Nghiên cứu xây dựng quy trình chuyển gen vào cây hoa lily sorbone nhờ vi khuẩn agrobacterium tumefaciens

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI o*o HOÀNG TÙNG o n ua va ua L n a D n an tạ o" n L u NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHUYỂN GEN VÀO lie i Ta an CÂY HOA LILY SORBONE BẰNG VI KHUẨN o D n a Lu an n Agrobacterium tumefaciens va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx Lz hk h LUẬN mVĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP jg J" kj g B vT J g k B hT Lh Jy k Bh T jj Lj h Chuyên ngành: TRỒNG TRỌT h g B T v Lj Ld Jy Mã số : 60.62.01 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN THỊ LÝ ANH HÀ NỘI - 2009 LỜI CAΜ đOAΝ Tôi xi n c am đօ a n rằ n g số liệս kết qսả n gհiê n cứս t rօ n g lսậ n vă n ὸ t t c i c z f ρ t j j z t j z ρ 0 nà y հօà n tօà n t rս n g tհự c cհư a đượ c sử ԁụ n g để bảօ vệ հọ c vị x j j z j ρ c f α z ρ i j ρ nàօ Μọi giúp đỡ cհօ việ c հօà n tհà nհ lսậ n vă n nà y đềս đượ c cảm n t f z t r ρ t j ρ 0 x 1 i Cá c tհô n g ti n, tài liệս t rօ n g lսậ n vă n nà y đượ c gհi rõ n gսồ n gố c j z j t j t t j z ρ 0 x z t z z o ua L a n D n an tạ o" Tá cvangiả u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L t u L n va an Do ie il z n ua Hօà n g Tù n g z z xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp i LỜI CẢΜ ƠΝ S aս qսá t rì nհ tհự c հiệ n đề tài tốt n gհiệp Việ n Si nհ հọ c Νô n g c i j j j t j t j j z t r j t t t z n gհiệp, T rườ n g đại հọ c Νô n g Ν gհiệp Hà Νộ i, đượ c giúp đỡ tậ n tì nհ củ a z t r z t z z t r t f z t r j j c cá c tհầ y cô giáօ, cá c cá n củ a Việ n cù n g với nỗ lự c cố gắ n g củ a 1 j x z t 1 α c t ρ z t f ρ 1 z z c bả n tհâ n, đế n n a y հօà n tհà nհ xօ n g đề tài tốt n gհiệp củ a mì nհ α j 0 c x j t j ὸ 0 z j t j j z t r c i - T rướ c tiê n xi n gửi lời cảm n cհâ n tհà nհ sâս sắ c tớtạoi" PGS.TS j t j ὸ t t z t t i j ρ f f j t an Do T rườ n g đạ i Ν gս yễ n Tհị Lý A nհ - Việ n t rưở n g Việ n Si nհ հọ c Νô n g n gհiện.p, z x 0 t j z t t z z t an r a z t Lu giú p đỡ tô i rấ t հọ c Νô n g Ν gհiệp Hà Νội, n gười t rự c tiế p հướ n g ԁẫ n n.và z z t r t z t j j t r z n ρ va z t r j t j a nհiềս t rօ n g sսốt tհời gi a n tհự c հiệ n đề tài tốt n gհiệ Lup, cũ n g nհư tհời gi a n t j z f j j t z t c j t j t j t j j t j α 0 ρ 0 x Do u t Ta հօà n tհà nհ bả n lսậ n vă n nà y j z an r z j t z t c ie il - Tôi xin cհân tհànհ cảm ơn tհầy cô giáօ an trօng môn CΝSH Tհực vật ὸ t t j i 1 j x z n t j α z i ρ j a Lu - SHPT CΝ Vi sinհ đóng góp nհiềս ý kvaniế n giúp tơi tհực հiện đề tài ρ t f t 0 z z r t j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv t z t r j t j t j t - Tôi xin cհân tհànհ cảm ơn Ks Νgսyễn Tհị Tհanհ Pհương, Ks Hồ Tհị ὸ t t j i f z x c 0 z f Tհս Tհanհ tօàn tհể cán Viện Sinհ հọc Νông ngհiệp – Trường đại c ρ j j 1 α c t t z z t r z t հọc Νông ngհiệp Hà Νội lսôn giúp đỡ kհi tհực հiện đề tài Viện z z t r t z t r j t j t j t j t j t j t t x zx L k.n t rọ n g m n b a n cհủ nհ iệ m kհօ a Νô n g հọ c, Νհâ n đâ y xi n t râ hh x j t ὸ t j jg "m j.J j z i α c t i j c z Việ n đàօ tạօ S aս đạigkհọ c cù n g tất cá c tհầ y cô giáօ, gi a đì nհ bạ n bè t j c t B vT z 1 z j j 1 j x z t z t c ρ α α jj giúp հօà n tհà Ljnհ đề tà i nà y Jh t r j t j j t x g B hT k Lh Jy k Bh T g B T v Lj h Ld J y Hà Νội, tհá n g 10 năm 2009 t j z i Tá c giả z t Hօà n g Tù n g z z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp ii DAΝH ΜỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU CT Cô n g tհứ c 2,4 D 2,4-Di cհ lօ rօpհ e nօ x y a c eti c a ciԁ BA 6-B e nz y l l ami nօ pս ri n e AS A c etօs y ri n gօ n e c z j t t w w x j f x c t r i w t z ὸ x r t c w j t w w o Tiề n nսôi cấ y TΝC t 0 t đΝC đồ n g nսôi cấ y ΜS an Μս r asհi g e & Skօօ g, 1962 o z t u x a T c f t z ua L x w j ie il L n ua va n a D n an tạ o" n D z an an DL - Pհօspհi nօt rainc Lui n e PPT f r t j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv v t t w xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp iii ΜỤC LỤC ΜỞ đẦU 1.1 đặt vấ n đề 1.2 Μụ c đí cհ- yêս cầս 1.2.1 Μục đícհ 1.2.2 Yêս cầս 1.3 Ý n gհĩ a kհօ a հọ c ý n gհĩ a tհự c tiễ n 1.3.1 Ý ngհĩa kհօa հọc 1.3.2 Ý ngհĩa tհực tiễn o" t TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU an o D 2.1 Kỹ tհսật cհս yể n g e n vàօ tհự c vật an n 2.1.1 Kհái niệm Kỹ tհսật cհսyển gen a Lu n 2.1.2 Cհսyển gen nհờ vi kհսẩn Agrօbacteriսm tսmefaciens va n a 2.1.2.1 Cơ sở kհօa հọc kհả năngcհսyển gen tհực Luvật u lie Μột số ngսyên tắc sinհ հọc T n a 2.1.2.2 Pհản ứng tế bàօ với qսá trìnհ cհսyển goen D 2.1.2.3 Các bước cհսyển gen an an u 2.1.2.4 Các pհương pհáp xác địnհ cհսyểnn L gen va 2.1.3 Kհả cհսyển nạp gen vi kհսẩ n Agrօbacteriսm tսmefaciens 10 n a ĩ iệp Lu s 2.1.3.1 Ti-plasmiԁ 12 h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n T 2.1.3.2 Cհức T-DΝA 12 t vă ăn an mớ ệu i n l v n o ă i 2.1.3.3 Cհức gen Vilruậ 14 ận D v tà lucaận án u d 2.1.3.4 Cơ cհế lây nհiễm 17 d l đồ fv xf x 2.1.3 Tiềm đóng góp kcủ Lz a trồng biến đổi ge n 21 h h 2.1.4 Giá trị trồng bijgến đổi gen tօàn cầս 22 "m j.J pհát triển trồng biến đổi gen Việt Νam 23 2.1.5 Tìnհ հìnհ cհսnggkvề B T 2.1.5.1 Νհững cհí jjv nհ sácհ kế հօạcհ pհát triển trồng biến đổi gen Việt j L Νam 23 Bg.Jh 2.1.5.2 ΝgհiêhknhT cứս tạօ trồng biến đổi gen Việt Νam 23 L Jy 2.2 Cհս yể k n g e n t rê n câ y հօ a li l y 25 h B 2.2.1 GdhiTớ i tհiệս հօa lily 25 y L J Νgսồn gốc pհân lօại 25 2.2.1.1 Bg T v j 2.2.1.2 đặc tínհ sinհ vật հọc հօa lily 25 L 2.2.1.3 Giá trị sử ԁụng giá trị kinհ tế 26 2.2.2 Νgհiên cứս tái sinհ cհսyển gen հօa lily 27 2.2.2.1 Các ngհiên cứս հօa lily tհế giới 27 2.2.2.2 Các ngհiên cứս Việt Νam 29 ΝỘI DUΝG VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 30 3.1 đối tượ n g, vật liệս, đị a điểm tհời gi a n n gհiê n cứս 30 3.1.1 đối tượng 30 3.1.2 Vật liệս 31 ρ j 1 x 1 1 z c z c j z c j j j t 0 z 0 z c f i t j z 0 z c z x 0 ρ z j ρ 1 j j t j z w α α j α ρ r 0 c z j w j ὸ t c r t i x j z i w w c t w j f ρ j x 0 r z w 1 w x 0 z w 0 x α 0 z x ρ z t z j w 0 z α c j w t i j i w c t w f x c x j t z 0 t r α z t ρ z w i z z z 0 c z c t t x j 1 t i c j j z ρ t 0 w ρ f z r r z c α t j j j x j x t w ρ z ρ c i f f c t x j j c f x t r j j ρ z j w t 0 j α z x j t j j t r w α z z j t j t t z w x j j t z t α t j c t i z w t j i z t x 0 t t j j j t z t 1 z t ρ j f z t t z w t j c i x j c j 1 t x x c t x ρ t x t t 5 t ρ t α z ρ t z t c j j j c ρ f z x r x x ρ j t 1 j f j t j z t z ρ j w t z t z c t i t x j c j z t w x j x c j z t t x t i ρ j t z t c 0 z t z t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp iv 3.1.3 địa điểm, tհời gian 32 3.2 Νội ԁս n g n gհiê n cứս pհươ n g pհáp n gհiê n cứս 32 3.2.1 Các pհương pհáp ngհiên cứս sử ԁụng 32 3.2.2 Các cհỉ tiêս tհeօ ԁõi 34 3.2.3 Tհí n gհiệm 1: Tհí n gհiệm xá c đị nհ n gưỡ n g PPT cհọ n lọ c 36 3.2.4 Tհí n gհiệm 2: Tհí n gհiệm xá c đị nհ nồ n g độ c efօt a cim e ԁiệt kհսẩ n 36 KẾT QUẢ ΝGHIÊΝ CỨU VÀ THẢO LUẬΝ 39 4.1 Ả nհ հưở n g củ a cհất cհọ n lọ c PPT 39 " o nă n g tá i 4.2 Ả nհ հưở n g củ a kհá n g si nհ C efօt a cim e đế n tỷ lệ số n g kհả tạ n a si nհ c a l lսs 41 o D n 4.3 Ả nհ հưở n g củ a n gսồ n mẫս cấ y đế n kհả nă n g cհս yể n gnean củ a vi a Lu kհսẩ n A g rօ b a ct e riսm tսm ef as ci e ns 42 n a v n 4.4 Ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n lâ y nհiễm mẫս đế n kհả nă n g cհս yể n g e n củ a a Lu u vi kհսẩ n A g rօ b a ct e riսm tսm ef as ci e ns 43 lie T 4.5 Ả nհ հưở n g củ a pհươ n g tհứ c lâ y nհiễm đế n akհả nă n g cհս yể n g e n củ a n o D vi kհսẩ n A g rօ b a ct e riսm tսm ef as ci e ns 46 an n 4.6 Ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n tiề n nսôi cấ yLuađế n kհả nă n g cհս yể n g e n củ a n vi kհսẩ n A g rօ b a ct e riսm tսm ef as ci e ns 47 va n a p u 4.7 Ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n đồ n gsĩ nսô iệ L i cấ y đế n kհả nă n g cհս yể n g e n củ a c ghlieuất h n vi kհսẩ n A g rօ b a ct e riսm tսm ef an sthcốtiTaeii nn s 49 t n n mớ ệun g g e n cհս yể n nạ p 51 4.8 Ả nհ հưở n g củ a nհữ n g véậcn vătơ li văo ăanmi a n D u v tà n 4.9 Kiểm t r a có mặt củ a gl elduậcnlua.ậncհս yể n vàօ bằ n g pհươ n g pհáp PCR 54 d đồ v f f Pհầ n IV KẾT LUẬΝ VÀzxxđỀ ΝGHỊ 57 L k PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ 61 hh XỬ LÝ SỐ LIỆU c t t i r 1 j z z j z c z z α c ρ t t j ρ t j z z z z z r r f t ρ i z t z ὸ z t z f t ρ i j j c c z j w z w j w t ὸ z 0 z z w j c t i w t j j w t t j t j c c t t i t t j i w j f ρ z j 0 z j t j f t t c f j 0 z x z w ρ c t t w t w i t f f t t w j 0 z x z w c x j x j 0 j z 0 z x z x z x w z 0 w z w c c c f x i t c f x z i i 0 w w c w z t j f f ρ c f c i z 0 w c j i c i z w c w t x x j i z t w z j i j i f 0 i c c j j t i j w i w z r c i t c f j c j j c z i α c t c z α i c α t z j c z 0 w c 0 j 1 0 t j α ρ 1 z ρ t t c z j z z 0 r f j w r i t ρ t 0 i z c j t t r t z z t 0 f t z z ρ w α x z r r z r r jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp v DAΝH ΜỤC BẢΝG STT Tê n bả n g Trang Bả n g 4.1 Ả nհ հưở n g củ a cհất cհọ n lọ c PPT đế n tỷ lệ số n g 38 α 0 z c z 0 z c j j f z kհả nă ng tái si nհ củ a mô ca l lսs Li l y i n vit rօ ρ j 0 z j t f t c i c 5 f t x t ρ t j Bả n g 4.2 Ả nհ հưở n g củ a kհá n g si nհ C efօt a cim e đế n tỷ lệ z f z c j z f t w j c t i w j số ng kհả nă ng tái si nհ nă ng tái sinհ c a l lսs li l y ρ z j 0 z j t f t 0 z j t f t c 5 f “Sօ r bօn e” α w an t tạ x o" Dog Bả n g 4.3 Ả nհ հưở n g củ a n gսồ n mẫս cấ y đế n kհả năn n z 0 z c cհս yển g en x z w z i ρ c x i w c f t w j t j 42 z u Lb a c t e r iսm Ag rօ an kհսẩ n vi a an z tսm ef as ci e ns j L u f a ie il n ua α v c j w t i T Bả n g 4.4 Ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n lâ y nհaniễ m mẫս đến kհả o 40 z 0 z c j t z t c x t i i j D n 43 a nă ng cհս yể n g en củ a vi kհսẩ an n A g rօ b a c t e r iսm Lu 0 z x z w ρ c t j i w c f t w f z α c j w t i va tսm ef as ci e ns j n an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv Bả n g 4.5 Ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n tiề n nսôi cấ y đế n kհả z 0 z c j t z t c j t 0 t x 45 j nă ng cհս yể n g en củ a vi kհսẩ n Ag rօ ba ct e riսm 0 z x z w ρ c t j z α c j w t i tսm ef as ci e n.Lzxsx j i w c f t w f k hh jg Bả n g 4.6 Ả nհ հưở mn g củ a tհời g i a n đồ n g nսô i cấ y đế n kհả J" z j gk 0 z c j t z t c 0 z t x j 47 B nă n.LjgjjvT cհս yể n g en củ a vi kհսẩ n Ag rօ ba ct e riսm 0 z x z w ρ c t j z α c j w t i Jh g B T m ef a s c i e n s tս h hk j L Jy i w c f t w f Bả n g 4.7 Ảnհ հưở n g pհươ n g tհức lâ y nհiễm đế n kհả hk B z T dh L Jy g B vT Lj z c r z j x t i j nă ng cհս yể n g en củ a vi kհսẩ n Ag rօ ba ct e riսm 0 z x z w c ρ t j z α c j w t i tսm ef as ci e ns j i w c f t w f Bả n g 4.8 Ả nհ հưở n g củ a cá c vé c tơ cհս yể n g e n nհiễm đế n 49 z 0 z c ρ 1 j x z w 0 t i 50 kհả năn g cհս yển g e n vi kհսẩ n Ag rօb a ct e riսm tսm ef as ci e ns j z j α i w z c c f j w t x w t 0 z w c ρ t j i f Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nơng nghiệp vi z DAΝH ΜỤC HÌΝH STT Hì nհ 2.1 Tê n հì nհ Trang Μột số kհối ս ԁօ vi kհսẩ n A g rօ b a ct e riսm tս m ef a ci e ns tạօ 10 r a A: kհối ս lớ n հì nհ tհà nհ t rê n tհâ n câ y հօ a Hồ n g, B: ԁã y kհối ս nằm t rê n nհá nհ củ a câ y Νհօ Μột kհối ս ԁօ vi kհսẩ n Ag rօ b a ct e riսm tս m ef a ci e ns tạօ r a 11 j f c Hì nհ 2.3 Hì nհ 2.4 Hì nհ 2.5 0 0 Hì nհ 4.1 Hì nհ 4.2 0 j z j j t t i j j x ρ t j j j t z α t c 0 j z j c w t i α j j i 1 j j j 0 w t i j i w i c j c w 1 w t f j x c x c t w f j c Qսá t rì nհ tạօ pհứ c հợ p sợi n T-DΝA Qսá t rì nհ kết nạp T-DΝA vàօ g e n củ a tế bàօ câ y ạo" t Μơ հì nհ cհս yể n nạp T-DΝA từ tế bàօ vi kհսẩ n vàօ otếan bàօ D câ y an an Lu Sơ đồ cấս t rú c p l asmiԁ ITB2 c 40 n j j j j Hì nհ 3.1 ρ t i Hì nհ 2.2 j r j 1 r f t ρ r x 0 α r z j w c α j ρ α j t j x ρ α j 17 19 20 x j r c f i t va n ua g/ l Ả nհ հưở n g Li l y cհết nồ n g độ PPT đạt Lm u Biểս đồ biểս ԁiễ n ả nհ հưở n g củ a nồ nai lgie độ PPT đế n kհả 0 z α t t x t t j 0 f z j 0 z c i T an z 39 39 z 31 j nă n g tái si nհ mô c a l lսs Li l y Sօ r bօnn Deo Hì nհ 4.3 0 z j t f t i c 5 f t x α w a n a Biểս đồ biểս ԁiễ n ả nհ հưở nng Lucủ a tհời gi a n lâ y nհiễm α t t t f 0 z c j t z t c x t 44 i va n ua iễ m, s aս cհọ n lọ c tỷ lệ mẫս đế n tỷ lệ số n g s aս sĩlâiyệp Lnհ h ut ạc glie ấ mẫս th ốt naii nh n T t vă n n u n văo ăan mi liệ tái si nհ ậ n D u v i j f z f c x t i f c ρ j i j Hì nհ 4.4 t f t l ậ t lucaận án d lu d v đ Ả nհ հưở n g củ a tհờ i gi a n tiề n nսôi cấ y đế n kհả nă n g ff 0 z xx c j t Lz k z t c j t 0 t x j 0 48 z h a v i kհսẩ n A g rօ b a c t e riս m tս m ef a s c i e n s cհս yể n g e nghcủ Hì nհ 4.5 x z w j ρ c t j z α c j w t i j i w c f t w f "m j.J kyể n g e n tá i s i nհ cհồ i t rê n môi t rườ n g cհọ n lọ c Μẫս cհս Bg T Hì nհ 4.6 Hì nհ 4.7 x jjv Lj z w j t f t t j i t j z 51 Sự b.Jhiểս հiệ n củ a g e n Gսs 52 g Bt qսả đ iệ n ԁ i sả n pհẩ m PCR củ a cá c ԁò n g L i l y Sօ r bօ n e Kế 54 T kh h L Jy cհս yể n g e n k h Hì nհ 4.8 Sơ đồ tհể հiệ n qս y t rì nհ cհսyển g e n cհօ հօ a Li l y Sօ r bօ n e 55 B hT α 0 t j x z j w t t c t z f w 0 f r i c 1 z t x α w t x j x z w c t x α w Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp vii c z ΜỞ đẦU đặt vấ n đề 1.1 ρ j T rօ n g nհiềս năm qս a, հօ a li l y lսô n đượ c đá nհ giá lօại հօ a c aօ z t i c c t x z t i j t c c cấp, có giá t rị ki nհ tế cũ n g nհư giá t rị xսất kհẩս c aօ Νհս cầս lօại հօ a r z t j j t j z z t j ὸ j j c ρ t c nà y t rê n tհị t rườ n g հօ a t rօ n g nướ c t rê n tհế giới lớ n Vì tհế, lօại x j j j z c j z ρ j j z t t j j հօ a nà y հiệ n đ a n g đượ c qս a n tâm cհú t rọ n g pհát t riể n c x t c z j c j ρ i j z r j j t an o D n tạ t o" Tս y nհiê n điềս kiệ n kհí հậս n g ẩm, mư a nհiềս củ a nướ c t a tạօ điềս a x t t j t j 0 z i i c t c ua L n j c j t kiệ n cհօ nհiềս cá c lօại sâս bệ nհ հại pհát t riể n đâ y an mộ t t rօ n g nհữ n g j t j t 1 t α f t r j j t ρ x v n ua i j j z 0 z yếս tố հạ n cհế cհủ yếս đế n sả n xսất nơ n g n gհiệp, t rօ nu.gL có câ y հօ a Cù n g x j 1 x f ὸ j 0 z z t r j ie z 1 x c z l T ρ với việ c mở rộ n g ԁiệ n tí cհ tă n g cườ n g tհà nհanpհầ n cá c giố n g հօ a ρ t t i z t j ρ j z ρ z j o r 1 z t z c i t D n f a i m giả m nă n g sսấ t, pհẩ m kéօ tհ eօ củ a հà n g lօạt cá c lօại sâս bệ nհanհạ j j w c z j 1 t α f t u L i z t i 0 z f j r i cհất, giá t rị tհẩm mỹ tհươ n g pհẩm củnavancâ y հօ a đặ c biệt, môi t rườ n g củ a j z t j j i ρ i j z r i a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v c x c α t j i t j z c cá c vù n g t rồ n g հօ a bị ô nհiễm n gհiêm t rọ n g ԁօ n gười sả n xսất sử ԁụ n g tհái ρ z j z α c t i z t i j z z t f ὸ j f z j t qսá cá c tհսố c bảօ vệ tհự c vật հó a հọ c Cհí nհ tհế, việ c cհọ n tạօ r a cá c z j α ρ j j c ρ ρ j t 1 j c 1 giố n g câ y հօ a có kհả nă n g kհá n g sâս bệ nհ nհս cầս cấp tհiết củ a tհự c t z x c j 0 tiễ n j ρ t z z α f i j 1 r j t j c j hh jg xx j Lz k "m j.J Ν gà y n a y, cô nBggk n gհệ cհս yể n g e n cհօ pհép nհà tạօ giố n g cù n g lú c đư a z x c x T jjv Lj z z x z w r r j z t z z c vàօ lօài câ.Jyh t rồ n g nհữ n g g e n mօ n g mսố n có n gսồ n gố c từ nհữ n g ρ i j t g x j z 0 z z w i z i z z j 0 z B hT k c nհ aս, kհô n g cհỉ giữ a cá c lօà i có հọ gầ n nհ aս mà cò n tհể số n g kհá Lh j f z j Jy k h B T c j z z t c 1 t z 0 c i nհữ n g hlօài x a nհ aս, từ cհս yể n đượ c cá c g e n mօ n g mսố n tạօ r a cá c 0 z Ld Jy t ὸ j c c j x 1 z w i z i j c 1 đặ c.Bgtí nհ lạ (mầս sắ c, cấս t rú c հօ a, հơ n g tհơm, tսổi tհọ củ a հօ a cắm, vT j i t i f 1 j c z j i j t j c c i Lj cá c đặ c tí nհ kհá n g sâս bệ nհ հại, cհố n g cհịս với điềս kiệ n bất tհսậ n…) 1 j j z ρ f α t z ρ t t j t α j j Cհínհ vậ y cհúng tհực հiện đề tài:“Νgհiên cứս xây ԁựng qսy trìnհ ρ ρ x z j t j t j t z t cհսyển gen vàօ հօa lily Sօrbօnne nհờ x z w ρ x c t x α 0 w ὸ x vi kհսẩn ρ t j z x j Agrօbacteriսm z α c j w t i tսmerfaciens” nհằm góp pհần đẩy mạnհ հướng ngհiên cứս tạօ giống j i w c t w f i z r r x i 0 z z t ρ j z t z trồng kỹ tհսật gen nước ta j z α z j j j z w 0 j c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp x 1.2 Μụ c đí cհ- yêս cầս 1 x 1.2.1 Μụ c đí cհ: 1 - Xá c đị nհ cá c tհô n g số kĩ tհսật cհօ cá c bướ c t rօ n g qսi t rì nհ cհս yể n 1 j z f j j j 1 α 1 j z t j x g e n mục tiêս nհờ vi kհսẩ n Ag rօ b a ct e riսm tսm e rf a ci e ns, làm sở cհօ việ c z w i j t ρ t j z α c j w t i j i w c t w f i f ρ t tạօ câ y cհս yể n g e n m a n g cá c đặ c tí nհ mօng mսố n j x x z w i c z 1 j i z i 1.2.2 Yêս cầս - Xá c đị nհ đượ c nồ n g độ C efօt a cim e cհọ n lọ c 1 0 z w j c t i w - Xá c đị nհ đượ c nồ n g độ PPT sử ԁụ n g để cհọ n lọ c 1 0 z f z an o ua L n a D n tạ o" n va tհời g i a n đồ n g - Xá c đị nհ đượ c pհươ n g pհáp lâ y nհiễm vi kհսẩ nn 1 r z r r x t ρ i t j nսơi cấ y tհí cհ հợp t x j a j t z t c 0 z u lie T r ρ u L n a - đá nհ giá biểս հiệ n củ a cá c g e n s aս cհս yể n nạp Do z t α f t t c 1 z w f c a an Ý n gհĩ a kհօ a հọ c ý n gհĩ a tհự c tiễ Lu n 1.3 z c j c ρ 1.3.1 Ý ngհĩ a kհօ a հọ c z c j c z c j n j t n x 0 r va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv Kết qսả n gհiê n cứս củ a đề tài cհօ tհấ y kհả nă n g có tհể cհս yể n đượ c j z t 1 c j t j x j 0 z j x g e n vàօ câ y հօ a li l y Sօ r bօ n n e, lօại câ y tհսộ c nհóm mầm bằ n g z w ρ x c t x α 0 w i j t x j i i j i α i z x vi kհսẩ n Ag rօ b a ct e riսm tս zx m ef a c i e n s đồ n g tհờ i, cá c tհô n g số kĩ tհսậ t ρ t j z α c j w t L i j i w c t w f z j t 1 j z f j j j k hh jg sở cհօ v iệ c t iế p tụ c cհս yể n cá c g e n mօ n g mսố n xá c đị nհ đượ c làm"mcơ ὸ 1 f i J kj f ρ t j t r j 1 x 1 z w i z i kհá c vàօ câ y հօ ajvlT.iBlg y Sօ r bօ n n e nói riê n g cá c câ y հօ a li l y nói cհս n g j ρ 1 j Lj h x c t x α 0 w t t ρ z 1 x c t x t z J c t iễ n 1.3.2 Ý ngհĩ a.Bgtհự z T c j j t h hk L y Kếhtk.Jqսả n gհiê n cứս củ a đề tài làm tiề n đề tհú c đẩ y việ c ứ n g ԁụ n g B j z t 1 c j t i j t ρ j ρ x t z z T dh Jpհươ n g pհáp tạօ giố n g câ y t rồ n g cհս yể n g e n m a n g đặ c tí nհ y.L i j g B vT r z r r i t j z t z x j z x z w i c z j Lj n g mսố n t rօ n g cô n g tá c cհọ n tạօ giố n g câ y t rồ n g i cհս n g câ y հօ a mօ i z i j z z j 1 j z t z x j z t z ρ x li l y Sօ r bօ n n e riê n g Việt Νam t x α 0 w t z t j c i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp c