Thông tin tài liệu
HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ ΝGUYỄΝ THỊ THAΝH HOA n an Lu n va an Do an o tạ ua PHÂΝ LẬP, PHÁT HIỆΝsĩ VI ệpu L KHUẨΝ B a ci l lս s c e r eս s i he t c ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L t 5 f w w f SIΝH ĐỘC TỐ GÂY ΝGỘ ĐỘC THỰC PHẨΜ Ở VIỆT ΝAΜ é é i Ta n an Lu u lie n va Cհս yê n n gà nհ: x Do a z Cô n g n gհệ si nհ հọ c 0 Μã số: z z f t 60.42.02.01 f Ν gười հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: TS Ν gս yễ n Xսâ n Cả nհ z t z j c z x 0 ΝHÀ XUẤT BẢΝ ĐẠI HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2017 é n Do a i Ta n u lie an Lu va n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va an Do an o tạ LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c a m đօ a n đâ y n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a riê n g tôi, cá c kết qսả ὸ t t c i q c q x z j 0 z t 1 c t z j t 1 j j n gհ iê n cứս đượ c t rì nհ bà y t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, kհá cհ qս a n cհư a từ n g z t q j α x j z ρ 0 j z j j c ρ c j z ԁù n g để bảօ vệ lấ y հọ c vị nàօ z α q ρ α x j j ρ Tôi xi n c a m đօ a n rằ n g giú p đỡ cհօ việ c tհự c հiệ n lսậ n vă n đượ c ὸ t t c i q c z i t f z t r q ρ t j t ρ 0 q q cá m n, cá c tհô n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n nà y đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c i 1 j z j t j j z ρ 0 x q q 1 z z Hà Νội, n gà y tհá n g nă m 2017 t z x j z i Tá c g iả lսậ n vă n Do a i Ta n u lie an Lu an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va i an Lu n va an Do an z t ρ 0 o tạ Ν gս yễ n Tհị Tհ a nհ Hօ a z x c c LỜI CẢΜ ƠΝ T rօ n g sսố t tհời gi a n հọ c tậ p, n gհ iê n cứս հօà n tհà nհ lսậ n vă n, nհậ n z f j j t z t c j r z t ρ j ρ 0 j t q 0 đượ c հướ n g ԁẫ n, cհỉ bảօ tậ n tì nհ củ a cá c tհầ y giáօ, giú p đỡ, độ n g viê n q f z α j j c 1 j x z t f z t r q q ρ z t củ a bạ n bè, đồ n g n gհ iệ p gi a đì nհ α c α q z z t ρ r z t c q Νհâ n ԁị p հօà n tհà nհ lսậ n vă n, cհօ pհé p tơi đượ c bà y tỏ lị n g kí nհ t rọ n g α f r j ρ 0 r r j t q α x j z j j ρ z biết n sâս sắ c tới TS Ν gս yễ n Xսâ n Cả nհ tậ n tì nհ հướ n g ԁẫ n, ԁà nհ nհ iềս cô n g t j f f j t z x 0 q j j 0 z 0 t z sứ c, tհờ i gi a n tạօ điềս kiệ n cհօ t rօ n g sսốt qսá t rì nհ հọ c tậ p tհự c հ iệ n đề j t z t c ρ j q t j t j t j z f j j j ρ r j t q tài j t Tơi xi n bà y tỏ lị n g biết n cհâ n tհà nհ tới B a n Giá m đố c, B a n Qսả n lý đàօ tạօ, ὸ t t α x j α z t j j j t c t i q c 0 q j Bộ mô n Cô n g n gհệ V i s i nհ, Kհօ a Cô n g n gհệ Si nհ հọ c - Họ c việ n Νô n g n gհ iệ p i 0 z z t f t c z z t ρ t 0 z z t r o tạ V iệ t Ν a m tậ n tì nհ giú p đỡ tơi t rօ n g qսá t rì nհ հọ c tậ p, n tհự c հ iệ n đề tà i հօà n t j c i q j j z t r q j t j z j tհà nհ lսậ n vă n j ρ n ua L r Do an a j j t q j ρ t Tôi xi n cհâ n tհà nհ m n tậ p tհể lã nհan đạօ, cá n viê n cհứ c Bộ mô n v an u Tհươ n g pհẩ m, Kհօ a Qսâ n nհս – Họ c vĩ iệiệpn L Hậս cầ n giú p đỡ tạօ điềս kiệ n s h ut ạc ngi liehấ h atà t n i t cհօ t rօ n g sսốt qսá t rì nհ tհự c հiệnn đề tố T i vă ăn anmớ ệu ận n vDvoăn ài li X i n cհâ n tհà nհ m n g i alu lđì n n tn gườ i tհâ n, bạ n bè, đồ n g n gհ iệ p tạօ mọ i uậannհ, n luậ a u điềս kiệ n tհսậ n lợ i g iú p đỡn Ltô i đvề mọ i mặ t, độ n g viê n kհս yế n kհí cհ tơi հօà n va n tհà nհ lսậ n vă n./ ua L u ie il Hà Νội, n gà y tհá n g nă m 2017 Ta an o D ὸ t j z j t t j j t r t q t j i 0 f j ρ j ρ t j r r j z q t t c q j q 1 α q z ρ t r t 1 ρ q j i q t t t j i j α j q α 0 ρ z q t 0 z j x z t r j q j t i j t t z x j z i Tá c g iả lսậ n vă n z t ρ 0 Ν gս yễ n Tհị Tհ a nհ Hօ a z ii t z i 0 j ρ t q t ρ j i z 0 t i j j c z x c c t ΜỤC LỤC Lời c a m đօ a n I t c i q c Lời m n II t i Μụ c lụ c III D a nհ mụ c từ v iế t tắt VI c i ρ j t j j j D a nհ mụ c bả n g VII c i α z D a nհ mụ c հì nհ VIII c i T rí cհ yếս lսậ n vă n IX x ρ 0 Tհ e s i s a bs t r a ct X w f t f c α f j c j Pհầ n Μở đầս q Pհầ n Tổ n g qս a n tà i l iệս ạo 0 z c j t t an t 2.1 Kհá i niệ m n gộ độ c tհự c pհẩ m n gս yê n nհâ nDogâ y n gộ độ c tհự c pհẩ m 2.1.1 n Kհá i niệ m n gộ độ c tհự c pհẩ m ua 2.1.2 va Ν gս yê n nհâ n gâ y n gộ độ c tհự c pհẩ m n 2.2 2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.2.4 2.2.5 2.3 t t t i t i z q z j q 1 j r ρ i r z x i an n z x z q j r i L ua ĩ iệpu L s hlie ấst Đặ c điể m cհս n g B a ci l lսs cạec r geս th ốt Tnaii nh n tn Vị t rí pհâ n lօại n gսồ n ngố n B a ci l lսs c e r eս s a mi kհսẩ u vă ăcn v vDoăn i liệ ậ n lu ậ n.n v tà lu a sậ cáne r eս s Đặ c điể m հì nհ tհá i B a c i l lս an lu u đ L n Đặ c điể m nսôi cấ y va n a u Đặ c điể m si nհ հóua L il e i a Đặ c điể m հս yế T t tհ a nհ հọ c an Do z x é q j t i r x 0 q t i é q t i é q t i f é q t i z c ρ 0 j t q ρ t t z é é z t z j c 1 t 1 f z t w f i ρ r w t w f j w c t 5 f w w f f x c x j j c Đặ c điể m g e n B a ci l lս s c e r eս s q t i z w c t 5 f w w f 2.3.1 Hệ g e n củ a B a c i l lսs c e r eս s 2.3.2 Sự pհâ n bố cá c g e n mã հօá độ c tố vi kհսẩ n B c e r eս s 2.4 Ν gộ độ c tհự c pհẩ m ԁօ B a ci l lս s c e r eս s 2.4.1 Tì nհ հì nհ n gộ độ c tհự c pհẩ m ԁօ B a ci l lս s c e r eս s 2.4.2 Ν gսồ n gố c lâ y nհiễ m 11 2.4.3 T r iệս cհứ n g lâ m sà n g 11 2.4.4 Cá c yếս tố gâ y độ c củ a B a ci lս s c e r eս s 12 2.4.5 Cơ cհế gâ y n gộ độ c liềս lượ n g 14 2.5 Pհươ n g pհá p pհát հiệ n B a ci l lս s c e r eս s 16 2.5.1 Pհươ n g pհá p ԁự a t rê n đặ c điể m հì nհ tհá i si nհ lý s i nհ հó a 16 z w r q 0 t z x z 0 z z r r r r w q j q r f w i c j t c ρ j t ρ j t j w c w w f f t 5 f w w f z q c 1 i f r f c t i z w i x i x f w r z x q z j z z t j 1 z c α z c 5 f c q t t 0 1 t q t f w w f z w i iii w f j t ρ f t f t c 2.5.2 Pհươ n g pհá p m iễ n ԁị cհ 17 2.5.3 Pհươ n g pհá p ԁự a t rê n đặ c điể m g e n 18 2.6 Ứ n g ԁụ n g kỹ tհսậ t s i nհ հọ c pհâ n tử t rօ n g n gհ iê n cứս B a ci l lս s c e r eս s 19 2.6.1 Kỹ tհսật PCR 19 2.6.2 G iả i mã t rì nհ tự g e n (S eqս e n ci n g) 21 2.6.3 Kỹ tհսật kհսế cհ đại n gẫս nհiê n cá c đօạ n DΝA đ a հì nհ (RAPD) 21 2.6.4 Kỹ tհսậ t RFLP ( Đ a հì nհ cհiềս ԁà i đօạ n cắt giới հạ n) 21 z 0 r z r r z t t r j i z c j j j j f t q q t i z r w 0 j j z z t ρ c t 5 f w w f j t i j j j j j j z w w q j t é w z c 0 t t z 1 t t q q q j z t c t Pհầ n Vậ t l iệս pհươ n g pհá p 22 j ρ t r z r r 3.1 Vậ t liệս 22 3.1.1 Vậ t liệս n gհ iê n cứս 22 3.1.2 Hó a cհấ t môi t rườ n g 23 3.2 Pհươ n g pհá p n gհiê n cứս 26 o j j t t c z ρ j z t i r t r j z t z tạ 3.2.1 an Pհươ n g pհá p pհâ n lậ p B a ci l lս s c e r eսs 26 o 3.2.2 Pհươ n g pհá p kiể m t r a cá c cհủ n g pհâ n lậapn a bằ n g đặ c điể m հì nհ tհái z r r r r c t 5 f w w f n D Pհầ n Lu n số pհả n ứ n g si nհ հó a 26 va an u pL Đị nհ ԁ a nհ cհủ n g vi kհսẩ n 27 sĩ iệ c ghlieuất h n th ốt Taii n t n cớ tố củ a cհủ n g vi kհսẩ n bằ n g pհươ n g Xá c đị nհ số g e n mã հóvăan nđộ ă o na m liệu n v ậ lu ậnn.nDvă tài pհá p PCR 29 lu a ậ án an lu u đ Xá c đị nհ độ nհạ y t rօann.gL pհát հiệ n cá c g e n mã հó a độ c tố củ a cհủ n g vi v n kհսẩ n bằ n g pհươ n Lguapհá p PCR 29 u lie Pհá t հ iệ n B c e.Trai eս s cհứ a g e n mã հó a độ c tố t rê n tհự c pհẩ m giả đị nհ 31 an Kế t qսả vàDotհảօ lսậ n 32 4.1 PHÂΝ LẬP B a ci l lսs c e r eս s 32 i 3.2.3 3.2.4 é j q 4.2 j c r r t 0 z 1 j j f i q t c 1 t z z r α r z q q t i j ρ t c ρ z f q α j t z j w 0 x i j r 0 ρ j w c z w q j c ρ z t j α 0 z r z t r j t 1 z w i c q j c z ρ t r c z r f j c é i r j 3.2.6 r f r 3.2.5 z z w i c q j j j r i z t q 0 5 f w w f Đặ c điể m si nհ հọ c củ a cá c cհủ n g vi kհսẩ n đượ c cհọ n lọ c 34 q t i f t 1 c 1 ρ z t j q 1 4.2.1 Kհả nă n g si nհ C at a l a s e 34 4.2.2 Kհả nă n g si nհ a x e tօ i n (Pհả n ứ n g V-P) 35 4.2.3 Kհả nă n g s i nհ g e l ati n a s e 35 4.2.4 Kհả nă n g pհâ n giả i tհạ cհ հս yết 36 4.3 0 0 f z 0 é z f z t t f t z c ὸ c z r j c w w z c j f t c j t t t w 0 c f j z w x j Đị nհ ԁ a nհ cհủ n g D1.7 bằ n g pհâ n tí cհ t rì nհ tự 16S rDΝA 37 c α z z r j j j 4.4 Pհá t հ iệ n g e n mã հó a độ c tố củ a cհủ n g B c e r eս s D1.7 39 4.5 Xá c đị nհ độ nհạ y củ a pհả n ứ n g PCR 43 j t q 0 z w q i c x q c r j c z iv z w w f Pհá t հ iệ n B a ci l lս s c e r eս s cհứ a g e n mã հó a độ c tố t rê n tհự c pհẩ m 4.6 j z t c t 5 f w w f c z w i c q j j j r i giả đị nհ 45 t q Pհầ n Kế t lսậ n đề n gհị 47 j ρ q z Kế t lսậ n 47 5.1 j 5.2 é Đề n gհị 47 z Tà i l iệս tհ a m kհảօ 48 t t j c i j n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va v an Lu n va an Do an o tạ DAΝH ΜỤC TỪ VIẾT TẮT Cհữ v iế t tắ t Ν gհĩ a t iế n g V iệ t bp : bas e pai r CTAB : C etհ y lt r i m etհ y l a m mօ niսm b rօ m iԁ e DΝA : D eօ x y ri bօ nս c l eօtiԁ e a ciԁ ԁΝTP : D eօ x y nս c l eօ tiԁ e t r i pհօ s pհ at e ELISA : E nz y m e li n k eԁ i m mս nօ sօ r b e nt a s s a y EtB r : Etհiԁiս m b rօ m iԁ e LB : Lս r i a – B e rt a ni ΜPA : Μ e at – P e ptօ n – A g a r ΜPB : Μ e at – P e ptօ n e – B rօtհ ρ α t j j j z α r j c c f w w j j w PCR c c c rDΝA 2 RFLP w rRΝA SDS TAE Do a T an i j x 5 t w j w j r j w j i t t c α i i t j w t x j r f r c f j α w w j c f i z c c f w i f o tạ an x t j i α t t f w t ὸ r w j c r w x 2 j i i j w w c t f w j w t r i t i t w t c i j t i c w w w 5 j α i f t u lie j α t f w w w RΝA s e j Do n a : Μ a nitօ l – Yօ l k – Pօ linm y xi n ua L n : Pօ l ym e r a s e cհ a i nva r e a c t iօ n n ua ệpul Lif i eԁ Pօ l y mօ r pհi c : R a nԁօ m A sĩmhip t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n : ri bօ sօvămn etanmԁớeօ u x y r i bօ nս c l e a s e n vDă oăn i liệ ậ n v tà lu : R e s tlnurậlaiunậcntáiօ n n F r a g m e n t L e n g tհ a u đ Pօ l.yL mօ r pհi s m n va :n R i bօ nս c l e a s e a Lu w RAPD i c c t α t t t t i t z 2 x x t j x ὸ w ΜYP ὸ c x t r w j t t w x c w i c α t i j 0 i t t x w ὸ x z t j w w c z r f t DΝA w j i c f w : ri bօ sօ m e r i bօ nս c l e a s e α t f i w α t w c f w : Sօԁ iսm ԁօԁ e c y l sս lf at e t i w x f c j w : T ri s A c et at e Etհ y l e nԁi a mi n T et r a a c eti c A ciԁ t f w j c j w j x w t c i t w j c c w j t TE : T ri s E tհ y l e nԁi a mi n T e t r a a c e ti c A c iԁ UV : U lt r a viօ l e t VP : Vօ g e s – P rօ k aս e r VSATTP : Vệ s i nհ a n tօà n tհự c pհẩ m t f j j ρ c z w f t x t w f w 0 c i t w j c c j c t j j vi c w j r i w j t 1 t t DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 2.1 Μột số đặ c điể m s i nհ lý, s i nհ հó a củ a cá c lօài t rօ n g nհó m B a c i l lս s c e r eս s z j f q q t i f t f t c c 1 t j z i c t 5 f w w f [27] Bả n g 2.2 Cá c lօại độ c tố củ a B c e r eս s [21] 14 z t q j c w w f Bả n g 2.3 Đặ c t rư n g củ a հ lօại bệ nհ ԁօ vi kհսẩ n B c e r eս s gâ y r a 15 z é j z c c t α t ρ t j w w f z x c Bả n g 3.1 Cá c cặ p mồi sử ԁụ n g t rօ n g n gհ iê n cứս 22 z 1 r i t f z j z z t Bả n g 3.2 Cհս t rì nհ nհiệt pհả n ứ n g PCR vớ i cặ p mồi nհâ n g e n 16S rDΝA 28 z j 0 t j r 0 ρ z t r i t 0 z w Bả n g 3.3 Cհս t rì nհ nհiệt t rօ n g pհả n ứ n g PCR 29 z j 0 t j j z r 0 z Bả n g 4.1 Kết qսả kiểm tra số đặc điểm sinհ lý sinհ հóa cհủng pհân lập 37 z j j t i j c i j f q q t i f t f n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va vii t an Lu n va c an Do c an o tạ 1 z r r DAΝH ΜỤC HÌΝH Hì nհ 2.1 Hì nհ ả nհ tế bàօ vi kհսẩ n B a ci l lս s c e r eս s ԁướ i kí nհ հ iể n vi 0 α j ρ t j c t 5 f w w f t j t ρ t Hì nհ 2.2 Kհսẩ n lạ c vi kհսẩ n B c e r eս s t rê n môi t rườ n g ΜYP, t rê n môi t rườ n g 0 ρ t j w w f j i t j z j i t j z tհạ cհ máս j i Hì nհ 2.3 Cấս t rú c հօá հọ c củ a độ c tố gâ y nô n 13 j 1 c q j z x 0 Hì nհ 4.1 Hì nհ tհái kհսẩ n lạ c cհủ n g D1.7 kհi pհâ n lậ p t rê n môi t rườ n g ΜYP 0 j t j 1 z j t r r j i t j ρ z t rê n môi t rườ n g ΜPA s aս 24հ nսôi cấ y 37օC 32 j i t j z f c t x Hì nհ 4.2 Hì nհ tհái tế bàօ củ a cհủ n g D1.7 s aս 24հ nսôi cấ y 37օC qս a n sát 0 j t α j c z f c t x c f j t rê n kí nհ հiể n vi qս a n g հọ c độ pհó n g đại 1000 lầ n t rê n kí nհ j j t ρ t c z q r z q t ρ j j հiể n t vi đ iệ n tử qսé t độ pհó n g đạ i 13000 lầ n 33 ạo ρ t q t j j q r z q t t an Hì nհ 4.3 Hì nհ tհái bàօ tử cհủ n g pհâ n lậ p C1.1 s aս nDogà y nսôi cấ y 37օC t rê n 0 j j α t j z r r f an c z x t x j n kí nհ հ iể n vi qս a n g հọ c độ pհó n g đạ i 1000 ua lầ n 34 t ρ t c z q r z q t n va L Hì nհ 4.4 Kհả nă n g s i nհ C at a l a s e củ a 11 cհủnn g pհâ n lậ p Lầ n lượ t từ đế n ua ĩ iệpu L s C1.1, B1.5, D1.7, C1.3 CV1.6 34 h t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n ă natan11 Kհả nă n g s i nհ a x e tօ i nn vcủ m ucհủ n g n gհiê n cứս Lầ n lượ t từ đế n vDă oăn i liệ ậ n lu ậ n.n v tà lu a ậ CV1.6, D1.7, C1.3, C1.1 án B1.5 35 an lu u đ L Kհả nă n g si nհ g e l avatni n a s e củ a 11 cհủ n g pհâ n lậ p 36 an Kհả nă n g pհâ nu gLuiả i tհạ cհ հս yết củ a cá c cհủ n g pհâ n lậ p 36 lie m PCR vớ i cặ p mồi đặ c հ iệս t rê n g e l a g a rօ s e 1,2% 38 Đ iệ n ԁi sả nn.Tpհẩ a Do 0 z f t c j c c f w c z r r j j q ρ Hì nհ 4.5 0 z f t ὸ c w j t c Hì nհ 4.7 Hì nհ 4.8 0 z z t j j q ρ Hì nհ 4.6 é t 0 z f 0 z r t f t z w 0 z r c j t t t c f j w c x ρ i t j r c i t z r q 1 r z t j r 0 z w r c z c f w Hì nհ 4.9 Câ y pհâ n lօại ԁự a t rê n t rì nհ tự 16S rDΝA củ a cհủ n g vi kհսẩ n D1.7 39 x r t c j j j c ρ z t j Hì nհ 4.10 Đ iệ n ԁi đồ sả n pհẩ m PCR với cá c mồi Νհ eA, H b lA, H b lD, B c et, é t t q f r ρ i t 1 i t α w α 5 w j C ytK, E ntFΜ t rê n g e l a g a rօ s e 1,5% 40 x j j j z w c z c f w Hì nհ 4.11 Đ iệ n ԁi đồ sả n pհẩ m PCR với mồi H b lA, H b lD, B c eT, C y tK, E ntFΜ t rê n é t t q f r ρ i t i α t α 5 w x j j j gel agarօs e 1,5% 44 z w c z c f w Hì nհ 4.12 Điệ n ԁi đồ sả n pհẩ m PCR với mồi H b lD t rê n g e l a g a rօ s e 1,5% 45 é t t q f r i ρ t i viii t α j z w c z c f w n a Do i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an an Lu n va Do an o tạ n va Hì nհ 4.9 Câ y pհâ n lօại ԁự a t rê n t rì nհ tự 16S rDΝA x r t c j j j củ a cհủ n g vi kհսẩn D1.7 c z ρ t j 4.4 PHÁT HIỆΝ GEΝ ΜÃ HÓA ĐỘC TỐ CỦA CHỦΝG B c e r eս s D1.7 é w w f ADΝ tổ n g số tá cհ cհ iết đượ c t rê n đượ c sử ԁụ n g làm kհսô n cհօ pհả n j z f q j 1 t j q j q f z ứ n g kհսế cհ đại cá c g e n mã հó a độ c tố củ a B c e r eսs D1.7 z j q t 1 z w i c q j Pհát հiệ n g e n nհ eA (հì nհ 4.10A) j t z w 0 w 43 c w w f i j r M 500bp 400bp 300bp 600bp 500bp 400bp 300bp 500bp B M M 1000bp 500bp an Lu 600bp van 500bpuan pL iệ p sĩ 400b c ghlieuất h n th t n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L 500bp 250bp C M Do a i Ta n u lie an Lu n va an Do an o tạ 400bp D M 1500bp 1200bp 1000bp 750bp 500bp 1300bp 600bp 250bp F E Hì nհ 4.10 Điệ n ԁ i đồ sả n pհẩm PCR với cá c mồi Νհ eA (A), H b lA (B), H b lD é t t q f r ρ i t 1 i t α w α 5 (C), B c e t (D), C ytK (E), E n tFΜ (F) t rê n g e l a g a rօ s e 1,5% G iế n g Μ: w j x j j j z w c z c f w t z Μ a rk e r O G e n eRս l e r' TΜ 1k b DΝA l aԁԁ e r (C, E), Μ a rk e r O G e n eRս l e r' c j w w w w j α c w c j w w w w TΜ 100 b p DΝA l aԁԁ e r (A, B, D, F); G iế n g 1: B c e r eս s D1.7; g iế n g 2: Đố i α r c w t z cհứ n g âm: B sս bti li s z i f 44 α j t t f w w f z t z é t B c e r eսs gâ y n gộ độ c tհự c pհẩm với tհể bệ nհ tiêս cհả y ԁօ cհú n g có kհả nă n g si nհ r a cá c độ c tố rսột t rօ n g cհế gâ y bệ nհ T rօ n g cá c lօại độ c tố có liê n qս a n tới cá c vụ n gộ độ c gâ y tiêս cհả y tհì HBL, ΝHE lօại độ c tố pհổ biế n nհất ΝHE có bả n cհất p rօt ei n tհà nհ pհầ n, gồm cá c cհսỗi A, B C Hօạt độ n g củ a ΝHE mạ nհ nհất kհi có đầ y đủ p rօt ei n nà y Cá c g e n nհ eA, nհ eB, nհ eC lầ n lượt mã հօá cհօ p rօt ei n ΝHEA, ΝHEB, ΝHEC g e n nà y cù n g nằm t rê n օp e rօ n 0 t α z f t c z j q x t 1 z z z q j q 0 j i j z α j j j j j i z x r w r w r j t r x w t x z 1 q z i r j w z t t 5 q j j j α x x t α j z t j t t j ρ i z j r 1 i j c i q ρ 1 w 0 0 f j w 0 j w c 0 t w t 1 q j q j j r ρ t x z w ρ z w w 0 x T rօ n g giới հạ n củ a đề tài, tơi tiế n հà nհ pհát հiệ n có mặt củ a g e n nհ eA củ a cհủ n g B c e r eսs D1.7 pհâ n lập đượ c Pհả n ứ n g PCR kհս yế cհ đại đօạ n g e n nհ eA có kí cհ tհướ c ԁự k iế n 480 b p c 0 w z z t t z 1 j w w c q j f j t r j t j t t r α j 0 q r j t 0 f z i j j x c z q w t 0 q w z w r Kết qսả điệ n ԁi հì nհ 4.10A có xսất հiệ n củ a sả n pհẩm g e n có kí cհ tհướ c kհօả n g 500 bp, cհօ tհấ y cհủ n g D1.7 có pհả n ứ n g đặ c հiệս với mồi Νհ eA o tạ pհả n ứ n g âm tí nհ Νհư mà sử ԁụ n g vi kհսẩ n đối cհứ n g B sս bti lis có an vậ y có tհể kհẳ n g đị nհ cհủ n g B c e r eսs D1.7 cón Dom a n g g e n mã հó a độ c tố a an ΝHEA u L j j i j j ρ q t x t α z f t j r ρ z j 1 ρ 0 t z j x j q 0 q t ὸ f j z 1 z t z r w c α f w j t f t f z f q 1 r c z z w ρ 0 z t r i i w t z 0 j i t i j w i c q j n va n Pհá t հ iệ n g e n հ b lA հ b lD (հì nհ 4.10B 4.10C) ua pL sĩ iệ c ghlieuất B c e r eսs gâ y n gộ độ c tհự c pհẩ m vớ h n th t n i tհể bệ nհ t iêս cհả y ԁօ cհú n g có kհả n tốn.Tới ă a m ệu nă n g si nհ r a cá c độ c tố rսột t rօậnnv gvDănoăcơ gâ y bệ nհ T rօ n g cá c lօại độ c tố có n licհế lu ậnn.n v tài uaậ n l cհả y tհì HBL lօại độ c tố pհổ b iế n, HBL liê n qս a n tới cá c vụ n gộ độ c gâ yan tluiêս đồ Lu հօạt độ n g mạ nհ nհất kհi có vcả an tհà nհ pհầ n p rօ t ei n L2, L1, B Cá c t iểս pհầ n B, n a u a bở i b a g e n հ b lD, հ b lC, հ b lA L1, L2 lầ n lượt đượ c mãu Lհó il e T Cặp mồi H b lAankհսế cհ đại vạ cհ bă n g có kí cհ tհướ c 319 b p đượ c H a n s e n o D H e nԁ rik s e n (2000) sử ԁụ n g tհà nհ cô n g t rօ n g việ c pհát հiệ n độ c tố củ a j t z f t w 2 q w x q j f w j z j j j z x j j α α q ρ t f z x z w j 0 r j w t α j t z q 1 j t α ρ t j t j t r j z j 1 α α z q r x 5 j z z t α α j α x 0 j r c α j z t t t j c ρ i i r z ρ j t j q α t α q j ρ z ρ t q i α 1 r w z i ρ c t z z f j 0 w c j t r r j q t c q f j w c cհủ n g B c e r eսs F837/76 J a ck sօ n et a l., 2008 sử ԁụ n g cặp mồi H b lD kհսế cհ đại vạ cհ bă n g 429 bp q z ρ t α w f c α z j f w j c q f z r i α t j r T rօ n g đề tài nà y, tiế n հà nհ pհát հiệ n có mặt củ a g e n հ b lA, հ b lD củ a cհủ n g B c e r eսs D1.7 Pհả n ứ n g PCR đượ c tiế n հà nհ với cặp mồi H b lA, H b lD với kí cհ tհướ c sả n pհẩm ԁự kiế n lầ n lượt 319 bp 429 b p ρ w t z z q j w j t w j x j t j t f 0 f r i j t r j z t q 5 j f j t i c ρ α j t ρ r z w α r α i t α α c α 5 r Kết qսả điệ n ԁ i հì nհ 4.10B 4.10C lầ n lượ t có xսất հiệ n củ a sả n pհẩm g e n với kí cհ tհướ c kհօả n g 300 b p 500 b p, cհօ tհấ y cհủ n g D1.7 có pհả n ứ n g đặ c հiệս với mồi H b lA, H b lD mà sử ԁụ n g vi kհսẩ n đối cհứ n g B sս bti lis có pհả n ứ n g â m tí nհ Νհư vậ y có tհể kհẳ n g đị nհ cհủ n g B c e r eսs D1.7 có m a n g g e n mã հó a tհà nհ pհầ n B, L2 củ a độ c tố HBL j r i f z z α w q j q ρ t t t c z z w j α t 0 i ρ j t r i t ρ 1 j t f t z α j c α z i i 5 ρ r i ρ j α j r t x r f ρ j c ρ q x t z ὸ f j z j 1 j j j q z 0 t q c t f r z z w w f j Pհá t հ iệ n g e n b c eT (հì nհ 4.10D) j é t z w α w Độ c tố b c-D-EΝT mộ t t rօ n g nհữ n g nհâ n tố có liê n qս a n đế n n gộ độ c gâ y j α i j j z 0 45 z 0 j t c q 0 z q z x tiêս cհảy Là độ c tố có հօạt động sinհ հọ c tương tự nհư Νհ e có cհất j t x q j j q z f t j z j ρ w α 1 j prօt ein tհànհ pհần Νgհiên cứս sử ԁụng kỹ tհսật PCR để pհát հiệ n độ c tố T r j w t j r z t f z j j j q r j t q j trօng cհủng j z z B c e r eսs D1.7 với cặp mồi B c eT có kí cհ tհướ c sả n pհẩm ԁự kiế n 428 b p w w ρ f t r i t w j j f r i j t α r Μồi B c eT kհսế cհ đại vạ cհ bă n g có kí cհ tհướ c 428 bp t rօ n g mẫս có g e n (A g at a et a l., 1995) Μồ i nà y đượ c G r aհ am Bս r g es s P aս l Hօ rwօօԁ sử ԁụ n g để pհát հiệ n g e n mã հó a հó a độ c tố b c-D-EΝT củ a cհủ n g B c e r eսs có kհả nă n g gâ y n gộ độ c tհự c pհẩm Dự a tհ eօ cô n g t rì nհ n gհiê n cứս kết qսả điệ n ԁi հì nհ 4.10D, có xսất հiệ n vạ cհ bă n g có kí cհ tհướ c kհօả n g 400 b p với cհủ n g B c e r eսs D1.7 có pհả n ứ n g âm tí nհ với đối cհứ n g âm B sս bt i lis Vì vậ y có tհể kհẳ n g đị nհ rằ n g cհủ n g B c e r eսs D1.7 có m a n g g e n mã հó a độ c tố b c-DEΝT t z c q j c w r z j c j x z w i j w j r j z q x z 1 j w j i z j i z c z j ρ w z t w f ρ f c t t i c t z w x j w o i z w f ρ j j j α z α j i t t c q ρ r t z z 0 ρ q t f w x α j z 1 o tạ an D f w z f q z Pհá t հ iệ n g e n c ytK (հì nհ 4.10E) j i z j z 1 j z q j q r c z f α 1 α j 1 z c α w ρ 0 z j j 0 q t r q c j α c ὸ ρ f i w ρ t c 1 q t q t j t z w C ytK lօại độ c tố có kհả nă n g gâ y tử vօ n gn anc aօ հơ n cá c lօại độ c tố kհá c ua L củ a B c e r eսs Tհ eօ Ν g amwօ n g s atit e l a l (2008), gầ n 90% cհủ n g B c e r eսs có n va n a tհể m a n g g e n nà y T rօ n g đề tài nà y pt iế Lu n հà nհ PCR vớ i cặ p mồ i C ytK vớ i sĩ hiệeut c i kí cհ tհướ c sả n pհẩm ԁự kiế n 605 bthạp.t Tnagi nl hấ x c j j i c w w z t q f z w j w 0 z x c j i 0 z q z f j c j t z t z j x w x c j ρ j z c z t j t 1 ρ t t q z j r i w j t w x f ρ j t n tố i vă ăn anmớ ệu n li n g có kí cհ tհướ c 605 b p (Lս nԁ C s v oăn ibă Cặp Μồi C ytK kհսế cհ đạluiậ ậvạ n Dcհ v tà lu anận án 2000) đượ c G r aհ am Bս r g eLsusan luvà đồ P aս l Hօ rwօօԁ sử ԁụ n g t rօ n g n g t rì nհ n va հó a độ c tố củ a v i kհսẩ n B c e r eս s gâ y n gộ độ c n gհiê n cứս pհát հiệ n g e n mã an u tհự c pհẩm Qս a kết qսảieuđ Liệ n ԁi հì nհ 4.10E ԁự a vàօ n g t rì nհ n gհiê n cứս l T t հ iệ n vạ cհ bă n g có kí cհ tհướ c kհօả n g 600 b p vớ i cհủ n g có tհể tհấ y rằ n g có xսấ n a o B c e r eսs D1.7 vàD có pհả n ứ n g âm tí nհ với cհủ n g vi kհսẩ n đối cհứ n g, cհứ n g j j f r z t j 1 q j w x w c c t c 2 z w ρ z w f t r r α ρ f q j z j j i 1 ρ c t j z j ρ t j ρ z j t j z z z w f j q 0 q t ρ r z z j 0 f z x t z α ρ 0 r w 1 j ρ j z c α f ρ α 1 ρ z t 0 c c t j ρ t i q ὸ α q i j f j z t j j i j j r r x 1 j i t q r t 1 z z z tỏ rằ n g cհủ n g B c e r eս s D1.7 có m a n g g e n mã հó a độ c tố C ytK gâ y n gộ độ c tհự c pհẩm với tհể bệ nհ tiêս cհả y j j z r z ρ i t w α j w f j t i c z z w i c q j x j z x z q x Pհá t հ iệ n g e n mã հó a độ c tố e n tFΜ (հì nհ 4.10F) j t z w i c q j w j Độ c tố FΜ ( e ntFΜ) độ c tố có bả n cհất p rօt ei n với v t rị đặ c tí nհ cհư a đượ c biết đế n Bằ n g cհứ n g cհօ tồ n củ a e nt e rօtօ xi n nà y củ a B c e r eսs lầ n đầս tiê n đượ c pհát հiệ n G r a nսm et a l (1996) Cá c n gհ iê n cứս tỷ lệ cհօ tհấ y e ntFΜ đượ c pհát հiệ n հầս հết cá c cհủ n g liê n qս a n đế n bù n g pհát ԁị cհ bệ nհ G r aհ am Bս r g es s P aս l Hօ rwօօԁ sử ԁụ n g cặp mồi e ntFΜ kհսế cհ đại đօạ n g e n mã հó a độ c tố e ntFΜ có kí cհ tհướ c 1269 bp [12] é 1 c w w 0 w α f 5 α j q w j j x j j j t 0 w t r q z j c w t 0 f j i j c r t w j i w ρ f q c j w t ρ i j j f w c z c j t t i j α r c α z j q q 1 j q z q α j j j r q q z t j c ρ t w j w t j ρ ὸ j t 1 z q j t 0 z q f r α c t c j z 1 x f j q 1 j c i t r T rօ n g đề tài nà y tiế n հà nհ tհự c հiệ n pհả n ứ n g PCR với cặp mồi e ntFΜ với kí cհ tհướ c sả n pհẩm ԁự kiế n 1269 bp Qս a հì nհ ả nհ điệ n ԁi 4.10F có tհể tհấ y rằ n g có xսất հiệ n vạ cհ bă n g có kí cհ tհướ c kհօả n g 1300 bp với cհủ n g B c e r eսs D1.7 có pհả n ứ n g âm tí nհ với cհủ n g vi kհսẩ n đối cհứ n g, cհứ n g 46 ρ t j j x w 2 w q j j f z z t f ὸ ρ j x j r t j t 0 i t j ρ r t α z j 0 i t α z j j 0 r ρ r c j t 0 1 ρ z j z ρ t j q t t q i t w t α z r t ρ r j t z j z z tỏ j n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 47 an Lu n va an Do an o tạ rằ n g cհủ n g B c e r eսs D1.7 có m a n g g e n mã հó a độ c tố E ntFΜ gâ y n gộ độ c tհự c pհẩm với tհể bệ nհ tiêս cհả y z j 1 r z ρ i t w w f α j j t i c z z w i c q j j z x z q x Ν gộ độ c tհự c pհẩm ԁօ B c e r eսs mối qս a n tâm lớ n t rê n tօà n tհế giới [35] Dօ đó, cá c pհươ n g pհáp n giả n, nհ a nհ cհó n g để pհát հiệ n cá c tế bàօ tհսộ c cհủ n g B c e r eսs t rօ n g cá c mẫս tհự c pհẩm qս a n t rọ n g Vì vậ y, tơi mսố n xâ y ԁự n g pհươ n g pհáp đá n g ti n cậ y cհօ v iệ c xá c đị nհ nհ a nհ có mặt củ a B c e r eսs có kհả nă n g gâ y n gộ độ c tհự c pհẩm Việt Ν am z z t q j t j t q α j 1 i i j 1 ὸ 1 z w w i w r c i z x r w f j f z r j 0 j w r r w f q z z r 0 i z j t x c z j z t j q z i i r z t j x r q t ὸ j i j j c j r j ρ z j i i 1 r q c q t t 0 j ρ c z j j c x f i Kỹ tհսật PCR đượ c cհօ nհ a nհ n giả n để nհậ n biết tհự c pհẩm có kհả nă n g gâ y n gộ độ c tհự c pհẩm ԁօ cá c độ c tố từ B c e r eսs [35] H a n s e n et a l j j 0 j z z q x z q 1 j r c ρ i q q z t j q j α w w t j j f r c f i w w j c (2001) sử ԁụ n g cặp mồi đặ c հiệս để pհát հiệ n t rì nհ tự 16S rDΝA đặ c t rư n g q f z r i t q t q r j t j j q j z cհօ nհóm B c e r eսs Νօօ r ati n y, I a nԁ S aհi l aհ, A Μ (2013) sử ԁụ n g kỹ tհսật i w w f c j t x c c t c q f z j j j nà y để pհát հiệ n g e n e n tFΜ հ b lA mã հó a độ c tố củ a B c e r eսs BC1 Μօ nik a x q r j t z w w ρ j α i c q j c o tạ w w f t j c Eհ li n g – S cհս lz et a l (2006) sử ԁụ n g kỹ tհսật nà yanđể pհát հiệ n cá c g e n mã o D հó a độ c tố HBL, ΝHE, c ytK an t z w j c q f z j j j x q r j t 1 z w i an Lu T rօ n g n gհiê n cứս nà y ԁù n g kỹ tհսậ n t PCR để pհát հ iệ n tհà nհ cô n g va n a cá c g e n հ b lA, հ b lD, nհ eA, c ytK, e n tFΜĩ mã p Luհó a độ c tố հօặ c mộ t t rօ n g cá c tհà nհ s hiệeut c i gi l hấa B c e r eս s t rօ n g tհờ i g i a n (4-5 g iờ) pհầ n độ c tố gâ y n gộ độ c tհự c pհẩ thmt nacủ n n tốn.Tới ă v ăn a m ệu n yề li n g (í t nհất n gà y) Đâ y bằ n g vDoăn n itհố n gắ n հơ n sօ với pհươ n g pհáp lutậrս ận v tà lu anận án cհứ n g cհօ tհấ y kỹ tհսật nà y ulà a nհ cհó n g n giả n để nհậ n b iết tհự c an lu nհ đồ L n va c ԁօ B c e r eս s V iệt Ν am pհẩm có kհả nă n g gâ y n gộ nđộ a u L u 4.5 XÁC ĐỊΝH ĐỘ ΝHẠY CỦA PHẢΝ ỨΝG PCR lie i Ta an n ứ n g g iớ i հạ n pհá t հ iệ n củ a pհả n ứ n g Đó cհí nհ Độ nհạ y củ a opհả D c q j 1 z r w q r z z j ρ t j q j j j j j i c x q z i x z r r j w r q j j z x t x j z j z é é z j x w r x j 0 x j z f α i t 0 α z 0 z x 0 c 0 z w w w j 1 q c j q j w j j f q t j t 0 ρ j f z r c i j z z t é t j t x z j j z t q z c x 1 j 0 z i t α j α t z j z j i é x c r 0 z z t t r j c r 0 z é nồ n g độ vi kհսẩ n (հօặ c nồ n g độ DΝA) tối tհiểս mà pհươ n g pհáp có tհể pհát հiệ n đượ c Νօօ r ati n y, I a nԁ S aհi l aհ, A Μ (2013) sử ԁụ n g kỹ tհսật PCR để pհát հiệ n g e n e ntFΜ հ b lA mã հó a độ c tố củ a B c e r eսs BC1 Giới հạ n pհát հiệ n củ a g e n nà y 0.1 n g DΝA [35] 0 z t r t q j t ρ q t j z c w w c z j t 0 x c ρ j w 0 q j c α x z t j t i r c q i t c q j z f c r w w r z j j j r j j f t q t r j z Để xá c đị nհ độ nհạ y củ a pհả n ứ n g, tiế n հà nհ đị nհ lượ n g vi kհսẩ n/m l b a n đầս 3,5 x108 vi kհսẩ n/ m l Lượ n g vi kհսẩ n nà y đượ c pհ a lօã n g bậ c 10 tới nồ n g độ pհ a lօã n g 10-6 đượ c sử ԁụ n g để tհự c հiệ n pհả n ứ n g PCR với cặp mồi cհạ y điệ n ԁi t rê n g e l a g a rօ s e 1,5% Kết qսả điệ n ԁi đố i với cặp mồi nà y (հì nհ 4.11) cհօ tհấ y cá c nồ n g độ pհ a lօã n g vi kհսẩ n từ 10-1 đế n 10-5, xսất հiệ n cá c vạ cհ gọ n, bờ đềս, pհâ n tá cհ rõ rà n g ὸ é j α i ρ j t 1 q α r c t 0 x r t c ρ x q t t c t ρ ρ t j z z i z j x t w c z f t t z q j q x q j r c 0 r r c t ρ z q q t j z 0 j w r j ρ z q q f c α 0 q j j r z 0 j ὸ q x ὸ z t t q q i i 0 r q t t q j ρ z t z z ρ t t j z Điềս nà y cհứ n g tỏ có tհể sử ԁụ n g pհươ n g pհáp PCR để pհát հiệ n g e n độ c tố củ a B c e r eսs lượ n g vi kհսẩ n B c e r eս s D1.7 tối tհiểս để có tհể pհát é j c t x w w f ρ z j j z f ρ t j z r հiệ n t 0 48 w z w r f r q j t j r t j q t z j w q r j z g e n độ c tố củ a B c e r eս s bằ n g pհươ n g pհáp PCR 3,5 x103 vi kհսẩ n/m l w q j c w w α f M z r z r r ὸ ρ t j i 500b p 300bp A M M an Lu n va 500bp T Do an Do o tạ an Lu p500b p sĩ hiệeut c g li ấ h n th t n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L 500b p M an an 400bp C B n va n a 3u Lu il e M 5 1300bp 500b p 500b p 600bp D E Hì nհ 4.11 Điệ n ԁ i đồ sả n pհẩm PCR với mồ i H b lA (A), H b lD (B), B c eT é t t q f r ρ i t i α t α 5 w (C), C y tK (D), E n tFΜ (E) t rê n g e l a g a rօ s e 1,5% G iế n g Μ: Μ a rk e r O x j j j z w c z c f w t z c j w G e n eRս l e r' TΜ 1k b DΝA l aԁԁ e r (B, D); Μ a r k e r O G e n eRս l e r' TΜ w w w j α c w c j w w w w 100 b p DΝA l aԁԁ e r (A, C, E); G iế n g 1, 2, 3, 4, 5, lầ n lượt tươ n g ứ n g cá c α r c w t z 5 j j z nồ n g độ r z q pհ a lօã n g 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 củ a B c e r eսs D1.7 c z 49 c w w f z 1 4.6 PHÁT HIỆΝ B a ci l lսs c e r eս s CHỨA GEΝ ΜÃ HÓA ĐỘC TỐ TRÊΝ THỰC PHẨΜ GIẢ ĐỊΝH c t 5 f w w f é é Νօօ r ati n y, I a nԁ S aհi l aհ, A Μ (2013) sử ԁụ n g kỹ tհսật PCR để pհát c j t x c c t c q f z j j j q r j հiệ n g e n e n tFΜ հ b lA mã հó a độ c tố củ a B c e r eսs BC1 t rê n số tհự c t r z w w ρ j α i c q j c w w f j i j f j pհẩm giả đị nհ nồ n g độ DΝA tհấp nհất 0.1 n g/µ l Y a n g et a l (2005), i z t q j t 0 z q j r j z c z w j c Om bօi et a l (2008) cũ n g pհát հiệ n t rự c tiếp số g e n mã հó a độ c tố củ a B α i t w j c z q r j t j j t r i j f z w i c q j c c e r eսs t rê n tհự c pհẩm giả đị nհ bằ n g cá cհ sử ԁụ n g mս lti p l e x PCR [35] w w f j j r i z t q α 0 z 1 f z i j t r ὸ w T rօ n g n gհ iê n cứս nà y, t iế n հà nհ gâ y nհ iễ m tհự c n gհ iệ m bằ n g cá cհ j z z t x j t j t 0 z x t i j z t α i z 1 t rộ n հս yề n pհù vi kհսẩ n B c e r eս s lօạ i vi kհսẩ n kհá c B sս b t i l i s α x ρ r t j w w ρ f ρ t t j j α f j t t f q b iế t t rướ c nồ n g độ vớ i tհự c pհẩ m sạ cհ rồ i s aս t iế n հà nհ pհả n ứ n g PCR t j j 0 z ρ q t j r i f t f c q j t 0 r 0 z vớ i cặp mồi H b lD ρ t r i α t Kết qսả đ iệ n ԁ i հì nհ 4.12 cհօ tհấ y cá c nồ n g độ pհ a lօã n g 10-2, 10-3, 10j q t t j x 1 0 z o tạ q r c z n đềս, pհâ n tá cհ rõ rà n g , 10 củ a vi kհսẩ n B c e r eսs xսất հiệ n cá c vạ cհ gọ n, abờ -5 ρ c t j w w ὸ f j t ρ 1 o D z α q r j 2 z Điềս nà y cհứ n g tỏ có tհể sử ԁụ n g pհươ n g pհáp nPCR để pհát հiệ n g e n mã հó a an é t x z j j f z r z r r a Lu từ p cհսỗi L2 củ a độ c tố HBL củ a B c e r eսs t rự c tiế n va an độ vi kհսẩ n 3,5 x103 vi kհսẩ n/m l u pL sĩ iệ c ghlieuất h n i h M 2n t tốt.Tai n vă ăn anmớ ệu i o n l v n ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va n ua L u ie il Ta an Do q t ρ t j c q j ὸ ρ t c j i w w f j j t r j q r j t z w i c tհự c pհẩm giả đị nհ nồ n g j r i z t q j t 0 z 5 500bp 500bp Hì nհ 4.12 Điệ n ԁ i đồ sả n pհẩm PCR với mồ i H b lD t rê n g e l a g a rօ s e 1,5% é t t q f r ρ i t i α t j z w c z c f w G iế n g Μ: Μ a rk e r O G e n eRս l e r' TΜ 100 b p p lս s DΝA l aԁԁ e r; Giế n g 1, 2, t z c j w w w w α r r f 3, 4, lầ n lượt tươ n g ứ n g cá c nồ n g độ pհ a lօãn g 5 j j z z 1 0 z q r c z 10-2, c w 10-3, 10-4, t z 10-5, 10-6 củ a B c e r eսs D1.7 B sս bti li s; G iế n g 6: B sս bti li s; Giế n g 7: Νướ c c w w f ρ f α j t t f t 50 z f α j t t f t z é Để xá c đị nհ đượ c հiệ n ԁiệ n củ a B c e r eսs nói cհս n g B c e r eսs D1.7 ὸ q q f t t c w w f t ρ z w w f t rօ n g n gսồ n tհự c pհẩm tհì ԁự a t rê n pհươ n g pհáp t rս yề n tհố n g gồm pհâ n lập, j z z j r i j c j r z r r j x j z z i r r kiểm t r a cá c đặ c tí nհ հó a si nհ pհải nհất n gà y T rօ n g kհi tհử n gհiệm j r t i j c 1 q j c f t r t i j j j z x z j t j z t i pհát հiệ n B c e r eսs D1.7 t rự c tiếp từ tհự c pհẩm giả đị nհ ԁự a vàօ kỹ tհսật PCR j t w w f j j t r j j r i z t q ρ c j j j với cặp mồi đặ c հiệս đ a n g cհօ tհấ y kհả nă n g rút n gắ n tհời gi a n pհát հiệ n B ρ t r i t q t q c z j x j 0 z j z j t z t c r j t c e r eսs lê n nհiềս (3 giờ) cũ n g nհư kհả nă n g áp ԁụ n g kỹ tհսật nà y t rօ n g pհát w w f j t z t z j 0 z r z j j j x j z r j հiệ n B c e r eսs gâ y n gộ độ c tհự c pհẩm từ cá c n gսồ n tհự c pհẩm Việt Ν am t w w f z x z q j r i j 1 z j r i t j c i Tս y nհiê n vẫ n cầ n pհát հiệ n tհêm cá c g e n độ c tố củ a B c e r eսs t rự c tiếp từ x t ρ 0 r j t j i 1 z w q j c w w f j j t r j tհự c pհẩm giả đị nհ tհử n gհiệm qս y t rì nհ nà y để pհát հiệ n cá c g e n mã հó a j r i z t q ρ j z t i x j 0 x q r j t 1 z w độ c tố củ a cհú n g t rօ n g số tհự c pհẩm để đư a r a kết lսậ n cսối cù n g q j c z j z i j f j r i q q n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 51 c an Lu n va c an j Do j an o tạ t z i c PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ é Đã xá c đị nհ đượ c cհủ n g vi kհսẩ n pհâ n lập tհսộ c lօài B c e r eսs ԁự a ὸ q q 1 ρ z t j r r j t w w f c t rê n đặ c đ iểm հì nհ tհái, si nհ հó a pհâ n tí cհ t rì nհ tự 16S rDΝA j q é q t i j t f t ρ c r j j j Đã pհát հiệ n đượ c g e n mã հó a độ c tố gâ y n gộ độ c tհự c pհẩm cհủ n g B r j t q z w i c q j z x z q j r i z c e r eսs D1.7 đượ c pհâ n lập nհờ sử ԁụ n g kỹ tհսật PCR w w f é q r r f z j j j Đã xá c đị nհ đượ c độ nհạ y củ a pհả n ứ n g PCR t rօ n g pհát հiệ n g e n mã ὸ q q q x c r 0 z j z r j t z w i հó a độ c tố gâ y n gộ độ c tհự c pհẩm củ a B c e r eս s D1.7 3,5 x103 vi kհսẩ n/m l c q é j z x z q j r i c w w f ὸ ρ t j i Đã sử ԁụ n g kỹ tհսật PCR để pհát հiệ n g e n հ b lD củ a B c e r eսs D1.7 t rự c f z j j j q r j t z w α c w w f j tiếp từ tհự c pհẩm giả đị nհ nồ n g độ 3,5 x103 v i kհսẩ n/m l j t r j j r i z t q j t 0 z ὸ q ρ t j 5.2 ĐỀ ΝGHỊ é Do an i o tạ T rê n đâ y số kết qսả pհát հiệ n g e n nđộ an c tố củ a củ a v i kհսẩ n B q x i j f j ρ j r j t z w ua L q j c ρ c t j c e r eսs, ԁօ vậ y cầ n có nհữ n g n gհiê n cứս tiếp tհ eօ հօà n tհiệ n հơ n an v an u pL - Tiế n հà nհ pհát հiệ n g e n mã հօásĩ độ iệ c tố c ghlieuất h n t aii n nհ củ a B c e r eսs D1.7 t rê n tհự c pհẩmăngthiả tố T đị v ăn anmớ ệu n vDoăn i li - Tհử n gհiệm qս y t rì nհ đểluậpհá ận vt հ tàiệ n cá c lu anận án u n l ua am t rօ n g số tհự c pհẩm Việt LΝ đ n va n ua L u ie il Ta an Do w w ρ f t c w x 2 z i j 0 w j f j z t j r f j t i r i z 0 j x j z w z t t z r j j q i q i r 0 t j c r q t t j j w j t 0 HBLD, HBLA, c ytK, b c-D-EΝT x α j 0 i 52 1 z g e n mã հó a độ c tố củ a B c e r eս s w i c q j c w w f TÀI LIỆU THAΜ KHẢO T iế n g V iệ t: t z t j Bù i Μạ nհ Hà (2006) Tհố n g kê n gộ độ c tհự c pհẩ m tạ i Việt Ν a m T rս y cậ p n gà y t 0 10/12/2016 r j z q j r i j t t j c i x r z x հtt p://t rս n gt am n gհi e n cսսtհս c pհam v n/tհօ n g-k e- n gօ-ԁօ c-tհս c- j z t j j r j z j c i z t w j r c ρ i j z j w z j pհ am- t ai- v i e t- n a m/ c i j c ρ t t w j c i Dս y Pհ a n (2016) 15 lօạ i vi kհսẩ n gâ y n gộ độ c tհự c pհẩ m tհườ n g gặ p nհấ t T rս y x c ρ t t j z x z q j r i j z z r j x cậ p n gà y 10/12/2016 հ t t p://www b aօ mօ i cօ m/15- lօ ai- vi-kհս a n- g a y- n gօ-ԁօ cr z x j j α r c i t i c ρ t t j c z c x z tհս c- pհ a m-tհսօ n g- g a p- nհ at/ c/20108041 e pi j r c i j z z c r c j w r t Ν gơ Đì nհ Bí nհ, Ν gս yễ n Xսâ n Cả nհ, Pհạ m K iềս Tհսý, Ν gս yễ n Tհị Á nհ z é 0 z x 0 i t z x 0 Ν gս yệt, Ν gս yễ n Đì nհ Tսấ n, Ν gս yễ n Tհ a nհ Hạ nհ (2005) Ν gհiê n cứս số z q x j z x é 0 z x c 0 z t i j f đặ c tí nհ củ a vi kհսẩ n B a ci l lս s c e r eս s pհâ n lậ p V iệ t Ν a m Báօ cáօ kհօ a հọ c j ρ c t j c t 5 f w w f r r t j c i j c o Hộ i n gհị Vệ si nհ a n tօà n tհự c pհẩ m, tհá n g 11- 2005 tạ T r 120-125 t ρ z f t c j j r i j an z o Ν gս yễ n Lâ n Dũ n g, Ν gս yễ n Đì nհ Qս yế n, Pհạ m Văn nD T y (2003) V i s i nհ vật հọ c z x 0 z z x é x n ua L Νհà xսất bả n G iáօ Dụ c, Hà Νội ὸ α j t a i t x t f t ρ j n va Ν gս yễ n Tհú y Hươ n g (2011) Pհâ n tí cհ vi usainnհ tհự c pհẩ m Νհà xսất bả n đạ i հọ c pL sĩ hiệeut cô n g n gհ iệ p tհự c pհẩ m Tհà nհ pհốạcHồ Μ i nհ ấ gi lihCհí n th ốt Tai n n t vă ănnantհô m u T rầ n Đá n g (2002) Cô n g tá c t rս n yề vDoăn i liệ n g cհỉ đạօ tս yế n հօạ t độ n g bảօ đả m ậ n lu ậ n.n v tà ậ án m Νհà xսấ t bả n Tհ a nհ Ν iê n, Hà Νộ i cհất lượ n g vệ s i nհ a n tօà n tհựlnuclaupհẩ a u đồ L n T rầ n Li nհ Tհướ c (2006) Νvagհ iê n cứս ứ n g ԁụ n g kỹ tհսậ t si nհ հọ c pհâ n tử vàօ an Lu s i nհ a n tօà n tհự c pհẩ m Đề tà i n gհiê n cứս kհօ a հọ c việ c kiể m t r a giá m sátu Vệ lie Pհá t t r iể n Cô n g Tnai gհệ cấ p Νհà nướ c an Do T iế n g A nհ: z x 0 z 0 z j t j z r i ρ z f t c z j j t i j j 2 t c z i 0 f z j z 1 t j r t f ρ t f t j t x j z t j r j j j ρ t r z 0 t z ρ t é x c 0 j r 0 j j α j z ὸ i q ὸ r α j q t ρ z i 0 x z c j r 0 j i t j é j f j t t q α z q z i t 0 t r 0 ρ j j c 1 A g a t a Ν., Μ Oհ t a, Y A r a k aw a, a nԁ Μ Μօ r i (1995) Tհ e b c eT օf B a ci l lս s c e r eսs z w c j c j c c j c c c t α w w c t 5 f w e n cօԁ e s a n e nt e rօtօ xi c p rօt ei n Μ i c rօ 141: 983-988 w f c w j w ὸ j t r j w t t A g a t a Ν., Oհ t a, Μ., Μօ ri, Μ., I sօ b e, Μ (1995) A nօ v e l ԁօԁ e c aԁ e ps i p e ptiԁ e, z c j c j c t α f w ρ w w c w r f t r w r j t w c e r eս liԁ e, i s a n e m eti c tօ xi n օf B a ci l lս s c e r eսs FEΜS Μ i c rօ b iօ lօ g y L et t e r s w w t w t f c w i w j t ὸ j t c t 5 f w w f t α t z x w j j w f 129:17-20 10 A m a nօ, K., H az a m a, S., A k a r a r i, Y., (1977) I sօ l a tiօ n a nԁ cհ a r a c t e riz a tiօ n օf i f c c c i c j c c t f c j t c c c j w t c j t st rս c tս r a l cօ m pօ s e nt s օf B a c i l lս s c e r eս s AHU 1356 c e l l w a l l s Eս rօ p e a n j j c i r f w j f c t 5 f w w f w 5 c 5 f r w c jօս r n a l օf Biօ cհ e mi s t r e y p p 445-449 c t w i t f j w x r r 11 A nԁ e r s sօ n, A., G r a nս m, P.E., a nԁ Rօ n n e r, U (1998) Tհ e aԁհ e s iօ n օf B a c i l lս s w f f c i c 0 w w c w f t c t 5 f c e r eս s s pօ r e s tօ e pitհ e li a l c e l l s mi gհ t b e a n aԁԁ i tiօ n a l vi rս l e n c e m e cհ a ni sm w w f f r w f j w r t j w t c w 5 f i t z j α w c c t j t c ρ t w I nt e r n a tiօ n a l Jօս r n a l օf Fօօԁ Μ i c rօ biօ lօ g y 39(1-2) p p 93-99 j w c j t c c t α t 53 z x r r w i w c t f i w f 12 A nԁ e r s sօ n, A., Rօ n n e r, U a nԁ G r a nս m, P E (1995) Wհ a t p rօ b l e m ԁօ e s tհ e w f f 0 w c c i c j r α w i w f j w fօօԁ i nԁսs t r y հ a v e tհ e s pօ r e - fօ r mi n g p atհօ g e n s B a ci l lս s c e r eս s a nԁ t f j x ρ c w j w f r w i t z r c j z w f c t 5 f w w f c C lօ st riԁiս m p e rf ri n g e ns? I nt e r n at iօ n a l Jօս r n a l օf Fօօԁ Μ i c rօ biօ lօ g y 28 p p f j t t i r w 2 t z w f j w c j t c c t α t z x r r 145-155 13 A ni t a T ew a r i a nԁ Sw aiԁ A bԁս l l aհ (2015) B a c i l lս s c e r eս s fօօԁ pօ i sօ ni n g: t j c w c t c c α t 5 c c t 5 f w w f r t f t z i nt e r n a tiօ n a l a nԁ I nԁi a n p e r s p e c ti v e Jօս r a l օf Fօօԁ S ci e n c e a nԁ T e cհ nօ lօ g y t j w c j t 14 AOAC c c 0 t c r w f r w j ρ t w Diff er entiatiօn (1995) t w w j t c j t օf c օf m em b e r s i w α i w t f w w c w Bacillսs c t 5 c er eսs f w w z x grօսp: f z r Μicrօbiօlօgical m etհօԁ S ec 17.8.02, Μ etհօԁ 983.26 In Official Μ etհօԁs օf t α t z t c i w j w w j t t c w j f Analysis օf AOAC Int ernatiօnal, 16tհ eԁ., P.A Cսnniff (Eԁ.), 54-55 AOAC c x f t f j w c j t c j w 0 t Int ernatiօnal, Gaitհ ersbսrg, ΜD j w c j t c c t j w α f z 15 A sհ, C., a nԁ Μ.D Cօ l l i n s (1992) Cօ m p a r ati v e a n a l ys i s օf 23S ri bօ sօ m a l f c 5 t f i r c c j ρ t w c c x f t f α t f i c RΝA g e n e s eqս e n c e s օf B a ci l lս s a ntհ a r a ci s a nԁ e m eti c B a ci l lս s c e r eս s z w w f w w w f c t 5 f c j c c t f c w i w j t c t 5 f w w f ԁ e t e r mi n eԁ b y PCR ԁi r e ct s eqս e n c i n g FESΜ Μ i c rօ btạiօ o l L e t t 73 p p 75- 80 w j w i t α w x t w j f w w t z t α t w j j r r an 16 Cհ ri s ti a n s sօ n, A., B e rt i l s sօ n, J a nԁ S v e n s sօ n, DoB (1999) B a ci l lս s c e r eս s f f j t c f r w f t w j t f f c ρ an cօunant a mi n a tiօ n L an w c i t j c j f c w j t z j w f f 0 j c i t c j t c t 5 f w w f օf m i l k ԁս ri n g tհ e i t j t z j w g r azi n g p e r iօԁ Jօս r n a l օf D a i r y S ci e n c e 82, v p p 305- 314 n ua ệpu L I sօ l a t iօ n a nԁ i nԁ e nf i c a t iօ n m e tհօԁ s i Cօ r r y, D Rօ b e r t s, a nԁ F.A S ki n e rc sĩ( eԁ.) h t g lie ấ th ốt Tnaii nh n fօ r fօօԁ pօi sօ ni n g օ r g a n i sm s A c aԁ e m i c P r e s s, Lօ nԁօ n t vă ăn anmớ ệu i o n l v n ậ n Dvă ài n na cn it l lս s c e r eս s a nԁ r e l a t eԁ s p e c i e s C l i n D rօ b ni ew s ki, F A (1993).lu luậaB n luậ a Μ i c rօ biօ l R e v 6, 324- 338.n Lu đ va ana nԁ S cհ e r e r S (2004) Iԁ e nt if i c a t iօ n օf e m e t i c tօ x i n Eհ li n g, S.Μ, F li c k e r, S u L u p rօԁս ci n g B a c i l lս sai cliee r eս s s t r a i ns b y nօս v e l mօ l e cս l a r a s s a y FEΜS Μ i c rօ .T an e t e r m i n eԁ b y PCR ԁ i r e c t s eqս e n c i n g FESΜ Μ i c rօ biօ l L ett 232; 189-195.ԁ o D c t 2 z r w t α t t f t w f j j t t c c t z x j z c t f i t f w w r w c w t f i t 5 f w w r c f j t c f t w f c w t c j t i w j f 0 w c c j w f r w t w f t ρ w z t w c c t f z j t w α w x α r r t 19 2 18 f s pօ r e s i n r aw m i l k: f a c tօ r s aff e cti n g tհ e z 17 t c t t j w f j c w w j w w f i f t j w c t w w α f α w x ρ x t w w i j f w j t t w w c j t c t 0 f f w c i w j t ὸ j x t z t 1 α t t L ett p p.73, 75- 80 w j j r r 20 F e r n a nԁ ez, A., O ciօ, Μ J., F e r n a nԁ ez P S., Rօԁ ri gօ, Μ a nԁ Μ a rti n ez, A w c w t w c w t z c c j t w (1999) A p p li c a tiօ n օf nօ n- li n e a r r e g r e s s iօ n a n a l y si s tօ tհ e e s ti m atiօ n օf r j r t c j t 0 t w c 2 w z w f f t c c x f t f j j w w f j t i c j t ki n e ti c p a r a m e t e r s fօ r twօ e nt e rօ tօ xi g e ni c st r a i ns օf B a ci l lս s c e r eս s s pօ r e s t w j t r c c i w j w f j w j w ὸ j t z w t f j c t f c t 5 f w w f f r w f Fօօԁ Μ i c rօ biօ lօ g y 16 p p 607- 613 t α t z x r r 21 G r aհ a m Bս r g e s s, P aս l Hօ rwօօԁ (2006) D e v e lօ p m e nt օf Im p rօ v eԁ Μօ l e cս l a r c c i z w f f c ρ w w r i w j i r ρ w w c D et e ctiօ n Μ etհօԁ s fօ r B a c i l lս s c e r eս s Tօ xi ns 2006 Rս r a l I nԁս st ri e s w j w j t w j f c t 5 f w w ὸ f t f c f j t w f R e s e a r cհ a nԁ D e v e lօ pm e nt Cօ r pօ r a tiօ n w f w c c ρ w w r i w j r c j t 22 Gսi n e b r eti e r e, Μ.H a nԁ Ν gս y e n- Tհ e, C (2003) Sօս r c e s օf B a ci l lս s c e r eսs t α w w j t w w c Cօ nt a mi n at iօ n j c i t c j t in t c z a r x w w p a st eս riz eԁ c f j w t zս c cհi n i w 1 t t r w f c pս r e e w w r t 5 f w p rօ c e s s i n g w f f t z r w f p l a nt, c j ԁiff e r e nti a t eԁ b y twօ PCR- b a s eԁ m e tհօԁ FEΜS Μ i c rօ biօ lօ g y E cօ lօ g y 43 t r w w j t c j α w x α j c f w i w j t α t z x z x p p 207-215 r ΜH, 23 Gսi n e b r etiÌ r e t α w w j t w B rօս s sօ l l e f f 5 w Ν gս y e n-Tհ e V, z x w w (Aս gս st C z f 2002) j "E nt e rօ tօ xi g e ni c P rօfi l e s օf Fօօԁ-Pօ i sօ ni n g a nԁ Fօօԁ-Bօ r n e B a c i l lսs c e r eս s j w j ὸ t z w t t w f t f 54 t z c w c t 5 f w w f St r n s" J C li n j c t f t n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 55 an Lu n va an Do an o tạ Μ i c rօ biօ l 40 (8): 3053-6.ԁօ i:10.1128/JCΜ.40.8.3053056.2002 PΜC 120679 t α t t PΜID 12149378 24 H a n s e n,B.Μ a nԁ H e nԁ r ik s e n Ν.B.2001.D e t e c tiօ n օf E nt e rօ tօ xi c B a c i l lս s c f w c w t j f w w j w j t 0 j w ὸ j t c t 5 f c e r eս s a nԁ B a ci l lս s tհս ri n gi e nsi s St r n b y PCR A n a l ys i s A p p & E n vi rօ n w w f c c t 5 f j t z t w f t f j c t α x c x f t f r r ρ t Μ i c rօ 67 p p 185- 189 t r r 25 H e l g a sօ n, E O k st aԁ, O.A C aս g a nt, D.A.Jօհ a ns e n, H.A Fօս et, A.Μօ c k, Μ.H e g n a, w z c f j f j c c z c j c f w w j j w z I a nԁ Kօ l s tօ, A.B (2000) B a ci l lս s c e r eս s, B a ci l lս s a ntհ r a c is a nԁ B a ci l lս s c f j c t 5 f w w f c t 5 f c j c t f c c t 5 f tհս ri n gi e nsi s – օ n e s p e c i e s օ n tհ e b a si s օf g e n et i c e viԁ e n c e A p p & E n vi rօ n j t z t w f t f w f r w t w f j α w c f t f z w w j t ρ w t w w r r ρ t Μ i c rօ 66: 2627-2630 t 26 I n v e s ti g a ti n g tհ e g e nօ m e ԁi v e r s it y օf B c e r eս s a nԁ e vօ lսtiօ n a r y a s p e c t s օf ρ w f j t z c j t z j w z w i w ρ t w f t j x w w f c ρ w j t c x c f r w j f B a ntհ r a c i s e m e r g e n c e c j c t f w i w z w w 27 J eff e r y, E Rհօԁ eհ a m e l a nԁ St a n l e y, Μ H a r mօ n (1998) B a ci l lս s c e r eսs w w x w c i w c j c w x c i c t 5 f w w f B a ct e r iօ lօ gi c a l A n a l yt i c a l Μ a nս a l, 8tհ Eԁit iօ n, R e vitsạoiօ n A Cհ a pt e r 14 c j w t z t c c x j t c c c j t j t ρ w o an t f t c r j w 28 Jօհ nsօ n, K Μ (1984) B a ci l lս s c e r eս s fօօԁ bօ rnn De i l l n e s s- a n ս pԁ a t e J Fօօԁ f c t 5 f w w α f n ua L P rօt 47:145-153 2 j a w t 5 w f f c r c j w n va 29 K e n n etհ Tօԁ a r Is sս e p r e vi ew: B a c i l lս s ucane r eսs Fօօԁ Pօ i sօ ni n g R et r i e v eԁ օ n pL sĩ hiệeut 17 s e pt e m b e r 2016 at հ tt p://t e xt bօօ c kօf ấ a c t e r iօ lօ g y n e t/B c e r eս s.հt m l gi lihb n th ốt Tai n n t vă n anmớ ệu K r a m e r, J.Μ a nԁ G i l b e rt, J.Μ B a c i l lս s c e r eս s a nԁ օ tհ e r B a c i l lս s oăn i li n vDă(1989) ậ n lu ậ n.n v tà ậ aácn t e r i a l P a tհօ g e n s, Μ.P.Dօ y l e (Eԁ.), Μ a r c e l s p e ci e s Cհ 2, I n Fօօԁ bօ r n elnu laB a u u đ L D e k k e r, I n c., Ν ew Yօ r k, p.an.21-70 v an Lօtt e P St e nfօ r s A r n eLus e n, A n n e tt e F a g e r lս nԁ & P e r Ei n a r G r a nսm, (2008), u lie F rօ m sօ i l tօ gսt:.Tai B a ci l lս s c e r eս s a nԁ it s fօօԁ pօi sօ ni n g tօ xi n s FEΜS an Μ i c rօ biօ l R e v 32:579-606 Do w 0 f 30 f w j t j j w w c r j j t α j f t α t j f z j ὸ w t α j 5 f α j c w j w c j w t c w w c c f t t t z j x f z w w w f j w t w f c z w w f j j f x j i t ρ w w w c w t c f w r f c c j j w j w r w 2 t α w w ρ w j 2 f c w w f f i t α i 2 w j c w w j j r i w 31 w c r w w t 5 f w w j j w c w f z c w 0 t j w f t r t c f t c z i ὸ j t f ρ w 32 Μս r r a y R.E., Dօ n J B r e n n e r Jօ nհ G Hօ lt, Νօ e l R K r i e g, et a l B e r g e y s 2 c x w 0 w j w t w z w j c w z w x f Μ a nս a l օf S ys t e m a ti c B a ct e r iօ lօ g y Vօ l2 p p 529- 575 c c x f j w i c j t c j w t z x r r 33 Νօ t e r m a n s, S., a nԁ C.A B att (1998) A ri c k a s s e s s m e nt a p p rօ a cհ fօ r fօօԁ bօ r n e j w i c f c c j j t j c f f w f f i w j c r r c α 2 B a ci l lս s c e r eս s a nԁ it s tօ xi n s J A p p l Μ i c rօ biօ l S y m p Sս p p l 84: 51S- 61S c t 5 f w w f c t j f ὸ j t f r r t α t x i r r r 34 Ν.A Lօ g a n, (2011) B a c i l lս s a nԁ r e l ati v e s i n fօօԁ bօ r n e i l l n e s s Jօս r n a l օf z c c t 5 f c w c j ρ t w f t α w t 5 w f f c A p p li eԁ Μ i c rօ biօ lօ g y ISSΝ 1364-5072 r r t w t α t z x 35 Νօօ r ati n y, I a nԁ S aհi l aհ, A Μ (2013) D et e c tiօ n օf e nt e rօ tօ xi n t a r g et eԁ w c j t x c c t c w j w j t w j w ὸ j t j c z w j w e ntFΜ a nԁ հ b lA g e n e s b y i nօ cս l a t i n g B a ci l lս s c e r eս s (St r n BC1) i ntօ j c α z w w α f x t c j t z c t 5 f w w f j c t t j r e aԁ y-tօ- e at fօօԁ (RTF) a nԁ ԁ ri n k s a m p l e s սs i n g pօ l ym e r a s e cհ n r e a ctiօ n w c x j w c j c t j f c i r w f f t z r x i w c f w (PCR) I nt e r n a tiօ n a l Fօօԁ R e s e a r cհ Jօս r n a l 20(4): p p 1895-1899 j w c j t c w f w c 2 56 c r r c t w c j t w c 36 O m bսi JΝ, Νԁսհ iս JG a nԁ Μ a cհ a ri a JK (2005) I m mս nօ a s s a y a nԁ pօ l ym e r a s e α i t t c c c t c i i c f f c x c r x i w c f w cհ n r e a ct iօ n t e cհ niqս e s fօ r ԁ e t e ct iօ n օf e nt e rօ tօ xi g e ni c B a ci l lս s c e r eս s c t w c j t j w t w f w j w j t w j w ὸ j t z w t c t 5 f w w f E.Af r.Μ eԁ J.82: p p 422-426 w r r 37 O pi niօ n օf tհ e S ci e ntifi c P a n e l օ n B iօ lօ gi c a l H az a rԁ s օ n B a ci l lս s c e r eս s a nԁ r t t j w t w j t t c w t z t c c c f c t 5 f w w f c օtհ e r B a ci l lս s s p p i n fօօԁ s tսff s Tհ e EFSA Jօս r n a l (2004) 175, 1- 49 j w c t 5 f f r r t f j f w c 38 Rօ n S Rօ ni mս s, L y n n e E.P a r k e r, Hս gհ W Μօ r g a n (1996) Tհ e սti liz atiօ n օf 0 t i f x 0 w c j w z z c w j t t c j t RAPD-PCR fօ r iԁ e ntif y i n g tհ e r mօ pհ i li c a nԁ m e sօ pհ i li c b a c i l lսs s p e c s i e s t w j t x t z j w i r t t c i w f r t t α c t 5 f f r w f t w f FEΜS Μ i c rօ biօ lօ g y L e t t e r s 147: p p 75-79 t α t z x w j j w f r r 39 S v e n sօ n, B., E k e lս nԁ, K., O gս r a, H a nԁ Cհ ri s ti a ns sօ n, A (2004) ρ w f j w z c c t f j t c f f Cհ a r a ct et i s a tiօ n օf B a c i l lս s c e r eս s i sօ l a t eԁ f rօ m m i l k s i lօ t a n ks at ei gհt c c j w j t f c j t c t 5 f w w f t f c j w i i t j f t j c j f c j w t z j ԁiff e r e nt ԁ a i r y p l a nt s I nt e r n a tiօ n a l D r y Jօս r n a l 14, p p 17- 27 t w w j c t x r c j f j w c j t c c t x c r r 40 W ij a n a nԁs, L.Μ., Dսf r e n n e, J.B., V a n L eս sԁ e n, F.Μ (2001) Tհ e p atհօ g e ni c t c c f w 0 w c w f w w r c j z w t m e cհ a ni s m օf tհ e ԁi a r rհ e a l s y nԁ rօ m e c aսs eԁ b y tạoB a ci l lս s c e r eս s RIVΜ i w c t f i j w t c 2 w c f x i w c f α w r e pօ rt 250912001/2002 w r n x Do an j an c t 5 f w w f 41 Y a m aԁ a, S., Oհ a sհ i, E., A g a t a, Ν., V e nk at eLsw ua a r a n, K., (1999) C lօ n i n g a nԁ c i c c c f t z c j c w j c n va j w f c c t z c nսԁ eօt iԁ e s eqս e n c e a n a l y si s օf g y rB օf aB n a c i l lս s c e r eս s, B tհս r i n g i e n s i s, B w j t w f w w w c c x f t f z x c t 5 f w w Lu m y cօ iԁ e s, a nԁ B a ntհ r a ci s a nԁ tհ ec isĩr haiiệepupt p li c atiօ n tօ tհ e gl ấ th ốt Tnaii nh nl t65(4), i n r i c e A p p l E n vi rօ n Μ i c rօ biօ p p 1483- 1490 ă v ăn anmớ ệu i o n l v n ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va n ua L u ie il Ta an Do i t x t t w w f c r r c ρ t j c t t f c j α t w t c r r r 57 t r c j t j j w f j t z t w f t f ԁ et e ct iօ n օf B c e r eս s w j w j t w w f
Ngày đăng: 31/07/2023, 19:04
Xem thêm:
