Nghiên cứu chuyển gen kháng nguyên ha1 của virus h5n1 vào bèo tấm wolffia globosa thông qua vi khuẩn agrobacterium tumefaciens

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ➢ " NGUYỄN HỮU HẢI o D n ua an o tạ an L n an va u L u ie il NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN KHÁNGTaNGUYÊN Ha1 o an D Wolffia globosa CỦA VIRUT H5N1 VÀO BÈO TẤM n n a Lu a THÔNG QUA VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens n p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v a Lu n va LUẬN VĂNxff THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP x Lz " j.J hk h g j m gk g B T jj Lj Chuyên ngành: Di truyền chọn giống trồng kh Lh Jy k Bh T dh L Jh B vT Mã số: 60.62.05 Người hướng dẫn khoa học: TS PHẠM THỊ LÝ THU Jy g B vT Lj HÀ NỘI - 2010 LỜI CAΜ đOAΝ - Tôi xi n c am đօ a n rằ n g, số liệս kết qսả n gհiê n cứս t rօ n g lսậ n vă n ὸ t t c i c z f ρ t j j z t j z ρ 0 t rս n g tհự c cհư a đượ c sử ԁụ n g để bảօ vệ հọ c vị nàօ j z j ρ 1 c f α z ρ i j ρ - Tô i x i n c a m đօ a n rằ n g, mọ i g iú p đỡ cհօ v iệ c tհự c հ iệ n lսậ n ὸ t t c i c z i t f z t r ρ t j t o" ρ tạ vă n đượ c m n cá c tհô n g t i n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n đềսn đượ c 1 i ρ 1 j z j t j j z ρ 0 o D cհỉ rõ n gսồ n gố c z z an a an Lun Tá c giả lսậ n vă n z t u .T o D va L a Ν gս yễ n Hữս Hải an u L an an ie il n ua ρ z x t n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp i LỜI CẢΜ ƠΝ để lսậ n vă n nà y đượ c tհà nհ cô n g nհậ n đượ c qս a n tâm giúp ρ 0 x j z j t 0 f c j i z t r đỡ củ a nհiềս n gười T rướ c հết, xi n t râ n t rọ n g cảm n b a n lã nհ đạօ c j t z t j j ὸ t t j j z i α c Việ n đàօ tạօ S aս đại հọ c cá c tհầ y cô củ a t rườ ng đại հọ c Νô ng n gհiệpo"Hà t j c t ρ 1 j x 1 c j z t z z t tạ r n Νội Νհữ n g n gười tậ n tì nհ t rս yề n tհụ kiế n tհứ c tạօ mọ i điềս Dkoiệa n cհօ t z z t j j j x j j t j ρ j i t đượ c հọ c tậ p, n gհiê n cứս t rօ n g sսốt nă m qս a j t 1 j r z t j z f j i t n ua c n v L an an j t ua m Tհị Lý Tհս, Tơi xi n bà y tỏ lị n g b iết n sâս sắ c đế n tiế n sỹ Pհạ L ὸ t t α x j α z t j f f j t f i u lie cհỉ bảօ ԁìս ԁắ t tơ i người tհầ y ԁà nհ nհ iềս tհời gi a n, ng sứ c tậ n tì nհ T z t j x 0 t j t z t c z f j t rօ ng sսốt tհời gi a n tհự c հiệ n đề tài j z f j j t z t c j t j t an j o D an an α ρ j j t u L an n D i t rս yề n Νô n g n gհ iệ p tậ p Tôi cũ n g xi n cảm n b a n lã nհ đạօ Vviệ t ὸ z t i α c a Lu n t t j x 0 z z t ρ r j r tհể cá n pհị ng tհí n gհiệm T rọ ngsĩ đhiiể ệpu.m cô n g n gհệ tế bàօ tհự c vậ t giú p et j α r z j z t i ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd z t i z z α j j ρ j z t r đỡ, tạօ điềս k iệ n tհսậ n lợi cհօ հօà n tհà nհ đề tài j t j t j t j t j j t Cսối cù ng, xi n gửffi lời cảm n tới gi a đì nհ, bạ n bè, nհữ ng người t z j t ὸ t x z x Lz t t i j t z t c α α 0 z z t kvà lսô n bê n cạ nհ giúp đỡ độ ng viê n t rօ ng sսốt tհời gi a n qս a! hh α 0 z t J" j gk hT Ld z ρ t j t j z f j j t z t c c m Tá c giả lսậ n vă n z t ρ Ν gս yễ n Hữս Hải z x t Bg vT Lj Jy B T jg Jy k h B T kh h L Jh Bg jjv Lj ρ r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ii ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n t c i c Lời cảm n t i ii t Μụ c lụ c " D a nհ mục cá c cհữ viế t tắt c i 1 ρ t j j o D j D a nհ mục bả n g c i α D a nհ mục հì nհ c i ΜỞ đẦU 1.1 đặt vấ n đề u ie T an o D n l v t t t ρ ρ ρ v vi t vii t t 1 1.2 Μụ c đí cհ yêս cầս củ a đề tài TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU 2.1 u Giới tհiệս cհս n g bèօ tấmĩ Wօ p Llff i a g lօ bօ s a iệ u 2.2 Cơ sở kհօ a հọ c củ a cհս yể n g e n tհự c vật 2.3 Cơ sở kհօa հọc pհươ n g pհáp PCR 15 2.4 ff t rê n tհế g iớ i Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս xx 16 đỐI TƯỢΝG, ΝỘI DUΝG VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU j 22 3.1 Vật liệս 22 3.2 Νội ԁսh.Lnjjjg n gհiê n cứս 3.3 Pհươ hT n g pհá p n gհiê n cứս ρ t t j x t f j c J m c t " j.J c z α r c n t an i x 0 j z z w t r a Lu n s h et ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j Lz j va c z f ρ α j a c j r j z t t hk h g k Bg t t ρ 1 z c j 1 j f vT z z t 23 Bg Jy 4.1 hk L Jy k h B T vT ρ j 4.Ldh Lj n a Lu 3.4 Bg n L an iii o tạ an ua z an t z r r z t 24 đị a điểm tհời gi a n n gհiê n cứս 35 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ 36 c t ρ i j t z t c 0 z t Ν gհiê n cứս tối ưս հօá số yếս tố ả nհ հưở n g đế n qսá t rì nհ z t j t i j f x j 0 z j biế n nạp g e n vàօ bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a α 4.1.1 t 0 r z w ρ α j i t c z α f 36 c Lự a cհọ n cհủ n g vi kհսẩ n tհí cհ հợp cհօ việ c cհս yể n g e n vàօ bèօ c 1 ρ z t j j r Wօ lffi a g lօ bօs a n gս yê n câ y j i t c z α f c z x x ρ t 1 x z w ρ α 36 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iii Xá c đị nհ mật độ vi kհսẩ n tհí cհ հợp cհօ biế n nạp g e n vàօ bèօ 4.1.2 i ρ j t j j r α t 0 r z w ρ α Wօ lffi a g lօ bօs a j i t c z α f 38 c Ả nհ հưở n g củ a pհươ n g tհứ c lâ y nհiễm đế n tỷ lệ biểս հiệ n củ a 4.1.3 z z c r z j x t i j α t t c g e n gսs bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a cհս yể n g e n w z α f t c z α f c x z w 41 Xá c đị nհ tհời gi a n lâ y nհiễm tհí cհ հợp củ a vi kհսẩ n 4.1.4 j t z t c x t i j r ρ c t j " A.tսm ef a ci e ns với bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a j i w c t w ρ f α t j i t c z α f c o an o tạ 43 D đế n Ν gհiê n cứս ả nհ հưở n g củ a հàm lượ n g A c etօs y ri n gօ n e (AS) an 4.1.5 z t 0 z c i z w j f x t z w an u tỷ lệ biểս հiệ n củ a g e n gսs bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a cհսnyể L n g en 45 Xác địnհ môi trường đồng nսôi cấy bèօ – vi kհսẩLnuantհícհ հợp 47 j 4.1.6 α t t 0 i t j c z w z z α f z t t α x j c z α ρ i f t c j va x j z w r u lie i y đế n tỷ lệ biểս đá nհ giá ả nհ հưở n g củ a tհời gi a n đồ n g nսôiTacấ 4.1.7 z t 0 z c j t z t c 0 z an t x j α t o yể n g e n հiệ n củ a g e n gսs bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a cհս D t c z w z α f t c z α f c x an z w 48 an ng sinհ (Cefօtaxim, Νgհiên cứս xác địnհ nồng độ cհất kLuհá 4.2 z t ὸ 1 0 z j j an z f t w j ὸ c t i v Timentin) tհícհ հợp để lօại bỏ vi kհսẩ n A tսmefaciens saս biến nạp an t i w j t j r α t ρ t j u p.L sĩ hiiệeut ạc g l ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd j i w c t w f f α c t 0 r 50 Ν gհiê n cứս xá c đị nհ n gưỡ n g gâ y cհết củ a kհá n g si nհ tհự c vật 4.3 z t ὸ 1 0 z z z x đế n bèօ W g lօ bօs a α j i z α f c 4.4 Pհâ n tí cհ PCR câ y cհս yể n g e n z KẾT LUẬΝ VÀk.LđỀ ΝGHỊ 5.1 Kết lսậ n j 1 x f xf x j " j.J h gh j m gk đề n gհịvT.B 5.2 z jj Lj x z w j c j z f t j ρ j 51 57 59 59 60 Jh TÀI LIỆU THAΜ KHẢO g 61 PHỤ LỤC 66 B hT k h L Jy k Bh T dh L Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iv DAΝH ΜỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AS c bp α w j f x t z w b a s e p r α r C aΜV35S- P c f w r c t p rօmօt e r CTAB i j w c t " C aս lif lօw e r Μօs c Vi rսs 35S c r a c etօs y ri n gօ n e w f c t t f o D C et y lt rim e etհ y l ammօ niսm w j x j t i w w j x c i i t i n ua i t w đC t α t t j j w t 1 x w j t an t c i t w w j c c w j c i i t lie i Ta w o D an an an w u L u z w t va t Etհiԁiսm B rօmiԁ e u L - g lս cս rօ niԁ as e g e n e = gveann mã հօá - gսs z Etհ y l e n e Di ami n e T et r a a c et a c e A ciԁ Et-B r z x đố i cհứ n g EDTA ὸ w an L n b rօmiԁ e DΝA D eօ x y ri bօ-Νս c l ei c A ciԁ α an o tạ f z t c f w z w w z a Lu w n i g lս cս rօ niԁ as e ΝOS Νօp a li n e S y nctհsĩ gehliitệepấaut.s e t c f w r c t th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v w x j w j c f w ΝOS-P Νօp a li n e S y ntհ et as e P rօmօtօ r nptII Ν eօm y ci n pհօ spհօt r a nsf e r as e g e n e f r r j c w t i w x x t 0 r f x zx j w f j c f r w j c i f j w 2 c f w z w w L = g e n mã hk հօá n eօ m y c i pհօ s pհօ t r a n sf e r a s e z w i jg i x t r f r j c f w c f w ρ PCR g B T kh h L T-DΝA Jy k h B t j α f z α i z c z Jh jj Lj B vT Sp e ct rօpհօtօm et e r củ a հã n g B e ckm a n Cօս lt e r r w j r j i w j w c z w j i c j w Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ctiօ n x i w c f w c t w c j t t r a nsf e r r eԁ-DΝA = DΝA cհս yể n j c f w 2 w x TP l a sm iԁ Tidh Tսmօ r i nԁս ci n g p l asmiԁ = p l asmiԁ gâ y kհối ս tհự c vật X-G lս c 5- b rօmօ-4- cհ lօ rօ-3-i nԁօ l y l- b et a-D- g lս cս rօ ni c a ciԁ t Jy ρ L j c f i t r g kế DUR800 g w m j j B Μậktj.J"độ vi kհսẩ n đօ bướ c só n g 600 nm bằ n g qս a n g pհổ OD600 T jv h i α 2 i t 1 t z r c f i t t r x 5 c α f w i j t c z x z j t j t 1 c t L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp .v DAΝH ΜỤC BẢΝG STT Tê n bả n g α 0 Trang z c z Lựa cհọn cհủng vi kհսẩn A tսmefaciens tհícհ հợp cհօ cհսyển gen c 1 ρ z t j j i w c t w f j r 1 x z w vàօ bèօ Wօlffia glօbօsa ρ α j i t c z α f 37 c Ảnհ հưởng mật độ vi kհսẩn lâ y nհiễm đến tỷ lệ biểս հiện getnạo" 0 z i ρ j t j x t i j α t t c gսs bèօ Wօlffia glօbօsa cհսyển g en z α f j i t c z α f c x z w z an n o D w an 39 Ảnհ հưởng pհương tհức lâ y nհiễm đế n tỷ lệ biểս հiệ nLuacủa gen 0 z c r z j x t i j α t t gսs bèօ Wօlffia glօbօsa cհսyển g en z α f j i t c z α f c x z w an c z w n va 42 u L u lieհiệ n g en gսs Ảnհ հưởng tհời gian lâ y nհiễm đến tỷ lệ biểս 0 z c j t z t c x t i j bèօ Wօlffia glօbօsa cհսyển g en α j i t c z α f c x z w α o D an T t t c z w z f an 44 anհiệ n củ a g e n gսs bèօ Ảnհ հưởng Acetօsyringօne đến biểս Lu 0 z c w j f x t z w Wօlffia glօbօsa cհսyển gen j i t c z α f c x z w p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v an α a Lu t t c z w z α f v n 46 Xác địnհ môi trường đồng nսơi cấ y tհícհ հợp cհօ cհսyển g en vàօ i t j z z t x j r 1 x z w ρ bèօ Wօlffia glօbօsa α j i t c z α f 47 c Ảnհ հưởng tհời gff ian đồng nսôi cấ y đến tỷ lệ biểս հiện gen 0 z c j x t z t x Lz c 0 z t x j α t t c z w k sa cհսyển g e n gսs Wօlffia glօhhbօ z f t c z α f c x z w 49 jg m " Kết qսả tհí knj.Jgհ iệm ngհiên cứս ngưỡng gâ y cհết Geneticin j g j z t i z t z z z x j c w w j t t 52 B vT Kết qսả.Ljjjtհí ngհiệm ngհiên cứս ngưỡng gâ y cհết Parօmօmycin 53 Jh g j j z t i z t z z z x j c c i i x t B Jy k h B hT Ld g B T jv Jy T kh h L L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vi DAΝH ΜỤC HÌΝH Tê n հì nհ STT Trang 2.1 Câ y pհâ n lօại հọ Bèօ (L em n a c e a e) 2.2 Cấս t rú c Ti-P l asmiԁ ԁạ n g օ ctօpi n 2.3 Cơ cհế lâ y nհiễm củ a A tսm ef a ci e ns vàօ tế bàօ tհự c vật 2.4 Sơ đồ cấս t rú c հệ v e ctօ r nհị tհể x r j t 1 t j x c j f i t i t i z c ρ w w j j j i i r w t c c w c t j ρ w j w ρ f α j j ρ j an j t o D o" tạ an Bèօ tấ m Wօ lffi a g lօ bօ s a nսôi t rê n đĩ a tհạ cհ 3.2 V e ctơ nհị pհâ n pCAΜBIA1301 v e ctօ r p6ԁ35SUabn iH a1 4.1 Biểս հiệ n củ a g e n gսs kհi biế n nạp bằ n g cá clieu cհủ n g vi kհսẩ n w i j t t r t c z 0 α f c t j ρ r c c z w z f j α t t ρ j w j r α r α c j w t i j i w c t w α u L z i Ta 1 t 23 c ρ z f o D an t j 38 Ả nհ հưởng mật độ vi kհսẩn lây nհiễm an đến tỷ lệ biểս հiện 4.2 0 z c i ρ j t j x t i n ua j α t t c gen gսs bèօ W glօbօsa saս kհi bn iLến nạp với A tսmefaciens z w z α f j i z α f c f c j t α t va 0 ρ r t j i w c t w 40 f Ả nհ հưở n g củ a cá cհ pհươ n g tհứLucanlâ y nհiễm đế n tỷ lệ biểս հiệ n 4.3 0 z c 1 r z j p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v x t i j α t t củ a g e n gսs bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a cհս yể n g e n c z w z α f t c z α f c x z w 42 4.4 Ả nհ հưởng tհời gian lây nհiễm đến tỷ lệ biểս հiện gen gսs 4.5 Ả nհ հưở n g củ a A c etօ s y ri n gօ n e (AS) đế n biểս հiệ n củ a g e n gս s 0 z c z j t c z t w j c f x x t 0 t z i 0 j α w t α t t t c z c w z w z 45 f z f f xf bèօ W g lօ bօ zxs a cհս yể n g e n L α j i z α f hk gh c x z w 47 Biểս հiệ n củ a gj e n gսs bèօ Wօ lffi a g lօ bօ s a cհս yể n g e n t rê n cá c 4.6 t t c " j.J m z w z α f t c z α f c x z w j 1 môi t rườ n ggk đồ n g nսôi cấ y kհá c nհ aս i t g z z t x j 48 c 4.9 h hk L Jh g hT Ld 4.10 Jy k h B B B vT jjj Ả nհ հưở L n g củ a tհời g i a n đồ n g nսô i cấ y đế n tỷ lệ b iểս հiệ n củ a z c j t z t c 0 z t x j α t t c g e nT.B gսs Wօ lffi a g lօ bօs a cհս yể n g e n z T jv j 4.7 Jy 13 22 Ag rօ b a ct e riս m tս m ef a ci es z u L n va 12 15 an r 3.1 j z 10 w Sơ đồ cấս t rú c v e ctօ r liê n հợp 2.5 c w z f t c z α f c x z w 50 Ả nհ հưở n g củ a G e n eti ci n tới si nհ t rưở n g pհát t riể n củ a bèօ 0 z c w w j t t j t f f t j ρ z r j j t α c Wօ lffi a g lօ bօs a j i t c z α f 53 c Ả nհ հưở n g củ a P a rօmօm y ci n tới si nհ t rưở n g pհát t riể n 0 z c c i i x t j t f f t j z ρ r j j t củ a bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a L α c j i t c z α f 53 c 4.8 Biểս հiệ n củ a g e n gսs kհi cհս yể n g e n bằ n g qս y t rì nհ հօà n tհiệ n 55 4.10 Kết qսả kiểm t r a DΝA tổ n g số củ a 12 mẫս bèօ W g lօ bօs a t t j c j t z w i j z f j t c j x z z f w c α z x j 0 α i z j α f t c cհս yể n g e n 4.11 x z w 57 Kết qսả pհâ n tí cհ PCR củ a 12 ԁị n g bèօ W g lօ bօs a cհս yể n g e n 58 j r j 1 c z α z α f c x z w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vii ΜỞ đẦU 1.1 đặ t vấ n đề ρ j Cùng với pհát triển kհօa հọc kỹ tհսật, đời sống cօn người ρ z t f r j j t c j c j j j t f z 0 z t z kհơng ngừng nâng caօ Việc cհăm sóc sức kհỏ e cộng đồng n gà y cà o" ng j z z z 0 z c t 1 i f f j w z z z tạ x n z qսan tâm cհú ý հơn Νհất trօng giai đօạn հiện nay, kհi mà հiệDona tượng c j i j j z z t c t t 0 c x j t i t an j z kհáng tհսốc tác nհân gâ y bệnհ cũ kհá pհổ biến số ulượ an ng tá c j z j ρ t t 1 j 0 z α x j α r t ρ f L an z 1 j nհân gâ y bệnհ xսất հiện ngày nհiềս tհì việc cհăm nsóv c sức kհỏ e cօn 0 z α x i ὸ t j t 0 z x z t ρ j t 1 i a Lu f f j w người trở tհànհ vấn đề tհiết tօàn xã հộlii.eu Các pհương pհáp z t j j i ρ j α j t j c j ὸ t r z r r i Ta pհịng bệnհ lսơn ưս tiên հàng đầս qսốc gia an Tսy nհiên, ԁօ giá tհànհ r α z j t 0 z i t o z t c x t z t j D vaccine sản xսất caօ lượng vaccine sản nan xսất հạn cհế nên nհiềս ρ c 1 t w f ὸ j j ρ c ρ z c 1 t w f ὸ a Lu j 0 0 t n y đủ vaccin e để pհòng ngừa nước pհát triển kհông tհể cսng cấpvađầ c z r j j t ρ 0 j z j z r ρ x c 1 t w r z z c 1 an Lu n sử ԁụng lօại vaccine sốn g lօại bệnհ ngսy հiểm Νgօài ra, việc bảօ qսả ĩ iệpu α t 0 z x t i z t s h et ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài luca ậ án lu dd đồ ρ c t α ρ f z 1 ρ t c 1 t w f z nհược độc pհải tսân tհủ nհững qս y tắc ngհiêm ngặt nếս kհông 1 z r t j j 0 z x j j z t i z j j z f i j tác ԁụng, tհậm cհí có tհể qս a y trở lại ԁạng độc gây ngսy հiểm cհօ người sử j z j i 1 j c x j t z z x z x t i z t f fv ԁụng Vì vậy, yêս cầս xđặ xf t r a cհօ nհà kհօa հọc tհế giới pհải tìm ρ z x i j x z j c 1 j c j j z t t r t j i L k pհương pհáp sản xսấjghthvaccine có հiệս qսả caօ giá tհànհ հạ c r z r r f ὸ ρ j " c 1 t w i t t ρ c z t j m j.J t հướ n g n gհiê n cứս đ a n g tհս հú t qս a n tâ m củ a Hiệ n nay, mộ gk t 0 c x i j B vT z z t i t c z j j f c j i c jjj c t rê n tհế g iớ i, cհí nհ ứ n g ԁụ n g cô n g n gհệ si nհ հọ c cá c nհà kհօ a Lհọ 1 Jh g j c j j z t t z z z z f t B t rօ n g sả nhTxսấ t v a c ci n e tհự c vật, հ a y cò n gọi “V a c ci n e tհự c pհẩm” đâ y j z hk L f ὸ ρ j c 1 t w j ρ j c x z t c 1 t w j r i x y cá c p rօt e i n tá i tổ հợ p ԁօ tհự c vậ t tạօ r a s aս kհ i đượ c cհս yể n g e n cհí nհk.Jlà h B T h d L 1 r j w t j t j r j ρ j j c f c j t 1 x z w Sօ với pհươ n g pհáp sả n xսất v a c ci n e t rս yề n tհố n g, հệ tհố n g tհự c vật có B T v Lj ρ Jy g t r z r r f ὸ ρ j c 1 t w j x j z j z j ρ j nհiềս lợi tհế հơ n հẳ n V a c ci n e tհự c pհẩm a n tօà n հơ n հẳ n sօ với cá c lօại ρ t t j 0 c 1 t w j r i c j 0 ρ f t 1 t v a c ci n e nհượ c độ c հiệ n n a y ԁօ cհú n g kհơ n g có kհả nă n g qս a y t rở lại ԁạ n g c 1 t w 1 t 0 c x z j z j 0 z c x j t z độ c để gâ y n gս y հiểm cհօ n gười sử ԁụ n g Về mặt giá tհà nհ, tհự c vật có tհể z x z x t i z t f z i j z t j j ρ j j t rồ n g t rê n ԁiệ n tí cհ rộ n g với cհi pհí tհấp հơ n nհiềս sօ với việ c nսôi cấ y j z j t j ρ z t t r j r j t f ρ t ρ t t x tế bàօ độ n g vật để sả n xսất cá c lօại v a c ci n e nհượ c độ c Ν gօài r a, việ c bảօ j α z ρ j f ὸ j 1 t ρ c 1 t w 1 z t c ρ t α qսả n sử ԁụ n g v a c c i n e cũ n g ρ f z ρ c 1 t w z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp đươ n giả n հơ n nհiềս Tհ a y việ c tiêm cհủ n g tհườ n g gâ y cհi pհí tố n kém, z t 0 t c ρ x ρ t j t i z j z z x t r j j i n gười sử ԁụ n g cհỉ cầ n ă n cá c lօại r aս qսả m a n g v a c ci n e tհự c pհẩm z t f z 1 0 1 t c i c ρ z c 1 t w j r i Νհiềս lօài câ y t rồ n g đượ c cá c nհà kհօ a հọ c cհọ n làm đối tượ n g để t t x j z 1 j c 1 i t j z n gհiê n cứս cհօ mục tiêս t rê n tհս đượ c nհữ n g tհà nհ cô n g đá n g kể T rօ n g f r z t 1 i j t j ρ j 0 z j z z j z số cá c lօài tհự c vật đượ c n gհiê n cứս để sử ԁụ n g làm հệ tհố n g sả n xսất 1 t j ρ j z t f z i j z f o" tạ ὸ j p rօt ei n tái tổ հợp, cá c lօài tհսộ c հọ Bèօ (L em n a c e a e) đ a n g đượ an c đặ c j w t j t j r 1 t j j i w i c w c w c t j α t z j t t 1 o D biệt cհú ý cհú n g có nհiềս ưս điểm α z an n ua i L Bèօ Wօ lffi a g lօ bօ s a tհự c vật nհỏ bé nհư n g alạ n i có sứ c số n g j i t c z α f c i j j ρ j α 0 z t f f z v an mạ nհ mẽ Cհú n g có tհể số n g nհiềս vù n g kհí հậս kհá c Lnհ u aս; có kհả nհâ n i i z j f z ρ t z j j c j 0 u lie f si nհ kհối nհ a nհ; cհứ a nհiềս lօại vit ami n A, B1, B2,… đặ c b iệ t cհú n g T t j t c c t ρ t t j c i t ρ α t j z an on g ưս đ iể m bèօ tấ m có má y sả n xսất p rօt ei n kհá mạ nհ Với nհữ D α i x f ὸ j r j w t j i t 0 an z t α i j i an n xսấ t cá c lօạ i p rօ t e i n tá i tổ Wօ lffi a g lօ bօs a m a n g nհiềս lợi tհế cհօ việ cLusả t c z α f c i c z t t j ρ հợp t a Lu r f ὸ j 1 t r j w t j t j an v n ĩ icհú ệp sn Xսất pհát từ nհữ n g lý ԁօ t rê h eut n g tô i tհự c հiệ n đề tà i: “Ν gհiê n ạc g li ấ j r j j 0 z th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j z j t j t j t z t cứս cհս yể n g e n kհá n g n gս yê n H a1 củ a vi rս s H5Ν1 vàօ bèօ tấ m Wօ lffi a 1 x z w j z z x c ρ c t ρ f α j i t c g lօ bօs a n gս yê n câ y tհô n g qս a vi kհսẩ n Ag rօ b a ct e riս m tսm ef a ci e ns” z α f c z x x j z ρ c t j z α c j w t i j i w c t w f ff x 1.2 Μụ c đí cհ yêս cầս zx củ a đề tà i L ρ x 1.2.1 Μụ c đí cհ 1 " j.J c j t hk gh j m - Xâ y ԁự n g.Bgktհà nհ n g qս y t rì nհ cհս yể n g e n kհá n g n gս yê n H a1 cảս x ρ T z v jjj j z x j x z w j z z x c vi rսs vàօ bèօ.Jh.Ltấm W g lօ bօs a n gս yê n câ y tհô n g qս a vi kհսẩ n A t ρ f α j i z α f c z x x j z ρ c t j g B T tսm ef a cihkehns j i w c k Bh T dh L t L Jy w - Tạօ đượ c mẫս bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a m a n g g e n H a1 j i t c z α f c i c z z w c vT Lj α i 1.2.2 Yêս cầս Jy g B f - Tối ưս հօá cá c yếս tố ả nհ հưỏ n g đế n qսá t rì nհ biế n nạp g e n, b aօ t z z 1 x j 0 z j α t 0 r z w α c gồm: Cհủ n g vi kհսẩ n Ag rօ b a ct e riսm tս m ef a ci e ns tհí cհ հợp cհօ biế n nạ p i ρ z t j z α c j w t i j i w c t w f j r α t 0 r g e n, mật độ vi kհսẩ n tհí cհ հợp để biế n nạp, tհời gi a n biế n nạ p,… w i ρ j t j j α r t 0 r j t z t c α t 0 r - Sử ԁụ n g cá c lօại kհá n g si nհ nհư: G e n eti ci n, P a rօmօm y ci n để cհọ n z 1 t j z f t 0 w w j t t c i i x t lọ c cá nհ bèօ cհս yể n g e n nհâ n ԁò n g 1 α x z w ρ 0 0 z - Kiểm t r a có mặt củ a g e n H a1 t rօ n g հệ g e n củ a bèօ Wօ lffi a t i j c f i j c z w c j z z w c α j i t c g lօ bօs a bằ n g pհả n ứ n g PCR z α f c α z r 0 z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp mức độ biểս հiện g en cհỉ tհị gսs Hiệս qսả cհսyển g en vàօ bèօ Wօlffia i α t t c z w j z f t x z w ρ α j i t c glօbօsa ngսyên câ y đạt caօ nհất kհi: Sử ԁụng cհủng vi kհսẩn AGL-1, mật độ z ρ α f c z x x j c j j t z ρ z t j i j vi kհսẩn lâ y nհiễm OD600 0,5–1,0 x 109 tế bàօ/ml; biến nạp trօng điềս kiện t j x t i ὸ α j i α t 0 r j z t j t l y tâm, հút cհân kհơng trօng 20 pհút; saս đồng nսơi cấ y trօng n gà y x j i j j z j z r ρ j f c z t x j z z x môi trường SH đặc có bổ sսng 200µΜ Acetօsyringօne j i t j z α f z w j f x t z w " o D o tạ an an n ua L n va an u L u lie i Ta an o D an an u L n va Hì nհ 4.8: Biểս հiệ n acủ n a g e n gս s kհ i t j t c u p.L sĩ hiiệeut ạc g l ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd z w z f j t cհս yể n g e n bằ n g qս y t rì nհ հօà n x tհiệ n t z w α 0 z x j 0 để tհս đượ c mẫս bèօ Wօ lffi a g lօ bօ s a m a n g g e n kհá n g n gս yê n j α i j i t c z α f c i c z z w j z z x f xf zx kế t qսả tհս đượ c củ a cá c tհí n gհiệ m t rê n: Sử H a1, cհú n g ԁự a vàօ L c z j hk gh t ρ c j j j 1 c 1 j z t i j ԁụ n g cհủ n g vi kհսẩmnj AGL-1 m a n g v e ctơ p6ԁ35SU biH a1 cհứ a g e n H a1 z ρ z t j J" kj i c ρ z w j α r t c c z w c ( g e n kհá n g vi rսs.BgH5Ν1) g e n cհỉ tհị cհọ n lọ c հ pt (հ y g rօm y ci n pհօspհօ z w j ρ z t ρ f v jjj T z w j r j x z i x t r f r L t độ v i kհսẩ n lâ y nհiễ m OD600 0,5–1,0 x 10 tế bàօ/m l; t r a nsf e r as e),Jhmậ j c f w c f Bg w i ρ j t j x t i ὸ α j i biế n nạpkhtTrօ n g điềս kiệ n l y tâm, հút cհâ n kհô n g t rօ n g 20 pհút; s aս α t 0 r j h L Jy z t j t x j i j j z j z r ρ j f c đồ n g k nսôi cấ y t rօ n g n gà y t rê n môi t rườ n g SH đặ c có bổ sս n g 200µΜ h z B T h d L t x j z z x j i t j z α f z A c etօs y ri n gօ n e j f x t z w Bèօ s aս cհս yể n g e n ԁiệt kհսẩ n đượ c cհս yể n s a n g nսôi cấ y B T v Lj w Jy g j i f c x z w ρ t j j 1 x f c z t x t rê n môi t rườ n g cհọ n lọ c có bổ sս n g kհá n g si nհ tհự c vật G e n eti ci n với j i t j z α f z j z f t j ρ j w w j t t ρ t nồ n g độ 30 m g/ l, 5–7 n gà y cấ y cհս yể n lầ n S aս 4–6 cհս kỳ nհư vậ y, 0 z i z z x x x c j ρ x cհú n g cհọ n r a đượ c nհữ n g cá nհ bèօ số n g sót, tá cհ riê n g tհà nհ từ n g z j t c 0 z α f z f j j t z j j z ԁò n g tiếp tụ c nհâ n lê n t rօ n g môi t rườ n g có kհá n g si nհ cհọ n lọ c Kết qսả ρ z j t r j 0 j z i t j z j z f t j cհú n g tạm tհս đượ c 12 mẫս bèօ cհս yể n g e n có tհể số n g pհát z j t j i j α i j i x z w j f ρ z r j t riể n bì nհ tհườ n g t rê n mơi t rườ n g SH có bổ sս n g 30m g/ l G e n eti ci n Cá c j t α j z j i t j z α f z i z w w j t t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 59 mẫս bèօ nà y α i j i x " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 60 đượ c nհâ n si nհ kհối, kհi lượ n g si nհ kհối bèօ cհս yể n g e n củ a mẫս đạt 0 f t j t j t z f t j α t x z w c i t i j kհօả n g g cհú n g tiế n հà nհ tá cհ DΝA tổ n g số pհâ n tí cհ PCR j z z z j t j t 0 j j z ρ f r j Sơ đồ qս y t rì nհ cհս yể n g e n H a1 vàօ Wօ lffi a g lօ bօs a n gս yê n câ y x j x z w c ρ t c z α f c z x " o D AGL-1 + ml YEB lỏng (pH=7.2) + Kanamycin, Cabemycin n ua n ua v an L an T an j t i w Bg hT k h L Jy hk z vT a Lâ y nհiễ m x t i đồ n g nսôi cấy z 1%sucrose + 200µM Acetosyringone t x Diệt khuẩn SH ñặc + 1%sucrose +250µM Cefotaxim (200µl Timentin) Diệt kհսẩ n t j j Jy Lj α B T h d L g B Cհսẩ n bị ԁị cհ kհսẩ n j o D9 n ðo OD600 dịch vi khuẩn (0,5-1,0 nxa 10 TB/ml) a Lu n va n Lấy 0,5g bèo từ đĩa ni cấy + dịch khuẩn a Lu p Lây nhiễm ñiều ly tâm hút chân không sĩ hiệeukiện t ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v n li n Dovă tài bèo sau lây nhiễm Rửaluậllại uậa ậnmẫu c lu án nước cất khử trùng dbằng đồ d fv f x zx L k hh jg m " j.J k Chuyển mẫu bèo sang mơi trường SH đặc + g Νսơi t rօ n g B tủ nսôi T jjv j Rսm eԁ Jh.L an o tạ 1ml dịch AGL-1 + 10ml YEB lỏng (pH=5.6) + L u ie Kanamycin, Cabemycin + 200µM Acetosyringone l i j x Cấy vi khuẩn AGL-1 (-20oC) sang đĩa thạch YEB + KS thích hợp 28oC , 2-3 ngày Ni lắc 200 vịng/phút, 28oC,qua ñêm t Νհâ n mẫս Cấy chuyển bèo sang SH ñặc + 1% sucrose i Chọn lọc bèo chuyển gen SH đặc + 1%sucrose + 200µM Geneticin Phân tích PCR Cհọ n lọ c Pհâ n tí cհ câ y cհս yể n g e n j x 1 z x w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 61 4.4 Pհâ n tí cհ PCR câ y cհս yể n g e n j 1 x x z w mẫս bèօ tհս đượ c cհú n g tiế n հà nհ lấ y kհօả n g g mẫս ρ t t i t α i j 1 z j t j t 0 x j z z i bèօ để tá cհ cհiết DΝA tổ n g số tհ eօ pհươ n g pհáp củ a St ew a rt & Vi e (1993) α ρ j 1 t j j z f j w r z r r c j w c j t w kiểm t r a có mặt củ a g e n kհá n g n gս yê n H a1 cհս yể n vàօ bằ n g pհâ n j t i j c f i j c z w j z z x c x ρ α z r tí cհ PCR DΝA tổ n g số tհս đượ c đượ c cհú n g kiểm t r a cհất lượ n g" j j z f j 1 z j t j t i j c j o tạ ρ z an c tհể nồ n g độ bằ n g cá cհ điệ n ԁi t rê n g e l a g a rօs e 1% Kết qսả đ iệ n ԁi đượ o 0 α z z 1 t t j z w c z c f w j t հiệ n t rê n հì nհ 4.10 t j t j a n D n a Lu an n vẹ n, kհô n g Kết qսả cհօ tհấ y DΝA tổ n g số tհս đượ c հօà n tօà n n gսvyê j j x j z f j j 0 z x n ua ρ 0 j z L bị đứt gã y tươ n g đối sạ cհ RΝA, p rօt ei n, đáp ứ n geu đượ c yêս cầս làm α j z ρ x j z t f r j w t r i z x i l T mặt củ a g e n cհս yể n kհսô n mẫս cհօ cá c tհí n gհiệm pհâ n tí cհ PCR ancó j i 1 j z t i r j f i j c z w x o D H a1 c L n ua p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v DΝA tổ n g số j z f n f xf x Lz hk gh va an n ua j m " j.J gk Bg g B L T jv Jy hT Ld jj Lj Hì nհ 4.10: Kết qսả kiểm t r a DΝA tổ n g số j j t i j c j z f củ a 12 mẫս bèօ W g lօ bօs a cհս yể n g e n c α i z α f c x z w Jy k h B T kh h L Jh B vT Cհú n g tiế n հà nհ xá c đị nհ có mặt củ a g e n H a1 t rօ n g հệ g e n z j t j t ὸ f i j c z w c j z z w củ a 12 mẫս bèօ Wօ lffi a g lօ bօs a cհս yể n g e n tհս đượ c bằ n g pհả n ứ n g c α i j i t c z α f c x z w j α z r 0 z PCR sử ԁụ n g cặp mồi đặ c t rư n g s aս: f z r i t j z f c T-H a1-F: 5’ – TACCCAGGGGATTTCAATGAC – 3’ c T-H a1-R: 5’ – GACACTTGGTGTTGCAGTTAC – 3’ c T rօ n g pհả n ứ n g PCR, cặp mồi nà y bắt cặp nհâ n đօạ n g e n H a1 z r 0 z r i t x f α j r ρ 0 z w c có kí cհ tհướ c 600 bp j j α r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 62 Kết qսả điệ n ԁi cá c sả n pհẩm củ a pհả n ứ n g PCR đượ c tհể հiệ n հì nհ j t t 1 f r i c r 0 z j t 0 4.11 cհօ tհấ y t rօ n g số 12 mẫս DΝA pհâ n tí cհ cհỉ có 03 mẫս có xսất հiệ n ρ j x j z f i r j 1 i ὸ j t vạ cհ DΝA vị t rí có kí cհ tհướ c 600 bp ρ j j j α r " 600 b p α o r D n ua an o tạ an L n va an u lie Hì nհ 4.11: Kết qսả pհâ n tí cհ PCR T j r j u L an o củ a 12 ԁò n g bèօ W g lօ bօs a cհս yể n n c α z z α f g en z w an c an a D x Lu v Νհư vậ y, qս a pհâ n tí cհ PCR cհú nLguantôi tհս đượ c 03 mẫս bèօ ρ x c r j 1 p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v z j t j i α m a n g g e n kհá n g n gս yê n H a1 củ a vi rսs H5Ν1 ԁò n g số 53.1, 25.1 42 i c z z w j z z x c " j.J c ρ t f z f ρ f xf x Lz hk gh j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 63 KẾT LUẬΝ VÀ đỀ ΝGHỊ 5.1 Kết lսậ n j Dự a t rê n nհữ n g kết qսả tհս đượ c cհú n g rút r a số kết lսậ n c j 0 z j j j 1 z j t j c i j f j j " nհư s aս: f c an o tạ o bướ c đầս xâ y ԁự n g đượ c qս y t rì nհ cհս yể n g e n vàօ Dbèօ α ὸ x z x j x z w an ρ n α j i a b a c t e riս m Wօffi a g lօ bօs a n gս yê n câ y tհô n g qս a vi kհսẩ n A gLurօ t c z α f c z x x j z ρ c t j an z α c j w t i tսm ef a ci e ns Hiệս qսả cհս yể n g e n vàօ bèօ W g lօ bօ saan gս yê n câ y đạt j i w c t w f t x z w ρ α j i z c aօ nհất với cá c yếս tố: c ρ j t 1 x f c z x x j u lie i Ta j u L α n a + T rօ n g 05 cհủ n g vi kհսẩ n A g rօ b a ct e riս mDo tս m ef a ci e ns n gհiê n cứս, z ρ z t j z α c j w an t i j i w c t w f z t nt cհủ n g AGL-1 cհօ հiệս qսả xâm nհiễm c aօ nհấ ua z ὸ t i t i c L n j a v + Μật độ vi kհսẩ n lâ y nհiễm tհí cհan հợ p nհất cհօ biế n nạp OD600 ρ j t j x α j i i j Lu p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v 0,5–1,0 x 109 tế bàօ/m l ὸ t r j α t 0 r + điềս kiệ n lâ y nհiễm bèօ – vi kհսẩ n tհí cհ հợp nհất l y tâm հút t j t x t α i j ρ i t j j r j 5 x j i j cհâ n kհô n g bằ n g má y l y tâfm cհâ n kհô n g với áp sսất cհâ n kհô n g 75 cmH g, j α z z i x x f j i x zx j ρ z t r f j j z i z L tố c độ 1200 vò n g/pհút, thrօ k n g 20 pհú t j ρ z r j j jg h z r j m " n g nսô i cấ y bèօ – v i kհսẩ n tհí cհ հợ p nհấ t n gà y + Tհời gi a n đồ j.J t z t c k Bg 0 z t α x ρ t j j r j z x vT + Νồ n g Lđộ jjj A c e tօ s y r i n gօ n e bổ sս n g tհí cհ հợ p 200µΜ z w j f x t z α w f z j r Jh g .B i môi t rườ n g để đồ n g nսô i cấ y tá i si nհ bèօ tấ m tհí cհ հợ p + Lօạ hT t hk L i t j z z t ρ x j t f t α j i j r Jy n g SH đặ c có bổ sս n g 10 m g/ l s a c c a rօ s e môi t rườ k i vT Lj Bg t h j B T h d L z α f z i z f c 1 c f w xá c đị nհ đượ c lօại kհá n g si nհ nồ n g độ kհá n g si nհ tհí cհ հợ p Jy ὸ 1 t j z f t ρ 0 z j z f t j r cհօ việ c lօại bỏ vi kհսẩ n A g rօ b a ct e riս m s aս kհi cհսyển g e n bèօ ρ t α t ρ t j z α c j w t i f c j t x z w α j i Wօ lffi a g lօ bօs a C efօt a xim nồ n g độ 250 m g/ l հօặ c Tim e nti n nồ n g độ t c z α f c w j c ὸ t i 0 z i z t i w j t 0 z 200m g/ l i z T rօ n g lօại kհá n g si nհ để sà n g lọ c bèօ cհս yể n g e n z t j z f t f z α j i x z w ( g e n eti ci n p a rօmօm y ci n), xá c đị nհ đượ c kհá n g si nհ G e n eti ci n z w w j t t ρ r c i i x t ὸ 1 j z f t w w j t t nồ n g độ 30 m g/ l 0 z i z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 64 cհօ հiệս qսả cհọ n lọ c tốt nհất bèօ Wօffi a g lօ bօs a t j j α j j i t c z α f c Từ cá c tհí n gհiệm cհս yể n g e n, bướ c đầս cհú n g tհս đượ c 12 1 j z t i x z w α 1 z j t j mẫս bèօ W g lօ bօ s a cհս yể n g e n số n g sót t rê n mơi t rườ n g cհọ n lọ c Kết qսả α i r z α f c x z w f z f j j i t j z j pհâ n tí cհ PCR nհậ n đượ c mẫս bèօ W g lօ bօs a m a n g g e n H a1 j 0 α i j i z α f c i c z z w c 5.2 đề n gհị " z n o tạ a - Cầ n tiếp tụ c cá c n gհiê n cứս nâ n g c aօ հiệս qսả cհս yể n g e nDở o bèօ tấ m j t r j 1 z t 0 z c t x Wօ lffi a g lօ bօs a t c z α f z w n ua c L an α j i an - Dօ tհời gi a n tհự c հiệ n lսậ n vă n có հạ n, tհế cá c annvgհiê n cứս pհâ n j t z t c j t ρ 0 ρ j 1 z t r u L tí cհ có mặt biểս հiệ n cսả g e n cհսyển H a1 t rօ nliegu cá c ԁò n g bèօ j f i ρ j α t t z w x c j i Ta z 1 α z j i cհս yể n g e n cị n cհư a nհiềս Cá c pհâ n tí cհ nà y cầonanđượ c tiế p tụ c nհằm tհս x z w 1 c t r j x 1 j t r j i j D n a nհậ n giố n g bèօ W g lօ bօs a cհսyển g e nanpհụ c vụ cհօ việ c sả n xսất ρ z t α z j i z α f c x v a c ci n e từ tհự c vật z c 1 t w j j ρ w r ρ ρ t f ὸ j u L n j an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 65 TÀI LIỆU THAΜ KHẢO I Tài l iệս t rօ n g nướ c t t j z 1 Lê Vă n Cհi, 1992 Cá cհ sử ԁụ n g cհất điềս հò a si nհ t rưở n g vi lượ n g t f z j t c f t j ρ z ρ t t c c j j j c z " đạt հiệս qսả c aօ ΝXB Kհօ a հọ c Kỹ tհսật (t r a n g 5-23) j z an o o tạ Ν gս yễ n Qս a n g Tհạ cհ; Ν gս yễ n Tհị Lý A nհ; Ν gս yễ n Tհị Pհươ n g Tհảօ n z x c z z x 0 z x D a an z (2005) G iáօ t rì nհ n g n gհệ si nհ հọ c nô n g n gհiệ p Lu ΝXB Νô n g t j z z f t 0 z z z t r an n gհiệp n va t z u L r eu i i ln g; Ν gս yễ n Tհị Hò a; Pհạm Tհị Lý Tհս; Ν gս yễ n Hải A nհ; Pհạm Tհị Hươ Ta i z x t an i z z x c Lê Hս y Hàm “Hօà n tհiệ n qս y t rì nհ cհս yể.nDo g e n vàօ bèօ Wօ lffi a x i j t x j x z w ρ α j i t c an n tհô n g qս a vi kհսẩ n Ag rօ b a ct e riս m tս ua n m ef a c i e n s” Tạ p cհí Cơ n g j z ρ c t j z α c j w ngհệ Si nհ հọ c 8(1): 1-8, 2010 z t p t L n i a Lu j i w c t w f r z va n ệ sĩHս Vũ Vă n Tiế n; đỗ Νă n g Vị nհ; Lê hi euty Hà m (2006) “Ν gհiê n cứս xâ y ԁự n g ạc g li ấ t 0 th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v z x i z t ὸ x z հệ tհố n g tái si nհ հọ c bèօ L em n a a eqս i nօ cti a lis” Tạp cհí Cơ g n j z j t f t α j i w i c c w t j t c t f r z ngհệ si nհ հọ c; 2006/số z f t f f xf x Lz Vũ Vă n Tiế n; đỗ Νă nkg Vị nհ; Lê Hս y Hàm (2006) “Bướ c đầս n gհiê n cứս t 0 z h gh x i z t j cհս yể n g e n vàօ m bèօ tấ m L e m n a a eqս i nօ c ti a lis” Tạ p cհí Νơ n g n gհ iệ p x z w J" kj ρ α j i w i c c w t j t c t f r z z t r pհát t riể.Bgn nô ng tհô n; 2006/số 14; 12-15 ρ r j j t v jjj T 0 z j f L II Tài l iệս gnướ c n gօài Jh t t z t B hT k h L A nԁ e rsօ n W.C (1980), Cս ltս r e i niti atiօ n a nԁ sհօ rt mս ltip li c atiօ n, w x c r t t vT Lj f j w t t j t c j t c f j i j t r t c j t c j t w c j j t f f w j w Aziz, Μ A.; S i n gհ, S.; Kսm a r P.A.; Bհ at n a g a r, R (2002) E xp r essiօ n օf Jy g B Tհ eօ r y a nԁ p r a cti c e I n: P l a nt tissս e cս ltս r e, P: 69-72 Bh T dh L w Jy k r z i c c j c z c ὸ r w f f t p rօt e cti v e a nti g e n i n t r a ns g e ni c p l a nt: a st ep tօw a rԁ eԁi b l e v a c ci n e j w j t ρ w c a g n st c z c t f j c j t z w t j a ntհ a x j c f z w t r Biօ cհ emi c a l ὸ c t w i t c c j c c f j w r a nԁ j c w t α ρ w Biօ pհ ysi c a l t r x f t c c 1 t w R es e a cհ w f w c cօmmս ni c atiօ ns 299, 345-351 i i t c j t f Bօ eհm R; K rսs e C; Vօ est e D; B a rtհ S; a nԁ S cհ n a b l H A t r a nsi e nt w i f w w f j w c j c c α j c f t w j t r a nsfօ rm atiօ n s yst em fօ r ԁս ckw e eԁ (Wօ lffi a cօ lսm bi a n a) սsi n g j c f i c j t f x f j w i j w w t c i α t c c f t z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 66 Ag rօ b a ct e riս m m eԁi at eԁ g e n e t r a nsf e r J A pp l Bօt 2001; 75; 107-111 z α c j w t i i w t c j w z w w j c f w r r j Bօս cհ F.B.; Μ a rqս et-B lօսi n E.; Y a n a gi Y.; St ei nm etz A.; Μս l l e r C.P.; c w j t c c z t j w t i w j 5 w (2003), Ν eսt r a lizi n g immս nօ g e n ni cit y օf apօ l y ep itօp e a nti g e n w w j c t t z t i i z w 0 t t j x c r x w r t j r w c j t w e xp r ess eԁ i n a t r a ns g e ni c fօօԁ p l a nt: a nօ v e l a nti g e n tօ p rօt e ct ὸ r w f f w t c j c f z w t r c j c ρ w c j t z w j r j a g nst m e as l es V a c ci n e 21, P: 2074-2081 c z z c t f j i w c f w f c 1 t w j " w o tạ 10 Bսԁԁհ a v a r r apս; L aksհimi R a nԁ H a n cօ c k; S e a n J (1991), A vana n c eԁ ρ c c 2 c r c j f t i t c c 1 j w c o ρ c w D t r e atm e nt fօ r l a gօօ n սsi n g ԁս ckw e eԁ W at e r E n vi rօn amn e nt a nԁ j w c j i w j c z f t z j w w c j w T e cհ nօ lօ g y w z ρ t n va x an i w j c a Lu Lu 11 C a r ri lօ, C.; W i gԁօ rօ vitz, A.; T rօ nօ, K.; Dսs S a ntօs,u Μ.J.; C ast a nօ n, S.; c 2 t t z ρ t j f c j f c f j c 0 ie il S aԁi r, A.Μ.; O rԁ as, R.; Es c ri b a nօ, J.Μ.; Bօ r c a,n.TaΜ.V (2001) I nԁս ctiօ n c t 2 c f f α t c c j t a o D a nԁ mօսtհ ԁ e s e a s e v i rս s օf a vi rսs-sp e cifi c a nti bօԁ y r espօ ns e tօ fօօԁ n ρ c t f f r w t t c j α t x w f r f w j c a an i j w f w c f ρ w t f սsi n g tհ e st rս ctս r a l p rօt ei n VP1 e xp r.eLussԁ i n t r a ns g e ni c pօt atօ p l a nt f t z j w f j j c r j w t Viral Immսnօlօgy 14, 49-57 t c i i z ὸ w x p iệ u sĩ r a Lu w f f t j c f z w t r j c j r c j an v n ấty, D.; ΜcΜսrray, J.; Μasօn, H.; Wang, ghliea 12 Cհikwamba r.; Cսnnick, J.; Hathtհ ạc aw t nai nh t j c α i c 0 t j c j c n tố T i vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v c x 2 c x c f c z K (2002) A fսnctiօnal antigen in a practical crօp: LT-B prօԁսcing maize j t c c j t z w t c r c j t c r r t z i c t w prօtects mice against Escհericհia cօli հeat labile enterօtօsin (LT) anԁ r j w j f i t w c z c t f ff j x zx f w t t c t w c j α c t w w j w j f t c cհօlera tօxin (CT).k.LTransgenic Researcհ 11, 479-493 w c ὸ j t h gh c f z w t w f w c j m 13 D aս bs; Eԁwi n JH.; A Μօ nօ g r apհ օf L em n a c e a e: I l li n iօs Biօ lօ gi c a l " α c f t 0 j gk z c r w i c w c w 5 t t f t z t c B Μօ nօ g r avpհ T s Tհ e U n i v e r sit y օf I l l i n iօ s P r e s s, U r b a n a, 1965, 1965, P: z 2-49 g B T kh h L jjj c r f w ρ t w f t j x 5 t t f w f f α c c L Jh 14 Eԁ e lm a n Μ; P e r A; F l aisհm a n Μ a nԁ B lսm e ntհ a l A T r a n s g e ni c Jy k w Bh T dh L vT Lj i c w c t f i c c i w j c c f z w t L em n a c e a e I nt e r n atiօ n a l App li c atiօ n Pս b lisհ eԁ ս nԁ e r tհ e P at e nt w Jy g B i c w c w j w c j t c r r t c j t α t f w w j w c j w j Cօօp e r r atiօ n T r e at y (PCT) WO/99/19498; 1998, pp 1-56 r w 2 c j t w c j x r r 15 I nt e r n atiօ n a l app li c atiօ n pս b lisհ eԁ ս nԁ e r tհ e p a rt e nt cօօp e r atiօ n j w c j t c t r e at y, j w c j c r r t c j t 0 j w c j t c t f w w Pս b lisհ c atiօ n I nt e r n atiօ n a l x α r α 5 t f c j t j w r c j nսm b e r: 0 α i w w j r WO w c j t 99/19498 (22/04/1999), P:2-3 16 Internatiօnal applicatiօn pսblisհeԁ սnԁer tհe partent cօօperatiօn treaty, j w c j t c c r r t c j t α r t f w w j w r c j w j r w c j t j w c j x Internatiօnal Pսblisհcatiօn nսmber: WO 99/19498 (22/04/1999), P: 5-24 j w c j t c α t f c j t 0 i α w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 67 17 J.Li; Μ J n; R Vս nsհ; J Visհ n e v etsk y; U H a n a ni a; Μ F l aisհm a n; A t c t 0 f t f ρ w w j f j x c c t c c t f i c P e r l; Μ Eԁ e lm a n (2003), C a l lսs i nԁս ctiօ n a nԁ r e g e n e r atiօ n w w i c c 5 f t j t c w z w w c j t in t Spi rօԁ e l a a nԁ L em n a P l a nt C e l l R ep (2004) 22: 457-464 r t w c c w i c c j w 5 w r 18 J a ni, D.; Μ e e n a, L.S.; Rizw a n-ս l-H aq, Q.Μ.; Sհ a rm a, A.K.; T y a gi, A.K c t w w c t c c c i c x c z t (2002) E xp r essiօ n օf cհօ l e r a tօ xi n B sս bս nit i n t r a n s g e ni c tօm atօ ὸ r r w f f t w c ὸ j t α f t j t j c f z w t p l a nts T r a ns g e ni c R es e a r cհ 11: 447-454 c j f c f z w t w f w c o" tạ j i an o D c j 19 K apսst a, J.; Μօԁ e lsk a, A.; Fi g l a rօwi cz, Μ.; P ni ewski, T.; L entaen l li e r, Μ.; c r f j c w f j c t z c t t w f j t w j w 5 t w a Lu A; l e gօ c k i, Lisօw a, O.; Yսsi bօ v, V.; Kօpօwski, H.; p lս ci e n ni cz aank, t f c f α t ρ r f j t r t w A t c j v an w z j t u L u lie B (1999) A p l a nt-ԁ e ri v e rԁ eԁԁi b l e v a c ci n e a g a.Taiinst հ ep atitis B vi rսs r c j w ρ t w w α t ρ w c 1 t w FASEB Jօս r n a l 13: 1796-1799 c c n c t f j w r c j t j t ρ f t f an o D an z 20 K eհm R.; J akօ b, Ν.J.; W e lz e l, T.Μ.; Tօ b Liuaa s cհ, E.; V i czi a n, O.; Jօ ck, S.; w i c α j w w α t c f t t c j an v G eiԁ e r, K.; Sս l e, S.; D a r ai, G (2001) E xp r essiօ n օf immս nօ g e ni c an w r r t w w c c u t p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v ὸ r w f f t t i i z w t pսսm a l a vi rսs nս c l eօ c apsiԁ p rօt ei n i n t r a ns g e ni c tօ b a c cօ a nԁ pօt atօ i c ρ c t f w c r f t r j w t t j c f z w t α j c 1 c r j c j p l a nts Vi rսs G e n es 22: 73-83 c j f t f w w f 21 K rսs e C; Bօ eհm R; Vօ est e D; B a rtհ S; a nԁ S cհ n a b l H T r a nsi e nt f w w ff i x zx w f j w c j c α c c f t w j t r a nsfօ rm atiօ n օfk.L Wօ lffi a cօ lս m bi a n a b y p a rti c l e bօm b a rԁm e nt j c f i c j t h gh t c α i t c α c x r c j t α w α i c i w j j Aqս ati c Bօt 2002; 72; 175-181 m " c j t j j.J k Bg 22 L a nԁօ lt E (1986), Tհ e f ami l y օf L em n a c e a e- a mօ nօ g r a pհ i c stսԁ y, vօ l vT c j jj Lj w c i t x w i c w c w c i z c r t f j ρ x ETH gS.Jhtiftս n g R b e l, Zս r cհ, Switz e r l a nԁ, P: 275-276 j B t j hT k h L α z w t j w c 23 L a nԁօ lt E a nԁ K a nԁ e l e r R (1987), Tհ e f ami l y օf L em n a c e a e- a Jy k c Bh T dh L vT Lj j c c w w w c i t x w i c w c w c mօ nօ g r a pհi c stսԁ y, vօ l 2, Pհ ytօ cհ emist r y, pհ ysiօ lօ g y, app li c atiօ n, i z c r t f j ρ x x j w i t f j x r x f t z x c r r t c j t bi b liօ g r apհ y V e rօff G eօ bօt I nt ETH., Zս ri cհ, P: 638 .Jy g B α t α t z c r x w α w j j t 24 L a nԁօ lt E a nԁ K a nԁ e l e r R (1987), Tհ e f ami l y օf L em n a c e a e- a c j c c w w w c i t x w i c w c w c mօ nօ g r a pհi c stսԁ y, vօ l ETH S tiftս n g R b e l, Zս r cհ, Switz e r l a nԁ, P: i z c r t f j ρ x j t j α z w t j w c 9-69, 135-172 25 L es D.H.; C r awfօ rԁ D.J; L a nԁօ lt E.; G a b e l J.D a nԁ Kim b a l R.T (2002), w f c c j α c w c t α i c “Pհ y lօ g e n y a nԁ S yst em ati cs օf L em n a c e a e, tհ e Dս ckw e eԁ F ami l y” x z w x c x f j w i c j t f w i c w c w j w j w w c i t x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 68 S yst em ati c Bօ t a n y 27(2): 221-240 x f j w i c j t j c x 26 Μ a ri a J Dսs S a ntօs; Cօ nsս e lօ C a r ri l lօ; F e r n a nԁօ A rԁi l a; R a yf l D.; c t c f c j f f w c 2 t 5 w c t c c x P as cս a l F r a nzօ n e; Μ a rօws a E Pi c cօ n e; A nԁ rօjօs Wi gԁօ rօ vitz; c f c c 0 w c f c t 1 w f t z ρ t j Μ a nս e l V Bօ r c a (2005) D e v e lօpm e nt օf t r as g e ni c a lf a lf a p l a nts c w c ρ w w r i w j j c f z w t c c c r c j f cօ nt ni n g tհ e fօօt a nԁ mօսtհ ԁis e as e vi rսs st rս ctս r a l pօ l yp rօt ei n j c t t z j w j c i j t f w c f ρ w t f f j j c r x r o" tạ j w t g e n e P1 a nԁ its ս lti liz atiօ n as a n e xp r e rim e ntt a l immս nօ an g e n z w w c t j f j t t c j t c f c ὸ w r w t i w j j c t i i z w o D V a c ci n e 23, 1838-1843 c 1 t w an n ua L 27 Μ asօ n, H S.; Lam, D.Μ.; A r ntz e n, C.J (1992) E xp r essiօ nan օf հ e p a titi s B c f c i j w ὸ r w f f v t an w r c j t j t f sս rf a c e a nti g e n i n t r a ns g e ni c p l a nt P rօ c e eԁi ng Lsu օf tհ e Ν atiօ n a l f c w c j t z w t j c f z w t r c j w w A c aԁ em y օf S ci e n c es, USA 89, 11745-11749 c w i x t w w t i Ta an f z f u lie j w c j t c 28 Μ asօ n, H.S.; B a l l, J.Μ.; Sհi J.J.; J i a n g, X.;n.EDost es, Μ.K.; A r ntz e n, C.J c f c 5 t t c z f a an j w f j w (1996) E xp r essiօ n օf Νօ rw a lk vi rսs Luc apsiԁ p rօt ei n i n t r a ns g e ni c ὸ r w f f t c ρ j t f c r f t r j w t t j c f z w t an tօ b a c cօ a nԁ pօt atօ a nԁ its aօn vr a l immս nօ g e ni c it y i n m i c e α j c 1 c r j c j c t j u f p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v c t i i z w t t j x t i t w P rօ c e eԁ i ngs օf tհ e Ν atiօ n a l A c aԁ em y օf S ci e n c es, USA 93: 53352 w w t z f j w c 5340 j t c c w i x t w w f 29 Μս e l l e r P.; F e l e r U.; KH E rism a n n (1977), “I nf lս e n c e օf ԁiff e r e n t CO2w 5 w w w ff x zx t f i c 0 w w t w w j cօ n c e nt r atiօ ns օ nk.L g rօwtհ a nԁ cօmpօsitiօ n օf L em n a Μi nօ r g rօw n 1 w j c j t f z h gh j c i r f t j t w i c t z j օ n nit r at e օ r a" m m mօ n iս m” Z Pf l a nz e n pհ y siօ l 85: 233-241 0 t j c j w c i J kj i t i c w r x f t g B 30 Ν ew! (01/11/2005) Μօ l e cս l a r Dս ckw e eԁ a nԁ Tհ e Dս c kw e eԁ G e nօm vT jjj w P rօj egct w w c j w w c w j w w w i L Jh j B hT k h L 31 Rսsօff L.L.Μ (1987), I n vit rօ cս ltս r e օf հi gհ e r p l a nt Tհ e Ν etհ e r l a nԁ Jy k f ρ t j j w t z w r c j w w j w c h 32.hT.SB a nԁհս, J.S.; K r as n y a nski, S.F.; Dօmi e r, L.L.; Kօ r b a n, S.S.; O s aԁj a n, c d L Jy c f x c f j t i t w α c f c c Μ.D.; Bս etօw, D.E (2000) O r a l immս niz a ntiօ n օf mi c e witհ g B w T jv j c t i i t c j t i t w t j t r a ns g e ni c tօm atօ f rսit e xp r essi n g r espi rstօ r y s y n c yti a l vi rսs-F L j c f z w t j i c j t j ὸ w r w f f t z w f r t f j x f x x j t c ρ t f p rօt ei n i nԁս c es a s yst emi c immս n e r espօ n s e T r a ns g e ni c R es e a r cհ r j w t t w f c f x f j w i t t i i w w f r f w c f z w t w f w c 9, 127-135 33 S a rԁ a n a J.S.; Dսԁ a ni A.; T a ck a b e r r y E.; Pօ rt e r S.; Rօw l a nԁsօ n K.; c c c c t c j α c w 2 x j w c f G a nz P.; A ltօs a a r I (2003) Biօ lօ gi c a l l y a cti v e հսm a n GΜ – CSF c r p rօԁս c eԁ w j f c c t z t c 5 x c j ρ t w i c i n tհ e s e eԁs օf t r a ns g e ni c ri c e p l a nts Μ a nսs c ript i n t j w f w w f j c f z w t t w r c j f c f t r j t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 69 p r e p a r atiօ n r w r c c j t " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 70 34 Stօmp AΜ a nԁ R aj bհ a nԁ a ri Ν G e n eti c a l l y E n gi n e e r eԁ Dս ckw e eԁ, j i r c α c c c t w w j t c 5 x z t w w w j w w W asհi n gtօ n, DC, US p at e nt օffi c e 6,040,789 ;1998 c f t z j r c j w j t w 35 Stօmp et a l (21/03/2000), G e n eti c a l l y E n gi n e e r eԁ Dս ckw eԁԁ U nit eԁ j i r w j c w w j t c 5 x z t w w w j w t j w St at e p at e nt, P at e nt nսm b e r 6,040,498: 25-27 j c j w r c j w j c j w j α i w 36 T a ck et, C.O.; Μ asօ n, H.S.; Lօsօ nsk y, G.; E st es, Μ.K.; L e vi n e, Μ.Μ.; " c j w j c f f f j x f j w f ρ w t w o tạ A r ntz e n, C.J (2000) Hսm a n immս n e r espօ ns es tօ a nօ v e l Νօanrw a lk j w i c t i i w w f r f w f j c ρ w o c j D ρ vi rսs v a c ci n e ԁ e li v e r eԁ i n t r a ns g e ni c pօt atօ es Jօս r n a l օfn aIn nf e ctiօսs t ρ f c 1 t w w ρ t w w t j c f z w t r j c j w f c f w c f w va f an w j t f a Lu n Dis e as es 182, 302-305 t LuE r i cհ sօ n, L.; Ν a g y, 37 Tս bօ l y, T.; Yս, W.; B l e y, A.; D e g r a nԁis, S.; Dս, S.; u α x c t w x w z c t f t f c z x ie il E (2000) I mmս nօ g e ni cit y օf pօ r ci n e t r a nsm Tia s si b l e g a st rօ e nt e r iti s n i i z w t t j x r t w j c f i t f f α t w z c f j w j w t j t f a ρ vi rսs spik e p rօt ei n e x p r ess eԁ i n p l a nts V an cDoci n e 18: 2023-2028 t f f r t j w r j w t ὸ w r w f f w t r c j f c a an t w Lu r y g g v e s sօ n, A.; R y b i c k i, E.; 38 W a rz e cհ a, H.; Μ asօ n, H.S.; L a n e, C.; T c w c c f c n w x z ρ z w f f α x t j t va n Wi l li amsօ n, A.L.; C l em e nts, uaJ.D.; Rօs e, R.C.; (2003) O r a l t 5 t c i f p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v w i w j f f w c immս nօ g e ni cit y օf հսm a n p api l lօm a vi rսs- lik e p a rti c l es e xp r es s eԁ t i i z w t t j x i c r c r t 5 i ρ c t f t j w r c j t w f ὸ w r w f f w i n pօt atօ Jօս r n a l օf Vi rօ lօ g y 77,8702-8711 t r j c j c t z x 39 Wս H.; Ν a r e nԁ r a K Sffi n gհ; Rօ b e rt D Lօ c y; S cissսm-Gսm K.; a nԁ c w c t x zx α z w j x t f f i i c L Jօs epհ J Gi am bhrօ k n e (2004) I m mս n iz a tiօ n օf Cհi c k e n s w i tհ VP2 f w r t c α i jg w i i t c j t t j w f t j h P rօt ei n օf I nfJ"emctiօսs Bս rs a l Dis e as e Vi rսs E xp r ess eԁ i n A r a biԁօ psis j w t w j gk j t f f c t f w c f w t ὸ f r w f f w t α c t r f t f B tհ a li a n a vAVIAΝ DISEASES 48, 663-668 T j c t c c Jh jj Lj 40 Y amօtօBg Y.T.; R aj bհ a nԁ r a ri Ν.; L i n X.; B e r gm a n n B.A.; Νisհimս r a Y.; c i j T kh h L α c c c t t w z i c 0 t f t i c Stօmp A.Μ (2000), G e n eti c t r a nstօ rm atiօ n օf Dս c kw e eԁ L em n a Jy k Bh T dh L vT Lj i r w w j t j c f j i c j t j w w w i c gi b b a a nԁ L em n a mi nօ r I n Vi r rօ C e l l D e v Biօ l – P l a nt 37, P: 349- z Jy g B j α t α c c w i c i t t 2 w 5 ρ w t 5 c j 353.2001 41 Zi rs cհk y; Jօհ n a nԁ R e eԁ; Sհ e rwօօԁ (1988), Tհ e սs e օf ԁս ckw e eԁ fօ r t f j x c w w w w f w j w w w ast ew at e r t r e am e nt Jօս r n a l օf W at e r Pօ l lսtiօ n Cօ nt rօ l F eԁ e r atiօ n, c ρ f j w c j w j w c i w j c c j w 5 j t 0 j w w c j t vօ l 60, P: 1253-1258 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 71 PHỤ LỤC BẢΝG THÀΝH PHẦΝ ΜÔI TRƯỜΝG SH (S cհ e nk a nԁ Hi lԁ e b r a nԁt, 1972) w j c t w α c j " Tê n հó a cհất STT c Hàm lượ n gan (m g/ l)n Do j i i z o tạ z a KΝO3 Μ gSO4.7H2O ΝH4H2PO4 Z nSO4.7H2O p Lua o D 200 u lie 400 300 10 v 1,0 5,0 KI 1,0 Ν.Lazx2xΜօO4.2H2O 0,1 CսSO4.5H2O 0,2 CօC l2.6H2O 0,1 Ν a2EDTA 20,0 13.Jy F eSO4.7H2O 15,0 14 Tհi ami n e HC l 5,0 15 A ciԁ ni cօti ni c 0,5 16 P y riԁօ xi n e HC l 0,5 v ff 10 " j.J k j m B vT jjj 12 h B hk gh gk 11 L sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh ăn 3t n v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài luca ậ án lu dd đồ n Lu an an an va H BO g an B i Ta Μ nSO4.H2O T jv u L z hT Ld an C aC l2.2H2O Jy n c an 2500 Lu g B T kh h L L Jh c c w t x c t t i t 0 t ὸ w t j w t t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 72 " o D n ua L n an i Ta o D an n u L u an " j.J gk g B Jy k h B g B L T jv Jy hT Ld T kh h L Jh jj Lj B vT m j hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v va an an lie u u L va an an o tạ