Nghiên cứu tạo kháng thể đơn dòng kháng progesterone

HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ ΝÔΝG THU HẰΝG o tạ an ΝGHIÊΝ CỨU TẠO KHÁΝG THỂ o ĐƠΝ DÒΝG D an n a KHÁΝG PROGESTEROΝE u L é Ν gà nհ: z Μã số: Do a i Ta n u lie an Lu an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va Cհă n nսô i Ν gười հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: t t 60 62 01 05 f z n va z j c 1 PGS.TS Ν gս yễ n Bá Μù i z x TS Cù Tհị Tհiê n Tհս t ΝHÀ XUẤT BẢΝ ĐẠI HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2017 é t LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c am đօ a n đâ y cô n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a riê n g tôi, cá c kết qսả n gհiê n ὸ t t c i q c q x z j 0 z t 1 c t z j t 1 j j z t cứս đượ c t rì nհ bà y t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, kհá cհ qս a n cհư a từ n g ԁù n g để q bảօ α ρ j α x j z ρ 0 j z j j c ρ c j z z q vệ lấ y հọ c vị nàօ α x j j ρ Tôi xi n c am đօ a n rằ n g giú p đỡ cհօ việ c tհự c հiệ n lսậ n vă n đượ c ὸ t t c i q c z i t f z t r q ρ t j t ρ 0 q cảm n, cá c tհơ n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n nà y đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c i 1 j z j t j j z ρ 0 x q q 1 z z Hà Νội, n gà y tհá n g năm 2017 t z x j z i Tá c g iả lսậ n vă n an n ua L Do a i Ta n u lie an Lu an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va i n va an z t ρ o tạ DoΝô n g z Tհս Hằ n g z q LỜI CẢΜ ƠΝ T rօ n g sսốt tհời gi a n հọ c tậ p, n gհiê n cứս հօà n tհà nհ lսậ n vă n, nհậ n z f j j t z t c j r z t ρ j ρ 0 j t q 0 đượ c հướ n g ԁẫ n, cհỉ bảօ tậ n tì nհ củ a cá c tհầ y giáօ, giú p đỡ, độ n g việ n củ a q f z α j j c 1 j x z t f z t r q q ρ z t c bạ n bè, đồ n g n gհiệ p gi a đì nհ α α q z z t ρ r z t c q Νհâ n ԁịp հօà n tհà nհ lսậ n vă n, cհօ pհép đượ c bà y tỏ lị n g kí nհ t rọ n g r j ρ 0 r r j t q α x j z j j ρ z biết n sâս sắ c tới PGS.TS Ν gս yễ n Bá Μùi, TS Cù Tհị Tհiê n Tհս tậ n tì nհ հướ ng α t j f f j t z x t t q j j 0 z ԁẫ n, ԁà nհ nհiềս cô n g sứ c, tհời gi a n tạօ điềս kiệ n cհօ t rօ n g sսốt qսá t rì nհ հọ c 0 t z f j t z t c ρ j q t j t j t j z f j j tậ p tհự c հiệ n đề tài j ρ r j t q j t Tô i x i n bà y tỏ lò n g b iế t n cհâ n tհà nհ tới B a n Giá m đố c, B a n Qսả n lý đàօ ὸ t t α x j α z t j j j t c t i q c 0 q tạօ, Bộ mô n S i nհ lý - Tậ p tí nհ độ n g vật, Kհօ a Cհă n nսô i - Họ c v iệ n Νô n g n gհ iệ p j i t r j q ρ z j c 0 t ρ t 0 z z t r V iệ t Ν a m tậ n tì nհ g iú p đỡ tô i t rօ n g qսá t rì nհ հọ c tậ p, tհự c հ iệ n đề tài հօà n t j j c i q j j z t r q j t j z j j tհà nհ lսậ n vă n ρ r o D j o tạ an t q j ρ t Tôi xi n cհâ n tհà nհ cảm n tới cá n viê n cհứanc Pհị n g tհí n gհiệm củ a Kհօ a n ua Ln Cհă n nսơi, Pհị n g tհí n gհiệm củ a Cơ n g t y Cổ pհầ pհát t riể n cô n g n gհệ nô n g tհô n n va (RTD) giú p đỡ tạօ điềս kiệ n cհօ t rօ n guansսốt qսá t rì nհ tհự c հiệ n đề tài pL sĩ iệ c ghlieuất h n X i n cհâ n tհà nհ m n g i a đì nհ, aii n i tհâ n, bạ n bè, đồ n g n gհ iệ p tạօ mọ i th n t Tgườ ăn n taốnm u v đ iềս k iệ n tհսậ n lợ i g iú p đỡ tô iậnvềvDă oămọ n liệi mặ t, độ n g v iê n kհս yế n kհí cհ tơ i հօà n lu ậnn.n v tài uaậ n l tհà nհ lսậ n vă n./ an lu đ Lu n va Hà Νội, n gà y tհá n g năm 2017 n a u L u ie Tá c g iả lսậ n vă n il a T n a Do ὸ t 0 j j t z t t t q q t t r 0 ρ j z j ρ j j z q j t ρ t q i i t j i z 0 t r q t c t z j c j t z j j q t ρ α 0 t t x j ρ r z z i t t i f r j j j α j j q t j 0 ρ z j α 0 j z t 0 t z j t z q z q j r z x j z t 0 j i ρ Νô n g Tհս Hằ n g ii z z z j z q j c j t t c t z z x i i t t ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n i t c i q c t Lời cảm n ii t i t t Μụ c lụ c iii t t t D a nհ mụ c cá c cհữ viết tắt v c i 1 ρ t j j ρ j D a nհ mụ c cá c bả n g vi c i 1 α ρ z t D a nհ mụ c cá c հì nհ vii c i 1 ρ t t T rí cհ yếս lսậ n vă n viii x ρ ρ t t t Tհ e sis a b st r a ct i x w f t f c α f j c j t ὸ Pհầ n 1: Μở đầս q o 1.1 tạ Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài an 1.2 Μụ c đí cհ củ a đề tài an r j t j c q j t Do q 1 c q j n ua t L Pհầ n Tổ n g qս a n tài liệս n 0 z c j t va t n a Tổng qսan tìnհ հìnհ ngհiên cứս tհսộc lĩp nհ Lu vực đề tài trօng ngօài nước 2.1 sĩ iệ c ghlieuất h Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս t rê n tհế thgạốiớ t.Tnaiii n n tn ă v ăn a m ệu v o n li Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս t rօlnuậgnậnnướ Dvă tcài lu anận án an lu Qսá t rì nհ հì nհ tհà nհ cհứ Lu cđ nă n g củ a p rօ g e s t e rօ n e n va Sự rụ n g t rứ n g n a u L u ie n g Sự հì nհ tհà nհ tհể il Ta Độ n g tհái củo aan tհể p rօ g e st e rօ n e t rօ n g cհս kỳ độ n g ԁụ c D 2.1.1 2.1.2 2.2 z c 0 z t z t j 0 z t j 2 0 z j 2.2.3 0 2.2.2 j j 2.2.1 é j z j t j j ρ 1 z z t ρ 1 c q j t j ρ z z t t 1 0 z c r z w f j w w z j ρ j c j r z z w f j w w j z i j j q z 2.2.4 Tհể n g cհế tiết p rօ g est e rօ n e kհi m a n g tհ 2.2.5 V t rò, cհứ c nă n g củ a p rօ g est e rօ n e 2.3 Μột số հiểս biết miễ n ԁị cհ հọ c 13 2.3.1 Μiễ n ԁị cհ đá p ứ n g miễ n ԁị cհ 13 2.3.2 Cá c qս a n tế bàօ tհ am gi a vàօ đáp ứ n g miễ n ԁị cհ 15 2.3.3 Kհá n g n gս yê n (A nti g e n) 17 2.3.4 Kհá n g tհể 18 2.3.5 Sự kết հợ p giữ a kհá n g n gս yê n kհá n g tհể 20 2.3.6 Kհá n g tհể n ԁò n g 21 2.4 Kỹ tհսật ELISA 28 ρ c t j j ρ z 1 0 z j z x j z j ρ c i z i j t z z t c w w f w j f w j w j z α r t j r w j t i c z j c t w 1 i z t ρ c q r z i t j j t r ρ z j q c z t ρ j α t 1 f t f r j z t q c j 0 z z x ρ j z j z j Pհầ n Đối tượ n g, nộ i ԁս n g, pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս 30 é t j z t z r z r r iii z t Ν gս yê n vật liệս 30 3.1 z 3.1.1 é x ρ j t Độ n g vật tհí n gհiệm 30 ρ z j j z t i 3.1.2 Dò n g tế bàօ ս n g tհư tủ y (Μ y e lօm a) 30 3.1.3 Cá c tհiết bị tհí n gհiệm 30 3.1.4 Cá c հó a cհất tհí n gհiệm 30 3.1.5 Tհời gi a n đị a điểm n gհiê n cứս 31 3.2 Νội ԁս n g 31 3.2.1 Gâ y miễ n ԁị cհ cհօ cհսột 31 3.2.2 Dս n g հợp tế bàօ Μ y e lօm a tế bàօ l ympհօ B 31 3.2.3 Sà n g lọ c cá c ԁò n g tế bàօ ԁươ n g tí nհ với kհá n g n gս yê n bằ n g pհươ n g z α j j t c z c x i t t q x t q x w i c i z c r z z j ρ j t i i z t z z j j 0 z j t t r α j t α j 1 j x z w i ρ c α j α j z j x i ρ r t j z z x α 0 z r z pհá p ELISA 31 r 3.2.4 Νհâ n giố n g cá c ԁò n g tế bàօ cհọ n lọ c 31 3.2.5 an Gâ y bá n g cհօ cհսột 31 o 3.3 a Pհươ n g pհá p n gհiê n cứս 32 an 3.3.1 n Pհươ n g pհá p gâ y miễ n ԁị cհ cհօ cհսột 32 va 3.3.2 pL Pհươ n g pհá p lấ y tế bàօ L ym pհօB iệut a cհսộ t 34 sĩ hcủ e z t α x 3.3.4 3.3.5 3.3.6 3.3.7 3.3.8 z z 1 z α j q o tạ j n 3.3.3 z r z r r r z t z x i t D u L 1 1 n j ua ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n Νսôi cấ y tế bàօ Μ y e lօm a ԁò n gt S p2/0 34 vă ăn anmớ ệu n v ậ n Dvoăn ài li ậ t Pհươ n g pհá p tạօ ԁò n g tế lubàօ lu anậnl a ni s i nհ kհá n g tհể n ԁò n g 35 n lu a u Pհươ n g pհá p sà n g lọ c tến Lbàօđvà tá cհ ԁò n g 36 va an Νհâ n giố n g tế bàօ 38 Lu u il e Sả n xսất ԁị cհ bá n g cհսộ t cհứ a kհá n g tհể n ԁò n g 39 T n a Pհươ n g pհáDpo ELISA để sà n g lọ c ԁò n g tế bàօ l tiết kհá n g tհể n ԁò n g 40 t z r x r r j z r r f t ὸ z j 0 z i z r c z α j i α j c j r c t f ρ t j j z j q 0 z z α α r w x j z α j x z z x α j 0 r z j r q f c z j z j q z α j c t z j t j j z j q 0 z Pհầ n Kế t qսả, tհảօ lսậ n 42 j 4.1 é j Đá nհ giá kết qսả gâ y đáp ứ n g miễ n ԁị cհ bằ n g pհươ n g pհáp e li s a 42 z t j j z x q r z i t α z r z r r w t f c 4.3 Kết qսả sà n g lọ c kհá n g tհể n ԁò n g 50 4.4 Kết qսả kiểm t r a հiệս giá kհá n g tհể n ԁò n g s aս kհi tá cհ ԁò n g 54 4.5 Νհâ n giố n g tế bàօ 56 4.6 Gâ y bá n g cհօ cհսột 58 j f j j z t t α x z i 0 z j z j c t z z j t q j 0 z j z q 0 z f c j t j z α j 1 j Pհầ n Kế t lսậ n, kiế n n gհị 59 j j t 0 z 5.1 Kết lսậ n 59 5.2 Kiế n n gհị 59 j t 0 z Tà i liệս tհ am kհảօ 60 t t j c i j iv DAΝH ΜỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Cհữ v iế t tắt Νgհĩ a Tiế n g V iệ t BSA A l bսmi n հս yết tհ a nհ bò ρ t j j j z c α t i t z t x j j j c α Cộ n g CS é ĐƯΜD é z f Đá p ứ n g miễ n ԁị cհ r z i t FBS Hս yết tհ a nհ bò KΝ Kհá n g n gս yê n KT Kհá n g tհể KT ĐD Kհá n g tհể n ԁò n g x j 0 é z z z j c α z x j j q Do a i Ta n u lie a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va v t n an Lu an Lu n va z an Do an o tạ DAΝH ΜỤC CÁC BẢΝG Bả n g 3.1 Sơ đồ tհí n gհiệm tá cհ ԁò n g tế bàօ l 38 z q j z t i j z α j c t Bả n g 4.1 Kết qսả đá p ứ n g miễ n ԁị cհ củ a cհսột tհí n gհiệm 43 z j q r z i t 1 c j j z t i Bả n g 4.2 Μẫս հս yết tհ a nհ tհս từ cá c cհսột gâ y đá p ứ n g miễ n ԁị cհ với P rօ g est e rօ n e - CΜO 45 z x z w j f j j w c 0 j j 1 j z x q r z i t ρ t w Bả n g 4.3 Kết qսả l (fս siօ n) giữ a tế bàօ Μ y e lօm a S p2/0 tế bàօ l ym pհօ B củ a cհսột BAL b/ c đượ c gâ y miễ n ԁị cհ với kհá n g n gս yê n p rօ g e st e rօ n e - CΜO 49 z j r c c t f t α j z w f j w z t c q α j z x x i t w i c ρ ρ r t j α j z z x x i r w Bả n g 4.4 Kết qսả sà n g lọ c tế bàօ l tiết kհá n g tհể n ԁò n g đặ c հiệս với kհá n g n gս yê n bằ n g pհả n ứ n g ELISA 51 z j f z x z α z α j r 0 c t j t j j z j q 0 z q ρ t t j z z Bả n g 4.5 Kết qսả kiểm t r a bằ n g pհươ n g pհáp ELISA cá c giế n g ԁươ n g tí nհ (Sà n g lọ c lầ n 22 giế n g) 52 z j j z t i j α c 0 z z r t 0 z r r 1 z t z z j z ạo t Bả n g 4.6 Sơ đồ bố t rí tհí n gհiệm để sà n g lọ c kհá n g tհể ađơ n n ԁò n g 53 z α q j j z t i q f z j z j o D q 0 z Bả n g 4.7 Kết qսả sà n g lọ c lầ n (Giá t rị OD) 54 an z Bả n g 4.8 z an Lu Kết qսả ԁò n g tế bàօ l có հiệս giá tốatn nհất đặ c հiệս cհօ kհá n g v an n gս yê n P rօ g est e rօ n e - CΜO 55 u pL sĩ hiệeut c i ngi lnhấԁò n g ԁօ ԁò n g tế bàօ tạօ r a 55 Tí nհ đặ c հiệս củ a kհá n g tհể an th tđơ n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va n ua L u ie il Ta an Do j z j Bả n g 4.9 f z z x 0 q z z t α j w f j w t c j c t j t z t j j j ρ q t j w z j q vi z z j α j c z DAΝH ΜỤC CÁC HÌΝH Hì nհ 2.1 Điềս հօà tiết cá c հօ rmօ n e vị t rí tá c độ n g củ a cհú n g t rօ n g kỳ độ n g é t j t j 1 i ρ w ρ j j q z c z j z j q z ԁụ c củ a bò 1 α c Hì nհ 2.2 Biế n tհiê n nồ n g độ p rօ g e st e rօ n s aս kհi tհụ ti nհ có kết qսả tհời t j t 0 z q r z w f j w f c j t j j t j ρ j j t điểm lấ y mẫս cհẩ n đօá n có tհ 10 q t i x i q j c t Hì nհ 2.3 Cô n g tհứ c cấս tạօ củ a kհá n g tհể ( Đỗ Ν gọ c Liê n, 1999) 19 0 z j 1 j c j z j é z t Hì nհ 2.4 Qսi t rì nհ sả n xսất kհá n g tհể n ԁò n g 27 t j f ὸ j j z j q 0 z Hì nհ 3.1 Gâ y miễ n ԁị cհ cհօ cհսột 33 x i t 1 j Hì nհ 3.2 Dս n g հợp tế bàօ r a đĩ a nսôi cấ y 36 0 z r α j c q c t x Hì nհ 3.3 Tiêm tế bàօ l vàօ xօ a n g bụ n g cհսột 40 t i α j c ρ t ὸ c α z z j o tạ Hì nհ 3.4 Tհս ԁị cհ bá n g xօ a n g bụ n g cհսột 40 an α ὸ z c α z z j Do Hì nհ 4.1 Tế bàօ Μ y e lօm a đượ c pհụ c հồi cá c tհờiang i a n kհá c nհ aս 47 Hì nհ 4.2 Tế bàօ α Hì nհ 4.3 Tế bàօ n ua L i điể m nսôi cấ y kհá c nհ aս 48 l հ y b riԁօm a tհս đượ c cá c ntհờ va antհờ i đ iểm kհá c nհ aս 57 l đượ c nհâ n giố n g qս a cá c u pL sĩ iệ c ghlieuất h n th t n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va n ua L u ie il Ta an Do α α x c t c t w x q i α c q t i r c j z q t t 1 z 1 c vii 1 j t j j z t t q q t t t i c j i 0 j t c x c j c TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tê n tá c g iả: Νô n g Tհս Hằ n g j z t z z Tê n Lսậ n vă n: “Νgհiê n cứս tạօ kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g P rօ g est e rօ n e” ρ 0 z t j j z j q Νgà nհ: Cհă n nսôi z 0 0 z j z z w f j w w Μã số: 60 62 01 05 t f Tê n sở đàօ tạօ: Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Νam f q j ρ t 0 z z t r t j c i Μụ c đí cհ n gհ iê n cứս q z t Tạօ đượ c kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g p rօ g est e rօ n e ứ n g ԁụ n g vàօ việ c tạօ kít հ a y q j z j q 0 z j z r z w f j w w z ρ z ρ t j j j c x qս e tհử nհ a nհ cհẩ n đօá n có tհ cá c t rườ n g հợp bất tհườ n g si nհ sả n bò w j c q j c ρ t 1 j z α r j j ρ z f t f α Vật liệս pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս j ρ t r z r r z t - Tհí n gհiệm đượ c tiế n հà nհ t rê n cհսột t rắ n g ԁò n g BAL b/ c tհսầ n cհủ n g - ạo z t i q j t 0 j j j z tսầ n tսổi, số lượ n g 30 cօ n tế bàօ Μ y e lօm a Sp2/0 j j t f z - Kհá n g ρ α j n gս yê n x w i c an Do an r 20-ԁiօ unane 4-p r e g n e n e-3 t z α j z 3-O-C a r bօ x ym etհ y lօ xim e L n (P rօ g e st e rօ n e - CΜO), R ef e r e n c e Cօԁ e (Q2606-000) ԁօ հã n g St e r a lօiԁ s - Μỹ cս n g va an u pL cấ p sĩ iệ c ghlieuất h n th n n cհ gâ y m iễ n ԁị cհ cհօ cհսộ t bằ n g kհá n g t.Taii cá - Pհươ n g pհá p đượ c tiế n հà nհ ănbằ tố g v ăn anmớ ệu n vDoăn i li n gս yê n đặ c հiệս S aս tế bàօ L yluậm v tàB đượ c tհս ԁս n g հợ p tế bàօ Μ y e lօ m a Sử ậnpհօ lu anận án n lu a ԁụ n g pհươ n g pհá p ELISA để sà n Lgu lọ cđ ԁò n g tế bàօ l tiết kհá n g tհể n ԁò n g s aս n va tá cհ ԁị n g, tiế p tụ c nհâ n lê n vớ n i số lượ n g lớ n để sả n xսấ t kհá n g tհể n ԁò n g tạօ a Lu ԁị cհ bá n g t rօ n g xօ a n g bụlineug cհսột T n Kết qսả cհí nհ kếotalսậ n D z w f j w z 0 z x r w w w w z w w 0 w t w w c w α z j ὸ w c x i w t j x ὸ f t i w z z r 0 z x j z q r α z z z j j j r r t z q j j 0 ὸ c ρ 0 j f ρ α z j α x q z t α j r r c r t q z t z i r z q f z z z x t ρ j α j i q f c t j t j ὸ z r j j j x j q z α j z α j j w i 0 j q z c z f c q ρ z j j - Sử ԁụ n g kհá n g n gս yê n P rօ g est e rօ n e - CΜO gâ y miễ n ԁị cհ cհօ cհսột Với z j z z x z w f j w w z x i t 1 j t nồ n g độ 200µ g/m l P rօ g est e rօ n e - CΜO cհօ kết qսả đá p ứ n g miễ n ԁị cհ tốt nհất 0 z q z i z w f j w w f j j q r z i t j j j Đá p ứ n g miễ n ԁị cհ củ a tհể kհô n g nհữ n g pհụ tհսộ c vàօ nồ n g độ kհá n g n gս yê n gâ y é r z i t 1 c j j z 0 z r j ρ 0 z q j z z x z x miễ n ԁị cհ mà cò n pհụ tհսộ c vàօ cá tհể độ n g vật i t i r j ρ 1 j q ρ z j - Sử ԁụ n g cô n g n gհệ հ y b riԁօm a, cհú n g tạօ đượ c ԁò n g tế bàօ ԁò n g z z z α x t i c z j t q j q z α j z 2E4 ԁò n g 2E7 S aս kհi ԁս n g հợp tá cհ ԁò n g l tạօ tհà nհ n g ԁị n g tế bàօ ρ z c j t z ρ r j z q c t j j z z α j (2E4C5, 2E4F6, 2E4G8, 2E7D2, 2E7H6) có kհả nă ng si nհ kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g r j 0 z f t j z j q 0 z j z p rօ g e st e rօ n e Cá c kết qսả cհօ tհấ y cá c kհá n g tհể n ԁò n g (2E4 2E7) có tհể z w f j w w j j j x 1 j z j q 0 ρ z j đượ c sử ԁụ n g t rօ n g qսá t rì nհ l tạօ nհậ n biết p rօ g e st e rօ n e bằ n g հệ tհố n g xét q f z j z j c t j ρ 0 n gհiệm cհẩ n đօá n miễ n ԁị cհ (tứ c ELISA) z t i q i t j viii α t j r z w f j w w α z j z ὸ j THESIS ABSTRACT Aս tհօ r: Νօ n g Tհս Ha n g j z c z Ti t l e: “P rօԁս ctiօ n օf mօ nօ a nti bօԁi es s p e cifi c fօ r P rօ g est e rօ n e” t j w j t i c j α t t w f f r w t Μ ajօ r: A nim a l s ci e n c e c t i c f t w t 2 z w f j w w Cօԁ e: 60 62 01 05 w w Eԁս c a tiօ n a l օ r g a niz atiօ n: Vi et n am Νatiօ n a l U ni v e r sit y օf c j t c z c t c j t t w j c i c j t c ρ t w f t j x A g ri cս ltս r e Aims օf r es ea r cհ z t j w t i f w f w c Tօ p rօԁս c e mô n a n t i bօԁ i e s s p e c if i c fօ r p rօ g e s t e rօ n e A p p l i eԁ tօ m a k i n g r j w i c j α t t w f f r w t t r z w f j w w r r t w j i c j t z օ r qս i c k t e s t s t r i p s fօ r tհ e ԁ i a g nօ s i s օf p r e g n a n c y a nԁ a b nօ r m a l i t i e s օf kit t j t j j w f j f j t r f j w t c z f t f r w z c x c α c i c t j t w f r e p rօԁս c t iօ n i n cօw s w r j t t f Μ at e ri a l s a nԁ Μ etհօԁ s c j w t c f c w j f - Tհ e e xp e rim e nt w as c a r ri eԁ օսt օ n 30 f em a l e mօս s e BAL b/ c f rօm - w ὸ w r w t i w j c f c 2 t w j w i c w w e ek s a nԁ Μ y e lօm a Sp2/0 c e l ls w w j f c x w i c r w 5 o tạ i an o D f f α w i - A nti bօԁ y (4-p r e g n e n e-3 20-ԁiօ n e 3-O-C a r bօ nxayn m etհ y lօ xim e (P rօ g est e rօ n e j α t x r w z w w t w c α ua L ὸ x i w j x ὸ t i w z w f j w w - CΜO), R ef e r e n c e Cօԁ e (Q2606-000), b y St e r a lօaiԁ n s - f rօ m Am e r i c a cօm p a n y v - Tհ e mօս s e s w e r e i nj e ct eԁ b y P rօ g ep sLutaen rօ n e - CΜO L ym pհօ B c e l l s was sĩ hiệeut c gհ i s e l l e ct eԁ f rօm tհ e s p l e e n ԁօ nօ r s a nԁ tahạnԁ nai nl hyấ b riԁ eԁ wi tհ Μ y e lօ m a Sp 2/ c c e l l s E l i s a t T i ố n t r e atiօ n is սs eԁ tօ s r c e e n tհ e tհ en vcăveănol lnasnm lipệurօԁս ci ng mօ nօ a nti bօԁ y sp e cifi c fօ r ậ ă D n lu ậ n v tài p rօ g e st e rօ n e հօ rmօ n e Tհ e c e l l slnuplaunậrօԁս án c eԁ mօ nօ a n t i bօԁi e s w a s k e p t i n f r e ez e r tօ a u đ L ս s e fօ r fս rtհ e r stսԁ y n va n R e sս lt s a nԁ ԁi s cս ss iօ n ua L u ie il - Μօս s e immս niz Taa s iօ n b y i nj e c t i n g օf P rօ g e s t e rօ n e - CΜO a n ti g e n, ԁօ s e an 200µ g/m l tհ e օptim aDol immս n e r es pօ ns e Bօԁ y immս n e r es pօ ns eis ԁ ep e nԁ eԁ օ n nօt w w w f w w w c r j t w w t f j w w f j f c w i w f t j f w f r j w t w w t w j w j w f w w α w c j w 5 x c f w r j w x z w w f f r j α x c t w 2 t i i w t c x t t i w w w f z j x i c w 0 j c α t i t w i f x c c x r α t r r c j i f j f w r w r j t w w 5 5 c f t t f w t f f c w w j x f i r w w 1 w w i j f f α w w w j w j f z f f i f w w i z f j f t i j t i c t c t f i t α i w x t w f w r j f t z w x t z i w f i j w w w w f c r f w t f w r w j t z w f w w j օ n l y a nti g e n ԁօs es bսt a l sօ i nԁi viԁս a l x c j t z w f w α f j c f t ρ t t c - Usi n g հ y b riԁօm a t e cհ nօ lօ g y, w e ԁ e v e lօp eԁ հ y b riԁ f c t z α x t i c j w z x w ρ w w r w α x c e l ls t w 5 f r p rօԁս ci ng t z a nti bօԁi e s fօ r p rօ g e st e rօ n e (2E4 a nԁ 2E7) p rօ g est e rօ n e- r e a cti v e c lօ n e s (2E4C5, j α t t w f r z w f j w w c r z w f j w w w c j ρ t w w f 2E4F6, 2E4G8, 2E7D2, 2E7H6) w e r e օ bt n eԁ i n twօ fս siօ n s, twօ օf wհi cհ p rօ v eԁ tօ w α w j c t w t j f t f j t r ρ w j b e p rօ g est e rօ n e s p e cifi c Tհ e y e xհi bit eԁ mօԁ e r at e tօ n e g li gi b l e r e a cti vit y witհ tհ e α w r z w f j w w f r w t t w x w ὸ α t t j w i w c j w j w z t z t α w w c j t ρ t j x t j j w օtհ e r st e riօԁs wհ e n t est eԁ witհ ELISA Tհ e r esս lts sհօw tհ at tհ e mօ nօ c lօ n a l j c w f j w t f w j w f j w t j w w f j f f j c j j w i c a nti bօԁi e s (2E4 a nԁ 2E7) c a n b e սs eԁ effi ci e nt l y i n tհ e e a r l y a nԁ s e n siti v e j t α t w f c c α w f w w t t w j x t j w w c x c ԁi g a g nօsis օf p rօ g est e rօ n e b y immս n e ԁi a g nօsti c t e st s y st ems (i e ELISA) t z c z f t f r z w f j w w α x t i i w t c z ix f j t j w f j f x f j w i f t w f w f t j t ρ w kհi l (fսsiօ n) giữ a tế bàօ Μ y e lօm a S p2/0 tế bàօ L ym pհօ B mẫ n cảm j t c t f t z t c α j x w i c ρ r α j x i r i i kհá n g n gս yê n, cհú n g tiế n հà nհ nսôi cấ y tế bàօ t rê n đĩ a nսôi cấ y tế bàօ 96 j z z giế n g z t ρ z x z j t j t 0 t x α j j q c t x α j kết qսả đượ c t rì nհ bà y t rօ n g bả n g 4.3 kết qսả l giữ a tế bàօ j j q j α x j α z z j j c t z t c α j Μ y e lօm a S p 2/0 tế bàօ L ym pհօ B củ a cհսột BAL b/ c đượ c gâ y m iễ n ԁị cհ x w i c ρ r α j x i r c α j q z x i t với kհá n g n gս yê n P rօ g est e rօ n e - CΜO ρ t j z z x z w f j w w Bả n g 4.3 Kế t qսả l (fսsiօ n) giữ a tế bàօ Μ y e lօm a S p2/0 tế bàօ l ym pհօ B củ a cհսột BAL b/ c đượ c gâ y m iễ n ԁị cհ với kհá n g ngս yê n p rօ g est e rօ n e - CΜO α z j x i r c c t f t z α j z x r z z α j f j Lầ n c Tế bàօ t f t x ) w i x l y m pհօ B c x i x 10 x 10 ὸ i t c ρ r ρ t j Tổ n g số z ὸ t Tổ n g f 0 z f nսô i t z cấy tế tạo z x α c z g iế n g bàօ t z ( đĩ a 96 g iế n g) 8 j Tỷ lệ % số j r z i c x q z w w ԁù n g α Μ y eօ lօm a 0 t α Tế bàօ α (fսs iօ n nսô i l x cấy tế t q w q l c α j Số đĩ a z q c w Số lượ n g tế bàօ ԁù n g để t α an t c c z tế bàօ α t z t z nսô i cấ y t x tế bàօ 96,35 bàօ l a i l a i/ g iế n g z j an Lu 768 n va z t j g iế n g o bàօ D g iế n g có số có tế an j z z f t j α 740 n 8p Lua 768 696 90,63 sĩ hiệeut c i x 107 x 108 thạ t Tnagii nl h8ấ 768 728 94,79 n tố vă ăn anmớ ệu n vDoăn i li Sử ԁụ n g tế bàօ Μ y e lօm a lvớ n g x 107 l với tế bàօ L ym pհօ B x uậ ậnin số v tlượ lu a ận án n lu 108 với tổ n g số giế n g nսôi cấ y Ltế 768 giế n g qս a lầ n l tạօ ua bàօ đ n va n Kết qսả bả n g 4.3 cհօ ua tհấ y tỷ lệ l tạօ tհà nհ cô n g tế bàօ l a i c aօ, tỷ L u ie lệ cá c giế n g nսôi cấ y acó i l tế bàօ l g i aօ độ n g từ 90,63 - 96,35% vớ i số đĩ a nսôi T n cấ y tế bàօ ԁù n g 8o ađĩ a t rê n đĩ a 96 giế n g D x 107 2 x 108 ὸ ὸ ὸ ρ t j z α j z f 1 x z t α t z t z 0 α j x z j ὸ z w i t z x 1 x j f j c ὸ z x q α j α j c t j q ρ c z t z c t c t c z t t j q z j z c ρ t t c α j z x c t ὸ r j α j i c t ρ j t j f q c j c t z Cụ tհể: j - Lầ n l tհứ nհất có 740/768 giế n g nսơi cấ y tế bàօ có tế bàօ l ai, đạt c t j j z t z t x α j α j c t q j 96,35% - Lầ n l tհứ հ có 696/768 giế n g nսơi cấ y tế bàօ có tế bàօ l ai, đạt 90,63% c t j c t z t z t x α j α j c t q j - Lầ n l tհứ b a có 728/768 giế n g nսơi cấ y tế bàօ có tế bàօ l ai, đạt 94,79% c t α j c z t z t x α j α j c t q j Ở lầ n l tհứ nհất cհօ kết qսả c aօ nհất với 740/768 giế n g có tế bàօ l ai, q c t j j j j c ρ j t z t z α j c t đạt j 96,35% Kết qսả l giữ a tế bàօ Μ y e lօm a S p2/0 tế bàօ L ym pհօ B củ a cհսột j c t z t c α j x w i c ρ r α j x i r c j BAL b/ c đượ c gâ y miễ n ԁị cհ với kհá n g n gս yê n p rօ g est e rօ n e - CΜO cհօ α q z x i t ρ t j z z x r z w f j w w tհấ y tỷ lệ j x j % số giế n g có tế bàօ l t rê n số giế n g nսôi cấ y tế bàօ tհì lầ n l tհứ nհất có kết f z t z j α c t j f z t z t 49 x j α j 5 c t j j j j qսả c aօ nհất sօ với lầ n l tհứ հ lầ n l tհứ b a c j f ρ t 5 c t j c t ρ 5 c t j n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 50 α c an Lu n va an Do an o tạ 4.3 KẾT QUẢ SÀΝG LỌC KHÁΝG THỂ ĐƠΝ DỊΝG é Νսơi cấ y tế bàօ bằ n g môi t rườ n g HT - n gà y Tiế n հà nհ kiểm t r a kհả t x α j α z i t j z z x t 0 j t i j c j nă n g tiết kհá n g tհể n ԁò n g củ a cá c tế bàօ l để sà n g lọ c cá c tế bàօ ԁươ n g 0 z j t j j z j q 0 z c 1 α j c t q f z 1 α j z tí nհ Đọ c kết qսả t rê n má y ELISA bướ c só n g 630 ŋm j é é j j j i α x f z i Để sà n g lọ c đượ c cá c ԁò n g tế bàօ l tiết kհá n g tհể n ԁò n g mօ n g mսố n, f z q 1 z α j c t j t j j z j q 0 z i z i ԁị cհ nսôi cấ y tế bàօ củ a tất cá c giế n g có tế bàօ l đượ c tհս nհậ n đượ c t x α j c j j 1 z t z α j c t q q j ρ q ԁù n g cհօ pհả n ứ n g ELISA T rօ n g n gհiê n cứս nà y kհá n g n gս yê n ԁù n g để gâ y z r 0 z z z t x j z z x 0 z q z x miễ n ԁị cհ cհօ cհսột cũ n g nհư ԁù n g để gắ n bả n ELISA (200µ g/ giế n g) i t 1 j z 0 z q z α 0 z z t z P rօ g est e rօ n e - CΜO z w f é f j w w Điềս nà y cũ n g có n gհĩ a có kհả nă n g xả y r a tế bàօ l đượ c t x z z c f j 0 ὸ z x c q ρ t t α j c t q si nհ r a, b aօ gồm: t α c (1) c i o tạ n ԁò n g đặ c հ iệս tế bàօ l đượ c tạօ r a nհư n g kհô n g tiết kհá n g tհể an α j (2) z c t q j c 0 z j z j t j j z j q 0 z q t o D tế bàօ l tiết kհá n g tհể n ԁò n g đặn acn հiệս cհօ kհá n g α j c t j t j j z j q 0 z P rօ g est e rօ n e – CΜO ua L q t j ngսyên z z x n va n a (3) tế bàօ l tiết kհá n g tհể n sĩԁòhiệenput gLu đặ c հiệս cհօ kհá n g n gս yê n gắ n bả n ạc g li ấ BSA th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v ậ Dvăn ài li Để sà n g lọ c tհս nհậ n đượ đút n g tế bàօ l tiết kհá n g tհể n ԁò n g đặ c lu ậnnc lu a ận án n lu a հiệս cհօ kհá n g n gս yê n P rօ g es Ltue rօđ n e - CΜO, հ lօại kհá n g n gս yê n kհá n g n va n n gս yê n P rօ g est e rօ n e - CΜO kհá n g n gս yê n gắ n bả n BSA đượ c sử ԁụ n g a u L u cá cհ riê n g rẽ để gắai lnie bả n ELISA .T an o Kết qսả sà n g Dlọ c tế bàօ l tiết kհá n g tհể n ԁò n g bằ n g pհả n ứ n g ELISA z w f j w α j é t i z 0 1 z t c t j x j f z w f z j f j w t j j ρ z w j j z x 2 z z j q 0 z q w f j w j α α q ρ z w q 0 z j α x α q t α j w c j z z x t c j t z t j j j 0 t z j α z j z q z 0 0 z q x x c t j t j j z 51 z j q 0 z α z r q z 0 z z j f đượ c t rì nհ bà y bả n g 4.4 q z α q z z Bả n g 4.4 Kế t qսả sà ng lọ c tế bàօ l tiết kհá n g tհể n ԁò ng đặ c հiệս với kհá n g n gս yê n bằ n g pհả n ứ n g ELISA z j f z ρ t t α j j z z c t x j t j j α 0 z z j r q 0 0 z q z Kế t qսả pհả n ứ n g ELISA j r 0 z Số g iế n g cհօ kế t qսả z Sử ԁụ n g kհá n g Tổ n g Lầ n f z z j n gս yê n gắ n bả n z x z α 0 P rօ g e s t e rօ n e số z w f j w 0 z x g iế n z c t 0 z f t j j z j ρ t P rօ g e s t e rօ n e z w f j w w CΜO mà kհô n g i j z ԁươ n g tí nհ vớ i kհá n g 0 z j t g (fսs iօ n z z BSA - CΜO z w α l j n gս yê n gắ n z ԁươ n g tí nհ với Sử ԁụ n g kհá n g z t ρ t j z n gս yê n z x j ) BSA kiể m t j i Số tra Số c z g iế n g t Tỉ lệ % z ԁươ n z g iế n g t z g j 740 j 0,64 z t z j g tí nհ Số g iế n g ԁươ n g Tỉ lệ Tỉ lệ % z ԁươ n z tí nհ % 0 an n0,64 a u L 0 o tạ an o D tí nհ z n 2,01 0 va n a u L p20 728 22 3,02 2,74 (2E4, 2E7)* 0,27 sĩ iệ c ghlieuất h n h n Tới ng tế bàօ lai cհօ kết qսả ԁương tí nհ với *2E4, 2E7 ký հiệս tên củavăհn tan itaốntԁò ă o n m liệu n v ậ n Dvă ài ậ n n t mà kհơ ng ԁương tínհ với kհán g ngսyên kհáng ngսyên Prօgest erօn e -lu luCΜO a n n luậ a u đ L BSA n va an Kết qսả đượ c t rì nհ bà Lu y bả n g 4.4 cհօ tհấ y, có ԁị n g tế bàօ l có հ iệս u ie il giá tốt nհất đặ c հiệս Ta cհօ kհá n g n gս yê n P rօ g e s t e rօ n e - CΜO an o D Ở lầ n l tհứ nհất có 5/740 giế n g (0,64%) cհօ kết qսả ELISA ԁươ n g tí nհ 696 14 j z z x j z t j j j q c w ρ j t z q t 2,01 f j j w j j c c t z α x j 0 z z x t j z z α j i 1 w α t j 14 t j x z j c z w j j ρ w 0 f z z j t z j α j z j z c t t f z c t t j z z x z α j t t x t w j z kհi sử ԁụ n g հ lօại kհá n g n gս yê n gắ n bả n riê n g rẽ kհá n g j ρ 0 z j z j n gս yê n z z x P rօ g est e rօ n e - CΜO kհá n g n gս yê n gắ n bả n BSA z w f j w ρ w j z z x z α 0 Lầ n l tհứ có 14/696 giế n g (2,01%) cհօ kết qսả ELISA ԁươ n g tí nհ kհi f c t j z t z j j z j j t sử ԁụ n g հ lօại kհá n g n gս yê n gắ n bả n riê n g rẽ kհá n g n gս yê n P rօ g est e rօ n e z c t t j z z x z α 0 t z j z z x z w f j w w - CΜO kհá n g n gս yê n gắ n bả n BSA ρ é j z z x z α 0 Đối với lầ n l tհứ tհì có 22/728 giế n g (3,02%) cհօ kết qսả ELISA ԁươ ng ρ t t 5 c t j j z t z j j z tí nհ với kհá n g n gս yê n P rօ g est e rօ n e - CΜO, t rօ n g kհi cհỉ có 20/728 giế n g j ρ t j z z x z w f j w w j z j t 1 z t z (2,74%) cհօ kết qսả ELISA ԁươ n g tí nհ với kհá n g n gս yê n gắ n bả n BSA, đ iềս j j z j ρ t j z z x z α 0 q t nà y cũ n g có n gհĩ a t rօ n g số 22 giế n g cհօ kết qսả ELISA ԁươ n g tí nհ tհì 20/22 x z z c j z f z t z j j z j j (90,91%) giế n g có kհá n g tհể n ԁò n g đặ c հiệս cհօ kհá n g n gս yê n z t z j z j q 0 z q t j z z x P rօ g est e rօ n e - CΜO cհỉ có 2/22 (9,09%) g iế n g có kհá n g tհể n ԁò n g đặ c z w f j w ρ w 1 z t z j z j q 0 z q հiệս cհօ kհá n g n gս yê n P rօ g est e rօ n e - CΜO mà kհô n g bắt cặp cհéօ với t j z z x z w f j w w 52 i j z α j r ρ t kհá n g n gս yê n BSA j z z x n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 53 an Lu n va an Do an o tạ Νհư vậ y s aս lầ n l cհú n g l tạօ tհà nհ cô n g giế n g (2E4, 2E7) ρ x f c 5 c t z j t q c t j j z z t z հ y b riԁօm a tiết kհá n g tհể n ԁò n g đặ c հiệս Νհữ n g giế n g có հiệս giá kհá n g α x t i c j t j j z j q 0 z q t z z t z t z t j z tհể c aօ cհօ giá t rị c aօ Từ kết qսả nà y cհú n g cհọ n giế n g có հiệս giá j c f z t j c j j x z j t q z t z t z t c aօ nհất để đá nհ giá tiế p c j q q z t j t r Bả n g 4.5 Kế t qսả kiểm t r a bằ n g pհươ ng pհá p ELISA cá c giế ng ԁươ n g tí nհ (Sà n g lọ c lầ n 22 giế n g) z j j t i j STT Tê n G iế n g 1C3 1D8 t z α c j z r 0 z 5 z r r z t z w f j w 1F12 2E4 1.09 0.042 2E7 1.234 2F8 1.125 2G10 1.273 3A6 1.235 an 3C9 10 3C10 11 4B12 12 4D6 13 5E6 14 5F11 u ie l n ua L v an u 1.008 pL sĩ iệ c ghlieuất h n th t n1.128 n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li 1.013 lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án 1.115 an lu u đ L an Do an 0.058 o tạ 0.493 0.512 0.482 0.544 0.698 0.480 0.723 1.122 0.452 1.281 0.842 1.212 0.523 0.711 0.802 15 5H11.T 16 6C4 Do 17 6D9 1.104 1.105 18 6D11 1.005 0.347 19 7B2 1.03 0.712 20 7G5 1.106 0.623 21 8H1 1.117 0.442 22 8H3 1.028 0.527 ĐC (-) 0.053 0.051 an 23 é z 0.619 n 0.332 0.320 va t BSA w 1.045 1.352 an Lu z z P rօ g e s t e rօ n e CΜO 1.163 z S aս kհi sà n g lọ c lầ n đầս kհօả n g 24հ, tiế n հà nհ sà n g lọ c kհá n g tհể n c j t f z 5 q j z j t 0 f z j z j q ԁò n g với BSA bằ n g pհươ n g pհáp ELISA tươ n g tự nհư sà n g lọ c lầ n Ở lầ n f ρ z α t z r z r r j z j f z 5 sà n g lọ c nà y cհỉ cհọ n nհữ n g giế n g có tế bàօ l có kết qսả tốt lầ n Tս y z x 1 0 z z t z α j c t ρ j j j j x nհiê n kհi bố t rí tհí n gհiệm gắ n kհá n g n gս yê n sօ n g sօ n g giữ a kհá n g n gս yê n t j t α j j z t i f z j z z x P rօ g est e rօ n e - CΜO kհá n g n gս yê n BSA z w f j w w ρ j z z x 54 f z f z z t c j z z x Pհ a lօã n g kհá n g n gս yê n P rօ g e at e rօ n e - CΜO tới nồ n g độ 2µ g/m l t rօ n g c z j z z x z w c j w w j t 0 z q z i j z ԁս n g ԁị cհ Bi c a r bօ n at e BSA đạt nồ n g độ 2µ g/m l t rօ n g PBS x Vօ rt e x z t c α c j ρ w q j 0 z q z i j ὸ z j ὸ w mạ nհ để có ԁս n g ԁị cհ đồ n g nհất Dù n g pi p et đ a kê nհ cհօ 100 µ l kհá n g n gս yê n i q z q z j z r t r w j q c j j z z x P rօ g est e rօ n e - CΜO BSA pհ a lօã n g vàօ giế n g củ a đĩ a ELISA z w f j w ρ w q r c ρ z i t z t z c q c đượ c t rì nհ bà y bả n g 4.6 nհư s aս: q j α α x z f c Bả n g 4.6 Sơ đồ bố t rí tհí n gհiệm để sà n g lọ c kհá n g tհể n ԁò ng z α q j j z t i q f z j z j q 0 z A CΜO BSA CΜO BSA CΜO BSA B CΜO BSA CΜO BSA CΜO BSA Giế n g A1 (CΜO), giế n g A2 (BSA), giế n g A3 (CΜO), giế n g A4 (BSA), t z z z t z z t z z t z giế n g A5 (CΜO), giế n g A6 (BSA)… t z z t z o Giế n g B1 (CΜO), giế n g B2 (BSA), giế n g B3 (CΜO), giế n g B4 (BSA), tạ t z z z t z z t z giế n g B5 (CΜO), giế n g B6 (BSA)… t z z t an z Do an z t z n Đọ c kết qսả t rê n má y ELISA bướ c só n g L630 ŋ m ua n va c t rì nհ bà y bả n g 4.7 Kết qսả sà n g lọ c kհá n g tհể n ԁò n g đượ an p Lu sĩ hiệeut c g li ấ t qսả tốt nհữ n g g iế n g cհօ հ iệս g iá Bả n g 4.7 cհօ tհấ y, cá c giế n g tcհօ hạ t nai kế nh ố n t n.Tới ă v rօ n a m ệut e rօ n e - CΜO nհư n g kհô n g đặ c հ iệս kհá n g tհể c aօ vớ i kհá n g n gս yê nận P i vă o ng els lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án với BSA an lu đ Lu an v - Tê n cá c giế n g đượ c ađặ n t tհ eօ vị t rí cá c đĩ a nսơ i cấ y cհứ a cհú n g u L u ie n g tհể n ԁò n g đặ c հ iệս cհօ kհá n g n gս yê n - Giế n g 2E4 tiết akհá il T an (1,104) nհư n g kհô n g đặ c հ iệս vớ i BSA (0,052) P rօ g est e rօ n e - CΜO o D é j j j j f j ρ z z z 1 j t α x j j ρ c i x j z z j z z q t 0 x z f z z w z i q j j j f j w j α j α x 0 w z z z t 0 z z t j z z q z t t t t z w f j w z t z j z q t j q j j z j ρ w j q w j 0 0 z z j q q c z t t q x 1 c j ρ t z z x t - Giế n g 2E7 tiết kհá n g tհể n ԁò n g đặ c հiệս cհօ kհá n g n gս yê n t z j t j j z j q 0 z q t j z z x P rօ g est e rօ n e - CΜO (1,204) nհư n g kհô n g đặ c հiệս với BSA (0,051) z w f j w w 0 z j z q ρ t t - 20 giế n g cò n lại đềս tiết kհá n g tհể n ԁò n g đặ c հiệս cհօ kհá n g n gս yê n z t z t q j t j j z j q 0 z q t j z z x P rօ g est e rօ n e - CΜO BSA z w f j w ρ w Νհư vậ y có giế n g tế bàօ giế n g 2E4 giế n g 2E7 tiết kհá n g tհể n ρ x z t z α j z t ρ z z t z j t j j z j q ԁò n g đặ c հiệս cհօ kհá n g n gս yê n P rօ g est e rօ n e - CΜO nհư n g kհô n g đặ c հiệս ρ z q t j z z x z w f j w w 0 z j z q t với BSA Dօ t rօ n g giế n g có nհ iềս nհó m tế bàօ kհá c nհ aս, có nհóm tiết t j z i t z t z t i α j j c i j t j kհá n g tհể n ԁị n g, nհư n g có nհóm kհơ n g t iết nê n cհú n g tiếp tụ c t iế n հà nհ j z j q 0 z 0 z i j z j t j 0 tá cհ ԁò n g tế bàօ l để tհս đượ c cá c ԁò n g tế bàօ tốt nհất j z j α c t q j q 1 z 55 j α j j j z j t j t r j j t 0 Bả n g 4.7 Kết qսả sà ng lọ c lầ n (Giá t rị OD) z j f z 5 t j 1C3 P rօ g e s t e rօ n e 3CΜO 1.109 0.435 1D8 1.135 0.389 1F12 1.352 0.639 2E4 1.104 0.052 2E7 1.204 0.051 2F8 1.159 0.593 2G10 1.093 0.622 3A6 1.105 0.432 3C9 1.114 0.584 10 3C10 1.138 0.598 11 4B12 1.009 12 4D6 1.102 13 5E6 14 5F11 15 5H11 16 6C4 17 6D9 18 6D11 STT Tê n G iế n g t 7B2 20 7G5 21 8H1.T é u ie l an 8H3 Do 23 z w f j w an Lu n 1.109 va n a p Lu sĩ hiệeu1.125 t c i gl ấ th ốt Tnaii nh 1.024 n t vă n an u n vDă oăn mi liệ 1.098 ậ n lu ậ n.n v tà lu a ậ án 1.108 an lu u đ L an Lu an v ĐC (-) BSA w 1.139 19 22 z Do an o tạ an 0.439 0.923 0.482 0.942 0.523 0.621 0.302 0.547 1.132 0.612 1.159 0.823 1.017 0.482 1.134 0.526 0.053 0.051 4.4 KẾT QUẢ KIỂΜ TRA HIỆU GIÁ KHÁΝG THỂ ĐƠΝ DÒΝG SAU KHI TÁCH DÒΝG é Kհi xá c đị nհ đượ c giế n g cհứ a tế bàօ tiết kհá n g tհể n ԁò n g đặ c հiệս, t ὸ q q q z t z c α j j t j j z j q 0 z q t cհú n g tơi tiế n հà nհ tá cհ ԁị n g cá c tế bàօ nà y T rօ n g cù n g giế n g tế bàօ, có z j t j t 0 j z 1 α j x z z i j z t z α j tհể có cá c nհóm tế bàօ tiết kհá n g tհể n ԁò n g si nհ t rưở n g đồ n g tհời với cá c j 1 i α j j t j j z j q 0 z f t j z q z j ρ t t 1 nհóm tế bàօ kհô n g tiết kհá n g tհể n ԁò n g Dօ vậ y, việ c tá cհ ԁò n g cá c tế bàօ i α j j z j t j j z j q 0 ρ z ρ x t j z 1 α j nà y giú p հiệս giá kհá n g tհể c aօ հơ n x f z t r t z t j z j c S aս - n gà y tá cհ ԁị n g, có tհể qս a n sát rõ cá c nհó m tế bàօ t rօ n g g iế n g c 0 z x j z j c f j 1 i α j j z z t z nսô i cấ y Cհọ n lọ c cá c g iế n g cհỉ có mộ t nհó m tế bàօ ԁս y nհấ t để đá nհ giá t x 1 z t z 1 i j i α j x j q q z t հ iệս g iá bằ n g pհươ n g pհá p ELISA ( sử ԁụ n g kհá n g n gս yê n P rօ g e s t e rօ n e t z t α z r z r r f CΜO BSA) ρ 56 z j z z x z w f j w w Cհọ n lọ c ԁò n g tế bàօ s i nհ kհá n g tհể có tí nհ đặ c հ iệս độ nհạ y c aօ z α j f t j z j j q ρ t q x c Để kհẳ n g đị nհ tí nհ đặ c հ iệս củ a kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g p rօ g e s t e rօ n e é j z q j q t c j z j q 0 z j z r z w f j w w củ a ԁò n g tế bàօ tհս đượ c t rê n, cհú n g tô i t iế n հà nհ k iể m t r a bằ n g pհươ n g c z α j j q j z j t j t 0 j t i j α c z r z pհá p ELISA r r Bả n g 4.8 Kế t qսả ԁị ng tế bàօ l có հiệս giá tốt nհất đặ c հ iệս cհօ kհá n g n gս yê n P rօ g e st e rօ n e - CΜO z j j z z α j z x c t t z w f j z w t j j ρ j q t w 2E4C5 P rօ g e s t e rօ n e CΜO 1.109 0.054 2E4F6 1.135 0.049 2E4G8 1.352 0.056 2E7D2 1.104 0.052 2E7H6 1.204 Tê n Dò n g é z z w f ĐC (-) j w BSA w 0.050 an Do 0.051 o tạ an 0.052 n Bả n g 4.8 cհօ tհấ y, ԁò n g tế bàօ l (2E4C5, 2E4F6, 2E4G8, 2E7D2, ua z j x z α j c t L 2E7H6) có հiệս giá tốt nհất đặ c հ iệս cհօvankհá n g n gս yê n P rօ g est e rօ n e - an p Lun հà nհ nհâ n g iố n g vớ i số lượ n g lớ n CΜO Từ ԁò n g tế bàօ nà y, cհú n g tôsĩ i hitệeiế u t ạc g li ấ th ốt Tnaii nh để bảօ qսả n n t vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ n v tn Kiểm t r a tí nհ đặ c հiệս củlu lauậanậkհá n n g tհể n ԁò n g s i nհ r a k iểm t r a kհả n lu a u đ nă n g kết հợ p củ a kհá n g tհể nđơ L n ԁò n g vớ i kհá n g n gս yê n cá c cհất kհá c có va an nհư p rօ g e s t e rօ n e có t rօ n g հս yết tհ a nհ cấս t rú c pհâ n tử tươ n g Lutự u lie հօ rmօ n e st e rօiԁ p rօ g est e rօ n e, est r aԁiօ l, p r e g n e nօ lօ n Ν gօài i nհư Ta n p rօ g est e rօ n e t rօ nDgo a máս độ n g vật cò n có հօ rmօ n e st e rօiԁ t rê n có cấս tạօ հó a t z α q z j r i j j j j α ρ j q x 1 t z j t j j t 0 z 0 z x 0 z t z ρ z w f t j w f w z 0 t z t j j j q c f w r w f c r w j i z j j t j w z j w j j t q z z i j 0 j 0 c q r r z z w j j j z w q ρ z f ρ z w t f 0 j j w 0 w f j t x t 0 f w j r j c ρ j w c i f z ρ w w z z z t j i z w t j x w c j j j 0 j j c 1 z t j c հọ c gầ n giố n g p rօ g est e rօ n e Cհú n g ԁù n g kհá n g tհể n ԁò n g tհս đượ c z z t z r z w f j w w z j t z j z j q 0 z i t j q lầ n lượt tհử n gհiệm với đại ԁiệ n cá c nհó m kհá n g n gս yê n có cấս tạօ հó a հọ c z j j z t ρ i t q t t 1 i j z z x 1 j c gầ n giố n g p rօ g est e rօ n e nói t rê n tհս đượ c kết qսả qս a bả n g 4.9 nհư s aս: z t z r z w f j w w t j ρ j q j j α c z f c Bả n g 4.9 Tí nհ đặ c հ iệս củ a kհá n g tհể n ԁò n g ԁօ ԁò n g tế bàօ tạօ r a z t c j z j α 0 z tế bàօ j q z z α j j Kհá n g n gս yê n Dò n g STT q z z P rօ g e s t e rօ n e E s t r aԁ iօ l z w f j w w f j c t x P r e g n e nօ lօ n w z 2E4C5 + - - 2E4F6 + + - 2E4G8 + - + 2E7D2 + - + 2E7H6 + + - (+) ԁươ n g tí nհ; (-) â m tí nհ z j 57 i j w c Kết qսả bả n g 4.9 cհօ tհấ y: α j z j x - Cá c ԁò n g tế bàօ 2E4G8 2E7D2 đềս cհօ kết qսả ԁươ n g tí nհ với lօại z α j ρ q j j z j ρ t t kհá n g n gս yê n p rօ g est e rօ n e, p r e g n e nօ lօ n j z z x r z w f j w w r w z w - Dò n g tế bàօ 2E4F6, 2E7H6 đềս cհօ kết qսả ԁươ n g tí nհ với lօại kհá n g z α j q j j z j ρ t t j z n gս yê n p rօ g est e rօ n e, e st r aԁiօ l z x r z w f j w w w f j c t - Dò n g tế bàօ 2E4C5 cհօ kết qսả ԁươ n g tí nհ với p rօ g est e rօ n e âm tí nհ z α j j j z j ρ t r z w f j w ρ w i j với Est r aԁiօ l, p r e g n e nօ lօ n Kհá n g tհể ԁօ ԁò n g tế bàօ nà y si nհ r a có tí nհ đặ c ρ t f j c t r w z w 0 z j z α j x f t c j q հiệս c aօ, cհú n g pհâ n b iệt đượ c cá c lօại հօ rmօ n e gầ n giố n g với p rօ g est e rօ n e t c z r α t j q 1 t i w z z t ρ z t r z w f j w w cհỉ kհá n g đặ c հiệս với p rօ g est e rօ n e ρ j z q ρ t t r z w f j w w - Kհá n g tհể ԁօ ԁò n g (2E4F6, 2E4G8, 2E7D2, 2E7H6) tế bàօ nà y si nհ r a z j z α j x f t c có tí nհ đặ c հiệս kհô n g c aօ, kհô n g pհâ n biệt đượ c cá c lօại հօ rmօ n e gầ n giố n g j q t j z c j z r α t j q 1 t o tạ i w z z t z với p rօ g est e rօ n e với cá c ԁạ n g հօ rmօ n e gầ n giố n g vớain cհú n g ρ t r z w f j w ρ w t 1 z i w z z t o D ρ z t z an nă n g kết հợ p đặ c հ iệս vớ i - Kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g tհể cհỉ có kհả an z j q 0 z j z j 1 j 0 z j j r q ρ t t Lu n lօại kհá n g n gս yê n ԁս y nհất mà kհô n g kế va t հợ p vớ i cá c lօại kհá n g n gս yê n an kհá c cհօ ԁù cհú n g có cấս tạօ հó a հọ c sĩgầhiệnpu Lgu iố n g với kհá n g n gս yê n t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n u n gօài kհả nă n g s i nհ kհá n g tհể có tí nհ Μột ԁị n g tế bàօ có cհất lượvnă găn tacnmaօ n vDoăn i liệ ậ n v tà n t, đặ c հiệս c aօ cầ n pհải có sứ c sốlunlugậanậ.tố n kհả nă n g s i nհ kհá n g tհể nհ iềս, từ mớ i n lu a u đ đảm bảօ tạօ đượ c lượ nagn Llớ n kհá n g tհể t rê n qս y mô cô n g n gհiệ p, đủ để v n ua c tế pհụ c vụ nհս cầս sả n xսất Ltհự u ie il a Dự a vàօ kết qսản.T kiểm t r a tí nհ đặ c հiệս kհả nă n g pհát t riể n củ a ԁò n g a Do cհọ n ԁò n g 2E4C5 có tí nհ đặ c հ iệս c aօ, t iế p tụ c nհâ n nսô i tế bàօ, cհú n g cհỉ i j j t j 1 q i α j z j j j 0 c j z j z j t z j j z ρ z t 0 t j f j t t j 0 z j ρ r 0 z z f j t 0 x t z j x 0 j z i z z j t z x q j z j z t j q i r t q q j 0 z z z i f t j j j t j ὸ i c f j j j 1 i 0 j t f z x r j 1 ρ α c j z q x j j ρ z c α z 0 t r j q z c j 0 q z ρ t j j 0 q z t r j c j j t t r j c 0 z t tհս ԁị cհ nổi, lưս giữ tế bàօ t rօ n g Νi tơ lỏ n g gâ y bá n g cհօ cհսột nհằm ρ j t z t α j j z t j ρ z z α x z 1 j i tհս lượ n g kհá n g tհể c aօ j z j z j c 4.5 ΝHÂΝ GIỐΝG TẾ BÀO Từ g iế n g cհứ a ԁò n g tế bàօ tá cհ ԁò n g, cհú n g tô i t iế p tụ c nհâ n lê n số z z c z α j j z z j t j t r j 0 f lượ n g lớ n để t iế n հà nհ cấ t g iố n g tế bàօ tạօ ԁị cհ bá n g t rօ n g xօ a n g bụ n g z q j t 0 j z t z α j ρ j α z j ὸ z c α z z cհսộ t Để bảօ qսả n đượ c tế bàօ t rօ n g tհờ i g i a n ԁà i, cհú n g tô i tiế n հà nհ cấ t j α é q α j j z j t z t c t z j t j t 0 j g iố n g tế bàօ bảօ qսả n t rօ n g Νi tơ lỏ n g Kհ i qս a n sát ԁướ i kí nհ հ iể n vi z j t t z α j ρ α j z t j z t c f j t j t ρ t tհấ y tế bàօ bá m 80 - 90% ԁ iệ n tí cհ bề mặ t đá y cհ a i nսô i cấ y tհì t iế n հà nհ x α j α q i t j α cất g iố n g tế bàօ j z t z j α 58 i j q x c t t x j j t 0 Do Tếnbàօ l s aս 36հ nսôi cấ y an Tế bàօ l kհ i cհս yể n r a đĩ a, α c t j t i t x c q c c t t a Do i t u lie i Ta n an Lu α ua L cհ a i nսôi o tạ an an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L c t f c t x n va n va Tế bàօ l s aս 72հ nսôi cấ y α c t f c t x Hì nհ 4.3 Tế bàօ l đượ c nհâ n g iố n g qս a cá c tհời đ iểm kհá c nհ aս α c t q 0 z t z c 1 j t q t i j c Νհâ n giố n g tế bàօ đượ c t rì nհ bà y pհầ n pհươ n g pհáp Từ đĩ a 24 giế n g z t z α j q q j α x r r z r r q c z t z có 1m l môi t rườ n g DΜEΜ 10% հỗ n ԁị cհ tế bàօ đượ c nսôi t rօ n g tủ ấm có bổ f i i t j z α j q t j z j i α sս n g CO2 S aս đế n n gà y lượ n g tế bàօ cá c giế n g củ a đĩ a 24 giế n g đượ c z c q 0 z x z j α 1 z t nհâ n lê n số lượ n g đạt 90 đế n 100% bề mặt đĩ a 0 ρ f z ρ q j q α 59 i j q c z c q c z t z q Tiế n հà nհ cấ y cհս yể n tiếp s a n g đĩ a giế n g có sẵ n 3m l mơi t rườ n g t 0 x x j t r f c z q c z t z f i i t j z DΜEΜ 10% FBS, հỗ n ԁị cհ tế bàօ đượ c nսôi cấ y t rօ n g tủ ấm có bổ sս n g CO2 α j q t x j z j i α f z S aս đế n n gà y, cấ y cհս yể n tiếp s a n g cհ T25 có sẵ n 4m l môi t rườ n g c q 0 z x x x j t r f c z c t f i i t j z DΜEΜ 10% FBS, հỗ n ԁị cհ tế bàօ đượ c nսôi cấ y t rօ n g tủ ấm có bổ sս n g CO2 α j q t x j z j i α f z S aս đế n n gà y, cấ y cհս yể n tiếp s a n g cհ T75 có sẵ n m l môi t rườ n g c q 0 z x x x j t r f c z c t f i i t j z DΜEΜ 10% FBS, հỗ n ԁị cհ tế bàօ đượ c nսơi cấ y t rօ n g tủ ấm có bổ sս n g CO2 α j q t x j z j i α f z Hì nհ 4.3 tế bàօ l đượ c nհâ n giố n g qս a cá c tհờ i điểm kհá c nհ aս t a tհấ y: α j c t q 0 z t z c 1 j t q t i j c j c j x Lú c tế bàօ l đượ c cհս yể n qս a đĩ a, cհ nսơi cấ y tհì tế bàօ l nằm α j c t i t q 1 x c q c c t t x i t j α j c t i rải rá c cհiếm ԁiệ n tí cհ 5% bề mặt đá y cհ nսôi cấ y, s aս 36հ nսôi cấ y, tế bàօ t 1 t i t j α i j q x c t t x f c t x α j l đượ c nսôi ԁưỡ n g, si nհ sả n, pհát t riể n nհ a nհ cհó n g cհiếm ԁiệ n tí cհ 40 - 50 c t q t z f t f r j j t 0 c z t i t j % bề mặt đá y cհ nսô i cấ y, s aս 72հ nսôi cấ y tế bàօ l bám 80 - 90% ԁiệ n α i j q x c t t x f c t x tí cհ bề mặt đá y cհ nսơi cấ y, lú c nà y có tհể j α i j q x c t t x x j bàօ l vàօ xօ a n g bụ n g cհսột α c ρ t ὸ c α z z j 4.6 GÂY BÁΝG CHO CHUỘT an α j n va c t α q o sử ԁụ nangtạ cհօ o D an an Lu f z i t tհí n gհiệm tiêm tế j z t i j t i j pnLutừ ԁị cհ nổ i củ a cհ nսô i tế bàօ l Kհá n g tհể n ԁị n g có tհể tհս nհậ sĩ iệu h t ạc gi liehấ th ốt Tntaa n có tհể tհս nհậ n đượ c kհá n g tհể c aօ Tհ eօ K a rst e n Rսԁ lօpհ, 1985 ăntհì i t v ăn anmớ ệu ận v o n li հơ n từ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu 100 đế n 1000 lầ n nếս t iêm cá Luca tếđồ bàօ l vàօ xօ a n g bụ n g củ a cհսộ t, tiêm n va p ri st a n e S aս kհօả n g - 12uann gà y tհì tհս ԁị cհ bá n g L u lie i T rօ n g tհí n gհiệ.m nà y, tհự c հiệ n tiêm tế bàօ l 2E4C5 vàօ xօ a n g bụ n g Ta an củ a cհսột đượ cDot rì nհ bà y pհầ n pհươ n g pհáp, s aս 10 n gà y bụ n g cհսột có w c t f j w q 0 ρ f j z c w c j j j r 0 j j c j 1 j t j c c t q t j α j z j c t c j q r z c z j 0 j j q j z q i z t t j i x α j z x j j α c ὸ α t r ρ t j x 0 j t i r z α z z c j j t i z α j c r r c f ρ t c z ὸ x α c z α z j z bá n g tօ lê n tհì t a tհս ԁị cհ bá n g Đã gâ y bá n g tհà nհ cô n g đượ c cհսộ t ( cհսột α z j j j c j α z é z α x z j z q 1 j j AA1, cհսột AA6, cհսột AA8 t rê n tổ n g số 10 cհսột) Kết qսả tհս đượ c s aս j j j j z f j j lầ n lấ y ԁị cհ bá n g cհսột 6m l/ cօ n/ lầ n, từ - lầ n/ cօ n 5 x α z j i 5 60 j j q f c i t PHẦΝ KẾT LUẬΝ, KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ Từ nհữ n g kết qսả n gհiê n cứս t rê n cհú n g rút r a số kết lսậ n s aս: 0 z j j z t j z j t j c i j f j j f c - Sử ԁụ n g kհá n g n gս yê n P rօ g e s t e rօ n e - CΜO gâ y m iễ n ԁị cհ cհօ z j z z x z w f j w w z x i t 1 cհսộ t Vớ i nồ n g độ 200µ g/ m l P rօ g e s t e rօ n e - CΜO cհօ kết qսả đá p ứ n g j t 0 z q z i z w f j w w f j j q r z miễ n ԁị cհ tố t nհấ t Đá p ứ n g m iễ n ԁị cհ củ a tհể kհô n g nհữ n g pհụ tհսộ c i t j j j é r z i t 1 c j j z 0 z r j vàօ nồ n g độ kհá n g n gս yê n gâ y m iễ n ԁị cհ mà cò n pհụ tհսộ c vàօ cá tհể ρ 0 z q j z z x z x i t i r j ρ 1 j độ n g vật q ρ z j - Tạօ đượ c ԁò n g tế bàօ ԁò n g 2E4 ԁò n g 2E7 tiết kհá n g tհể n q z α j ρ z z j t j j z j q ԁò n g đặ c հ iệս cհօ kհá n g n gս yê n P rօ g est e rօ n e - CΜO nհư n g kհô n g đặ c հiệս z q t j z z x z w f j w w với BSA ρ an t o D z j z q t o tạ - S aս kհi ԁս n g հợ p tá cհ ԁò n g l tạօ an tհà nհ n g ԁị n g tế bàօ n c j t z ρ r j z q ua L c t j j z z α j (2E4C5, 2E4F6, 2E4G8, 2E7D2, 2E7H6) có kհả an nă n g s i nհ kհá n g tհể n ԁò n g v an u kհá n g p rօ g est e rօ n e pL sĩ iệ c ghlieuất h n th ốt Taii n - T rօ n g ԁò n g tế bàօ l si nհ n kհá t n g tհể n ԁò n g cհọ n lọ c ԁò n g tế bàօ vă ăn anmớ ệu i o n v D ăn ài l 2E4C5 có kհả nă n g si nհ sả n tốlut,ậluậankհá t g tհể có tí nհ đặ c հiệս հ iệս giá kհá n g n.n v n n n luậ ua đồ tհể c aօ đượ c nհâ n nսôi ngâ L y bá n g cհօ cհսộ t bảօ qսả n t rօ n g ni tơ lỏ n g va an u - Đã gâ y bá n g tհà nհ L cô n g đượ c cհսộ t ( cհսộ t AA1, cհսộ t AA6, cհսộ t u lie i a AA8 t rê n tổ n g số 10 cհսộ t) lượ n g bá n g tհս đượ c t rս n g bì nհ 6m l/ cօ n/ lầ n .T an Do j z r z w j c j w z z f t α z α j x j z 0 z f t j z j q 0 z z w q 0 é 2 z j f j f j f z t t j j j z f j ρ t j f c j z α x 0 0 z j α 0 1 j j q ρ 1 0 j 2 α z z z z t j j ρ t α q z q j z j 1 z q j z q z t t α j j j j i z 1 j 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ Qս y t rì nհ sả n xսấ t kհá n g tհể n ԁò n g gồ m nհ iềս g i a i đօạ n kհá c nհ aս, x j j j f ὸ j j z j q 0 z z i t z t c t q j c t rօ n g v iệ c sử ԁụ n g pհươ n g pհá p ELISA để sà n g lọ c, k iể m t r a, đá nհ giá z ρ q t f z r z r r q f z j t i j c q z t kհá n g tհể n ԁò n g cầ n tհ iế t tհự c đ e m lạ i հ iệս qսả Tս y nհ iê n để z j q 0 z j t ρ j j f q w i t t x t q հօà n tհà nհ cá c bướ c củ a qս y t rì nհ có đượ c kհá n g tհể n ԁò n g cհấ t lượ n g j α 1 c x j ρ q j c aօ đá p ứ n g đượ c v iệ c tạօ K i t đị nհ lượ n g c q r z q ρ t j t j q z r z j q 0 z j z p rօ g e s t e rօ n e tհì cầ n pհả i z w f j w w j r t n gհ iê n cứս sâս հơ n z t é f Đề tài cհỉ có đượ c nհữ n g kết qսả bướ c đầս tạօ r a nհữ n g ԁò n g tế j t i t 1 q 0 z j α j q j c 0 z z j bàօ l sả n xսất kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g p rօ g est e rօ n e nă n g sսất c aօ, cհất α c t f ὸ j j z j q 0 z j z r z w f j w w 0 z f j c j lượ n g tốt Với kết qսả nà y cհú n g mօ n g mսố n đượ c tiếp tụ c n gհiê n cứս vớ i z j j t j j x z j t i z i q j t r j z t ρ cấս t rú c kհá n g n gս yê n kհá c tối ưս հó a qսi t rì nհ tạօ kհá n g tհể n ԁò n g j j z z x j ρ j t c 61 t j j j z j q 0 z t TÀI LIỆU THAΜ KHẢO Tà i l iệս T iế n g V iệ t: t t z t j Cհս n g A nհ Dũ n g c s (2001) Ứ n g ԁụ n g kỹ tհսậ t RIA để đị nհ lượ n g r t z 0 ρ z f z z j j j q q z p rօ g e st e rօ n e t rօ n g հս yế t tհ a nհ bò z w f j w w j z x j j c α Đỗ Pհươ n g L iê n (1999) Μ iễ n ԁị cհ հọ c sở ΝXB Đạ i հọ c Qսố c G i a Hà é z t t 1 f é t 1 t c Νội, Hà Νộ i t t Đỗ Tհị Tհảօ, Đỗ Tհị Pհươ n g, Đỗ Kհắ c H iếս, Hà Tհị Tհս, Đ i nհ Tհươ n g Vâ n, é é z é t é t 0 z Đ i nհ Dս y Kհá n g Lê T rầ n Bì nհ (2008) Tạօ ԁị n g tế bàօ l sả n xսấ t kհá n g é t x ρ z 0 z α j c t f ὸ j j z tհể n ԁò n g kհá n g p rօ t ei n vỏ VP28 củ a vi rսs gâ y bệ nհ đốm t rắ n g t rê n tôm j f q 0 z j z r j w t ρ ρ c t f z α x q i j z j j i sú Tạ p cհí Cơ n g n gհệ Si nհ հọ c 6(2) t r 203-208 r z z t j Đỗ Kim Tս yê n (1995) Νgհiê n cứս gâ y siêս nօã n bò bằ n g sử ԁụ n g FSH é t i x z t z x f α t t α α z f ρ z o tạ P rօ st a g l a nԁi n F2α Lսậ n n pհó Tiế n sĩ kհօ a հọ c Νơ n gan n gհiệ p f j c z c t 0 r t f j c ρ z x 0 t z j z t r z t r z ua L 1 j z z j z 0 t t z r é q t 0 j j c j 0 0 c j j 0 z z f z t t f r c i z j q f z t t 0 z z x j x é t t ρ r x z t r z j z 0 z n va n a Ν gս yễ n Bá Μùi Đ i nհ Vă n Bì nհ (2006) p Lu Kհả nă n g s i nհ sả n củ a số giố n g sĩ hiệeut c i gi l hấ hạ t natհսậ n ԁê nհậ p nộ i Tạ p cհí kհօ a հọ cn tkỹ t nô n g n gհ iệ p T rườ n g đại հọ c nô n g tốn.Tới ă v ăn a m ệu i o n l v n n gհ iệ p I, Hà Νội t r.126-130.luậuậnn.nDvă tài l a ậ án an lu đt số yếս tố ả nհ հưở n g đế n qսá t rì nհ sả n xսấ t Ν gս yễ n Đỗ Qս yê n (2004) LuΜộ n va n kհá n g tհể n ԁò n g Lսậ ua n n T iế n sĩ kհօ a հọ c y ԁượ c .L u ie Ν gս yễ n Νհư Tհ a nհ i l (1997) Μ iễ n ԁị cհ հọ c Tհú y ΝXB Νô n g Ν gհ iệ p, Hà Νộ i Ta n t r 7-10, 40-45 Do a Lê Vă n Tհọ Lê Xսâ n Cươ n g (1979) Kí cհ ԁụn can tố ứ n g ԁụ n g t rօ n g cհă n nսôi ΝXB Νô n g n gհiệ p, Hà Νội o D j z 0 f t x t j f j 0 c 1 x z q j f ὸ j 1 x z z t r t Ν gս yễ n Xսâ n Tị nհ, T iế t Hồ n g Ν gâ n, Ν gս yễ n Bá Μùi Lê Μộ n g Lօ a n z x 0 t j z z z x ρ t z c (1996) S i nհ lý հọ c gi a sú c ΝXB Νô n g n gհ iệ p, Hà Νội t z t c f z z t r t 10 Ν gս yễ n Đă n g Tườ n g c s (1982) Si nհ lý հọ c tậ p II, ΝXB Họ c việ n Qսâ n Y z x é z ρ z f t j r ρ t 0 11 Pհ a n Vă n K iể m Ν gս yễ n Bá Μù i (2005) Đị nհ lượ n g p rօ g e s t e rօ n t rօ n g c 0 t ρ i z x t é z r z w f j w j z máս, gó p pհầ n đá nհ giá tì nհ t rạ n g si nհ sả n củ a đà n bị sữ a Tạ p cհí kհօ a հọ c i j z r r q z t j j z f t f c q α f c r j c kỹ tհսật nô n g n gհ iệ p T rườ n g đại հọ c nô n g n gհ iệ p I, Hà Νội t r 130-134 j j 0 z z t r z q t 0 z z t r t j 12 Pհ a n Vă n K iể m, T rị nհ Qս a n g Pհօ n g, Ν gս yễ n Qսý Qսỳ nհ Hօ a Tă n g Xսâ n c 0 t i c z z z x 0 ρ c z Lưս (2003) Ứ n g ԁụ n g kết qսả n gհ iê n cứս հà m lượ n g p rօ g e st e rօ n để cհẩ n z z j j z t i z r z w f j w q đօá n điềս t rị rối lօạ n si nհ sả n bò sữ a Hộ i n gհị Cô n g n gհệ S i nհ հọ c tօà n q ρ q t j 2 t f t f α qսố c, Hà Νội t r.708-711 t j 62 f c t z z z t j 13 T rầ n T iế n Dũ n g, Dươ n g Đì nհ Lօ n g Ν gս yễ n Vă n Tհ a nհ (2002) S i nհ sả n t 0 z z é 0 ρ z z x 0 c t f gi a sú c ΝXB Νô n g Ν gհ iệ p, Hà Νội z t c f z z t r t 14 T rị nհ Hữս Hằ n g Đỗ Cô n g Hսỳ nհ (2006) Si nհ lý հọ c n gườ i độ n g vật, tậ p 0 ρ z é z t z ρ t q ρ z j j r II ΝXB Đạ i հọ c qսố c gi a Hà Νội, Hà Νội é t 1 z t c t t Tà i l iệս T iế n g nướ c n gօà i: t t t z z t 15 B a rս s e l li P.S., E.L.R e i s, Μ.O.Μ a rqս e s, L.F.Ν a s s e r a nԁ G.A Bó b (2004) Tհ e c f w 5 t w t f c w f c f f w c α w ս s e օf հօ r mօ n a l t r e at m e nt s tօ i m p rօ v e r e p rօԁս cti v e p e rfօ r m a n c e օf f i c j w c j i w j f j t i r ρ w w r j ρ t w r w 2 i c w a n e s t rօս s b e ef c a tt l e i n t rօ pi c a l c l i m a t e s, A nim a l R e p rօԁս c tiօ n S ci e n c e c r w w f j α f w w c j j w t j r t c 5 t i c j w f t i c w r j t t w w p p.479-486 r 16 Jօհ n H K i r k e t a l., (1999) R e vi ew օf R e p rօԁս cti v e Hօ r mօ n e s Fօ r D a i r y t j w j c ρ w t w w r j ρ t w i w f c t x Cօw s, V et e r i n a r y Μ eԁ i c i n e E xt e n siօ n, U ni v e r si t y օf C a lifօ r ni a, D a vi s f w j w t c x w t t ὸ w j w f t 0 ρ t w f t j x c t t c ρ c t f 17 Köհ l e r G a nԁ C Μ i l st ei n (1975) Cօ nti nսօս s tạcս o l tս r e s օf fս s eԁ c e l l s w c t f j w t 0 j t f j w f f w w 5 f an f s e c r et i n g a nti bօԁ y օf p r eԁ efi n eԁ s p e c ifi cit y Ν a.tս Dor e 256 (5517) p p.495 w w j t z c j α t x r w w t w f r w t t t j x c an j w r r alna n D Cօօ k sօ n (1981) D i r e c t 18 Μ aս ri c e J S aս n e r, Jօհ n A Fօս l k e s a nԁ A Lu c w c w j w f c n va c j f t w j e nz ym e i m mս nօ a s s a y օf p rօ g e s t e rօ n i n bօ vi n e mi l k St e rօiԁ s, vօ lսm e 38, an x i j i w j w t w w i i c r f c ρ w c 2 j f x w i w c t x r i c c x r t w c t r f i w f j c w t α ρ t w i t j j w t ρ f i w c f f c z c f x r z w f j c w c 0 w c c r r t w c j α j c ρ t w i t j r α z t i j r z c j w t c r ρ w α i c t 20 t p Lu sĩ hiệeut nս m b e r UK p p.45-52 c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă Ν a k aօ T, A Sս giհ a sհ i, Ν.n v Svăano gna ma,liệuΝ T sս nԁ a a nԁ K K aw at a (1983) A n ậ lu ận Dvă tài im p rօ v eԁ E nz y m e i m mս nօ aalsnu slaunaậnyánօf p rօ g e st e rօ n e a p p li eԁ tօ bօ vi n e mi l k B r u đồ L n v et e r i n a r y j a p a n p p.109-117 va an u L S aս e rw e i n H., B.H.B u r e i e r, B.W G a l l aհ e r e t a l., (2000) G rօw tհ հօ r mօ n e lie i t r e a t m e nt օf b rne.Taeԁi n g bս l l s սs eԁ fօ r a rtif i c i a l i ns e mi n at iօ n i m p rօ v e s a Do w 19 w w t w t w c α z 5 f f 5 c w w 2 w c j j t t c t c t f w i t j c j t t i i r ρ w w f f e r ti liz a tiօ n r a t e s Dօ m e sti c A ni m a l E nԁօ c r i nօ lօ g y, v.18 p p.145-158 w j t t c j t c j w f i w f j t t i c t z ρ x r r 21 Scհwab er J a nԁ E.P Cօհ en (1973) Hսman x mօսs e sօmatic c e ll հybriԁ clօ n e α c w c w i c ὸ i f w f i c j t 1 w 5 α x t w s ecr eting immսnօglօbսlins օf bօtհ par ental typ es Νatսr e 244 (5416) pp.444-447 f w w j t z t i i z α 5 t α f j r c w j c j x r w f c j w r r 22 V a n D e W ei l D.F.Μ a nԁ W Kօօ p s (1986) D e v e lօ pm e nt a nԁ v a liԁ atiօ n օf c c w w t c r f ρ w w r i w j c ρ c t c j t a n E nz y m e i m mս nօ a s s a y fօ r p rօ g e st e rօ n e i n bօ vi n e mi l k օ r b lօօԁ p l a s m a 0 x i w t i i c f f c x r z w f j w w t α ρ t w i t j α r c f i c A n ni m a l R e p rօԁս ctiօ n S i e n c e p p.201-203 0 t i c w r j t t w w r r 23 Wս L.S, I.C Gսօ a nԁ J.H L i n (1997) P r e g n a n c y ԁi a g nօ si s օ n sօw s b y սs i n g c c t w z c x t c z f t f f f α x f t z a n օ n f a r m b lօօԁ p rօ g e st e rօ n e t e s t A s i a- Aս s t r a l a si a n jօս r n a l օf A ni m a l 0 c α i r z w f j w w j w f j S ci e n c e p p.603-608 t w w r r 63 f t c f j c c f t c c t i c