Khảo sát thành phần hóa học cây ruột gà có khớp borreria articularis l f f n will

Trang 1

TRUONG DAI HOC SU PHAM THANH PHO HO CHI MINH

KHOA HOA HOC

BỘ MÔN HÓA HỌC HỮU CƠ cg*t›

KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP

KHAO SAT THANH PHAN HOA HOC CAY RUOT GA CO KHOP

Trang 2

NHAN XET CUA HOI DONG

SEER EE EEE EERE REE EEE EERE EEE EEE E EERE E EERE EEE EEE EEO TPP eee eee ee

SERRE EEE ERE EEE REAR EERE REE ERE REE EERE EERE ERT HEH REET ERE OH eRe He Oe

" e #946696 90%694 09900990 %6490%6990 6909690969096 91909096990 9699096960 69909099 6e 999x996 es*+eesese+eseseesseesss+e+ese+ees+eesseeesseeseesswewexeswemeewesseesseeessemsewesmesessesesseseesssweesewemseœmsemesewesese Se

*ˆ9#4%®%4+®e%#®tse+e+e**®et+eete*sesete+eseresesdses#esesfpe®e*se+seessse+e#+eeses+e+e+esseresse+eds+d*sesedeesseess+esseseses#desesesseses*eeesseesemesessee#eseseseesseessde“edeseesseesese9dteseseeesseeseesedewsseeseeke

CEE ERE REE EE EEE EEE EERE EEE EEE EE EEE EEE EEE EERE EEE EE EEE TEETER EE HEHE EEE EERE EEE EEE EEE EEE H EEE EERE EEE

CE EEE EEE REE EEE EERE EERE EERE ER EEE EEE EERE EEE EERE EEE EERE EEE EEE EEE EEE EEE EE EEE EEE REED

EEE EEE EEE EERE EERE EERE EEE EEE EEE EEE EEE REE EERE EERE EEE HEHEHE EOE TER EERE EEO EEE EERE ERE RRR ere

EOE EEE EEE AEE EERE EEE EEE E EEE EEE EEE ERE EERE EEE EER EEE EEE EERE EERE EERE REET ETE TEETER RTE ETE Peer

SERRE ERE RARER EERE EERE ERR ERE REE REE EEE EERE PREECE T EE TTETT RE TETERT RE T REE TT RTE E HEHE EKER TREE EERSTE HERE EEE H Se

CERRO ET ETOH TEETER EKER THEE ETERS TREES EEE HES EEE EES EEES EES EESEEEE EEE EEE EEEEEEEEH EE HEE EEE EEE

Se EERE EERE EEE EEE EEE EEE EEE EE EEE EEE EEE EEE EEE EERE EEE EEE EEE EERE EEE EE EEE

SEE EEE EEE EEE EERE EE EERE EERE EEE EEE ERE REE EEE EERE EERE EEE EEE EEE EEE EERE EERE EERE HERO ERR EER REE

SEE EEE EEE EEE EEE EEE EERE EERE EEE ERE ERE ERATE EEE EE EERE EERE EERE REE EEE EERE ERE Eee eee

Ce EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EE EEE EE EEE EERE EEE EERE EERE EEE TERRE REE EERE HEE EERE

EEE EEE EERE EEE EERE EAE EEE EERE EEE EERE EEE EERE EERE EERE EEE REE HETERO TEHTEREHREETEREER EE O TRE PeP eee

SPREE ERE REE EER EERE ERE REET ETE EERE TEETER EEE TEETER TERRE ET ERT EER ERE H THERE ERE RHEE HEE HEE EEE E EEE E ES

(Ky va ghi ré ho tén)

the

ie

Trang 3

LOI CAM ON

Luan văn được thực hiện tại phòng hợp chất thiên nhiên, thuộc khoa Hóa, trường đại học Sư Phạm thành phố Hồ Chí Minh

Với tắm lòng trân trọng và biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn cô Nguyễn Thị Ánh Tuyết, người cô luôn hết lòng tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo mọi

điều kiện thuận lợi giúp em hoản thành tốt khỏa luận này Cô không những truyền đạt cho em những tri thức khoa học những kinh nghiệm nghiên cứu quý báu, mả còn là

tắm lòng nghiên cứu khoa học giúp cho em có những hành trang cần thiết trên bước đường nghiên cứu vả học tập

Em xin hết lòng cảm ơn quỷ thầy cô bộ môn hóa, khoa hóa — đại học sư phạm

tp.HCM, các thấy cô đã hết lòng hướng dẫn, giáng dạy, truyền thụ cho em nhiều kiến thức khoa học quý báu trong suốt thời gian em học tại trường

Em xin gửi lời cảm ơn đến các anh chị, các bạn phòng hợp chất thiên nhiên

trường đại học sư phạm thành phô Hồ Chí Minh đã tận tình truyền đạt những kinh nghiệm quý báu, quan tâm, nhiệt tình hướng dẫn và tạo mọi điều kiện giúp đỡ em trong suốt quá trình thực hiện đẻ tải

Con xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cha mẹ, các anh chị những người luôn bên con khích lệ ủng hộ con vẻ mặt vật chất vả tinh thần để con yên tâm hoàn thành khỏa luận

Tôi xin gửi lời cảm ơn đến đến tất cả bạn bè tôi, đã luôn bên tôi giúp đỡ và động viên tơi hồn thành khóa luận này

Trang 4

Khóa luận tốt nghiệp Lam Tran Minh Thư

LỜI MỞ ĐÀU

Hóa học các hợp chất tự nhiên, đang có xu hướng phát triển mạnh mẽ Bởi vì theo các công trình nghiên cứu trên thế giới cũng như ở Việt Nam nhiều hợp chất tự

nhiên có được tính chữa bệnh rất lớn như hoạt tính kháng virus HIV ức chế tế bào ung

thư kháng viêm, kháng khuẩn, vv Bên cạnh đó, nền y học cô truyền Việt Nam với bé day lich str lau đời và phong phú, trong đó đa số các bài thuốc được bảo chế từ các

loại cây cỏ trong thiên nhiên Ngày nay cùng với sự phát triển của nền dược học hiện đại thì nền được học cô truyền cũng không ngừng phát triển và đổi mới

Cây Ruột gà có khớp (Borreria articularis) là một nguôn thảo được quý, thuộc

chi Borreria, ho Rubiaceae c6 tac dụng kháng khuẩn kháng nắm [14] Dich chiết

metanol có tác dụng bảo vệ gan [10] có tác dụng hữu ích trong điều trị sốt, sỏi bang quang giảm đau đầu [12] Ở Việt Nam, cây được dùng đẻ trị sốt chữa đau mắt, có

tác dụng kháng viêm kháng khuẩn như: E coli, Vibrio cholerae, Aspergillus ustus,

A.ochraceus ð Ấn Độ cây được sử dụng rộng rãi trong y học dân gian [3] Rể được sử dụng đẻ súc miệng làm giảm đau răng, hạt chữa tiêu chảy, kiết ly và cỏ hoạt tính kháng khuẩn [3 14]

Trang 5

Khóa luận tết nghiệp Lam Tran Minh Thư = 10% Z MR HSQC HMBC 'H-NMR C-NMR DEPT Ppm EA CH,CI ME CH)Cl,

DANH MUC CAC CHU VIET TAT

> Modi don (Singlet)

:- Mũi đôi (Doublet) > Midi ba (Triplet)

Mai da (Multiplet)

:_ Cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) Heteronuclear Single Quantum Correlation

Heteronuclear Multiple Bond Coherence Proton Nuclear Magnetic Resonance : Carbon Nuclear Magnetic Resonance

Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

Hang s6 tuong tac spin-spin

: Part per million

Trang 6

Khóa luận tốt nghiệp Lâm Trân Minh Thư

DANH MUC CAC HINH ANH, SO BO, BANG BIEU

1 Hinh anh

Hinh | Cay ruột gà cỏ khớp

Hinh 2 Tương quan HMBC trong hợp chất BORMEI

2 Sơ đồ

Sơ đỏ 1, Qui trình diéu ché cao hexan, cao ethyl acetate

Sơ đỏ 2: Sơ đỗ cô lập hợp chất hữu cơ BORMEI trong cao ethanol còn lại Sơ đỏ 3: Sơ đô 6 lap hop chat httu co BOR-EA-8.3 trong cao ethyl acetate

3 Bang biéu

Bảng 1-3: Các giai đoạn sắc kí của hợp chất BORMEI Bảng 4-7: Các giai đoạn sắc kí của hợp chất BOR-EA-8.3 Bang 8: Dữ liệu phỏ NMR của hợp chất BORMEI

Trang 7

Khỏa luận tốt nghiệp Lâm Trần Minh Thư

MỤC LỤC

EOL MO DAU iscsi ssi tetera, l

DANH MUC CAC CHO VIET TAT wo bu vcoaeeosooioosani 2

DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH SƠ ĐỎ BẰNG BIÊU 55-55555552 3 CHƯƠỜNG TTÔNG QUẦN: cccccccc2L 0266 61A0100400665 0460 14G563164602 06 6 1.1 DAC DIEM THUC VAT CÂY RUỘT GÀ CỎ KHỚP 55-555 5555 7

EK BONING iii REREAD 7

k2 FKàt sales Te TY NẴ cuddeeenaenaeeoeteaaaaogoeaoresgdsossaytisiantegiesee 7

1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ DƯỢC TÍNH -.-225<5-+Svsccvvs-ceee 7 1.3 CÁC NGHIÊN CỨU VẺ THÀNH PHẢN HÓA HỌC - - § L.3.1 Borreria artiCularis S5 5111155121111 11 1 1 ng ng 8 1432 Brower hen weribIlNG126—2-:C2L20 02 6002001S120022GG0310210402144266446ã22463/2366-3 10 TS ———m———rresenressaeessees I] ÈL8;d Ngraerẫt KÀ (N2 GG¿cbGGiEiticccciccccccccicici0iiic0lbss6issäi 13 £5; CDRP IOOCS LOUIS os cirvescasnasacrnnerexseshedn pi resensncengrarncersasucengnasdioaeses teccoauanennceonsens 13 CHƯỜNG 2 THỰC NGHIỆM:(22¿22226C2 222cc 2Ÿ G220ïGQGd0d0xãcx4 17 2.1 HOA CHAT, THIET BJ, PHUONG PHAP .0 :.:ssc:sscsssessssssscsssessesssecssecnsesssesaees 18 DEN Fil AE ios SSE BA Sei aa Raa 18

BES TRIO DR nn ccs cesses csuscecsaysaanaceabissseicGnsealabil easpalapes pa setaheashasdieouassiasatibneaiti 18

Trang 8

Khoa luận tốt nghiệp Lâm Trần Minh Thư

Bh TERT TƯN seosssx,ss(642x30640v C101222426549yx6261162169ÿueiebaavvyicdesienl686/00/2554391029264206934 692.9 20

2.4.2 Có lập các hợp chất hữu cơ trong cao ethanol còn lại 5 5-5-5 20

24.3 CÔ LẬP CÁC HỢP CHÁT HỮU CƠ TRONG CAO ETYL AXETATE 25

CHUONG 3.KET QUA VA THAO LUAN o ccccsccccsessesssssssssssssesessssuscsuscessssessceseeneesace 29

3.1 Khảo sát câu trúc hóa học của hợp chất BORMEI -2-522 52s 30 3.2 Khao sat câu trúc hóa học của hợp chất BOR-EA-8.3 5-555-S0 31 CHƯỜNG4XẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT (2 22222002220 0000 2200626 34 'h‹ann on ố ố ẽ ẽẽ °:(,.-£‹+SL, H)H, 35

MD ES NIT ea NBS aaa Rea 35

Trang 9

Trang 10

1.1 DAC DIEM THUC VAT CAY RUOT GA CO KHOP Tên thông thường: Ruột gà có khớp

Tên khoa học: 8ørreria articularis (L f}F._N WIllL Họ: Cả phê (Rubiceae)

Tên đồng nghĩa: Spermaeoce articularis (L.Ÿ) 1.1.1 Mô tả chung

Cây ruột gà có khớp lả cây thân cỏ, mọc đứng, đoạn gân gốc hơi sả Thân non mảu xanh, thân già mảu nâu tím, tiết điện vuông, cạnh như cỏ cánh Trên thân cỏ lông lông màu trắng ngăn Lá đơn, mọc đôi Phiên lá hình bâu dục, đâu nhọn, hơi tròn ở gốc, dài 2-26 cm, rộng I-l 5 cm, mặt trên xanh đậm, mặt dưới nhạt hơn, bìa phiên nguyên Hai mặt lá có lông ngắn nhưng mặt dưới rất nhiêu ở các gân lá Cụm hoa chụm 2-7 hoa ở nách lá nhưng nở không đều nhau mảu tím nhạt Quả nang, hình bằu dục, kich thước 5x2 5 mm, có nhiều lông trắng ở mặt ngoải Hạt hình bầu dục, kích thước 3xl 5 mm, non mau trang, gia màu nâu vàng, mặt trên hơi phông, mặt dưới cỏ

ranh doc to [17]

Ruột gà có khớp Borreria articularis

Hình 1 Cây ruột gà có khớp

1.1.2 Vùng phân bố, thu hái

Cây ruột gà có khớp (Borreria articularis) là một loài cây mọc nhiều ở các vùng nhiệt đới và cân nhiệt đới như Châu Mỹ, Châu Phi, Châu Á trong đỏ cỏ Việt

nam [6]

1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VÈ DƯỢC TÍNH

Ở Việt Nam: cảnh của ruột gà có khớp được dùng đẻ trị đau mắt, rễ dùng để giải khat, tri sot [1]

Trang 11

hap dau đâu viêm mặt vả nướu rắng [6]

Ngoài ra, năm 2007, Vadivelan và cộng sự đã nghiên cứu vẻ khả năng kháng

viêm cua Borreria articularis KM qua nghiên cứu cho thấy địch chiết chloroform ethyl acetate, nước, benzene của loài có khả năng kháng lại sự viêm nhiễm, phù nẻ ở

chuột một cách hiệu quả [15]

Năm 2008 Razia Sultana và cộng sự đã nghiên cứu vẻ khả năng kháng khuẩn

va khang nam của 8ørreria articularis Dịch chiết chloroform, cthyl acetate, ethanol

có khả năng kháng tốt bảy loại vi khuan (Bacillus, Vibrio cholerae ) và vài loại nằm khac (Aspergillus ochraceus, Aspergillus ustus, ) [14]

Theo các nghiên cửu được tính vẻ trước, dịch chiết phản trên mặt đất của

Borreria articularis có tác dụng kháng E.coli, Vibrio cholerae, Aspergillus ustus, A

ochoraces | 8Ì

1.3 CÁC NGHIÊN CUU VE THANH PHAN HOA HOC

1.3.1 Borreria articularis

Năm 2004, từ cao chlorofrom K.S.Mukherjee và cộng sự [8] đã cô lập được

f-amyrin (1) và m6t triterpene mdi la acid 3a-acetoxy-olean-12-en-29-oic (2)

° on

(1) (2)

Năm 2008 Razia và cộng sự [ l4] cô lập duge: acid 3-keto-olean-|2-en-29-

Trang 12

Khóa luận tốt nghiệp Lam Tran Minh Thư (3) (4) (7) (8)

Năm 2008, từ cao ethanol cla B.articularis, Razia va cOng sy [14] đã cô lập

được 6 - methyl -Š5- cyclodecen -l -ol ( 8 )

Năm 2010, Neoh Bee Keat và cộng sự đã cô lập được acid ursolic (Š),

stigmastcrol (9), benzo[g]isoquinoline-5,10-dione (10) và hexadecanoic (11)

Trang 13

Khóa luận tốt nghiệp Lam Tran Minh Thư (11) (12) 1.3.2 Boreria verticillata

Năm 1991, Balde và cộng sy [2] đã cô lập được một alkaloid mới là spermacoceine (l2) ngoài ra các alkaloid: borrerine (13), borreverine (14) và isoborreverine (15) cling duge cô lập

mk

(15) (16)

Năm 1999, Vieira và cộng sự [l6] đã cô lập được một tridoid mới lả borreriagenin (l6) ngoài ra các còn hai iridoid đã biết cũng được cô lập là asperuloside (17) va daphylloside (18)

Trang 14

(18)

Năm 2010 Moreira và cộng sự [7] đã cô lập hai alkaloid indol: 6-methoxy-4-

(3-methylbut-2-en-1-yl)-lH-indol (Verticillatine A) (19), va 1-(1H-indol-6-yl)-3- methylbutan-1!-on (Verticillatine B) (20) M6t iridoid moi 6'-O-(2-glyceryl) scandoside methyl ester (21) cùng hai hợp chất iridoid khác là asperuloside (17) và scandoside methyl ester (22) cũng đã được cô lập (19) (20) “ ` GOOCH, (22) (21) 1.3.3 Spermacoce kispida

Năm 1981, Sainty và cộng sự [II] đã cô lập được bảy iridoid từ vỏ gốc cây B.verticillata: daphylloside (18), asperuloside (17), scandoside methyl ester

Trang 15

(25) (26)

Năm 1996, tu S.hispida Chandel và cộng sự [Š} đã cô lập được các flavonoid:

Trang 16

Khỏa luận tốt nghiệp Lam Trin Minh Thu

1.3.4 Borreria latifolia

Nam 2002, Kamiya va céng sy [4] da co lap duge cac glycoside iridoid: acid

asperulosidic (26), acid deacetylasperulosidic (25), scandoside (31), daphylloside (18), 6-O-acetylscandoside (32), 10-hydroxyloganin (33), deacctyldaphylloside (34) cùng

với một diterpenoid là phytol (35) từ Ö8.1a!//o1ia thu thập ở Indonesia 0 ° (35) (36) 1.3.5 Spermacoce Laevis

Năm 2007, Noiarsa vả cộng sự [9] từ S /aevis đã cô lập được một chất mới 1a

(Z)-3-hexenyl @-B-p-glucopyranosyl-(—>6)-J-p-glucopyranoside (36) cing 17 hop

chất khác: (6S.9R)-roseoside (37) (Z)-3-hexenyl O-B-p-glucopyranoside (38), (Z)-3-

hexeny! O-a-i-rhamnopyranosyl-(1-—>6)-f-D-glucopyranoside (39), (Z)-3-hexenyl O-

Trang 17

glucopyranoside (42) phenylethyl ()-d-L-rhamnopyranosyl-( I-»6)-f-p-

glucopyranoside (43), benzyl -d-t-arabinopyranosyl-{I->»6)-B-p-glueopyranoside (44), benzyl O-B-p-xylopyranosy!-(1—+6)-B-p-glucopyranoside (45) asperuloside (17), 6a-hydroxyadoxoside (46), acid asperulosidic (26), kaempferol 3-O-j-p- glucopyranoside (47), kaempferol 3-O-rutinoside (48), quercetin 3-O-a-1-

Trang 18

Khóa luận tốt nghiệp Lam Tran Minh Thu

(45) (46)

Trang 19

Khóa luận tốt nghiệp Lâm Tran Minh Thu

Trang 20

Khóa luận tốt nghiệp Lâm Trần Minh Thư

Trang 21

2.1 HOÁ CHÁT, THIẾT BỊ, PHƯƠNG PHÁP

2.1.1 Hoa chat

Silica gel: silica gel 60, 0,04-0,06 mm, Merck dùng cho cột sắc ki Silica gel pha đảo, RP-I8 Merck dùng cho sắc kỉ cột

Sắc ký bảng mỏng loại 25DC — Aflufolein 20x20, Kiesel gel 60F vs,” Merck Sac ky bang mong loai 25DC, RP-18, Merck

Dung môi dùng cho quá trình thí nghiệm gồm: hexane, ethanol, chloroform, ethyl acetate, acetone, methanol, dichlorometan va nude cat

Thuốc thử hiện hinh các vết chất hữu cơ trên bảng mỏng: sử dụng H;SO, 259% 2.1.2 Thiết bị Các thiết bị dùng đẻ giải ly dụng cụ chứa mẫu Các cột sắc ký Máy cô quay chân không Bếp cách thuỷ

Đén soi UV: bước sóng 254 nm và 365 nm

Cân điện tử Sartorius Mass 620g

2.1.3 Phương pháp tiến hành

2.1.3.1 Phương pháp phân lập các hợp chất

Sử dụng kỹ thuật sắc kí cột silica gel pha thường, pha đảo Rp-18 kết hợp sắc ki

lớp mỏng

Hiện hình sắc ký lớp mỏng bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 365

nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H;SO, 30%

2.1.3.2 Phương pháp xác định cấu trúc hoá học các hợp chất

Xác định cấu trúc hoá học các hợp chất bảng phỏ cộng hưởng từ hạt nhân 'H-

NMR (500 MHz), C-NMR (125 MHz), duge ghi tai phong NMR, Vién Héa Hoe,

Viện KH-CN Việt Nam số !8 Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội

Trang 22

Khoa luận tốt nghiệp Lam Tran Minh Thư

2.2 NGUYEN LIEU

2.2.1 Thu hái nguyên liệu

Mẫu cây dùng trong nghiên cứu khoá luận là toàn bộ cây (Borreria

articularis.L f) được thu hái tại Mũi Né, Phan Thiết vào tháng 5/2013

Mẫu cây đã được TS Phạm Văn Ngọt nhận danh tên khoa học là *8orreria

articuiaris”, họ Cà phê (Rubiaceae)

2.2.2 Xử lý mẫu nguyên liệu

Mẫu nguyên liệu được rửa sạch loại bỏ phân sâu bệnh cắt nhỏ phơi khô trong

bóng râm, rồi xay thảnh bột mịn Sau đỏ tiền hảnh ngâm dam, chiét và phân lập các

hop chat

2.3 DIEU CHE CAC LOAI CAO

Cây Ruột gà có khớp (Borreria articularis) được phơi khô, cắt nhỏ và nghiên thành bột mịn rồi đem đi sấy khô đến khối lượng không đổi (m = 15.00 kg) Nguyên liệu bột mịn được tận trích với cthanol 96° bằng phương pháp ngâm dâm, lọc và cô quay loại dung môi dưới áp suất thấp thu được cao ethanol thô (534.00 g)

Cao ethanol thé duge chiét long — léng lan lugt voi hexane, ethyl acetate, thu duge cao hexane (183.00 g), cao ethyl acetate (80.00 g), cao ethanol còn lại (240.00g) Quá trình thực hiện được tóm tắt theo sơ dé |

Trang 23

Khóa luận tốt nghiệp Lam Tran Minh Thư Sơ đồ 1 Qui trình diéu ché cao hexan, cao ethy! acetate Cây Ruột gà có khớp m = 15.00 kg ~ Ngâm dầm trong ethanol on Loc Bã khô Dịch cthanol

~ Cô quay thu hỏi dung môi

Ethanol Cao ethanol

534.00 g

~ Chiết lỏng — long véi hexan, ethyl acetate, metanol

~ C6 quay thu héi dung méi Cao henxane H Cao ethyl acetate EA Cao ethanol con lai ME 183.00 g 80.00 g 240.00 g 2.4 CO LAP CAC HOP CHAT HUU CO TRONG CAY BORRERIA ARTICULARIS 2.4.1 Cao hexan Chưa khảo sát

2.4.2 Cô lập các hợp chất hữu cơ trong cao ethanol còn lại

Thực hiện SKC silica gel trên cao ethanol còn lại(240.00 g) với hệ dung môi rửa giải EA:ME có độ phân cực tăng dân từ 09% đến 20% methanol sau đó là hệ dung

môi EA:ME:H;O có độ phân cực tăng dân qua các tỉ lệ 8:2:0.5, 7.5:2.5:1, 7:3:1, 5:5:1

vả cuối cùng là ME 100% Dịch giải ly qua cột được hứng vảo các lọ Theo dõi quá trình giải ly bằng sắc kí lớp mỏng Những lọ cho kết quả sắc ki lớp mỏng giếng nhau được gộp chung thành 1 phân đoạn Kết quả thu được 12 phan doan (ME1-ME12), được trình bảy trong bảng 2

Trang 24

Khóa luận tốt nghiệp Lâm Tran Minh Thư

Bing 1 Sac kí cột silica gel trên cao ethanol còn lại

Trọng

hee, Dung môi giải ly lượng nace Ghi chú

(g)

MEI EA 100% 7.27 Nhiéu vét | Chưa khảo sat

ME2 EA 100% 8.90 Nhiêu vết Chưa khảo sát

ME3 EA:ME 9.5:0.5 22.02 Nhiêu vết | Chưa khảo sát

ME4 EA:ME 9.5:0.5 14.39 Nhiều vết Chưa khảo sát EA:ME 9:] MES EA:ME 8.5:1.5 25.00 Nhiều vết, có Khảo sát vết đen rõ ME6 EA:ME 8.5:1.5 25.83 Nhiéu vet Chưa khảo sát EA:ME 8:2

ME? EA:ME 8:2 15.02 Nhiéu vet Chưa khảo sát

ME8 EA:ME:H;O 8:2:0.5 53.37 Nhiêuvết | Chưa khảo sát

ME9 | EA:ME:H;O 7.5:245:] 10.53 Nhieu vết | Chưa khảo sát

ME10 EA:ME:H:O 7:3:1 15.10 Nhiêu vết Chưa khảo sắt

MEII EA:ME:H;O 5:5:1 25.81 Nhiéu vet | Chưa khảo sát

ME:12 ME 100% 13.43 Nhiéu vét | Chưa khảo sát

Ghi cha: EA (ethyl acetate), ME (methanol), HyO (nước)

Trang 25

là ME 100%, Dich giải ly qua cột được hứng vào các lọ Theo đõi quá trình giải ly

bằng sắc kí lớp mỏng Kết quả thu được 7 phân đoạn (ME51-ME5?), được trình bảy trong bảng 2 Bang 2 Sac ki cét silica gel trên phân đoạn MES ciia bang 1 Phan Trọng lượng | - Dung môi giải ly Sac ký lớp mong Ghi chú đoạn (g)

Nhieu vet, vet

MES! EA 100% 0.91 Khao sat

đen tách rõ

MES2 EA 100% 0.90 Nhiêu vết Chưa khảo sát

MES3 EA 100% 1.20 Nhiêu vết Chưa khảo sát

ME54 EA 100% §.21 Nhiéu vết Chua khao sat EA:ME:H,O Ec ath MESS 5.75 Nhiéu vét Chưa khảo sát 3:26: EA:ME:H:O ee MES6 8.80 Nhiéu vét Chua khao sat 3:2.6:1 ME57 ME 100% 1.55 Kéo vệt Chưa khảo sát

Ghi cha: EA (ethyl acetate), ME (methanol), H7O (nwdc) e© Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn MES1 cia bang 2

Phân đoạn MESI (0.911) được SKC silica gel, với hệ dung môi rửa giải

H:C;:ME 4:4:0.2 và ME 100% Dịch giải ly qua cột được hứng vảo các lo Theo doi

quá trình giải ly bằng sắc kí lớp mỏng Những lọ cho kết quả sắc kí lớp mỏng giống

nhau được gộp chung thành I phân đoạn Kết quả thu được 5 phân đoạn (MESII- MES15), duge trinh bay trong bảng 3

Trang 26

Bảng 3 Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn MESI của bảng 2 Phân Trọng lượng Dung mơi giải Ìy Sac ky lop mong Ghi cha doan (g) H:CH,Cl,:ME Kai Chua khao EMSII 0.10 Nhiêu vết 4:4:0.2 sát H:CH;Cl;:ME Có một vêt màu đen rõ | Chưa Khảo ME512 0.05 ae 4:4:0.2 và nhiéu vét sat H:CH,Cl,:ME Có một vet màu đen rõ MESI3 0.25 Khảo sát 4:4:0.2 và ít vệt nâu mờ H:CH;Cl;:ME Chưa khảo MES14 0.20 Nhiều vết 4:4:0.2 sat Chua khao MES15 ME 100% 0.08 Kéo vệt i 1

Ghỉ chủ: H (hexanec) CH;C]; (dichiorometan), ME (methanol) e© Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn MES513 của bảng 3

Sắc ký lớp mỏng trên phân đoạn ME513 (0.25g) cho thấy 1 vết màu đen to rõ

và một vệt nâu mờ, hiện hình bảng thuốc thử HạSO,25% đun nóng nên phân đoạn

EA232 được SKC silica gel pha thường mét lan va mét lan SKC silica gel pha đảo đã thu được chất ở dạng dầu màu vàng nâu 100 mg R/=0.5 (hệ dung môi CH;ClI;:ME

Trang 28

Khoa luận tốt nghiệp Lâm Tran Minh Thu 2.4.3 CO LAP CAC HOP CHAT HUU CO TRONG CAO ETYL AXETATE

Thực hiện SKC silica gel trên cao ethy] acetate (80,00 g) với hệ dung môi rửa

giải CH;C];:CH:OH có độ phân cực tăng dan tir 0% đến 20% methanol Dich giai ly qua cột được hứng vảo các lọ Theo dõi quá trình giải ly bằng sắc kí lớp mỏng Những lọ cho kết quá sắc kí lớp mỏng giống nhau được gộp chung thành I phân đoạn Kết quả thu được 6 phân đoạn (EA I-EA6) được trình bày trong bảng 4

Bang 4 Sắc kí cột silica gel trên cao ethyl acetate (80.008) Phân Dung môi giải ly | Trọng lượng Sac ky lop mong su Ghi cha Sa đoạn (g)

EAI H:CH;C]; 5:5 5,28 Vệt dai Chua khao sat

EA2 | H: CHCl, 5:5 3.40 Nhiéu vết Chưa khảo sát

EA3 | CHKC:ME 9.5:0.5 253 Nhiều vết Chưa khảo sát

EA4 CN 9.5:0.5 9.00 Nhiều vết Khảo sát

EAS | CH)Cl):ME 9:1 17.86 Nhiều vết Chưa khảo sát

EA6 | CH;Cl;:ME 7:3 16.93 Nhiều vết Chưa khảo sát

Ghi chu: H (hexane), CH;Cl, (dicloromethane), ME (methanol)

2.4.3.1 Sắc kí cột silicagel trên phân đoạn EA4 (9.00g) của bảng 4

Sắc ký lớp mỏng trên phân đoạn EA4 (9.00g) của bảng 3 cho nhiều vết, có vết hiện rõ nên phân đoạn EA4 tiếp tục được sắc ký cột với hệ dung môi rửa giải

Trang 29

Khóa luận tốt nghiệp Lam Tran Minh Thu Bang 5: Sic ki c6t silicagel trên phân đoạn EA4 (9.00g) của bảng 4 Trọn Phân đoạn | Dung môi giải ly ` Sắc ký lớp mỏng Ghi chú lượng (g) EA41 CH;C]; 100% 1.23 Nhiều vết Chưa khảo sát CH;C];: ME ` EA42 1.96 Nhiều vét, táchrõ | Chưa khảo sát 9.5:0.5 CH;C];: ME `, EA43 1.64 Nhiêu vết, táchrõ | Chưa khảo sát 9.5:0.5 EA44 CH;Cl,: ME 9:1 1.47 Nhiêu vết, tách rõ | Khao sat

Ghỉ chú: CH;C]; (dicloromethane), EA (ethyl acetate)

e Sic ki cot silicagel trén phan doan EA44 (1.472) của bảng 5 —

Sắc kí lớp mỏng trên phân đoạn EA44 (1.47g) cua bang 5 cho nhieu vet va

có vét tím hông rõ nên phân đoạn EA44 được tiếp tục sắc kí cột silica gel với hệ dung môi rửa giải CH;C];: ME có độ phân cực tăng dân từ 0%-10%, Dịch giải ly qua cột được hứng vào các lọ Theo dõi quá trình giải ly bảng sắc kí lớp mỏng Những lọ cho kết quả sắc kí lớp mỏng giống nhau được gộp chung thành 1 phân đoạn Kết quả thu

được Š phân đoạn (EA441-EA445), được trình bảy trong bảng 6

Bảng 6: Sắc kí cột silicagel trên phân đoạn EA44 (9.00g) của bảng 5 Trọn “ Phân doan | Dung môi giải ly Bi: Sắc ký lớp mỏng Ghi chú lượng (g) EA44I CH;C]; 100% 0.17 Nhiêu vết Chưa khảo sát CH;CằH: ME EA442 0.30 Nhiều vết, tách rõ | Khao sat 95:05

EA443 | CH;Cl;: ME9.5:0.5 0.23 Nhiêu vết táchrõ | Chưa khảo sát EA444 CH;Cl;: ME 9:] ().50 Nhiều vết táchrö | Chưa khảo sát EA445 ME 100% 0.11 Nhiêu vết Chưa khảo sát

Ghỉ chú: CH;C]› (dicloromethane), EA (ethyl acetate.)

e® Sắc kỉ cột silicagel trên phản đoạn EA442 (0.30) của bảng 6

Sắc kí lớp mỏng trên phân đoạn EA442 (0.30g) của bảng 6 cho nhiều vết trong

đó có vét tím hỏng và tím xanh rö nên phân đoạn EA442 được tiếp tục sắc kí cột silica

Trang 30

gcl với hệ dung môi rửa giải H: EA 3:2 Dịch giải ly qua cột được hứng vào các lọ Theo đõi quá trình giải ly bằng sắc kí lớp mỏng Những lọ cho kết quả sắc kí lớp mỏng giống nhau được gộp chung thành | phan đoạn Kết quả thu được 4 phân đoạn

(EA4421-EA4424) được trình bày trong bảng 7

Bảng 7: Sắc kí cột silicagel trên phân đoạn EA442 (0.30g) của bảng 6 Phân Trọng Ì ; Dung môi giải ly — Sac ky lop mỏng Chi chú đoạn (g)

Vet tim xanh con lan vét

EA4421 H: EA 3:2 0.02 Chưa khảo sát nâu

Vét tim hong tách rõ,

EA4422 H: EA 3:2 0.06 còn lẫn một vài vết Khảo sát

khác

EA4423 H: EA 3:2 0.83 Nhiêu vêttáchrõ | Chưa khảo sát

EA4424 ME 100% 0.05 Nhiéu vet Chưa khảo sát

Ghỉ chú: H (hexane), EA (ethyl acetate.)

e Sắc kí lớp mỏng trên phân đoạn EA4422 (0.06g) của bảng 7 cho vét tím hồng tách rõ còn lẫn vài vết khác hiện hình bằng thuốc thử HạSO,25% đun nóng nên phân đoạn EA4422 được tiếp tục được sắc kí cột silica gel đảo với hệ dung môi rửa giải H,O: ME 1.6:8.4 da thu được chất bột màu trắng 10mg R/=0.5 (hệ dung môi CHCI;:ME 4.9:0.1, màu tim hồng khi hiện hình bằng thuốc thử H;ạSO¿ 25%) Kí hiệu

Trang 31

Khóa luận tốt nghiệp Lâm Trần Minh Thư

Sơ đồ 2: Sơ đỏ cô lập hợp chất hữu cơ BOR-EA-8.3 trong cao ethyl acetate

Trang 32

Khóa luận tết nghiệp Lâm Trần Minh Thư

_—— CHƯƠNG3

Trang 33

Khỏa luận tết nghiệp Lam Tran Minh Thư

3.1 Khảo sát cầu trúc hóa học của hợp chất BORMEI

Chat dang dau mau vang nau

Dir ligu phd 'H-NMR (500MHz, DMSO-d,), °C-NMR(125 MHz, DMSO-d,), DEPT-NMR được trình bảy trong bang 3.1.(Phu lục /, 2)

Pho HSQC được trình bày ở phụ lục 3

Phỏ HMBC được trình bày ở phụ lục 4

+ Biện luận cấu trúc BORMEI

Phỏ 'H-NMR của hợp chất BORMEI cho tín hiệu cộng hưởng của proton =CH-

ở õ 8,72 (s); 6.55 (d, J=3,5 Hz) và 5.77 (d, J=3,5 Hz), proton -CHạ- õ 3.80 (s)

Pho °C kết hợp với DEPT-NMR cho thấy hợp chất có 6 carbon bao gồm 3

carbon loại =CH cộng hưởng ở ðc 169,9; 115,3 và 101.3: 2 carbon olefin =C< cộng hudéng 6 dc 153,6 va 144,3; nhóm -CH;- cộng hưởng ở ðc 48, l

Các tương quan trong phổ HSQC cho thấy rằng proton ở ô„ 8,72 gắn trên

carbon ðc 169,9: 2 proton olefin còn lại ở 8, 6.55 va 5,77 gắn trên 2 carbon tương ửng

lân lượt cộng hưởng ở ðc 1 15.3 và 101,3

Sự tuong quan HMBC tir proton & 8 6,55 dén carbon & &¢ 153,6;144,3 va

101.3; proton olefin céng hudng tai 5, 5,77 ciing cho tuong quan dén carbon tai 153.3;

144.3 và 1 carbon khác ở ðc 115,3 Proton -CHạ- cho tương quan dén carbon 6 ðc 153,6 7 | Y

Hình 2 Tương quan HMBC trong hop chat BORME1

Do thời gian có hạn từ những dữ liệu NMR, cấu trúc của hợp chất BORMEI

tạm được đẻ nghị như sau với các số liệu NMR trong bảng 8

Trang 34

Khỏa luận tốt nghiệp Lâm Trin Minh Thu Công thức hợp chất BORMEI Bảng 8: Dữ liệu phô NMR của hợp chất BORME! VỊ trí ôn (ppm) dc (ppm) HMBC ('H-’C) 2 144.3 3 6.55 (d, 3.5) 115.3 2,4, 5 4 5.77 (d, 3.5) 101.3 2, 3,5 5 153.6 6 3.8 (s) 48.1 4,5 7 8.72 (s) 169.9 2 3.2 Khảo sát cấu trúc hóa học của hợp chất BOR-EA-8.3 Bột màu trắng Dữ liệu phổ 'H-NMR (500 MHz, CDCI;-MeOD) và !ÌC-NMR (125 MHz, CDCI:-MeOD), DEPT-NMR được trình bày trong bảng 3.2.(Phự lục 5, 5a, 6, 6a, 6b, 7, 7a)

+ Biện luận cấu trúc BOR-EA-8.3

Phổ 'H-NMR của hợp chất BOR-EA-8.3 cho thấy tin hiệu cộng hưởng của

proton olefin & 6, 5,27 va 5,24; proton -CH)-O- 6 5, 3,65 va 3,39; proton >CH-O- ở 5, 3,60 Ngoai ra, con c6 proton cla nhom —CHy ở vùng từ trường cao ð, 0,77-1,1

Phé °C kết hợp với DEPT-NMR cho thấy hợp chất BOR-EA-8.3 có carbon

>C=O của nhóm -COOH cộng hudng 6 180 Cac carbon >CH-O- cộng hưởng ð‹ 716.6 (2C) — -CH;-O- cộng hưởng tại ð¿ 71.7 vả 71,7 Từ các cặp mũi cộng hưởng ở ö, 122.3 và 143,9; 125.5 và 138,2 kết hợp với các tin hiệu cộng hướng của proton

olefin vả proton của các nhóm -CH; ở vùng từ trưởng cao trong phỏ 'H-NMR cho phép dự đoán hợp chất BOR-EA-8.3 là hỗn hợp của 2 triterpen với khung sườn olean-

31

Trang 35

Khóa luận tốt nghiệp Lâm Tran Minh Thư

I2-en (BOR-EA -8.3a) và urs-I 2-en (BOR-EA -8.3b) cùng có nhóm —COOH ở vị trí 28 Trong cầu trúc của hai chất trong hỗn hợp nảy còn có nhóm -CH;OH

Dựa vào câu trúc khung olean-12-en và urs-12-en cho thấy nhóm hydroxy của ~CH;-OH chỉ có thể gắn trên các carbon C-23~C-30,

Vì xuất hiện carbon —CH; cộng hưởng ở õc 11.4 và 11,5 nên dự đoán cấu trúc

BOR-EA-8.3a va BOR-EA-8.3b có nhóm —OH gắn trên C-23

Do thời gian có hạn, dựa vào đữ liệu phỏ NMR trên và so sánh với dữ liệu phố

NMR của các hợp chất hederagenin (SSl), urs-12-en-3B.23-dihydroxy-28-oic acid

(SS2) urs-12-en-2ø,3ƒ.23-dihydroxy-28-oic acid (SS3) cho thấy có sự tương đồng tương đối giữa 2 hợp chất BOR-EA-8.3a và SSI, BOR-EA-8.3b và SS2, cho nên cầu

trúc của 2 hợp chất BOR-EA-8.3a và BOR-EA-8.3b trong hỗn hợp BOR-EA-8.3 tam

Trang 36

Trang 37

Khoa luận tốt nghiệp Lim Trin Minh Thư

CHUONG 4

KET LUAN VA DE XUAT

Trang 38

Khỏa luận tốt nghiệp Lâm Tran Minh Thư

4.1 KẾT LUẬN

Việc khảo sát thành phân của cây Ruột gả có khớp (Borreria articularis) thu

hái tại Phan Thiết - Bình Thuận đã thu được kết quả như sau:

Từ phân đoạn MES (sơ đỗ 2) của cao ethanol con lai, sir dụng các phương pháp trich ly, chiết xuất, đã cô lập được hợp chất BORME] Sử dụng các phương pháp phân tích hóa lí hiện đại NMR đã tạm để nghị cấu trúc BORMEI như sau:

Từ phân đoạn EA4 (sơ đỗ 3) của cao ethyl acetate, sử dụng các phương pháp

trích ly, chiết xuất, đã cô lập được hợp chất BOR-EA-8.3 Sử dụng các phương pháp

phân tích hóa lí hiện đại NMR, kết hợp so sánh với tài liệu tham khảo đã tạm đẻ nghị

câu trúc BOR-EA-8.3 là hỗn hợp của 2 chất hederagenin (BOR-EA-8.3a) và urs-l2- en-3$-23-dihydroxy-28-oic acid (BOR-EA-8.3b)

Hederagenin Urs-12-en-3B-23-dihydroxy-28-oic acid

4.2 DE XUAT

Do hạn ché vẻ thời gian, trong khóa luận này, chúng tôi chỉ mới tiền hành phân lập với một số phân đoạn cao và tạm đẻ nghị cấu trúc của những chất ở trên Vì vậy,

trong thời gian tới, chúng tôi sẽ tiếp tục nghiên cứu kĩ hơn đề có thẻ đưa ra được câu

trúc chất một cách chính xác nhất Đồng thời, còn rát nhiều phân đoạn chúng tôi chưa

nghiên cứu nẻn chúng tôi cũng sẽ tiếp tục nghiền cửu trên các cao và các phân đoạn

Trang 39

TÀI LIỆU THAM KHẢO:

Tài liệu tiếng Việt

1 VO Van Chỉ (2012) *Từ điển cây thuốc Việt Nam", NXB Y Học, Hà Nội, tập 2, 626

Tài liệu tiếng Anh

2 Baldé AM, Pieters LA, Gergely A, Wray V, Claeys M, Vlietinck AJ, (1991),

Spermacoceine, a bis-indole alkaloid from Borreria verticillata Phytochemistry, 30, 997-1000

3, Chopra, RN, Nayar, SL, Chopra IC (1956), Glossary of Indian Medicinal Plants; CSIR; New-Delhi, 39

4 Kamiya K, Fujita Y, Saiki Y, Hanani E, Mansur U, Satake T, (2002), Studies on the constituents of Indonesian Borreria latifolia Heterocycles, 56, 537-44

5 Kaviarasan K, Kalaiarasi P, Pugalendi V, (2008), Antioxidant efficacy of flavonoid- rich fraction from Spermacoce hispida in hyperlipidemic rats J App| Biomed, 6, 165- 76

6 Lucia Maria Conserva and Jesu Costa Ferreira, Junior Borreria and Spermacoce species (Rubiaceae): A review of their ethnomedicinal properties, chemical constituents, and biological activities

7 Moreira VF, Oliveira RR, Mathias L, Braz-Filho R, Vieira UJ, ( 2010), New

chemical constituents from Borreria verticillata (Rubiaceae) Helv Chim Acta), 93,

1751-7

8 Mukherjee KS, Mukhopadhyay B, Mondal S, Gorai D, Brahmachari G, (2004), Triterpenoid constituents of Borreria articularis J Chinese Chem Soc, 51, 229-31

9 Noiarsa P, Yu Q, Matsunami K, Otsuka H, Ruchirawat S, Kanchanapoom T, (2007),

(Z)-3-hexenyl diglycosides from Spermacoce laevis Roxb J Nat Med, 61, 406-9

10 Parameshwar H, Krishna Mohan G, Ravi Kumar B, Narsimha Reddy Y, (2010),

Hepatoprotective effect of the methanolic extract of whole plant of borreria articularis on carbon tetrachloride induced hepatotoxicity in albino rats, Journal of

Pharmaceutical Research & Health Care, 2 (4), 285

11 Sainty D, Bailleul F, Delaveau P, Jacquemin H, (1981), Iridoids of Borreria verticillata Planta Med, 42, 260-4

12.Sazia Afreen Rahee Jony Mallik (2012), Phytochemical screenings of the methanol extract of whole plant Borreria articularis, International Journal of

Pharmaceutical & Biological Archives, 3(5), 1062-1066

13 Shashi B.Mahato, Asish P.Kundu, (1994), °C NMR spectra of pentacylic triterpenoids- a complilation and som salient features phytochemistry, 37 (6), 1517-

1578

14 Sultana R, Rahman MS, Bhuiyan MN, Begum J, Anwar MN, (2008), In vitro

antibacterial and antifungal activity of Borreria articularis Bangladesh J Microbiol

25, 95-8

Trang 40

15 Vadivelan S, Sinha BN, Betanabhatla KS, Christina AJ, Pillai RN, (2007), Anti- inflammatory activity of Spermacoce articularis Linn on carrageenan induced paw

edema in Wistar male rats Pharmacologyonline, 3, 478-84

16 Vieira IJ, Mathias L, Braz-Filho R Schripsema J, (1999), Iridoids from Borreria verticillata, Org Lett, 1, 1169-71