ảnh hưởng của lactate và lactate dehydrogenase đến xét nghiệm định lượng nồng độ ethanol trong máu tử thi

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ THANH XUÂN ẢNH HƯỞNG CỦA LACTATE VÀ LACTATE DEHYDROGENASE ĐẾN XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG NỒNG ĐỘ ETHANOL TRONG MÁU TỬ THI LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ THANH XUÂN ẢNH HƯỞNG CỦA LACTATE VÀ LACTATE DEHYDROGENASE ĐẾN XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG NỒNG ĐỘ ETHANOL TRONG MÁU TỬ THI CHUYÊN NGÀNH: KHOA HỌC Y SINH (HOÁ SINH) MÃ SỐ: 8720101 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS BS LÂM VĨNH NIÊN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 LỜI CẢM ƠN Tôi xin trân trọng cảm ơn Đảng ủy, Ban Giám hiệu, Phịng Đào tạo Sau Đại học, Bộ mơn Hóa Sinh trường Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tận tình thời gian học tập nghiên cứu Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám đốc, Phịng Độc chất Trung tâm Pháp y thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành nghiên cứu Tơi xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Thầy hướng dẫn PGS TS BS Lâm Vĩnh Niên tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thiện luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn Quý Thầy Cô anh chị Bộ mơn Hóa Sinh truyền đạt kiến thức, ln dìu dắt, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập Tôi xin chân thành cảm ơn bạn bè, đồng nghiệp, đặc biệt lớp Sau Đại học Hoá sinh y học trường Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh niên khố 2020-2022 2021-2023 nhiệt tình giúp đỡ trao đổi chuyên môn công việc nghiên cứu khoa học để đến hôm hồn thành luận văn Cuối tơi xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình sát cánh, dành cho yêu thương vơ bờ hỗ trợ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Nguyễn Thị Thanh Xuân LỜI CAM ĐOAN Tôi Nguyễn Thị Thanh Xuân, học viên Cao học chun ngành Hóa sinh y học khố 2020-2022 trường Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn PGS TS BS Lâm Vĩnh Niên Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu, thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực, khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thanh Xuân MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH iv DANH MỤC SƠ ĐỒ, BIỂU ĐỒ v ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan lactate, lactate dehydrogenase ethanol 1.2 Một số phương pháp phân tích ethanol 17 1.3 Tình hình nghiên cứu ảnh hưởng lactate lactate dehydrogenase đến nồng độ ethanol máu tử thi 23 Chương 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 Thiết kế nghiên cứu 31 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 31 2.3 Đối tượng nghiên cứu 31 2.4 Cỡ mẫu nghiên cứu 31 2.5 Biến số nghiên cứu 32 2.6 Phương pháp công cụ đo lường, thu thập số liệu 33 2.7 Quy trình nghiên cứu 35 2.8 Phương pháp phân tích liệu 37 2.9 Đạo đức nghiên cứu 38 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 39 3.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 39 3.2 Khảo sát nồng độ lactate, lactate dehydrogenase máu tử thi phương pháp sinh hoá 42 3.3 Khảo sát nồng độ ethanol máu tử thi phương pháp sắc khí với đầu dị ion hoá lửa 47 3.4 So sánh nồng độ ethanol máu tử thi phương pháp sinh hoá phương pháp sắc khí với đầu dị ion hố lửa 49 3.5 Ảnh hưởng lactate lactate dehydrogenase đến xét nghiệm định lượng nồng độ ethanol máu tử thi 50 Chương 4: BÀN LUẬN 54 4.1 Khảo sát nồng độ lactate, lactate dehydrogenase máu tử thi phương pháp sinh hoá 54 4.2 Mối liên quan nồng độ lactate, lactate dehydrogenase yếu tố khảo sát 56 4.3 Khảo sát nồng độ ethanol máu tử thi phương pháp sinh hoá phương pháp sắc khí với đầu dị ion hố lửa 58 4.4 Ảnh hưởng lactate lactate dehydrogenase đến xét nghiệm định lượng nồng độ ethanol máu tử thi 61 KẾT LUẬN 68 KIẾN NGHỊ 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 1: PHIẾU THU THẬP SỐ LIỆU NGHIÊN CỨU PHỤ LỤC 2: QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM NỒNG ĐỘ CỒN TRONG MÁU VÀ TRONG DỊCH CƠ THỂ i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt ADH Alcohol dehydrogenase ALDH Aldehyde dehydrogenase ALT Alanine aminotransferase ATP Adenosine triphosphate BAC Blood alcohol content Nồng độ cồn máu FID Flame ionization detector Đầu dò ion hóa lửa GC Gas chromatography Sắc ký khí IR Infrared ray Tia hồng ngoại ISTD Internal standard Nội chuẩn LDH Lactate dehydrogenase MEOS Microsomal ethanol oxidizing Hệ thống oxy hóa ethanol system microsome NAD+ Nicotinamide adenine dinucleotide NADH Nicotinamide adenine dinucleotide hydrogen PMI Post-mortem interval Khoảng thời gian sau chết REA Radiative energy attenuation Kỹ thuật suy giảm lượng xạ SH SIDS Sinh hoá Sudden infant death syndrome Tai nạn giao thông TNGT WHO Hội chứng đột tử trẻ sơ sinh World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới ii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Ngưỡng pháp lý nồng độ ethanol số quốc gia 15 Bảng 1.2: Ngưỡng ethanol máu theo định 320/QĐ-BYT ngày 23 tháng 01 năm 2014 Bộ Y tế “Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chun ngành Hóa sinh” 16 Bảng 3.1: Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu (n=110) 39 Bảng 3.2: Nồng độ lactate, lactate dehydrogenase máu tử thi phương pháp sinh hoá (n=110) 42 Bảng 3.3: Một số yếu tố liên quan đến nồng độ lactate (n=110) 43 Bảng 3.4: Mối liên quan nồng độ lactate khoảng thời gian sau chết 44 Bảng 3.5: Một số yếu tố liên quan đến nồng độ lactate dehydrogenase (n=110) 45 Bảng 3.6: Mối liên quan nồng độ lactate dehydrogenase khoảng thời gian sau chết 46 Bảng 3.7: Nồng độ ethanol máu tử thi phương pháp sắc khí với đầu dị ion hố lửa (n=110) 47 Bảng 3.8: Phân bố nồng độ ethanol máu đối tượng nghiên cứu phương pháp sắc khí với đầu dị ion hố lửa theo định 320/QĐBYT Bộ Y tế (n=110) 48 Bảng 3.9: Nồng độ ethanol máu tử thi phương pháp sinh hố phương pháp sắc khí với đầu dị ion hố lửa (n=110) 49 Bảng 3.10: Mối tương quan nồng độ lactate, lactate dehydrogenase nồng độ ethanol máu tử thi phương pháp sắc khí với đầu dị ion hố lửa 50 Bảng 3.11: Mối tương quan nồng độ lactate, lactate dehydrogenase nồng độ ethanol máu tử thi phương pháp sinh hoá 51 Bảng 3.12: Mối tương quan nồng độ lactate, lactate dehydrogenase iii chênh lệch nồng độ ethanol phương pháp sinh hố phương pháp sắc khí với đầu dị ion hoá lửa 52 Bảng 4.1: Nồng độ lactate, lactate dehydrogenase ethanol xét nghiệm phương pháp số tác giả 63 Bảng 4.2: Nồng độ lactate, lactate dehydrogenase ethanol ca tử thi dương tính với ethanol (lớn 10 mg/100mL) với chênh lệch ethanol hai phương pháp lớn mg/100mL 64 iv DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Chuyển hố ethanol gan 11 Hình 1.2: Tương quan nồng độ ethanol máu, lượng sử sụng giai đoạn ngộ độc 12 Hình 1.3: Sắc ký đồ điển hình số chất 22 Hình 1.4: Hoạt tính lactate dehydrogenase theo thời gian từ chết đến khám nghiệm tử thi vị trí lấy mẫu khác 24 Hình 2.1: Kỹ thuật lấy mẫu máu tĩnh mạch đùi 36 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 67 tin cậy xác hơn, phát rượu khác (methanol, isopropyl alcohol,…) cần thời gian phân tích lâu hơn, chi phí cao yêu cầu nhân viên đào tạo chun mơn Vì vậy, sở y tế khơng có điều kiện sử dụng phương pháp sinh hoá để xét nghiệm nồng độ ethanol cần có trao đổi nhân viên phòng xét nghiệm bác sĩ lâm sàng để tránh sai lệch nhầm lẫn đưa kết luận Vì điều gây xử phạt oan tình tham gia giao thơng, chẩn đốn bệnh kết luận nguyên nhân tử vong Đây vấn đề tranh cãi sôi thu hút nhiều dư luận tiếp diễn chưa có văn thức vấn đề Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 68 KẾT LUẬN Trong khoảng thời gian từ tháng 02/2022 đến tháng 04/2022, thu thập số liệu 110 ca tử thi lấy máu làm xét nghiệm nồng độ ethanol Trung tâm Pháp y thành phố Hồ Chí Minh Thơng qua kết nghiên cứu, rút kết luận sau: Nồng độ lactate lactate dehydrogenase sau chết Do không thực xét nghiệm nồng độ lactate trước tử vong để so sánh tất mẫu nghiên cứu có nồng độ lactate máu cao mức bình thường, trung bình 35,54 ± 8,51 mmol/L Nồng độ lactate thấp 16,44 mmol/L cao 54,5 mmol/L Tương tự, nồng độ LDH tăng cao sau chết với trung vị 1707 U/L (khoảng tứ phân vị 860,3-3652 U/L), thấp 243,6 U/L có 10 trường hợp LDH nằm ngưỡng bình thường với khoảng thời gian sau chết Nồng độ cao 71443 U/L (tương ứng khoảng thời gian sau chết 72,67 giờ) Khơng có khác biệt nồng độ lactate với giới, vị trí lấy mẫu, nguyên nhân tử vong khoảng thời gian sau chết Tương tự, LDH không bị ảnh hưởng giới nguyên nhân tử vong có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,001) nồng độ LDH vị trí lấy mẫu, số trung vị LDH máu tim phải cao máu tĩnh mạch đùi Đặc biệt, có tương quan mạnh nồng độ LDH khoảng thời gian sau chết, có ý nghĩa thống kê (p < 0,001) Thời gian tính từ lúc tử vong đến lúc khám nghiệm tử thi lâu nồng độ LDH tăng So sánh nồng độ ethanol máu tử thi hai phương pháp ngưỡng pháp lý nồng độ ethanol máu Có khác biệt có ý nghĩa thống kê nồng độ ethanol phương pháp sinh hoá phương pháp GC-FID (p < 0,001) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 69 Sự ảnh hưởng lactate lactate dehydrogenase đến nồng độ ethanol máu tử thi phương pháp sinh hố Khơng có tương quan nồng độ lactate LDH với nồng độ ethanol máu tử thi phương pháp GC-FID Phương pháp GC-FID phương pháp “tiêu chuẩn vàng” để định lượng nồng độ ethanol máu, đặc biệt trường hợp liên quan đến pháp lý Có tương quan yếu nồng độ lactate chênh lệch nồng độ ethanol (p < 0,05) có tương quan mạnh nồng độ LDH chênh lệch nồng độ ethanol (p < 0,001) Nếu nồng độ LDH lớn nồng độ ethanol xét nghiệm phương pháp sinh hố có chênh lệch cao so với phương pháp GC-FID Nếu xét thêm tương quan LDH khoảng thời gian sau chết khoảng thời gian sau chết cao làm cho nồng độ ethanol xét nghiệm phương pháp sinh hoá sai lệch nhiều Trong 30 trường hợp có chênh lệch ethanol hai phương pháp lớn 10 mg/100mL khoảng thời gian sau chết sau 10,17 giờ, nồng độ lactate > 20,10 mmol/L LDH > 2310 U/L Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 70 KIẾN NGHỊ Dựa kết nghiên cứu, xin đề xuất kiến nghị sau: Nếu sở khơng có sẵn máy GC-FID xét nghiệm nồng độ ethanol phương pháp sinh hoá, đồng thời thực xét nghiệm lactate LDH thời điểm để hỗ trợ kết luận xác nồng độ ethanol máu Đối với trường hợp nghi ngờ tăng nồng độ ethanol máu xét nghiệm phương pháp sinh hố mẫu sau nên đựng ống chứa NaF, bảo quản 0oC vịng tháng gửi mẫu đến sở có trang bị máy GC-FID để xác định xác nồng độ ethanol Cần có nghiên cứu với cỡ mẫu lớn khoảng thời gian chết cụ thể, đặc biệt trường hợp có liên quan đến pháp lý (đối tượng tham gia giao thơng, tử thi,…) để phân tích nhiều ảnh hưởng lactate, LDH nồng độ ethanol máu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO Karch SB Forensic issues in alcohol testing CRC Press/Taylor & Francis Group; 2007 Barry S Levine YHC, A Wayne Jones Alcohol In: Barry S Levine, Sarah Kerrigan, eds Principles of forensic toxicology 5th ed Springer Nature Switzerland AG; 2020:287-316:chap 19 Saukko P, Knight B The Pathophysiology of Death In: Saukko P, Knight B, eds Knight’s Forensic Pathology ed CRC Press; 2016:55-94:chap Coe JI Postmortem chemistry of blood, cerebrospinal fluid, and vitreous humor In: Fisher RS, Petty CS, eds Forensic Pathology A Handbook for Pathologists U S Department of Justice; 1977:21-49 Rifai N, Horvath AR, Wittwer CT Tietz textbook of clinical chemistry and molecular diagnostics 6th ed Elsevier; 2018 Foucher CD, Tubben RE Lactic acidosis NCBI Bookshelf StatPearls Publishing; 2021 Toffaletti JG Blood lactate: biochemistry, laboratory methods, and clinical interpretation Critical reviews in clinical laboratory sciences 1991;28(4):253–268 doi:10.3109/10408369109106865 Ewaschuk JB, Naylor JM, Zello GA D-lactate in human and ruminant metabolism The Journal of Nutrition 2005;125(7):1619-1625 doi:10.1093/jn/135.7.1619 Bộ Y tế Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Hóa sinh 2014 10 Farhana A, Lappin SL Biochemistry, lactate dehydrogenase NCBI Bookshelf StatPearls Publishing; 2020 11 Buras KL Are enzymes accurate indicators of postmortem interval?: a biochemical analysis Louisiana State University; 2006 12 Information NCfB PubChem compound summary for CID 702, ethanol Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Accessed September 8th, 2021 https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Ethanol 13 Dasgupta A Alcohol and its biomarkers: clinical aspects and laboratory determination Laboratory Medicine 2015;46(3):e72–e73 doi:10.1309/LMD9PAMUNKPA7DVN 14 Global Status Report on Alcohol and Health 2018 (World Health Organization: Geneva) 1–472 (2019) 15 Lưu Bích Ngọc, Nguyễn Thị Thiềng Tiêu dùng rượu bia Việt Nam NXB Đại học Kinh tế Quốc dân; 2018:62 16 Yip L Ethanol In: Lewis S Nelson, al e, eds Goldfrank’s toxicologic emergencies 11th ed McGraw-Hill Education; 2019:1143-1156:chap 76 17 Krishan Vij Alcohol and Alcoholism Textbook of Forensic Medicine and Toxicology 5th ed Elsevier; 2011:495-505 18 Watanabe K Ethanol In: Suzuki O, Watanabe K, eds Drugs and poisons in humans, a handbook of practical analysis Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2010 19 Kugelberg FC, Jones AW Interpreting results of ethanol analysis in postmortem specimens: a review of the literature Forensic Science International Jan 2007;165(1):10-29 doi:10.1016/j.forsciint.2006.05.004 20 Verstraete A, Legrand S-A Drug-impaired driving In: Houck MM, ed Forensic toxicology (Advanced forensic science series) Elsevier; 2018:12061231 21 Vissers L, Houwing S, Wegman F Alcohol-Related Road Casualties in Official Crash Statistics 2018:58 22 Điều 260 Bộ luật hình (2015) 23 Điều 260 Luật sửa đổi, bổ sung số điều Bộ luật Hình số 100/2015/QH13 (2017) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 24 Điều Luật Giao thông đường (2008) 25 Điều Nghị định 100/2019/NĐ-CP quy định xử phạt vi phạm hành lĩnh vực giao thông đường đường sắt (2019) 26 Điều Luật Phòng, chống tác hại rượu, bia (2019) 27 Coe JI Postmortem chemistry update Emphasis on forensic application The American Journal of Forensic Medicine and Pathology 1993;14(2):91117 doi:10.1097/00000433-199306000-00001 28 Costa I, Carvalho F, Magalhães T, Pinho PGd, Silvestre R, Dinis-Oliveira RJ Promising blood-derived biomarkers for estimation of postmortem interval Toxicology Research 2013:1-26 doi:10.1039/C5TX00209E 29 Donaldson A Estimation of post-mortem interval using biochemical markers University of Otago 2013 30 Lythgoe AS The activity of lactate dehydrogenase in cadaver sera: a comparison of different sampling sites Medicine, Science and the Law 1980;20(1):48-53 doi:10.1177/002580248002000110 31 Thompson WC, MaIhotra D, Schammel DP, Blackwell W, Ward ME, Dasgupta A False-positive ethanol in clinical and postmortem sera by enzymatic assay: elimination of interference by measuring alcohol in proteinfree ultrafiltrate Clinical Chemistry 1994;40(8):1594-1595 32 Badcock N, O’Reilly D False-positive Emit-st ethanol screen with postmortem infant plasma Clinical Chemistry 1992;38(3):434 33 Bishop-Freeman SC, Bertholf RL, Powers RH, Mayhew LC, Winecker RE False-positive enzymatic alcohol results in perimortem specimens Laboratory Medicine Jul 2020;51(4):394-401 doi:10.1093/labmed/lmz082 34 Lefrere B, Wohrer D, Godefroy C, et al False-Positive Ethanol Level in Urine and Plasma Samples of a Resuscitated Infant Journal of Analytical Toxicology Feb 14 2022;46(1):e21-e27 doi:10.1093/jat/bkaa188 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 35 Nine JS, Moraca M, Virji MA, Rao KN Serum-ethanol determination: comparison of lactate and lactate dehydrogenase interference in three enzymatic assays Journal of Analytical Toxicology 1995;19:192-196 36 Powers RH, Dean DE Evaluation of potential lactate - lactate dehydrogenase interference with an enzymatic alcohol analysis Journal of Analytical Toxicology 2009;33(8):561-563 doi:10.1093/jat/33.8.561 37 Nacca N, Hodgman MJ, Lao K, Elkins M, Holland MG Can elevated lactate and LDH produce a false positive enzymatic ethanol result in live patients presenting to the emergency department? Clinical Toxicology Mar 2018;56(3):189-192 doi:10.1080/15563650.2017.1357825 38 Golby R, Ovakim D, Garg A False-positive ethanol levels in modern laboratory assays Clinical Toxicology Aug 2020;58(8):853-854 doi:10.1080/15563650.2019.1687908 39 Sutheimer C, Hepler BR, Sunshine I Clinical application and evaluation of the Emit-stTM drug detection system American Society of Clinical Pathologists 1982;77(6):731-735 doi:10.1093/ajcp/77.6.731 40 Wineka CL, Wahbab WW, Windischc RM, Jr CLW Serum alcohol concentrations in trauma patients determined by immunoassay versus gas chromatography Forensic Science International 2004;139(1):1-3 doi:10.1016/s0379-0738(03)00262-7 41 Gharapetian A, Holmes D, Urquhart N, Rosenberg F Dehydrogenases interference with enzymatic ethanol assays: forgotten but not gone Clinical Chemistry Jul 2008;54(7):1251-1252 doi:10.1373/clinchem.2007.102491 42 Jones TE False-positive ethanol blood concentrations leading to clinical confusion on Christmas Day Clinical Biochemistry Nov 2011;44(16):13551357 doi:10.1016/j.clinbiochem.2011.07.018 43 Dinis-Oliveira RJ, Carvalho F, Duarte JA, et al Collection of biological Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh samples in forensic toxicology Toxicology Mechanisms and Methods Sep 2010;20(7):363-414 doi:10.3109/15376516.2010.497976 44 Oakes SA Cell Injury, Cell Death, and Adaptations In: Kumar V, Abbas A, Aster J, eds Robbins & Cotran Pathologic Basis of Disease 10th ed Elsevier; 2020:33-69:chap 45 Schleyer F Determination of the time of death in the early postmortem interval Methods of Forensic Science 1963;2:253-293 46 Das S, Panda S, Acharya A, Kundu UMA, Mohanty B, Ali I Serum and tissue enzymatic changes after death and it’s correlation with Postmortem interval in goat Journal of Entomology and Zoology Studies 2019;7(5):224229 47 Rehm J, Room R, Monteiro M, et al Alcohol use In: Ezzati M, Lopez AD, Rodgers A, Murray CJL, eds Comparative quantification of health risks World Health Organization; 2004:959–1108 48 Đặng Tiến Gia tăng tai nạn giao thông lái xe sử dụng rượu bia Accessed October 10th, 2022 https://laodong.vn/xa-hoi/gia-tang-tai-nan-giao-thong-dolai-xe-su-dung-ruou-bia-1059938.ldo 49 Ostrovsky YM Endogenous ethanol its metabolic, behavioral and biomedical significance Alcohol 1986;3(4):239-247 50 Simic M, Ajdukovic N, Veselinovic I, Mitrovic M, Djurendic-Brenesel M Endogenous ethanol production in patients with diabetes mellitus as a medicolegal problem Forensic Science International Mar 10 2012;216(13):97-100 doi:10.1016/j.forsciint.2011.09.003 51 Gorgus E, Hittinger M, Schrenk D Estimates of Ethanol Exposure in Children from Food not Labeled as Alcohol-Containing Journal of Analytical Toxicology Sep 2016;40(7):537-42 doi:10.1093/jat/bkw046 52 MGGilliland, Bost R Alcohol in decomposed bodies: postmortem Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh synthesis and distribution Journal of Forensic Sciences 1993;38(6):12661274 53 Ragab AR, Al-Mazroua MK, Afify MM, Saeed IA, Katbai C Endogenous Ethanol Production Levels in Saudi Arabia Residents Journal of Alcoholism & Drug Dependence 2015;3(3):1-4 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 1: PHIẾU THU THẬP SỐ LIỆU NGHIÊN CỨU BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHIẾU THU THẬP SỐ LIỆU NGHIÊN CỨU Đề tài: ẢNH HƯỞNG CỦA LACTATE VÀ LACTATE DEHYDROGENASE ĐẾN XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG NỒNG ĐỘ ETHANOL TRONG MÁU TỬ THI Mã số phiếu ……………………… I PHẦN HÀNH CHÍNH Số hiệu tử thi: …………………………………………………………… Năm sinh: ……………………………………………………………… Giới:  Nam  Nữ II THƠNG TIN KHÁC Thơng tin giải phẫu tử thi Điều trị bệnh viện  Không  Có Thời gian tử vong …… giờ.… , ngày ……/… /… …… Thời điểm khám nghiệm tử thi …… giờ.… , ngày ……/… /… …… Nguyên nhân tử vong (Tai nạn giao thông, tai nạn lao động, treo cổ, đột tử, ngộ độc, ngạt nước, chết cháy, té cao,…) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 2 Kết xét nghiệm Mẫu xét nghiệm: 2.1  Máu tĩnh mạch đùi  Máu tim Phương pháp sinh hoá Nồng độ lactate mmol/L Nồng độ LDH U/L Nồng độ ethanol mg/100mL 2.2 Phương pháp sắc ký khí với đầu dị ion hố lửa Nồng độ ethanol mg/100mL Người lập phiếu Nguyễn Thị Thanh Xuân Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 2: QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM NỒNG ĐỘ CỒN TRONG MÁU VÀ TRONG DỊCH CƠ THỂ TRUNG TÂM PHÁP Y CỘNG HỒ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Phịng Độc Chất Độc lập – Tự – Hạnh phúc oOo -Tp Hồ Chí Minh, ngày 29 tháng 07 năm 2013 QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM NỒNG ĐỘ ETHANOL TRONG MÁU VÀ TRONG DỊCH CƠ THỂ Đại cương: Xét nghiệm nồng độ ethanol máu dịch thể sắc ký khí phương pháp thường quy pháp y độ nhạy độ đặc hiệu cao Chỉ định: Xác định nồng độ ethanol máu dịch thể tất trường hợp giải phẫu tử thi Trung tâm theo quy định pháp luật tố tụng Chuẩn bị: Nhân viên xét nghiệm: bác sĩ chuyên khoa độc chất nhân viên xét nghiệm nắm quy trình xét nghiệm định lượng ethanol máu Phương tiện: Dụng cụ: − Pipet 100 L – 1000 L; − Đầu típ 100 L – 1000 L; − Vial 20 mL (vial headspace thủy tinh); − Nắp vial 20 mL (nắp vial tối thiểu chịu nhiệt độ 130 độ C) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Hóa chất: − Nội chuẩn: Tert-butanol nồng độ mg/mL nước cất − Chất chuẩn ethanol nồng độ mg/100mL 100 mg/100mL làm QC Thiết bị: − Máy sắc ký khí có phận lấy mẫu pha (headspace), cột pha tĩnh BAC1 BAC2 đầu dò FID; − Máy sinh khí Hydro: tạo khí Hydro có độ tinh khiết 99,9999% có khả chỉnh tốc độ dịng đến 100 mL/phút − Khí Heli có độ tinh khiết 99,9995% với tốc độ dòng 3,42 mL/phút (14psi) Mẫu bệnh phẩm: − Máu dịch thể tối thiểu mL, có ghi nhận vị trí lấy mẫu bệnh phẩm (tĩnh mạch đùi, tâm thất phải, bàng quang,…) Lý tưởng lấy máu tĩnh mạch đùi, trước thực giải phẫu tử thi; − Ống nghiệm đựng máu chuyên dụng tráng Natri Florua (thường quy định nắp xám); − Sau lấy máu, đậy chặt nút ống nghiệm chuyển đến chỗ bảo quản độ C 30 phút Nếu nơi lưu giữ xa, nhiệt độ bên 30 độ C, nên bảo quản túi giữ lạnh độ C vận chuyển − Trên giấy yêu cầu xét nghiệm, phải ghi rõ lấy bệnh phẩm, tên tuổi đối tượng, quan trưng cầu, tên người lấy máu bác sĩ định ký phiếu xét nghiệm ghi ngày Các bước tiến hành: Chuẩn bị thiết bị: − Bật máy sinh khí Hydro; − Khởi động máy tính mở chương trình TC Navigator GC-HS; − Bật công tắc máy GC Clarus 680 turboMatrix40; Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh − Nhập giá trị: Oven temperature: 70C, Inj Temperature: 200C, Tranfer line: 220C, Carrier gas: Heli, Split flow: 20mL/phút, Air: 450mL/phút, Hydro: 45 mL/phút Chuẩn bị mẫu: − Nhân viên phịng thí nghiệm rửa tay sạch, đeo khấu trang găng tay − Tồn q trình chuẩn bị mẫu tiến hành tủ hút khí độc − Dùng pipet lấy 0,5 mL máu cho vào vial 20 mL cho 0,1 mL tert- butanol làm nội chuẩn − Đóng nắp vial nhanh Phân tích máy: − Đưa vial chứa mẫu vào phận lấy mẫu headspace − Nhập thông tin mẫu vào phần mềm quản lý máy − Tiến hành phân tích máy: dựa vào đường chuẩn xây dựng hàng tuần với tối thiểu nồng độ khác nhau, tính nồng độ ethanol máu tồn phần − In kết Phân tích kết quả: − Kết luận nồng độ cồn máu: biểu thị theo đơn vị mg/100mL − Nồng độ ethanol máu thấp 10 mg/dL xem ethanol nội sinh Lưu giữ mẫu: − Lưu giữ mẫu máu sau định lượng nồng độ cồn tuần nhiệt độ -15 độ C Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn