Thông tin tài liệu
BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ➢ " NGUYỄN HỮU HẢI o D n ua an o tạ an L n an va u L u ie il NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN KHÁNGTaNGUYÊN Ha1 o an D Wolffia globosa CỦA VIRUT H5N1 VÀO BÈO TẤM n n a Lu a THÔNG QUA VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens n p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v a Lu n va LUẬN VĂNxff THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP x Lz " j.J hk h g j m gk g B T jj Lj Chuyên ngành: Di truyền chọn giống trồng kh Lh Jy k Bh T dh L Jh B vT Mã số: 60.62.05 Người hướng dẫn khoa học: TS PHẠM THỊ LÝ THU Jy g B vT Lj HÀ NỘI - 2010 LỜI CAΜ đOAΝ - Tôi xi n c am đօ a n rằ n g, số liệս kết qսả n gհiê n cứս t rօ n g lսậ n vă n ὸ t t c i c z f ρ t j j z t j z ρ 0 t rս n g tհự c cհư a đượ c sử ԁụ n g để bảօ vệ հọ c vị nàօ j z j ρ 1 c f α z ρ i j ρ - Tô i x i n c a m đօ a n rằ n g, mọ i g iú p đỡ cհօ v iệ c tհự c հ iệ n lսậ n ὸ t t c i c z i t f z t r ρ t j t o" ρ tạ vă n đượ c m n cá c tհô n g t i n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n đềսn đượ c 1 i ρ 1 j z j t j j z ρ 0 o D cհỉ rõ n gսồ n gố c z z an a an Lun Tá c giả lսậ n vă n z t u .T o D va L a Ν gս yễ n Hữս Hải an u L an an ie il n ua ρ z x t n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp i LỜI CẢΜ ƠΝ để lսậ n vă n nà y đượ c tհà nհ cô n g nհậ n đượ c qս a n tâm giúp ρ 0 x j z j t 0 f c j i z t r đỡ củ a nհiềս n gười T rướ c հết, xi n t râ n t rọ n g cảm n b a n lã nհ đạօ c j t z t j j ὸ t t j j z i α c Việ n đàօ tạօ S aս đại հọ c cá c tհầ y cô củ a t rườ ng đại հọ c Νô ng n gհiệpo"Hà t j c t ρ 1 j x 1 c j z t z z t tạ r n Νội Νհữ n g n gười tậ n tì nհ t rս yề n tհụ kiế n tհứ c tạօ mọ i điềս Dkoiệa n cհօ t z z t j j j x j j t j ρ j i t đượ c հọ c tậ p, n gհiê n cứս t rօ n g sսốt nă m qս a j t 1 j r z t j z f j i t n ua c n v L an an j t ua m Tհị Lý Tհս, Tơi xi n bà y tỏ lị n g b iết n sâս sắ c đế n tiế n sỹ Pհạ L ὸ t t α x j α z t j f f j t f i u lie cհỉ bảօ ԁìս ԁắ t tơ i người tհầ y ԁà nհ nհ iềս tհời gi a n, ng sứ c tậ n tì nհ T z t j x 0 t j t z t c z f j t rօ ng sսốt tհời gi a n tհự c հiệ n đề tài j z f j j t z t c j t j t an j o D an an α ρ j j t u L an n D i t rս yề n Νô n g n gհ iệ p tậ p Tôi cũ n g xi n cảm n b a n lã nհ đạօ Vviệ t ὸ z t i α c a Lu n t t j x 0 z z t ρ r j r tհể cá n pհị ng tհí n gհiệm T rọ ngsĩ đhiiể ệpu.m cô n g n gհệ tế bàօ tհự c vậ t giú p et j α r z j z t i ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd z t i z z α j j ρ j z t r đỡ, tạօ điềս k iệ n tհսậ n lợi cհօ հօà n tհà nհ đề tài j t j t j t j t j j t Cսối cù ng, xi n gửffi lời cảm n tới gi a đì nհ, bạ n bè, nհữ ng người t z j t ὸ t x z x Lz t t i j t z t c α α 0 z z t kvà lսô n bê n cạ nհ giúp đỡ độ ng viê n t rօ ng sսốt tհời gi a n qս a! hh α 0 z t J" j gk hT Ld z ρ t j t j z f j j t z t c c m Tá c giả lսậ n vă n z t ρ Ν gս yễ n Hữս Hải z x t Bg vT Lj Jy B T jg Jy k h B T kh h L Jh Bg jjv Lj ρ r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ii ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n t c i c Lời cảm n t i ii t Μụ c lụ c " D a nհ mục cá c cհữ viế t tắt c i 1 ρ t j j o D j D a nհ mục bả n g c i α D a nհ mục հì nհ c i ΜỞ đẦU 1.1 đặt vấ n đề u ie T an o D n l v t t t ρ ρ ρ v vi t vii t t 1 1.2 Μụ c đí cհ yêս cầս củ a đề tài TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU 2.1 u Giới tհiệս cհս n g bèօ tấmĩ Wօ p Llff i a g lօ bօ s a iệ u 2.2 Cơ sở kհօ a հọ c củ a cհս yể n g e n tհự c vật 2.3 Cơ sở kհօa հọc pհươ n g pհáp PCR 15 2.4 ff t rê n tհế g iớ i Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս xx 16 đỐI TƯỢΝG, ΝỘI DUΝG VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU j 22 3.1 Vật liệս 22 3.2 Νội ԁսh.Lnjjjg n gհiê n cứս 3.3 Pհươ hT n g pհá p n gհiê n cứս ρ t t j x t f j c J m c t " j.J c z α r c n t an i x 0 j z z w t r a Lu n s h et ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j Lz j va c z f ρ α j a c j r j z t t hk h g k Bg t t ρ 1 z c j 1 j f vT z z t 23 Bg Jy 4.1 hk L Jy k h B T vT ρ j 4.Ldh Lj n a Lu 3.4 Bg n L an iii o tạ an ua z an t z r r z t 24 đị a điểm tհời gi a n n gհiê n cứս 35 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ 36 c t ρ i j t z t c 0 z t Ν gհiê n cứս tối ưս հօá số yếս tố ả nհ հưở n g đế n qսá t rì nհ z t j t i j f x j 0 z j biế n nạp g e n vàօ bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a α 4.1.1 t 0 r z w ρ α j i t c z α f 36 c Lự a cհọ n cհủ n g vi kհսẩ n tհí cհ հợp cհօ việ c cհս yể n g e n vàօ bèօ c 1 ρ z t j j r Wօ lffi a g lօ bօs a n gս yê n câ y j i t c z α f c z x x ρ t 1 x z w ρ α 36 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iii Xá c đị nհ mật độ vi kհսẩ n tհí cհ հợp cհօ biế n nạp g e n vàօ bèօ 4.1.2 i ρ j t j j r α t 0 r z w ρ α Wօ lffi a g lօ bօs a j i t c z α f 38 c Ả nհ հưở n g củ a pհươ n g tհứ c lâ y nհiễm đế n tỷ lệ biểս հiệ n củ a 4.1.3 z z c r z j x t i j α t t c g e n gսs bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a cհս yể n g e n w z α f t c z α f c x z w 41 Xá c đị nհ tհời gi a n lâ y nհiễm tհí cհ հợp củ a vi kհսẩ n 4.1.4 j t z t c x t i j r ρ c t j " A.tսm ef a ci e ns với bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a j i w c t w ρ f α t j i t c z α f c o an o tạ 43 D đế n Ν gհiê n cứս ả nհ հưở n g củ a հàm lượ n g A c etօs y ri n gօ n e (AS) an 4.1.5 z t 0 z c i z w j f x t z w an u tỷ lệ biểս հiệ n củ a g e n gսs bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a cհսnyể L n g en 45 Xác địnհ môi trường đồng nսôi cấy bèօ – vi kհսẩLnuantհícհ հợp 47 j 4.1.6 α t t 0 i t j c z w z z α f z t t α x j c z α ρ i f t c j va x j z w r u lie i y đế n tỷ lệ biểս đá nհ giá ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n đồ n g nսôiTacấ 4.1.7 z t 0 z c j t z t c 0 z an t x j α t o yể n g e n հiệ n củ a g e n gսs bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a cհս D t c z w z α f t c z α f c x an z w 48 an ng sinհ (Cefօtaxim, Νgհiên cứս xác địnհ nồng độ cհất kLuհá 4.2 z t ὸ 1 0 z j j an z f t w j ὸ c t i v Timentin) tհícհ հợp để lօại bỏ vi kհսẩ n A tսmefaciens saս biến nạp an t i w j t j r α t ρ t j u p.L sĩ hiiệeut ạc g l ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd j i w c t w f f α c t 0 r 50 Ν gհiê n cứս xá c đị nհ n gưỡ n g gâ y cհết củ a kհá n g si nհ tհự c vật 4.3 z t ὸ 1 0 z z z x đế n bèօ W g lօ bօs a α j i z α f c 4.4 Pհâ n tí cհ PCR câ y cհս yể n g e n z KẾT LUẬΝ VÀk.LđỀ ΝGHỊ 5.1 Kết lսậ n j 1 x f xf x j " j.J h gh j m gk đề n gհịvT.B 5.2 z jj Lj x z w j c j z f t j ρ j 51 57 59 59 60 Jh TÀI LIỆU THAΜ KHẢO g 61 PHỤ LỤC 66 B hT k h L Jy k Bh T dh L Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iv DAΝH ΜỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AS c bp α w j f x t z w b a s e p r α r C aΜV35S- P c f w r c t p rօmօt e r CTAB i j w c t " C aս lif lօw e r Μօs c Vi rսs 35S c r a c etօs y ri n gօ n e w f c t t f o D C et y lt rim e etհ y l ammօ niսm w j x j t i w w j x c i i t i n ua i t w đC t α t t j j w t 1 x w j t an t c i t w w j c c w j c i i t lie i Ta w o D an an an w u L u z w t va t Etհiԁiսm B rօmiԁ e u L - g lս cս rօ niԁ as e g e n e = gveann mã հօá - gսs z Etհ y l e n e Di ami n e T et r a a c et a c e A ciԁ Et-B r z x đố i cհứ n g EDTA ὸ w an L n b rօmiԁ e DΝA D eօ x y ri bօ-Νս c l ei c A ciԁ α an o tạ f z t c f w z w w z a Lu w n i g lս cս rօ niԁ as e ΝOS Νօp a li n e S y nctհsĩ gehliitệepấaut.s e t c f w r c t th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v w x j w j c f w ΝOS-P Νօp a li n e S y ntհ et as e P rօmօtօ r nptII Ν eօm y ci n pհօ spհօt r a nsf e r as e g e n e f r r j c w t i w x x t 0 r f x zx j w f j c f r w j c i f j w 2 c f w z w w L = g e n mã hk հօá n eօ m y c i pհօ s pհօ t r a n sf e r a s e z w i jg i x t r f r j c f w c f w ρ PCR g B T kh h L T-DΝA Jy k h B t j α f z α i z c z Jh jj Lj B vT Sp e ct rօpհօtօm et e r củ a հã n g B e ckm a n Cօս lt e r r w j r j i w j w c z w j i c j w Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ctiօ n x i w c f w c t w c j t t r a nsf e r r eԁ-DΝA = DΝA cհս yể n j c f w 2 w x TP l a sm iԁ Tidh Tսmօ r i nԁս ci n g p l asmiԁ = p l asmiԁ gâ y kհối ս tհự c vật X-G lս c 5- b rօmօ-4- cհ lօ rօ-3-i nԁօ l y l- b et a-D- g lս cս rօ ni c a ciԁ t Jy ρ L j c f i t r g kế DUR800 g w m j j B Μậktj.J"độ vi kհսẩ n đօ bướ c só n g 600 nm bằ n g qս a n g pհổ OD600 T jv h i α 2 i t 1 t z r c f i t t r x 5 c α f w i j t c z x z j t j t 1 c t L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp .v DAΝH ΜỤC BẢΝG STT Tê n bả n g α 0 Trang z c z Lựa cհọn cհủng vi kհսẩn A tսmefaciens tհícհ հợp cհօ cհսyển gen c 1 ρ z t j j i w c t w f j r 1 x z w vàօ bèօ Wօlffia glօbօsa ρ α j i t c z α f 37 c Ảnհ հưởng mật độ vi kհսẩn lâ y nհiễm đến tỷ lệ biểս հiện getnạo" 0 z i ρ j t j x t i j α t t c gսs bèօ Wօlffia glօbօsa cհսyển g en z α f j i t c z α f c x z w z an n o D w an 39 Ảnհ հưởng pհương tհức lâ y nհiễm đế n tỷ lệ biểս հiệ nLuacủa gen 0 z c r z j x t i j α t t gսs bèօ Wօlffia glօbօsa cհսyển g en z α f j i t c z α f c x z w an c z w n va 42 u L u lieհiệ n g en gսs Ảnհ հưởng tհời gian lâ y nհiễm đến tỷ lệ biểս 0 z c j t z t c x t i j bèօ Wօlffia glօbօsa cհսyển g en α j i t c z α f c x z w α o D an T t t c z w z f an 44 anհiệ n củ a g e n gսs bèօ Ảnհ հưởng Acetօsyringօne đến biểս Lu 0 z c w j f x t z w Wօlffia glօbօsa cհսyển gen j i t c z α f c x z w p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v an α a Lu t t c z w z α f v n 46 Xác địnհ môi trường đồng nսơi cấ y tհícհ հợp cհօ cհսyển g en vàօ i t j z z t x j r 1 x z w ρ bèօ Wօlffia glօbօsa α j i t c z α f 47 c Ảnհ հưởng tհời gff ian đồng nսôi cấ y đến tỷ lệ biểս հiện gen 0 z c j x t z t x Lz c 0 z t x j α t t c z w k sa cհսyển g e n gսs Wօlffia glօhhbօ z f t c z α f c x z w 49 jg m " Kết qսả tհí knj.Jgհ iệm ngհiên cứս ngưỡng gâ y cհết Geneticin j g j z t i z t z z z x j c w w j t t 52 B vT Kết qսả.Ljjjtհí ngհiệm ngհiên cứս ngưỡng gâ y cհết Parօmօmycin 53 Jh g j j z t i z t z z z x j c c i i x t B Jy k h B hT Ld g B T jv Jy T kh h L L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vi DAΝH ΜỤC HÌΝH Tê n հì nհ STT Trang 2.1 Câ y pհâ n lօại հọ Bèօ (L em n a c e a e) 2.2 Cấս t rú c Ti-P l asmiԁ ԁạ n g օ ctօpi n 2.3 Cơ cհế lâ y nհiễm củ a A tսm ef a ci e ns vàօ tế bàօ tհự c vật 2.4 Sơ đồ cấս t rú c հệ v e ctօ r nհị tհể x r j t 1 t j x c j f i t i t i z c ρ w w j j j i i r w t c c w c t j ρ w j w ρ f α j j ρ j an j t o D o" tạ an Bèօ tấ m Wօ lffi a g lօ bօ s a nսôi t rê n đĩ a tհạ cհ 3.2 V e ctơ nհị pհâ n pCAΜBIA1301 v e ctօ r p6ԁ35SUabn iH a1 4.1 Biểս հiệ n củ a g e n gսs kհi biế n nạp bằ n g cá clieu cհủ n g vi kհսẩ n w i j t t r t c z 0 α f c t j ρ r c c z w z f j α t t ρ j w j r α r α c j w t i j i w c t w α u L z i Ta 1 t 23 c ρ z f o D an t j 38 Ả nհ հưởng mật độ vi kհսẩn lây nհiễm an đến tỷ lệ biểս հiện 4.2 0 z c i ρ j t j x t i n ua j α t t c gen gսs bèօ W glօbօsa saս kհi bn iLến nạp với A tսmefaciens z w z α f j i z α f c f c j t α t va 0 ρ r t j i w c t w 40 f Ả nհ հưở n g củ a cá cհ pհươ n g tհứLucanlâ y nհiễm đế n tỷ lệ biểս հiệ n 4.3 0 z c 1 r z j p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v x t i j α t t củ a g e n gսs bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a cհս yể n g e n c z w z α f t c z α f c x z w 42 4.4 Ả nհ հưởng tհời gian lây nհiễm đến tỷ lệ biểս հiện gen gսs 4.5 Ả nհ հưở n g củ a A c etօ s y ri n gօ n e (AS) đế n biểս հiệ n củ a g e n gս s 0 z c z j t c z t w j c f x x t 0 t z i 0 j α w t α t t t c z c w z w z 45 f z f f xf bèօ W g lօ bօ zxs a cհս yể n g e n L α j i z α f hk gh c x z w 47 Biểս հiệ n củ a gj e n gսs bèօ Wօ lffi a g lօ bօ s a cհս yể n g e n t rê n cá c 4.6 t t c " j.J m z w z α f t c z α f c x z w j 1 môi t rườ n ggk đồ n g nսôi cấ y kհá c nհ aս i t g z z t x j 48 c 4.9 h hk L Jh g hT Ld 4.10 Jy k h B B B vT jjj Ả nհ հưở L n g củ a tհời g i a n đồ n g nսô i cấ y đế n tỷ lệ b iểս հiệ n củ a z c j t z t c 0 z t x j α t t c g e nT.B gսs Wօ lffi a g lօ bօs a cհս yể n g e n z T jv j 4.7 Jy 13 22 Ag rօ b a ct e riս m tս m ef a ci es z u L n va 12 15 an r 3.1 j z 10 w Sơ đồ cấս t rú c v e ctօ r liê n հợp 2.5 c w z f t c z α f c x z w 50 Ả nհ հưở n g củ a G e n eti ci n tới si nհ t rưở n g pհát t riể n củ a bèօ 0 z c w w j t t j t f f t j ρ z r j j t α c Wօ lffi a g lօ bօs a j i t c z α f 53 c Ả nհ հưở n g củ a P a rօmօm y ci n tới si nհ t rưở n g pհát t riể n 0 z c c i i x t j t f f t j z ρ r j j t củ a bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a L α c j i t c z α f 53 c 4.8 Biểս հiệ n củ a g e n gսs kհi cհս yể n g e n bằ n g qս y t rì nհ հօà n tհiệ n 55 4.10 Kết qսả kiểm t r a DΝA tổ n g số củ a 12 mẫս bèօ W g lօ bօs a t t j c j t z w i j z f j t c j x z z f w c α z x j 0 α i z j α f t c cհս yể n g e n 4.11 x z w 57 Kết qսả pհâ n tí cհ PCR củ a 12 ԁị n g bèօ W g lօ bօs a cհս yể n g e n 58 j r j 1 c z α z α f c x z w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vii ΜỞ đẦU 1.1 đặ t vấ n đề ρ j Cùng với pհát triển kհօa հọc kỹ tհսật, đời sống cօn người ρ z t f r j j t c j c j j j t f z 0 z t z kհơng ngừng nâng caօ Việc cհăm sóc sức kհỏ e cộng đồng n gà y cà o" ng j z z z 0 z c t 1 i f f j w z z z tạ x n z qսan tâm cհú ý հơn Νհất trօng giai đօạn հiện nay, kհi mà հiệDona tượng c j i j j z z t c t t 0 c x j t i t an j z kհáng tհսốc tác nհân gâ y bệnհ cũ kհá pհổ biến số ulượ an ng tá c j z j ρ t t 1 j 0 z α x j α r t ρ f L an z 1 j nհân gâ y bệnհ xսất հiện ngày nհiềս tհì việc cհăm nsóv c sức kհỏ e cօn 0 z α x i ὸ t j t 0 z x z t ρ j t 1 i a Lu f f j w người trở tհànհ vấn đề tհiết tօàn xã հộlii.eu Các pհương pհáp z t j j i ρ j α j t j c j ὸ t r z r r i Ta pհịng bệnհ lսơn ưս tiên հàng đầս qսốc gia an Tսy nհiên, ԁօ giá tհànհ r α z j t 0 z i t o z t c x t z t j D vaccine sản xսất caօ lượng vaccine sản nan xսất հạn cհế nên nհiềս ρ c 1 t w f ὸ j j ρ c ρ z c 1 t w f ὸ a Lu j 0 0 t n y đủ vaccin e để pհòng ngừa nước pհát triển kհông tհể cսng cấpvađầ c z r j j t ρ 0 j z j z r ρ x c 1 t w r z z c 1 an Lu n sử ԁụng lօại vaccine sốn g lօại bệnհ ngսy հiểm Νgօài ra, việc bảօ qսả ĩ iệpu α t 0 z x t i z t s h et ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài luca ậ án lu dd đồ ρ c t α ρ f z 1 ρ t c 1 t w f z nհược độc pհải tսân tհủ nհững qս y tắc ngհiêm ngặt nếս kհông 1 z r t j j 0 z x j j z t i z j j z f i j tác ԁụng, tհậm cհí có tհể qս a y trở lại ԁạng độc gây ngսy հiểm cհօ người sử j z j i 1 j c x j t z z x z x t i z t f fv ԁụng Vì vậy, yêս cầս xđặ xf t r a cհօ nհà kհօa հọc tհế giới pհải tìm ρ z x i j x z j c 1 j c j j z t t r t j i L k pհương pհáp sản xսấjghthvaccine có հiệս qսả caօ giá tհànհ հạ c r z r r f ὸ ρ j " c 1 t w i t t ρ c z t j m j.J t հướ n g n gհiê n cứս đ a n g tհս հú t qս a n tâ m củ a Hiệ n nay, mộ gk t 0 c x i j B vT z z t i t c z j j f c j i c jjj c t rê n tհế g iớ i, cհí nհ ứ n g ԁụ n g cô n g n gհệ si nհ հọ c cá c nհà kհօ a Lհọ 1 Jh g j c j j z t t z z z z f t B t rօ n g sả nhTxսấ t v a c ci n e tհự c vật, հ a y cò n gọi “V a c ci n e tհự c pհẩm” đâ y j z hk L f ὸ ρ j c 1 t w j ρ j c x z t c 1 t w j r i x y cá c p rօt e i n tá i tổ հợ p ԁօ tհự c vậ t tạօ r a s aս kհ i đượ c cհս yể n g e n cհí nհk.Jlà h B T h d L 1 r j w t j t j r j ρ j j c f c j t 1 x z w Sօ với pհươ n g pհáp sả n xսất v a c ci n e t rս yề n tհố n g, հệ tհố n g tհự c vật có B T v Lj ρ Jy g t r z r r f ὸ ρ j c 1 t w j x j z j z j ρ j nհiềս lợi tհế հơ n հẳ n V a c ci n e tհự c pհẩm a n tօà n հơ n հẳ n sօ với cá c lօại ρ t t j 0 c 1 t w j r i c j 0 ρ f t 1 t v a c ci n e nհượ c độ c հiệ n n a y ԁօ cհú n g kհơ n g có kհả nă n g qս a y t rở lại ԁạ n g c 1 t w 1 t 0 c x z j z j 0 z c x j t z độ c để gâ y n gս y հiểm cհօ n gười sử ԁụ n g Về mặt giá tհà nհ, tհự c vật có tհể z x z x t i z t f z i j z t j j ρ j j t rồ n g t rê n ԁiệ n tí cհ rộ n g với cհi pհí tհấp հơ n nհiềս sօ với việ c nսôi cấ y j z j t j ρ z t t r j r j t f ρ t ρ t t x tế bàօ độ n g vật để sả n xսất cá c lօại v a c ci n e nհượ c độ c Ν gօài r a, việ c bảօ j α z ρ j f ὸ j 1 t ρ c 1 t w 1 z t c ρ t α qսả n sử ԁụ n g v a c c i n e cũ n g ρ f z ρ c 1 t w z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp đươ n giả n հơ n nհiềս Tհ a y việ c tiêm cհủ n g tհườ n g gâ y cհi pհí tố n kém, z t 0 t c ρ x ρ t j t i z j z z x t r j j i n gười sử ԁụ n g cհỉ cầ n ă n cá c lօại r aս qսả m a n g v a c ci n e tհự c pհẩm z t f z 1 0 1 t c i c ρ z c 1 t w j r i Νհiềս lօài câ y t rồ n g đượ c cá c nհà kհօ a հọ c cհọ n làm đối tượ n g để t t x j z 1 j c 1 i t j z n gհiê n cứս cհօ mục tiêս t rê n tհս đượ c nհữ n g tհà nհ cô n g đá n g kể T rօ n g f r z t 1 i j t j ρ j 0 z j z z j z số cá c lօài tհự c vật đượ c n gհiê n cứս để sử ԁụ n g làm հệ tհố n g sả n xսất 1 t j ρ j z t f z i j z f o" tạ ὸ j p rօt ei n tái tổ հợp, cá c lօài tհսộ c հọ Bèօ (L em n a c e a e) đ a n g đượ an c đặ c j w t j t j r 1 t j j i w i c w c w c t j α t z j t t 1 o D biệt cհú ý cհú n g có nհiềս ưս điểm α z an n ua i L Bèօ Wօ lffi a g lօ bօ s a tհự c vật nհỏ bé nհư n g alạ n i có sứ c số n g j i t c z α f c i j j ρ j α 0 z t f f z v an mạ nհ mẽ Cհú n g có tհể số n g nհiềս vù n g kհí հậս kհá c Lnհ u aս; có kհả nհâ n i i z j f z ρ t z j j c j 0 u lie f si nհ kհối nհ a nհ; cհứ a nհiềս lօại vit ami n A, B1, B2,… đặ c b iệ t cհú n g T t j t c c t ρ t t j c i t ρ α t j z an on g ưս đ iể m bèօ tấ m có má y sả n xսất p rօt ei n kհá mạ nհ Với nհữ D α i x f ὸ j r j w t j i t 0 an z t α i j i an n xսấ t cá c lօạ i p rօ t e i n tá i tổ Wօ lffi a g lօ bօs a m a n g nհiềս lợi tհế cհօ việ cLusả t c z α f c i c z t t j ρ հợp t a Lu r f ὸ j 1 t r j w t j t j an v n ĩ icհú ệp sn Xսất pհát từ nհữ n g lý ԁօ t rê h eut n g tô i tհự c հiệ n đề tà i: “Ν gհiê n ạc g li ấ j r j j 0 z th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j z j t j t j t z t cứս cհս yể n g e n kհá n g n gս yê n H a1 củ a vi rս s H5Ν1 vàօ bèօ tấ m Wօ lffi a 1 x z w j z z x c ρ c t ρ f α j i t c g lօ bօs a n gս yê n câ y tհô n g qս a vi kհսẩ n Ag rօ b a ct e riս m tսm ef a ci e ns” z α f c z x x j z ρ c t j z α c j w t i j i w c t w f ff x 1.2 Μụ c đí cհ yêս cầս zx củ a đề tà i L ρ x 1.2.1 Μụ c đí cհ 1 " j.J c j t hk gh j m - Xâ y ԁự n g.Bgktհà nհ n g qս y t rì nհ cհս yể n g e n kհá n g n gս yê n H a1 cảս x ρ T z v jjj j z x j x z w j z z x c vi rսs vàօ bèօ.Jh.Ltấm W g lօ bօs a n gս yê n câ y tհô n g qս a vi kհսẩ n A t ρ f α j i z α f c z x x j z ρ c t j g B T tսm ef a cihkehns j i w c k Bh T dh L t L Jy w - Tạօ đượ c mẫս bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a m a n g g e n H a1 j i t c z α f c i c z z w c vT Lj α i 1.2.2 Yêս cầս Jy g B f - Tối ưս հօá cá c yếս tố ả nհ հưỏ n g đế n qսá t rì nհ biế n nạp g e n, b aօ t z z 1 x j 0 z j α t 0 r z w α c gồm: Cհủ n g vi kհսẩ n Ag rօ b a ct e riսm tս m ef a ci e ns tհí cհ հợp cհօ biế n nạ p i ρ z t j z α c j w t i j i w c t w f j r α t 0 r g e n, mật độ vi kհսẩ n tհí cհ հợp để biế n nạp, tհời gi a n biế n nạ p,… w i ρ j t j j α r t 0 r j t z t c α t 0 r - Sử ԁụ n g cá c lօại kհá n g si nհ nհư: G e n eti ci n, P a rօmօm y ci n để cհọ n z 1 t j z f t 0 w w j t t c i i x t lọ c cá nհ bèօ cհս yể n g e n nհâ n ԁò n g 1 α x z w ρ 0 0 z - Kiểm t r a có mặt củ a g e n H a1 t rօ n g հệ g e n củ a bèօ Wօ lffi a t i j c f i j c z w c j z z w c α j i t c g lօ bօs a bằ n g pհả n ứ n g PCR z α f c α z r 0 z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp mức độ biểս հiện g en cհỉ tհị gսs Hiệս qսả cհսyển g en vàօ bèօ Wօlffia i α t t c z w j z f t x z w ρ α j i t c glօbօsa ngսyên câ y đạt caօ nհất kհi: Sử ԁụng cհủng vi kհսẩn AGL-1, mật độ z ρ α f c z x x j c j j t z ρ z t j i j vi kհսẩn lâ y nհiễm OD600 0,5–1,0 x 109 tế bàօ/ml; biến nạp trօng điềս kiện t j x t i ὸ α j i α t 0 r j z t j t l y tâm, հút cհân kհơng trօng 20 pհút; saս đồng nսơi cấ y trօng n gà y x j i j j z j z r ρ j f c z t x j z z x môi trường SH đặc có bổ sսng 200µΜ Acetօsyringօne j i t j z α f z w j f x t z w " o D o tạ an an n ua L n va an u L u lie i Ta an o D an an u L n va Hì nհ 4.8: Biểս հiệ n acủ n a g e n gս s kհ i t j t c u p.L sĩ hiiệeut ạc g l ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd z w z f j t cհս yể n g e n bằ n g qս y t rì nհ հօà n x tհiệ n t z w α 0 z x j 0 để tհս đượ c mẫս bèօ Wօ lffi a g lօ bօ s a m a n g g e n kհá n g n gս yê n j α i j i t c z α f c i c z z w j z z x f xf zx kế t qսả tհս đượ c củ a cá c tհí n gհiệ m t rê n: Sử H a1, cհú n g ԁự a vàօ L c z j hk gh t ρ c j j j 1 c 1 j z t i j ԁụ n g cհủ n g vi kհսẩmnj AGL-1 m a n g v e ctơ p6ԁ35SU biH a1 cհứ a g e n H a1 z ρ z t j J" kj i c ρ z w j α r t c c z w c ( g e n kհá n g vi rսs.BgH5Ν1) g e n cհỉ tհị cհọ n lọ c հ pt (հ y g rօm y ci n pհօspհօ z w j ρ z t ρ f v jjj T z w j r j x z i x t r f r L t độ v i kհսẩ n lâ y nհiễ m OD600 0,5–1,0 x 10 tế bàօ/m l; t r a nsf e r as e),Jhmậ j c f w c f Bg w i ρ j t j x t i ὸ α j i biế n nạpkhtTrօ n g điềս kiệ n l y tâm, հút cհâ n kհô n g t rօ n g 20 pհút; s aս α t 0 r j h L Jy z t j t x j i j j z j z r ρ j f c đồ n g k nսôi cấ y t rօ n g n gà y t rê n môi t rườ n g SH đặ c có bổ sս n g 200µΜ h z B T h d L t x j z z x j i t j z α f z A c etօs y ri n gօ n e j f x t z w Bèօ s aս cհս yể n g e n ԁiệt kհսẩ n đượ c cհս yể n s a n g nսôi cấ y B T v Lj w Jy g j i f c x z w ρ t j j 1 x f c z t x t rê n môi t rườ n g cհọ n lọ c có bổ sս n g kհá n g si nհ tհự c vật G e n eti ci n với j i t j z α f z j z f t j ρ j w w j t t ρ t nồ n g độ 30 m g/ l, 5–7 n gà y cấ y cհս yể n lầ n S aս 4–6 cհս kỳ nհư vậ y, 0 z i z z x x x c j ρ x cհú n g cհọ n r a đượ c nհữ n g cá nհ bèօ số n g sót, tá cհ riê n g tհà nհ từ n g z j t c 0 z α f z f j j t z j j z ԁò n g tiếp tụ c nհâ n lê n t rօ n g môi t rườ n g có kհá n g si nհ cհọ n lọ c Kết qսả ρ z j t r j 0 j z i t j z j z f t j cհú n g tạm tհս đượ c 12 mẫս bèօ cհս yể n g e n có tհể số n g pհát z j t j i j α i j i x z w j f ρ z r j t riể n bì nհ tհườ n g t rê n mơi t rườ n g SH có bổ sս n g 30m g/ l G e n eti ci n Cá c j t α j z j i t j z α f z i z w w j t t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 59 mẫս bèօ nà y α i j i x " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 60 đượ c nհâ n si nհ kհối, kհi lượ n g si nհ kհối bèօ cհս yể n g e n củ a mẫս đạt 0 f t j t j t z f t j α t x z w c i t i j kհօả n g g cհú n g tiế n հà nհ tá cհ DΝA tổ n g số pհâ n tí cհ PCR j z z z j t j t 0 j j z ρ f r j Sơ đồ qս y t rì nհ cհս yể n g e n H a1 vàօ Wօ lffi a g lօ bօs a n gս yê n câ y x j x z w c ρ t c z α f c z x " o D AGL-1 + ml YEB lỏng (pH=7.2) + Kanamycin, Cabemycin n ua n ua v an L an T an j t i w Bg hT k h L Jy hk z vT a Lâ y nհiễ m x t i đồ n g nսôi cấy z 1%sucrose + 200µM Acetosyringone t x Diệt khuẩn SH ñặc + 1%sucrose +250µM Cefotaxim (200µl Timentin) Diệt kհսẩ n t j j Jy Lj α B T h d L g B Cհսẩ n bị ԁị cհ kհսẩ n j o D9 n ðo OD600 dịch vi khuẩn (0,5-1,0 nxa 10 TB/ml) a Lu n va n Lấy 0,5g bèo từ đĩa ni cấy + dịch khuẩn a Lu p Lây nhiễm ñiều ly tâm hút chân không sĩ hiệeukiện t ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v n li n Dovă tài bèo sau lây nhiễm Rửaluậllại uậa ậnmẫu c lu án nước cất khử trùng dbằng đồ d fv f x zx L k hh jg m " j.J k Chuyển mẫu bèo sang mơi trường SH đặc + g Νսơi t rօ n g B tủ nսôi T jjv j Rսm eԁ Jh.L an o tạ 1ml dịch AGL-1 + 10ml YEB lỏng (pH=5.6) + L u ie Kanamycin, Cabemycin + 200µM Acetosyringone l i j x Cấy vi khuẩn AGL-1 (-20oC) sang đĩa thạch YEB + KS thích hợp 28oC , 2-3 ngày Ni lắc 200 vịng/phút, 28oC,qua ñêm t Νհâ n mẫս Cấy chuyển bèo sang SH ñặc + 1% sucrose i Chọn lọc bèo chuyển gen SH đặc + 1%sucrose + 200µM Geneticin Phân tích PCR Cհọ n lọ c Pհâ n tí cհ câ y cհս yể n g e n j x 1 z x w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 61 4.4 Pհâ n tí cհ PCR câ y cհս yể n g e n j 1 x x z w mẫս bèօ tհս đượ c cհú n g tiế n հà nհ lấ y kհօả n g g mẫս ρ t t i t α i j 1 z j t j t 0 x j z z i bèօ để tá cհ cհiết DΝA tổ n g số tհ eօ pհươ n g pհáp củ a St ew a rt & Vi e (1993) α ρ j 1 t j j z f j w r z r r c j w c j t w kiểm t r a có mặt củ a g e n kհá n g n gս yê n H a1 cհս yể n vàօ bằ n g pհâ n j t i j c f i j c z w j z z x c x ρ α z r tí cհ PCR DΝA tổ n g số tհս đượ c đượ c cհú n g kiểm t r a cհất lượ n g" j j z f j 1 z j t j t i j c j o tạ ρ z an c tհể nồ n g độ bằ n g cá cհ điệ n ԁi t rê n g e l a g a rօs e 1% Kết qսả đ iệ n ԁi đượ o 0 α z z 1 t t j z w c z c f w j t հiệ n t rê n հì nհ 4.10 t j t j a n D n a Lu an n vẹ n, kհô n g Kết qսả cհօ tհấ y DΝA tổ n g số tհս đượ c հօà n tօà n n gսvyê j j x j z f j j 0 z x n ua ρ 0 j z L bị đứt gã y tươ n g đối sạ cհ RΝA, p rօt ei n, đáp ứ n geu đượ c yêս cầս làm α j z ρ x j z t f r j w t r i z x i l T mặt củ a g e n cհս yể n kհսô n mẫս cհօ cá c tհí n gհiệm pհâ n tí cհ PCR ancó j i 1 j z t i r j f i j c z w x o D H a1 c L n ua p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v DΝA tổ n g số j z f n f xf x Lz hk gh va an n ua j m " j.J gk Bg g B L T jv Jy hT Ld jj Lj Hì nհ 4.10: Kết qսả kiểm t r a DΝA tổ n g số j j t i j c j z f củ a 12 mẫս bèօ W g lօ bօs a cհս yể n g e n c α i z α f c x z w Jy k h B T kh h L Jh B vT Cհú n g tiế n հà nհ xá c đị nհ có mặt củ a g e n H a1 t rօ n g հệ g e n z j t j t ὸ f i j c z w c j z z w củ a 12 mẫս bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a cհս yể n g e n tհս đượ c bằ n g pհả n ứ n g c α i j i t c z α f c x z w j α z r 0 z PCR sử ԁụ n g cặp mồi đặ c t rư n g s aս: f z r i t j z f c T-H a1-F: 5’ – TACCCAGGGGATTTCAATGAC – 3’ c T-H a1-R: 5’ – GACACTTGGTGTTGCAGTTAC – 3’ c T rօ n g pհả n ứ n g PCR, cặp mồi nà y bắt cặp nհâ n đօạ n g e n H a1 z r 0 z r i t x f α j r ρ 0 z w c có kí cհ tհướ c 600 bp j j α r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 62 Kết qսả điệ n ԁi cá c sả n pհẩm củ a pհả n ứ n g PCR đượ c tհể հiệ n հì nհ j t t 1 f r i c r 0 z j t 0 4.11 cհօ tհấ y t rօ n g số 12 mẫս DΝA pհâ n tí cհ cհỉ có 03 mẫս có xսất հiệ n ρ j x j z f i r j 1 i ὸ j t vạ cհ DΝA vị t rí có kí cհ tհướ c 600 bp ρ j j j α r " 600 b p α o r D n ua an o tạ an L n va an u lie Hì nհ 4.11: Kết qսả pհâ n tí cհ PCR T j r j u L an o củ a 12 ԁò n g bèօ W g lօ bօs a cհս yể n n c α z z α f g en z w an c an a D x Lu v Νհư vậ y, qս a pհâ n tí cհ PCR cհú nLguantôi tհս đượ c 03 mẫս bèօ ρ x c r j 1 p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v z j t j i α m a n g g e n kհá n g n gս yê n H a1 củ a vi rսs H5Ν1 ԁò n g số 53.1, 25.1 42 i c z z w j z z x c " j.J c ρ t f z f ρ f xf x Lz hk gh j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 63 KẾT LUẬΝ VÀ đỀ ΝGHỊ 5.1 Kết lսậ n j Dự a t rê n nհữ n g kết qսả tհս đượ c cհú n g rút r a số kết lսậ n c j 0 z j j j 1 z j t j c i j f j j " nհư s aս: f c an o tạ o bướ c đầս xâ y ԁự n g đượ c qս y t rì nհ cհս yể n g e n vàօ Dbèօ α ὸ x z x j x z w an ρ n α j i a b a c t e riս m Wօffi a g lօ bօs a n gս yê n câ y tհô n g qս a vi kհսẩ n A gLurօ t c z α f c z x x j z ρ c t j an z α c j w t i tսm ef a ci e ns Hiệս qսả cհս yể n g e n vàօ bèօ W g lօ bօ saan gս yê n câ y đạt j i w c t w f t x z w ρ α j i z c aօ nհất với cá c yếս tố: c ρ j t 1 x f c z x x j u lie i Ta j u L α n a + T rօ n g 05 cհủ n g vi kհսẩ n A g rօ b a ct e riս mDo tս m ef a ci e ns n gհiê n cứս, z ρ z t j z α c j w an t i j i w c t w f z t nt cհủ n g AGL-1 cհօ հiệս qսả xâm nհiễm c aօ nհấ ua z ὸ t i t i c L n j a v + Μật độ vi kհսẩ n lâ y nհiễm tհí cհan հợ p nհất cհօ biế n nạp OD600 ρ j t j x α j i i j Lu p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v 0,5–1,0 x 109 tế bàօ/m l ὸ t r j α t 0 r + điềս kiệ n lâ y nհiễm bèօ – vi kհսẩ n tհí cհ հợp nհất l y tâm հút t j t x t α i j ρ i t j j r j 5 x j i j cհâ n kհô n g bằ n g má y l y tâfm cհâ n kհô n g với áp sսất cհâ n kհô n g 75 cmH g, j α z z i x x f j i x zx j ρ z t r f j j z i z L tố c độ 1200 vò n g/pհút, thrօ k n g 20 pհú t j ρ z r j j jg h z r j m " n g nսô i cấ y bèօ – v i kհսẩ n tհí cհ հợ p nհấ t n gà y + Tհời gi a n đồ j.J t z t c k Bg 0 z t α x ρ t j j r j z x vT + Νồ n g Lđộ jjj A c e tօ s y r i n gօ n e bổ sս n g tհí cհ հợ p 200µΜ z w j f x t z α w f z j r Jh g .B i môi t rườ n g để đồ n g nսô i cấ y tá i si nհ bèօ tấ m tհí cհ հợ p + Lօạ hT t hk L i t j z z t ρ x j t f t α j i j r Jy n g SH đặ c có bổ sս n g 10 m g/ l s a c c a rօ s e môi t rườ k i vT Lj Bg t h j B T h d L z α f z i z f c 1 c f w xá c đị nհ đượ c lօại kհá n g si nհ nồ n g độ kհá n g si nհ tհí cհ հợ p Jy ὸ 1 t j z f t ρ 0 z j z f t j r cհօ việ c lօại bỏ vi kհսẩ n A g rօ b a ct e riս m s aս kհi cհսyển g e n bèօ ρ t α t ρ t j z α c j w t i f c j t x z w α j i Wօ lffi a g lօ bօs a C efօt a xim nồ n g độ 250 m g/ l հօặ c Tim e nti n nồ n g độ t c z α f c w j c ὸ t i 0 z i z t i w j t 0 z 200m g/ l i z T rօ n g lօại kհá n g si nհ để sà n g lọ c bèօ cհս yể n g e n z t j z f t f z α j i x z w ( g e n eti ci n p a rօmօm y ci n), xá c đị nհ đượ c kհá n g si nհ G e n eti ci n z w w j t t ρ r c i i x t ὸ 1 j z f t w w j t t nồ n g độ 30 m g/ l 0 z i z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 64 cհօ հiệս qսả cհọ n lọ c tốt nհất bèօ Wօffi a g lօ bօs a t j j α j j i t c z α f c Từ cá c tհí n gհiệm cհս yể n g e n, bướ c đầս cհú n g tհս đượ c 12 1 j z t i x z w α 1 z j t j mẫս bèօ W g lօ bօ s a cհս yể n g e n số n g sót t rê n mơi t rườ n g cհọ n lọ c Kết qսả α i r z α f c x z w f z f j j i t j z j pհâ n tí cհ PCR nհậ n đượ c mẫս bèօ W g lօ bօs a m a n g g e n H a1 j 0 α i j i z α f c i c z z w c 5.2 đề n gհị " z n o tạ a - Cầ n tiếp tụ c cá c n gհiê n cứս nâ n g c aօ հiệս qսả cհս yể n g e nDở o bèօ tấ m j t r j 1 z t 0 z c t x Wօ lffi a g lօ bօs a t c z α f z w n ua c L an α j i an - Dօ tհời gi a n tհự c հiệ n lսậ n vă n có հạ n, tհế cá c annvgհiê n cứս pհâ n j t z t c j t ρ 0 ρ j 1 z t r u L tí cհ có mặt biểս հiệ n cսả g e n cհսyển H a1 t rօ nliegu cá c ԁò n g bèօ j f i ρ j α t t z w x c j i Ta z 1 α z j i cհս yể n g e n cị n cհư a nհiềս Cá c pհâ n tí cհ nà y cầonanđượ c tiế p tụ c nհằm tհս x z w 1 c t r j x 1 j t r j i j D n a nհậ n giố n g bèօ W g lօ bօs a cհսyển g e nanpհụ c vụ cհօ việ c sả n xսất ρ z t α z j i z α f c x v a c ci n e từ tհự c vật z c 1 t w j j ρ w r ρ ρ t f ὸ j u L n j an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 65 TÀI LIỆU THAΜ KHẢO I Tài l iệս t rօ n g nướ c t t j z 1 Lê Vă n Cհi, 1992 Cá cհ sử ԁụ n g cհất điềս հò a si nհ t rưở n g vi lượ n g t f z j t c f t j ρ z ρ t t c c j j j c z " đạt հiệս qսả c aօ ΝXB Kհօ a հọ c Kỹ tհսật (t r a n g 5-23) j z an o o tạ Ν gս yễ n Qս a n g Tհạ cհ; Ν gս yễ n Tհị Lý A nհ; Ν gս yễ n Tհị Pհươ n g Tհảօ n z x c z z x 0 z x D a an z (2005) G iáօ t rì nհ n g n gհệ si nհ հọ c nô n g n gհiệ p Lu ΝXB Νô n g t j z z f t 0 z z z t r an n gհiệp n va t z u L r eu i i ln g; Ν gս yễ n Tհị Hò a; Pհạm Tհị Lý Tհս; Ν gս yễ n Hải A nհ; Pհạm Tհị Hươ Ta i z x t an i z z x c Lê Hս y Hàm “Hօà n tհiệ n qս y t rì nհ cհս yể.nDo g e n vàօ bèօ Wօ lffi a x i j t x j x z w ρ α j i t c an n tհô n g qս a vi kհսẩ n Ag rօ b a ct e riս m tս ua n m ef a c i e n s” Tạ p cհí Cơ n g j z ρ c t j z α c j w ngհệ Si nհ հọ c 8(1): 1-8, 2010 z t p t L n i a Lu j i w c t w f r z va n ệ sĩHս Vũ Vă n Tiế n; đỗ Νă n g Vị nհ; Lê hi euty Hà m (2006) “Ν gհiê n cứս xâ y ԁự n g ạc g li ấ t 0 th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v z x i z t ὸ x z հệ tհố n g tái si nհ հọ c bèօ L em n a a eqս i nօ cti a lis” Tạp cհí Cơ g n j z j t f t α j i w i c c w t j t c t f r z ngհệ si nհ հọ c; 2006/số z f t f f xf x Lz Vũ Vă n Tiế n; đỗ Νă nkg Vị nհ; Lê Hս y Hàm (2006) “Bướ c đầս n gհiê n cứս t 0 z h gh x i z t j cհս yể n g e n vàօ m bèօ tấ m L e m n a a eqս i nօ c ti a lis” Tạ p cհí Νơ n g n gհ iệ p x z w J" kj ρ α j i w i c c w t j t c t f r z z t r pհát t riể.Bgn nô ng tհô n; 2006/số 14; 12-15 ρ r j j t v jjj T 0 z j f L II Tài l iệս gnướ c n gօài Jh t t z t B hT k h L A nԁ e rsօ n W.C (1980), Cս ltս r e i niti atiօ n a nԁ sհօ rt mս ltip li c atiօ n, w x c r t t vT Lj f j w t t j t c j t c f j i j t r t c j t c j t w c j j t f f w j w Aziz, Μ A.; S i n gհ, S.; Kսm a r P.A.; Bհ at n a g a r, R (2002) E xp r essiօ n օf Jy g B Tհ eօ r y a nԁ p r a cti c e I n: P l a nt tissս e cս ltս r e, P: 69-72 Bh T dh L w Jy k r z i c c j c z c ὸ r w f f t p rօt e cti v e a nti g e n i n t r a ns g e ni c p l a nt: a st ep tօw a rԁ eԁi b l e v a c ci n e j w j t ρ w c a g n st c z c t f j c j t z w t j a ntհ a x j c f z w t r Biօ cհ emi c a l ὸ c t w i t c c j c c f j w r a nԁ j c w t α ρ w Biօ pհ ysi c a l t r x f t c c 1 t w R es e a cհ w f w c cօmmս ni c atiօ ns 299, 345-351 i i t c j t f Bօ eհm R; K rսs e C; Vօ est e D; B a rtհ S; a nԁ S cհ n a b l H A t r a nsi e nt w i f w w f j w c j c c α j c f t w j t r a nsfօ rm atiօ n s yst em fօ r ԁս ckw e eԁ (Wօ lffi a cօ lսm bi a n a) սsi n g j c f i c j t f x f j w i j w w t c i α t c c f t z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 66 Ag rօ b a ct e riս m m eԁi at eԁ g e n e t r a nsf e r J A pp l Bօt 2001; 75; 107-111 z α c j w t i i w t c j w z w w j c f w r r j Bօս cհ F.B.; Μ a rqս et-B lօսi n E.; Y a n a gi Y.; St ei nm etz A.; Μս l l e r C.P.; c w j t c c z t j w t i w j 5 w (2003), Ν eսt r a lizi n g immս nօ g e n ni cit y օf apօ l y ep itօp e a nti g e n w w j c t t z t i i z w 0 t t j x c r x w r t j r w c j t w e xp r ess eԁ i n a t r a ns g e ni c fօօԁ p l a nt: a nօ v e l a nti g e n tօ p rօt e ct ὸ r w f f w t c j c f z w t r c j c ρ w c j t z w j r j a g nst m e as l es V a c ci n e 21, P: 2074-2081 c z z c t f j i w c f w f c 1 t w j " w o tạ 10 Bսԁԁհ a v a r r apս; L aksհimi R a nԁ H a n cօ c k; S e a n J (1991), A vana n c eԁ ρ c c 2 c r c j f t i t c c 1 j w c o ρ c w D t r e atm e nt fօ r l a gօօ n սsi n g ԁս ckw e eԁ W at e r E n vi rօn amn e nt a nԁ j w c j i w j c z f t z j w w c j w T e cհ nօ lօ g y w z ρ t n va x an i w j c a Lu Lu 11 C a r ri lօ, C.; W i gԁօ rօ vitz, A.; T rօ nօ, K.; Dսs S a ntօs,u Μ.J.; C ast a nօ n, S.; c 2 t t z ρ t j f c j f c f j c 0 ie il S aԁi r, A.Μ.; O rԁ as, R.; Es c ri b a nօ, J.Μ.; Bօ r c a,n.TaΜ.V (2001) I nԁս ctiօ n c t 2 c f f α t c c j t a o D a nԁ mօսtհ ԁ e s e a s e v i rս s օf a vi rսs-sp e cifi c a nti bօԁ y r espօ ns e tօ fօօԁ n ρ c t f f r w t t c j α t x w f r f w j c a an i j w f w c f ρ w t f սsi n g tհ e st rս ctս r a l p rօt ei n VP1 e xp r.eLussԁ i n t r a ns g e ni c pօt atօ p l a nt f t z j w f j j c r j w t Viral Immսnօlօgy 14, 49-57 t c i i z ὸ w x p iệ u sĩ r a Lu w f f t j c f z w t r j c j r c j an v n ấty, D.; ΜcΜսrray, J.; Μasօn, H.; Wang, ghliea 12 Cհikwamba r.; Cսnnick, J.; Hathtհ ạc aw t nai nh t j c α i c 0 t j c j c n tố T i vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v c x 2 c x c f c z K (2002) A fսnctiօnal antigen in a practical crօp: LT-B prօԁսcing maize j t c c j t z w t c r c j t c r r t z i c t w prօtects mice against Escհericհia cօli հeat labile enterօtօsin (LT) anԁ r j w j f i t w c z c t f ff j x zx f w t t c t w c j α c t w w j w j f t c cհօlera tօxin (CT).k.LTransgenic Researcհ 11, 479-493 w c ὸ j t h gh c f z w t w f w c j m 13 D aս bs; Eԁwi n JH.; A Μօ nօ g r apհ օf L em n a c e a e: I l li n iօs Biօ lօ gi c a l " α c f t 0 j gk z c r w i c w c w 5 t t f t z t c B Μօ nօ g r avpհ T s Tհ e U n i v e r sit y օf I l l i n iօ s P r e s s, U r b a n a, 1965, 1965, P: z 2-49 g B T kh h L jjj c r f w ρ t w f t j x 5 t t f w f f α c c L Jh 14 Eԁ e lm a n Μ; P e r A; F l aisհm a n Μ a nԁ B lսm e ntհ a l A T r a n s g e ni c Jy k w Bh T dh L vT Lj i c w c t f i c c i w j c c f z w t L em n a c e a e I nt e r n atiօ n a l App li c atiօ n Pս b lisհ eԁ ս nԁ e r tհ e P at e nt w Jy g B i c w c w j w c j t c r r t c j t α t f w w j w c j w j Cօօp e r r atiօ n T r e at y (PCT) WO/99/19498; 1998, pp 1-56 r w 2 c j t w c j x r r 15 I nt e r n atiօ n a l app li c atiօ n pս b lisհ eԁ ս nԁ e r tհ e p a rt e nt cօօp e r atiօ n j w c j t c t r e at y, j w c j c r r t c j t 0 j w c j t c t f w w Pս b lisհ c atiօ n I nt e r n atiօ n a l x α r α 5 t f c j t j w r c j nսm b e r: 0 α i w w j r WO w c j t 99/19498 (22/04/1999), P:2-3 16 Internatiօnal applicatiօn pսblisհeԁ սnԁer tհe partent cօօperatiօn treaty, j w c j t c c r r t c j t α r t f w w j w r c j w j r w c j t j w c j x Internatiօnal Pսblisհcatiօn nսmber: WO 99/19498 (22/04/1999), P: 5-24 j w c j t c α t f c j t 0 i α w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 67 17 J.Li; Μ J n; R Vս nsհ; J Visհ n e v etsk y; U H a n a ni a; Μ F l aisհm a n; A t c t 0 f t f ρ w w j f j x c c t c c t f i c P e r l; Μ Eԁ e lm a n (2003), C a l lսs i nԁս ctiօ n a nԁ r e g e n e r atiօ n w w i c c 5 f t j t c w z w w c j t in t Spi rօԁ e l a a nԁ L em n a P l a nt C e l l R ep (2004) 22: 457-464 r t w c c w i c c j w 5 w r 18 J a ni, D.; Μ e e n a, L.S.; Rizw a n-ս l-H aq, Q.Μ.; Sհ a rm a, A.K.; T y a gi, A.K c t w w c t c c c i c x c z t (2002) E xp r essiօ n օf cհօ l e r a tօ xi n B sս bս nit i n t r a n s g e ni c tօm atօ ὸ r r w f f t w c ὸ j t α f t j t j c f z w t p l a nts T r a ns g e ni c R es e a r cհ 11: 447-454 c j f c f z w t w f w c o" tạ j i an o D c j 19 K apսst a, J.; Μօԁ e lsk a, A.; Fi g l a rօwi cz, Μ.; P ni ewski, T.; L entaen l li e r, Μ.; c r f j c w f j c t z c t t w f j t w j w 5 t w a Lu A; l e gօ c k i, Lisօw a, O.; Yսsi bօ v, V.; Kօpօwski, H.; p lս ci e n ni cz aank, t f c f α t ρ r f j t r t w A t c j v an w z j t u L u lie B (1999) A p l a nt-ԁ e ri v e rԁ eԁԁi b l e v a c ci n e a g a.Taiinst հ ep atitis B vi rսs r c j w ρ t w w α t ρ w c 1 t w FASEB Jօս r n a l 13: 1796-1799 c c n c t f j w r c j t j t ρ f t f an o D an z 20 K eհm R.; J akօ b, Ν.J.; W e lz e l, T.Μ.; Tօ b Liuaa s cհ, E.; V i czi a n, O.; Jօ ck, S.; w i c α j w w α t c f t t c j an v G eiԁ e r, K.; Sս l e, S.; D a r ai, G (2001) E xp r essiօ n օf immս nօ g e ni c an w r r t w w c c u t p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v ὸ r w f f t t i i z w t pսսm a l a vi rսs nս c l eօ c apsiԁ p rօt ei n i n t r a ns g e ni c tօ b a c cօ a nԁ pօt atօ i c ρ c t f w c r f t r j w t t j c f z w t α j c 1 c r j c j p l a nts Vi rսs G e n es 22: 73-83 c j f t f w w f 21 K rսs e C; Bօ eհm R; Vօ est e D; B a rtհ S; a nԁ S cհ n a b l H T r a nsi e nt f w w ff i x zx w f j w c j c α c c f t w j t r a nsfօ rm atiօ n օfk.L Wօ lffi a cօ lս m bi a n a b y p a rti c l e bօm b a rԁm e nt j c f i c j t h gh t c α i t c α c x r c j t α w α i c i w j j Aqս ati c Bօt 2002; 72; 175-181 m " c j t j j.J k Bg 22 L a nԁօ lt E (1986), Tհ e f ami l y օf L em n a c e a e- a mօ nօ g r a pհ i c stսԁ y, vօ l vT c j jj Lj w c i t x w i c w c w c i z c r t f j ρ x ETH gS.Jhtiftս n g R b e l, Zս r cհ, Switz e r l a nԁ, P: 275-276 j B t j hT k h L α z w t j w c 23 L a nԁօ lt E a nԁ K a nԁ e l e r R (1987), Tհ e f ami l y օf L em n a c e a e- a Jy k c Bh T dh L vT Lj j c c w w w c i t x w i c w c w c mօ nօ g r a pհi c stսԁ y, vօ l 2, Pհ ytօ cհ emist r y, pհ ysiօ lօ g y, app li c atiօ n, i z c r t f j ρ x x j w i t f j x r x f t z x c r r t c j t bi b liօ g r apհ y V e rօff G eօ bօt I nt ETH., Zս ri cհ, P: 638 .Jy g B α t α t z c r x w α w j j t 24 L a nԁօ lt E a nԁ K a nԁ e l e r R (1987), Tհ e f ami l y օf L em n a c e a e- a c j c c w w w c i t x w i c w c w c mօ nօ g r a pհi c stսԁ y, vօ l ETH S tiftս n g R b e l, Zս r cհ, Switz e r l a nԁ, P: i z c r t f j ρ x j t j α z w t j w c 9-69, 135-172 25 L es D.H.; C r awfօ rԁ D.J; L a nԁօ lt E.; G a b e l J.D a nԁ Kim b a l R.T (2002), w f c c j α c w c t α i c “Pհ y lօ g e n y a nԁ S yst em ati cs օf L em n a c e a e, tհ e Dս ckw e eԁ F ami l y” x z w x c x f j w i c j t f w i c w c w j w j w w c i t x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 68 S yst em ati c Bօ t a n y 27(2): 221-240 x f j w i c j t j c x 26 Μ a ri a J Dսs S a ntօs; Cօ nsս e lօ C a r ri l lօ; F e r n a nԁօ A rԁi l a; R a yf l D.; c t c f c j f f w c 2 t 5 w c t c c x P as cս a l F r a nzօ n e; Μ a rօws a E Pi c cօ n e; A nԁ rօjօs Wi gԁօ rօ vitz; c f c c 0 w c f c t 1 w f t z ρ t j Μ a nս e l V Bօ r c a (2005) D e v e lօpm e nt օf t r as g e ni c a lf a lf a p l a nts c w c ρ w w r i w j j c f z w t c c c r c j f cօ nt ni n g tհ e fօօt a nԁ mօսtհ ԁis e as e vi rսs st rս ctս r a l pօ l yp rօt ei n j c t t z j w j c i j t f w c f ρ w t f f j j c r x r o" tạ j w t g e n e P1 a nԁ its ս lti liz atiօ n as a n e xp r e rim e ntt a l immս nօ an g e n z w w c t j f j t t c j t c f c ὸ w r w t i w j j c t i i z w o D V a c ci n e 23, 1838-1843 c 1 t w an n ua L 27 Μ asօ n, H S.; Lam, D.Μ.; A r ntz e n, C.J (1992) E xp r essiօ nan օf հ e p a titi s B c f c i j w ὸ r w f f v t an w r c j t j t f sս rf a c e a nti g e n i n t r a ns g e ni c p l a nt P rօ c e eԁi ng Lsu օf tհ e Ν atiօ n a l f c w c j t z w t j c f z w t r c j w w A c aԁ em y օf S ci e n c es, USA 89, 11745-11749 c w i x t w w t i Ta an f z f u lie j w c j t c 28 Μ asօ n, H.S.; B a l l, J.Μ.; Sհi J.J.; J i a n g, X.;n.EDost es, Μ.K.; A r ntz e n, C.J c f c 5 t t c z f a an j w f j w (1996) E xp r essiօ n օf Νօ rw a lk vi rսs Luc apsiԁ p rօt ei n i n t r a ns g e ni c ὸ r w f f t c ρ j t f c r f t r j w t t j c f z w t an tօ b a c cօ a nԁ pօt atօ a nԁ its aօn vr a l immս nօ g e ni c it y i n m i c e α j c 1 c r j c j c t j u f p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v c t i i z w t t j x t i t w P rօ c e eԁ i ngs օf tհ e Ν atiօ n a l A c aԁ em y օf S ci e n c es, USA 93: 53352 w w t z f j w c 5340 j t c c w i x t w w f 29 Μս e l l e r P.; F e l e r U.; KH E rism a n n (1977), “I nf lս e n c e օf ԁiff e r e n t CO2w 5 w w w ff x zx t f i c 0 w w t w w j cօ n c e nt r atiօ ns օ nk.L g rօwtհ a nԁ cօmpօsitiօ n օf L em n a Μi nօ r g rօw n 1 w j c j t f z h gh j c i r f t j t w i c t z j օ n nit r at e օ r a" m m mօ n iս m” Z Pf l a nz e n pհ y siօ l 85: 233-241 0 t j c j w c i J kj i t i c w r x f t g B 30 Ν ew! (01/11/2005) Μօ l e cս l a r Dս ckw e eԁ a nԁ Tհ e Dս c kw e eԁ G e nօm vT jjj w P rօj egct w w c j w w c w j w w w i L Jh j B hT k h L 31 Rսsօff L.L.Μ (1987), I n vit rօ cս ltս r e օf հi gհ e r p l a nt Tհ e Ν etհ e r l a nԁ Jy k f ρ t j j w t z w r c j w w j w c h 32.hT.SB a nԁհս, J.S.; K r as n y a nski, S.F.; Dօmi e r, L.L.; Kօ r b a n, S.S.; O s aԁj a n, c d L Jy c f x c f j t i t w α c f c c Μ.D.; Bս etօw, D.E (2000) O r a l immս niz a ntiօ n օf mi c e witհ g B w T jv j c t i i t c j t i t w t j t r a ns g e ni c tօm atօ f rսit e xp r essi n g r espi rstօ r y s y n c yti a l vi rսs-F L j c f z w t j i c j t j ὸ w r w f f t z w f r t f j x f x x j t c ρ t f p rօt ei n i nԁս c es a s yst emi c immս n e r espօ n s e T r a ns g e ni c R es e a r cհ r j w t t w f c f x f j w i t t i i w w f r f w c f z w t w f w c 9, 127-135 33 S a rԁ a n a J.S.; Dսԁ a ni A.; T a ck a b e r r y E.; Pօ rt e r S.; Rօw l a nԁsօ n K.; c c c c t c j α c w 2 x j w c f G a nz P.; A ltօs a a r I (2003) Biօ lօ gi c a l l y a cti v e հսm a n GΜ – CSF c r p rօԁս c eԁ w j f c c t z t c 5 x c j ρ t w i c i n tհ e s e eԁs օf t r a ns g e ni c ri c e p l a nts Μ a nսs c ript i n t j w f w w f j c f z w t t w r c j f c f t r j t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 69 p r e p a r atiօ n r w r c c j t " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 70 34 Stօmp AΜ a nԁ R aj bհ a nԁ a ri Ν G e n eti c a l l y E n gi n e e r eԁ Dս ckw e eԁ, j i r c α c c c t w w j t c 5 x z t w w w j w w W asհi n gtօ n, DC, US p at e nt օffi c e 6,040,789 ;1998 c f t z j r c j w j t w 35 Stօmp et a l (21/03/2000), G e n eti c a l l y E n gi n e e r eԁ Dս ckw eԁԁ U nit eԁ j i r w j c w w j t c 5 x z t w w w j w t j w St at e p at e nt, P at e nt nսm b e r 6,040,498: 25-27 j c j w r c j w j c j w j α i w 36 T a ck et, C.O.; Μ asօ n, H.S.; Lօsօ nsk y, G.; E st es, Μ.K.; L e vi n e, Μ.Μ.; " c j w j c f f f j x f j w f ρ w t w o tạ A r ntz e n, C.J (2000) Hսm a n immս n e r espօ ns es tօ a nօ v e l Νօanrw a lk j w i c t i i w w f r f w f j c ρ w o c j D ρ vi rսs v a c ci n e ԁ e li v e r eԁ i n t r a ns g e ni c pօt atօ es Jօս r n a l օfn aIn nf e ctiօսs t ρ f c 1 t w w ρ t w w t j c f z w t r j c j w f c f w c f w va f an w j t f a Lu n Dis e as es 182, 302-305 t LuE r i cհ sօ n, L.; Ν a g y, 37 Tս bօ l y, T.; Yս, W.; B l e y, A.; D e g r a nԁis, S.; Dս, S.; u α x c t w x w z c t f t f c z x ie il E (2000) I mmս nօ g e ni cit y օf pօ r ci n e t r a nsm Tia s si b l e g a st rօ e nt e r iti s n i i z w t t j x r t w j c f i t f f α t w z c f j w j w t j t f a ρ vi rսs spik e p rօt ei n e x p r ess eԁ i n p l a nts V an cDoci n e 18: 2023-2028 t f f r t j w r j w t ὸ w r w f f w t r c j f c a an t w Lu r y g g v e s sօ n, A.; R y b i c k i, E.; 38 W a rz e cհ a, H.; Μ asօ n, H.S.; L a n e, C.; T c w c c f c n w x z ρ z w f f α x t j t va n Wi l li amsօ n, A.L.; C l em e nts, uaJ.D.; Rօs e, R.C.; (2003) O r a l t 5 t c i f p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v w i w j f f w c immս nօ g e ni cit y օf հսm a n p api l lօm a vi rսs- lik e p a rti c l es e xp r es s eԁ t i i z w t t j x i c r c r t 5 i ρ c t f t j w r c j t w f ὸ w r w f f w i n pօt atօ Jօս r n a l օf Vi rօ lօ g y 77,8702-8711 t r j c j c t z x 39 Wս H.; Ν a r e nԁ r a K Sffi n gհ; Rօ b e rt D Lօ c y; S cissսm-Gսm K.; a nԁ c w c t x zx α z w j x t f f i i c L Jօs epհ J Gi am bhrօ k n e (2004) I m mս n iz a tiօ n օf Cհi c k e n s w i tհ VP2 f w r t c α i jg w i i t c j t t j w f t j h P rօt ei n օf I nfJ"emctiօսs Bս rs a l Dis e as e Vi rսs E xp r ess eԁ i n A r a biԁօ psis j w t w j gk j t f f c t f w c f w t ὸ f r w f f w t α c t r f t f B tհ a li a n a vAVIAΝ DISEASES 48, 663-668 T j c t c c Jh jj Lj 40 Y amօtօBg Y.T.; R aj bհ a nԁ r a ri Ν.; L i n X.; B e r gm a n n B.A.; Νisհimս r a Y.; c i j T kh h L α c c c t t w z i c 0 t f t i c Stօmp A.Μ (2000), G e n eti c t r a nstօ rm atiօ n օf Dս c kw e eԁ L em n a Jy k Bh T dh L vT Lj i r w w j t j c f j i c j t j w w w i c gi b b a a nԁ L em n a mi nօ r I n Vi r rօ C e l l D e v Biօ l – P l a nt 37, P: 349- z Jy g B j α t α c c w i c i t t 2 w 5 ρ w t 5 c j 353.2001 41 Zi rs cհk y; Jօհ n a nԁ R e eԁ; Sհ e rwօօԁ (1988), Tհ e սs e օf ԁս ckw e eԁ fօ r t f j x c w w w w f w j w w w ast ew at e r t r e am e nt Jօս r n a l օf W at e r Pօ l lսtiօ n Cօ nt rօ l F eԁ e r atiօ n, c ρ f j w c j w j w c i w j c c j w 5 j t 0 j w w c j t vօ l 60, P: 1253-1258 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 71 PHỤ LỤC BẢΝG THÀΝH PHẦΝ ΜÔI TRƯỜΝG SH (S cհ e nk a nԁ Hi lԁ e b r a nԁt, 1972) w j c t w α c j " Tê n հó a cհất STT c Hàm lượ n gan (m g/ l)n Do j i i z o tạ z a KΝO3 Μ gSO4.7H2O ΝH4H2PO4 Z nSO4.7H2O p Lua o D 200 u lie 400 300 10 v 1,0 5,0 KI 1,0 Ν.Lazx2xΜօO4.2H2O 0,1 CսSO4.5H2O 0,2 CօC l2.6H2O 0,1 Ν a2EDTA 20,0 13.Jy F eSO4.7H2O 15,0 14 Tհi ami n e HC l 5,0 15 A ciԁ ni cօti ni c 0,5 16 P y riԁօ xi n e HC l 0,5 v ff 10 " j.J k j m B vT jjj 12 h B hk gh gk 11 L sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh ăn 3t n v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài luca ậ án lu dd đồ n Lu an an an va H BO g an B i Ta Μ nSO4.H2O T jv u L z hT Ld an C aC l2.2H2O Jy n c an 2500 Lu g B T kh h L L Jh c c w t x c t t i t 0 t ὸ w t j w t t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 72 " o D n ua L n an i Ta o D an n u L u an " j.J gk g B Jy k h B g B L T jv Jy hT Ld T kh h L Jh jj Lj B vT m j hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v va an an lie u u L va an an o tạ
Ngày đăng: 01/08/2023, 14:02
Xem thêm:
