKNTDC21, em Nguyễn Thị Ngọc Quyền lớp DCQ2016, em Nguyễn Việt Tân lớp DCQ2017, em Nguyễn Ái Vy lớp DCQ2019 em nghiệm chế viên lab Hố phân tích-Kiểm nghiệm sẵn sàng hỗ trợ chị Cảm ơn tất em Con xin dành tất lòng biết ơn đến Cha Mẹ, Cha Mẹ nguồn động lực giúp vượt qua tất khó khăn, giúp hồn thành tốt chặng đường năm Đại học năm Cao học Sự ủng hộ Cha Mẹ giúp tự tin để tiếp tục đam mê mình, bước tiếp đường nghiên cứu khoa học Cuối cùng, em xin dành lời cảm ơn đặc biệt đến người Anh, khoảng thời gian năm vừa qua, Anh người động viên, giúp đỡ em, Anh tạo điều kiện để em hoàn thành mục tiêu, Anh chỗ dựa tinh thần nguồn hỗ trợ để em có kết học tập nghiên cứu tốt Hy vọng thời gian tới, tiếp tục đồng hành Anh Chân thành cảm ơn Anh, Anh ThS Nguyễn Tiến Hưng Học viên Phạm Lê Ngọc Yến i MỤC LỤC Trang Danh mục ký hiệu, từ viết tắt iii Danh mục bảng v Danh mục hình vii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Metformin hydroclorid 1.2 Vildagliptin 11 1.3 Vildagliptin amid 20 1.4 Thiết lập chất chuẩn, chất đối chiếu 22 1.5 Thuốc điều trị đái tháo đường phối hợp metformin hydroclorid vildagliptin 26 1.6 Các nghiên cứu phân tích liên quan đến hai thành phần metformin hydroclorid vildagliptin 27 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Đối tượng nghiên cứu 30 2.2 Nguyên vật liệu 30 2.3 Phương pháp nghiên cứu 32 CHƯƠNG KẾT QUẢ 42 3.1 Tổng hợp thiết lập chất đối chiếu vildagliptin amid 42 3.2 Xây dựng quy trình định lượng tạp 1-cyanoguanidin vildagliptin amid viên nén bao phim chứa metformin hydroclorid vildagliptin 63 CHƯƠNG BÀN LUẬN 78 4.1 Tổng hợp thiết lập chất đối chiếu vildagliptin amid 78 4.2 Xây dựng quy trình định lượng tạp 1-cyanoguanidin vildagliptin amid viên nén bao phim chứa metformin hydroclorid vildagliptin 86 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 91 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Độ tuyến tính Bước sóng 218 nm Bước sóng 210 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Kết đánh giá độ tuyến tính 1-cyanoguanidin SUMMARY OUTPUT Regression Statistics Multiple R 0,99815907 R Square 0,99632154 Adjusted R Square 0,99558584 Standard Error 937,809236 Observations ANOVA df Regression Residual Total Intercept X Variable SS MS F 1191055945 1191055945 1354,26343 4397430,82 879486,163 1195453375 Coefficients -1594,6503 188257,694 Standard Error 910,301495 5115,65395 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn t Stat P-value -1,7517826 0,14019995 36,8003183 2,7901E-07 Significance F 2,7901E-07 Lower Upper Lower 95% Upper 95% 95,0% 95,0% -3934,6548 745,3542 -3934,6548 745,3542 175107,487 201407,901 175107,487 201407,901 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Vildagliptin amid SUMMARY OUTPUT Regression Statistics Multiple R 0,99815928 R Square 0,99632194 Adjusted R Square 0,99558633 Standard Error 369,234255 Observations ANOVA df Regression Residual Total Intercept X Variable SS MS F 184652588 184652588 1354,41399 681669,674 136333,935 185334258 Standard Coefficients Error t Stat P-value 705,708092 358,403907 1,96903013 0,1060555 15551,4472 422,56653 36,8023639 2,7893E-07 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Significance F 2,7893E-07 Lower 95% -215,59848 14465,2053 Lower Upper Upper 95% 95,0% 95,0% 1627,01467 -215,59848 1627,01467 16637,689 14465,2053 16637,689 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh LOD, LOQ Bước sóng 218 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bước sóng 210 nm Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Độ Bước sóng 218 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Bước sóng 210 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Độ xác - Độ lặp lại Bước sóng 218 nm - Độ xác trung gian Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bước sóng 210 nm Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Bước sóng 218 nm Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bước sóng 210 nm Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Kết đánh giá độ xác 1-cyanoguanidin SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 3,65E- Column 1,249341 0,208223 05 1,97E- Column 1,243333 0,207222 05 ANOVA Source of Variation SS df Between Groups 3,0075E-06 3,01E-06 Within Groups 0,00028066 10 2,81E-05 Total 0,00028367 11 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn MS F P-value F crit 0,10716 0,750151 4,964603 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Vildagliptin amid SUMMARY Groups Count Sum Average Variance Column 5,936845 0,989474 0,001236 Column 6,221522 1,03692 0,001664 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 0,0067534 df MS P-value F crit 0,006753 4,657687 0,056283 4,964603 Within Groups 0,01449948 10 Total 0,02125288 11 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn F 0,00145 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 13: Dự thảo quy trình định lượng tạp 1-cyanoguanidin tạp vildagliptin amid chế phẩm phương pháp HPLC-PDA Điều kiện sắc ký Cột sắc ký Atlantis® dC18, 100 Å (150 x 4,6 mm; µm) Tốc độ dịng: 1,0 ml/phút Thể tích tiêm: 20 µl Nhiệt độ cột: 35 oC Đầu dò PDA: Bước sóng phát 210 nm (vildagliptin, vildagliptin amid), 218 nm (metformin, 1-cyanoguanidin) Dung môi pha mẫu: Nước tinh khiết Dung dịch đệm pH 3,0: Hòa tan 0,5 g natri hexasulfonat 0,5 g natri clorid vào 900 ml nước tinh khiết, điều chỉnh đến pH 3,0 dung dịch H3PO4 đậm đặc, thêm nước tinh khiết vừa đủ 1000 ml, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm Pha động: Dung dịch đệm pH 3,0 ACN, chương trình gradient sau: Thời gian (phút) Đệm pH 3,0 (%) ACN (%) 0-1 97 91 85 15 12 55 45 12,1 97 18 97 Thứ tự rửa giải: 1-cyanoguanidin - Metformin - Vildagliptin amid - Vildagliptin Chuẩn bị mẫu Dung dịch chuẩn metformin hydroclorid: cân xác lượng chuẩn metformin hydroclorid, cho vào bình định mức phù hợp, thêm dung môi pha mẫu vừa đủ, lắc Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh đều, pha lỗng cần để thu dung dịch có nồng độ metformin hydroclorid khoảng 50.000 µg/ml Dung dịch chuẩn vildagliptin: cân xác lượng chuẩn vildagliptin, cho vào bình định mức phù hợp, thêm dung mơi pha mẫu vừa đủ, lắc đều, pha lỗng cần để thu dung dịch có nồng độ vildagliptin khoảng 2.500 µg/ml Dung dịch chuẩn 1-cyanoguanidin: cân xác lượng chuẩn 1-cyanoguanidin, cho vào bình định mức phù hợp, thêm dung môi pha mẫu vừa đủ, lắc đều, pha lỗng cần để thu dung dịch có nồng độ 1-cyanoguanidin khoảng 200 µg/ml Dung dịch chuẩn vildagliptin amid: cân xác lượng chuẩn vildagliptin amid, cho vào bình định mức phù hợp, thêm dung mơi pha mẫu vừa đủ, lắc đều, pha loãng cần để thu dung dịch có nồng độ vildagliptin amid khoảng 200 µg/ml Dung dịch tương thích hệ thống: Pha lỗng đến thể tích thích hợp dung dịch chuẩn 1-cyaniguanidin dung dịch chuẩn vildagliptin amid dung môi pha mẫu để thu dung dịch có nồng độ 1-cyanoguanidin vildagliptin amid khoảng 0,2; µg/ml Lọc qua màng lọc RC 0,45 µm Dung dịch chuẩn hỗn hợp: Pha lỗng đến thể tích thích hợp dung dịch chuẩn metformin hydroclorid, dung dịch chuẩn vildagliptin, dung dịch chuẩn 1cyaniguanidin dung dịch chuẩn vildagliptin amid dung môi pha mẫu để thu dung dịch có nồng độ metformin hydroclorid, vildagliptin, 1-cyanoguanidin vildagliptin amid khoảng 10.000; 500; 0,2; µg/ml Lọc qua màng lọc RC 0,45 µm Dung dịch thử gốc: cân 20 viên, xác định khối lượng trung bình viên Cân xác khối lượng viên bất kỳ, cho vào bình định mức 500 ml, thêm dung môi pha mẫu, lắc, siêu âm 30 phút, để nguội, thêm tiếp dung môi pha mẫu đến vạch, lắc đều, lọc qua giấy lọc, bỏ vài mililít dịch lọc đầu Dung dịch có nồng độ metformin hydroclorid khoảng 10.000 µg/ml Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Dung dịch thử 1-cyanoguanidin: Pha loãng dịch lọc dung dịch thử gốc để thu dung dịch có nồng độ metformin hydroclorid khoảng 1.000 µg/ml Lọc qua màng lọc RC 0,45 µm Dung dịch thử vildagliptin amid: Lọc dịch lọc dung dịch thử gốc qua màng lọc RC 0,45 µm Tiến hành Tiêm liên tiếp lần dung dịch tương thích hệ thống, lần dung dịch chuẩn hỗn hợp, lần mẫu trắng vào hệ thống sắc ký, ghi nhận tín hiệu đánh giá tính phù hợp hệ thống theo yêu cầu sau: - Dung dịch tương thích hệ thống: RSD% diện tích pic 1-cyanoguanidin vildagliptin amid lần tiêm không 10% - Dung dịch chuẩn hỗn hợp: Độ phân giải pic 1-cyanoguanidin độ phân giải pic vildagliptin amid với pic liền kề không thấp 1,5 Tiêm lần dung dịch thử, ghi nhận diện tích pic trung bình tạp (nếu có) Cơng thức tính hàm lượng tạp 1-cyanoguanidin vildagliptin amid 𝑋(%) = 𝑆% 𝐶& 𝑚 %' 𝐷% × × × × 100 𝑆& 𝑚% 𝐻𝐿𝑁 1000 X(%): Hàm lượng % tạp 1-cyanoguanidin/vildagliptin amid (%) ST: Diện tích pic 1-cyanoguanidin/vildagliptin amid dung dịch thử SC: Diện tích pic trung bình 1-cyanoguanidin/vildagliptin amid mũi tiêm dung dịch chuẩn hỗn hợp CC: Nồng độ 1-cyanoguanidin/vildagliptin amid dung dịch chuẩn hỗn hợp (µg/ml) mT: Khối lượng cân mẫu thử (mg) DT: Độ pha loãng mẫu thử (ml) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh mTB: Khối lượng trung bình viên (mg) HLN: Hàm lượng nhãn metformin hydroclorid (để tính hàm lượng tạp 1cyanoguanidin)/vildagliptin (để tính hàm lượng tạp vildagliptin amid) (mg) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn