Nguyễn trà my chiết xuất, phân lập và đánh giá hoạt tính trên cytokin il 1β và il 10 in vitro của một số hợp chất từ rễ cây xáo leo (paramignya scandens (griff ) craib), họ cam rutaceae luận văn thạc sĩ dược học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN TRÀ MY CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH TRÊN CYTOKIN IL-1β VÀ IL-10 IN VITRO CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ RỄ CÂY XÁO LEO (Paramignya scandens (Griff.) Craib), HỌ CAM - Rutaceae LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN TRÀ MY CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH TRÊN CYTOKIN IL-1β VÀ IL-10 IN VITRO CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ RỄ CÂY XÁO LEO (Paramignya scandens (Griff.) Craib), HỌ CAM - Rutaceae LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU – DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Đỗ Thị Hà PGS.TS Nguyễn Hoàng Tuấn HÀ NỘI, 2023 LỜI CẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận văn này, nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ Thầy Cô, nhà khoa học Trường Đại học Dược Hà Nội Viện Dược liệu, đồng nghiệp, gia đình bạn bè Lời đầu tiên, xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Đỗ Thị Hà PGS.TS Nguyễn Hoàng Tuấn, người Thầy dành thời gian, tâm huyết hướng dẫn, giúp đỡ, động viên tơi suốt q trình học tập nghiên cứu khoa học Tôi xin chân thành cảm ơn anh chị đồng nghiệp Khoa Hóa Phân tích – Tiêu chuẩn – Viện Dược liệu, Thầy Cô anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu, Thực vật, Dược học cổ truyền – Trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ đóng góp ý kiến cho tơi q trình học tập thực nghiên cứu Nhân dịp này, xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Sau đại học, Thư viện Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn Nghiên cứu phần kết đề tài tài trợ kinh phí từ nhiệm vụ khoa học cơng nghệ theo Nghị định thư Việt Nam với Hàn Quốc Bộ KH&CN cấp kinh phí: “Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư điều hòa miễn dịch số thuốc Việt Nam, mã số: NĐT.85.KR/20” Lời sau cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới gia đình bạn bè ln chia sẻ, ủng hộ tơi suốt q trình học tập vừa qua Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 03 năm 2023 Học viên Nguyễn Trà My MỤC LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Paramignya 1.1.1 Vị trí phân loại phân bố .3 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Tác dụng dược lý 11 1.2 Tổng quan Xáo leo (Paramignya scandens) 13 1.2.1 Đặc điểm thực vật, phân bố Xáo leo 13 1.2.2 Thành phần hóa học Xáo leo 13 1.2.3 Tác dụng dược lý Xáo leo 14 1.3 Sơ lược hệ miễn dịch 15 1.3.1 Liệu pháp cải thiện tình trạng miễn dịch thể .15 1.3.2 Interleukin-1β (IL-1β) 16 1.3.3 Interleukin-10 (IL-10) 20 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 21 2.1.1 Nguyên liệu 21 2.1.2 Hóa chất, dung mơi .21 2.1.3 Máy móc, thiết bị dụng cụ .22 2.2 Phương pháp nghiên cứu 22 2.2.1 Phương pháp chuẩn bị cao chiết .23 2.2.2 Phương pháp phân lập xác định cấu trúc hợp chất 24 2.2.3 Phương pháp đánh giá hoạt tính IL-1β IL-10 in vitro 24 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu 25 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 26 3.1 Kết chiết xuất cao toàn phần cao phân đoạn từ rễ Xáo leo 26 3.2 Kết sàng lọc hoạt tính cytokin IL-1β IL-10 in vitro cao toàn phần cao phân đoạn từ rễ Xáo leo 27 3.3 Phân lập hợp chất từ phân đoạn có hoạt tính rễ Xáo leo 29 3.4 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ rễ Xáo leo 31 3.4.1 Hợp chất XL1 .31 3.4.2 Hợp chất XL2 .32 3.4.3 Hợp chất XL3 .33 3.4.4 Hợp chất XL4 .35 3.4.5 Hợp chất XL5 .36 3.5 Kết đánh giá hoạt tính cytokin IL-1β IL-10 in vitro hợp chất phân lập từ rễ Xáo leo 37 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 41 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .46 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Phần viết tắt 13 C-NMR H-NMR BMDC Tiếng Anh Tiếng Việt Carbon-13 nuclear magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân resonance spectroscopy carbon 13 Proton magnetic resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân spectroscopy proton Bone marrow-derived dendritic Tế bào gai có nguồn cell gốc từ tủy xương Ac Acetyl CC Column chromatography CDCl3 Cloroform-d COX-2 Cyclooxygenase DCM Dichloromethane EtOAc Ethyl acetate 10 EtOH Ethanol 11 GSK Glycogen synthase kinase 12 Hela Human cervical carcinoma cell Dịng tế bào ung thư biểu mơ lines cổ tử cung người Human hepatocellular Dòng tế bào ung thư biểu mô carcinoma cell lines gan người Human promyelocytic Dòng tế bào ung thư máu leukemia cell lines người Heteronuclear multiple bond Phổ tương tác dị hạt nhân connectivity spectrometry qua nhiều liên kết High-performance liquid Sắc ký lỏng hiệu cao 13 14 15 16 HepG2 HL-60 HMBC HPLC Sắc ký cột chromatography 17 18 HSQC HT-29 Heteronuclear single quantum Phổ tương tác dị hạt nhân coherence qua liên kết Human colon cancer cell lines Dòng tế bào ung thư ruột kết người 19 IL Interleukin 20 iNOS Nitric oxide synthase 21 KB Human epithelial carcinoma Dịng tế bào ung thư biểu mơ cell lines người Human androgen-dependent Dòng tế bào ung thư tuyến prostate cancer cell lines tiền liệt phụ thuộc androden 22 LNCaP người 23 LPS Lipopolysaccharide 24 LU-1 Lung adenocarcinoma cell line Dịng tế bào ung thư biểu mơ tuyến phổi Dòng tế bào ung thư vú 25 MCF-7 Human breast cancer cell line 26 MMP Matrix metalloproteinase 27 MS Mass spectrometry Phổ khối lượng 28 NMR Nuclear magnetic resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 29 NSCLC Non-small cell lung cancer Ung thư phổi tế bào không nhỏ 30 OVCAR-8 Human ovarian carcinoma Dòng tế bào ung thư biểu mơ buồng trứng người 31 PC-3 Human androgen-independent Dịng tế bào ung thư tuyến prostate cancer cell lines tiền liệt không phụ thuộc androden người 32 PGE2 Protagladin E2 33 PTEN Phosphatase and tensin homolog 34 SIDS Sudden infant death syndrome Hội chứng đột tử trẻ sơ sinh 35 SH-SY5Y Human neuroblastoma cell line Dòng tế bào u nguyên bào thần kinh người 36 SK-Mel-2 Human melanoma cell line Dịng tế bào u ác tính hắc tố người 37 TLC 38 TLTK 39 TNF-α Thin layer chromatography Sắc ký lớp mỏng Tài liệu tham khảo Tumour necrosis factor α Yếu tố hoại tử khối u-α 40 TT Thứ tự 41 tt/tt Thể tích/thể tích 42 VEGF Vascular endothelial growth Yếu tố tăng trưởng nội mô factor mạch máu Tổ chức Y tế giới 43 WHO World health organization 44 YAP-1 Yes-asociated protein DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo hợp chất – 22 .8 Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo hợp chất 23 – 37 Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo hợp chất 38 – 44 10 Hình 1.4 Cơng thức cấu tạo hợp chất 45 – 50 10 Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo hợp chất 51 – 63 11 Hình 1.6 Cơng thức cấu tạo hợp chất 64 – 67 11 Hình 2.1 Hình ảnh lồi Paramignya scandens .21 Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 23 Hình 3.1 Tóm tắt q trình chiết xuất cao chiết từ rễ Xáo leo 26 Hình 3.2 Hoạt tính ức chế sản sinh IL-1β cao toàn phần cao phân đoạn từ rễ Xáo leo dòng tế bào RAW264.7 27 Hình 3.3 Hoạt tính kích thích sản sinh IL-10 cao toàn phần cao chiết phân đoạn từ rễ Xáo leo dòng tế bào RAW264.7 28 Hình 3.4 Tóm tắt q trình phân lập hợp chất từ cao chiết EtOAc 30 Hình 3.5 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết hợp chất phân lập 30 Hình 3.6 Cấu trúc hợp chất XL1 32 Hình 3.7 Cấu trúc hợp chất XL2 33 Hình 3.8 Cấu trúc tương tác HMBC (→) hợp chất XL3 35 Hình 3.9 Cấu trúc hợp chất XL4 36 Hình 3.10 Cấu trúc hợp chất XL5 37 Hình 3.11 Hoạt tính ức chế sản sinh IL-1β hợp chất phân lập từ rễ Xáo leo dòng tế bào RAW264.7 38 Hình 3.12 Hoạt tính kích thích sản sinh IL-10 hợp chất phân lập từ rễ Xáo leo dòng tế bào RAW264.7 39 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các hợp chất phân lập từ loài thuộc chi Paramignya .4 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ hợp chất XL1 chất tham khảo .31 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ hợp chất XL2 chất tham khảo .32 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ hợp chất XL3 chất tham khảo .33 Bảng 3.4 Dữ liệu phổ hợp chất XL4 chất tham khảo .35 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ hợp chất XL5 chất tham khảo .36 Phụ lục 4.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL1 Phụ lục 4.2: Phổ 13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL1 vi Inten.(x10,000,000) 2.00 102.30 229.05 270.15 1.75 1.50 1.25 381.30 1.00 693.50 0.75 0.50 457.30 0.25 583.45 300.20 0.00 100 150 200 761.60 639.30 185.15 250 300 350 400 450 500 550 Phụ lục 4.3: Phổ MS XL1 vii 600 650 700 750 m/z PHỤ LỤC 5: DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT XL2 Hình 3.6: Cấu trúc hóa học XL2 Phụ lục 5.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL2 Phụ lục 5.2: Phổ 13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL2 Phụ lục 5.3: Phổ HMBC XL2 Phụ lục 5.4: Phổ MS XL2 viii Phụ lục 5.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL2 Phụ lục 5.2: Phổ 13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL2 ix Phụ lục 5.3: Phổ HMBC XL2 Inten.(x10,000,000) 2.00 102.30 259.05 300.15 1.75 517.30 1.50 1.25 1.00 0.75 534.25 0.50 229.10 0.25 0.00 100 343.20 150 200 250 300 350 415.30 400 450 500 550 Phụ lục 5.4: Phổ MS XL2 x 600 650 700 750 m/z PHỤ LỤC 6: DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT XL3 Hình 3.7: Cấu trúc hóa học XL3 Phụ lục 6.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL3 Phụ lục 6.2: Phổ 13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL3 Phụ lục 6.3: Phổ HMBC XL3 Phụ lục 6.4: Phổ MS XL3 xi Phụ lục 6.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL3 Phụ lục 6.2: Phổ 13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL3 xii Phụ lục 6.3: Phổ HMBC XL3 xiii Inten.(x10,000,000) 2.00 102.30 329.10 370.20 1.75 1.50 404.30 1.25 1.00 0.75 273.15 0.50 425.25 0.25 488.65 219.25 0.00 100 150 200 551.65 579.70 663.55 691.50 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 m/z 600 650 700 750 m/z Phụ lục 6.4a: Phổ MS+ XL3 Inten.(x10,000,000) 2.00 283.45 327.25 1.75 1.50 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 353.40 227.40 0.00 100 150 200 250 300 350 413.35 400 450 500 550 Phụ lục 6.4b: Phổ MS- XL3 xiv PHỤ LỤC 7: DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT XL4 Hình 3.8: Cấu trúc hóa học XL4 Phụ lục 7.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL4 Phụ lục 7.2: Phổ 14C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL4 Phụ lục 7.3: Phổ MS XL4 xv Phụ lục 7.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL4 Phụ lục 7.2: Phổ 14C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL4 xvi Inten.(x10,000,000) 2.00 311.15 623.30 1.75 1.50 325.40 1.25 1.00 0.75 255.45 0.50 0.25 0.00 100 150 200 651.50 409.25 219.35 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 m/z Phụ lục 7.3a: Phổ MS+ XL4 Inten.(x10,000,000) 2.00 311.15 1.75 1.50 325.40 1.25 1.00 0.75 255.45 0.50 0.25 283.45 409.25 281.20 219.35 0.00 150 200 250 300 350 Phụ lục 7.3b: Phổ MS- XL4 xvii 400 450 m/z PHỤ LỤC 8: DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT XL5 Hình 3.9: Cấu trúc hóa học XL5 Phụ lục 8.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL5 Phụ lục 8.2: Phổ 14C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL5 Phụ lục 8.3: Phổ MS XL5 xviii Phụ lục 8.1: Phổ 1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) XL5 Phụ lục 8.2: Phổ 14C-NMR (CDCl3, 150 MHz) XL5 xix Inten.(x10,000,000) 4.0 3.5 3.0 2.5 102.30 327.15 2.0 404.30 368.25 1.5 1.0 440.35 0.5 219.30 0.0 100 150 200 483.40 515.50 267.20 250 300 350 400 450 500 625.45 550 600 670.55 685.50 723.50 650 700 750 m/z Phụ lục 8.3a: Phổ MS+ XL5 Inten.(x10,000,000) 4.0 3.5 3.0 2.5 255.40 2.0 283.40 325.30 1.5 1.0 0.5 219.35 353.35 373.35 265.30 227.40 423.35 397.40 0.0 150 200 250 300 350 Phụ lục 8.3b: Phổ MS- XL5 xx 400 450 m/z