Lương lê uyên trang xây dựng quy trình chiết xuất, bào chế cao giàu daphnoretin và đánh giá hoạt tính trên cytokin il 1β và il 10 in vitro từ phần trên mặt đất của cây niệt dó (wikstroemia indica (l ) c a mey) luận văn t

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯƠNG LÊ UYÊN TRANG XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT, BÀO CHẾ CAO GIÀU DAPHNORETIN VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH TRÊN CYTOKIN IL-1β VÀ IL-10 IN VITRO TỪ PHẦN TRÊN MẶT ĐẤT CỦA CÂY NIỆT DÓ (Wikstroemia indica (L.) C.A.Mey) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯƠNG LÊ UYÊN TRANG XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT, BÀO CHẾ CAO GIÀU DAPHNORETIN VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH TRÊN CYTOKIN IL-1β VÀ IL-10 IN VITRO TỪ PHẦN TRÊN MẶT ĐẤT CỦA CÂY NIỆT DÓ (Wikstroemia indica (L.) C.A.Mey) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU – DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Hoàng Tuấn PGS.TS Đỗ Thị Hà HÀ NỘI 2023 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn đến PGS.TS Nguyễn Hoàng Tuấn PGS.TS Đỗ Thị Hà - hai người thầy tâm huyết hướng dẫn, giúp đỡ suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn anh chị em Khoa Hóa phân tích - Tiêu chuẩn - Viện dược liệu ln nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô giáo Khoa Dược liệu - Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội giảng dạy đóng góp ý kiến cho thời gian học tập Khoa Xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Sau đại học - Trường Đại học Dược Hà Nội, Viện dược liệu cho phép, tạo điều kiện thuận lợi cho học tập nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, đồng nghiệp bạn bè ln đồng hành ủng hộ tơi để hồn thành luận văn Nghiên cứu tài trợ kinh phí từ nhiệm vụ khoa học công nghệ theo Nghị định thư Việt Nam với Hàn Quốc Bộ KH&CN cấp kinh phí: “Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư điều hòa miễn dịch số thuốc Việt Nam, mã số: NĐT.85.KR/20” Hà Nội, ngày 03 tháng 04 năm 2023 Học viên Lương Lê Uyên Trang MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Cây Niệt dó 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng sinh học độc tính 1.2 Tổng quan hợp chất daphnoretin 10 1.3 Phương pháp tối ưu hóa chiết xuất 13 1.3.1 Phương pháp thay đổi yếu tố (OFAT) 13 1.3.2 Phương pháp bề mặt đáp ứng (RSM) 14 1.4 Sơ lược nghiên cứu tác dụng miễn dịch dược liệu 19 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.1.1 Nguyên liệu 24 2.1.2 Hóa chất, dung mơi 24 2.1.3 Máy móc, thiết bị dụng cụ 25 2.2 Nội dung nghiên cứu 25 2.3 Phương pháp nghiên cứu 26 2.3.1 Phương pháp điều chế cao đặc từ phần mặt đất Niệt dó 26 2.3.2 Phương pháp định lượng daphnoretin nguyên liệu cao Niệt dó 26 2.3.3 Phương pháp khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến quy trình chiết xuất daphnoretin 27 2.3.4 Phương pháp đánh giá hoạt tính cytokin IL-1β IL-10 in vitro cao Niệt dó giàu daphnoretin 30 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 32 3.1 Kết xây dựng đường chuẩn định lượng daphnoretin nguyên liệu 32 3.1.1 Kết xây dựng đường chuẩn 32 3.1.2 Kết định lượng daphnoretin nguyên liệu 33 3.2 Kết xây dựng quy trình chiết xuất, bào chế cao giàu daphnoretin từ phần mặt đất Niệt dó 33 3.2.1 Khảo sát ảnh hưởng số yếu tố đến trình chiết xuất phương pháp thay đổi yếu tố 33 3.2.2 Tối ưu hóa quy trình chiết xuất phương pháp bề mặt đáp ứng 47 3.2.3 Kết xây dựng quy trình chiết xuất, bào chế cao đặc giàu daphnoretin 58 3.3 Kết đánh giá hoạt tính cytokin IL-1β IL-10 in vitro cao Niệt dó giàu daphnoretin 60 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 65 4.1 Về nguyên liệu Niệt dó 65 4.2 Về xây dựng quy trình chiết xuất yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết xuất daphnoretin 66 4.3 Về kết đánh giá hoạt tính cytokin IL-1β IL-10 in vitro cao Niệt dó giàu daphnoretin 70 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT W indica Niệt dó (Wikstroemia indica (L.) C.A.Mey) IL Interleukin TNF Yếu tố hoại tử khối u (Tumor Necrosis Factor) TLR Các thụ thể giống Toll (Toll-like receptor) IC50 Nồng độ ức chế tối đa 50% (Half maximal inhibitory concentration) MIC Nồng độ ức chế tối thiểu (Minimum Inhibitory Concentration) MBC Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (Minimum Bactericidal Concentration) RSM Phương pháp bề mặt đáp ứng (Response surface methodology) OFAT Phương pháp thay đổi yếu tố (One factor at a time) DoE Phương pháp thiết kế thí nghiệm (Design of Experiments) SFE Chiết xuất lỏng siêu tới hạn (Supercritical Fluid Extraction) CCD Mô hình phức hợp trung tâm (Central composite design) ANOVA Phân tích phương sai (Analysis of Variance) LPS Lipopolysaccharide HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High-performance liquid chromatography) FBS Huyết bào thai bò (Fetal bovine serum) ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay DMSO Dimethyl sulfoxide DMEM Dulbecco's modified Eagle's medium TN Thực nghiệm HL Hàm lượng DM/DL Dung môi/dược liệu TB Trung bình H Hiệu suất KTDL Kích thước dược liệu NG-CH Cao đặc giàu daphnoretin bào chế từ phần mặt đất Niệt dó theo quy trình xây dựng 1kg/mẻ DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cơng thức cấu tạo daphnoretin 10 Hình 1.2: Sơ đồ bước tối ưu hóa chiết xuất 14 Hình 1.3: Sơ đồ thiết kế thí nghiệm theo mơ hình phức hợp trung tâm (CCD) .16 Hình 2.1: Phần mặt đất Niệt dó 24 Hình 2.2: Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 26 Hình 3.1: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích pic sắc ký vào nồng độ daphnoretin 32 Hình 3.2: Kết khảo sát phương pháp chiết xuất 34 Hình 3.3: Các kích thước dược liệu khảo sát 35 Hình 3.4: Kết khảo sát kích thước dược liệu 36 Hình 3.5: Kết khảo sát tỉ lệ dung môi/dược liệu 39 Hình 3.6: Kết khảo sát dung môi chiết xuất .41 Hình 3.7: Kết khảo sát thời gian chiết 44 Hình 3.8: Kết khảo sát số lần chiết 46 Hình 3.9: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc hàm lượng daphnoretin cao vào điều kiện khảo sát .53 Hình 3.10: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc hiệu suất chiết cao vào điều kiện khảo sát 54 Hình 3.11: Quy trình chiết xuất, bào chế cao giàu daphnoretin từ phần mặt đất Niệt dó (mẻ 1kg) 60 Hình 3.12: Cao Niệt dó chiết xuất theo quy trình xây dựng (NG-CH) .60 Hình 3.13: Tác dụng ức chế sản sinh IL-1β cao giàu daphnoretin từ phần mặt đất Niệt dó dòng tế bào RAW264.7 61 Hình 3.14: Tác dụng kích thích sản sinh IL-10 cao giàu daphnoretin từ phần mặt đất Niệt dó dịng tế bào RAW264.7 63 DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Kết xác định diện tích pic sắc ký dãy dung dịch chuẩn 32 Bảng 3.2: Kết xác định hàm lượng daphnoretin nguyên liệu 33 Bảng 3.3: Kết khảo sát phương pháp chiết xuất .34 Bảng 3.4: Kết khảo sát kích thước dược liệu .35 Bảng 3.5: Kết khảo sát tỉ lệ dung môi/dược liệu 37 Bảng 3.6: Kết khảo sát dung môi chiết 40 Bảng 3.7: Kết khảo sát thời gian chiết .43 Bảng 3.8: Kết khảo sát số lần chiết 45 Bảng 3.9: Các biến đầu vào biến đầu .47 Bảng 3.10: Kết thiết kế thí nghiệm tiến hành thực nghiệm 48 Bảng 3.11: Kết phân tích phương sai mơ hình 50 Bảng 3.12: Kết đánh giá sai số mơ hình 55 Bảng 3.13: Thông số quy trình chiết xuất tối ưu 57 Bảng 3.14: Kết kiểm định mơ hình thực nghiệm 58 Bảng 3.15: Kết thực quy trình quy mơ 1kg/mẻ .59 Bảng 3.16: Kết đánh giá hoạt tính cytokin IL-1β cao giàu daphnoretin từ phần mặt đất Niệt dó dịng tế bào RAW264.7 61 Bảng 3.17: Kết đánh giá hoạt tính cytokin IL-10 cao giàu daphnoretin từ phần mặt đất Niệt dó dịng tế bào RAW264.7 62 ĐẶT VẤN ĐỀ Niệt dó (Wikstroemia indica (L.) C.A.Mey) loài thuộc họ Trầm (Thymelaeaceae) sử dụng dân gian để chữa viêm hạch, hen suyễn, ho gà, viêm amidan, viêm tuyến mang tai; tươi đắp chữa đinh nhọt, sưng tấy, vết thương, rắn cắn [1],[2] Hiện nay, Việt Nam giới có số cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học Niệt dó phát khả điều hòa miễn dịch; kháng HIV-I, viêm gan B; chống sốt rét ung thư [3],[4] Daphnoretin coumarin Niệt dó có nhiều tác dụng dược lý bật ức chế phát triển khối u, chống virus, hoạt hóa protein kinase C, giãn mạch vành, giảm đau thắt ngực [1] xem thành phần tác dụng lên hệ thống miễn dịch, ức chế khối u kháng virus [5],[6] Một số nghiên cứu daphnoretin chứng minh hợp chất có tác dụng làm giảm nhẹ q trình thối hóa tế bào sụn IL-1 gây ra, làm giảm bớt tiến triển bệnh viêm khớp chuột [7], ức chế tăng sinh tế bào ung thư người CNE HeLa [8], có tác dụng ức chế tốt với bạch cầu đơn nhân, có khả lớn để sử dụng điều hòa miễn dịch [9] Với tác dụng bật trên, đồng thời hợp chất nghiên cứu cho có tiềm cao điều trị bệnh liên quan đến miễn dịch [10],[11], daphnoretin sử dụng chất đánh dấu việc đánh giá chất lượng cao chiết xuất từ Niệt dó Nghiên cứu sàng lọc tác dụng liên quan đến miễn dịch thuộc đề tài Nghị định thư hợp tác Việt Nam - Hàn Quốc cho thấy Niệt dó thuốc có tiềm cao, lựa chọn để nghiên cứu sâu tác dụng liên quan đến miễn dịch Đề tài: “Xây dựng quy trình chiết xuất, bào chế cao giàu daphnoretin đánh giá hoạt tính cytokin IL-1β IL-10 in vitro từ phần mặt đất Niệt dó (Wikstroemia indica (L.) C.A.Mey)” với mục đích điều chế cao chuẩn hóa hàm lượng daphnoretin phục vụ nghiên cứu sâu hơn, thực với mục tiêu sau: 1 Xây dựng quy trình chiết xuất, bào chế cao giàu daphnoretin từ phần mặt đất Niệt dó Đánh giá hoạt tính cytokin IL-1β IL-10 in vitro cao Niệt dó 26 Zhang Xiaoli, Wang Guocai, Huang Weihuan, Ye Wencai, Li Yaolan (2011), "Biflavonoids from the roots of Wikstroemia indica", Natural Product Communications, 6(8), pp.1111-1114 27 Liang Y., Lin D.Q., Guo B.J., Zeng D.C and Song Y.P (2005), "Analysis of chemical constituents of essential oil in officinal plant Wikstroemia indica by gas chromatography-mass spectrometry", Chemical Fine Chemical Society, 22, pp 357-358 28 Wang Z.D., Yan P., Yu D.Q (1985), "Study on the composition of Wikstroemia viridiflora", Fujian Journal of Traditional Chinese Medicine,16, pp.44 29 Cheng L.R., Huang S.F and Xu L.P (1994), "Experimental study on the antiradiation effect of polysaccharide of Wikstroemia indica", Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology, 11, pp.27 30 Lee Kuo-Hsiung, Tagahara Kiyoshi, Suzuki Hideyo, Wu Rong-Yang, Haruna Mitsumasa, Hall Iris H., Huang Huan-Chang, Ito Kazuo, Iida Toshiyuki, Lai Jeng-Shiow (1981), "Antitumor agents 49 Tricin, kaempferol-3-0-β-DGlucopyranoside and (+)-nortrachelogenin, antileukemic principles from Wikstroemia indica", Journal of Natural Products, 44(5), pp.530-535 31 Jiang Hong-Fang, Wu Zhuo, Bai Xue, Zhang Yi, He Ping (2014), "Effect of daphnoretin on the proliferation and apoptosis of A549 lung cancer cells in vitro", Oncology Letters, 8(3), pp.1139-1142 32 Koga Ritsuko, Ohno Shinji, Ikegame Satoshi, Yanagi Yusuke (2010), "Measles virus-induced immunosuppression in SLAM knock-in mice", Journal of virology, 84(10), pp.5360-5367 33 Fang L, Zhu LY, Liu WL (2000), "Study on antiinflammatory and bacteriostatic action of Wikstroemia indica tablets", Chinese Journal of Information on Traditional Chinese Medicine, 7, pp.28 34 Vlietinck AJ, Bruyne T.De, Apers S., Pieters L.A (1998), "Plant-derived leading compounds for chemotherapy of human immunodeficiency virus (HIV) infection", Planta medica, 64(02), pp.97-109 35 Chen Hua-Chien, Chou Chen -Kung, Kuo Yueh-Hsiung, Yeh Sheau-Farn (1996), "Identification of a protein kinase C (PKC) activator, daphnoretin, that suppresses hepatitis B virus gene expression in human hepatoma cells", Biochemical pharmacology, 52(7), pp.1025-1032 36 Ho Wing-Shan, Xue Jun-Yi, Sun Samuel S.M., Ooi Vincent E.C., Li Yao-Lan (2010), "Antiviral activity of daphnoretin isolated from Wikstroemia indica", Phytotherapy Research: An International Journal Devoted to Pharmacological Toxicological Evaluation of Natural Product Derivatives, 24(5), pp.657-661 37 Đỗ Tất Lợi (1999), Cây thuốc vị thuốc Việt Nam, tr.107-108, NXB Khoa học kĩ thuật 38 Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam II, tr.36-40, NXB Trẻ Hồ Chí Minh 39 Ko Yen-Chen, Feng Hai -Tung, Lee Ren-Jye, Lee Maw-Rong (2013), "The determination of flavonoids in Wikstroemia indica CA Mey by liquid chromatography with photo-diode array detection and negative electrospray ionization tandem mass spectrometry", Rapid Communications in Mass Spectrometry, 27(1), pp.59-67 40 Wang D, Chen Yanzhong, Xu Zujiang, Yu Wenjin, Liu Xiao Yue (2011), Method for extracting daphnoretin from Wikstroemia indica, CN102311415A, 41 Peng Jinyoung, Dong Fuqiu, Xu Qiwei, Xu Youwei, Qi Yan, Han Xu, Xu Lina, Fan Guorong, Liu Kexin (2006), "Orthogonal test design for optimization of supercritical fluid extraction of daphnoretin, 7-methoxydaphnoretin and 1,5-diphenyl-1-pentanone from Stellera chamaejasme L and subsequent isolation by high-speed counter-current chromatography", Journal of Chromatogr A, 1135(2), pp.151-157 42 Czitrom Veronica (1999), "One-factor-at-a-time versus experiments", The American Statistician, 53(2), pp.126-131 designed 43 Myers Raymond H, Montgomery Douglas C, Anderson-Cook Christine M (2016), Response surface methodology: process and product optimization using designed experiments, John Wiley & Sons 44 Chamoli Sunil (2015), "ANN and RSM approach for modeling and optimization of designing parameters for a V down perforated baffle roughened rectangular channel", Alexandria Engineering Journal, 54(3), pp 429-446 45 Montgomery Douglas C (2017), Design and Analysis of Experiments, John Wiley & Sons 46 Trường Đại học Y Hà Nội (2006), Miễn dịch học, Nhà xuất Y học, Hà Nội 47 Nagarathna PKM, Reena K, Reddy Sriram, Wesley Johnson (2013), "Review on immunomodulation and immunomodulatory activity of some herbal plants", International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, 22(1), pp.223-230 48 Abbas Abul K, Lichtman Andrew H, Pillai Shiv (2014), Cellular and molecular immunology E-book, Elsevier Health Sciences 49 Bai Rui-Bin, Zhang Ya-Jie, Fan Jing-Min, Jia Xu-Seng, Li Dai, Wang YanPing, Zhou Jing, Yan Qiao (2020), "Immune-enhancement effects of oligosaccharides from Codonopsis pilosula on cyclophosphamide induced immunosuppression in mice", Food function, 11(4), pp.3306-3315 50 Lin Zhi-Bin (2005), "Cellular and molecular mechanisms of immunomodulation by Ganoderma lucidum", Journal of pharmacological sciences 99(2), pp.144-153 51 Nguyễn Thị Thu Hương, Chung Thị Mỹ Duyên, Dương Hồng Tố Quyên, Đức, Nguyễn Minh (2016), "Khảo sát tác dụng cao Sâm Việt Nam trồng số chức miễn dịch động vật bị gây stress lập", Tạp chí Dược liệu, 21(1+2), tr.60-65 52 Nguyễn Thượng Dong, Trần Công Luận, Nguyễn Thị Thu Hương (2007), Sâm Việt Nam số thuốc họ Nhân sâm, NXB Khoa học kĩ thuật, Hà Nội 53 Le Thi Hong Van, Lee Seo Young, Kim Tae Ryong, Kim Jae Young, Kwon Sung Won, Nguyen Ngoc Khoi, Park Jeong Hill, Nguyen Minh Duc (2014), "Processed Vietnamese ginseng: Preliminary results in chemistry and biological activity", Journal of Ginseng Research 38(2), pp.154-159 54 Nguyen Thi Thu Huong, K Matsumoto, N.T Nham, N.H Quang, N.M Duc, K.Yamasaki, H Watanabe (1997), "Effect of Vietnamese Ginseng on the phagocytosis in vitro and in vivo", International Journal of Phytomedicine, 4(4), pp.341-346 55 HongKong Chinese Materia Medica Standard (2002), Wikstroemiae Radix, Vol.9, pp.235-376 56 Pham Thi Hien, Nguyen Thi Ha Ly, Nguyen Van Lieu, Vu Thi Diep, Ho Hoai Thuong, Nguyen Cong Luong, Do Thi Ha (2023), "Quantitative determination of daphnoretin in aerial parts of Wikstroemia indica L (Thymelaeaceae) by HPLC-DAD", Journal of Medicinal Materials, Vol 28, No.2, pp 93-98 57 Maruthamuthu Vijiayalakshmi, Henry Linda Jeeva Kumari, Ramar Mohan Kumar, Kandasamy Ruckmani (2020), "Myxopyrum serratulum ameliorates airway inflammation in LPS-stimulated RAW 264.7 macrophages and OVAinduced murine model of allergic asthma", Journal of Ethnopharmacol, 255, pp.112369 58 Porras-Dávila S L., Zamilpa A et al (2023), "Anti-inflammatory and neuroprotective effects of standardized fractions in herniarin and daphnoretin from Distictis buccinatoria", Chemistry and Biodiversity PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phiếu kết giám định mẫu Phụ lục 2: Sắc ký đồ định lượng daphnoretin dược liệu cao chiết 3/31/2023 11:48:51 AM Page / Analysis Report Summary(Compound) Trang NG DL 1.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 150 100 50 0 10 15 20 25 30 Trang NG DL 2.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 150 100 50 0 10 15 20 25 30 Trang NG DL 3.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 150 100 50 0 10 15 20 25 30 > ID#1 Compound Name: Daphnoretin Title Sample Name Sample ID Trang NG DL 1.lcd NG 1.3 NG 1.3 Trang NG DL 2.lcd NG 5.1 NG 5.1 Trang NG DL 3.lcd NG 5.3 NG 5.3 Area 2376943 2636643 2407397 D:\KHOA HPTTC\data\niet gio\0802-trang\Trang NG-RSM19.lcd Summary(Compound) Trang NG-RSM01.lcd 3/31/2023 12:08:39 PM Page / 1 PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 Analysis Report 100 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM2.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 100 50 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM3.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 100 50 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM4.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 100 50 0 10 15 20 25 30 > ID#1 Compound Name: Daphnoretin Title Sample Name Trang NG-RSM01.lcd NG 10.3 Trang NG-RSM2.lcd NG 2.3 Trang NG-RSM3.lcd NG 13.2 Trang NG-RSM4.lcd NG2.1 Sample ID NG 10.3 NG 2.3 NG 13.2 NG2.1 Area 2959353 1729252 1742654 1834450 D:\KHOA HPTTC\data\niet gio\0802-trang\Daphnoretin 31.25 mg-ml_061.lcd 3/31/2023 12:41:08 PM Page / Analysis Report Summary(Compound) Trang NG-RSM5.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 100 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM6.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 150 100 50 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM7.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 100 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM8.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 250 0 10 15 20 25 30 > ID#1 Compound Name: Daphnoretin Title Sample Name Trang NG-RSM5.lcd NG 1.2 Trang NG-RSM6.lcd NG 3.3 Trang NG-RSM7.lcd NG 3.1 Trang NG-RSM8.lcd NG 9.2 Sample ID NG 1.2 NG 3.3 NG 3.1 NG 9.2 Area 2908651 2537977 3535377 5525021 D:\KHOA HPTTC\data\niet gio\0802-trang\Daphnoretin 31.25 mg-ml_061.lcd 3/31/2023 12:20:28 PM Page / Analysis Report Summary(Compound) Trang NG-RSM9.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 100 0 10 15 20 25 30 Trang NG- RSM10.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoetin mAU 250 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM11.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 100 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM12.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 100 0 10 15 20 25 30 > ID#1 Compound Name: Daphnoretin Title Sample Name Trang NG-RSM9.lcd NG 6.2 Trang NG- RSM10.lcd NG 9.1 Trang NG-RSM11.lcd NG 8.2 Trang NG-RSM12.lcd NG 11.3 Sample ID NG 6.2 NG 9.1 NG 8.2 NG 11.3 Area 3945281 5553160 3364036 3062027 D:\KHOA HPTTC\data\niet gio\0802-trang\Daphnoretin 31.25 mg-ml_061.lcd 3/31/2023 12:22:58 PM Page / Analysis Report Summary(Compound) Trang NG-RSM13.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 100 0 10 15 20 25 30 Trang NG- RSM14.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 100 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM15.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 250 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM16.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 300 200 100 0 10 15 20 25 30 > ID#1 Compound Name: Daphnoretin Title Sample Name Trang NG-RSM13.lcd NG 12.1 Trang NG- RSM14.lcd NG 14.2 Trang NG-RSM15.lcd NG 1.1 Trang NG-RSM16.lcd NG 15.2 Sample ID NG 12.1 NG 14.2 NG 1.1 NG 15.2 Area 3641626 3684346 5862069 4141545 D:\KHOA HPTTC\data\niet gio\0802-trang\Daphnoretin 31.25 mg-ml_061.lcd 3/31/2023 12:25:16 PM Page / Analysis Report Summary(Compound) Trang NG-RSM17.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 100 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM18.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 250 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM19.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 250 0 10 15 20 25 30 Trang NG-RSM20.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 250 0 10 15 20 25 30 > ID#1 Compound Name: Daphnoretin Title Sample Name Trang NG-RSM17.lcd NG 6.3 Trang NG-RSM18.lcd NG 13.1 Trang NG-RSM19.lcd NG 8.1 Trang NG-RSM20.lcd NG 10.2 Sample ID NG 6.3 NG 13.1 NG 8.1 NG 10.2 Area 3126034 5774688 5977324 6192420 D:\KHOA HPTTC\data\niet gio\0802-trang\Daphnoretin 31.25 mg-ml_061.lcd 3/31/2023 12:01:33 PM Page / Analysis Report Summary(Compound) Trang NG-TN1.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 150 100 50 0 10 15 20 25 30 Trang NG-TN2.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 150 100 50 0 10 15 20 25 30 Trang NG-TN3.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 150 100 50 0 10 15 20 25 30 > ID#1 Compound Name: Daphnoretin Title Sample Name Sample ID Trang NG-TN1.lcd NG 10.1 NG 10.1 Trang NG-TN2.lcd NG 11.1 NG 11.1 Trang NG-TN3.lcd NG 12.3 NG 12.3 Area 2829150 2818881 2769119 D:\KHOA HPTTC\data\niet gio\0802-trang\Daphnoretin 31.25 mg-ml_061.lcd 3/31/2023 11:52:45 AM Page / Analysis Report Summary(Compound) Trang NG-CH1.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 150 100 50 0 10 15 20 25 30 Trang NG-CH2.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 150 100 50 0 10 15 20 25 30 Trang NG-CH3.lcd PDA Multi 345nm,4nm Daphnoretin mAU 200 150 100 50 0 10 15 20 25 30 > ID#1 Compound Name: Daphnoretin Title Sample Name Sample ID Trang NG-CH1.lcd NG 7.2 NG 7.2 Trang NG-CH2.lcd NG 9.3 NG 9.3 Trang NG-CH3.lcd NG 11.2 NG 11.2 Area 2567481 2667555 2648793 D:\KHOA HPTTC\data\niet gio\0802-trang\daphnoretin 0.25 mg-ml_002.lcd