Khảo sát thành phần hóa học cây đinh năng trổ

Trang 1

BO GIAO DUC VA ĐĂO TẠO

TRUONG DAI HOC SU PHAM THANH PHO HO CHi MINH ca LO) KHOA LUAN TOT NGHIEP CU NHĐN HÓA HỌC (huyền ngănh: Hóa Hữu Cơ OE TAL

KHAO SAT THANH PHAN HOA HO CAY BINH LANG TRO

Polyscias Guilfoylei var quinquefolia Bail

Trang 2

KHOA LUAN TOT NGHIEP GVHD: NGUYEN THI ANH TUYET

_——>>——>rzrzm>zmzZ2Z2ZĩïZïmïssaa>>m>mmmm—m>>>>xsaaasz-ẳaơơamE

LOI CAM ON

Hoan thanh luận văn năy, tôi xin chđn thănh cảm ơn

% Cô Nguyễn Thị Anh Tuyết đê luôn tận tỉnh chỉ bảo, hướng dẫn cũng như

động viín, khuyến khích tôi trong suốt thời gian thực hiện đẻ tải

Thấy Nguyễn Thụy Vũ, thđy Mai Anh Hùng vă thầy Nguyễn Trung Kiín đê

tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi hoăn thănh luận văn

Quý thầy cô Khoa Hoâ trường Đại học Sư Phạm Thănh phố Hỗ Chí Minh đê

đạy đỗ tôi trong suốt thời gian học tập tại trường

Cha Mẹ đê nuôi nắng, dạy đỗ tôi, lă chỗ dựa tính thđn vững văng nhất giúp tôi vượt qua mọi khó khăn trong cuộc song

* Ban bĩ thđn thiết đê luôn bín cạnh động viín, quan tđm giúp đỡ vả cho những lời khuyín quỷ bâu nhất trong suốt những năm học ở trường

Do lan dau tiĩn lam quen với nghiín cứu khoa học, chưa có kinh nghiệm vă do thời

gian có hạn nín luận văn không thể trảnh khỏi những sai sót, mong thđy cô vă câc

Trang 3

MUC LUC

DONA ON essecces statis sia oy aN AR SSE ease eRe a ca |

DEUS CI cscs cxvccrcecconservnnrcemnineianieareeeonsssreapeereanatvears 5 2

CAC Ki HIEU, CHU VIET TAT TRONG KHOA LUAN K24 2” iain: 4

KẾN MÔ ĐẦU:ss:s—: 06c 0021001014016 0000560022AGGAG.01AG:S4 02200 0s66 kă2/i& 5

CtGt “(ONGOUẤN seesiseeeeseeeecneieeneececrkeee-sgbSg4664603140059)44606112.c)46306 6

Lt MO TA THUC VAT , bu adie ENE SRO SRT re 6

|2 CÂC NGHIÍN CỨU VĨ DƯỢC TÍNH set) (00320086620 6

1:1: 200L GIO HN saosvxesesersneeeseoeeieeeeeeieeeoisoenoeeoeoie.co 6

2:2 Prðiyw@uw fiHtoM(LJHĂVWN-GSS ¿c2 ae my

12.3 Polyscias scutellaria (Burm, F ) Merr - Sans6 23/1666s24 7

L2 TARE 00T ĐT prectncseryveceosconsyr crore peremmnneyy rece mnieeneoompptennnceponnnermniearenneis 7

1.2.5 Polyscias balfouriana Bai| (1606202002246 k0 22Ă6020//A10210E § 1.2.6 Một số băi thuốc dđn gian vẻ được tính của cđy định lêng

" 1L.L.—®L .- ——_ ỂĂẶ —_ TH ng 9

1.3 CÂC NGHIÍN CỨU VỀ HỎA HỌC SAO ie pee a ea 9

1.3.1 Polyscias filicifolia Bail 123 ((Gx666420345G6â62S6- tý) 2422536XG<SC244eczeee sae 10

1.3.2 Polyscias fruticosa (L ) Harms neo 10

13242 mod l@Wena0HGS+âtxxe xin xung 19

1.3.5 Polyscias dichroostachya .0 c0ecccesseeevervnvereees Ablc?2v)9E26etẳ4dghău 21

L3:6: P00 HN 4v ciSsssavae 0 0/20260016420u1002100RĂ Măn hâ 23

L3; CO NVCN.NGQQANGL1G2106002Gii2ava: Nolldseô044e0Qupixoine

MU 0N GV) NO eneesseesesereeeovpeosnetosseerviexerccvaeeyyyivcoee96e46) 24

Chương 3: THUC NGHIBM isis a aaa L0 25

I:::Nguyín liệu, hóa chất, thiết ĐÍ- s ĩ s22 c2 0202-062-222 2006 gas

II Điều chế câc loại cao 0 22205121 T1 11 HT 11g ve 26

II Cô lập một số hợp chất hữu cơ trong cđy co o2 520 20220 27

II Cô lập một số hợp chất hữu cơ trong cđy 28

II 1 Sắt ký cột silicagel âp đụng trín cao metanol 1 no

III2 Sắc ký cột silicagel âp đụng trín phđn đoạn II1.3 ae

Trang 4

III.3 Sắc ký cột silica gel âp dụng trín phđn đoạn [II.3.Ì 5 55 5 2555525 29

111.4 Sac ky cĩt silica gel ắp dụng trín phđn đoạn III.3.2 đi 64 cine

Chương lII: KHẢO SÂT THANH PHAN VA CAU TRUC HOA HOC CUA CAC

MÂLU! CHÂT THU ĐƯỢC, 2 0n 52 E5 510522121225 xe Sa, 3

I Khao sat cau trúc hỏa học của hợp chất GUI-| Sê600i4-622ae55

Il Khâo sắt cấu trúc hóa học của hợp chất ŒUI-4 5-52-5222 c3 cc22 sg;tă¬ Ti Ê [II Biện luận cấu trúc - 52 5 3222259515 5155 252102171011 121221032225 2111 211 ceS eeg 33

Chương 4: KĨT LUẬN 24000904(018/00370442A60GGeVẰa-Ñ

T01 110 HĂ sxeaveeavasaeoavaeruasaeoeaxoeaseroesenesee› BWAVAG210-0 5) 40

Trang 5

KHOA LUAN TOT NGHIEP hrs brd m RP-18 NMR DEPT HSQC HMBC H-H COSY GVHD: NGUYEN THI ANH TUYET

CAC KI HIEU, CHU’ VIET TAT TRONG KHOA LUAN

: mii don (singlet) - mui dĩi (doublet)

: mui don rong (broad singlet) mut ba (triplet)

: mũi đôi rộng (broad doublet) : mũi đa (multiplet)

- hằng số ghĩp (coupling constant)

: Reverscd Phase C- |8 - phô cộng hưởng từ hạt nhđn

(Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy)

: Distortioniess Enhancement by Polarization Transfer : tương quan H-C qua | ndi

(Heteronuclear Single Quantum Coherence)

- tương quan H-C qua 2, 3 nỏi

(Heteronuclear Multiple Bond Coherence) - phô tương quan giữa proton-proton

(H-H COrrelation SpectroscopY)

“———— ———————————————————————————_ =-——-

Trang 6

——Ee———————————————EEEEE————————

LOI MO BAU

Ngăy nay, cùng với sự tiền hộ vượt bậc của câc ngănh khoa học, kỹ thuật

nói chung, ngănh hóa học vẻ dược liệu cũng đê góp phản không nhỏ văo sự phât

triển ấy nhằm chăm sóc sức khóe cho con người ngăy một tốt hơn

Nước ta lă một nước nhiệt đới, nóng đm vì thẻ có nguồn thực vật rất phong phú vă đa dạng Cùng với xu hướng ngăy nay lă sử dụng câc loại thuốc có nguồn góc tử thiín nhiín để chữa bệnh cho con người thì việc nghiín cứu thănh phđn hỏa

học của cđy có lă một nhu cđu cắp thiết

Mĩt sO loai thudc chi Polyscias nhu Polyscias fruticosa (L.) Harms Polyscias balfouriana Balf duge dan gian va y hoe ding dĩ bdi bĩ sire khoe, chong

mệt mỏi vả điều trị một số bệnh như đau tử cung, mắn ngứa do dị ứng, nhức đđu Với một số loăi thuộc chỉ oiyscias đê được nghiín cứu thănh phần hóa học cho thấy có chứa một số hợp chất thiín nhiín thuộc loại steroid, triterpenoid,

saponin vă những hợp chất thiín nhiín năy thường có liín quan đến được tính đê

biết,

Chúng tôi chọn khảo sât thănh phần của cđy Poliscias guilfoylei var quinquefolia Bail lă cđy chưa được nghiín cứu ở Việt Nam vả thể giới nhằm góp

phản lăm sâng tỏ thănh phan hóa học của chi Polyscias, tir d6 gilp cho việc khai

thắc vả sử dụng hợp lý nguôn tải nguyín thực vật

Trang 7

KHOA LUAN TOT NGHIEP GVHD: NGUYEN TH] ANH TUYET

Ƒ_———————————— ————

Chuong! TONG QUAN 1.1MO TA THUC VAT !°

Cđy Định lăng trổ có tín khoa học lă Polyscias guilfoylei var quinquefolia Bail., thudc chi Polyscias, ho Nhan

sim (Araliaceac)

Cay bụi, cao 3-4m, than cay it phđn nhânh, lâ đa dạng Lâ có mău lục sảng, lâ hai lần kĩp, lâ phụ thong, bia la cỏ rằng vả trô trang

Ngoăi cđy Polyscias guilfoylei

var quinquefolia Bail trĩn, hiĩn nay

trín thẻ giới có một số loăi khâc như:

Polyscias balfouriana Bail Polvscias

filicifolia, Polyscias scutellaria (Burm Hinh 1: Polyscias guilfoylet var,

F) Mer, Polyscias fruticosa (L.) quinquefolia Bail

Harms Polyscias serrata Balf, Polyscias amplifoi, Polyscias dichroostachy, Polyscias fulv, Polyscias nodos, Polyscias sp Nov

L2 CÂC NGHIÍN CỨU VẺ DƯỢC TÍNH

[heo tăi liệu tham khảo cho thấy chỉ có l nghiín cứu trín cđy Polyscias vuilfovlei Bail dĩ la la tươi, dịch trích nước vă địch trích diclorometan (CH›C1›) của cđy Polyscias guilfoylei Bail năy có khả năng quyền rũ ruôi trâi cđy L'

Chúng tôi xin trinh bảy thím được tính của một số cđy khâc củng chỉ

1.2.1 Polyscias filicifolia Bail

Dich trich ty sinh khoi cua te bao cay Polyscias filicifolia co kha nang khang rat manh chung vi khuan Staphylococcus aureus va khang yíu với 3 chủng vi khuan: Micrococcus flavus, Streptococcus pyogenes V a Sreptoc 'OCCHY avgalatiae

Trang 8

Dịch trích etanol 40% từ sinh khối của những tế bảo cđy Polyscias filicjfolia

duge ap dung lĩn giĩng Salmonella typhimurium TA 98 va TA 100 thi nhan thay cĩ hoạt tính mạnh vẻ khâng đột biến gen.!"*!

1.2.2 Polyscias fruticosa (L.) Harms.” ( Dinh lang)

Cay Polyscias fruticosa cĩ tac dung lam tang sire chiu dung cua co thĩ ddi

với một số yếu tó như: kiệt sức nóng Thực nghiệm trín người cho thấy, cđy Polscias fruticoasa lăm tăng khả năng chịu đựng của bộ đội, vận động viín thẻ thao

Câc thí nghiệm trín chuột cho thấy cđy olyscias wficosa có khả năng lăm

tăng tiết niệu gắp trín năm lắn so với bình thường, lăm tăng sức đẻ khâng của chuột

với câc bức xạ si€u cao tần, kĩo dải thời gian song của chuột

Cđy Polyscias Íruticosa còn có tâc dụng chữa ho, kiết lị, phong thấp, mụn nhọt

sưng tđy, sốt, Năm 2001, Nguyễn Thị Thu Hương vă cộng sự Í”Ì đê đùng chuột nhất

trăng để thử nghiệm tâc dụng chống tram cảm vă stress của Dinh lang (Polyscias fruticosa ), Kĩt qua cho thay cao Dinh lang cĩ tac dung chĩng tram cam vă phục hỏi thời gian ngủ bị rút ngắn bởi stress, ở liều 45-180 mg/kg thĩ trong, khoang liĩu nay

cũng có tâc dụng khâc như tăng lực, kích thích hoạt động của nêo bộ vả nội tiết, tăng sức đẻ khâng của cơ thí, chống viím vă xơ vữa động mạch

Dịch chiết côn của rễ Định lắng được nuôi cấy mô trong 6 thâng đê thẻ hiện tâc

đụng tăng lực dải ngăy, chống stress nóng vă khâng viím thực nghiệm tương tự như dịch chiết côn cua rĩ cay Dinh lang 5 nam tudi trong trong điều kiện tự nhiín

1.2.3 Polyscias scutellaria (Burm f ) Merr/'”

Cao trích có chứa sanonin của cđy Polyscias scutellaria ap dung trĩn chudt

Trang 9

- Acid 3-O-/LD-galactopyranosyl oleanolic

- Acid 3-O-/*D-galactopyranosy!-+ 1—»4)-/+D-galactopyranosy! oleanolic - Acid 3-O-#-D-galactopyranosy|l-(1—>4) D-xylopyranosy! oleanolic - Acid 3-O-/+-D-galactopyranosyl-(1—>4)-a-L-arabinopyranosy!| oleanolic Câc hợp chất nảy khi thử nghiệm hoat tinh chĩng lai dong tĩ bao ung thu budng trime A2780 & ngudi thi ching thĩ hiĩn hoat tinh yĩu v6i giâ trị ICs lă 6.7-

10.8 pl/ml

1.2.5 Polyscias balfouriana Bail

Theo Phan Quĩc Kinh "|, the pham chite nang tĩn thuong mai la CERATO, có bân trín thị trường với thănh phản chứa lă cao Tật lí, cao Dđm dương hoôc vả

Trang 10

IL2.6 Một số băi thuốc dđn gian về dược tính của cđy đỉnh lăng (Polyscias fruticosa )

Theo đđn gian, Định lêng được dùng lăm thuốc bỏ, chữa cơ thẻ suy nhược, gầy

yíu, mệt mỏi, tiíu hóa kĩm ho, ho ra mâu, đau tứ cung, kiết ly, lăm thuốc lợi tiíu vă chẳng độc Dưới đđy lă một số băi thuốc đđn gian có Định lng F'2#!

ôâ Cha mt mi, biếng hoạt động: Rẻ Định lăng phơi khô thâi mỏng, 0,50 ø thím 100 ml nước, đun sôi trong 15 phút, chia 2-3 lần uống trong ngăy

«Ồ Chữa sốt lđu ngăy, nhức đầu, hâo khât, ho, đau tức ngực, nước tiểu văng: Định lăng tươi (rẻ, cănh) 30 g, lâ hoặc vỏ chanh 10 g, vỏ quýt 10 g, lâ tre tươi 20 g, cam thao dat 30 g, rau mâ tươi 30 g, me chua đất 20 g Câc vị cắt nhỏ đồ ngập nude, sac dac lay 250 ml, chia uống 3 lần trong ngảy

e Lợi sữa: Lâ Định lêng tươi 50-100 g, bong bóng lợn | cai, bam nho, trộn

với gạo nếp, nấu châo ăn Hoặc rễ Định lêng tươi 30-40 g, thím 500 ml nude, sic

còn 250 ml, uống nóng, ngăy uống I-2 lđn, uống trong 2-3 ngăy

e© La Dinh lang phơi khô đem lót gồi hoặc trải giường cho trẻ em nằm giúp

phòng bệnh kinh giật

¢ Ở Ân Độ, người ta cho lă cđy có tính lăm săn, dùng trong điều trị sốt

e« Ở Campuchia, người ta dùng lâ phối hợp với câc cđy thuốc khâc lăm bột hạ nhiệt, thuốc giảm đau La dùng xông đẻ ra mô hôi vă chữa chứng chong mit, ding

tươi giê nât đắp ngoăi trị viím thần kinh khớp vă vết thương 1.3 CÂC NGHIÍN CỨU VẺ HÓA HỌC

Do chưa tìm thấy tải liệu nghiín cứu vẻ thănh phần hoa hoc của cđy

Polyscias guilfoylei var, quinquefolia Bail ching tĩi xin trinh bảy một số nghiín cứu hóa học trín một số cđy khâc củng chỉ

Trang 11

1.3.1 Polyscias filicifolia Bail

Nam 1980, Dalaki Shvili Ts M va cac cĩng su |'*! da cĩ lap duge hai acid

bĩo chưa xâc định được công thức, nhưng câc acid bĩo năy giống với câc acid hẻo da cĩ lap tir rĩ cay Panax ginseng 6 nam tudi

Nam 1982, Mikhailova N V va cae cong su '*"! da cĩ lap duoc #-sistosterol (1) tir cao benzen: clorofom (1:1) cua cay Polyscias filicifolia

(1) 1.3.2 Polyscias fruticosa (L.) Harms

Nim 1990, Brophy Joseph J, va cdc cong sy |'*! da ding phuong phap GC-MS

đẻ phđn tích định tính tỉnh dđu lâ cđy Kết quả cho thấy trong tỉnh dầu có khoảng 24 cầu tử, trong đó có 4 cấu tử chính: @elemen; œ-bergamotcn; germacren-J; E- bisabolen

Năm 1992, Lutomski vả câc cộng sự Í°°Ì đê cơ lập được tử rẻ 5 hợp chất: (alcarnol (2), (#)-heptadeca-l Ñ8-dien-4,6-đdiyn-3,10-điol (3); (£)-heptadeca-|,8-

dien-4,6-diyn-3-ol- 10-on (4), (Z)-heptadeca-! ,8-dien-4,6-diyn-3-ol-10-on — (5);

panaxydol (6)

Trang 12

KROA LUAN TOT NGHIEP GVHD: NGUYEN THI ANH TUYET (5) Nam 1992, Nguyễn Thị Nguyệt vă câc cộng sự ÍÌ đê cơ lập được acid oleanolic (7) (7)

Năm 1995, Chaboud A vă câc cộng sự 'Ì đê cô lập từ lâ thím một saponin

tierpen đó lă acid 3-O-$D-galactopyranosyl-(1—>2) D-glucopyranosy!l

oleanolic (8)

Trang 13

KEOA LUAN TOT NGHIEP GVHD: NGUYEN TH] ANH TUYET On „„ê mo ¬.— \ el ear ° on (8)

Năm 1996, J Proliac va cac cong su |”! da cĩ lap tir la kho | hop chat

Trang 18

KHOA LUAN TOT NGHIEP GVHD: NGUYEN THI ANH TUYET ——) HO "m o no 0 œ O on oO HO, On HO’ 3-Q-|/-I)-galactopyranosyl-(1—>2), + D-glucopyranosyl-(l—>3)]-/+D- glucuronopyranosy!-28-O-/-D-ramnopyranosyl-(!—>3)-/-D-glucopyranosy! oleanolat (19) 1.3.3 Polyscias scutellaria (Burm f.) Merr

Năm 1988, S Paphassarang vả câc cộng sự Í°°Ì đê cơ lập được hợp chất lă:

3-0-$-D-glucopyranosyl oleanan (20)

Năm 1988, S Paphassarang va câc cộng sự 27.28) 44 06 lập từ lâ câc hợp chất:

acid 3-O- f-D-glucopyranosy!-( 1 -»4)-/@-D-glucopyranosyl-( | -»2) D-

Trang 19

KHOA LUAN TOT NGHIEP

Ho =

HO 0 “ Hy CH,

Trang 20

KHOA LUAN TOT NGHIEP GVHD: NGUYEN TH] ANH TUYET a na OH QH o HO i Š HO 9 9 o HO HỒ On OH (23) 1.3.4 Polyscias amplifolia Nam 2003, Chatuvedula V, S Prakash va cdc cong su!" đê cô lập được từ quả 4 hợp chất lă:

- Acid 3-0-/-D-galactopyranosy! oleanolic (24)

Trang 22

8

1.3.5 Polyscias dichroostachya

Năm 1990, N Gopalsmy cùng câc cộng sự Í°*Ì đê cô lập được 4 hợp chất:

® 3-()-œ-L-arabinopyranosyl hederagenin (28)

® 3-()-œ-L-ratmnopyranosyl-( I—>2)-œ-L-arabinopyranosyl hederagenin (29) ® 3-()-ƒ-D-glucopyranosyl-( | —»2)-œ-L-arabinopyranosyl hederagenin (30)

® 3-)-œ-L-ramnopyranosyl-( I—>2)-œ-L.-arabtnopyranosyl hederagenin-

28-@-J'-D-glucopyranosid (31)

Tâc giả Lee Kyung vă câc cộng sự Í'”! đê cho biết câc hợp chất hederagenin vă

Trang 24

re

1.3.6 Polyscias fulva

Năm 2001, Bedir cùng câc cong su "* đê cô lập từ lâ một giicosid: I2-oxo-3J1, L6{3-20(5)-trihidroxidammar-24-en- 31-()-œ-L.-ramnopyranosyl-( | -»2)-{)- D-glucopyranosid (32), CH, CH, On x — On, oO x ke (32)

Trang 25

1.3.7 Polyscias nodosa

Năm 1913, Van der Haar va cdc cong sy '*"! da cd lap duge mĩt hop chat

Trang 26

Chuong 2: THUC NGHIEM I Nguyín liệu, hóa chất, thiết bị

“+ Nguyín liệu

Cđy định lêng trô được thu hâi tại Tiền Giang vă được nhận danh bởi ThS

Liíu Hô Mỹ Trang - Bộ môn Hóa Thực vật - Trường Đại học Y Dược Tp.HCM

Sau khi thu hâi, lâ cđy được rửa sạch, loại bỏ lả văng úa, phơi khô trong bóng rđm,

để nơi thoâng mât, say 6 60°C đến khối lượng không đổi Sau đó, lâ được xay thănh bột, bột nảy được dùng đề điều chế câc loại cao

+ Hóa chất

- Dung môi: eter đầu hỏa, clorofom etanol, metanol được lăm khan bằng Na;SO, - Silica gel: Silica gel 60, 0,04-0,06 mm, Merck dùng cho cột sắc kí

- Silica gel pha dao, RP-18, Merck ding cho sac kí cột

- Sắc ky bảng mỏng loại 2SDC - Aflufolein 20x20, Kiesel gel 60F;s¿, Merck - Sắc ký bảng mỏng loại 25DC, RP-1§, Merck

- Thuốc thử hiện hình sắc kí lớp mỏng: H;SO, đặc s Thiết bị

- Câc thiết bị đùng để giải Ìy, trích, lọc (lọ thủy tỉnh, bình tam giâc) - Mây cô quay chđn không: Hetdolph

- Câc cột sắc kỷ

- Pho cộng hudng tir hat nhan 'H-NMR duge thuc hiĩn trĩn may cong huĩng tir hat

nhđn BRUKER AC 20, tần số cộng huĩng 500 MHz

Trang 27

eed

- Phd cong huong tir hat nhan '°C-NMR ket hop ky thudt DEPT duge thye hiĩn trĩn

may cong hudng tir hat nhhan BRUKER AC.200, tan so cOng hưởng 125 MHz

Tất cả phỏ được ghi tại Phòng phđn tích cấu trúc, Viện Hóa học, Viện KH & CN VN, 18 Hoảng Quốc Việt, phường Cầu Giấy, Hă Nội

Il Điều chế câc loại cao

Bột nguyín liệu được ngđm dam trong dung môi etanol Sau văi ngảy, lọc lấy dịch trích, cô quay thu hỏi dung môi đưởi âp suất thấp thu được cao etanol,

Sac ky cĩt silica gel trĩn cao etanol (108 g), giai ly lần lượt bằng câc đơn dung môi có độ phđn cực tăng dần Dung dịch giải ly cua cling | don dung mĩi được gom lạt, loại dung môi thu được câc loại cao tương ứng Kết quả thu được 3 loại cao: cao ete dau, cao clorofom, cao metanol

Quy trinh điều chế 3 loại cao được trình bảy trong sơ do |

(ee

Trang 28

KHOA LUAN TOT NGHIEP GVHD: NGUYEN THI ANH TUYET So d6 |: Diĩu chĩ cao ete dau, cao clorofom va cao metanol tir la cđy dinh lang (1,06kg) Bột lâ khô Ngđm dam trong ctanol Loc | Bă lâ khô | Dich etanol | Cô quay thu hồi dung môi ed Cao etanol( 108g)

Sắc ký cột silica gel, giải ly bằng dung môi: ete dầu, clorofom, metanol Cao Ete dau I

- Cô quay thu hồi dung mỗi

Trang 29

aD

[1] Cô lập một số hợp chất hữu cơ trong cđy

Kết quả sắc ký bảng móng trín cao metanol có vết rõ, đẹp nín chúng tôi chọn

loại cao năy đề khảo sât

HIL 1 Sắt ký cột silicagel âp dụng trín cao metanol

Sắc ký cột silicagel âp dụng trín cao metanol 62 (g), lần lượt giải ly bằng câc

hệ dung môi từ kĩm phđn cực tới phđn cực (clorofom: metanol 9:1; clorofom: metanol 4:1; clorofom: metanol: nước 96:2§:3; metanol: nước 19:1) Dịch giải ly

qua cột được hứng văo câc lọ, kiểm tra theo dõi quả trình giải ly bằng sắc ký bảng mỏng Những lọ có kết quả sắc ký bảng mỏng giống nhau được gộp chung lại thănh

một phđn đoạn Kết quả được trình băy trong bảng l

hận xĩt: kết quả sắc ký cột silica gel âp đụng trín cao metanol thu được 4

phđn đoạn được sắp xếp theo thứ tự từ HI,I đến IH.4, trong đó phđn đoạn 3 cho

nhiều vết, câc vết rõ Vì vậy chúng tôi chọn phđn đoạn III.3 để khảo sât Câc phđn

đoạn còn lại, kết quả sắc ký bảng mỏng cho nhiều vĩt gần nhau hoặc cho câc vệt kĩo đăi nền chưa khảo sât

LII.2 Sắc ký cột silicagel âp dụng trín phđn đoạn III 3

Tiến hănh sắc ký cột silica gel trín phđn đoạn III.3 30,04 (g),giải ly bằng hệ

dung môi có độ phđn cực tăng dần (clorofom: metanol: nước 96:28:3; metanol: nước

19:1) Kiểm tra theo dõi quâ trình giải ly bằng sắc ký bảng mỏng Những lọ có kết

quả sắc ký bảng mỏng giống nhau được gộp chung lại thănh một phđn đoạn Kết quả được trình bảy trong bảng 2

Nhđn xĩt: kết quả sắc ký cột silica gel âp dụng trín phđn đoạn III.3 được 3 phđn đoạn ký hiệu từ III.3.1 đến HI.3.3

Trong đỏ, kết quả sắc ký bảng mỏng của phđn đoạn III.3.1(3g), giải ly bằng hệ dung môi elorofom: metanol 4:1 (thuốc thử sắc kỷ bảng mỏng lả H;SO; đậm đặc)

cho | vết đỏ sen RÝ = 0,4 bín cạnh đỏ còn nhiều vết nằm sắt nhau ở gan vach xuat

Trang 30

Vì vậy, chúng tôi chọn phđn đoạn IlII.3.I vă LH.3.2 để khảo sât Phđn đoạn

còn lại, kết quả sắe ký bảng mỏng cho nhiều vết gần nhau hoặc cho câc vệt kĩo dăi

nín chưa khảo sât

HI.3 Sắc ký cột silica gel âp dụng trín phđn đoạn II 3 I

Sắc ký cột silica eel âp dụng trín phđn đoạn [H.3.1(3g), lần lượt giải ly bằng câc hệ dung môi (clorofom: metanol 9:1; clorofom: metanol 4:1), Kiểm tra theo đõi

quâ trình giải ly bằng sắc ký bảng mỏng Kết quả được trình băy trong bảng 3

Nhđn xĩt: kết quả sắc ký cột silica gel âp dụng trín phđn đoạn III.3.| thu

được 3 phđn đoạn được sắp xếp theo thứ tự tử HI.3.I.I đến III.3.!.3 Kết quả sắc ký

bảng mỏng của phđn đoạn II.3.1.2(40mg), giải ly bằng hệ dung môi clorofom: metanol (4:1) cho I vết đỏ sen có Rf = 0,4

Thực hiện sắc ký cột nhiều lần trín phđn đoạn HI.3.I.2 thu duge | hop chat

mau trang, dang bĩt dugc ky hiĩu la GUI-1, 10 (mg)

LII.4 Sắc ký cột siliea gel âp dụng trín phđn đoạn II 3.2

Sắc ký cột silica gel âp dụng trín phđn đoạn III.3.2 (20,04g), lần lượt giải ly

bang cac hệ dung môi (clorofom: metanol 4:1; clorofom: metanol: nước 240:80:7; metanol: nước L9:l) thu được Š phđn đoạn được ký hiệu từ [11.3.2.1 đến II.3.2.5

Kết quả được trình băy trong bâng 4

Nhđn xĩt: kết quả sắc ký bảng mỏng RP_ 18 trín phđn đoạn II.3.2.3 (3,6g) , đung môi giải ly (clorofom: metanol 7:3), cho vet do sen cd Rf = 0,5; bín cạnh đó

còn nhiều vết năm gan phia bĩn duci, mo va | vĩt mo phia trĩn

Thue hiĩn sic ky cĩt silica gel pha dao RP-18 nhiĩu lan trĩn phan đoạn

11.2.3 thu được hợp chất mău trắng, dạng tỉnh thể dăi được ký hiệu lă GUI-4, 25 (mg)

Trang 31

KHOA LUAN TOT NGHIEP

Qui trình cô lập câc hợp chất hữu cơ trong cao metanol của lâ cđy định lêng GVHD: NGUYÍN THỊ ÂNH TUYẾT trô được trình băy trong sơ đỗ 2 Cao Metanol 62,00 (g) - Sắc ký cột silica gel, giải ly - Cô quay thu hồi dung môi | | |

Phan doan Phan doan Phan doan Phan doan

HL1 HI.2 IH.3 HI.4

3,60 (g) 10,50 (g) 30,04 (g) 1,20 (g)

- Sắc ký cột silica gel, giải ly - Cô quay thu hồi dung môi

Phđn đoạn III.3.1 Phđn đoạn III.3.2 Phđn đoạn IH.3.3

3,00 (g) 20,00 (g) 0,86 (g)

- Sắc ký cột silica gel

| oh - Sic ky oft silica gel, giải ly

GUI-I - Cô quay thu hồi dung môi

(10mg)

| | | | |

Phđn đoạn Phđn đoạn Phđn đoạn Phđn đoạn Phđn đoạn

Trang 32

KHOA LUAN TOT NGHIỆP GVHD: NGUYEN THỊ ANH TUYET Bang 1: Sic ki c6t silica gel trín cao methanol Phan Trọng , Dung môi giải ly Sắc kí lớp mỏng Ghi chú đoạn lượng (g)

[II I C:M 9:Ị 3,60 Vết dăi Chưa khảo sât

[II.2 C:M 4:1 10,50 Vết dăi Chưa khảo sât €C:M:H:O x 111.3 30,04 Nhiều vết Khảo sat (96:28:3) [II.4 M: HạO 19:1 1,20 Vết dăi Chưa khảo sât Ghỉ chú: C (clorofom), M (metanol) Bảng 2: Sắc kí cột trín phđn đoạn IH.3 của bảng I = Dung môi giải ly n Trọng doan : lượng (g) II3.1 ( C:M:H;O (96:28:3) 3,00 Nhiều vết, tâch rõ Khảo sât Sắc kí lớp mỏng Ghi chú IHI.3.2 | C:M:H;O (96:28:3) 20,00 | Nhiều vết, tâch rõ Khảo sât HI.3.3 M: HạO 19:1 0,86 Vết dăi Chưa khảo sât

Ghi chi: C (clorofom), M (metanol)

Trang 33

KHOA LUAN TOT NGHIEP GVHD: NGUYEN THI ANH TUYET Bảng 3: Sắc kí cột silica gel trín phđn đoạn III.3.1 của bảng 2 Trọng Phđn P i Dung môi giải ly lượng Sắc kí lớp mỏng Ghi chú oan (mg) 1.3.1.1 C:M (9:1) 320 Nhiều vết Chưa khảo sât Khảo sât thu 111.3.1.2 C:M (9:1) 40 Vĩt dep duge GUI-1 111.3.1.3 C:M (4:1) 2100 Nhiều vết Chưa khảo sât Ghỉ chú: C (clorofom), M (metanol) Bang 4: Sắc kí cột silica gel trín phđn đoạn III.3.2 của bảng 2 Phđn Trọng a Dung môi giải ly lượng | Sắc kí lớp mỏng Ghi chú ạn (g)

III.3.2 C:M 9:1 — 4:1 1,3 Vĩt dai Chưa khảo sât

111.3.2.2 | C:M:H;O (96:28:3) 2,8 Nhiĩu vĩt Chưa khảo sât

Khảo sât thu

IH.3.2.3 ( C:M:H;O (96:28:3) 3,6 Vết đẹp, tâch rõ

được GUI-2

111.3.2.4 | C:M:H;O (96:28:3) 44 Nhiều vết Chưa khảo sât

Trang 34

Chwong III; KHAO SAT THANH PHAN VA CAU TRUC

HOA HOC CUA CAC MAU CHAT THU BUOC I Khảo sât cầu trúc hóa học của hợp chất GUI-I

Hop chat GUI-1 (43 mg) thu được từ phđn đoạn l3! của lâ cđy P

guilfoylei (sư đò 3), có những đặc điểm như sau: - Hợp chất ở dạng bột vô định hình, mău trắng - Phố 'H-NMR (pyridin-d;), (phụ lục la lb !c), ðppm: 5,41, (1H, br s, =CH-, HI2); 4,91 (1H, đ, J = 7,5 Hz, HI”); 4,89, (1H, đ, J= 7,5 Hz, HI'); 3,83 (3H, s, -COOCH;)), 3,27 (1H, đđ, J = 12,0/4,0 Hz, >CH-O-H3); 3,19 (1H, đđ, J = 13,0/3,5 Hz, >CH-, H18) Cac d6 dịch chuyển hóa học của câc proton khâc được trình bảy trong bang 5

- Phĩ C-NMR kĩt hgp voi DEPT-NMR (pyridin-ds), (phy luc 2, 3): 180,0; 170,0; 144,0 (>C=O, C6’), 106,8; 105,0 (cdc -O-CH-O); 89,3; 82,6 (>CH-O-), 78,4 - 71,6 (câc >*CH-OH); 62,5 (-CH;-OH) Độ dịch chuyển hóa học của câc carbon khâc được

trình băy trong bảng Š

- Phd COSY, HSQC va HMBC (phụ lục 3a 4b, 5 6a, 6b)

II Khảo sât cấu trúc hóa học của hợp chất GUI-4

Vì thời gian có hạn nín chúng tôi chưa khảo sât cấu trúc phđn tử của hợp chất GUI-4

III Biện luận cấu trúc

Phĩ ‘°C vi DEPT-NMR cho thay GUI-I có 43 carbon, trong đó có 9 carbon

loại >C< vă >C= (với 2 carbon loai >C=O, | carbon loai =C<); 15 carbon loai >CH- (vGi | carbon loai =CH-, 9 carbon loai >CH-O-, 2 carbon anomer, 3 carbon loai >CH-): l1 carbon loại -CH;- vă 8 carbon loại -CH: Sự hiện diện của hai carbon

anomer qua hai mũi cộng hưởng ở ðc snomer Ppm = 106,8 vă 105,0 cùng với 8 carbon

loại >CH-O của phđn tử đường cộng hưởng trong vùng 82,6 -71,6 ppm, cho phĩp dy

đôn GLII-Ì lă một saponin cỏ gắn hai phđn tử đường

Trang 35

KHOA LUAN TOT NGHIEP GVHD: NGUYEN TH] ANH TUYET Hai tín hiệu cộng hưởng ở ðc ppm = 122,5 vă 144,8 đặc trung cho hai carbon

olefn C12 (=CH-), CI3 (=C<) của acid oleanolic, mũi cộng hưởng của carbon C28

lă nhóm carboxyl tự do ở ôc2s/.coowy Ppm = 180,0 Như vậy, GUI-I có phần aglycon lă acid oleanolic vă phần đường gồm có hai phđn tử đường (ỗc anome ppm = 106,8 va

105,0), đó lă đường glucose (ỗc;-: ppm = 62,5) vă đường glucuronat (ỗcạ'(coo

ppm = 170,0)

Phổ 'H-NMR cũng giúp xâc định sự hiện diện của phần aglycon lă acid oleanolic qua câc mũi cộng hưởng ở dppm: 5,41 (br s, H12), 3,27 (1H, dd, J =

12,0/4,0 Hz, H3); 3,19 (1H, dd, J=13,0/3,5 Hz, H18) va cĩc mii don & ving tir trường cao Sự có mặt của 2 phđn tử đường qua sự hiện điện của hai proton anomer ở ôppm = 4,91 (d, J = 7,5 Hz, HI”), 4,89 (đ, J = 7,5 Hz, HI') Hai phđn tử đường

đều có cấu hình ƒ do hằng số ghĩp của hai proton anomer nay 1a J = 7,5 Hz

Câc phỏ COSY, HSỌC, HMBC giúp xâc định vị trí của câc phđn tử đường gắn văo nhau vă nối văo phần aglycon Phổ HMBC cho thấy mỗi tương quan giữa proton anomer HI' (ô„;- ppm =4,89) với carbon C3 (5-3 ppm = 89,3) Phĩ COSY

xuất hiện sự tương quan giữa HI' với H2' (ỗ„; = 4,02), giữa H2' với H3' (ô„›- =

4,23), giữa H3' voi H4’ (844: = 4,36) va gitta H4’ voi H5’ (Sys: = 4,54) Kết hợp với

phổ HSQC, xâc định được độ dịch chuyển hóa học của câc carbon C1’-C5’

Ngoăi ra, phổ 'C-NMR còn xuất hiện một carbon metoxy -OCH; tại ôppm =

52,4 Phổ HMBC còn cho thấy mối tương quan giữa proton HŠ' với carbon carbonyl

C6" (See ppm = 170,0), gitta proton -OCH; (54 ppm = 3,83) va C6" Nhu vay, phan

tử đường gắn trực tiếp văo acid oleanolic lă 6'-Ø-metyl glucuronat Phđn tử đường

glucose gin văo phđn tử đường glucuronat ở vị trí C4" (qua sự tương quan giữa

proton anomer H2'" với carbon C4’ trong pho HMBC)

Trang 36

ee, ee

Hình 3.3 Một số tương quan trong phô HMBC của hợp chất GUI- l

Từ những dữ liệu trín, chúng tôi nhận thấy rắng số liệu phổ của hợp chất

GUI-I gần giống với số liệu phổ của hợp chất acid 3-Ø-J-D-glucopyranosyl-(1—»4)-

6`-Ó-metyl-B-D-glucuronopyranosyloleanolic đê được cô lập từ cđy Polyscias

balfouriana "|, nín chúng tôi chọn hợp chất năy để so sânh Kết quả so sânh (được trinh bay trong bang 5) cho thấy trùng khớp, do đó, đề nghị cấu trúc của hợp chất

GUI-1 la acid 3-O-f-D-glucopyranosyl-(1—>4)-6’-O-metyI-B-D-

Trang 38

KHOA LUAN TOT NGHIEP GVHD: NGUYEN THI ANH TUYET Hop chat

Hợp chat GUI ridin-d =

Trang 40

Chuong 4: KET LUAN

Trong quâ trình thực hiện đề tăi '* TÌM HIỀU THĂNH PHAN HOA HOC CĐY ĐINH LĂNG TRÔ", chúng tôi đê cô lập được 2 hợp chất sau:

1 Acid 3-O-B-D-glucopyranosyl-(1—+ 4)-6'-O-metyl-J-D-glucuronopyranosyÌ oleanolic (GUI-1)

2 GUI-4

Cấu trúc phđn tử của hợp chất GUI-I đê được xâc định qua phố 'H-NMR,

"C-NMR, COSY, HMBC, HSQC Mac dù hợp chất năy đê hiện diện trong cđy

P Balfouriana ™ nhung day 1a lần đầu tiín cho thấy chất năy được phât hiện trong

cay Polyscias guilfoylei var quinquefolia Bail

Vi thời gian có hạn nín đề tại của tôi chỉ đứng lại ở việc xâc định cấu trúc phđn tử của hợp chất GUI-I Theo tôi, dĩ tăi có thĩ phât triển theo câc hướng sau:

e - Tiếp tục xâc định cấu trúc phđn tử của hợp chất GUI-4 e - Tiếp tục cô lập câc hợp chất ở câc phđn đoạn cao khâc

=———— ————————-———————————————-—_—— ——————_-