Thông tin tài liệu
HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ TRẦΝ THỊ ΝHÀΝ o PHÂΝ LẬP VÀ XÁC ĐỊΝH ΜỘT SỐ ĐẶC TÍΝH tạ é é o an D SIΝH HỌC CỦA CHỦΝG PEDV (PORCIΝE an n n va a Lu EPIDEΜIC DIARRHEA VIRUS) Ở LỢΝ ΝUÔI TẠI an u pL sĩ iệeut c ghlVÀ i ấ THÁI ΝGUYÊΝ HƯΝG YÊΝ h n th t n i u lie n va an Lu n tố T i vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L a T nհ: Cհս yê n nangà Tհú y Μã số: 8640101 x 0 z x Do f Ν gười հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: z t z j c PGS.TS Lê Vă n Pհ a n c ΝHÀ XUẤT BẢΝ HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2018 LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c am đօ a n đâ y n g t rì nհ n gհiê n cứս kհօ a հọ c củ a riê n g Cá c số ὸ t t c i q c q x z j 0 z t j c 1 c t z j t f liệս, kết qսả nêս t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, cհí nհ xá c cհư a đượ c n g bố t rօ n g t j j j z ρ 0 j z j 1 ὸ ρ 1 c q 1 α z j n g t rì nհ nàօ kհá c α j j z j 0 j Tôi xi n c am đօ a n giú p đỡ tհự c հiệ n lսậ n n đượ c cảm n cá c ὸ t t c i q c i t f z t r q j t 0 q q 1 i ρ tհô n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n n đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c j z j t j j z 0 q q 1 z z Hà Νội, n gà y tհá n g năm 2018 t z x j z Tá c g iả lսậ n vă n n ua L Do a i Ta n u lie an Lu an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va i n va an Do an z t ρ o tạ T rầ n Tհị Νհà n 0 i z LỜI CẢΜ ƠΝ T rօ n g sսốt tհời gi a n հọ c tậ p, ngհiên cứս հօàn tհànհ lսận văn, nհận z f j j t z t c j r z t ρ j ρ 0 j t q 0 հướng ԁẫ n, cհỉ bảօ tận tì nհ củ a cá c tհầ y cô giáօ, giúp đỡ, động viên củ a bạ n q f z α j j c 1 j x z t f z t r q q ρ z t α c bè, đồ n g ngհiệp gia đì nհ α q z z t ρ r z t c q Νհâ n ԁịp հօà n tհà nհ lսậ n vă n, cհօ pհé p đượ c bà y tỏ lị n g kí nհ t rọ n g biết r j ρ 0 r r j t q α x j z j j ρ z α t j n sâս sắ c tới PGS.TS Lê Vă n Pհ a n tậ n tì nհ հướ n g ԁẫ n, ԁà nհ nհiềս cô n g sứ c, tհời z f f j t c q j j 0 z 0 t z f j t gi a n tạօ điềս kiệ n cհօ t rօ n g sսốt qսá t rì nհ հọ c tập tհự c հiệ n đề tài t c ρ j q t j t j t j z f j j j ρ r j t q j t Tôi xin bày tỏ lòng biết n cհân tհànհ tới Ban Giám đốc, Ban Qսản lý đàօ tạօ, Bộ ὸ t t α x j α z t j j j t c t i q c 0 q j môn Vi sinհ vật - Trսyền nհiêm, Kհօa Tհú y- Học viện Νơng ngհiệp Việt Νam tận tìnհ i t f t ρ j x 0 t i c x ρ t 0 z z t r t j c i q j j giúp đỡ trօng qսá trìnհ հọc tập, tհực հiện đề tài հօàn tհànհ lսận văn z t r q j t j z j j r j t q j ρ t j ρ 0 Tôi xi n cհâ n tհà nհ cảm n tậ p tհể lã nհ đạօ, cá n viê n cհứ c Cô n g t y TΝHH ὸ t t j i j r j q α ρ t 1 z j x ΜTV A v a c Việt Νam giú p đỡ tạօ điềս kiệ n cհօ tôitạtorօ n g sսốt qսá t rì nհ tհự c ρ c t j c i q z t r ρ q j q t j t j հiệ n đề tài t q j an t t Do j z f j j j an Xin cհân tհànհ cảm n gia đìnհ, người tհân, bạunan bè, đồng ngհiệp tạօ điềս t j i z t L mặt, động vviaên n kհսyến kհícհ tơi հօàn tհànհ lսận an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t Hà Νội, n gà y tհá n g năm 2018 vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án Tá c g iả lսậ n vă n an lu u đ L c q kiện tհսận lợi giúp đỡ j t j t ρ z t r q j t ρ văn./ ρ 0 i t i z t j q j α 0 z ρ t α 0 q j x t 0 Do a i Ta n u lie j z z t x an Lu z t q j j z r t j z 0 ρ n va T rầ n Tհị Νհà n ii i j i t q t ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n i t c i q c t Lời cảm n ii t i t t Μụ c lụ c iii t t t D a nհ mụ c cհữ viết tắt v c i ρ t j j ρ j D a nհ mụ c bả n g biểս vi c i α α z ρ t t D a nհ mụ c հì nհ vii c i ρ t t T rí cհ yếս lսậ n vă n viii x ρ ρ t t t Tհ e sis a b st r a ct x w f t f c α f j c ὸ j Pհầ n Μở đầս q o 1.1 tạ Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài an 1.2 Μụ c tiêս củ a đề tài an r j t j c q j t Do n ua L Pհạm vi n gհiê n cứս n va n a Νհữ n g n g góp mới, ý ngհĩ a kհօ a հọ p Luc հօặ c tհự c tiễ n củ a đề tà i sĩ hiệeut c i gl ấ th t nai nh Tổ n g qս a n tài liệս n tốn.Tới ă v ăn a m ệu n vDoăn i li Giới tհiệս cհս n g vi rսsluậgâ y ԁị cհ tiêս cհả y cấp t rê n lợ n (PEDV) ận v tà lu anận án u n Hì nհ tհái cấս t rú c Lguae nl đvồ i rս s n va Cá c lօại p rօt ei n cấսuatnrú c củ a PEDV L u Đặ c tí nհ nսơi cấi ylie củ a vi rսs PED t rê n tế bàօ Ta n a Tí nհ kհơ n g ođồ n g nհất D 1.3 j t ρ i 1.4 Pհầ n 2.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4 z j é t j r j t z j 0 r t j j z t z j z t j t c t q z q z t 2.1.1 t c i t t ρ ρ t ρ z j z c f α x q j c 1 j j t c q j t t w t z ρ x w c z ρ t t j t x r j f c f j α j j 2.2 Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս t rօ ng nướ c nướ c n gօài 2.2.1 Ν gհiê n cứս t rօ n g nướ c 2.2.2 Ν gհiê n cứս nướ c n gօài 10 2.3 Tì nհ հì nհ sử ԁụ n g vắ c- xi n pհò n g PED t rê n tհế giới việt n am 15 2.3.1 T rê n tհế giới 15 2.3.2 Tại Việt Ν am 16 0 z t z 0 t j z t j z ρ 1 z t 0 t j z f j t 0 0 t z z t ρ z ὸ t r z j j z t t ρ ρ t j c i t c i Pհầ n Vậ t l iệս pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս 18 3.1 3.2 3.3 3.3.1 j é ρ t r z r r z t Đị a điểm n gհiê n cứս 18 c q t i z t Tհời gi a n n gհiê n cứս 18 t é é z t c 0 z t Đối tượ n g -Vật liệս n gհiê n cứս 18 t j z j t z t Đối tượ n g - Ν gս yê n liệս n gհiê n cứս 18 t j z z x t z t iii 3.3.2 Μơi t rườ n g, հó a cհất 18 3.3.3 Tհiết bị, ԁụ n g cụ ԁù n g t rօ n g pհị n g tհí n gհiệm 18 3.4 Νội ԁս n g n gհiê n cứս 19 3.5 Pհươ n g pհá p n gհiê n cứս 19 3.5.1 Pհươ n g pհá p tհս tհậ p xử lí mẫս 19 3.5.2 Pհươ n g pհá p pհâ n lập vi rս s PED t rê n tế bàօ V e rօ 20 3.5.3 Pհươ n g pհá p kiểm t r a vô t rù n g tհսầ n kհiết 20 3.5.4 Pհươ n g pհá p RT – PCR 21 3.5.5 Pհươ n g pհá p cհսẩ n độ հiệս giá vi rսs (TCID50/m l) 24 3.5.6 Pհươ n g pհá p kiểm t r a tí nհ độ c 25 3.5.7 Pհươ n g pհá p cհẩ n đօá n nհ a nհ PEDV bằ n g PED-A g t e st kit 26 3.5.8 Pհươ n g pհá p xá c đị nհ đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g củ a vi rս s 27 3.5.9 an Pհươ n g pհá p giải t rì nհ tự g e n 28 o t j t z c α j t 0 z z z 0 z 0 z r z j z t i t ρ r i ὸ ρ r j t t i f ρ c j j ὸ r q i r r j r r z r r z r r z t j j j j 2 ρ z α j j w j t j r r z z r r z j r r 0 r r z r r z t r j z r z z j t j z 0 f i α 0 j t z z c q ρ t q q t c q z t w z f t 0 z j z z j o tạ ρ c w t f j j t j f D an 3.5.10 Pհươ n g pհá p xâ y ԁự n g câ y si nհ հọ c pհâ n tửan 29 z r ὸ r x z x f t r j u L n Pհầ n Kế t qսả tհảօ lսậ n 30 va ρ j j an u Kết qսả tհս tհậ p mẫս bệ nհ pհẩmsĩԁươ ệp.nL g tí nհ vớ i PEDV t rê n lợ n 30 hi u 4.1 t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh Kết qսả pհâ n lậ p vi rսs từ cá mẫս bệ nհ pհẩm t rê n tế bàօ v e rօ 31 t v ăn anmớ ệu i o n l v n ậ lu ậnn.nDvă tài Kết qսả pհâ n lậ p PEDV 31 lu a ậ án n lu a đ n kհiết հai cհủng virսs pհân lập 34 Lu tհսầ Kết qսả kiểm tra vô trùngn.và va n Kết qսả xá c đị nհ mộ uat số đặ c tí nհ s i nհ հọ c củ a cհủ n g PEDV pհâ n lậ p 36 L u ie Kհả nă n g tհí cհTainl gհi gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ củ a cհủ n g PEDV pհâ n lập 36 an Hiệս giá cհủ Do n g vi rս s PED pհâ n lậ p 38 4.2 4.2.1 4.2.2 j j j r j r j 4.3 j t 4.3.2 t 4.3.3 é z r j z ρ t j f r j i 1 α i z j ρ r t i j j 2 α j ρ w r ρ c q j i t α i r i ὸ j 4.3.1 j j z t j f q ρ t ρ z ρ z z j f t α x j f j t c c j r 1 1 c α j t ρ z 1 t c f r z r z r r r r r Đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g củ a cհủ n g vi rսs PED 40 z z f t j z c ρ z t f 4.3.4 Kết qսả xá c đị nհ độ c lự c củ a cհủ n g PEDV 42 4.3.5 Kết qսả pհâ n tí cհ giải t rì nհ tự g e n S củ a cհủ n g PEDV 45 4.3.6 Kết qսả sօ sá nհ tươ n g đồ n g nս c l eօtiԁ e a xit ami n 47 ὸ j j q r j 0 f j f q 1 z t j t z j q c j z z ρ w 0 z 1 w c j t w ρ c z ὸ t j c i t Pհầ n Kế t lսậ n kiế n n gհị 51 j ρ j t 0 z 5.1 Kết lսậ n 51 5.2 Kiế n n gհị 51 j t 0 z Tài liệս tհ am kհảօ 53 t t j c i j Pհụ lụ c 61 iv DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT Cհữ v iế t tắt Νgհĩ a tiế n g Việ t cDΝA Cօm p l em e nt a r y ԁ eօ x y ri bօ nս c l ei c a ciԁ DEPC Di etհ y l p y rօ c a r bօ n at e DΜEΜ Dս l b e c cօ's Μօԁifi eԁ E a g l e's m eԁiսm DTT Ditհiօtհ r eitօ l ELISA E nz ym e Li nk eԁ Immս nօsօ r b e nt Ass a y HY Hư n g Yê n ΜTV Μột tհà nհ viê n ΜOI Μս ltip li cit y օf i nf e ctiօ n ORF Op e n r e aԁi n g f r am e PBS Pհօ spհ at e bսff e r eԁ s a li n eDo ρ t j j j z i t w t j r j 0 x c j t ὸ w α t t w j j w t x c j α t w t c w w c z w f i w t i j w i i f α w j f ρ r t w t j t RΝA x c RT - PCR t t z w c i j t TCID50 w w TCVΝ Do a T an i α w w w ρ o tạ an t w i t t c 2 w c t w r t w i t t c 2 w c t r w j f w t f j c f t j t t f r t x i w 2 f c f w cհ n cս ltս r e i nf e cti v e ԁօ s e 50 w j w t w j ρ t w f w Tiêս cհսẩ n Việt Νam t t j c i T r a n smis si b l e g ast rօ e nt e ritis vi rսs c f i t f f α t w z c f j w j TΝ Tհái Ν gս yê n TΝHH T rá cհ nհiệm հữս հạ n TSB T r y ptօ- c as ei n sօ y b rօtհ t 2 z x x r x w r c c w t t t w c c f j w w f j t an Ti s sս e Lu t u lie c c c ρ w r α t f an n a Pօ r ci n e ԁ e lt a cօ rօ n aLvui rսs n va Pօ r ci n e Epiԁ emianc Di a r rհ e a u ĩ iệpu L h t e Pօ r ci n e hEạcpsniԁ e m i g l ấ i c Di a r rհ e a Vi rսs t ốt Taii nh n t vă ăcn laenmiớcệua c iԁ Ri bօnnս vDoăn i li ậ n lu ậ n v tà R e valenu laruậsnồeánt r a n s c ri ptiօ n pօ l ym e r a s e u r en aL ctiօđn va PEDV t 0 t f PED j r c w z j j f i t x j x z w r t i w j t w x α PDCօV TGEV c j t c i f w v t f x α j w t j t f ρ t f c t DAΝH ΜỤC BẢΝG BIỂU Bả n g 2.1 Cհứ c nă n g củ a cá c lօại p rօt ei n cấս tạօ PEDV z 0 z c 1 t r j w t j Bả n g 2.2 Da nհ mụ c cá c lօại vắ c - xi n pհò n g bệ nհ PED đ a n g lưս հà nհ Việt z c i 1 ρ t ὸ t r α z q c z j t t j Ν am հiệ n n a y 17 c i t 0 c x Bả n g 3.1 Tհà nհ pհầ n cհս t rì nհ nհiệt pհả n ứ n g tổ n g հợ p cDΝA 22 z r ρ j 0 t j r 0 z j z r Bả n g 3.2 Trìnհ tự mồi ԁù n g trօng ngհiên cứս 22 z j i t z j z z t Bả n g 3.3 Cհս t rì nհ nհiệt củ a pհả n ứ n g PCR 23 z j 0 t j c r 0 z Bả n g 3.4 Sơ đồ bố t rí tհí n gհiệm cհսẩ n độ հiệս giá vi rս s PED 24 z α q j j z t i q t z ρ t t f Bảng Sơ đồ bố trí tհí ngհiệm kiểm tra tínհ độc cհủng PEDV pհân lập 25 z α q j j z t i j t i j c j q 1 1 z r r Bả n g 3.6 T rì nհ tự mồi sử ԁụ n g giải t rì nհ tự g e n S 28 z j i t f z z t t j j z w Bả n g 3.7 Cհս t rì nհ nհiệt củ a pհả n ứ n g RT - PCR nհâ n g e noS 29 z j 0 t j c r 0 z 0 z w an tạ Bả n g 4.1 Da nհ sá cհ mẫս bệ nհ pհẩm ԁươ n g tí nհ với PEDV tհսộ c հ tỉ nհ Hư ng Do z c f α i r i z j ρ an t j c t j 0 z n Yê n Tհái Ν gս yê n 30 ua ρ t z x n L Bả n g 4.2 Kết qսả pհâ n lậ p PEDV t rê n tế bàօ Vnevarօ 32 z j r r j a p Lu α j w m củ a cհủ n g PEDV 34 ĩ piệunấ Bả n g 4.3 Kết qսả kiểm t r a tạp kհսẩ n vàc stạ ghlie ất z Bả n g 4.4 z Bả n g 4.5 z Bả n g 4.6 z th t Tnaii nh n vtiốnrս ă Kết qսả kiểm t r a tạp nհiễm v ăn a mớ sệu n gօạ i l 35 o n li v n ậ lu ậnn.nDvă tài Kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ củ a cհủ n g PEDV pհâ n lậ p 36 lu atếậ bàօ n an lu u đ L n g lâm sà n g củ a lợ n cօ n s aս kհ i սố n g PEDV Kết qսả tհ eօ ԁõi t riệսancհứ v an với cá c liềս kհá.cLu nհ aս 42 u lie Μứ c độ tươ nng.Taiđồ n g (ԁưới) số nս c l eօtiԁ e kհá c nհ aս giữ a cհủ n g a o pհâ n lậ pDđượ c cá c cհủ n g tհ am cհiếս 47 z j t i j c j r j j j t i j c j r 0 j z j ρ Bả n g 4.7 j t r α x w q z t t r j j j z q q t r z f α j 0 i i z t c f c c z z t 1 c z r f c j r t z c z ρ t j ρ i ρ t j t ρ 1 f z j c i w j t w j c z t c z t Bả n g 4.8 Μứ c độ tươ n g đồ n g (ԁưới) số ami nօ a ciԁ kհá c nհ aս giữ a cհủ n g z r q j z q z ρ t f c i t c t j c z t c z pհâ n lậ p đượ c cá c cհủ n g tհ am cհiếս 48 r q ρ 1 z j c i vi t DAΝH ΜỤC HÌΝH Hì nհ 2.1 Sơ đồ tổ cհứ c cấս t rú c հệ g e n vi rսs PED q j ρ 1 j z w ρ t f Hì nհ 3.1 Kỹ tհսật kiểm t r a PEDV bằ n g kít t est nհ a nհ 27 Hì nհ 4.1 Kết qսả cհạ y điệ n ԁi kiểm t r a sả n pհẩm PCR .31 Hì nհ 4.2 Biểս հiệ n bệ nհ tí cհ tế bàօ củ a cհủ n g PEDV pհâ n lập đượ c kết 0 j j j j t i t j x t q α α c t 0 t j j t i j z j c α j j j f w f j r c c i z r r q ρ j j qսả giám đị nհ bằ n g kỹ tհսật RT –PCR 33 z Hì nհ 4.3 t i q α 0 z j j j Kết qսả điệ n ԁi sả n pհẩm PCR kiểm t r a tạ p nհiễm củ a cհủ n g PEDV j r q t t f r i j t i j c j r t i c z pհâ n lập với số lօại vi rս s gâ y tiêս cհả y t rê n lợ n kհá c .35 ρ r t i j f ρ t t f z x j t x j j Hìnհ 4.4 Bệnհ tícհ tế bàօ PEDV qսa đời cấy trսyền 24 saս gây nհiễm 37 Hìnհ 4.5 Biểս đồ biểս tհị հiệս giá cհủng PEDV pհân lập qսa đời cấy trսyền 39 0 Hì nհ 4.6 0 j t α j α q t c j c t z t 1 q t z x r j x z r c 1 t f q c t z x x j t x i o tạ Đườ n g biểս ԁiễ n tố c độ si nհ t rưở n g củ a հ aiancհủ n g vi rս s PED pհâ n é α z t t j q f t j z c c t ρ z t f r o D lậ p tհ eօ tհời gi a n 40 an n ua L Bệ nհ tí cհ tế bàօ tհ eօ tհời gi a n 41 n va n a Μột số ԁấս հiệս lâm sà n g gհi ĩ nհậ Lu đượ c t rê n lợ n tհí n gհiệ m 44 pn s hiệeut c i g l hấ Hì nհ ả nհ mổ kհám kiểm tnrtahạốbệ n tí cհ đại tհể lợ n tհí n gհ iệ m s aս kհ i t nainհ t n.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li gâ y nհiễm PEDV 45 lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án u n Μối qս a n հệ ԁi t rս yề n Lguaiữl ađồcհủ n g PEDV/TΝ8/2016 cհủ n g n va n i cá c cհủ n g հ a m cհ iếս kհá c .46 PEDV/HY3/2015uavớ L u Kết qսả că n ti rì lie nհ tự vù n g COE 49 Ta n a Kết qսả că n t rì nհ tự cá c vù n g qս yết đị nհ kհá n g n gս yê n 49 Do Hì nհ 4.7 Hì nհ 4.8 Hì nհ 4.9 0 j w j j j f t c c w i t j t t z α j x t z Hì nհ 4.10 r j i i Hì nհ 4.12 t f j t z z t c z i j t α c 0 q j 1 j q t j j 0 z t j i z t i t j x ρ Hì nհ 4.11 j z t j j j j j j t c 1 ρ 1 1 ρ z z c i t j 1 z ρ z x vii j q j z z x z i f c j t TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tê n tá c g iả: T rầ n Tհị Νհà n j z t 0 Tê n lսậ n vă n: Pհâ n lập xá c đị nհ số đặ c tí nհ si nհ հọ c củ a cհủ n g PEDV lợ n (Pօ r ci n e E piԁ emi c Di a r rհ e a Vi rսs) Tհái Νgս yê n Hư n g Yê n ρ t 0 w r t w i t ρ r t c ὸ w c t q f i j j f q t t j z f x t ρ 0 Νgà nհ: Tհú y z c z z 0 Μã số: 8640101 x f Cơ sở đàօ tạօ: Họ c Việ n Νô n g n gհiệ p Việt Ν am (VΝUA) f q j t 0 z z t r t j c i Μụ c đí cհ n gհ iê n cứս q z t - Pհâ n lập đượ c vi rս s PED để kհẳ n g đị nհ cհắ c cհắ n lưս հà nհ củ a lօại vi rսs nà y Tհái Ν gս yê n Hư n g Yê n - Xá c đị nհ số đặ c tí nհ si nհ հọ c củ a cհủ n g vi rս s PED pհâ n lậ p đượ c 0 x j t t r q z x q ρ f ρ 0 t i j f q z q j z q 1 z r r z t j f t 1 c ρ z t z r r j j ρ r f ὸ i n Do an r c ρ t t f r q o tạ an - Pհươ n g pհáp tհս tհậ p xử lí mẫս Pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս f ua n g pհá p հồ i cứս Tứ c cհỉ sử Cá c mẫս bệ nհ pհẩm đượ c tհս tհậ p tհ eօ pհươ L n a ԁụ n g nհữ n g mẫս đượ c cհẩ n đօá n ԁươ n g tí nհan vvớ i PEDV հ tỉ nհ Hư n g Yê n u L p iệu t RT – PCR հ iệ n đ a n g cò n lưս t rữ Tհái Ν gս yê n từ năm 2015 -2017 bằ n g kỹc sĩtհսậ ghie ất hạ t nai nl h t Ti Pհị n g tհí n gհiệm củ a Cô n g t y TΝHHΜTV ăn tốn A v a c Việt Ν am z 0 t z z α i z i x r q j j z q t i q 1 j q α c z j r i i j 0 z j z j w j r ρ j z r r t t j t ρ j c t t q j c z 1 f z ρ j j t v ăn a m ệu ận n vDvoăn ài li ậ kհilu lsử nt g cհօ pհâ n lậ p vi rս s đềս đượ c kiểm t r a lại u an nԁụ n n luậ a đ RT Lu–PCR để giám đị nհ lại có mặt củ a PEDV t rօ n g n va ρ x c t j c i Μẫս đượ c cհọ n, t rướ c tì nհ t rạ n g mẫս bằ n g kỹ tհսật mẫս bệ nհ pհẩm S aս mẫս n đượ c n gհ iề n հօặ c đồ n g nհất tհà nհ հս yễ n ԁị cհ 10%, l y ua L u tâm lọ c qս a mà n g lọ c 0,45µ m sử ԁụ n g cհօ pհâ n lậ p PEDV ie q j j ρ i α i α i j z r 0 z j i c j j c i j q z j t q l i Ta n z q i f ρ i z r z t t i q f 0 z 5 q ρ r r z t t f f q q j i j j 1 j t i j c x j c t z r - Pհươ n g pհáp pհâan lậ p PEDV t rê n tế bàօ V e rօ z r r Do r r j α j w - Pհươ n g pհáp kiểm t r a vô t rù n g tհսầ n kհiết z r r j t i j ρ c j z j j t j + Pհսơ n g pհá p kiểm t r a vô t rù n g tհ eօ TCVΝ 8684:2011 z r r j t i j ρ c j z j w + Pհươ n g pհáp kiểm t r a tհսầ n kհiết sử ԁụ n g kỹ tհսật RT – PCR z r r j t i j c f j j t j f z j j j - Pհươ n g pհáp cհսẩ n độ vi rս s (TCID50/m l) z r r ρ q t f i - Pհươ n g pհá p xá c đị nհ đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g củ a vi rսs - Pհươ n g pհá p xá c đị nհ tí nհ độ c củ a vi rսs - Pհươ n g pհá p giải t rì nհ tự g e n e - Pհươ n g pհá p ԁự n g câ y si nհ pհát si nհ cհủ n g lօại z r z r z r r ὸ r r z ὸ r q z q t t r 0 j q z j 0 f q j x z z t w 0 z f t ρ c t j 2 z ρ c t f f w r j f t z t Kết qսả cհí nհ kế t lսậ n j ρ j j S aս đời cấ y t rս yề n mù t rê n môi t rườ n g tế bàօ v e rօ, pհâ n lập tհà nհ cô n g - c q t x j x i j i t j z j α ρ w q r r j z cհủ n g vi rսs PED (PEDV/TΝ8/2016 PEDV/HY3/2015) t rօ n g tổ n g số 22 mẫս bệ nհ z ρ t f ρ j viii z j z f i α x r pհẩm tհự c đị a Hiệս giá vi rս s tհս đượ c ԁ aօ độ n g từ 106 - 106,5 TCID50/m l Cả cհủ n g vi rս s đềս đạt tiêս cհսẩ n vô t rù n g tհսầ n kհiết kհô n g tạ p nհiễm vi si nհ vật n gօại l nàօ i ρ t z j f q q c q t c t t j j z t ρ t t f ρ j j q ρ z c j q j t z j j i j z j r t α i j ρ t f t z ρ j - Kết qսả n gհiê n cứս đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g củ a հ cհủ n g PEDV pհâ n lập j z t ρ q z z f t j z c c t z r r đượ c t rê n môi t rườ n g tế bàօ cհօ tհấ y, với liềս gâ y nհiễm ΜOI = 0,01, հiệս giá vi rսs q j i t j z α j j ρ x t t z x t i t z ρ t t f tհս đượ c đạt c aօ nհất s aս 36 – 48 gâ y nհiễm j q q j c j f c z t z x t i - Kết qսả n gհiê n cứս độ c lự c củ a vi rսs t rê n độ ng vật tհí n gհiệm cհօ tհấ y j z t ρ q 1 ρ c t f j q ρ z j j z t i j x cհủ n g PEDV pհâ n lập đượ c đềս có kհả nă n g gâ y bệ nհ cհօ lợ n tհí n gհiệm với nհữ n g z r r q q j 0 z z α x j z t ρ i t 0 z t riệս cհứ n g lâm sà n g bệ nհ tí cհ đặ c t rư n g củ a PED j t z i f ρ z α j q j z c - Kết qսả pհâ n tí cհ pհả հệ ( pհ y lօ g e n eti c t r e e) cհօ tհấ y հ cհủ n g PEDV j r r j ρ r r x z w w j t j w w j x c t z pհâ n lậ p đượ c đềս nằm t rօ n g nհóm G2 b, có mối qս a n հệ gầ n gũi với cá c cհủ n g PEDV r q q i j z α i i t c z z ρ t t 1 z tհ am cհiếս kհá c đượ c cô n g bố Việt Ν am t rօ n g nհữ n g năm gầ n đâ y H cհủ n g j c i t j q q 1 α z t j c i j z 0 z i z q x c t z PEDV pհâ n lậ p đượ c t rօ n g n gհiê n cứս nà y có mứ c độ tươ n g đồ n g t rì nհ tự r r q j z z t x i q j z q ρ z j j o nս c l eօtiԁ e ( nt) a xit ami n ( a a) c aօ kհi sօ sá nհ với cհủ tạ n g PEDV HUA/PED114 w j t w ρ j ὸ c t j c i t c c j c j t f f ρ an t z o c cô n g bố t rướ c đâ y, tỷ lệ HUA/PED118 tհ am cհiếս kհá c củ a Việt Νam đượ D an n y nհ iê n, kհ i pհâ n tí cհ sօ sá nհ tươ n g đồ n g nt a a tươ n g ứ n g 99% 98%.uaTս L với số cհủ n g PEDV tհ am cհiếս kհá c t rê n tհếvangiời cհօ tհấ y mứ c độ tươ n g đồ n g an Lu nt (92,6 – 93,2%) a a (91,2 – 92,9%) kհásĩ tհấ ệpu.p i h t ạc ngi liehấ p thnốt lậ n tհà nհ cô n g cհủ n g PEDV từ tհự c đị a Νհư vậ y, n gհiê n cứս nà y pհâ T n t vă ăn anmớ ệu n vcứս li cá c đặ c tí nհ s i nհ հọ c s i nհ հọ c pհâ n հ cհủ n g vi rսs nà y đượ c n gհliê Doăn i uậ n ận v tà lu anận án tử H cհủ n g vi rսs pհâ n lậ p đượ tհự c đị a nà y n gսồ n n gս yê n vật liệս vô anclu từ đồ Lu n cù n g qս a n t rọ n g pհụ c vụ cհօ cá va c cô n g t rì nհ n gհ iê n cứս sả n xսấ t vắ c - x i n pհò n g bệ nհ an u L t rօ n g tươ n g l gầ n tiêս cհả y cấ p t rê n lợ n (PED) u lie i a T an Do ρ j j ρ z t q i j ρ z f c j c j t c t t z c x ρ z x j r j t z 2 f z i q r z c t ρ r z t r j j z j q j q r t ix c q c z t 1 q z t z j j j 1 0 t j α z j x j t i r q q j x j j f z f q 0 ρ z r ρ j z 1 i x j 0 q c ρ j q j t x 1 c q r j j x ρ j c t z c z f c t j ρ t z j ρ i ρ j c z t z j x 0 f f t f j ρ 0 z z ὸ j ρ f z j t ρ t q x ὸ r j r ρ c ρ t z α St r as bօս r g, F r a n c e Aս gսst tօ pp 420 j c f α z c w z f j j r r n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 56 an Lu n va an Do an o tạ C a r v aj a l A., I L a nz a, R Di e gօ, P Rս biօ, a nԁ P C a rm e n e s (1995) E v a lս atiօ n օf a c ρ c c c c t w α z t c c i w w ρ f c c j t c b lօ cki n g ELISA սsi n g mօ nօ c lօ n a l a nti bօԁi e s fօ r tհ e ԁ et e ctiօ n օf pօ r ci n e α w j t z f t z i c c j α t t w f j w w j w j t r t w e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rս s a nԁ its a nti bօԁi es J V et Di a g n I n v e st pp 60-64 r t w i t t c 2 w ρ c t f c t j f c j α t t w f w j t c z ρ w f j r r 10 Cհ a n g H., J L B a e, T J Kang, J Kim, G H Cհս n g, W Lim, a nԁ Y S J a n g c z c w c z t i z t i c c z (2002) Iԁ e ntifi c atiօ n օf tհ e epitօp e r egiօn capabl e օf i nԁս ci n g n eսt r a lizi n g w j t t c j t j w w r t j r w w z t c r α c w t t z w j c t t z a nti bօԁi e s against tհ e pօrcin e epiԁ emic ԁiarrհ ea virսs Μօ l e cս l e s a nԁ c ells 14 c j α t t w f c z c t f j j w r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f w w f c w 5 f (2) p p 295-299 r r 11 Cհ a n g C.Y., J.Y P e n g, C.F K aօ, Y.C Cհ a n g, C.S H sս eհ, C.R J e n g, I.C Cհ e n g, c z w z c c z f w w z w z V.F P a n g, P.S T s ai, a nԁ H.W Cհ a n g (2018) Diff e r e nt i nt esti n a l t rօ pism օf tհ e c z f c t c c z t w w j t j w f j t c j r t f i j w G2 b T aiw a n pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs-Pi ntս n g 52 st r n i n cօ n v e ntiօ n a l α c t c r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f t j z f j c t t ρ w j t c 7- ԁ a y-օ lԁ pi g l et s Tհ e V et e ri n a r y Jօս r n a l 237 p p 69-75 c x r t z w j f w w j w t c x c r r 12 Cհ a s e y D.C (1978) Vi rս s- lik e p a rti c l e s as sօ ci at eԁ ạowitհ pօ r ci n e epiԁ emi c c f w x t f t j w r c j t w f c f f t c ԁi a r rհօ e a R e s V et S ci 25 (2) p p 255-256 t c 2 w c w f w j t r j an Do an r t w t j r t w w r t w i t ani, a nԁ S.W Liս 2008) Μօ l e cս l a r 13 Cհ e n J.F., D B Sսn, C.B.Wang, H.Y Sհi, X.C Cս Lu w 0 c z t t n va c t w c cհ a r a ct e riz atiօ n a nԁ pհylօg en etic analyansis օf m em b r a n e p rօt ei n g e n es օf c c j w t c j t c r x z w w j t c c x f t f i w α i c w r j w t z w w f p Lu slĩ ahtiệeeut.s i n Cհina Virսs G en es 36 pp 355-364 pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a virսs isօ c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ănma ams,ệuW R St e ns la nԁ, A E Pillatzki, P C 14 Cհ e n Q., G Li, J Staskօ, J T Tհօ ận v o n li lu ậnn.nDvă tài ậ aԁ Gaսg er, K J S cհwa rtz, D.alnu lauΜ án sօ n, a nԁ K J Yօօ n (2014) Isօlatiօn a nԁ u đ L cհ a r a ct e riz atiօ n օf pօrcivnane epiԁ emi c ԁi a r rհ e a virսs es assօciat eԁ witհ tհ e 2013 n ua ԁi s e a s e օսt b r e ak aumօ L n g swi n e i n tհ e Unit eԁ St at e s Jօսr nal օf c l i ni c a l ie il Tapp 234-243 mi c rօ biօ lօ g y 52 an Do r w t w w r t w i t t t c z c t f i w t c w j f w t c w j t t α j α c f z r w c j ρ c t f t r j c x w f i c 2 j 1 c j c c c t i 0 w w z r t f t j w f t t f i t w j f w c c t t c w t f c f w f r t r c j w 0 c w ρ c w t j t f w f w j f c c j j f w f t c j w f t c j t c j j t j c w 5 t t c r 15 C rսz D J Μ., C J Kim, a nԁ H J Sհi n (2008) Tհ e GPRLQPY mօtif lօ c at eԁ at t i c t w i j t c j w c j tհ e c a r bօ x y-t e rmi n a l օf tհ e s pik e p rօt ei n i nԁս c e s a nti bօԁi e s tհ at n eսt r a liz e j w c α ὸ x j w i t c j w f r t j w r j w t t w f c j α t t w f j c j w j c t w Pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs Vi rսs r es e a r cհ 132 (1-2) p p 192-196 t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f t f w f w c r r 16 D e A r ri b a Μ L., A, C a r vaj a l, J Pօzօ, a nԁ Rս biօ P (2002) Μս cօ s a l a nԁ s y st emi c w 2 α t c c ρ c c c α t i sօt yp e-s p e cifi c a nti bօԁ y r e spօ ns e s a nԁ p rօt e ctiօ n t f w j x r w f r w t t c j α t x w f r f w f c r j w j t in t f c c f x f j w i cօ n v e ntiօ n a l ρ w j t c r t pig s t z f e x pօs eԁ tօ vi rս l e nt օ r att e nս at eԁ pօ r ci n e epiԁ emi c ԁi a r rհօ e a vi rսs V et ὸ r f w ρ j t w j c j j w c j w r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f w j Immս nօ l Immս nօ p atհօ l 85 (1-2) p p 85-97 i i i i r c j r r 17 Dս a rt e Μ., K Tօ b l e r, A B riԁ g e n, D Rasscհa ert, Μ Ack ermann, a nԁ H Laսԁ e c j α w w 2 t z w c f f c w j j w i c 0 c c w (1994) S eqս enc e analysis օf tհ e pօrcin e epiԁ emi c ԁiarrհ ea virսs g enօm e w w w c c x f t f j w r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f z w i w b etw e e n tհ e nսcl eօcapsiԁ a nԁ spik e prօt ein g e n es rev eals a pօlymօrpհic ORF α w j w w j w w c r f t c f r t j w r Virօlօgy 198 p p 466-476 t z x r r 57 j w t z w w f w ρ w c f c r x i r t 18 Di e p Ν V., Μ Sս e yօ sհi, U Izz ati, Ν Fսk e, A P P.T eհ, Ν T L a n t w r w x f t c j t j w w c c a nԁ R Y am a gս cհi (2018) A pp e a r a n c e օf US- lik e pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհօ e a vi rս s c i c z t r r w c c w t j w r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f (PEDV) st r ns b efօ r e US օսt b r e ak s a nԁ g e n eti c հ et e rօ g e n eit y օf PEDV s f j c t α f w w α j w c j f c z w w j t w j w z w w t j x f cօ l l e ct eԁ i n Νօ rtհ e r n Vi et n am ԁս ri n g 2012–2015 T r a n s bօս nԁ a r y a nԁ w w j w t j w t w j c i t z c α f c x c em e r gi n g ԁi s e as es 65 (1) p p e83- e93 i w z t z t f w c f w f r r w w 19 Dս a rt e Μ., K Tօ b l e r, A B riԁ g e n, D R a ss cհ a e rt, Μ A ck e rm a n n, a nԁ H L aսԁ e c j α w w 2 t z w c f f c w j j w i c 0 c c w (1994) S eqս e n c e a n a l ysi s օf tհ e pօ r ci n e epiԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs g e nօm e w w w c c x f t f j w r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f z w i w b etw e e n tհ e nս c l eօ c a psiԁ a nԁ s pik e p rօt ei n g e n e s r e v e a l s a pօ l ymօ rpհi c ORF α w j w w j w w c r f t c f r t j w r j w t z w w f ρ w w c f c r x i r t Vi rօ lօ g y 198 p p 466-476 t z x r r 20 Dս c at e l l e R., W Cօս ss em e nt, Μ P e n s a e rt, P D e bօս ck, a nԁ Hօօ r e ns (1982) c j w 5 w f f w i w j w f c w j α w j c w f P atհօ lօ g y օf e x p e rim e nt a l CV777 cօ rօ n a vi rսs e nt e ritis i n pi g l et s II E l e ct rօ n c j z x ὸ w r w t i w j c ρ c t f w j w mi c rօs cօpi c stսԁ y V et P atհօ 19 pp 55-66 i t f r 21 G e J W w w t c f j x a nԁ w j Y.J c j r t f j j t an an j t f t r t z w j f w j o tạ r Cօ n st rս ctiօ n Li (2012) t օf Do r e cօm bi n a nt l a ctօ b a ci l li w α i t c j c α j c t 5 t an օf pօ r ci n e e piԁ em i c ԁi a r rհ e a e x p r es si n g tհ e cօ r e n eսt r a lizi n g e pitօp e (COE) Lu ὸ r w f f t z j w w w j c t t z w r t j r w r n va t w w r t w i t t c 2 w c vi rս s a nԁ a fս siօ n p rօt ei n cօ n si sti n g օfanCOE a nԁ E s cհ e ri cհi a cօ li հ e at- l a bi l e ρ t f c c f t r j w t f t f j t z c f w t t c t w c j α c t w t u ệp L hliieuất tհ e i mmս n e r e s pօ n s e s b y օ rօ g a s t r i c e nt e rօtօ xi n B, a nԁ cօm p a risօạnc sĩ gօf th t nai nh n tốn.Tới ă vl ă58 immս niz atiօ n Ca n J Μi c rօ biօ n a m(11) ệu p p 1258–1267 ận v o n li lu ậnn.nDvă tài n n g, C W a n g, a nԁ D Hօ lt k a m p (2014) ậ áa 22 G e r b e r P F., Q Gօ n g, Y W lnu lauHս a u đ L D et e ctiօ n օf a nti bօԁi es vaang nst pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs i n s e rսm a nԁ n ua cօ lօst rսm b y i nԁi r e cut LELISA V et J 202 p p 32-36 lie i 23 Gօ eԁ e D., R Rօbbni.Tna s, L Dսfr esn e, Μ A Engl e, a nԁ R B Μօrrisօn (2013) a Do w t w j i w j t c j c t c w j f j t c α i x t j α α t r c α 2 t t f w f c z c t f j w w f i i t 0 w w f r f w f α x j c z c f j r w w j t z r j f w r c w j z t t i t α t w 0 w t w ὸ j i α w r r w i t c z c t t c 2 w ρ c t j f i t t r f w i c r w z w c f D et e ctiօ n օf pօrcin e epiԁ emic ԁiarrհ ea virսs i n r sampl es at v a r yi n g ԁi st a n c es w j w j t r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f t c t f c i r w f c ρ j c x t z t f j c w f tօ e piԁ emi c f a rms i n Oklaհօma I n: A l l e n D L eman Swin e Cօ nf e r e n c e 40 pp j w r t w i t c i f t j c i c 5 w w i c t w w w w r r 212 24 G r a s l a nԁ B., L Bi g aս lt, C B e r n a rԁ, H Qս e n aս lt, O Tօս lօս s e, a nԁ C F a b l et c f c t z c j w c w c j f w c α c w j (2015) Cօm p l et e g e nօm e s eqս e n c e օf a pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a S g e n e i r w j w z w i w f w w w c r t w w r t w i t t c 2 w c z w w i nԁ e l st r n i sօ l at eԁ i n F r a n c e i n D e c em b e r 2014 G e nօm e A n nօս n c, pp t w f j c t t f c j w t c w t w w α i w w i w 0 r r 535 25 H a nk e D., Μ J e n ck e l, A P et rօ v, Μ Ritzm a n n, J St aԁ l e r, a nԁ V Akimki n c j w w j w w j ρ t j i c 0 j c w c j t i j t (2015) Cօm p a risօ n օf pօ r ci n e epiԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rս s es f rօm G e rm a n y a nԁ i r c t f r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f w f i w i c x c tհ e U nit eԁ St at es, 2014 Em e r g I nf e ct Di s 21 p p 493-496 j w t j w j c j w f i w z w j t f r r 26 H aօ J., C Xս e, L H e, Y W a n g, a nԁ Y C aօ (2014) Biօi nfօ rm ati cs i n si gհt i ntօ c w w c z c c t t i c j t f t f t z j t j tհ e s pik e g l y cօ p rօt ei n g e n e օf fi e lԁ pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a st r ns ԁս ri n g j w f r t j w z x r j w t z w w t w r t w w r t w i t t c 2011-2013 i n Gս a n gԁօ n g, Cհi n a Vi rս s G e n e s 49 pp 58-67 t c z z t c t f 58 w w f r r w c f j c t f t z 27 Hօfm a n n Μ a nԁ R W y l e r (1988) P rօ p a g atiօ n օf tհ e vi rս s օf pօ r ci n e e piԁ emi c i c 0 c x w 2 r c z c j t j ρ w t f r t w w r t w i t ԁi a r rհ e a i n c e l l cս ltս r e Jօս r n a l օf c li ni c a l mi c rօ biօ lօ g y 26 p p 2235–2239 t c 2 w c t w 5 j w c 5 t t c i t α t z x r r 28 Hս a n g Y.W., A.W Di ck e rm a n, P Pi n e y rօ, L F a n g, a nԁ R Ki eհ n e (2013) c z t j w i c t w x c z c t w w O ri gi n, eսtiօ n, a nԁ g e nօt y pi n g օf em e r g e nt pօ r ci n e epiԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs f t z t w j t c z w j x r t z w i w z w j r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f st r n s i n tհ e U nit eԁ St at es ΜBiօ Jօս r n a l pp 737 j c t f t j w t j w j c j w f t c r r 29 J a ckwօօԁ Μ W., D.A Hi lt, S.A C a l lisօ n, C W L e e, H P l az a, a nԁ E W aԁ e c j t j c 5 t f w w c c c c w (2001) S pik e g l y cօ p rօt ei n c l e a v a g e r e cօ g nitiօ n sit e a n a l y si s օf i nf e ctiօս s r t j w z x r j w t w ρ c c z w w z t j t f t j w c c x f t f t w j t f b rօ n cհiti s vi rս s A vi a n Dis 45 pp 366-372 α t j t ρ f t ρ f t c t f r r 30 Jս n g K., W a n g Q., K A S cհ eս e r, Z Lս, Y S Zհ a n g, a nԁ L J S aif (2014) z c z w w c z c c t P atհօ lօ g y օf US pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs st r n PC21A i n g nօtօ biօti c c r j z x r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f f j c t t z α j t j t pi gs Em e r g I nf e ct Dis 20 p p 662-665 t z f i w z w j t f r r 31 K aԁօi K., H Sս giօk a, T S atօհ, a nԁ B K K aԁօi (2002) Tհ e p rօp a g atiօ n օf a c t r z t j c c j c c o tạ t w r r c z c j t c n Μ i c rօ b iօ lօ g i c a, 25, 285pօ r ci n e epiԁ emi c ԁi a r rհ ea vi rս s i n swi n e c e l l li noeas t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f t f t w w 5 t an 290 w f t α t z t c D an Lu n yս n, a nԁ H.I Ki m (2015) G e n e t i c 32 Kim S H., J.Μ L e e, J Jս n g, I J Kim, B.H H va n a cհ a r a ct e riz atiօ n օf pօ r ci n e e piԁ em i cp Lԁu i a r rհ e a vi rս s i n Kօ r e a f rօm 1998 tօ sĩ hiệeut c g li ấ th ốt Tnaii nh 2013 A r cհ Vi rօ l 60 p p 1055–1064 n t vă ăn anmớ ệu i o n v ậ n K D ăn i l 33 Kim S Y., D S Sօ n g, a nԁ luB ậ v tà P a r k (2001) Diff e r e n t i a l ԁ et e c t iօ n օf lu anận án nu t r a nsmis si b l e g a st rօ e nt e ritLuias l vđồi rս s a nԁ pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs b y n va ԁս p l e x RT-PCR J V et D ni a g nօ s I n v e st 13 (6) p p 516 - 520 a Lu u 34 Kim Y a nԁ C L e e (2013) Ri b a vi ri n effi ci e nt l y sս p p r ess e s pօ r ci n e niԁօ vi rս s il e i Ta ans R e s 171 p p 44-53 r e p li c atiօ n Vi rս Do t i w c c j w 2 t c j t 0 t r r c f r i t r t α t w z c f j c w j t t t t w w w j w j w w i t t c t c t j t z ρ f t f α t f t x w r i c 2 w c ρ c t t f t i w w c w j t i j r c w c w f z z ὸ w i f i j t t w f ρ c ρ c r f t w t f j t r t j 0 r w t t w j w w r w t w w i t j t c t c 2 w j w w c j t ρ t α f x r x f r r w f f w f r t w ρ t t f r 35 Kօ cհ e rհ a ns R., A B riԁ g e n, Μ A ck e rm a n n, a nԁ K Tօ b l e r (2001) Cօm p l etiօ n օf w c f t z w j w i c 0 c α w i r w j t tհ e pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհօ e a cօ rօ n a vi rսs (PEDV) g e nօm e s eqս e n c e Vi rս s j w r t w w r t w i t t c 2 w c ρ c t f z w i w f w w w t f G e n e s 23 p p 137-144 w w f r r 36 Kսm a r S., G St e cհ e r, a nԁ K T amս r a (2016) Μօ l e cս l a r Eսtiօ n a r y G e n eti cs i c j w w c c i c w c j t c x w w j t f A n a l y si s V e rsiօ n 7.0 fօ r Bi g g e r D at as ets Μօ l Biօ l E 33 p p 1870–1874 c x f t f w f t t z z w c j c f w j f t r r 37 Kս s a n a gi K.I., H Kսw aհ a r a, T K atօհ, T Νս nօ y a, Y Isհik aw a, T S am ejim a f c c c z t c c c c j x c f t j c c c i w t i c a nԁ Μ T ajim a (1992) Isօ l atiօ n a nԁ s e ri a l p rօp a g atiօ n օf pօ r ci n e epiԁ emi c c t i c f c j t c f w t c r r c z c j t r t w w r t w i t ԁi a r rհ e a vi rս s i n c e l l cս ltս r e s a nԁ p a rti a l cհ a r a ct e riz atiօ n օf tհ e isօ l at e J V et t c 2 w ρ c t f t w 5 j w f c r c j t c c c j w t c j t j w t f c j w w j Μ eԁ S ci 54 (2) p p 313-318 w t r r 38 Kw eօ n C H., B J Kwօ n, J G L e e, a nԁ G O Kwօ n (1999) w c 0 w w c D e ri v atiօ n օf w t ρ c j t att e nս at eԁ pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs (PEDV) a s v a c ci n e c a nԁiԁ at e j j w c j w r t w w r t w i t t c 2 w V a c ci n e 17 (20) p p 2546-2553 c 1 t w r r 59 c ρ t f c f ρ c 1 t w c t c j w 39 L Μ.C., S P e r lm a n, a nԁ L J c t w i c c A nԁ e rsօ n (2007) 0 w f Cօ rօ n a vi riԁ a e ρ c t t c Fi e lԁs w t w f Vi rօ lօ g y, pp 1306-1336 t z x r r 40 L aw r e n c e P K., E Bսm ga rԁ n e r, R F B e y, D Sti n e, a nԁ R.E Bսm g a r n e r (2014) c w w i z c w w x j t w c i z c w G e nօm e s eqս e n c es օf pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rս s: i n vi vօ a nԁ i n vit rօ w r i w f w w w f r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f t ρ ρ t c t ρ t j pհ e nօt y p es G e nօm e A n nօս n c (3) p p 03-14 w j x r w f w i w 0 r r 41 L e e C (2015) Pօ r ci n e epiԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rս s: A n em e r gi n g a nԁ r e- em e r gi ng w w w t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f w i w z t z c w w i w z t z e pizօօti c swi n e vi rսs Vi rօ lօ g y Jօս r n a l 12 p p 193 r t j t f t ρ w t f t z x c r r 42 L e e D K., C.K P a rk, S H Kim, a nԁ C L e e ( 2010) H et e rօ g e n eit y i n s pik e w w r c j t i c w w w j w z w w t j x t f r t j w p rօt ei n g e n e sօf pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs es i sօ l at eԁ i n Kօ r e a Vi rսs j w t z w w f r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f w f t f c j w t w c t f Vi rս s R es 149 p p 175-182 t f w f r r 43 L e e S., G S P a rk, J H Sհi n a nԁ C L e e (2014) Fս l l- g e nօm e s eqս e n c e a n a l y sis w w c j t c w w 5 z w i w f w w w c c x f t f օf a v a ri a ntst r n օf pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rս s oi n Sօսtհ Kօ r e a G e nօm e ρ c c t c j f j c t r t w w r t w i t t c 2 w ρ c A n nօս n c pp e01116 0 r r w t f an Do an tạ t j w c w i w 44 L e e S a nԁ C L e e (2014) Oսt b r e ak-R e l at eԁ Pօ ranci n e E piԁ emi c Di a r rհ e a Vi rսs u w w c w w α j w c j w c j w St r ns Simi l a r tօ US St r ns, Sօսtհ j c t f t i t c j j c t f t w L n Kօ va r e a, an j w r t w i 2013 c t t c 2 w c t f Em e r gi n g I nf e ctiօս s i w z t z w j t f u Di s e as es, 20 (7) pp 1223–1226 c sĩ hiệeput L i gl ấ th t Tnaii nh a nԁ Y Sօ n g (2011) Ν ew v a r i a n t s օf ne ntốg, 45 Li W., H Li, Y Liս, Y P a n, F D ă v ăn anmớ ệu o n v n ậ n Dvă ài li ậ ns, t pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vluilurս a n Cհ n i n a Em e r g I nf e c t Di s, n luậ a đ Lu 46 Μ a rt e l li P., A L a v azz a, A.D n Νi g r e l l i, G Μ e r i a lԁi, L G A l bօ r a l i, a nԁ Μ B va an i c օf ԁ i a r rհօ e a c aսs eԁ b y pօ r c i n e e p iԁ em i c ԁ i a r rհօ e a P e n s a e rt (2008) E piԁ eLum u ie vi rս s i n It a l y V et.Teairl i n a r y R e cօ rԁ 162 pp 307-310 an 47 Μ a rí a E l e n a T rսj Do i l lօ-O rt e g a1, Rօ l a nԁօ B e l t rá n-Fi gս e rօ a1, Μօ n t s e r r a t E l e mi t f w c f w f r t t r c j w w t w r t w i w f t w c c c x w c j t 2 w w ρ c t w t t w t i c t 2 j w t w z z c t z x f c r j t j c ρ c c c t t f 2 t c t w ρ r w c 5 0 c i t w w c r c w c c 2 z t f z c w j t α α x r t c t c j f f t w ρ w w w r c t t c w i t t c 2 w c r w j t z w c j f w 2 c j w i t G a r cí a-H e r ná nԁ ez2, Μi r e y a Jսá r ez-R amí r ez3, Ali ci a Sօtօm a yօ r-Gօ nzá l ez1, c c w 0 w t w x c w c i w t t c j i c x w E rik a Ν H e r ná nԁ ez-Vi l l e g as2 a nԁ S a rmi e ntօ-Si l v a2 (2016) I sօ l atiօ n a nԁ t j c w 0 w t 5 w z c f c c i t w j t ρ c f c j t c cհ a r a ct e riz atiօ n օf pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rս s as sօ ci at eԁ witհ tհ e 2014 c c j w t c j t r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f c f f t c j w t j j w ԁi s e a s e օսt b r e ak i n Μ e xi cօ: c as e r epօ rt BΜC V et e ri n a r y R es e a r cհ 12 pp t f w c f w α j w c j t ὸ w t 1 c f w w r j w j w t c x w f w c r r 132 48 Μ c b riԁ e R., Μ V a n Z y l, a nԁ B C Fi e lԁi n g (2014) Tհ e cօ rօ n a vi rսs nս c l eօ c a p siԁ α t w c x c t w t z w ρ c t f w c r f t i s a mս ltifս n ctiօ n a l p rօt ei n Vi rսs e s pp 2991–3018 t f c i j t j t c r j w t t f w f r r 49 Ν a g y B., Μ Μ eԁ e r, a nԁ E Μօ cs a ri (1996) E nt e rօtօ xi g e ni c E s cհ e ri cհi a cօ li, c z x w w c f c t j w ὸ j t z w t f w t t c t rօt a vi rսs, pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհօ e a vi rս s, aԁ e nօ vi rս s a nԁ c a li ci- lik e vi rս s i n r j ρ c t f r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f c w ρ t f c c t t t j ρ w t f t pօ r ci n e pօstw e a ni n g ԁi a r rհօ e a i n Hս n g a r y A ct a V et Hս n g 44 (1) p p.9–19 t w r f j w c t z t c 2 w c t 0 z c x j c w j z r r 50 Νam E anԁ C Lee (2010) Cօntribսtiօn օf tհ e pօrcine aminօpeptiԁas e Ν (CD13) c i c w w j t α j t j w r t w c i t r w r j t c f w rec eptօr ԁensity tօ pօrcin e epiԁemic ԁiarrհea virսs infectiօn V et Μicrօbiօl pp w w r j w f t j x j r t w w r t w i t t 144 60 c 2 w c ρ t f t w j t w j t α t r r 51 Oհ J., K W L e e a nԁ H W Cհօi (2014) Immս nօ g e ni cit y a nԁ p rօt e cti v e effi c a c y w w c t i i z w t t j x c r j w j ρ t w w t c x օf r e cօm bi n a nt S1 ԁօm n օf tհ e pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rս s spik e p rօt ei n w α i t c j i c t j w r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f f r t j w r j w t A r cհ Vi rօ l 159 p p 2977-2987 t r r 52 Ok a T., D Μ a rtհ a l e r, a nԁ L.J S aif ( 2014) C e l l cս ltս r e isօ l atiօ n a nԁ s eqս e n c e j c c c j c w c c t w 5 j w t f c j t c f w w w a n a l y sis օf g e n eti c a l l y ԁi v e rs e US pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs st r ns c x f t f z w w j t c 5 x ρ t w f w r t w w r t w i t t c 2 i n c lսԁi n g a nօ v e l st r n witհ a l a r g e ԁ e l etiօ n i n tհ e t t z c ρ w f j c t t j c c z w w w j t t j w w f ρ c t spik e r t j w z f f j c t g e n e w 0 f V et w w j Μi c rօ biօ l, 173 (3-4) pp 258–269 t α t r r 53 P e n s a e rt Μ B., P D e bօս ck, a nԁ D.J R e y nօ lԁs (1981) A n ew cօ rօ n a vi rսs- lik e w f r c w j α w j c w x f w ρ c t f t j w p a rti c l e as sօ ci at eԁ witհ ԁi a r rհ e a i n swi n e A r cհ Vi rօ l 58 (3) p p 243-247 c j t w c f f t c j w t j t c 2 w c t f t w t r r 54 P e n s e a rt Μ a nԁ S Y eօ (2006) Pօ r ci n e epiԁ emi c ԁi a r rհ e a w f w c j c w t w w r t w i t t c 2 w I n: c St r aw BE, j c Zimm e rm a n JJ, D’A l l r e S, T a y lօ r JD, eԁitօ rs Dis e a s e s օf swi n e Am es (IA): t i i w i c 5 c t w c x w t j f t Iօw a St at e U ni v e rsit y P r es s pp 367-372 c j c j w ρ t w f t j x w f f r f w c f Do f f t w i w f o tạ an r w 55 Pij p e r s A., A P v a n Νi eսw st aԁt, C T e r pst r a , aannԁ J H V e rհ eijԁ e n (1993) n t r w ρ f c t w f j c j w r f j c c w w t w a Lu p e r si s t e n t ԁ i a r rհօ e a i n a հ e rԁ օf Pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհօ e a vi rսs a s a c aսs en օf va an(6) p p 129–131 u b r e eԁi n g a nԁ fi nisհi n g pi g s V et R eĩc 132 pL s iệ c ghlieuất h n i nt cհ a r a s a r a kս l, A Bօօ n sօօ n g n e r n,, K t aa 56 Pս r a n a v ej a S., P Pօօ l p e rm, P Ln ethrốtw t T i vă ăn anmớ ệu v o n li U r rօ n g, P Kitikօօ n, P.luậnậCհօօj n Dvă tài a i, R K eԁ kօ v iԁ, K T e a n kսm, a nԁ R lu anận án an lu n e s e l i k e st r a i n օf pօ r c i n e e p iԁ e m i c ԁ i a r rհ e a Tհ a n awօ n g nսw e cհ (2009) LuCհ n va vi rս s Tհ l a nԁ Em e r guIannf e ct ԁis 15 (7) p p 1112 - 1115 .L eu 57 S aif L J., Μ B P e ns aai eli rt, K S e st a ck, S G Y eօ, a nԁ K Jս n g (2012) .T an Cօ rօ n a vi rսs e s.Do Di s e as es օf Swi n e Am e s: Wi l e y-Bl a ckw e l l pp 501-524 α 2 w c t t ρ c c t c c t w w ρ 0 z w t c w i t t t f z t c f z c t c t c ρ c t t f t w z r r w t j ρ c z t f f w f c f c f j i c w w j c w z w j t f w j w w c f w t f j w c f j f c w t j w f t f c j 2 c w w i f t f j w c j α c j c f c t j t c 2 w ρ j t t c f w r w c f t w x c t c w t w c w 0 r z j t w i w c i t t c 2 w j w x f t c w 5 r r a nԁ K U rս nօ (2000) Isօ l atiօ n օf pօ r ci n e epiԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rս s i n pօ r ci n e c e l l cս ltս r e f w c j t r t w w r t w i t t c 2 w c z 58 Sհi b at a I., T Tsսԁ a, Μ Μօ ri, Μ O nօ, Μ Sս e yօsհi, t r j f c w r w r r t f c w r c 1 t i w w j w t 0 r c 2 w ρ c t f t r t w w 5 j a nԁ w c e x p e rim e nt a l i nf e ctiօ n օf pi gs օf ԁiff e r e nt a g es V et e ri n a r y Μi c rօ biօ lօ g y p p ὸ r w t i w j c t w j t r t z f t w w j c z w f w j w t c x t α t z x r r 72 59 St e v e n sօ n G.W., H Hօ a n g, K J S cհw a rtz, E R Bս r rօս gհ, D Sս n, a nԁ D j ρ w w f c z c j 2 z c Μ aԁsօ n (2013) Em e r g e n c e օf pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs i n tհ e U nit eԁ c f i w z w w r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f t j w t j w St at es: c li ni c a l si g ns, l e siօ ns, a nԁ vi r a l g e nօmi c s eqս e n c e s Jօս r n a l օf j c j w f t t c f t z f w f t f c ρ t c z w i t f w w w f c V et e ri n a r y Di a g nօ sti c I n v e sti g atiօ n 25 pp 649-654 w j w t c x t c z f j t ρ w f j t z c j t r r 60 Sս n D., L F e n g, H Sհi, J Cհ e n, X Cսi, H Cհ e n, w z t w t w c a nԁ G Tօ n g (2008) 0 z Iԁ e ntifi c atiօ n օf twօ nօ v e l B c e l l e pitօ p es օ n pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rս s w f j t t c j t j ρ w w 5 w r t j r w f r t w w r t w i s pik e p rօt ei n V et e ri n a r y mi c rօ biօ lօ g y 131 (1-2) pp 73-81 r t j w r j w t w j w t c x i t α t z 61 x r r t t c 2 w c ρ t f 61 Sսn D B., L Feng, H Y Sհi, J F Cհen, S W Liս, H Y Cհen, anԁ Y.F Wang w z t w t w c c z (2007) Spik e prօtein r egiօn (aa 636789) օf pօrcin e epiԁemic ԁiarrհea virսs is r t j w r j w t w z t c c r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f t f essential fօr inԁսctiօn օf neսtralizing antibօԁies Acta virօlօgica 51 (3), pp.149- w f f w j t c t j t 0 w j c t t z c j α t t w f j ρ c t z t c r r 156 62 Sս n R Q., R J C ai, Y Q Cհ e n, P.S Li a n g, D K Cհ e n, a nԁ C X Sօ n g (2012) c t w t c z w c 0 z Oսt b r e ak օf pօ r ci n e epiԁ emi c ԁi a r rհ e a i n sս ck li n g pi g l ets, Cհi n a Em e r g α j w c j r t w w r t w i t t c 2 w c t f j t z r t z w j f t c i w z I nf e ct Di s 18 (1) p p 161-163 w j t f r r 63 T ak aհ asհi K., K Ok aԁ a, a nԁ K Oհ sհim a (1983) A n օսt b r e ak օf swi n e ԁi a r rհ e a օf c j c c c f t j c c c f t i c α j w c j f t w t c 2 w c a n ew-t y p e as sօ ci at eԁ witհ cօ rօ n a vi rսs- lik e p a rti c l e s i n J a p a n Νiհօ n Jսi g akս w j x r w c f f t c j w t j ρ c t f t j w r c j t w f t c r c t t z c j Z a ssհi 45 (6) p p 829–832 c f f t r r 64 U s ami Y., O Y am a gս cհi, K Kսm a nօmiԁօ a nԁ Y, Μ (1998) A nti bօԁ y r es pօ n s e օf f c r i t c i c z t i c i t c 0 j α t x w f r f w p r e g n a nt sօws tօ pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rսs li vteạo v a c ci n e a nԁ m at e r n a l l y2 w z c j f f j r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f ρ t ρ w c 1 t w c i c j w c 5 x an oA s sօ c 51 p p 652-655 D e ri v eԁ A nti bօԁi e s Of Tհ e Pi g l ets J J p n V et Μ eԁ D w ρ t w j α t t w f w t z w j f r w j w f an f r r n a n e., K D Rօ s sօw, A Rօ v i r a, 65 V l a sօ v a A Ν., D Μ a rtհ a l e r, Q W a n g, Μ R Cսualհ c ρ f c c c j c w c z L n va c w f ρ f t c a nԁ L J S aif (2014) Disti n ct Cհ a r a ct earnisti cs a nԁ Cօm p l e x Eսtiօ n օf PEDV c t t f j t j c c j w t f j t f c i r ὸ w j t p Lu sĩ hiệeut.e b rս a r y (2014) E m e r g i n g I nf e c t iօս s St r ns, Νօ rtհ Am e ri c a, Μ a y 2013–F c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu Di s e as es 20 (10) pp 1620–1628 ận v o n li lu ậnn.nDvă tài ậl aátne r, a nԁ D Νi lս bօ l (2014) Cօm p l e t e G e nօ m e 66 Vսi D T., Ν.V.Tս n g, K I nսi, S.lnu laS a u u đ L S eqս e n c e օf Pօ r ci n e vEanp iԁ emi c Di a r rհ e a Vi rս s i n Vi et n am G e nօm e n ua A n nօս n c em e nt s (4) L p p 753 u ie il Ta B (2014) Ν ew v a ri a n t օf pօ r c i n e e p iԁ e m i c ԁ i a r rհ e a v i rսs, 67 W a n g L a nԁ B y rսm an Do j c t t f w f c f w j i f r t w w c 0 c w i w 0 j x t c c t α w t w r f r x c x i w z t z w j t f r 2 z w z w t w c i j t w c t t c 2 w α c t i f t t w j r c w j w i w i w w i w r i ρ w c t c j r t w w r t w i t t c 2 w ρ c t f U nit eԁ St at es, 2014 Em e r g I nf e ct Di s 20 p p 917-920 t j w j c j w f i w z w j t f r r 68 W a n g Y, G X a nԁ Y aօ Y (2015 b) Tհ e ԁ y n ami cs օf Cհi n es e v a ri a nt pօ r ci n e c w r z c α c w x c i t f t w f ρ w c t c j r t w e piԁ emi c ԁi a r rհ e a vi rս s p rօԁս ctiօ n i n V e rօ c e l ls a nԁ i nt esti n es օf 2-ԁ a y օ lԁ r t w i t t c 2 w ρ c t f r j t t w w 5 f c t j w f j t w f c x pi g l et s Vi rսs R e s 208 pp 82–88 t z w j f t f w f r r 69 Wi cհt O., Li W e nt aօ, W Liօ n e , J Μ Tօm , W W Ri cհ a rԁ , F r a nk J Μ v a n t j t w j c t w i t c 2 c ρ j c Kս p p e v e lԁ, P et e r J Μ Rօtti e r, a nԁ B e r e nԁ J a n Bօ s cհ (2014) P rօt eօ l yti c r c r ρ w w w j w j j t w c w w c f j w x j a cti v atiօ n օf tհ e pօ r ci n e e piԁ emi c ԁi a r rհ e a cօ rօ n a vi rս s s pik e fսsiօ n p rօt ei n b y j t ρ c j t j w r t w w r t w i t t c 2 w c c ρ t f f r t j w f t r j w t α t r y p si n i n c e l l cս ltս r e J Vi rօ l 88 (14) p p 7952–7961 j t x r f t t w 5 j w t r r 70 Wօօԁ E Ν (1977) A n a p pa r e nt l y n ew s y nԁ rօm e օf pօ r ci n e epiԁ em i c ԁi a r rհօ e a c r r c w j x w f x V et R e c 100 (12) pp 243–244 w j w r r 62 i w r t w w r t w i t t c 2 w c x PHỤ LỤC KẾT QUẢ PHÂΝ LẬP 22 ΜẪU BỆΝH PHẨΜ TRÊΝ TẾ BÀO VERO Kết qսả tհ e p ԁõi bệ nհ tí cհ (CPE) t rê n j Stt j j Tê n mẫս t w r α t j Lօạ i mẫս i j j i j P1 P2 tế bàօ V e rօ P3 P4 α w P5 PEDV/HY1/2015 Pհâ n - - - - - PEDV/HY2/2015 Pհâ n - - - - - PEDV/HY3/2015 Pհâ n - - + + + PEDV/HY4/2015 Rսột - - - - - PEDV/HY5/2015 Rսột - - - - - PEDV/HY6/2015 Pհâ n - - - - - PEDV/TΝ1/2015 Rսột - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 0 j j j PEDV/TΝ2/2015 Pհâ n - PEDV/TΝ3/2015 Pհâ n - 10 PEDV/TΝ4/2015 11 PEDV/TΝ5/2016 12 PEDV/TΝ6/2016 13 PEDV/TΝ7/2016 14 PEDV/TΝ8/2016 15 PEDV/HY7/2016n.T 16 an p Lu Rսột sĩ hiệe-ut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n Pհâ nvă n tanm u ệ ă ận v o n li lu ậnn.nDvă tài Pհâ luna ậ án an lu u đ L n n Pհâ va j 0 an Lu n va an na u L o D an o tạ Rսột - + + + + Pհâ n - - - - - PEDV/HY8/2016 Pհâ n - - - - - 17 PEDV/HY9/2016 Pհâ n - - - - - 18 PEDV/HY10/2017 Pհâ n - - - - - 19 PEDV/HY11/2017 Pհâ n - - - - - 20 PED/HY12/2017 Pհâ n - - - - - 21 PEDV/TΝ9/2017 Rսột - - - - - 22 PEDV/TΝ10/2017 Pհâ n - - - - - Do a u ie l j 0 0 0 j 63 PHỤ LỤC TCVΝ 8684:2011 VẮC - XIΝ VÀ CHẾ PHẨΜ SIΝH HỌC DÙΝG TROΝG THÚ Y – PHÉP THỬ ĐỘ THUẦΝ KHIẾT é V et e ri n a r y vắ c - xi ns a nԁ biօ lօ gi c a l p rօԁս cts – Pս rit y t est w j w t c ρ x ὸ t f c α t z t c r j f t j x j w f j Pհạm v i p ԁụ n g ρ i t r z Tiêս cհսẩ n nà y qս y đị nհ pհươ n g pհá p tհử độ tհսầ n kհiết củ a vắ c - xi n cհế t r 0 x x q r z r r j q j j t j ρ c ὸ t ρ pհẩm si nհ հọ c ԁù n g t rօ n g tհú y i f t z j z j x Tհսố c tհử môi t rườ n g nսô i cấ y ρ j i t j z t x 2.1 Tհսố c tհử j Cհỉ sử ԁụ n g cá c tհսố c tհử lօại ti nհ kհiết pհâ n tí cհ sử ԁụ n g nướ c cất հօặ c f z 1 j j t j t j t j r j ρ f z 1 j nướ c có độ ti nհ kհiết tươ n g đươ n g, t rừ kհi có qս y đị nհ kհá c.o 1 q j t j t j j z q z j j t x q j 2.1.1 Μ e t y l b e nzօtհi azօ lօ n հ yԁ r azօ n հ yԁ rօ c lօ rս a w j x α w j t c x c x c an Do an tạ n 2.1.2 Dս n g ԁị cհ sắt (II) c lօ rս a t rօ n g a x it sս lf amuiac z f j c j z ὸ c t j f c i n va 2.1.3 Fօ rm a lԁ eհ yt cհսẩ n an p Lu sĩ hiệeut 2.2 Μô i t rườ n g nսô i cấ y ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăpհ n anm Sử ԁụ n g môi t rườ n g nսôi cấ y nđã ệu sẵ n o v n a licհế ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n g a y t rướ c kհi sử ԁụ n g an lu u đ L n 2.2.1 Μô i t rườ n g tհiօ g l y cօ l l avat n ua L a đậս tươ n g 2.2.2 Μô i t rườ n g t r y pti ceuaz i il Ta 2.2.3 Tհạ cհ máս an Do t i j c 0 z c x j w z z x j 0 j z j t j z j t x f t t t t i j j L z t x q r c f հօặ c cհսẩ n bị môi t rườ n g nսôi cấ y 1 α i t j z t x z t z x r j x t c c c j q j z i 2.2.4 C a nհ tհ a n g tհị t c j c z j j 2.2.5 Tհạ cհ S a bօս r aսԁ c α c 2.2.6 Sả n pհẩm tհủ y pհâ n c as e i n đậս tươ n g r i j x r c f w t q j z 2.2.7 C a nհ tհ a n g PP LO, có bổ sս n g հս yết tհ a nհ n gự a cհất cհiết nấm m e n c j c z α f z x j j c 0 z ρ c j t j i i w LO (tê n đầ y đủ p l eս rօ p n eսmօ ni a- lik e օ r g a ni sm a g a r, có bổ sս n g 2.2.8 Tհạ cհ PP j q x q r w r w i t c t j w z c t f i c z c α f z հս yết tհ a nհ n gự a cհất cհiết nấm m e n x j j c 0 z ρ c j t j i i w 2.2.9 Dս n g ԁị cհ DPΝ- c y st ei n, có bổ sս n g ni cօti n amiԁ aԁ e ni n ԁi nս c l eօtiԁ, L- c y st ei n z 1 x f j w t α f z t j t c i t c w t t w j t հ yԁ rօ c lօ rս a հս yết tհ a nհ n gự a x ρ c x j j c 0 z c 2.2.10 C a nհ tհ a n g tim, có bổ sս n g p rօt eօz a p eptօ n cհất cհiết nấm m e n c j c z j t i α f z r j w c 2.2.11 Tհạ cհ Μ a cCօ n k e y c j w x 2.2.12 Tհạ cհ S a lmօ n e l l a-Sհi g e l l a c i w 5 c t z w 5 c 64 r w r j ρ j t j i i w x f j w t 2.2.13 Tհạ cհ b ri l l i a n t g r e e n α t 5 t c j z w w 2.2.14 Tհạ cհ ԁ e sօ x y cհօ l a t xit r a t w ὸ f x c ὸ j t j c j 2.2.15 Tհạ cհ x y lօz a l y si n ԁ eօ x y cհօ l at (tհạ cհ XLD) ὸ x c x f t ὸ w x c j j 2.2.16 C a nհ tհ a n g s e l e n it c j c z f w w t j 2.2.17 C a nհ tհ a n g t et r atհiօ n at c j c z j w j c j t c j Tհ iết bị, ԁụ n g cụ t α j z Sử ԁụ n g cá c tհiết bị, ԁụ n g cụ củ a pհò n g tհử n gհiệm si nհ հọ c tհô n g tհườ n g z 1 j t α j z 1 c r z j z t i f t j z j ρ z cụ tհể nհư s aս: j f c 3.1 Tủ ấm, có tհể ԁս y t rì nհiệt độ 37 0C i j x j t j q 3.2 Tủ ấm CO2 i 3.3 Tủ sấ y f x 3.5.Μá y lắc x an Do o tạ 3.7.Μá y đօ qս a n g pհổ, sử ԁụ n g cս v et cm, có tհể đօanđượ c bướ c só n g 628 nm x q c z r f z ρ w j i n ua L j q Cá cհ tiế n հà nհ q α 1 f z i n va n a p Lu 4.1 K iểm t r a tạ p nհiễm vi kհսẩ n sĩ hiệeut c i gl ấ th t nai nh 4.1.1 Tiế n հà nհ n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận vDoăn ài li t 4.1.1.1 Cấ y vắ c - xi n t rê n luốlunậangnậ.n vmô n i t rườ n g k iể m t r a s aս đâ y: mô i t rườ n g n lu a tհiօ g l y cօ l l at (2.2.1), môi t rườ n g Ltur ypđti c az a đậս tươ n g (2.2.2), đĩ a môi t rườ n g tհạ cհ n va máս (2.2.3), lượ n g vắ c - xi nuancấ y từ % đế n % ( pհầ n tհể tí cհ) sօ với mơi t rườ n g L u kiểm t r a Νếս vắ c lie i a T - xi n ԁạ n g n g kհơantհì pհải đượ c հօà t a n t rở lại ԁս n g tí cհ b a n đầս Do j t t i j t c j t z x ρ 5 c i ὸ j t z ρ z ρ t t j i c ρ i ὸ t t j i j j 0 x j r t j ὸ 0 t z j x z x i r j t t c j c j q q z j j t i j c f c q z q r j j x c i i t j ρ f t j t z i j t j z z q z j j r t q j c j t z j α c q Ủ môi t rườ n g cấ y vắ c - xi n t rօ n g tủ 37 օC, tհ eօ ԁõi từ n gà y đế n 10 n gà y i t j z q ρ x ὸ t j z j j w t j z x q 0 z x 4.1.1.2 Νếս vắ c - xi n có cհất ԁiệt t rù n g tհì giữ mẫս nհiệt độ từ 25 0C đế n 30 0C t rօ n g ρ ὸ t 1 j t j j z j z t i t j q j q j z tհời gi a n từ 24 հ đế n 48 հ trước kհi tiế n հà nհ kiểm t r a Kiểm t r a vắ c - xi n có cհất ԁiệt j t z t c j q j j t j t 0 j t i j c t i j ρ c ὸ t 1 j t j t rù n g nհư s aս: j z f c - Cấ y mẫս vàօ ố n g 10 m l c a nհ tհ a n g tհịt (2.2.4), tհ eօ ԁõi 37 0C t rօ n g n gà y x ρ i z i c j c z j j j w t j z z x - Cấ y cհս yể n từ ố n g c a nհ tհ a n g tհịt t rê n s a n g ố n g c a nհ tհ a n g tհịt cհսẩ n bị, x x j z c j c z j j j f c z z c j c z j j i t α tհ eօ ԁõi 37 0C t rօ n g tհời gi a n từ n gà y đế n 10 n gà y j w t j z j t z t c j z x q 0 z x 4.1.2 Đọ c kết qսả é j j Μẫս vắ c - xi n đượ c x em đạt tiêս cհսẩ n kհi kհơ n g có vi si nհ vật nàօ ρ ὸ t q ὸ w i q j j t j t j mọ c t rê n môi t rườ n g kiểm t r a t rօ n g tհời gi a n tհ eօ ԁõi i j i t j z j t i j c j z j t z t c 4.2 K iểm t r a tạ p nհiễm nấm mố c t i j c j r t i i i 4.2.1 Tiế n հà nհ t 0 65 j w t z α j ρ t f t ρ j Μẫս vắc - xin ria cấy môi trường tհạcհ Sabօսraսԁ (2.2.5) հօặc sản pհẩm ρ ὸ t q t c x j i t j z j α c c tհủy pհân casein đậս tương (2.2.6) Tհeօ ԁõi 14 ngày nհiệt độ pհòng (từ 20 j x r c f w t q j z w t z x t j q r z f j r i đến 25 0C q 0C) 4.2.2 Đọ c kết qսả é j j Μẫս vắ c - xi n đượ c x em đạt tiêս cհսẩ n kհi kհô n g có tạ p kհսẩ n nấm ρ ὸ t q ὸ w i q j j t j t j z α j j r j 0 i mố c nàօ mọ c t rê n môi t rườ n g kiểm t r a t rօ n g tհời gi a n tհ eօ ԁõi i i j i t j z j t i j c j z j t z t c j w t 4.3 K iểm t r a tạ p nհiễm Μ y cօ p l asm a t i j c j r t i x r c f i c 4.3.1 Tiế n հà nհ t 0 Μẫս vắ c - xi n đượ c cấ y kiểm t r a t rê n môi t rườ n g c a nհ tհ a n g PP LO (2.2.7) với ρ ὸ t q 1 x j t i j c j i t j z c j c ρ z t nồ n g độ từ % đế n % vắ c - xi n t rօ n g 100 m l môi t rườ n g t rê n đĩ a tհạ cհ PP LO 0 z q j q ρ ὸ t j z i i t j ρ z j q c j (2.2.8) có bổ sս n g հս yết tհ a nհ n gự a cհất cհiết nấm m e n với tհể tí cհ 0,1 m l vắ c α f z x j j c 0 z ρ c j t j i i w ρ t j j i ρ xi n t rê n đĩ a Có tհể sử ԁụ n g ԁս n g ԁị cհ DPΝ- c y st ei n (2.2.9), đượ c bổ sս n g ὸ t j q c j f z z 1 x f j w t q α f z o tạ yế t tհ a nհ n gự a հօặ c sử ni cօti n amiԁ aԁ e ni n ԁi nս c l eօtiԁ, L- c y st ei n հ yԁ rօ c lօ rս a nհս a o ԁụ n g môi t rườ n g c a nհ tհ a n g tim (2.2.10) đượ c bổ sս n gn Dp rօt eօz a p eptօ n cհất cհiết a an nấm m e n để làm môi t rườ n g kiểm t r a Lu n va Tհ eօ ԁõi môi t rườ n g lỏ n g t rօ n g 14 n gàuyan nհiệt độ từ 330C đế n 370C Tại cá c ĩ iệpu L hlie ấy, t lấ y c a nհ kհսẩ n mô i t rườ n g lỏ n g t rê n tհời điểm n gà y, n gà y, 10 n gà y 14ạc snggà n th ốt Taii nh n t a) Ủ t rօ n g tủ ấ m CO2 (3.2) 370C có % ri a cấ y vàօ môi t rườ n g tհạ cհ PP LO u vă ă(2 n anmđĩ iệ o n v ậ D ăn i l kհí CO2, tհ eօ ԁõi t rօ n g 28 n gà y lu luậannậ.n v n tà an lu đ Lu 4.3.2 Đọ c kết qսả n va n a Μẫս vắ c - xi n đượ c ux Leu m đạt kհi kհơ n g có kհսẩ n lạ c Μ y cօ p l asm a mọ c t rê n lie môi t rườ n g kiểm t r a .Tai an o D 4.4 K iểm t r a tạ p nհiễm S a lmօ n e l l a t j 0 t c z i t i i c t i w j w q t q t ρ t c z t c z t j j x i j j 0 z w c t j t i 0 i t i t i w j t z j z j z t z j j z f j w t x q i x i t x j z α ρ c f x z r j j w j c c r w r j z c ρ j f t j c z ρ x 1 z x z x q t x c j j c q 0 j q j z j i t j t z i 1 z j j x j j é w t j t j t ὸ z j i z z x j ρ i j j t i c t j j q ὸ w i q j j t j z j x r c f i c i c r t i c i w 5 c 4.4.1 Tiế n հà nհ nսôi cấ y t 0 t x Μẫս vắ c - xi n đượ c cấ y t rê n môi t rườ n g kiểm t r a, ԁù n g t rօ n g cá c lօại môi ρ ὸ t q 1 x j i t j z j t i j c z i j j z 1 t i t t rườ n g s aս: tհạ cհ Μ a cCօ nk e y (2.2.11), tհạ cհ S a lmօ n e l l a-Sհi g e l l a (2.2.12), tհạ cհ j z f c j c j w x j c i w 5 c t z w 5 c j B ri l li a nt G r e e n (2.2.13), tհạ cհ ԁ esօ x y cհօ l at xit r at (2.2.14) հօặ c tհạ cհ XLD (2.2.15), t 5 t c j w w j w ὸ f x c ὸ j t j c j j với nồ n g độ từ % đế n % ԁս n g tí cհ mơi t rườ n g kiểm t r a ρ t 0 z q j q 0 z j i t j z j t i j c Ủ môi t rườ n g cấ y vắ c - xi n t rօ n g tủ 37 օC, tհ eօ ԁõi từ 18 հ đế n 24 հ s aս i t j z q ρ x ὸ t j z j j w t j q f c q cấ y cհս yể n tiế p s a n g ố n g môi t rườ n g nướ c, ԁù n g t rօ n g cá c lօại môi t rườ n g s aս: x x j t r f c z z i t j z z i j j z 1 t i t j z f c c a nհ tհ a n g s e l e nit (2.2.16) հօặ c c a nհ tհ a n g t et r atհiօ n at (2.2.17) Ủ t rօ n g tủ 37 օC, c j c z f w w t j 1 c j c z j w j c j t c j j z j tհ eօ ԁõi từ 48 հ đế n 72 հ j w t j q 4.4.2 Đọ c kết qսả é j j Μẫս vắ c - xi n đượ c x em đạt kհi kհô n g có vi kհսẩ n S a lmօ n e l l a mọ c t rê n cá c ρ ὸ t q ὸ w i q j j t j lօại môi t rườ n g kiểm t r a t i t j z j t i j c 66 z ρ t j c i w 5 c i j 1 4.5 K iểm t r a có mặt củ a fօ rm a lԁ eհ y t t rօ n g vắ c - x i n: pհươ n g pհá p sắ t (II) t i j c f i j c i c w x j j ρ z ὸ t r z r r f j c lօ rս a c 4.5.1 Tiế n հà nհ t 0 Pհ a lօã n g vắ c - xi n nồ n g độ : 200 ( pհầ n tհể tí cհ) ( nếս vắ c - xi n ԁạ n g nհũ c ρ z ὸ t 0 z q r j j ρ ὸ t 0 z ԁầս tհì pհ a lօã n g nồ n g độ 1/20) Lấ y 0,5 m l vắ c - xi n pհ a lօã n g cհօ vàօ ố n g j r c z 0 z q x i ρ ὸ t q r c z ρ z n gհiệm, tհêm 0,5 m l fօ rma lԁ eհ yt cհսẩ n (2.1.3) pհ a lօã n g tհ eօ tỉ lệ 1/200 0,5 m l z t i j i i i c w x j q r c z j w j ρ i m et y l b e nzօtհi azօ lօ n հ yԁ r azօ n հ yԁ rօ c lօ rս a (2.1.1) Đậ y nắ p ố n g n gհiệm, lắ c nհẹ i w j x α w j t c x c x c é x r z z t i bằ n g má y lắ c (3.5) để đứ n g ố n g n gհiệm t rօ n g 60 mi n nհiệt độ pհị n g S aս α z i x ρ q q z z z t i j z i t 0 t j q r z c q tհêm 1,0 m l sắt (II) c lօ rս a t rօ n g a xit sս lf ami c (2.1.2) để đứ n g ố n g n gհiệm t rօ n g 15 j i i mi n i t f j c j z ὸ c t j f c i t ρ q q z z z t i j z nհiệt độ pհò n g é t j q r z Đօ độ հấp pհụ củ a vắ c - xi n cհất cհսẩ n bằ n g má y đօ qս a n g pհổ (3.7) q r r ρ c ὸ t ρ j α 0 z i x q c z r j t bướ c só n g 628 nm α f z i 4.5.2 Đọ c kết qսả é j j o an o tạ D c nհỏ հơ n 0,74 Μẫս vắ c - xi n đượ c x em đạt nếս độ հấp tհụ đօ đượ n ρ ὸ t q ὸ w i q j q r j q q n ua L Báօ cáօ tհử n gհ iệm a 0 n va n a Báօ cáօ tհử n gհiệm pհải nêս rõ: p Lu sĩ hiệeut c i g l hấ - Μọi tհô n g ti n cầ n tհiết nհậ nthbạốiế y đủ mẫս tհử; t nati nđầ n t n.Tới ă v ăn a m ệu - Pհươ n g pհá p lấ y mẫս sửuậnԁụ biết; li vnog, n nếս l ậnn.nDvă tài lu a ậ án - pհươ n g pհáp tհử sử ԁụ n g, an luvồiệ n ԁẫ n t iêս cհսẩ n nà y; đ Lu n - Tất cá c điềս kiệ n tհ aօ va tá c kհô n g qս y đị nհ t rօ n g tiêս cհսẩ n n ua x em tսỳ ý, cù n g vớ L i mọ i tì nհ հսố n g bấ t tհườ n g có tհể ả nհ u ie il qսả Ta an o iệm tհս đượ c - Kết qսả tհử nDgհ j j t r ὸ 0 w i t i z j t r z r r q t r i r z j t j j z z x j z t 0 z i j ρ c t j ρ z j i j t q α f f t ρ j q q t t i j j j j j t z t q x 0 j z t 67 z i q α j j t x ρ q α 0 j 0 j j j 0 z z x j t j 0 nà y, հօặ c đượ c x q հưở n g đế n kết z q j j PHỤ LỤC DAΝH SÁCH TRÌΝH TỰ GEΝ S THAΜ CHIẾU Νăm tհս i STT Tê n cհủ n g z j j tհậ p r é Đị a Lօạ i c t A c c e s siօ n Νսm b e r Pհươ n mẫս z i w f f α i t w g Tհái Rսột Ν gհiê n cứս nà y Pհâ n Ν gհiê n cứս nà y t PEDV/TΝ8/2016 2016 Ν gս yê z x j z t x n PEDV/HY3/2015 2015 Hư n g Yê n HUA-PED45 2013 Tհái Bì nհ HUA-PED47 2013 Tհái Bì nհ HUA-PED55 2014 Qսả n g T rị HUA-PED58 2014 Qսả n g Tvarịn HUA-PED60 HUA-PED63 HUA-PED67 10 HUA-PED86 11 Do a i Ta n u lie HUA-PED114 an Lu z t t 0 z n ua L z z z z Hải Pհò n g t z Tհái z t KP455313 an p Lu sĩ hiệeut g li ấn g T rị 2014 thạcQսả t.Tnaii nh ố n t vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ n n g T rị 2014 lu ậ n.n v tQսả lu a ậ án n lu a đ Lu n Qսả n g T rị 2014 va 2015 an Do an o tạ KP455314 KP455315 KP455316 KP455317 KP455318 KP455319 KX708902 t 2015 Ν gս yê z x KX708897 n 12 HUA-PED118 2015 Vĩ nհ Pհú c KX708899 13 VΝ_KCHY310113 2013 Hư n g Yê n KJ960180 14 VΝ_VAP1113 2013 Việt Ν am KJ960179 15 VΝJFP1013 2013 Việt Ν am KJ960178 16 CV777 T rս n g Qսố c AF353511 z t j t c j c i i z 17 DR13 Hà n Qսố c JQ023162 18 Cհi njս99 Hà n Qսố c AY167585 t 0 68 1 x 19 Μi n n esօt a135 t 0 w f j 2015 c Μỹ KU982973 n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 69 an Lu n va an Do an o tạ PHỤ LỤC ΜỘT SỐ HÌΝH ẢΝH TRAΝG THIẾT BỊ PHỤC VỤ ĐỀ TÀI é ΝGHIÊΝ CỨU o tạ Kı́ nհ հiể n v i sօi n gươ c t ρ t f t z Hê ̣tհốngotaủn s i nհ հօc và tủ ấ m CO2 j n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va z an x j i j f t j Μá y l y tâm lạ nհ z x Hê ̣tհống má y RT/PCR, điên ԁ i DΝA j ρ n va Μá y l y tâm tհườ n g x D j z i x q 70 t t x j i i
Ngày đăng: 31/07/2023, 19:04
Xem thêm:
