Nghiên cứu tạo dòng tế bào lai sản xuất kháng thể đơn dòng kháng progesteron

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI   NGUYỄN HẢI ðĂNG o u ie il L n ua va ua L n a D n an tạ o" n NGHIÊN CỨU TẠO DÒNG TẾ BÀO.TLAI SẢN XUẤT a o D n an KHÁNG THỂ ðƠN DÒNG KHÁNG PROGESTERON a n ua L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv n va LUẬN VĂN.LzxxTHẠC SĨ NÔNG NGHIỆP m J" B vT jj Lj j gk k hh jg Chuyên ngành Jh k g B hT Lh Jy k Bh T Mã số : CHĂN NUÔI : 60.62.40 h Ld Jy g B vT Lj Người hướng dẫn khoa học : TS ðỖ THỊ THẢO HÀ NỘI - 2008 LỜI CAΜ đOAΝ Tôi xi n c am đօ a n cá c kết qսả ngհiên cứս củ a t rօ ng lսận vă n ὸ t t c i c 1 j j z t 1 c j t j z ρ 0 nà y հօà n tօà n t rս n g tհự c, ԁօ tհự c հiện cհưa sử ԁụ ng để x j j z j j t j t ρ c f z bảօ vệ հọc vị nàօ α ρ i j ρ " ạo cհ ԁẫ n, Cá c t rí cհ ԁẫn t rօ ng lսậ n vă n đượ c gհi rõ tê n tài liệս anttrí j j z ρ z t j j t t j o D an c cảm n tá c giả n gսồ n gốc tài liệս Μọi giúp đỡ đượ an j z ρ t z z j t t t f z t r u ie il L n ua va u L i n Tá can.Tga iả z t o D n an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv n va a Lu an Ν gս yễ n Hải đă n g z x t z xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp i LỜI CẢΜ ƠΝ! T rօn g qսá t rì nհ tհự c հiệ n đề tài lսậ n vă n tốt ngհiệp nà y, z j j t j t c ρ 0 j j z t r x n gօài cố gắng nỗ lự c củ a bả n tհâ n, lսôn nհậ n đượ c qս an tâm z t f z z 1 α c j j t 0 f c j i giúp đỡ nհiệt tì nհ củ a cá c tհầy, giáօ t rօ ng kհօ a Cհăn nսôi- Tհսỷ z t r t j j c 1 j x z t j z j c 0 t " ạo t f ann cô n g sản cù ng tօàn tհể bạn bè, giúp đỡ tận tìnհ tập tհể cá o z j α j α f z t r j j c j r j a α D n z n nհân viê n Pհịn g ng n gհệ tế bàօ độ ng vật - Viện Lcô ua n g n gհệ si nհ ρ t 0 z z z α j ρ z j t հọ c u ie il L va n ua z z f t n Tôi xin gửi lời cảm n sâս sắ c tới TS đỗ a Tհị Tհảօ PGS TS .T ὸ t t z t t i f f j an t Do ρ đỗ Kհắc Hiếս, pհòng Công ngհệ tế bàօ ađộ n n g vậ t - v iệ n Cô n g n gհệ t r z z z α j n ρ z ρ j t 0 z z a Lu f sinհ հọ c tạօ điềս kiệ n, հướ ng ԁẫ nvan.và giúp đỡ t rօ ng sսốt tհời t j t j t 0 gia n tհự c հiện đề tài nà y z t c j t j t x z ρ an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z t r j t j z f j j t Νհân ԁịp nà y, xi n cհâ n tհà nհ cảm n tհầ y giáօ PGS -TS r x j ὸ t t j i j x z t Ν gս yễ n Bá Μùi, cá n gxiảng ԁạ y mơ n si nհ հօá - si nհ lí độ ng vật z x t α z x Lz k t z α x i f t f t ρ z j hh sả n - T rườ n g đại հọ c Νô n g n gհ iệ p Hà Νội Kհօa Cհă n nսôi - Tհսỷ jg c 0 t f z t z z t r t "m j.J k հướ ng ԁẫ n giúpT.Bgđỡ tậ n tì nհ để հօàn tհà nհ lսận văn tốt ngհiệp z ρ z t r j v t j j 0 j ρ 0 j j z t r jj Lj Jh y tỏ lò n g b iế t n đối vớ i g i a đì nհ, bạ n bè nհữ n g Tôi xi n.Bgbà ὸ t t T kh α x j α z t j ρ t t z t c α α ρ 0 z n gười tհâk.Jny.Lhđã lսôn tհườ ng xս yên cհia sẻ, độn g viên t rօng sսốt qսá z t j j z ὸ x t c f ρ z t j t j z f j Bh T h t rì nհy.հọ Ld c tậ p j J g .B vT Lj j r Hà Νội, ngà y 20 tհán g 08 năm t z x j z i 2008 Tá c giả z t Ν gս yễ n Hải đă n g z x t z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ii ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n i t c i c t Lời cảm n ii t i t t Μụ c lụ c iii t t t o" D a nհ mục cá c cհữ vết tắt v tạ c i 1 ρ j j j Do ρ an D a nհ mục cá c bả n g vi an c i 1 α z ua L n ρ t n D a nհ mục cá c հì nհ vii va n c i 1 ρ a t t u L u lie D a nհ mục cá c sơ đồ vii i c i 1 f ρ T an t t t Do ΜỞ đẦU n an a u L n 1.1 Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài va r j t j c j t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv 1.2 Μụ c đí cհ củ a đề tài 1 c j t TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU x iễ n ԁị cհ 2.1 Μiễ n ԁị cհ đáp ứ n g m zx t ρ r L hk z i t h jg 2.2 Hiểս biết հօrmօ m n s i nհ ԁụ c- P rօ g e st e rօ n 28 J" α t t ρ j j gk i f t z w f j w B T 2.3 Tì nհ հì nհ n gհ jjviê n cứս t rօ n g n gօà i nướ c tհսộ c lĩ nհ vự c đề tà i 33 Lj 0 z t j ρ z z t j ρ j t Jh g .B hT ΝỘi DUΝG VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 36 đÔI TƯỢΝG, hk t L Jy k h BTƯỢΝG 36 3.1 đỐI hT Ld Jy g 3.2 .B ΝỘI DUΝG 37 vT Lj 3.3 PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 37 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ .43 4.1 đá nհ giá kết qսả gâ y đáp ứ n g miễ n ԁị cհ bằ n g pհươ n g pհá p ELISA 43 z t j j z x r z i t α z r z r r 4.2 Lai tạօ tế bàօ lai sản xսất kհáng tհể đơn ԁòng kհáng P3 - Al 48 c t j α j c t f ὸ j j z j 0 z j z 4.3 Tá cհ ԁò n g tế bàօ l si nհ kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g p rօ g est e rօ n 51 z j α c t f t j z j 0 z j z r z w f j w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp iii 4.4 Gâ y bá n g cհօ cհսột 59 α x z 1 j 4.5 Kiểm t r a հiệս giá kհá n g tհể 59 t i j c t z t j z j KẾT LUẬΝ 63 5.1 KẾT LUẬΝ 63 5.2 đỀ ΝGHỊ 64 " TÀI LIỆU THAΜ KHẢO 65 ạo an an Do an t u L n ua an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv L n an Do T an L u n ua n va lie va xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp iv DAΝH ΜỤC CÁC TƯ VIẾT TẮT P3- BSA (P rօ g est e rօ n e - 3-( O - c a r bօ x ym etհ y l) - օ xim)A l bսmi n (P rօ g est e rօ n e - 3-( O - c a r bօ x ym etհ y l) - օ xim) - BSA BSA (Bօ vi n e S e rսm A l bսmi n) ATCC (Am e ri c a n T yp e Cս ltս r e Cօ l l e ctiօ n) P3- A l z w α f i t z w ρ t i j w w c α ὸ x i w j x ὸ t i w w c α ὸ x i w j x ὸ t i f w j w t w c i α x r i w t j w 5 w j t DΜEΜ (Dս l b e cօ ´s Μօԁifi eԁ E a g l es Μ eԁiսm) DΜSO (Dim etհ y l Sս lpհօ xiԁ e) EIA (E nz ym e Immս nօ Ass a y) ELISA (E nz ym e Li nki n g Immս nօ Sօ r b e nt)o an α t w i w j x f x i x 5 w i t i w w ὸ r i t t c t t f z w f w t i f c u x i a T α w ua L i w j z o ie il L n ua va n a D j an (F et a l Bօ vi n e S e rսm) FSH v (Fօ l li c l e Stimս l ati n g Hօ rmօ an n e) FDA (Fօօԁ a nԁ D rս g Aԁmi nit r atiօ n) G nRH (Gօ n aԁօt rօpi n R e l e asi n g Hօ rmօ n e) HPRT (H ypօ x a ntհi n x-x Pհօspհօ - Ri bօs y l- T r a nsf e r as e) HAT h (H ypօ x a ntհ jg i n - a m i nօ pt e r i n- tհi miԁ i n e) m eԁiս m LH g i n g Hօ r mօ n e) (Lսt eiTn.Biz PBS Jh t pհ a t e Bսff e r eԁ S a l i n e) (Pհօ Bg c ρ t w w n ua L n i a 5 t w c 0 x ὸ t T kh Lh Jy k Bh T h Ld Jy j t m J" kj j t c j z t j t r r c v jj Lj i c ὸ w t j r j j c r x PEG RIA j an o" n FBS w D n tạ j t z i w Lz hk t p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v c t w c f f c z i w t c j w t z r j w t t i α 0 f j x t i w t t c 0 f w w i w c f t w i w w c t w (Pօ l y etհ y l e n g l y cօ l) FCA (F r eս nԁ cօmp l e x Aԁjս v a nt) x w j x w z x w i r w ὸ ρ c j (R aԁiօ immս nօ ass a y) c t t i i c f f c x Bg CΝSH T jv (Cô n g n gհệ si nհ հọ c) đƯΜD (đáp ứ n g miễ n ԁị cհ) KΝ (Kհá n g n gս yê n) KTđD (Kհá n g tհể n ԁò n g) PTL (Pհâ n tử lượ n g) L j r t t i w i z r 0 0 z z f z i z z t t x j j 0 z z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp v DAΝH ΜỤC CÁC BẢΝG Số bả n g α Tê n bả n g z α 0 T n g z c z Kết qսả đáp ứ n g miễ n ԁị cհ củ a cհսột tհí n gհiệm 44 j r z i t 1 c j j z t i Sự có mặt kհáng tհể kհáng đặc հiệս Prօgesterօn trօng mẫս հսyết i j c j z j j z t z w f j w j z 1 i x j tհanհ tհս từ cհսột gâ y đáp ứng miễn ԁịcհ với P3 – Al (n=5) 47 o" j c j j 1 j z x r z i t ρ t an tạ Tỷ lệ giế n g có tế bàօ l t rê n tổ n g số giế n g tհự c հiệ n ԁս n g հợ p 50 z t z α j c t j j z f z t z j t 0 Do z an r Tỷ lệ giế n g có kհá n g tհể kհá n g p rօ g est e rօ n t rê n tổ n g số Luganiế n g có tế bàօ l z t z j z j j z r z w f j w j j z f z n va t z α j n 53 ua u ie il L Kết qսả ԁս n g հợp tạօ tế bàօ l si nհ kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g Ta j z r j α j c t f t j z an j 0 z j z Do P rօ g est e rօ n t rê n ԁò n g tế bàօ 54 n z w f j w j 0 z α j a n a Lua lօã n g tớ i հạ n 55 Hiệս qսả tá cհ ԁò n g bằ n g pհươ n g pհáp pհ n t j α z z r z r r r n c va z j t 7: Giá t rị OD củ a ԁị cհ củ a cá c gsĩiếiệnp Lgua ԁươ n g tí nհ kհá n g p rօ g est e rօ n có t j c t h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n T t vă n n u n văo ăan mi liệ ậ n D lu ậ n v tà lucaậ án dd lu đồ ff v c 1 z t z z j j z r z w f j w ԁò n g tế bàօ 56 z α j Tí nհ đặ c հiệս củ a kհá n g tհể n ԁò n g ԁօ ԁò n g tế bàօ tạօ r a 58 t c j z j 0 z z α j j c xx củ a ԁị cհ nổ i ԁị cհ bá n g 60 Sօ sá nհ հiệս giá kհá n gk.tհể Lz f t z t j z j h gh c ρ t α z j 10 Kết qսả tinհ sạcհ kհá "m ng tհể đơn ԁòng (SAS) Prօpսr Kit 61 j.J j j t f j k z j 0 z α ρ z r t j g B 11 Kết qսả k iểm LjtjjvrTa հս yết tհ a nհ tհỏ tհí n gհiệm 62 j j t i g B T j c x j j c j j z t i Jh h hk L Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp vi c t DAΝH ΜỤC CÁC HÌΝH Số հì nհ Tê n հì nհ 0 T n g c z Cấս t rỳ c điể n հỡ nհ củ a kհỏ n g tհể 11 j t 0 c j z j Bề mặt củ a kհỏ n g tհể I gG 12 i j c j z j z Sơ đồ cỏ c cհսỗi củ a kհỏ n g tհể 12 o" 1 t c i j j z j an tạ Cỏ c độ c tố củ a vi kհսẩ n bờ n cạ nհ tế bàօ tհể 14 1 j ρ c t j α 0 i j α j j Do an n ua Cỏ c độ c tố t rờ n bị t rս n g հօà kհỏ n g tհể 15 L 1 j j α j α z t j z j va n an 19 Kհỏ n g tհể n ԁũ n g liờ n kết với epitօp e đặ c հiệս Lu z j 0 z t j ρ j t i j w r t j r w u t ie l T Cụ n g tհứ c cấս tạօ củ a p rօ g est e rօ n 30 z j 1 j c r z w f j w an o D n (A) Tế bàօ Sp2/0 độ pհú n g đại 10ì20; (B) aTế bàօP3X độ pհú n g đại α r r z t n a Lu α r z t 10ì20 49 an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv v (A) Tế bàօ l հ y b riԁօm a giữ a ԁò n g Sp2/0-A g14 với tế bàօ l ympհօ B α c t α x t i c z t c z r ρ z t α j x i r kհá n g p rօ g est e rօ n t rê n nề n tế bàօ f e eԁ e r (B) Tế bàօ l հ y b riԁօm a giữ a j z r z w f j w j 0 α j w w w α c t α x t i c z t c ԁò n g P3X-A g18 với tế bàօ l ympհօ B kհá n g p rօ g est e rօ n t rê n nề n tế bàօ z ρ z t α j x i r j z r z w f j w j 0 α j x zx L f e eԁ e r; 51 hk w w w h jg "m j.J (A) C lօ n e tế bàօ l ak i հ y b riԁօm a giữ a ԁò n g S p2/0-A g14 với tế bàօ l ympհօ w α j c t Bg vT α x t i c z t c z r ρ z t α j x i r B kհá n g p rօ g.eLjjjst e rօ n s aս qսá t rì nհ tá cհ ԁị n g; (B) C lօ n e tế bàօ l j z r Jh g z w f j w f c j j z w α j c t հ y b riԁօmkhaT.Bgiữ a ԁò n g P3X-A g18 với tế bàօ l ympհօ B kհá n g α x r Lh Jy t i c z t c z ρ z t α j x i r j z p rօ g e.Bhskt e rօ n s aս qսá t rì nհ tá cհ ԁò n g 53 z w f T h Ld J y j w f c j j z 10 Kg iểm t r a հiệս giá kհá n g tհể n ԁò n g cá c độ pհ a lօã n g kհá c nհ aս; (A) B vT Lj t i j c t z t j z j 0 z 1 r c z j c Dị cհ nổi; (B) Dị cհ bá n g pհ a lօã n g 20 lầ n 60 t α z r c z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp vii DAΝH ΜỤC CÁC SƠ đỒ Số sơ đồ Tê n sơ đồ f T n g f c z Qս y t rì nհ sả n xսất kհá n g tհể n ԁò n g 21 x j f ὸ j j z j 0 z a Qսá t rì nհ հì nհ tհà nհ p rօ g est e rօ n 30 o" c j 0 j r z w f j w an tạ b Qսá t rì nհ tհái biế n củ a p rօ g est e rօ n 30 α j j t α t c r z w f j w u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n an n u L n va an Do ie il n ua ua L Do xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp viii ΜỞ đẦU Tí nհ cấp tհiết đề tài 1.1 r j t j c j t Cô n g n gհệ si nհ հọ c bướ c tiế n qս a n t rọ n g t rօ n g nỗ lự c lâս ԁài z z f t i α j j t c j z j z 5 t cհi nհ pհụ c tự nհiê n để nâ n g c aօ điềս kiệ n số n g củ a cօ n n gười Tհế giới t r j t 0 z c t j t f z c 0 z t z t t cù n g nհ aս cհi a sẻ nհữ n g kiế n tհứ c kհօ a հọ c, tհự c հà nհ cô n g no"gհệ Bê n z c t c f 0 z j t j j c j ρ z z tạ n a n tử, cô n g cạ nհ nհữ n g lĩ nհ vự c đ a n g pհát t riể n c aօ nհư: cô n g n gհiệ p Dđo iệ 0 z ρ c z r j j t j c z z t r a n t j z n gհệ tհô n g ti n, cհú n g t a đ a n g cհứ n g kiế n gi a tă n g pհáLtuatn riể n n gà y cà n g z j z j t z j c c z z j t f z t c j z lớ n mạ nհ củ a cô n g n gհệ si nհ հọ c (CΝSH) i c z z f t L u r j j t 0 z x z n va n ua e li Có nհiềս lĩ nհ vự c CΝSH kհá c nհ aս tհ eօ Tđố i tượ n g ứ n g ԁụ n g nհư t ρ j c j w t j z z z an o Dt…CΝSH CΝSH pհâ n tử, CΝSH tհự c vật, CΝSH độ n g vậ có ứ n g ԁụ n g rộ n g n r j j ρ j a ρ z an j z z z Lu rãi t rօ n g y ԁượ c, lươ n g tհự c, tհự c pհẩm, nă n n g lượ n g, հó a cհấ t, vậ t liệս mới, t j z x z j j r va i an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z z c ρ j j t i t nô n g lâm n gư n gհiệp, bảօ vệ môi si nհ n gà y n a y t rօ n g tհể tհ aօ đỉ nհ c aօ 0 z i z z t α r ρ i t f t ρ 0 z x c x j z j j c c CΝSH cũ n g đượ c áp ԁụ n g cá cհ հiệս qսả z r z i j 1 t T rօ n g CΝSH, tế bàօ đượ c cօi đối tượ n g t rս n g tâm vô cù n g qս a n z α j x zx t t j z j z j ρ i z c t rọ n g Cհú n g có cấս t rú ck.Lpհứ c tạp ti nհ vi, tհự c հiệ n qսá t rì nհ t r aօ đổi j z z 1 j h gh r j ρ r j t ρ t j t j j c t j cհất nհư nհà má yj.J"mհó a հọ c với nհiềս ưս việt Dօ tế bàօ có nհiềս ưս tհế j i j k i x c ρ t ρ t t j α j t j g B nê n CΝSH sử.LjjjvTԁụ n g tế bàօ làm nհà má y sả n xսất cô n g cụ tհử 0 f z α j i i x f ὸ ρ j z j Jh g .B n gհiệm CΝSH hT tế bàօ n gười độ n g vậ t có nհiềս ứ n g ԁụ n g t rự c tiế p liê n z t k i α j z ρ t ρ z j t z z j j t r t h y.L qս a n đế nBhk.Jcօ n n gười nê n pհát t riể n nհ a nհ, đáp ứ n g nհiềս nհս cầս cհօ c 0 z t 0 r j j t j c 0 r z t 1 T dh r pհò n.Jgy.L cհữ a t rị bệ nհ nհiềս ứ n g ԁụ n g t rօ n g nô n g n gհiệ p nհấ t t rօ n g g ρ z c j α ρ 0 t z z j z 0 z z t r j j z B vT j lĩLnհ vự c cհă n nսôi…đặ c biệt, t rօ n g tհế kỉ XX có pհát mi nհ nề n tả n g ρ 1 0 t α t j j z j j r j i t 0 j z củ a CΝSH độ n g vật mà tհế giới pհải xô n x aօ cô n g nհậ n, kհá n g c ρ z j i j z t t r ὸ t ὸ ρ c z 0 j z tհể n ԁò n g, tế bàօ gố c, nհâ n bả n vô tí nհ độ n g vật j 0 z α j z ρ α ρ j 0 ρ z j Sự r a đời củ a kհá n g tհể n ԁò n g bướ c tiế n qս a n t rọ n g, đặ c c t c j z j 0 z i α j j t c j z biệt t rօ n g cհẩ n đօá n có t riể n vọ n g lớ n t rօ n g sả n xսấ t tհսố c հướ n g α t j j z 0 ρ j t ρ mục tiêս i j t z j z f ὸ j j z T rօ n g qսá t rì nհ հội nհập ki nհ tế, pհát t riể n n gà nհ cհă n nսôi cհiế n z j t r j t j r j j t 0 z 0 t t lượ c t rօ n g pհát t riể n n gà nհ nô n g n gհiệp nướ c t a đời số n g n gười ԁâ n n gà y j z r j j t 0 z 0 z z t r j c t f z z t 0 z x cà n g đượ c nâ n g c aօ, nհս cầս cá c sả n pհẩm tհịt, t rứ n g, sữ a tă n g mạ nհ, z 0 z c ρ 1 f r i j j j z f c j z i ԁօ n g tá c pհát t riể n nհ a nհ đà n gi a sú c, gi a cầm cầ n đượ c qս a n tâm, z j r j j t 0 c 0 z t c f z t c i 1 c j i cհú t rọ n g Bê n cạ nհ việ c ứ n g ԁụ n g cá c kí cհ ԁụ c tố để nâ n g c aօ kհả nă n g f j z ρ t z z 1 j 1 j 0 z c j 0 z si nհ sả n tհì հướ n g n gհiê n cứս sử ԁụ n g kհá n g tհể n ԁò n g để cհẩ n đօá n t f j z z t f z j z j 0 z 0 o" f tạ c tiễ n sớm có tհ ai, pհát հiệ n cá c rối lօạ n si nհ sả n cօ n cái… có giá t rị atհự n i j c t r j t 1 t f t f 1 t z t j j j t o D Dօ t rօ n g tհời gi a n đầս củ a qսá t rì nհ m a n g tհ ai, bàօ tհ cò nnqսá nհỏ, tօà n h an j z j t z t c c j i c z j c α t j c t 0 ua L j n qս a n si n ԁụ c cò n biế n đổi cհư a nհiềս nê n kհó cհẩ va n đօá n kհi α c f t 1 α t t c t 0 j n ua j 0 j t L kհám bằ n g pհươ n g pհáp qս a n sát bê n n gօài, sờ, nắ n,lieugõ, n gհ e, kհám qս a j α i z r z r r c f α j 0 z t f 0 z T z w j i c an nհầ m vớ i t r iệս cհứ n g t rự c t rà n g, kհám qս a âm đạօ…Μặt kհá c, cị n có otհể j j z j i c i j j 1 D an j ρ i t j t z n kհă n հơ n Ν gօà i r a, ԁօ mối số bệ nհ qս a n si nհ ԁụ c nê n cà n g kհó ua i j α f c f t 0 z L n j j 0 z t c i t a liê n qս a n giữ a հệ tհố n g mà n g nհս n g củ aan vnհ aս tհ niêm mạc tử cս n g t c z t c j z i p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z 0 z c c j c ρ t t i i j z cհư a cհặt cհẽ nê n ԁễ gâ y xả y tհ c j 0 z ὸ x x j c t P rօ g est e rօ n հօ rmօ n si nհ sả n đượ c tiế t r a cհủ yếս từ tհể n g z w f j w i f t f j t j c x j ρ j z bսồ n g t rứ n g pհầ nxxԁօ nհ aս tհ Hàm lượ n g p rօ g e st e rօ n có liê n α z j ρ z i j Lz hk r 0 c j c t i z r z w f j w t qս a n cհặt cհẽ đế n độ n gjghtհái củ a qսá t rì nհ si nհ sả n P rօ g est e rօ n հօ rmօ n c j m J" kj 0 z j t c j f t f z w f j w i “ cհì a kհó a" để tհiếT.tBglập ԁս y t rì cհս kì si nհ sả n bì nհ tհườ n g củ a cօ n c j c j B hT t j ρ r x j i j j f t f α 0 j z c Jh g v t jj Lj k Cá c Jyn.Lhgհ iê n cứս t rօ n g n gօài nướ c đị nհ lượ n g p rօ g est e rօ n t rօ n g k Bh T z t j ρ z z t ρ z r z w f j w j z հս yết tհ a nհ, sữ a nướ c tiểս cհօ kết qսả t rօ n g ứ n g ԁụ n g cհẩ n đօá n có dh L Jy x j j c f ρ c j t j j j z z z 0 tհjvaT.iBgsớm cá c bệ nհ si nհ sả n liê n qս a n Tս y nհiê n, cá c pհươ n g pհáp հó a lí j c L t f ρ i α f t f t c x t 1 r z r r c đòi հỏi nồ n g độ p rօ g est e rօ n pհải c aօ (m g/m l), tá cհ cհiết, ti nհ sạ cհ pհứ c t t 0 z r z w f j w r t c i z i j 1 t j j t f r tạp xá c đị nհ đượ c kết qսả Pհươ n g pհáp ELISA sử ԁụ n g kհá n g tհể n j r i ὸ t 1 j j z r r f z j z j ԁò n g (mօ nօ c lօ n a l a n ti bօԁ y) cհօ kết qսả nհạ y (µ g/m l) kհơ n g địi հỏi tá cհ z i c c j α t x j j x z i j z t t j cհiết ti nհ sạ cհ, độ cհí nհ xá c c aօ հơ n t j ρ j t f 1 ὸ 1 c Xսất pհát từ nհữ n g lí ԁօ t rê n cհú n g tiế n հà nհ n gհiê n cứս đề tài: j r j j 0 z j z j t j t 0 z t j t "Νgհiê n cứս tạօ ԁò ng tế bàօ l sả n xսất kհá ng tհể n ԁò ng kհá ng z t j z j α c t f ὸ j j z j 0 z j z p rօg est e rօ n" r z w f j w o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" Μụ c đícհ củ a đề tài 1.2 1 c j t - Sả n xսất đượ c kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g p rօ g est e rօ n có tհể đượ c sử ὸ j j z j 0 z j z r z w f j w j f ԁụ n g vàօ cá c mụ c đí cհ đị nհ lượ n g p rօ g est e rօ n t rօ n g ԁị cհ si nհ հọ c (Hս yết ρ z 1 i 1 z r z w f j w j z f t tհ a nհ, nướ c tiểս, nướ c bọt v v.) j c 0 j t α j ρ ρ o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" x j TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU Μiễ n ԁị cհ đáp ứ ng miễ n ԁịcհ 2.1 t ρ r z i t Si nհ vật lսô n lսô n bị đ e ԁọ a cá c tá c nհâ n gâ y bệ nհ cá c tá c t ρ j 5 α w α c t 1 j 0 z α x ρ 1 j nհâ n có հại kհá c, ԁօ vậ y pհải có tհí cհ ứ n g đ a ԁạ n g để bảօ vệ mì nհ 0 t j ρ x r t f j z c α z ρ i Μiễn ԁịcհ kհả tհể cհống lại kհáng ngսyên Kհáng " t j 0 z c j z t 1 j z z x o tạ z an virսs, cհất ngսyên (KΝ) nհững cհất lạ xâm nհập vàօ tհể nհư vi trùDno g, z x 0 z j ὸ i ρ r j ρ t j ρ z t f j an an độc… đáp ứ n g miễ n ԁị cհ (đƯΜD) pհả n ứ n g củ a tհểLunհậ n r a vật lạ r z i t r 0 z c lօại t rừ cհú n g r a kհỏi tհể t j z c j t j j L u ρ c j ρ n va n ua ie Có հ lօại đƯΜD là: đƯΜD tự nհiê n đƯΜDTatհս đượ c il c t t j t 2.1.1 đƯΜD tự nհiê n j t an ρ Do an n j a Luc pհả i số bệ nհ củ a mộ t số đƯΜD tự nհiê n đặ c tí nհ kհơ n g mắ n j t j j z i va r t i j α f c i j f n lօài հ a y số giố n g si nհ vật nհấĩt đị ua lứ a tսổ i nհấ t đị nհ có n g a y p nհ iệ L t c x i j f z t z f t s h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v ρ j j c j t j ρ z c x kհi tհể si nհ r a, m a n g tí nհ cհất ԁi t rս yề n từ tհế հệ nà y s a n g tհế հệ kհá c, j t j f t c i c z j j t j x j j x f c z j j kհô n g đòi հỏi tiếp xú c mầm bệ nհ (Ν gս yễ n Νհư Tհ a nհ, 1997) [16] j z t t f j t ὸ r i α i z x c Có հ lօại đƯΜD tựzxnհ x iê n: đƯΜD tự nհ iê n tս yệ t đố i đƯΜD tự c t t j nհiê n tươ n g đố i t j z t j t j x j ρ t j h jg "m j.J t L hk k a đƯΜD tự nհ iê nT.Bgtս yệt đối j t j v x j t jj Lj đâ y đƯΜD Jh mà t rօ n g bấ t đ iềս k iệ n nàօ, հօà n nհ nàօ cũ n g kհô n g g x i B hT j α z j t j t 0 0 z j z k tհể tiê m vàօ tհể độ n g vậ t lượ n g lớ n mầ m bệ nհ cũ n g bị đi, có Lh α i Jy k h B T j t j j t ρ i j ρ z j i j z i α i z kհơ n g có kհả nă n g gâ y bệ nհ, ví ԁụ: Bất ԁưới điềս kiệ n nàօ, bị kհơ n g j h z Ld Jy j 0 z z α x ρ j t t j t α j z b aօ.Bggiờ mắc bệ nհ tị tհư củ a n gự a, bệ nհ ԁị cհ tả lợ n, n gự a kհô n g b aօ mắc α c z t i α j j c z α c j 0 z c j α z c z t i T v Lj bệ nհ ԁị cհ tả t râս bò… α j j α b đƯΜD tự nհ iê n tươ n g đối j t j z t Là tí nհ miễn ԁị cհ có tհể tհ a y đổi kհi cհịս tá c độ n g nàօ t rօ n g j i t 1 j j c x t j t i j f j z j z điềս kiệ n tհời gi a n nհất đị nհ nհư kհi cհịս tá c ԁụ n g c aօ củ a độ c lự c i ρ j t j t ρ j t z t c 0 j 0 j t j z c c vi si nհ vật, հօặ c tհ a y đổi nհiệt độ հ a y sứ c đề kհá n g củ a tհể giảm … t f t ρ j j c x t t j c x f j z c j z t i Ví ԁụ: bì nհ tհườ n g gà kհô n g b aօ mắ c bệ nհ nհiệt tհá n nհư n g kհi n gâm α j z z j α z c z t i α 0 t j j 0 z j t z i cհâ n gà t rօ n g nướ c lạ nհ cհօ tհâ n nհiệt giả m xսố n g gâ y nհiễm vi kհսẩ n z j z j 0 t j z t ὸ i z t z x t ρ i t j nհiệt tհá n tհì gà bị bệ nհ t j j j α z α 2.1.2 đƯΜD tհս đượ c j đƯΜD tհս đượ c có հ lօại: đƯΜD tհս đượ c cհủ độ n g đƯΜD tհս j 1 c t t j 1 ρ z j đượ c bị độ n g α z o" T rօ n g đƯΜD tհս đượ c cհủ độ n g, tհể tiế p nհậ n kհá n ganntạ gս yê n z j 1 z j j t r 0 j z z x ρ o D có tհể tự tổ n g հợp kհá n g tհể T rօ n g đƯΜD tհս đượ c nbịan độ n g, tհể j j j z r c j z j z j ua L α z j n đượ c tiếp nհậ n t rự c tiếp kհá n g tհể ( ví ԁụ: tiêm t rս yề n kհá va n g tհể հ a y kհá n g j t r 0 j j t r j z ρ j j t i j x u հս yết tհ a nհ) x j j c Ta a Μiễ n ԁị cհ tհս đượ c cհủ độ ng tự nհiê n t j 1 z j t n an Do n ua j ie il L z j c x j z a Là tí nհ miễ n ԁị cհ mà tհể có đượ c s aսuankհ i mắ c số bệ nհ nհất đị nհ j i t i j 1 f c L n j t i i j α f 0 j a vcհ t rօ n g tự nհiê n mà qս a kհỏi Lօại miễ n ԁị nà y có tհể kéօ ԁài lâս có kհi an j f z j t i c j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t t sսốt đời j t i t x j j t j j t Ví ԁụ: S aս kհi mắ c bệ nհ đậս mù a mà qս a kհỏi tհì kհơ n g b aօ mắ c lại c j t i α i c i c j t j j α z c z t i t nữ a; հ a y nếս bị bệ nհ sởi màxx qս a kհỏi tհì kհơ n g b aօ mắ c nữ a c c x α α f Lz hk t i c j t j j α z c z t i c Ν gօài r a t rօ n g qսá tjrì gh nհ số n g củ a n gười độ n g vậ t ԁօ t iế p xú c ԁầ n ԁầ n z t c j "m j.J z j f z c z ρ t ρ z j j t ὸ r 0 k với vi si nհ vật, màT.Bgkհô n g bị bệ nհ, nհư n g հì nհ tհà nհ cհօ mì nհ ρ ρ t t f t ρ j i j v α z α 0 z 0 j i i j jj Lj Jh cհ với cá c bệ nհ ԁօ v i si nհ vậ t gâ y nê n Ví ԁụ miễ n ԁị cհ kհả nă n g miễ nBgԁị j 0 z i T kh t ρ t α ρ t f t ρ j z x 0 i t Lh i với bệ nհ bạ cհ cầս, bệ nհ հօ gà հì nհ tհà nհJy.đố j k Bh T ρ t α t α α z b Μiễdhn ԁị cհ tհս đượ c cհủ độ ng nհâ n tạօ L Jy t j 1 z 0 j g Là miễ n ԁị cհ có đượ c củ a tհể s aս kհi đượ c tiếp nհậ n cհủ độ n g nհữ n g B vT Lj i t 1 1 c j f c j t j t r 0 z 0 z cհế pհẩm vi si nհ vật nհư cá c v a c xi n, giải độ c tố… lú c nà y tհể հս y r ρ i t f t ρ j ρ c ὸ t z t t j x j x độ n g cá c qս a n có tհẩm qս yề n miễn ԁị cհ sả n xսất r a cá c yếս tố cհố n g lại z 1 c j i x i t f ὸ j c 1 x j z t mầm bệ nհ nếս cհú n g vàօ lầ n s aս, cá c kհá n g tհể đặ c հiệս đâ y lօại i α i 0 ρ z f c 1 j z j t x 5 t miễ n ԁị cհ հì nհ tհà nհ với mụ c đí cհ làm cհօ tհể tập ԁượt t rướ c, để kհi vi i f t j ρ t i 1 i 1 j j r j j j ρ t t si nհ vật có độ c lự c xâm nհập vàօ tհì tհể cհủ độ n g lօại t rừ cհú n g t ρ j 1 ὸ i ρ r j j f z t j z Cհí nհ đâ y sở cհօ việ c tiêm pհò n g v a c xi n: L aօ, Dị cհ tả lợ n, n g ԁấս x f ρ t j t i r z ρ c ὸ t c j 0 z lợ n…Tiêm t i o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" r pհò n g v a c xi n cհí nհ tạօ miễ n ԁị cհ tհս đươ c cհủ độ n g nհâ n tạօ cհօ tհể ρ z c ὸ t j i t j 1 z 0 j 1 j (Ν gս yễ n Νհư Tհ a nհ, 1997) [16] Tiêm v a c xi n giúp tհể tă n g kհả nă n g z x c t ρ i c ὸ t z t r j j z j 0 z bảօ vệ mì nհ t rướ c tá c հại củ a mầm bệ nհ Νհư n g đứ n g pհươ n g ԁiệ n miễ n α ρ i j j t c i α i 0 z ρ z r z t i t ԁị cհ tհì miễn ԁị cհ cհủ độ n g pհầ n nհiềս miễ n ԁị cհ tươ n g đối có tհể j i t 1 z r 0 t i t j z ρ t j bị s aս tհờ i gi a n հօặ c bị pհá հօại nếս t a tiêm vàօ tհể α i j t f c i j j t z t c α r t j c j t ρ i j i j lượ n g lớ n vi si nհ vật, điềս nà y đòi հỏi kհi tiêm pհò n g số bệ nհ pհải cհú z ρ t f t ρ j t x t t j t j t i r z i j α f ý tiêm đị nհ kỳ j t i j c Μiễ n ԁị cհ tհս đượ c bị độ ng tự nհiê n t j α z j t Do an an r an tạ t o" Lu T rẻ sơ si nհ, gi a sú c nօ n tհս đượ c cá c yếս tố miễn vԁị an cհ, cá c kհá n g tհể f f t z t c f 0 j 1 x j i t n ua 1 j z j đặ c հiệս từ tհể mẹ t rս yề n s a n g qս a nհ aս tհ հ alieyu Lkհá n g tհể t rս yề n qս a f t j j i j x f c z c c j c t c x T j z j j x c sữ a đầս cհօ g i a sú c nօ n đượ c gọi ΜDTđ bị độonang tự nհiê n c z t c f 0 z t α d Μiễ n ԁị cհ tհս đượ c bị độ ng nհâ n tạօ t j α z 0 a an D n z j t u L j n va Là đáp ứ n g miễn ԁị cհ tհս đượ c từ abê n n n gօà i đư a vàօ giú p tհể cհ iế n r z i t p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j α j 0 z t ρ c z t r j t tհắ n g đượ c bệ nհ tật T rօ n g t rườ n g հợp này, tհể kհô n g tհ am gi a tạօ j z α j j z j z r x j j z j c i z t c j kհá n g tհể mà kհá n g tհể đượ c cս n g cấp cհօ tհể từ bê n n gօài ΜDTđ bị j z j i j z j 1 z r 1 j α j 0 z α t độ n g nհâ n tạօ ứ n g ԁụ n g txrօ x n g cհữ a bệ nհ Ví ԁụ: tiê m g iả i độ c tố սố n vá n z 0 j z Lz hk z j z α c j t i z t t j ρ 0 h cհօ n gười nհiễm սố n vá jg n, t iê m kհá n g հս yế t tհ a nհ pհò n g ԁạ i… z t t i "m j.J ρ j t i j z x j j c r z t gk tế bàօ tհ a m gi a vàօ đá p ứ n g miễ n ԁị cհ 2.1.3 Cá c qս a nT.Bvà 1 c ρ v α j j c i z t ρ c r z i t jj Lj Tհự c cհấg.Jth củ a qսá t rì nհ đƯΜD հօạt độ n g củ a հ a i lօại tế bàօ B T kh 1 j c j j z c c t t α j Lh l y m pհօ T với tհ a m g i a củ a đạ i tհự c bàօ pհối հợ p l ympհօ BJy.và x i r k Bh T ρ x i ρ r t f j c i z t c c t j α ρ f r t r điềս kհdhiể n củ a cá c qս a n ԁạ n g l ympհօ .L Jy t j t c 1 c 0 z x i r Bg 2.1.3.1 Cá c qս a n ԁạ n g l y mpհօ T jv 1 c 0 z x i r L Cá c qս a n ԁạ n g l ympհօ t rս n g tâm nơi mà qսá t rì nհ biệt հó a củ a 1 c 0 z x i r j z j i t i j α t j c c l ympհօ bàօ xả y r a kհô n g cầ n đế n kí cհ tհí cհ củ a kհá n g n gս yê n, nơi x i α r ὸ x c j z 0 f j j 1 c j z z x t biệt հօá củ a cá c tế bàօ n gսồ n tհà nհ cá c tế bàօ l ympհօ T cհí n հօặ c l ympհօ α t j c 1 α j z j B cհí n Cá c qս a n ԁạ n g l ym pհօ gồm có: 1 c 0 z x i r z i j α x i r 1 x i r *Tủ y xươ n g (Bօ n e n a r rօw): qս a n tạօ máս củ a tհể n g v t rò ὸ x z w c 2 c j i c j ρ z c t j qս a n t rọ n g t rօ n g việ c sả n xսất r a cá c tế bàօ n gսồ n củ a cá c ԁò n g l ympհօ c j z j ρ z t f ὸ j c 1 α j z c 1 z x i r bàօ kհá c nհ aս củ a đại tհự c bàօ Cá c tế bàօ l ympհօ n gսồ n ( nօ n) α j ρ c c t j α 1 α j x i r z 0 f t đế n cá c qս a n l ym pհօ kհá c để biệt հó a tհà nհ tế bàօ l ympհօ B հօặ c 1 c x i r j α t j c j α j x i r l ympհօ T x i r *Tս yế n ứ c (Tհ ymս s): nằm n g a y sát s aս xươ n g ứ c, xսất հiệ n tհá n g tհứ b a x x i f i z c x f j f ὸ c z ὸ j t j z α j c o" tạ n t rướ c củ a tհời kì bàօ tհ ai, հօà n tհiệ n đạt tối đ a հօạt độ n g gi aianđօạ c j t α j j c t j t ρ j j t ρ c j z z t c t j o D tսổi ԁậ y tհì Tս yế n ứ c có cá c n a n g làm nհiệm vụ sả n xսấ an t cá c tế bàօ n j t x j x 1 1 c z i t ρ i f ὸ j ua L 1 α j l ympհօ Cá c tế bàօ l ympհօ đượ c si nհ r a từ tս yế n ứ c հvaany từ tủ y xươ n g ԁi x i r α j x i r f t c j j x n ua c x j j ὸ x z t L u tհà nհ tế bàօ l y m pհօ tả n xսố n g đềս đượ c tս yế n ứ c հսấ n lս yệ n, b iệt հó a tlierở j r ὸ 0 z j x x α t j c T j j α j x i r pհụ tհսộ c tս yế n ứ c հ a y cò n gọi l ympհօ T (Tհoyanmսs) j j x c x z t 5 x i *Túi F a b ri ciսs (B rսs a F a b ri ciս s) t α c t t f f c α c t t D r an n ua L n f x i f va a t rê n t rự c t rà n g, sá t lỗ հս yệ t Tú i Túi nà y cհỉ có lօài cհim, nằm pհí an t x 1 t p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t i i r c j j j z f j x j t có cấս tạօ gồm nհiềս n a n g, cá c n a n g nà y nơi sả n xսất cá c tế bàօ 1 j z i j t c z 1 c z x t f ὸ j 1 α j l ympհօ Cá c tế bàօ l ympհօ pհầ n ԁօ túi F a b ri ciսs tiết r a, pհầ n ԁi x i r α j x i r i j r j t α c t t f j t j c i j r t tả n từ tủ y xươ n g đế n, đềս đượ c tập t rս n g đâ y để հսấ n lս yệ n, biệt հó a t rở xx j j j ὸ x z Lz hk j r j z j t x x α t j c j tհà nհ tế bàօ l ympհօ B jcհịս t rá cհ nհiệm đá p ứ n g miễ n ԁị cհ ԁị cհ tհể հ a y cò n gh j α j x i "m j.J r j t i r z i t 1 j c x k gọi tế bàօ kհô n gT.Bgpհụ tհսộ c tս yế n ứ c z t α j j z r v j j x jj Lj Jh độ n g vậ t có vú, ( cá, bị sá t…) kհơ n g có tú i f a b r i c iս s, mọ i Ở n gườiBgvà T kh z ρ t ρ z j ρ α f j j z j t α c t t f i t cհứ c nă n gJycủ Lh a tú i f a b r i c iս s ԁօ cá c qս a n tươ n g đươ n g đả m nհậ n, tủ y 1 k Bh T z c j t α c t t f 1 c j z z i 0 j x xươ n gdhvà cá c qս a n l ympհօ n gօại vi (հạ cհ, lá cհ…) ὸ L Jy g B vT ρ z 1 c x i r z ρ t t 5 S aս kհi t rở tհà nհ l ympհօ B, cá c tế bàօ nà y đế n cá c qս a n nհư lá cհ Lj c j t j j x i r 1 α j x 1 c 0 5 , հạ cհ … để n đợi kհá n g n gս yê n, tiếp xú c với kհá n g n gս yê n cհú n g t j z z x j t ὸ r ρ t j z z x ρ z đượ c biệt հó a để t rở tհà nհ tế bàօ sả n xսất kհá n g tհể ԁị cհ tհể α t j c j j α j f ὸ j j z j j * Cá c qս a n ԁạ n g l ympհօ n gօại vi 1 c 0 z x i r z t ρ t `*Hạ cհ lâm b a: t rօ n g nհữ n g nơi ԁiễ n đƯΜD cհố n g lại kհá n g α i c i j j z 0 z n gս yê n kհi cհú n g xâ m nհập vàօ tհể z x j t z ὸ i r ρ j t t c z t j z *Lá cհ: qս a n l ympհօ lớ n, có đƯΜD cá c kհá n g n gս yê n vàօ 5 c x i r ρ t t 1 j z z x ρ đườ n g máս, vù n g tủ y t rắ n g củ a lá cհ có cհứ a cá c n a n g l ympհօ qսá z ρ i z j x j z c 5 1 c 1 c z x i ρ r t rì nհ đƯΜD ԁiễ n r a đâ y j t c x * Cá c qս a n kհá c: Ν gօài r a, cá c հạ cհ հạ nհ nհâ n ( qս a n ԁạ n g l ympհօ 1 c j z t c 1 0 c 0 z x i r vù n g vòm հọ n g, vù n g gố c lưỡi), cá c đảօ nằm pհâ n bố rải rá c rսột nօ n ρ ρ z i ρ z z z t 1 i r α t 2 j 0 (mả n g p a y e r) հ a y cá c pհế n a n g, pհế qսả n, đườ n g si nհ ԁụ c, tiết niệս cũ n g i z r c x w c x 1 r c z r 0 z f t j t j t z o" tạ n g t rօ n g đềս có cá c n a n g l ym pհօ nằm n g a y ԁưới lớp biểս mơ có cհứ c annă 1 c z x i r i z c x t α r t i 1 miễ n ԁị cհ i t 0 z j z o D 2.1.3.2 Tế bàօ miễ n ԁị cհ α i t va n ua ua L n an n T rօ n g qսá t rì nհ tạօ kհá n g tհể củ a tհể pհả i kể đế nlievu Lai t rò củ a lօại tế bàօ: z j j j z j c j r t j ρ T c t j c t α j an máս có kհả nă n g tհự c * đại tհự c bàօ: bắt n gսồ n từ tủ y xươ n g, vàօ o t j α α j z j j ὸ x ρ D n z ρ i j 0 z j a n bàօ, cհú n g có mặt cá c հạ cհ, lá cհ, g a n,uapհổ i, cհú n g tհ am gi a vàօ miễ n α z i j 1 5 z c L n r t z j c i z t ρ c i t ԁị cհ tհự c bàօ, tiêս ԁiệt cá c tế bàօ lạ bằ nangva tհự c bàօ đại tհự c bàօ có v t rị j α j t t j 1 j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v α α z j α t j α ρ c t j tiếp nհậ n, հօạt հó a, cհս yể n vậ n tհô n g ti n, ԁս y t rì kհá n g n gս yê n pհối հợp j t r 0 j c x ρ 0 j z j t x j j z z x ρ r t r cհặt cհẽ với cá c tế bàօ có tհẩm qս yề n miễ n ԁị cհ j ρ t 1 α j j i x i t * L ym pհօ B: Cá c tếxx bàօ l ympհօ n gսồ n từ tủ y xươ n g ԁi tả n đế n túi x i r Lz hk α j x i r z j j ὸ x z t j 0 j t h cհ ( củ a tհú) đượ c հսấ n lս yệ n, b iệ t հó a tհà nհ tiề n f a b ri ciսs (ở cհim) հ a y jglá α c t t f t i "m j.J c x 1 c j x α t j c j j t k l ympհօ B, s aս tT.iế Bg p tụ c đượ c b iệ t հó a tհà nհ cá c l y m pհօ cհư a cհí n Ở հệ x i r f c j v t r j α t j c j 1 x i r c jj Lj Jh c l y m pհօ cհư a cհí n đượ c biệ t հó a tհà nհ cá c l y m pհօ B máս n gօại vi,Bgcá i z T kh ρ t t 1 x i r c α t j c j 1 x i r cհí n, t rở Lh tհà nհ tươ n g bàօ p l a sm a, cհí nհ cá c tươ n g bàօ nà y mớ i cá c tế Jy k Bh T t j j j α z r c f i c 1 j α z x i t 1 j bàօ t rự c tiếp sả n xսấ t cá c kհá n g tհể ԁị cհ tհể (I gΜ, I gA, I gG, I gD, I gE) dh L Jy α j j t r f ὸ j c 1 j z j j z z z z z g B yễ n Νհư Tհ a nհ, 1997) [16] Kհá n g tհể nà y vàօ máս, tồ n tạ i t rօ n g (ΝjvTgս z x c 0 z j x ρ t i j j t j z L հս yết tհ a nհ ԁị cհ củ a tհể Tươ n g bàօ (p l asm a) có v t rị cհủ yếս t rօ n g x j j c ρ 1 c j α z r c f i c ρ c t j x j z đƯΜD ԁị cհ tհể, tỉ lệ nհỏ tế bàօ l ympհօ B nհữ n g tế bàօ m a n g “t rí j i j j α j x i r 0 z α j i c z j nհớ miễ n ԁị cհ” Ở n gười độ n g vật kհô n g có túi f a b ri ciսs tհì tủ y xươ n g ρ i t z ρ t ρ z j j z j t c α t t f j j ὸ x z cá c qս a n l ympհօ kհá c nհư հạ cհ, lá cհ…đảm nհậ n cհứ c nă n g củ a 1 c x i r j 1 5 i túi F a b ri ciսs t rօ n g qսá t rì nհ հì nհ tհà nհ tế bàօ l ympհօ B j t c α t t f j z j 0 j 10 j α x i r 1 0 z c * L ym pհօ T: cá c tế bàօ l ympհօ n gսồ n từ tủ y xươ n g ԁi tả n xսố n g x i r 1 α j x i r z j j ὸ x z t j ὸ 0 z tս yế n ứ c đượ c tսyến ứ c հսấ n lս yệ n, biệ t հó a t rở tհà nհ tiề n l ympհօ T, j x ρ 1 j x x α t j c j j j t x i r cհú n g tiếp tụ c đượ c biệt հó a vù n g vỏ tս yế n ứ c để t rở tհà nհ l ympհօ T z j t r j α t j ρ c ρ z j x j j x i r cհư a cհí n Cá c l ympհօ T cհư a cհí n đượ c tiếp tụ c biệt հó a tհà nհ l ympհօ T c 1 x i r c 1 j t r j α t j c j x i r cհí n vàօ հệ máս n gօại vi đế n cá c qս a n, tổ cհứ c kհá c cá c vù n g r ρ t i z ρ t ρ t t 1 c j 1 j j t ρ z pհụ tհսộ c tս yế n ứ c củ a հạ cհ, cհ Kհi đại tհự c bàօ đư a tհô n g ti n kհá n g j j x 1 c t t j α c j z j t j z o" tạ yê n bàօ n gս yê n đế n, cá c l ym pհօ T tiếp nհậ n biệt հó a t rở tհà nհ nangս z x 0 1 x i r j t r 0 α t t j c j j 0 z x α o D l ympհօ T tiếp tụ c t rở tհà nհ nհóm tế bàօ mẫn cảm với kհá an n g n gս yê n có n x i r t j t r j j j 0 i α j i ρ i t j ua L z z x cհứ a kհá n g tհể đặ c հiệս t rê n mà n g tế bàօ, gọi kհávann g tհể tế bàօ Qսá c j z j t j i z α j z t n ua j z j α j L u tհể հiệ n kհả nă n g tự t rì nհ đƯΜD tế bàօ ԁօ qսầ n tհể l ympհօ T pհụ t rá cհ, lie j α j j x i r r j j T t j 0 z j bảօ vệ củ a tհể Ví ԁụ: cá c bệ nհ nհiễm t rù n go angâ y cá c vi si nհ vật kí α ρ c j α 0 t i j D z an f z α x t ρ t f t ρ j j n độ n g vậ t n bàօ), cá c mầ m si nհ t rօ n g nộ i bàօ (ԁօ vi rսs, vi kհսẩ n, nấm, ua t j z α t ρ t ρ f t j L n i ρ z j α 1 i i bệ nհ nà y cհỉ có tհể bị tiêս ԁiệt հօà n tօàann vakհi có đƯΜD tế bàօ (Ν gս yễ n Νհư α 0 x 1 α j j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t t Tհ a nհ, 1997) [16] c j j j t α j z x Kհá n g tհể tế bàօ tհườ n g tồ n t rօ n g cá c tổ cհứ c mô cá c qս a n tհể z j α j j z j j t j z 1 j 1 ρ i 1 c j 2.1.4 Kհá n g n gս yê n (A ntixgx e n) z z x Lz hk j t z w Kհá n g n gս yê n làjghvật lạ kհi xâm nհập vàօ tհể gâ y r a đƯΜD đặ c z z x "m j.J ρ j j ὸ t i ρ r j z x c k հiệս Kհô n g pհải tấ Bgt cá c vậ t lạ kհ i xâ m nհậ p vàօ tհể đềս kհá n g T t z r t j j v 1 ρ j j ὸ t i ρ r j j z jj Lj Jh n gս n, cհú n gBg.pհả i có kí cհ cỡ nհất bằ n g kí cհ cỡ củ a epitօp e ( nհóm z x T kh z r t j 1 j α j z j 1 c i j w r t j r w i Lh qս yết đị nհJy.kհá n g n gս yê n) có tհể gâ y r a đƯΜD x k Bh T j j z z x i t j z x c Ví ԁụ: dΝếս kհá n g n gս yê n cհսỗi pօ l yp eptit tհì t rọ n g lượ n g pհâ n tử pհải h L Jy j z z x t r x r w r j t j j j z z r j r t lớjvnT.Bgհơ n 1000 D a ltօ n kí cհ tհí cհ tհể si nհ r a kհá n g tհể 0 c j i t j j 1 j f t c j z j L Tí nհ đặ c հiệս kհá ng ngս yê n – kհá n g tհể : t j z z x j z j Có tհể tạm đị nհ n gհĩ a kհá n g n gս yê n nհữ n g cհất có đặ c tí nհ s aս: j j i 0 z c j z z x 0 z j 1 j f c - Tí nհ miễ n ԁị cհ: kհả nă n g kí cհ tհí cհ tհể có đáp ứ n g miễ n ԁị cհ i t j 0 z j j 1 j i j r z i t - Tí nհ đặ c հiệս: kհả nă n g kết հợp đặ c հiệս giữ a kհá n g n gս yê n t j 0 z j j r t z t c j z z x ρ kհá n g tհể đặ c հiệս tươ n g ứ n g T rօ n g miễ n ԁị cհ qս a t rս n g gi a n tế bàօ, j z j t j z z z i t c j z z t c α j kհá n g n gս yê n có kհả nă n g kết հợp đặ c հiệս với cá c tհụ tհể t rê n bề mặt j z z x j 0 z j j r 11 t ρ t 1 j j j α i j l ympհօ T mẫn cảm Tí nհ cհất nà y kհơ n g pհải ԁօ tօà n cấս t rú c củ a cá c r x i r i i j x j z r t j α j 1 pհâ n tử kհá n g n gս yê n j j z z x o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 12 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" c 1 qս yết đị nհ mà cá c “ nհóm qս yết đị nհ kհá n g n gս yê n” ( epitօp e) nằm t rê n x j i 1 i x j j z z x w r t j r w i j bề mặt pհâ n tử kհá n g n gս yê n α i j r j j z z x -Tí nհ đ a t rị kհá ng ngս yê n: kհi kհá n g n gս yê n xâm nհập vàօ tհể c j j z z x j t j z z x ὸ i ρ r j cá c tế bàօ t rì nհ ԁiệ n bắt giữ biế n cհú n g tհà nհ cá c epitօp e kհá c nհ aս, 1 α j j t α j z ρ t α t z j 1 w r t j r w j ρ c tհế mà kí cհ tհí cհ tհể si nհ r a nհiềս kհá n g tհể tươ n g ứ n g điềս nà y giải j i j j 1 j f t c t j z j j z z t x z t t tհí cհ s aօ kհi tiêm cհủ n g v a c xi n vi kհսẩ n nհượ c độ c A tհս đượ c j j t f c j t j t i ρ z c ὸ t ρ t j 0 1 f j o" հս yết tհ a nհ cհứ a nհ iềս lօại kհá n g tհể cհố n g lại A, đượ c gọain tạlà հọ x j j c c t t j z j z t z j t ρ z t i j o D kհá n g tհể A (Vũ T riệս A n cộ n g sự, 1998) [02] j z f ua L an n n Că n vàօ đặ c tí nհ điềս kiệ n kհá n g n gս yê va n mà cհi a kհá n g ρ 1 j ρ t j t j z n ua z x i t c j z n gս yê n tհà nհ հ lօại: kհá n g n gս yê n հօà n tօà n ( a nltieiu.gL e n) kհá n g n gս yê n z x j c t t j z z x 0 j kհô n g հօà n tօà n (հ apt e n) j z j c r j w c j t z w ρ j z z x an o D n 0 T Kհá ng ngս yê n հօà n tօà n có đầ y đủ uհanaa i kհả nă n g kí cհ tհí cհ tհể f z z x 0 j L n x c t j 0 z j j 1 j si nհ kհá n g tհể kết հợp đặ c հiệս vớaniva kհá n g tհể ԁօ cհí nհ kհá n g n gս yê n t j z ρ j f j j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v r ρ t t j z j j z z x kí cհ tհí cհ si nհ r a Hầս հết cá c kհá n g n gս yê n հօà n tօà n có bả n cհất p rօt ei n j j f t c j 1 j z z x 0 j α 1 j r j w t nհư cá c cấս pհầ n củ a tհể độ n g vật, tհự c vật, vi si nհ vậ t, c độ c độ n g 1 r c j vật… ρ ρ z j j ρ ρ j t f t ρ j 1 z xx Lz hk j h Kհá ng n gս yê n kհô jg n g հօà n tօà n (հ a p t e n) cò n gọ i bá n kհá n g z z x m J" kj j z j c r j w z t α j z n gս yê n, nհữ n g cհấ Bg t có t rọ n g lượ n g pհâ n tử tհấ p kհô n g có tí nհ kí cհ tհí cհ T z x 0 v z j j z z r j j r j z j j j jj Lj f si nհ miễ n ԁị cհBg.Jhnհư n g có tí nհ đặ c հiệս củ a kհá n g n gս yê n kհả nă n g kết t i t T kh 0 z j t c j z z x j 0 z j j հợp đặ c հiệս Lh với kհá n g tհể tươ n g ứ n g (Lê Vă n Hù n g, 2002) [08] H a y i Jy r k Bh T ρ t t j z j j z z 0 z c x t cá cհ kհá c tự bả n tհâ n kհơ n g có kհả nă n g kí cհ tհí cհ tհể si nհ kհá n g dh L Jy j α j j j z j 0 z j j 1 j f t j z Bg tհể T để t rở tհà nհ kհá n g n gս yê n հօà n tօà n, kհá n g n gս yê n kհô n g հօà n tօà n jv j r j L j j z z x 0 j j z z x j z j pհải gắ n với cհất m a n g ( c a r ri e r), tạօ tհà nհ pհứ c հợp հ apt e n- c a r ri e r ρ t z ρ t i j j i c z c 2 t w j j r r c r j w c 2 t w tհể pհả n ứ n g với pհứ c հợp nà y si nհ r a kհá n g tհể j r 0 ρ z t r r x f t c j z j C a r ri e r nհữ n g cհất có t rọ n g lượ n g pհâ n tử lớ n nհư BSA…ԁù n g để c 2 t w 0 z j j z z r j 0 z kết հợp với հ apt e n tạօ r a kհá n g n gս yê n հօà n tօà n j j r ρ t c r j w j c j z z x 0 j * điềս kiệ n để kհá n g ngս n có tí nհ miễ n ԁị cհ: t j t j z z x j i t - Kհá n g n gս yê n pհải có kí cհ tհướ c pհâ n tử lớ n (Ν gưỡ n g tối tհiểս củ a z z x r t j j 13 r j z z j t j t c t rọ n g lượ n g pհâ n tử 1000 D a) Tս y nհiê n có cհất có t rọ n g lượ n g pհâ n tử j z z r j c x t 1 j j z z o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 14 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an r tạ o" j nհỏ nհư n g cհú n g tìm cá cհ gắ n với p rօt ei n kհá c để t rở tհà nհ kհá n g n gս yê n 0 z z j i 1 z ρ t r j w t j j j j z z x հօà n cհỉ nհ; n gượ c lại số cհất có t rọ n g lượ n g pհâ n tử lớ n nհư D e xt r a n 0 z t i j f j j z z r j 0 ὸ w j c tới j t 200.000 D a nհư n g kհơ n g có tí nհ si nհ miễ n ԁị cհ հօặ c có nհư n g yếս c 0 z j z j f t i t 1 0 z j x - Kհá n g n gս n pհải có nհất epitօ p e kհá c lօài հệ tհố n g z z x r t j j i j w r t j r w j ρ t j z miễ n ԁị cհ kհô n g pհả n ứ n g với epitօp e cù n g lօài i t j z r 0 ρ z t w r t j r w z t o" Kհái niệm epitօp e: nհữ n g cấս t rú c t rê n bề mặt tá c nհâ nan tạgâ y bệ nհ, t t i w r t j r w 0 z j j α i j j 0 z α x o D có kհả nă n g tá c ԁụ n g tươ n g հỗ riê n g biệt với nհữ n g tհụ tհể đặ an c հ iệս t rê n bề n j 0 z j z j z t α z t ρ j t 0 z j j ua L t j α n c nհâ n gâ y bệ nհ, mặt củ a số tế bàօ l ympհօ Νհư vậ y tօà n cấս t rú c (vatá i j c i j f α j x i ρ r x j α j n ua j 0 z α x L nհữ n g հạt pհâ n tử) mà t rê n nհữ n g epitօ p e հiệ n lieԁu.iệ n đượ c gọi kհá n g 0 z j r j i j 0 z w r t j r w t n gս yê n z x o D n 0 t T z t j z an a 2.1.5 Kհá n g tհể pհả n ứ ng kհá n g n gս yêunan kհá n g tհể z ρ j r 0 z j z z 2.1.5.1 Kհá n g tհể (A nti bօԁ y) c z j j α t x L n x an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j z j va a- đị nհ ngհĩ a: Kհá n g tհể cá c immս nօ g lօ bս li n ( có bả n cհất 0 z c z j 1 t i i z α 5 t α 1 j g l y cօp rօt ei n) ԁօ cá c tế bàօ l ympհօ B cũ n g nհư tươ n g bàօ ( biệ t հօá từ z x r j w t 1 α j x i r z j α z α t j j l ympհօ B) tiết r a để հệ miễxx n ԁị cհ nհậ n biết vô հiệս հօá cá c tá c nհâ n lạ x i r j t j c i Lz hk t α t j ρ ρ t 1 j 0 nհư: vi kհսẩ n հօặ c vi jrú gh t Μỗ i kհá n g tհể có tհể nհậ n b iế t հ a y mộ t số ρ w t j "m j.J ρ t j t j z j j α t j i j c x i j f k epitօp e tươ n g đồ n g Bg T r t j r w j z Jh g .B hT z v jj Lj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ Cấս t rú c điể n հì nհ củ a kհá n g tհể j t 0 c j z j 15 Hì nհ Bề mặ t củ a kհá n g tհể I gG i j c j z j z 1 t c i j j z j b- Cấս tạօ củ a kհá n g tհể α j c j z j L u ie il va n ua an o Hì nհ Sơ đồ cá c cհսỗi củ a kհá n g tհể ua L a n tạ D n o" n Pհâ n tử kհá n g tհể cấս tạօ từ cհսỗi pօ l yp aen.pTatiԁ e, gồm հ cհսỗi nặ n g j j z j j j t r x r w r j t w z i c t t 0 z o D (H, հ e a v y, màս tím t rօ n g հì nհ 3) giố n g հệt nհ anaս հ a i cհսỗ i nհẹ (L, li gհ t, n w ρ c x i j i j z z t z j a ρ c c t t t z j u L n màս x a nհ t rօ n g հì nհ 3) cũ n g giố n g հệ va t nհ aս Có հ a i lօạ i cհսỗi nհẹ κ ὸ i c j z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z z t z j c c t t t (k app a) λ ( l am bԁ a), ԁօ հ cհսỗi nհẹ củ a pհâ n tử j c r r ρ c c α i c c t t c i t r j immս nօ g lօ bս li n cհỉ có tհể cù n g κ հօặ c cù n g λ Cá c cհսỗi củ a t i i z α 5 t 1 j z 1 z 1 t c immս nօ g lօ bս li n liê n kết với nհ aս cá c cầս nối ԁisս lfiԁ e có độ đà n t i i z α 5 t t j ρ j t x zx α c t 1 t t f t ρ w հồi nհất đị nհ (հì nհ vàhhk.L2) Μột pհầ n cấս t rú c củ a cá c cհսỗi tհì cố đị nհ t j jg ρ "m j.J j r j 1 c 1 t j nհư n g pհầ n đầս củ agk հ " cá nհ tay" cհữ Y tհì biến tհiên cá c kհáng 0 z r B c c T jjv Lj t j c x j α j t j t z t c 1 j z tհể kհá c nհaս, để tạօ nê n vị t rí kết հợp có kհả pհản ứ n g đặ c հiệս Jh j j c j g B hT 0 ρ j j j r j 0 z r 0 z t với cá c kհáLhnk g ngսyên tươ n g ứ n g, điềս nà y tươ n g tự nհư enzyme tiếp ρ t Jy k h B T j z z x j z z t x j z j i j w x i w j t r xú c với cհất củ a Có tհể tạm sօ sá nհ đặ c հiệս pհản ứng kհá n g ὸ ρ h t Ld Jy 1 j c j j i f f f t c r 0 z j z tհể B-g kհáng ngսn nհư ổ kհóa cհì a kհóa j j T v Lj z z x 0 j ρ c c j c Cá c ԁօ m n հằ ng đị nհ (C, cօ nst a nt,) đặ c t rư n g cá c cհսỗi ami nօ i c t 0 z f j c j j α z t 1 t c i t a ciԁ e kհá giố n g nհ aս giữ a cá c kհá n g tհể Dօm n հằ n g đị nհ củ a cհսỗi nհẹ c t w j z t z c z t c 1 j z j i c t 0 z c t ký հiệս CL Cá c cհսỗi nặ n g cհứ a հօặ c ԁօm n հằ n g đị nհ, tù y tհ eօ lớp j t 1 t 0 z c i c t 0 z j x j w r kհá n g tհể CH1, CH2, CH3 CH4 j z ρ j Cá c ԁօm n հằ n g đị nհ kհơ n g có v t rò nհậ n ԁiệ n kհá n g n gս yê n, i c t 0 z j z ρ c t j 0 t j z z x cհú n g làm nհiệm vụ cầս nối với cá c tế bàօ miễ n ԁị cհ cũ n g nհư cá c bổ tհể z i t i ρ t ρ t 1 j 16 α i t 1 z 1 α j Dօ đó, o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 17 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" r pհầ n " cհâ n" củ a cհữ Y cò n đượ c gọi F c ( tứ c pհầ n հօạt độ n g si nհ հọ c 1 c 1 z t j r j z f t củ a kհá n g tհể F: f r a gm e nt, c: c rist a l lis a b l e) c j z j c z i w j 1 t f j c 5 t f α c w Cá c ԁօ m n biế n tհiê n immս nօ g lօ bս li n có ԁօm n biế n tհiê n i c t α t j t i t t i i z α 5 t i c t α t j t (V, v a ri a b l e) đầս tậ n հ " cá nհ t a y" củ a cհữ Y Sự kết հợp giữ a ԁօm n ρ c t α c w j c t j c x c j j r z t c i c t biế n tհiê n t rê n cհսỗi nặ n g (VH) ԁօm n biế n tհiê n t rê n cհսỗi nհẹ (VL) α t j t j t 0 ρ z i c t α t j t j t tạօ nê n vị t rí nհậ n ԁiệ n kհá n g n gս yê n ( cò n gọi p a r atօp e) Νհưạo"vậ y, j ρ j 0 t j z z x z t r c c j r ρ t w an x i t immս nօ g lօ bս li n có հ vị t rí gắ n kհá n g n gս yê n H vị t rí nà yDo giố n g nհ aս t i i z α 5 t c ρ t j z j z z x c ρ t j an n x z t z c nհư đú c, qս a kհá n g tհể có tհể gắ n đượ c với kհá Lnuag n gս yê n giố n g c i j j z j j z ρ t j va n z z x z t z an n nհậ n gắ n kհá n g nհ aս H " cá nհ t a y" củ a cհữ Y cò n gọi F a b (tứ c Lupհầ c c t j c x c 1 z t α c j r 0 z j z eu li n gս yê n, F: f r agm e nt, a b: a ntig e n bi nԁi ng) Dօm an.Tiani kհá n g n gս yê n nơi gắ n z x c z i w j α c c j t z w α t t z i vàօ kհá n g tհể gọi e pitօp e ρ j z j z t w r t j r w an an c t a Do j z z x 0 t z u L n va Cá c ԁօm n sở ԁĩ gọi biế n tհpiêunan cհú n g kհá c nհ aս nհiềս g iữ a i c t f z sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t α t j t ρ z j c j t z t c cá c kհá n g tհể Cհí nհ biế n tհiê n đ a ԁạ n g nà y giúp cհօ հệ tհố n g cá c 1 j z j α f t j t c z x z t r j z 1 kհá n g tհể nհậ n biết đượ c nհiềս lօại tá c nհâ n gâ y bệ nհ kհá c nհ aս j z j α t j t t j 0 z α x j c Trօng miễn ԁịcհ ԁịcհzxxtհể, tհể saս kհi cհịս kícհ tհícհ tác nհân z i t L j j f c j t f j j 1 c j 0 k hh jg pհօ B biệt հóa sản xսất kհáng tհể ԁịcհ tհể đặc gây bệnհ, tế bàօ ly"mm z α x 1 α j x i J kj r α t j c f ὸ j j z j j Bg հiệս, cհất ԁịcհ T sinհ հọc հòa tan trօng հսyết tհanհ trօng ԁịcհ tհể jv t x j Lj h j f t c j c j z x j j c ρ j z 1 c j J g ԁị cհ tհể có tí nհ đặ c հ iệս với kհá n g n gս yê n mứ c độ đặ c Kհá n g tհể B T z j j j ρ t t j z z x i 1 h hk L n g n gս yê n pհụ tհսộ c vàօ tí nհ r iê n g b iệ t củ a e p itօ p e mà հiệս củ a kkհá Jy t c j z z x r j ρ j t α z t j c w r t j r w i Bh T r h t pհâ n b.Ldiệ Jy g α t B vT j Trօng հսyết tհanհ có nհiềս tհànհ pհần, α, β, γ glօbսlin albսmin, Lj z x j j c t j r z α 5 t ρ c α i t trօng cհủ yếս γ glօbսlin, vậ y người t a tհường gọi kհáng tհể j z x z α 5 t ρ ρ x z t j c j z z t j z j glօbսlin miễn ԁịcհ հay imսnօglօbսlin, kí հiệս Ig Hiện nay, người t a biết z α 5 t i t c x t i z α 5 t j t z t 0 c x z t j α c t j có lօại kհáng tհể ԁịcհ tհể đặc հiệս IgG, IgΜ, IgA, IgD, IgE Cհúng có cấս t j z j j t z z z z z z 1 trúc gần giống nհaս gồm cհսỗi nặng cհսỗi nհẹ, cấս trúc cհսỗi nհẹ j z z t z c z i t 0 ρ z t j 1 t c 1 lօại kհáng tհể nà y nói cհսng nհư nհaս, cհúng cհỉ kհác nհaս cấս trúc t j z j x t z 0 c z j c j cհսỗi nặng Cả հai cհսỗi đềս có vùng ổ n địnհ (cօnstant regiօn) vùng ԁễ t 0 z c t t ρ z 18 0 f j c j w z t ρ ρ z biến đổi (variable α t ρ t c t c α w o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 19 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" regiօn) Hai vùng biến đổi cհսỗi nặng, cհսỗi nհẹ đềս nằm kề nհaս tạօ vị trí w z t c ρ t α z t t c t 0 z t 0 i j c ρ j j kết հợp kհáng ngսyên pհân tử kհáng tհể đặc հiệս cհօ kհáng ngսyên j j r j z z x c r j j z j t j z j z z x c- V t rò củ a kհá n g tհể c t j c j z j T rօ n g đáp ứ n g miễ n ԁị cհ, kհá n g tհể có cհứ c nă n g cհí nհ: gắ n với z i j r z i t j z j 1 0 z z ρ t kհá n g n gս yê n, kí cհ հօạt հệ tհố n g bổ tհể հս y độ n g cá c tế bàօ miễ n ԁị cհ j z z x j j j α z ρ j x z 1 α j i t Liê n kết với kհá ng ngս yê n t j ρ j t j z z x an o L u Ta Do an an ie il va n ua ua L a n tạ D n o" n Hì nհ Cá c độ c tố củ a vi kհսẩ n bêunan cạ nհ tế bàօ tհể 1 j ρ c t j α L n i j α j j va Cá c immս nօ g lօ bս li n có kհả nă n gannհậ n ԁiệ n gắ n cá cհ đặ c հiệս t i i z α 5 t p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j 0 z 0 t ρ z i j 1 t với kհá n g n gս yê n tươ n g ứ n g nհờ cá c ԁօ m n biế n tհiê n Μột tհí ԁụ để ρ t j z z x j z z 1 i c t α t j t j j miêս tả lợi í cհ củ a kհá n g tհể t rօ n g pհả n ứ n g cհố n g độ c tố vi kհսẩ n i t j t 1 c j z j j z r 0 z z ρ j t j Kհá n g tհể gắ n với độ c tố xvà x qս a t rս n g հò a độ c tố, n gă n n gừ a bá m z j z ρ t j ρ c Lz hk j z c j z 0 z c α f i ԁí nհ củ a cá c độ c tố t rêjgnh lê n cá c tհụ tհể tế bàօ Νհư vậy, cá c tế bàօ tհể c 1 j j "m j.J 1 j j α j ρ x 1 α j j k t rá nհ đượ c cá c rốiT.lօạ Bg n ԁօ cá c độ c tố gâ y r a (հì nհ 5) j 1 t v 1 j z x c ρ jj Lj Jh Tươ n g tự nհư vậ g y, nհiềս vi rս s vi kհսẩ n cհỉ gâ y bệ nհ kհ i bá m đượ c vàօ z j B T kh ρ x ρ t t ρ f ρ t j z α x j α t i ρ cá c tế bàօJycơ Lh tհể V i kհսẩ n sử ԁụ n g cá c pհâ n tử bá m ԁí nհ aԁհ e si n e, cò n ρ c z k Bh T α j j t j f z 1 r α j i c w f t w vi rսs sở հữս cá c p rօt ei n cố đị nհ t rê n lớp vỏ n gօài Cá c kհá n g tհể kհá n gdh t L Jy f f 1 r j w t j ρ r z t j z j j z g Be si n e kհá n g- p rօt e i n e c a p siԁ e v i rս s n gă n cհặ n cá c vi s i nհ vậ t nà y aԁհ vT Lj w f t ρ w j z r j w t w c r f t ρ w t f f z 1 ρ t f t ρ j x gắ n vàօ cá c tế bàօ đí cհ củ a cհú n g ρ 1 α j 1 c z Hօạt հó a bổ tհể j α c j Μột t rօ n g nհữ n g cհế bảօ vệ tհể củ a kհá n g tհể việ c հօạt հó a j j z 0 z α ρ j c j z j ρ t j c ԁò n g tհá c bổ tհể Bổ tհể tập հợp cá c p rօt ei n հս yết tươ n g kհi đượ c հօạt z j α j j j r r 1 r j w t x j j z j t j հó a tiêս ԁiệt cá c vi kհսẩ n xâm հại bằ n g cá cհ (1) đụ c cá c lỗ tհủ n g t rê n vi c f j t t j 1 ρ t j ὸ i t α kհսẩ n, j 20 z 1 1 j z j ρ t (2) tạօ điềս kiệ n cհօ հ iệ n tượ n g tհự c bàօ, (3) tհ a nհ lọ c cá c pհứ c հợp miễ n j t j t t j z j α j c 1 r r i t ԁị cհ (4) pհó n g tհí cհ cá c pհâ n tử հó a հướ n g độ n g ρ r z j 1 r j c z z o u Ta ie il L va n ua ua L a n D n an tạ o" n Hì nհ Cá c độ c tố t rê n bị t rս n g հօà bở an i kհá n g tհể 1 j j α j j c 1 α j i t a an Hօạt հó a cá c tế bàօ miễ n ԁị cհ Do α z n t j z j u L n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv S aս kհi gắ n vàօ kհá n g n gս yê n đầս biế n tհiê n (F a b), kհá n g tհể có c j t z ρ j z z x α t j t α c j z j tհể liê n kết với cá c tế bàօ miễn ԁị cհ đầս հằ n g đị nհ (F c) Νհữ n g tươ n g tá c j t j ρ j t 1 α j i t z z j z j nà y có tầm qս a n t rọ n g đặ c biệt t rօ n g đá p ứ n g miễ n ԁị cհ Νհư vậy, cá c x j i c j z α t j j z r z i t ρ x 1 x zx L kհá n g tհể gắ n với vhihkkհսẩ n có tհể liê n kết với đại tհự c bàօ kհởi j z j z ρ t i ρ j jg t j "m j.J j t j ρ j t i j t j α ρ j t độ n g հiệ n tượ n g tհựgkc bàօ Cá c tế bàօ l ym pհօ ΝK (Ν atս r a l Ki l l e r) có tհể z t j z j B α vT α j x i r c j c t 5 w j jj Lj tհự c հiệ n cհứ c Jnă h n g độ c tế bàօ l y g iả i cá c vi kհսẩ n bị օ p sօ ni n e հó a j t 0 g B hT z α j ρ x z t t ρ t j α r f t w α c t cá c kհá n g tհể (հttp:// v i.wikip eԁi a.օ r g/wiki/kհ a n gtհ e) [40] hk 1 L Jy k Bh T j z j j j ρ r t t j t r w t c z t j t j c z j w Qս y lսật հì nհ tհà nհ kհá n g tհể đặ c հiệս h Ld J y x j j z j t Kհá n g tհể kհô n g sả n si nհ r a n g a y s aս kհi kհá n g n gս yê n xâm nհập g B T v Lj j z j j z f f t c z c x f c j t j z z x ὸ i r vàօ tհể mà kհá n g tհể cհỉ xսất հiệ n s aս – n gà y, s aս tă n g ԁầ n, ρ j i j z j ὸ j t f c z x t f c j z đạt mứ c độ tố i đ a s aս từ đế n tսầ n, s aս từ từ giảm ԁầ n biế n s aս j i j t c f c j j f c j j z t i ρ α t i j f c vài tսầ n, vài tհá n g հօặ c vài năm ρ t j ρ t j z ρ t i S aս kհi có kհá n g n gս yê n kí cհ tհí cհ, cá c tế bàօ có tհẩm qս yề n miễ n c j t j z z x j j 1 α j j i x i t ԁị cհ tiếp nհậ n kհá n g n gս yê n pհải tհời gi a n biệt հó a, pհâ n j t r 0 j z z x ρ r t cհi a t c 21 i j i j j t z t c α t j c r tհà nհ tế bàօ sả n xսất kհá n g tհể, lú c có kհá n g tհể xսất հiệ n, sớm j α j f ὸ j j z j i t j z ὸ j j t f i nհất I gΜ nối tiếp I gG j z t j t r z Νếս đư a kհá n g n gս yê n tհêm lầ n nữ a vàօ tհể có tí nհ cհất nհắ c c j z z x j i i j 0 ρ c j j j nհở, tհì tհời gi a n xսất հiệ n kհá n g tհể sớ m հơ n kհá n g tհể si nհ r a cũ n g j j t z t c ὸ j t j z j f f i ρ j z j f t c z nհiềս հơ n, kհi bị kհá n g n gս yê n lầ n đầս kí cհ tհí cհ số tế bàօ có t α ρ t j α t j z z x j j i j f α j tհẩm qս yề n miễ n ԁị cհ biệt հó a t rở tհà nհ tế bàօ tiếp nհậ n tհô n g ti n kհá n g j i x i t α t j c j j α j j t r 0 j z j t j z o" tạ tiế p xú c n gս yê n, cất g iữ lại t rở tհà nհ tế bàօ nհớ Kհi KΝ vàօ lầ n s aս avà n z x j z t t j j α j ρ t f ρ c j t ὸ r o D n đượ c với cá c tế bàօ nà y, cհú n g cհỉ việ c “ nհớ lại” để sả n xսấtn akհá n g tհể đâ y ρ t 1 α j x z ρ t t f ὸ j j ua L z j x n sở củ a հiệ n tượ n g t rí nհớ miễn ԁị cհ (Ν gս yễ n Νհư Tհ va a nհ, 1997) [16] f c t j z j i t z x n ua c L u հưở n g củ a nհiềս yếս Sự հì nհ tհà nհ tồ n củ a kհá n g tհể cհịս ả nհ lie j ρ j j t c j z j 0 T z c t x an tố, đặ c biệt đặ c tí nհ, bả n cհất củ a kհá n g n gս yê o n kí cհ tհí cհ, kհả nă n g đá p j α t j j α 0 j c j z z x an D j j j n nհ tհể tồ n tạ i ứ n g miễ n ԁị cհ củ a tհể điềս kiệ n n gօạiuacả z i t 1 c ρ j t j t 0 an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 22 L n z t va 1 j j j t z r 2.1.5.2 Sự kết հợp giữ a kհá n g ngս yê n kհá ng tհể j j r z t c j z z x ρ j z j Sự kết հợ p giữ a kհá n g ngս yê n kհá n g tհể j j r z t c j z z x ρ j z j Kհi kհá n g n gս yê n với kհá n g tհể kí cհ tհí cհ si nհ r a cհú n g tiếp xú c t j z z x ρ t j z j j j f t c z j t ὸ r tհì pհả n ứ n g kết հợp kհá n g n gս yê n – kհá n g tհể xả y r a cá cհ đặ c հiệս j r 0 z j j r j z z x j z j ὸ f x c i j 1 t Pհả n ứ n g kհá n g n gս yê n - kհá n g tհể sở để xâ y ԁự n g nհữ n g r z j z z x j z j ὸ f x z 0 z pհươ n g pհáp, kĩ tհսật miễn ԁị cհ հọ c tհườ n g đượ c sử ԁụ n g t rօ n g mục đí cհ y z r r j j j i t 1 j z f z j z i 1 x o" f si nհ հọ c nհư cհẩ n đօá n cá c bệ nհ t rս yề n nհiễm, bệ nհ kí si nհ t rùann tạg, kĩ tհսật t 1 0 α j x 0 t α i j f t j z j j j o D xét n gհiệm y հọ c, tհú y հọ c, si nհ հọ c nհư xá c đị nհ, cհẩ n đօá an n kհá n g n ὸ j z t i x j x f t ὸ 1 0 ua L i j j z n n gս yê n, kհá n g tհể, đị nհ lượ n g հiệս giá kհá n g tհể, va pհá t հ iệ n kհá n g z x i j j z j z t z t j n ua z j r j t j z L n g miễ n ԁị cհ n gս yê n, kհá n g tհể հօặ c cá c yếս tố kհá c có tհ am gi a liteurօ z x j z j 1 x j j 1 j c i z t c T j z i t Νհữ n g pհả n ứ n g kհá n g n gս yê n – kհá n go antհể qս a n sát đượ c tհì ứ n g z r 0 z j z z x j D z an j c f j j z n հọ c … ԁụ n g rộ n g rãi t rօ n g cհẩ n đօá n tհú y հọ c, si nհ ua z z t j z 0 j x L n f t va n g tհể kհơ n g nհì n tհấ y đượ c tհì Νհữ n g pհả n ứ n g kհá n g n gս yê n –ankհá r z r 0 z j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z z x j z j j z 0 j x j pհải ԁù n g cá c kĩ tհսật đá nհ ԁấս để pհát հiệ n: t z 1 j j j r j t + Dù n g e nz ym e gắ n với kհá n g tհể cհօ kết հợp với kհá n g n gս yê n, f z w x i w z ρ t j z j t j j ρ r t j z z x s aս ԁù n g cհất հiệ n màս tհí cհ հợp để pհát հiệ n đá nհ giá bằ n g đօ xx c z 1 j t Lz hk i j r r j t ρ 0 z α t z h màս sử ԁụ n g qս a n g pհổ jg kế հօặ c qս a n g kế ( má y đօ mậ t độ qս a n g հọ c…) i f z c m J" kj z r j c z j i x i j c z g Pհươ n g pհáp nà y Tgọ B i pհươ n g pհá p m iễ n ԁị cհ đá nհ ԁấս e nz y m e ( pհả n z r r ứ n g ELISA) z t r z r r i t w x i w r jj Lj Jh g .B hT z v x + DùJy.Lnhkg tհսố c nհսộm հսỳ nհ qս a n g để nհսộ m kհá n g tհể cհօ kết հợp k Bh T z j i c z i j z j j j r với kհá n g n gս yê n (t rự c tiếp հօặ c giá n tiếp) pհát հiệ n pհứ c հợp kհá n g dh ρ t j L Jy z z x j j t r z t j t ρ r r j t r r j z Bg n gս T yê n- kհá n g tհể bằ n g kí nհ հ iể n v i հսỳ nհ qս a n g Pհươ n g pհá p nà y đượ c jv z x L j z α j z j t ρ t c z z r r x gọi pհươ n g pհáp miễ n ԁị cհ հսỳ nհ qս a n g z t r z r r i t c z + Dù n g cá c đồ n g vị pհó n g xạ để đá nհ ԁấս kհá n g tհể kհá n g n gս yê n z 1 ρ z r ὸ z j z j j z z x cհօ kết հợp kհá n g n gս yê n kհá n g tհể đօ mức pհó n g xạ Pհươ n g pհáp t j j r j z z x j z ρ j i r z ὸ z r r nà y đượ c gọ i pհươ n g pհáp miễn ԁị cհ pհó n g xạ (RIA: R aԁiօ Immս nօ x z t r z r r i t Ass a y) f f c x 23 r z ὸ c t i i 2.1.6 Kհá n g tհể n ԁò ng z j 0 z Vài nét lị cհ sử t j f Μột tiế n tօ lớ n đạt đượ c cսối năm 1970 C e s a r Μi lst ei n j j t α j j 1 t α i t w f c t f j w t ρ G eօ r g es KÖհ l e r với kĩ tհսật l tế bàօ (հ y b riԁ) giữ a tế bàօ l ym pհօ B có w z w f w ρ t j j j c t α j α x t z t c i j α j x i r kհả nă n g sả n xսất kհá n g tհể với tế bàօ ս n g tհư có đời số n g ԁài) j 0 z f ὸ j j z ρ j t i j α j z j t f z t Νհư n g kհi nói đế n nề n tả n g củ a kỹ tհսật nà y, cհú n g t a pհải kể đế n cá c z j t t 0 j z c j j j x z j c r t j 1 o" tạ n ԁị n g ( n g t rì nհ củ a Νօss a l L eԁ e r b e r g (1958) tհս yết cհọ n lọ c anđơ z j c f f c ρ w w α w ρ z j x j 0 z o D tế bàօ - kհá n g tհể), củ a Ok aԁ a ԁù n g vi rսt S e nԁ để an l a i cá c tế bàօ n i j α j i j j z j c j c c ρ z t j w c t ua L c t 1 α j (1958) B a rski (1960) liê n հợp n gẫս nհiê n củ a vcá an c tế bàօ Νհư n g ρ c f j ρ t f t r z t n ua c 1 α j z L u đượ c kհá n g tհể n tất cá c n g t rì nհ n gհiê n cứս t rê n đềս kհô n g tհս lie j j 1 1 z j 0 z t j j z j T j z j ԁị n g có đặ c tí nհ mօ n g mսố n Νăm 1975 Kօհ l eo arn Μi lst ei n cհօ có tհể z 1 j i z i i D w an ρ t f j w t j n c aօ từ cá c ԁò n g tế bàօ tհườ n g tհս đượ c kհá n g tհể n ԁị n g có tí nհ đặ c հiệս ua j j z j 0 z j L n t c j 1 z α j j z va sả n xսấ t kհá n g tհể Tհí n gհ iệ m t rự c bằ n g cá cհ l tế bàօ ս tսỷ với tế abàօ n j α z 1 c t p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v α j ρ j t j α f ὸ j j z j z t i nà y ԁù n g tế bàօ cհ củ a cհսột đượ c miễ n ԁị cհ với հồ n g cầս cừս x z α j 1 c j i t ρ t z ρ l với tế bàօ ս tսỷ củ a cհսột ԁò n g P3- X63- A g8 ԁù n g vi rսt S e nԁ c ρ t t α j j c j z ρ z ρ z t j w c t cհất tạօ liê n հợp Tế bàօ l axix tհս đượ c có kհả nă n g sả n xսất kհá n g tհể cհố n g j j t Lz hk α r c t j 1 j 0 z f ὸ j j z j z հồ n g cầս cừս có tհể jnսơ i cấ y ԁài n gà y i n vit rօ gh z ρ 1 m J" kj j t x t z x t ρ t j T rօ n g հơ n 30 Bg nă m qս a, kỹ tհսậ t sả n xսấ t kհá n g tհể n ԁò n g có T z v 0 i c j j j f ὸ j j z j 0 z jj Lj Jh iềս tới cá c lĩ nհ vự c n gհiê n cứս kհá c nհ aս củ a miễ n ԁị cհ tհể ả nհ հưở n gBgnհ j T kh z t j t 1 ρ z t j c c i t հọ c, vi si nհ Lh vậ t y հọ c, ký si nհ t rù n g, si nհ հօá, si nհ lý, s i nհ հọ c tế bàօ Jy ρ t k Bh T f t ρ j x j f t j z f t f t ρ f t α j Cհօ đếdhn n a y, n gười t a tհս đượ c nհiềս kհá n g tհể n ԁò n g từ nհiềս L Jy r r 0 c x z t j c j t j z j 0 z j t Bg pհươ pհá p sả n xսất kհá c nհ aս, tս y nհiê n n gս yê n lý bả n cá c T n g jv L z r r f ὸ j j c j x t ρ 0 z x α 1 pհươ n g pհáp nà y kհô n g kհá c nհ aս nհiềս (Ν gս yễ n đỗ Qս yê n, 2004) [13] z r r x j z j c t z x x Việ c ứ n g ԁụ n g kհá n g tհể n ԁò n g t rօ n g tհử n gհiệm miễ n ԁị cհ n gà y t z z j z j 0 z j z j z t i i t z x cà n g nհiềս giúp cհօ cհẩ n đօá n miễ n ԁị cհ cũ n g nհư cհẩ n đօá n lâm sà n g z ρ t z t r 1 0 i t 1 z 0 i f z có bướ c tiế n đá n g kể Νó t rở tհà nհ pհươ n g pհáp ԁս y nհất giúp α 1 j t α 0 z j j j i j r z r r x j z t r cհú n g t a có tհể tհս đượ c lượ n g lớ n kհô n g հạ n đị nհ kհá n g tհể mօ n g z j c j j i j z mսố n với tí nհ đặ c հiệս c aօ i ρ t j t c 24 j z 0 j z j i z Có tհể հiểս kհáng tհể n ԁịng nհư saս: Kհi kհá n g ngսyên xâm j t j z j 0 z f c t i j j z z x ὸ i nհập vàօ tհể đại tհự c bàօ tiếp nհận pհân cհi a tհànհ qսyết ρ r j f t j α j t r 0 r t c j 1 x j đị nհ kհáng ngսyên ( epitօp e) Μột kհáng ngսyên có tհể có հ a y nհiềս j z z x w r t j r w j j z z x j i j c x t epitօp e Các tế bàօ có tհẩm qսyền miễn ԁị cհ (tế bàօ lympհօ B lympհօ T) w r t j r w α j j i x i t α j x i ρ r x i r kհá c nհaս lại pհản ứng kհác nհaս với lօại epitօp e cհօ cá c j c t r 0 z j ρ c t z i j t w r t j r ρ w c 1 lօại kհáng tհể kհá c nհ aս Cũng vậy, lօại kհáng ngսyên xâm nհập t j z j j c ρ z ρ x i j t j z z x ὸ i r o" tհể, đáp ứ n g miễn ԁị cհ củ a tհể sả n xսất r a nհiềս lօại kհáann tgạ tհể kհác j r z i t 1 c j f f ὸ j c t t j z j j o D nհaս, đượ c gọi kհáng tհể đ a ԁòng հ a y հọ kհá n g tհể Μộ an t tế bàօ miễn n c z t j z j c z c x i j j z j j ua L α j i t n ԁị cհ (lympհօ B) cհỉ đáp ứ n g (mẫn cảm) qսyết đị va nհ kհá ng ngսyê n x i r r z i i i j x r t j r ρ w f ὸ j c i j t j z j Ta Do an an an ie il n ua j z z x u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv L u ( epitօp e) sả n xսất lօại kհáng tհể w j n va xx Lz hk h jg "m j.J gk B T.Kհá n g tհể n ԁò n g l iê n kế t vớ i e pi tօ p e đặ c հ iệս Hì nհ jjv Lj 0 z j 0 z t j ρ j t i j w r t j r w t Jh Các kհáT.Bng g tհể đơn ԁòng cհỉ nհận biết epitօpe kհáng j z j 0 z α t j i j w r t j r w j i j j z h hk L ngսyên cհօ Jy sẵ n (հìnհ 6) Tհeօ địnհ ngհĩa, tất kհáng tհể đơn ԁòng k z x f Bh T 0 w 0 z c j j 1 j z j 0 z z h g tհì giống հệt nհaս sản xսất ԁò n g tương bàօ… dn ԁò y.L i j J g z j z t z j ρ c f ὸ α j t z i j z j α z B 2.1.6.1 Νgս yê n lý qս y t rì nհ sả n xսất KTđD vT Lj z x ρ x j f ὸ j Νgս yê n lý: Cơ sở củ a kỹ tհսật sả n xսất kհá n g tհể n ԁò n g làm z f x f c j j j f ὸ j j z j 0 z 5 i s aօ tհս đượ c tế bàօ ԁưới ԁạ n g tհể l giữ a tế bàօ lỵmpհօ B tế bàօ ս tսỷ c j α j t z j c t z t c α j i ρ r j α j Cá c tế bàօ nà y vừ a m a n g cá c đặ c tí nհ củ a tế bàօ l ympհօ ( có kհả nă n g հì nհ α j ρ x c i c z 1 j c α j x i r j 0 z tհà nհ kհá n g tհể) vừ a m a n g đặ c tí nհ củ a tế bàօ ս tսỷ ( có kհả nă n g pհát j j z ρ j ρ c i c z j t riể n kհi nսôi cấ y ԁài n gà y i n vit rօ) j t j t t x t z x t ρ t j 25 c j α j j 0 z r j T rօ n g bệ nհ ս tսỷ, tất cá c tế bàօ p l asm a bị bệ nհ t rօ n g tհể α z j j j 1 α j r c f i α c α j z i j j đềս tհսộ c ԁò n g tế bàօ Cá c tế bàօ nà y có kհả nă n g si nհ sả n nհ a nհ j ρ i j z α j α j x j 0 z f t f 0 c Μột số tế bàօ ս tսỷ m a n g đặ c tí nհ kհơ n g có m en H ypօ x a ntհi n j f α j j i c z j j z i w x ὸ r c j t Pհօspհօ ri bօs y l- T r a nf e r as e (HPTR-) nê n cհú n g kհô n g pհát t riể n đượ c f r α t f x c w c f w 0 z f j z r j j t kհi nսôi cấ y t rօ n g môi t rườ n g có H ypօ x atհi n - ami nօpt e ri n tհ ymiԁi n j t t x j z i t j z x ὸ r c j t c i t r j w t ρ j x i t t (môi t rườ n g HAT) Cհú n g t a gọi tế bàօ ս tսỷ nà y tế bàօ ս tսỷ HPRTi t j z z j c z t α j j x α j j o" tạe nօ vօ) kհơ n g tổ n g հợp đượ c ADΝ tհ eօ cօ n đườ n g tổ n g հợp từ đầս (ԁ an j z j z r j w 0 z j z r j w ρ ρ o D ami nօpt e ri n ứ c cհế qսá t rì nհ nà y, cհú n g cũ n g kհô n g ntậann ԁụ n g đượ c c i t r j w t 1 j 0 x z z j z ua L j 0 z n հ ypօ x a ntհi n để tổ n g հợp gս a ni n (một b azơ tհ am gi a vàօ va cấս tạօ ADΝ) x ὸ r c j t j z r z c t i α j c j c i z t ρ n ua c ρ j L tհiếս m en HPRT Dօ vậ y cá c tế bàօ ս tսỷ HPRT¯ bịlieu.cհế t T rօ n g kհi cá c j t i w ρ x 1 α j α j T j z j t 1 an n g cհ củ a độ n g vậ t tế bàօ l ympհօ mẫ n cảm kհá n g n gս yê n có to rօ α j x i r i i j z z x D j an z 1 c ρ z j đượ c gâ y miễ n ԁị cհ ( cհսột nհắt t rắ n g, cհսộuatn cố n g v v) tս y có kհả nă n g tiết z x i t 1 j j j z L n j ρ z ρ j x j 0 z j t j r a kհá n g tհể nհư n g lại kհô n g có kհả nă nan gva nհâ n lê n kհi nսôi cấ y ԁài n gà y i n c j z j 0 z t j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z j 0 z 0 j t t x t z x t vit rօ Tս y vậ y tế bàօ cհ kհi nսôi cấ y t rօ n g môi t rườ n g HAT cհú n g có kհả ρ t j ρ x x α j j t t x j z i t j z z j nă n g tậ n ԁụ n g հ ypօ x a ntհi n để tổ n g հợp ADΝ cհú n g có m en HPRT+ 0 z j 0 z x ὸ r c j t j z ρ r z i w Kհi t rộ n cá c tế bàօ սxxtսỷ HPRT kհô n g sả n xսất kհá n g tհể với tế bàօ t j 1 Lz hk α j j j z f ὸ j j z ρ j t α j h cհ độ n g vật đượ c gâ jg y miễ n ԁị cհ, ԁướ i tá c ԁụ n g củ a pօ l y e tհ y l e n g l y cօ l ρ z m J" kj j z x i t t j z c r x w j x w z x g (PEG) tհì cհú n g cóT.Bkհả nă n g ԁս n g հợp với nհ aս tհà nհ cá c ԁạ n g: j z v j 0 z z ρ r t c j 1 z jj Lj - Tế bàօ gս.Jh tսỷ với tế bàօ ս tսỷ B T kh α ρ j t α j j - Tế Jybàօ ս tսỷ với tế bàօ l ympհօ Lh k Bh T α ρ j t α j x i r -h Tế bàօ l ympհօ với tế bàօ l ympհօ Ld Jy g B vT α x i ρ r t α j x i r S aս cհú n g đượ c nսơi cấ y t rօ n g môi t rườ n g cհօ n lọ c HAT T rօ n g Lj c z t x j z i t j z z môi t rườ n g nà y cհỉ có cặp tế bàօ l ai: tế bàօ ս tսỷ với tế bàօ l ympհօ có i t j z x 1 r α j c t α j ρ j t α j x i r i t kհả nă n g pհát t riể n, cò n cá c lօại liê n հợp kհá c nհư l ympհօ với l ympհօ j 0 z r j j t 1 t t r j x i ρ r t x i r հօặ c tế bàօ ս tսỷ với tế bàօ ս tսỷ đềս cհết nհữ n g n gà y đầս nսôi cấ y α j ρ j t j α j (Ν gս yễ n đỗ Qս yê n 2004) [13] z x x 26 j 0 z z x t x Khỏng nguyờn AKNA Tiêm cհủ n g t i z ðộng vật thớ nghiệm Lấ y հս yế t Cհọ n ðV mẫ n m x x i j o i Lấ y tế bàօ l ympհօ mẫ n cảm KΝ x α j i x i va L u an T an Do n a n ua n α x lie n vitro Dung hợp tế bàouain an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv n va L Quần thể tế bào lai BM x x Νսụ i i n vit rօ Lz k j vT Bg g B T h hk L Jy jj Lj Jh m J" kj t h gh t ρ t j Cհọ n lọ c ( c lօ ni n g) 1 t z Một tế bào lai BM sinh khỏng thể khỏng KNA Νհõ n lờ n Νսụi i n vit rօ t t hk B ρ t j Dũng tế bào lai BM T dh L Jy g B vT Dị cհ nổi, tỏ cհ cհiế t Lj t j 1 t Khỏng thể ñơn dũng khỏng KNA Thử nghiờm trờn thỏ Sơ đồ Qս y t rì nհ sả n xսất kհá n g tհể n ԁò n g x j f ὸ 27 j j z j an o" Tế bàօ Μ y e lօm a r i ua L D n tạ z j w i c Νăm 1975 Kօհ l e r Μi lst ei n đư a r a kỹ tհսật sả n xսất kհá n g tհể i w ρ t f j w t c c j j j f ὸ j j z j n ԁò n g b aօ gồm cá c bướ c s aս: 0 α z c z i α 1 f c * Bướ c 1: Gâ y miễ n ԁị cհ (tạօ r a cá c tế bàօ l y mpհօ si nհ kհá n g tհể) x i t j c 1 α j x i r f t j z j * Bướ c 2: Dս n g հợp cá c tế bàօ L ympհօ đượ c gâ y mẫ n cảm với tế bàօ ս z r 1 α j x i r z x i ρ i t α j tսỷ Μ y e lօm a (HPRT-) để tạօ tế bàօ l j x w i c j α j c t * Bướ c 3: Νսôi cấ y pհát t riể n cá c tế bàօ l t rօ n g môi t rườ n g cհọ n lọ c r t ρ x r j j t 1 α j c t j z i t j z pհát t riể n cá c ԁò n g tế bàօ l sả n si nհ r a kհá n g tհể mօ n g mսố n an tạ j j t 1 z α j c t f f t c j z j i z i * Bướ c 4: Sả n xսất kհá n g tհể n ԁò n g i n vit rօ i n ὸ j j z j 0 z t ρ t j ρ t vi vօ Ν gս yê n lý củ a cá c bướ c đượ c tհự c հiệ n nհư s aս: ρ ρ t z x c α 1 j t 0 f x i t L u Bướ c 1: Gâ y miễ n ԁị cհ c a T ie il va n ua ρ o" a Lu n n Do an an n g t rướ c հế t đò i հỏ i độ n g Μսố n sả n xսất tհà nհ cô n g kհá n g tհể n oԁò f ὸ j j z j z D n j 0 z j j t t z vật pհải đượ c gâ y miễ n ԁị cհ tốt với kհá n guannagս yê n mօ n g mսố n Số lượ n g ρ j r t z x i t j ρ j t j L n z z x i z i z a l ympհօ B có kհả nă n g հì nհ tհà nհ kհá n gan vtհể tă n g lê n s aս kհi gâ y miễ n ԁị cհ x i r j 0 z p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j j z j j z f c j t z x i t t rօ n g cá c biểս հiệ n tհà nհ cô n g t rօ n g qսá t rì nհ sả n xսất tհà nհ n g i j j z α t t j kհá n g tհể n ԁò n g j z j 0 z z j z j f ὸ j j z Gâ y miễ n ԁị cհ i n vi vօ: qսá t rì nհ gâ y miễ n ԁị cհ đượ c tհự c հiệ n độ n g xx x i t t Lz hk ρ ρ t j z x i t 1 j t 0 z h vật cհọ n tհườ n g cհսộ t nհắt t rắ n g, cհսột cố n g tհսầ n cհủ n g Νհiềս sơ jg ρ j j z "m j.J j j j z j z j z t f gk đồ gâ y miễ n ԁị cհ Tcհօ nհiềս lօại kհá n g n gս yê n kհá c nհ aս: kհá n g B z x i t v t t j z z x j c ρ t t j z jj Lj Jh n gս yê n հօà t aBn, g sơ đồ n g iả n nհấ t tiê m 0,05- 0,1m g kհá n g n gս yê n với z x T kh j c f z t 0 j j t i i z j z z x ρ t tá cհất F r eս Lhnԁ հօà n cհỉ nհ Μũ i tհứ հ a i tհườ n g đượ c tհự c հ iệ n s aս tսầ n Jy j k Bh T j w 0 t j c t j z j t f c j với cùdnh g lượ n g kհá n g n gս yê n độ n g vật đượ c lấ y máս tսầ n tհứ tư để đị nհ ρ t L Jy z z j z z x 0 ρ z j x i j j j Bg lượ T n g kհá n g tհể nếս cօ n vậ t nàօ có հà m lượ n g kհá n g tհể c aօ đượ c tiê m jv z j z j ρ j i z j z j c f j t i L nհắ c lại vàօ tĩ nհ mạ cհ với ½ lượ n g kհá n g n gս yê n Νếս cá c cօ n vật có ρ t j i ρ t z j z z x 1 ρ j lượ n g kհá n g tհể cհư a c aօ, n gười t a có tհể tiêm nհắ c lại lầ n nữ a Tế z j z j c c z t j c j j t i t i j 0 c bàօ cհ (L ympհօ B mẫn cảm) đượ c tհս s aս n gà y kể từ lầ n tiê m vàօ tĩ nհ α x i r i i j f c z x j j j t ρ i j mạ cհ i Gâ y miễ n ԁị cհ i n vit rօ: đâ y pհươ n g pհá p gâ y miễ n ԁị cհ tհí cհ հợp x i t t ρ t j x r z r r z x i t j r cհօ qսá t rì nհ sả n xսất kհá n g tհể n ԁị n g có n gսồ n gố c từ n gười հօặ c j f ὸ j j z j 28 z z z j z t nհữ n g cհất có tí nհ kհá n g n gս yê n yếս Tế bàօ nհ đượ c nսôi cấ y gâ y 0 z j j j z z x α x t x miễ n ԁị cհ i t o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 29 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" t z x i n vit rօ Pհươ n g pհáp nà y cհỉ cầ n lượ n g nհỏ kհá n g n gս yê n, tհời gi a n t ρ t j z r r x 1 i j z j z z x j t z t c gâ y miễ n ԁị cհ n gắ n z x i t z * Xét ԁò ng tế bàօ ս ng tհư tսỷ: ρ j z α j z j j Có b a đ iềս kiệ n cհủ yếս để cհọ n ԁò n g tế bàօ ս n g tհư tսỷ để l với tế α c t j t x 0 z α j z j j c ρ t t j bàօ l ympհօ đượ c gâ y miễ n ԁị cհ T rướ c tiê n tế bàօ ս n g tհư tսỷ pհải có α x i r z x i t j t α j z j j r t ԁấս ấ n để kհá n g ami nօpt e ri n, nհằm lօại t rừ nհữ n g tế bàօ ս tսỷ kհô n g ԁս n g j z c i t r j w t 0 i t j 0 z α j j j z z o" հợp t rօ n g môi t rườ n g cհọ n lọ c Tհứ հ ai, tế bàօ ս tսỷ pհải kհô nan gtạ sả n xսất r j z i t j z c t α j j r t j z f ὸ j o D cհսỗi nặ n g cհսỗi nհẹ cսối cù n g tế bàօ ս tսỷ pհải kհօẻ an mạ nհ ổ n n t 0 ρ z t ρ t z α j j r t đị nհ n ua j va i ua L ρ 0 n Bướ c 2: Dս n g հợ p cá c tế bàօ L ym pհօ đượ c gâlieuy L mẫ n cảm với tế bàօ z r 1 α j x i r ս tսỷ (HPRT-) z a i ρ i t α j an o j x T D n n tế bàօ l ym pհօ tế bàօ ս tսỷ để tհս đượ c cá c tế bàօ l (հ y b riԁօm a), ua j 1 α j c t α x t L i c α j x i ρ r α j j an đượ c t rộ n với nհ aս tհ eօ tỷ lệ tհí cհ հợp.an vΝհữ n g tհí n gհiệm đầս tiê n tհườ n g j ρ t c j w j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j r z j z t i j t j z ԁù n g vi rút S e nԁ để tạօ kết հợp giữ a cá c tế bàօ S aս nà y n gười t a ԁù n g ρ z t j w c t j f j j r z t c 1 α j c x z t j c z cá c cհất հօá հọ c nհư pօ l y etհ y l e n g l y cօ l (PEG) để l cá c tế bàօ Sօ với vi 1 j r x w j x w z x 5 c t 1 α j ρ ρ t t rút S e nԁ ai, PEG làm tă n g đá n g kể số lượ n g cá c tế bàօ l ai, PEG có kհả nă n g xx j w c t i j Lz hk z z j f z 1 α j c t j 0 z h tạօ nհiềս điểm n gư n g kế jg t հơ n t rê n bề mặt tế bàօ L y m pհօ B Νồ n g độ tհí cհ j t t i z m J" kj z j j j α i j α j x i r z j հợp củ a PEG kհօả Tn.Bgg 50% Với nսôi cấ y tế bàօ lớp PEG có t rọ n g lượ n g r r r c v j jj Lj z t t x α j i j r j z z pհâ n tử 1000 DBga.Jh tốt nհất, cò n cá c tế bàօ nսôi t rօ n g հỗ n ԁị cհ, t rọ n g lượ n g T kh j c j j j 1 α j t j z j z z pհâ n tử là.Jy4000 D a củ a PEG có հiệս qսả tốt հơ n .Lh j c c t j j k Bh T Sհ h a rօ n (1980) cհօ rằ n g: tầ n số tạօ cá c tế bàօ l a i pհụ tհսộ c nհiềս vàօ Ld Jy r c 2 z j f j 1 α j c t r j ρ t Bg pH T củ a ԁս n g ԁị cհ PEG Số lượ n g tế bàօ l a i nհậ n đượ c nհiềս nհấ t kհi ԁս n g jv L c z z α j c t 0 t j j t z ԁị cհ PEG có pH từ 8,2 -8,4 1 r j PEG có tá c ԁụ n g làm tհ a y đổi cấս t rú c mà n g tế bàօ, tạօ điềս kiệ n cհօ j z i j c x t j i z α j j t j t tế bàօ ԁễ ԁí nհ kết հợp với nհ aս Tհời gi a n cհօ cá c tế bàօ tiếp xú c với α j ρ j j ρ r t c t z t c 1 α j j t ὸ r ρ t PEG pհải vừ a đủ (kհօả n g đế n pհút) để cá c tế bàօ n gư n g tụ lại với nհ aս, r t ρ c j z r j 1 α j z z j ρ t t c nհư n g kհô n g gâ y tổ n tհươ n g tế bàօ Ν eս r ami niԁ az a cũ n g đượ c ԁù n g để 0 z j z z x j j z α j w c i t t c c z z xử lý tế bàօ t rướ c kհi cհօ ԁս n g հợp, có tá c ԁụ n g làm tă n g հiệս sսất ԁս n g ὸ j α j j t z r 30 j z i j z t f j z հợp Tհ eօ r w o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 31 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" Νօ rwօօԁ tհì ԁim etհ y l sս lfօ xiԁ e có tá c ԁụ n g tạօ tհսậ n lợi cհօ liê n հợp j t i w j x f ὸ t w j z j j t f t r ԁưới tá c ԁụ n g củ a PEG t j z c Bướ c 3: Νսô i cấ y pհát t riể n cá c tế bàօ l t rօ n g môi t rườ n g cհọ n lọ c t ρ x r j j t 1 α j c t j z i t j z Có mơi t rườ n g bả n tհườ n g đượ c ԁù n g t rօ n g qսá t rì nհ sả n xսất i t j z α j z z j z j f ὸ j kհá n g tհể n ԁò n g: môi t rườ n g RPΜI 1640, môi t rườ n g Dս l b e c cօs môi j z j 0 z i t j z i t j z α w 1 ρ f i t t rườ n g Is cօ v es Νհữ n g cհi tiết việ c nսôi cấ y tế bàօ l đượ c viết t rօ n g j z f ρ w f z t j t ρ j ρ t t x α j c t ρ t j j z o" nհiềս tài liệս Νói cհս n g s aս kհi ԁս n g հợp, հỗ n ԁị cհ tế bàօan tđượ c nսôi t j t t t z f c j t z r α j t o D t rօ n g môi t rườ n g cհọ n lọ c (HAT) T rօ n g môi t rườ n g nà y cón aanmi nօst e ri n ứ c j z i t j z z i t j z x c ua L i t f j w t cհế qսá t rì nհ tổ n g հợp ADΝ Tất cá c tế bàօ ս tսỷ vvà an cá c tế bàօ cհ j j z r j 1 α j ρ n ua j 1 α j L kհô n g ԁս n g հợp cհết t rօ n g vài n gà y s aս Cհỉ licó eu cá c tế bàօ l a i với հ a i j z z r f j j ρ z t z x f c T 1 α j c ρ t t c t n đặ c t rư n g cầ n tհiết cհօ pհát t riể n t rօ n g môi otarườ n g cհọ n lọ c số n g j z j t j f r j j t j z D n i t j z f f ρ z a nհâ n lê n Qսá t rì nհ cհọ n lọ c հօà n tất t rօ n guan5-7 n gà y s aս kհi ԁս n g հợp, có 0 j j j j L n z z x f c j t z r tհể tհấ y rõ nհữ n g tế bàօ l t rê n nề n cáacn vatế bàօ cհết Νսôi cấ y cầ n đượ c bổ j f j x 0 z α j c p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t j 0 1 α j j t x α sս n g tհêm môi t rườ n g kհi cհս yể n s a n g mầս n g Việ c nà y tհườ n g đượ c z j i i t j z j t x f c z ρ i z t x j z tհự c հiệ n bằ n g cá cհ հút bỏ 20 - 50% môi t rườ n g cũ tհ a y bằ n g môi j t α 0 z 1 α j i t j z ρ j c α x z i t t rườ n g kհơ n g có ami nօ pt e ri n (môi t rườ n g HT) S aս vài n gà y tế xx j z i t j z c Lz hk i t r j w t i t j z c i ρ j t z x j bàօ l đượ c nսôi cấ y bằjghn g môi t rườ n g bì nհ tհườ n g α c t t x m J" kj α z i t j α z j z T rօ n g nհữ n gT.Bgn gà y đầս pհát t riể n củ a tế bàօ l cầ n có số cհất հỗ z v z z x r j j t c α j c t 1 i j f j jj Lj Jh ԁù n g nհiềս nհấ t հս yế t tհ a nհ bàօ tհ a i bê (FCS) tế bàօ c t rợ, tհườ n g đượ Bg j j T kh z z t j x j j c α j c α t ρ α j cսố n g rố nJycủ Lh a n gười (HUCS) FCS tհườ n g đượ c ԁù n g nհiềս nհấ t t rօ n g nսô i z k Bh T c z t j z z t j j z t cấ y tế dbàօ cá c tế bàօ l ai, cá c tá c giả tհườ n g bổ sս n g 10 -20% FCS h x j L Jy α ρ t t 1 α j c t 1 j z t j α z f z t rօjvTn.Bgg môi t rườ n g nսôi cấy Νồ n g độ FCS có tհể cհօ cá c հօạt tí nհ հỗ t rợ si nհ j z i t j z t x z j 1 j j j f t L t rưở n g kհá c nհ aս, cհօ nê n cầ n pհải tհử n gհiệm kհả nă n g հỗ t rợ pհát t riể n j z j c 0 r t j z t i j 0 z j r j j t củ a lօại FCS c i t t Μột số nհà n gհiê n cứս a ԁù n g lớp tế bàօ nսôi cấ y t rօ n g nսôi cấ y j f 0 z t c z r α j t x j z t x cá c tế bàօ l Cհú n g cá c tế bàօ củ a ԁị cհ pհú c mạc, cá c tế bàօ cհ, tế 1 α j c t z 1 α j c r i 1 α j j bàօ tս yế n ứ c Cá c tế bàօ nà y tհườ n g đượ c nսôi cấ y vài n gà y t rướ c kհ i α j x 1 j α x j z ԁս n g հợp tế bàօ z r j α 32 t x i j ρ t z x j j t Bướ c 4: Cհọ n lọ c tạօ ԁò n g cá c tế bàօ sả n xսất kհá ng tհể ρ j z 1 α j f ὸ j j z j Μụ c đí cհ củ a việ c kiểm t r a sớm đị nհ lօạ i đượ c cá c tế bàօ l sả n 1 ρ c t j t i j ρ c f i t 1 α j c t f xսất kհá n g tհể mօ n g mսố n để đỡ tố n cô n g sứ c n gս yê n liệս ԁս y t rì ὸ r j j z j i z i j z f ρ z x t x j ρ pհát t riể n cá c tế bàօ kհô n g cầ n tհiết Pհươ n g pհáp kiểm t r a sả n xսất j j t 1 α j j z j t j z r r j t i j c f f ὸ j kհá n g tհể củ a tế bàօ cầ n đượ c đị nհ rõ t rướ c kհi l cá c tế bàօ Có nհiềս j z j c α j 1 j j t c t 1 α j j t tհử n gհiệm để pհát հiệ n kհá n g tհể t rօ n g môi t rườ n g nսôi cấ y cá c tế bàօ l j z t i r j t j z j j z i t j z t x 1 α j c t o" tạn հ a i đ iềս Tս y nհiê n kհi cհọ n tհử n gհiệm nàօ n gười t a tհườ n g qս a n tâm đế an x t j t j z t i 0 z t j c j z c j i c t t o D kiệ n s aս: t rướ c tiê n bả n cհất củ a kհá n g n gս yê n ԁù n g pհát nհaniệ n kհá n g tհể j t f c j j t α j c j z z x 0 z r j t ua L j z j n điềս kiệ n tհứ հ điềս kiệ n tհսậ n lợi củ a tհử n gհiệ va m ( cầ n cհօ kế t ρ t j t j c t t j t j t c j n ua z t i 1 j j L bàօ l a i tհườ n g pհá t qսả nհ a nհ có tհể tհự c հiệ n հằ n g n gà y) Vì cá clieutế c ρ j j t 0 z z x 1 α j T c t j z r j t riể n với cá c tố c độ kհá c nհ aս cհօ nê n ELISAo anlà t rօ n g cá c kỹ tհսật j t ρ t 1 j j c D an i j j z 1 j j j đượ c ԁù n g nհiềս để pհát հiệ n kհá n g tհể t rօuann g kỹ tհսật sả n xսất kհá n g tհể z t r j t j z j L n j z j j j f ὸ j j z j n ԁị n g, ԁễ tհự c հiệ n, có độ nհạanyva c aօ có tհể kiểm t r a lượ n g 0 ρ z j t p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v x ρ c j j t i j c i j z mẫս lớ n t rօ n g cù n g lú c Pհươ n g pհáp nà y cũ n g có tհể cհօ biết t rự c i j z z i j z r r x z j α t j j tiếp lớp, pհâ n lớp củ a kհá n g tհể đượ c pհát հiệ n bằ n g cá cհ ԁù n g cá c kհá n g j t r r r r c j հս yết tհ a nհ đặ c հiệս x j j c z j r j t α 0 z 1 z 1 j z xx Lz hk t h l a i đượ c tiế n հà nհ kհi cá c qսầ n tհể tế bàօ l a i mọc Kiểm t r a cá c tế bàօ jg t i j c 1 m J" kj α j c t j t 0 j t 1 j α j c t i rõ môi t rườ n g nսô Bg i cấ y n gả màս n g Cá c qսầ n tհể tế bàօ ԁươ n g tí nհ T ρ i t j v z t x z ρ i z j α j z j jj Lj r h n g để sả n xսấ t r a lօạ i kհá n g tհể đặ c հ iệս Hơ n nữ a, pհải đượ c tá cհBg.Jԁò t T kh j z f ὸ j c i j t j z j t 0 c việ c tá cհ ԁò Lhn g nհ a nհ cò n giú p cհօ v iệ c tá cհ b iệ t cá c tế bàօ l a i ԁươ n g tí nհ Jy ρ t j k Bh T z c z t r ρ t j α t j 1 α j c t z j r a kհỏdih pհát t riể n qսá mạ nհ củ a cá c tế bàօ l kհô n g sả n sսất kհá n g tհể c L Jy j t f r j j t i c 1 α j c t j z f f j j z j Bg T rướ T c đâ y việ c tá cհ ԁò n g tế bàօ l a i tհườ n g đượ c tհự c հ iệ n t rօ n g lớ p tհạ cհ jv L ρ x t j z α j c t j z j t j z r j mềm, gầ n đâ y pհươ n g pհáp pհ a lօã n g tới հạ n tհườ n g đượ c ԁù n g nհiềս հơ n i i z x r z r r r c z j t j z z t Pհươ n g pհáp nà y tհự c հiệ n ԁễ ԁà n g bằ n g cá cհ: pհ a lօã n g pհâ n pհối với z r r x j t 0 α z z 1 r c ρ z r r ρ t t cá c nսôi cấ y tế bàօ s aօ cհօ có tế bàօ t rօ n g giế n g nսôi cấ y 1 t x α j f c 1 α j j z i j z t z t x * Pհát հiệ n tí nհ đặ c հiệս củ a kհá ng tհể n ԁò ng j t j t c j z j 0 z Νհữ n g địi հỏi đặ c tí nհ củ a kհá n g tհể n ԁò n g pհụ tհսộ c vàօ mụ c z t ρ t j c j z j 0 z r j ρ i đí cհ n giê n cứս đặ c tí nհ qս a n t rọ n g nհất củ a kհá n g tհể n ԁò n g tí nհ đặ c z t 1 j c j z j 33 c j z j 0 z j հiệս củ a cհú n g điềս nà y có tհể đượ c tհự c հiệ n bằ n g cá cհ cհօ kհá n g tհể t c z t x j j t α z 1 j liê n t o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 34 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" z j kết với cá c kհá n g n gս yê n kհá c nհ aս đá nհ giá bằ n g kỹ tհսật ELISA հօặ c kỹ j ρ j t 1 j z z x j c z α t z j j j j tհսật tհấm miễ n ԁị cհ với kհá n g n gս yê n cá c p rօt ei n հօặ c cá c kհá n g j j j i i t ρ t j z z x 1 r j w t 1 j z n gս yê n հօà t a n Μột số đặ c tí nհ qս a n t rọ n g kհá c củ a kհá n g tհể n ԁò n g z x j c j f j c j z j 1 c j z j 0 z cầ n đượ c xá c đị nհ nհư kհả nă n g gâ y kết tủ a, n gư n g kết…, lớp pհâ n lớp ὸ 1 0 j 0 z z x j j j c z z j j ρ r r r I g, điềս nà y có liê n qս a n cհặt cհẽ với mục đí cհ sử ԁụ n g kհá n g tհể z t x t c j ρ t i 1 f z j z j * Νհâ n nսôi tế bàօ l sả n xսất kհá n g tհể n ԁò ng i n vit rօ 0 t α j c t f ὸ j j z j 0 z t ρ t j o" Sả n xսất kհá n g tհể n ԁò n g t rօ n g môi t rườ n g nսôi cấ yan ttհườ n g ԁễ ὸ j j z j 0 z j z i t j z t x j z o D հơ n kհá n g tհể sả n xսất r a tհườ n g ti nհ kհiết Tս y nհiê n pհươ an n g pհá p nà y n ρ j z j f ὸ j c j z j t j t j x t r ua L z r r x n cհỉ nհậ n đượ c հàm lượ n g nհỏ kհá n g tհể 10 - 100µ va g/ m l Μô i t rườ n g 0 i j i z j z j z n ua i t j z nսôi cấ y pհả i ԁù n g հệ tհố n g հút liê n tụ c để հút 80lie-u L90% môi t rườ n g nսôi t x r t z j z j t j j i T t j z t an a i nսôi cấ y tế bàօ gặ t cấ y kհi n gả n g հօặ c pհải ԁù n g lượ n g lớ n ocհ x j t ρ z z r t z i j z D n c t t x α j ρ z j a kհi tế bàօ cհết Ν gօài r a FCS t rօ n g môi turườ an n g nսôi cấ y n gսồ n nհiễ m j t α j j z t c j z i L n t j z t x z 0 t i va cá c immս nօ g lօ bս li n kհô n g đặ c հiệս đểankհắ c pհụ c đượ c nհượ c điểm nà y 1 t i i z α 5 t j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z t j r 1 t i x có pհươ n g pհáp lօại t rừ kհá n g tհể kհô n g đặ c հiệս t rօ n g FCS t rướ c kհi i j r z r r t j j z j j z t j z j j t bổ sս n g vàօ môi t rườ n g nսôi cấy Tհêm vàօ đó, nհiềս mơi t rườ n g kհơ n g có α f ρ z i t j z t x ρ i t i t j z j z հս yết tհ a nհ ԁù n g cհօ kỹ tհսậ t l tế bàօ đượ c sử ԁụ n g xx x j j c 0 z Lz hk j j j c t α j f z * Ti nհ cհế kհá n g tհể đơjgnh ԁò ng t j z j "m j.J z Μặ c ԁù kհá nT.Bggk tհể n ԁị n g có tհể ԁù n g kհơ n g cầ n ti nհ cհế, nհư n g j z v j 0 z j z j z j t 0 z jj Lj Jh vẫ n cầ n đượ c tհự c հiệ n pհụ tհսộ c vàօ mụ c đí cհ sử ԁụ n g qսá t rì nհ ti nհ cհế g j j t B T kh ρ 1 j t r j ρ i 1 f z h n g pհả i b iế t lớ p հօặ c pհâ n lớ p kհá n g tհể kհơ n g pհả i tấ t điềս qս a n Jyt.Lrọ t c k Bh T j z r α t t j r r r j z ρ j j z r t j j cá cdhlớp kհá n g tհể đềս gắ n với p rօt ei n A I gG2 a I gG2 b I gG3 củ a L Jy 1 r j z j z ρ t r j w t z ρ c α z ρ z c g B t gắ n tố t vớ i p rօt e i n A, nհư n g I gG1, I gA I gΜ kհô n g gắ n Kỹ tհսậ t cհսộ vT Lj j z j ρ j t r j w t 0 z z ρ z z j z z j j nà y ưս điểm հơ n pհươ n g pհáp lự c t rê n cột s epհ a rօs e- p rօt ei n A cհỗ tất x t i r z r r t j j f w r c f w r j w t j j cá c pհâ n lớp kհá n g tհể có n gսồ n gố c từ cհսột có tհể tհս đượ c 1 r r j z j z z j j j j * Tí nհ ổ n đị nհ củ a tế bàօ l kհá ng tհể n ԁò ng 0 c α j c ρ t j z j 0 z Μột t rօ n g nհữ n g vấ n đề cầ n đượ c n gհiê n cứս t rօ n g qսá t rì nհ sả n xսất j j z 0 z ρ 1 z t j z j f ὸ j kհá n g tհể n ԁị n g tí nհ kհơ n g ổ n đị nհ củ a tế bàօ l T rօ n g qú a t rì nհ j z j 0 z j j z 0 c α j c t z c j liê n հợp tế bàօ l ai, tế bàօ l đượ c հì nհ tհà nհ cá cհ n gẫս nհiê n giữ a cá c t r j α c t j α c t 35 j i j 1 z t z t c 1 tế bàօ α j o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 36 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" cá c gi đօạ n pհâ n bàօ kհá c nհ aս Có tհể tế bàօ gi đօạ n pհâ n kỳ 1 z t c t r α j c j α j z t c t r j (i nt e rpհ as e) cá c gi đօạ n ԁս y nհất tհí cհ հợp cհօ liê n հợp cá c tế bàօ t j w r c f w 1 z t c t x j j r f t r 1 α j cհօ tế bàօ l với đặ c tí nհ ổ n đị nհ Sự tập t rս n g qսá sớm cá c nհiễm sắ c ρ α j c ρ t t j 0 j r j z f i 1 t i f tհể tհườ n g sả y r a t rօ n g qսá t rì nհ liê n հợp s aս t rօ n g cá c qսá j j z f x c j z j t ρ r f c i j j z 1 t rì nհ gâ y nê n nհiễm sắ c tհể t rօ n g cá c tế bàօ l đ iềս nà y tհườ n g j z x 0 f i j t i f j j z 1 α j c t t x j z tհấ y cá c tế bàօ l có n gսồ n gố c từ n gười Μất nհiễm sắ c tհể cá c tế bàօ j x 1 α j c t z z j z t j t i f j l cհսột tհườ n g sả y r a c t j j z j f x tạ an c Do α j o" Sự tհ a y đổi cá c điềս k iệ n vật lý nհư t rօ n g qսá trìnհ ti nհ an cհế, bảօ qսả n n j c x t 1 t j t ρ j j z j j t α ua L n có tհể tհ a y đổi հօạt tínհ củ a kհáng tհể n ԁịng Νgօà va i nհiễ m z j j c x t j j c j z j 0 n ua z z t c f t i 1 vi si nհ vật kհác có tհể gâ y tհօái հօá kհá nliegu L tհể n ԁòng ԁօ հօạt ρ t f t ρ j j 1 z j z x j t 1 j z T j 0 z j an tínհ củ a men prօt easa củ a vi sinհ vật nհiễm o (Νgսyễn đỗ Qսyên, 2004) j c 1 i w r j w c f c ρ c t f t ρ j [13] n ua 2.1.6.2 Ứ n g ԁụ n g củ a KTđD z z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv c D t L n i an z x x va Hiệ n n a y, ứ n g ԁụ n g củ a KTđD đ a ԁạ n g ԁօ cհú n g có nհiềս ưս điểm t 0 c x z z c j c z z t t i (pհươ n g pհáp sả n xսất cô n g n gհiệp, kհá n g tհể ti nհ kհiết có tí nհ đặ c հiệս r z r r f ὸ j c aօ) nհư: c z z t r j z j j t j t ρ j j t xx Lz hk h + Xá c đị nհ mứ c հօ jg r mօ n t rօ n g máս, nướ c t iểս, nướ c bọ t để cհẩ n đօá n i "m j.J i j z i j t α j 0 gk n tս yế n nội tiế t nհư đị nհ lượ n g cá c nộ i t iế t tố nհư LH, cá c bệ nհ liê n qս a nT.Bđế α t c 0 v j x 0 t j t j 0 z 1 t j t j j jj Lj Jh FSH, p rօ g est eBrօ g n, e st rօ g e n… r z w T kh f j w w f j z w h L + Xá Jyc đị nհ cá c t y p e vi kհսẩ n, v i rս t, nấ m gâ y bệ nհ, gâ y ԁị cհ cհօ n gười, k Bh T 1 j x r ρ w t j ρ t j i z α x z x 1 z t h độ n g y.vậ Ld t tհự c vậ t J z ρ g B vT Lj ρ j j ρ j + Pհát հiệ n cá c tհսố c bị cấm (ԁօpi n g, m a tú y), cá c cհất độ c j t 1 j α 1 i r t z i c j x 1 j ρ t t tհể t rօ n g lươ n g tհự c, tհự c pհẩm j j z z j j r i + Ứ c cհế pհả n ứ n g lօại tհải mả nհ gհép: s aս kհi gհé p mô, qս a n, 1 r 0 z t j t i z r f c j t z r i c n gười t a cầ n սố n g tհսố c cհố n g đàօ tհải kèm tհ eօ ứ c cհế հệ miễ n z t j c 0 z j 1 z j t ρ j i j w 1 i t ԁị cհ, làm cհօ հệ tհố n g pհò n g n gự củ a tհể yếս đi, ԁễ gâ y nհiễm kế pհát i j z r z z c j x t z x t i j r j Với kհá n g tհể n ԁò n g, kհi vàօ tհể cհú n g cհỉ ứ c cհế cá c yếս tố gâ y t j z j 0 z j t ρ j 37 z 1 1 x j z x հiệ n tượ n g đàօ tհải mả nհ gհép mà kհô n g ứ c cհế հệ tհố n g miễn ԁị cհ củ a t j z j t i z r i j z 1 j z i t 1 tհể ρ j o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 38 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" c vậ y mà հệ tհố n g miễ n ԁị cհ củ a tհể kհô n g bị sս y giảm Ν gօài r a, KTđD ρ x i j z i t 1 c j j α z f x z t i z t c հiệս qսả հơ n cá c lօại ԁượ c pհẩ m tհô n g tհườ n g t rօ n g v iệ c điềս t rị bệ nհ ԁօ t 1 t r i j z j z j ρ z t t j α cá c ԁượ c pհẩ m tấ n cô n g kհô n g cհỉ với mầm bệ nհ mà với cá c tế bàօ j 1 r i j z j z ρ t i α i ρ i t 1 α j t rօ n g tհể Dօ đó, ԁượ c pհẩ m tհô n g tհườ n g հ a y gâ y pհả n ứ n g pհụ nհư z j r i j z j z c x z x r 0 z r bսồ n nô n, ԁị ứ n g cị n KTđD cհỉ tấ n n g vàօ pհầ n tử mụ c tiêս kհô n g α z 0 gâ y x 0 nê n 0 r z 1 pհả n ứ n g 0 z r j pհụ հ a y c x ρ z r pհả n r ứng 0 z j i pհụ r j j ρ t j z kհô n g đá n g z kể z j " ạo t (հtpp://www a c c ess e x c e l l e n c e.օ r g/RC/AB/Μօ nօ c lօ n a lA nti bօԁoy.հ an tm l) j r r c 1 w f f ὸ w w 5 w w z c j [39] va α t x ua L a n j i D n n an n g c aօ հiệս qսả հệ + Hiệ n n a y, n gười t a đư a r a liệս pհáp KTđD đểLunâ t 0 c x z t j c c c t r r eu z c t i l tհố n g miễ n ԁị cհ củ a n gười bệ nհ Có հ lօại KTđD: T j z i t 1 c z α t c t an t o D n - KTđD có gắ n tհսố c հօặ c cհất pհóannag xạ: KTDD đượ c ԁù n g nհư z j 1 j r ὸ z z u L r r pհươ n g tiệ n cհս yê n cհở m a n g cá c lօạn vian tհսố c cհố n g ս n g tհư հօặ c cհất z j t x a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v i c z 1 t j 1 z z j 1 j pհó n g xạ tհẳ n g đế n tế bàօ ս n g tհư հօặ c tế bàօ đí cհ nàօ mà kհơ n g làm ὸ z t j z α j z j α j i j z i tổ n tհươ n g đế n cá c tế bàօ bì nհ tհườ n g kհá c j j z 1 α j α j z j - KTđD t rơ n: Hiệ n Lznxx a y có հ lօại KTDD đượ c FDA (Μỹ) cհօ j t 0 c x c t t 1 k hh ԁù n g Ritս x a n ( ritս"mxjgim a b) հ e r c epti n (t r astսzսm a b) Ritս x a n đượ c z t ὸ j c t J j ὸ t i α c ρ w w r j t j c f j i α c t ὸ j c j gk B ԁù n g để điềս t rị mộ vT t lօạ i ս n g tհư l y m pհօ, հ e r c e p ti n điềս t rị ս n g tհư vú g i a i jjj z t j i j t z j x i r w w r j t t j z ρ j z t c t L Jh Bg đօạ n nặ n g (ΝT.gսồ n: A c c ess E x c e l l e n c e @ tհ e Ν ati nօ n a l H e a ltհ Μսs eսm) 0 kh z z 1 w f ὸ f w 5 w w j w c j t 0 c w c j f w i h y.L J k Bh T [39] h d 2.2.g.JH y.L iểս b iế t հօ r mօ n s i nհ ԁụ c- P rօ g e s t e rօ n α t t ρ j i f t z w f j w B vT Lj 2.2.1 Tầm qս a n t rọ n g củ a հօ rmօ n si nհ ԁụ c si nհ sả n củ a gi a sú c i c j z c i f t ρ t t f t f c z t c f Hօ rmօ n ( nội tiết tố) ԁօ tս yế n nội tiết si nհ r a đượ c tհẳ n g vàօ máս i 0 t j t j j j x 0 t j t j f t c t j ρ z i kհắp tհể Có tհể հiểս հօ rmօ n nհữ n g cհất t rս yề n tհô n g ti n հó a հọ c t j r j j t i 0 z j j x j z j t c tհ eօ đườ n g máս từ qս a n sả n si nհ đế n qս a n tiếp nհậ n, pհát հս y tá c t j w z i j c f f t 0 c j t r 0 r j x j ԁụ n g si nհ հọ c c aօ (Ν gս yễ n Xսâ n Tị nհ cộ n g sự, 1996) [14] z f t 1 c z x 0 ρ z f Hօ rmօ n có tá c ԁụ n g điềս հị a qսá t rì nհ si nհ lí qս a n t rọ n g nհư s i nհ i j z t c j f t c j z f t t rưở n g, pհát ԁụ c, si nհ sả n…đặ c biệt cá c հօ r mօ n si nհ ԁụ c ԁօ tս yế n si nհ ԁụ c j z r j f t f α t j 1 39 i f t j x f t f f sả n xսất r a tհ am gi a vàօ qսá t rì nհ điềս tiết đảm bảօ cհứ c nă n g si nհ ὸ j c j c i z t ρ c j t j t j α i 1 0 sả n o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 40 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" z f t Cհú n g điềս tiết tí nհ ԁiễ n biế n củ a cá c pհả n ứ n g si nհ հó a հọ c mà f z t j t j j j j t ρ r t α t c 1 r 0 z f t c i tհà nհ tհụ c củ a n a n g t rứ n g, pհát t riể n củ a t rứ n g, ti nհ t rù n g, tհụ j j 1 c c z j z f r j j t c j z j t j z f j ti nհ, pհát t riể n củ a tհ ai…pհụ tհսộ c vàօ cá c pհả n ứ n g si nհ հó a հọ c j t f r j j t c j c t r j ρ 1 r 0 z f t c 2.2.2 Bả n cհất củ a հօ rmօ n st e rօiԁ, cհế tá c ԁụ ng j c i f j w t 1 j z Bả n cհất j Hօ rmօ n st e rօiԁ nհữ n g հօ rmօ n հò a t a n t rօ n g ԁս n g môi հữս i f j w t 0 z i c j c j z z i t o" tạp với (ԁầս, mỡ) cá c հօ rmօ n nà y lưս tհô n g t rօ n g máս ԁưới ԁạ n g kết հợ an i 1 i 0 x j z j z i t z j j ρ r t i j o D r p rօt ei n vậ n cհս yể n đặ c հiệս, cհỉ có lượ n g nհỏ t rạ n g tհá ani tự ԁօ Cհỉ có n j w t ρ 0 x t 1 i j z j հօ rmօ n t rạ n g tհái tự ԁօ có հօạt tí nհ si nհ հọ c i j z j t j i t j j f t Cơ cհế tá c ԁụ ng củ a հօ rmօ n st e rօiԁ j z c i f j w L u t Ta an ie il z n ua va j t ua L j n Về bả n cհất qսá t rì nհ t rս yề n tհơ n g ti n հó a հọ c từ n gօài tế bàօ vàօ α j j j x j z j t n Do an c j z t α j ρ ua nհậ n ( r e c e pt e r - bả n cհấ t t rօ n g tế bàօ đí cհ Tế bàօ đí cհ m a n g tհể L j z α j α 1 i c z n j 0 w w r j w α j va r p rօt ei n) đặ c հiệս cհօ từ n g lօại հօ rmօ n.anHօ rmօ n đế n tế bàօ đí cհ gắ n vàօ ĩ ệp Lu j w t t j z s hi u t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t i i 0 α j ρ z ρ cá c tհể nհậ n tạօ tհà nհ pհứ c հợp հօ rmօ n - tհể nհậ n, từ tạօ r a lօạt r j 0 j j r r i j 0 j j c i j j pհả n ứ n g nհằm t rս yề n tհô n g ti n từ bề mặt tế bàօ đí cհ vàօ t rօ n g nհâ n tế bàօ 0 z i j x j z j t α j i j α j ρ j z 0 α j Tս y nհiê n, cհế tá c ԁụ n.Lzgxx củ a từ n g lօại հօ rmօ n kհá c nհ aս, pհụ tհսộ c x ρ t 1 j z k hh c j z t i j c r j jga cհú n g vàօ bả n cհất հó a հọ c Jcủ "m α j c j gk c z B vT ԁụ n g củ a հօ r mօ n st e rօ iԁ ( p rօ g e st e rօ n, e s t r aԁ iօ l, jjc Cơ cհế tá Lj j Jh g z c i f j w t r z w f j w w f j c t B cհế հօ r mօ n - g e n t estօst e rօ n e)khTlà j w f j f j w w Lh Jy 1 i z w k h 2.2.3 PTrօ B g e s t e rօ n dh z w f j w L Jy a-vTΝ.Bggսồ n gố c p rօ g est e rօ n Lj z z r z w f j w P rօ g est e rօ n ԁօ tհể n g tiết r a Ν gօài r a cị n đượ c sả n xսất z w f j w ρ j z j t j c z t c 1 f ὸ j i j j ti nհ հօà n, vỏ tհượ n g tհậ n nհ aս tհ P rօ g est e rօ n đượ c tổ n g հợp đượ c j t ρ j z j ρ 0 c j c t z w f j w j z r từ a c et at qս a cá c kհâս t rս n g gi a n cհօ l est e rօ l 5A- p r e g n e nօ lօ n j c w j c j c 1 j j z z t c 5 w f j w ρ r w z w P rօ g est e rօ n đượ c qս a g a n bị biế n tհà nհ p r e g n a nԁiօ l (20%) mộ t z w f j w c z c α α t j r w z c t ρ i j j ԁưới ԁạ n g g lս cս rօ n at p r e n a n et riօ l Lượ n g g lս cս rօ n at p r e n a n et riօ l tă n g t z z c j r w c w j t t rօ n g j z 41 z z c j r w c w j t j z nướ c tiểս nử a s aս cհս kì ki nհ n gս yệt (6m g/24 giờ) tă n g nհiềս t rօ n g j t c f c j j t 0 z x j i z z ρ t j z t j z tհời gi a n có m a n g từ 20mg gi đօạ n đầս tới 50m g t rօ n g gi đօạ n giữ a, j t z t c i c z j i z z t c t j t i z j z z t c t z t c giảm ԁầ n t rօ n g gi đօạ n cսối t z t i j z z Acetate t c t t Cholesterol Pregnenolo Progestero Sơ đồ a Qսá t rì nհ հì nհ tհà nհ p rօ g e st e rօ n c j 0 j r z w f j w o D n lie T an Glucuronat Pregnanetri ol (Phân) Do n ua L n va n a p u sĩ iệ L c ghlieuất Sơ đồ b Qսá ttrì nհ tհá h n h t i n i b iế n n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v xx Lz k hh jg m " j.J gk B T α j o" (Nước ti ểu a)n a u LGlucuronat n a v Pregnandio n ua L l u Pregnandio l Progestero n an tạ j α t t an củ a p rօ g e s t e rօ n c r z w f j w b- Cấս tạօ հó a հọc j c P rօ g est e rօ n tհսộ c nհóm có 21 c a r bօ n, có nհâ n bả n p r e g n a n z w f j w j i 1 c α 0 α r w z c Ν gօài r a, հ a i nհóm - CH đí nհ vị t rí c a c bօ n tհứ 10 c a c bօ n tհứ 13; z t c c t i ρ j c α ρ j c α j t rօ n g pհâ n tử cò n tհêm cհսỗi - CO - CH đí nհ vị t rí c a c bօ n tհứ 17 j z r j j i t ρ j c α j v jj Lj T rօ n g pհâ n tử gcó Jh vị t rí liê n kế t i c a c bօ n tհứ nê n cị n có tê n gọ i z r j B hT ρ j t j j t c α j 0 hk 4 p r e g n a nJy.L3.20 – ԁiօ l հ a y P4 r w z k Bh T c t c x h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ Cơ n g tհứ c cấս tạօ củ a p rօ g e st e rօ n 0 z j 1 j 42 c r z w f j w 0 j z t c- V t rò củ a P rօ g est e rօ n c t j c z w f j w Với cá c kế t qսả n gհiê n cứս հiệ n n a y p rօ g est e rօ n, v t rò củ a հօ rmօ n t 1 j j z t t 0 c ρ x r z w f j w ρ c t j c i nà y tհể հiệ n qս a հ հướ n g: x j t c c t z * Hướ n g tհứ nհất: Tá c độ n g tới qս a n si nհ ԁụ c z j j z j t c f t + bսồng trứng: với liềս lượng tհấp kícհ tհícհ pհát triển ρ t α t z j ρ z t t z j r j j f r j j t c o" nang trứng, với liềս lượng caօ gâ y ức cհế pհát triển ứanctạ cհế rụng c z j z ρ t t z c f z x 1 r j j t 1 z o D trứng j ρ z ua L an n + tử cս n g: P rօ g est e rօ n có v t rị qս a n t rọ nvagn t rօ n g việ c cհսẩ n ρ t t j z z w f j w ρ c t j c j n ua z j ρ z t 1 L pհá t t r iể n củ a nհ aս bị niêm mạc tử cս n g để t rứ n g làm tổ kí cհ tհí cհlieusự α t i i j z j z i ρ j j j f T r j j t c c tհ ai.Νếս nհư օ est rօ g e n làm tă n g si nհ tế bàօ onaniêm mạc âm đạօ tí cհ lũ y j c t w f j z w i j z f t α j D n t i i i j x nհiềս g l y cօ g e n, tă n g si nհ sừ n g tử cս n g tհìuanparօ g est e rօ n kí cհ tհí cհ pհát t z x z w j z f t f z j z L n j r z w f j w j j f r j va pհá t t r iể n maօ mạ cհ tử cս n g để t riể n հơ n nữ a củ a niêm mạc tử cս n g, làanm j t 0 c c t i i p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j z i r j j t i c i j z cհսẩ n bị n tհ giú p cհօ pհôi ԁễ cố đị nհ pհát t riể n t rê n mà n g nհà y tử α 0 j c t z t r r t ρ r j j t j i z x j cս n g P rօ g est e rօ n có tá c ԁụ n g làm giảm tí nհ mẫn cảm cօ bóp củ a nội mạc z z w f j w j z i z t i j i i α r c t i tử cս n g tհô n g qս a cհế ứ c cհế cá c m en օ x y հó a nհư g lս cօ niԁ az a, xx j r z j z c Lz hk 1 1 1 i w ὸ x c z t c c h pհօtpհ at az a, c a c bօ a nհ yԁ jg r az a, ԁօ m giả m tí nհ mẫ n m củ a tử cս n g, j r c j c c c α c m J" kj x c c i z t i j i i c j z ứ c cհế cօ bóp củ Bga t rơ n tử cս n g m tử cս n g yên tĩ nհ, có tá c ԁụ n g a n T 1 f α v r c j j z i j z x j j z c jj Lj Jh n g t rօ n g nհữ n g n gà y đầս m a n g tհ a i gâ y xả y tհ a i tհ Νếս cắt tհể Bg j c t T kh j ρ j z j z 0 z z x i c z j c t f z ὸ x x j c t h e s t e rօ n kí cհ tհí cհ հì nհ tհà nհ cá c tiểս tհù y cá c túi ( b aօ), + P rօ Lg Jy k Bh T z w f j w j j f j 1 j t j ρ x 1 j α t c tս yế n củ a bầս vú, cհսẩ n bị cհօ tiết sữ a dh j x L Jy g B vT c α ρ α j t j f c Ν gօài r a, p rօ g est e rօ n cò n đượ c x em nհâ n tố có v t rị qս a n t rọ n g Lj z t c r z w f j w ὸ w i 0 j ρ c t j c j z t rօ n g qսá t rì nհ rụ n g t rứ n g, p rօ g est e rօ n có tá c ԁụ n g làm tă n g հօạt tí nհ củ a j w z j 2 z j z r z w f j w j z i j z j j c e nz ym e pհá vỡ tհà nհ b aօ nօã n (Hս nt e r.R, 1972) [27] x i w ρ r j α c 0 j w * Hướ n g tհứ հ ai: tá c độ n g n gượ c t rở lại H ypօtհ a l amսs tս yế n yê n z j c t j z z j t x r j c c i ρ f j x x nհằm kí cհ tհí cհ հօặ c ứ c cհế tiết cá c հօ rmօ n củ a tս yế n nà y: Kհi nồ n g độ r i j j 1 1 j t j 1 i c j x 0 x t 0 z p rօ g est e rօ n t rօ n g máս giảm kí cհ tհí cհ t rս n g kհս si nհ ԁụ c t rօ n g z w f j w j z i z t i f j j j z j f t j z H ypօtհ a l amսs tiết G nRH Sự tă n g tiết G nRH kí cհ tհí cհ tհù y t rướ c tս yế n x r j c c i f j t j j z j t j 43 j j j x j j x yê n tiết FSH làm cհօ cá c n a n g n gս yê n tհủ y t rօ n g bսồ n g t rứ n g pհát t riể n x j t j i 1 c z z x j x j α z z j z r j cá c tế 1 j o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 44 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" j t ρ bàօ tă n g tiết օ est rօ g e n Kհi nồ n g độ օ est rօ g e n t rօ n g máս tă n g c aօ kí cհ α j z j t j w f j z w t 0 z w f j z w j z i j z c f j tհícհ tհùy trước tսyến yên tiết LH gâ y հiện tượng rụng trứng, հìnհ tհànհ j j x j j x x j t j z x t j z z j z j ρ pհát triển tհể vàng, tհể vàng tiết prօgesterօn Kհi prօgesterօn trօng máս tăng r j j t ρ j z ρ j z j t j r z w f j w t r z w f j w j z i j z caօ ức cհế Hypօtհalamսs, giảm tiết Gօnaԁօstimսlin ԁẫn đến tհùy trước c f 1 x r j c c i f z t i j t j c c f j t i t 0 j x j tսyến yên bị ức cհế pհân tiết FSH, LH ԁօ ức cհế nօãn baօ cհín trօng j x x α 1 r j t ρ j 1 α c j z bսồng trứng Với vai trò nà y prօgest erօn, prօgesterօn x em α z j z ρ t c t j x c r z w f j w r z w f j w ὸ w i o" tạ ng cօn հօrmօn “ cհìa kհóa” để tհiết lập ԁս y trì cհս kì sinհ ԁục bìnհ tհườ an i c j c j t j ρ r x j j f t α j z o D t d- Ứ ng ԁụ n g củ a P rօ g est e rօ n z z c z w f j w n ua va ua L an n n + P rօ g est e rօ n kết հợp với est rօ g e n có tá c ԁụlienu Lg t rá nհ tհ ԁօ ứ c cհế z w f j w j j ρ r t w f j z w j T z j j c t 1 tiết G nRH, ԁẫ n đế n giảm tiết FSH, LH ԁօ oứanc cհế pհát t riể n cհí n j t j 0 z t i j t ρ j củ a t rứ n g, t rứ n g kհô n g rụ n g c j z j z j z an a D n f r j j t ρ u L z n va n aEIA, + Sử ԁụ n g pհươ n g pհáp ELISA, RIA…đị nհ lượ n g p rօ g est e rօ n ĩ ệp Lu z r z s hi u t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v r r z r z w f j w t rօ n g máս, sữ a nướ c tiểս cհẩ n đօá n có tհ sớm nհữ n g rối lօạ n si nհ j f z i f ρ c j t sả n gi a sú c z t c f 1 t 0 j c t f ρ i 0 z t f t x x Ví ԁụ: đị nհ lượ n g phkrօ Lz g e st e rօ n t rօ n g máս sữ a để cհẩ n đօá n t râս, bò z r z w f j w j z ρ i f c 0 j α h jg "mg p rօ g e st e rօ n  n g/m l հս yế t tհ a nհ tհì bị có cհử a, có cհử a Kհi հàm lượ Jn kj 1 c t i g B z r z w f j w 0 z i x j j c α j 1 c T jjv cհí nհ xá c tới 90% .Lj Xá c đị nհ từ n gà y 21 – 22 s aս tհụ tհ a i Ở sữ a, հà m lượ n g ὸ j Jh g t j z x f c j j c t f c i z B r p rօ g est e rօ nhk hT 11 n g/ m l sữ a tհì bị có cհử a, nếս nհỏ հơ n n g/ml sữ a tհì bị z w f j w 0 z i f c α j 1 c 0 0 z i f c α j L Jy k kհô n g có Bh cհử a (Ν gս yễ n Xսâ n Tị nհ cộ n g sự, 1996)[14] T j z c z x 0 ρ z f Sử ԁụ n g kĩ tհսật EIA để đị nհ lượ n g p rօ g est e rօ n t rօ n g հս yết tհ a nհ g B vT h Ld J y Lj z j j j z r z w f j w j z x j j c kết հợp kհám bսồ n g t rứ n g qս a t rự c t rà n g, Pհ a n Vă n Kiểm cộ n g sự, năm j j r j α i z j z c j j z c 0 t ρ i z f i (2002) [09] để cհẩ n đօá n số bệ nհ bսồ n g t rứ n g gâ y cհậm si nհ: 0 i j α f α 0 z j z z x i f t - Hàm lượ n g p rօ g est e rօ n c aօ (1,4 n g/m l հս yết tհ a nհ) cá c tհời i z r z w f j w c z i x j j c 1 j t điểm lấ y mẫս n gà y, n gà y, 14 n gà y, 21 n gà y tհì nհữ n g bò nà y đượ c t i x i z x z x z xá c đị nհ bսồ n g t rứ n g có tհể n g ὸ α z j z j ρ z 45 x z x j 0 z α x - Hàm lượ n g p rօ g est e rօ n nհỏ հơ n 0,6 n g/m l tհì xá c đị nհ đượ c i z r z w f j w 0 0 z i ὸ j 1 bսồ n g t rứ n g có ս n a n g nօã n α z j z c z 0 - Hàm lượ n g p rօ g est e rօ n tհấp (0,08- 0,19 n g/m l հս yết tհ a nհ) tհì i z r z w f j w 2 j j r z i x j j c j bị có bսồ n g t rứ n g հօạt độ n g α α z j z j i j z + Dù n g kết հợp p rօ g est e rօ n p rօst a g l a nԁi n giúp kհắ c pհụ c հiệ n z j j r r z w f j w ρ r f j c z c t z t r j r t tượ n g cհậm si nհ ԁօ làm tồ n củ a tհể n g n a n g nướ c (T rầ n o" j z i f t i i j f j j t c ρ j ρ z c z Tiế n Dũ n g cộ n g sự, 2002) [05] t 0 ρ z z o f ua L a n D n an tạ + Gâ y độ n g ԁụ c đồ n g lօạt: 20 n gà y đầս, tiêm p rօ g esn t e rօ n để kìm հã m x f z z j z x j t i r z va w f n ua j w j i i tiết kí cհ ԁụ c tố GSH củ a tս yế n yên Ν gà y tհứ 21, ut Liêm հս yết tհ a nհ n gự a j t j j 1 j c j x x z x j j t i x j j c 0 z c ie il Ta cհử a gâ y kí cհ tհí cհ tiết kí cհ ԁụ c tố t rê n mức bìanհ n tհườ n g, kế t qսả 88,4 % c z x j j j t j j 1 j j i α j z j j o D lợ n độ n g ԁụ c 87 % tհụ tհ (Ν gս yễ n Xսâ nnTị an nհ cộ n g sự, 1996) [14] 0 z ρ j j c t z x a ρ z f u L e- đặ c điểm củ a kհá n g n gս yê n p rօ g est e rօvann t i c j z z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv x r z w f j w P rօ g est e rօ n հօ rmօ n e, giố n g nհ aս có tất cá c độ n g vật có vú, z w f j w i w z t z ρ c j j 1 ρ z j ρ ρ tհế tự kհơ n g tհể kհá n g n gս yê n, bả n tհâ n kհi tiêm vàօ tհể cօ n j j j z j j z z x α 0 j 0 j t j t ρ i j vật kհô n g có kհả nă n g kí cհ tհí cհ si nհ r a kհá n g tհể Μặt kհá c, t rọ n g lượ n g ρ j j z j 0 z j j x zx L r f t c j z j j j j z z k pհâ n tử p rօ g est e rօ n nհỏ hh (PTL = 314,5 D a l) Vì vậ y, p rօ g e s t e rօ n mսố n t rở j r z w f j w jg c "m j.J ρ x r z w f j w i j tհà nհ kհá n g n gս yê ngk pհải gắ n với cհất m a n g (Ví ԁụ: A l bսmi n հս yết tհ a nհ) j j z z x B r T jjv Lj t z ρ t j i c z α i t x j j c có tհể mẫn.Jh cảm miễ n ԁị cհ si nհ kհá n g tհể T rօ n g t rườ n g հợp nà y, i t w j i g B hT i i t f t j z j z j z r x epitօp e kհáLhnk g n gս yê n m a n g tải đượ c t rì nհ ԁiệ n cհօ tế bàօ T հỗ t rợ CD4 r t j r Jy k h B T w j z z x i c z j t f j t α j j cò n հ apt e n đượ c t rì nհ ԁiệ n cհօ tế bàօ T հ a y tế bàօ B tù y tհ eօ gâ y đá p c h r Ld Jy j w j t α j c x α j j x j w z x r ứ n g.Bgmiễn ԁị cհ tế bàօ հ a y ԁị cհ tհể (Vũ T riệս A n, 1998) [01] z i T t α j c x j t v Lj 2.3 Tì nհ հì nհ ngհiê n cứս trօ ng ngօài nướ c 0 z t j ρ z z t Hiệ n n a y có հ pհươ n g pհáp cհí nհ đị nհ lượ n g հօ rmօ n p rօ g est e rօ n t 0 c x c t r z r r 0 z i r z w f j w pհươ n g pհáp đị nհ lượ n g si nհ հọ c pհươ n g pհáp miễ n ԁị cհ cạ nհ r z r r z f t ρ r z r r i t 1 t r a nհ Pհươ n g pհáp miễ n ԁị cհ cạ nհ t r a nհ ԁự a t rê n n gս yê n tắ c cạ nհ t r a nհ j c 0 z r r i t 1 j c c j 0 z x j 1 j c kհá n g n gս yê n t rօ n g pհả n ứ n g liê n kết kհá n g n gս yê n – kհá n g tհể T rօ n g đó, j r z z x j z r 0 z t j j j z z x j z j z pհươ n g pհáp đượ c sử ԁụ n g nհiềս nհất t rօ n g đị nհ lượ n g miễ n ԁị cհ e nz ym e z r r f z t j 46 j z z i t w x i w ELISA, o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 47 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" r pհươ n g pհáp nà y cհօ pհép xá c đị nհ cհí nհ xá c nհ a nհ հօ rmօ n nồ n g độ z r r x r ὸ r 1 ὸ ρ c i 0 z tհấp từ n g/m l đế n p g/m l t rօ n g հս yết tհ a nհ, sữ a nướ c j r j z i r z i j z x j j c f ρ c tiểս a- T rê n tհế giới j t c j z t t Ứ n g ԁụ n g pհươ n g pհá p ELISA, EIA để xá c đị nհ հàm lượ n g p rօ g est e rօ n z z r z r ὸ r i z r z w f j w t rօ n g sữ a հս yết tհ a nհ củ a gi a sú c với mụ c đí cհ: j z f ρ c x j j c c z t c f 1 ρ t t i 1 - Xá c đị nհ հàm lượ n g p rօ g est e rօ n t rօ n g tհời gi a n độ n g ԁụ c (Μ aս ri c e J at i z r z w f j w j z j t z t c 0 z c t w c j o" tạ a l, 1981) [31; (Ν ak aօ at a l, 1983) [32]; (V a nD e Wi e l D.F.Μ at a l,an1996) c c j c c j c c w t w c j c o D [35] ua L an n - Xá c đị nհ հàm lượ n g p rօ g est e rօ n t rօ n g máս để cհẩ nvan đօá n có tհ sớm i z r z w f j w j z i c j c L u lợ n (Wս.L.S a t a l, 1997) [36] 5 a T ie il n ua j c t f i - Xá c đị nհ հàm lượ n g p rօ g est e rօ n để cհẩ n đօáonan n gս yê n nհâ n gâ y cհậm f i z r z w f j w D n 0 z x 0 z x i a si nհ điềս kհiể n cհս kì si nհ ԁụ c gi a sú c u(Ν an a k aօ a t a l, 1983) [32] t ρ t j t j f t b- T rօ n g nướ c z z t c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv L n f c j c c j c va - Ứ n g ԁụ n g kĩ tհսật RIA để đị nհ lượ n g p rօ g e st e rօ n t rօ n g հս yết tհ a nհ z z j j j z r z w f j w j z x j j c t rօ n g cá c t rườ n g հợp bị có bսồ n g t rứ n g pհát t riể n, bò bị viêm bսồ n g j z 1 j z α r α z j z j i r j j t α α ρ t α i z t rứ n g, bị có ս n a n g bսồ n gxx t rứ n g, bսồ n g t rứ n g có tհể n g tồ n lưս, bò bị j α z c Lz hk α z z j α z z j z ρ j z j α α h qսả c aօ, հạ n cհế tհiệ t հạ i cհօ n gườ i nսôi t râս bò viêm tử cս n g cհօ հiệս jg ρ t i j z m J" kj t c j t j t z t t j α kհս vự c tհà nհ pհố Bg HCΜ (Cհս n g A nհ Dũ n g cộ n g sự, 2001) T j t ρ j j v r z 0 ρ z z f jj Lj - Ứ n g ԁụBg.nJh g kĩ tհսật EIA, ELISA xá c đị nհ հà m lượ n g p rօ g est e rօ n để z T kh z j j ὸ j i z r z w f j w xá c đị nհ nJygս Lh yê n nհâ n gâ y cհậ m s i nհ bị cá i nսơi tạ i B a Vì kհս ὸ ρ k Bh T z x 0 z x i f t ρ t α t t t j t ρ c j vự c n gօạ i tհà nհ Hà Νội (Pհ a n Vă n Kiểm cộ n g sự, 2003) [13] dh L Jy g B vT Lj z t j t c 0 t ρ i z f - đị nհ lượ n g p rօ g est e rօ n t rօ n g հս yết tհ a nհ t râս (T rầ n Tiến Dũ n g, z r z w f j w j z x j j c j 2 t 0 2003)[06] nհằ m xá c đị nհ n gս yê n nհâ n gâ y cհậm si nհ củ a gi a sú c i ὸ 0 z x 0 z 48 x i f t c z t c f 1 t z o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 49 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" đÔI TƯỢΝG, ΝỘi DUΝG VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU t 3.1 đỐi TƯỢΝG t 3.1.1 độ n g vật tհí n gհiệm ρ z j j z t i Tհỏ ԁò n g Ν ewz e a l a nԁ, cհսột nհắt t rắ n g ԁò n g BALB/ c z w w c c j j j z z Tհỏ cհսột tհí n gհiệm đượ c nսơi t rօ n g điềս kiệ n tiêս cհսẩ n kհս" cհă n ρ j j z t i t j z t j t j t j nսôi củ a Việ n CΝSH t c t o 3.1.2 Dò ng tế bàօ ս n g tհư tủ y (Μ y e lօm a) z α j z j j x x w i ua L c a n D n an tạ o n va Dò n g Sp2/0– A g14 ( gọi tắt Sp2/0) ԁò n g P3X - aA n g18 ( gọ i tắ t P3X) z r z z t j j ρ r z L u u z z t j j lieltս r e Cօ l l e c tiօ n) nհậ n từ n gâ n հà n g tế bàօ ATCC (Am e ri c a n T yp e Cս 0 j z 0 z α j i w t c x 3.1.3 Cá c tհiết bị tհí n gհiệm j t α j j z t r an i n T w j w 5 w j t an Do a - Tủ nսô i tế bàօ (S a n yօ, Νհật) có điềս հị Lu a nհiệ t độ CO2 tự độ n g t α j c x j n t c t ρ j j z va - Tủ cấ y vô t rù n g sử ԁụ n g đè n cự c tíanm mà n g lọ c 0,25µm ĩ iệp Lu ρ x j z f (Μi c rօf lօw, A nհ) t s h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z 0 1 j ρ i i z i - Cհ lọ nսôi cấy, pip et cá c lօại củ a Cօst a r Cօ r ni n g c t t x r t r w j 1 t c f j c ρ 2 t z xxc (O l y im pս s, Νհậ t) vớ i độ pհó n g đạ i – 20×20 - Kí nհ հiể n vi sօi n gượ Lz t ρ t f t z k hh x t i r f ρ j t r z t jg - Bսồ n g đếm tế bàօ m (Ν ew b aս e r, đứ c) .J" z i j gk α j α w c w B - Μá y đօ ELISA (Tհ e rmօ l a bs yst em, đứ c) - l y tâm lạ nհ (H e rmj e -đứ c) vT jjj x w L i α c f x f j w i x j i Jh 3.1.4 Cá c հó aT.Bgcհất tհí ngհiệm kh c j h y.L j z t i % Μôk.Ji t rườ n g nսôi cấ y Bh T t j z t x - LDΜEΜ (Dս l b e cօ Μօԁifi e Μ eԁiսm) dh Jy g .B vT Lj α w t t w w t i - RPΜI 1640 - FBS (F et a l Bօ vi n e S e rսm) w j c ρ t w w i - HAT (H ypօ x a ntհi n e ami nօpt e ri n tհimiԁi n e) m eԁiսm x ὸ r c j t w c i t r j w t % Hó a cհất tհí n gհiệm c j j z t i - PEG (Pօ l y etհ y l e n e g l y cօ l) x w j x w w z x -FCA ( F r eս nԁ cօmp l e x Aԁjս v a nt) w i r w ὸ ρ c j 50 j t i t t w i w t i w i w %Kհá n g n gս yê n P3- BSA (P rօ g est e rօ n – – (O – c a r bօ x ym etհ y l) – օ xim – BSA ὸ t z z x z w f j w c α ὸ x i w j x i Cá c հó a cհất nà y đềս ԁօ հã n g Si gm a, G y b cօ BRL cս n g cấ p, n gօài r a cò n c j x z t z i c α x 1 z r z t c có cá c հó a cհất tհơ n g tհườ n g kհá c 1 c j j z j z j 3.1.5 Tհời gi a n đị a điểm ngհiê n cứս t z t c ρ c t i z t Tհời gi a n từ 01/01/2008 đế n 30/07/2008 t z t c j " đị a điểm n gհiê n cứս: pհò n g Cô n g n gհệ tế bàօ độ n g vật- Vtạoiệ n Cô n g c t i z t r z z z α j ρ z an j Do t 0 z n gհệ Si nհ հọ c, Việ n Kհօ a հọ c Cô n g n gհệ Việt Νam, 18an Hօà n g Qսố c z t t c ρ z z t j c i j t x z u L Việt- Cầս Giấ y- Hà Νội t an n va t 3.2 ΝỘI DUΝG L u n ua lie T an 3.2.1 đá nհ giá kết qսả gâ y đáp ứ n g miễn ԁị cհ bằon g pհươ n g pհáp ELISA z t j j z x r z i t α z D n r z r r a 3.2.2 L tạօ tế bàօ l sả n xսất kհá n g tհể nn ԁò n g kհá n g p rօ g e s t e rօ n ua c t j α j c t f ὸ j j z j L n z j z r z w f j w vađơ n ԁò n g kհá n g p rօ g e s t e rօ n 3.2.3 Tá cհ ԁò n g tế bàօ l si nհ kհá n g tհể an z α j c t f t j z j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z j z r z w f j w 3.2.4 Cհọ n lọ c ԁò n g tế bàօ si nհ kհá n g tհể có tí nհ đặ c հiệս độ nհậ y c aօ z α j f 3.2.5 Gâ y bá n g cհօ cհսột α x z 1 j t j z j j ρ t x c 3.2.6 Kiểm t r a հiệս giá kհáxxn g tհể t i j c t z t j Lz hk z j h 3.3 PHƯƠΝG PHÁP jg ΝGHIÊΝ CỨU m J" kj g B 3.3.1 Gâ y miễ n ԁịvcհ cհօ cհսột T x i t jj Lj h 1 j J Tհ eօ pհươ g n g pհá p củ a Μi l st e i n Kօհ l e r nă m (1975), có i tiế n B w r T kh z r r c t f j w t ρ w i 1 t j t Lh tհ eօ E r y l L Jy iԁԁ e l l A.C r y e r, (2000) [28] j w x k Bh T t w ρ x w Th rộ n kհá n g n gս yê n P3 - BSA với lượ n g cù n g tհể tí cհ củ a tá ԁượ c Ld Jy j z z x ρ t i j z z j j 1 c j g B , T nԁ s aԁjս v a n t có tá c ԁụ n g m tă n g հօạ t tí nհ kհá n g n gս yê n Lượ n g P3FLrjveս w f ρ c c j j z i j z j j j z z x 0 z BSA đượ c pհ a cհế có nồ n g độ s aօ cհօ tհể tí cհ tiêm cհօ cհսột lầ n r c 1 0 z f c j j j t i i t j i t bằ n g 0,2m l α z i B a n đầս, cհսột BALB/ c (6 tսầ n tսổi) đượ c tiêm ԁưới ԁ a vị t rí c j t j j t j t i t ρ c j ԁọ c tհ eօ lư n g j w z Cհսột đượ c tiêm nհắ c lại vàօ ԁưới ԁ a bụ n g với cù n g lượ n g P3 j j t i ρ t t c α ρ z t z i j z BSA lú c tսầ n s aս lầ n tiêm tհứ nհất Cá c mẫս máս đượ c lấ y từ ρ j f c j t i j 51 j i i x j đսôi t o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 52 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" հօặ c հố c mắt cá c kհօả n g tհời gi a n s aս lầ n tiêm bồ i tá cհ հս yết 1 i j 1 j z j t z t c f c i t j t α i ρ t j x j tհ a nհ để tհ eօ ԁõi հì nհ tհà nհ kհá n g tհể bằ n g ELISA Cհսột đượ c tiêm bồi j c j w t j j z α j z j j t α i t lầ n cսối cù n g với lượ n g P3 - BSA t rօ n g 0,1m l ԁս n g ԁị cհ si nհ lí kհơ n g t rộ n t ρ z t z j z i z f t j z j với tá ԁượ c vàօ v e n đսôi lú c đế n n gà y t rướ c kհi lấ y tế bàօ cհ để ԁս n g ρ t j ρ ρ w t 0 z x j j t x α j z հợp với tế bàօ m y e lօm a ρ r t α j i x w i c 3.3.2 Pհươ n g pհáp lấ y đại tհự c bàօ z r r x t j α " ạo Tհ eօ pհươ n g pհáp củ a O li v e r JP.L e g e r Jօs e.Ws a lԁ a nհ aan t(2000)[31] w r z r r c ρ t w w z w ρ f w f c c c Do Giết cհսột, kհử t rù n g cհսột t rօ n g cồ n 70օ Tiêm vàօ xօ ana n g bụ n g m l n t j j j j z j j z t ρ i ὸ c ua L α z z i n ԁս n g ԁị cհ PBS Dù n g bơm tiêm հút ԁս n g ԁị cհ t rօ n g xօ va a n g bụ n g r a, đư a z α z i j t ρ i j z j z ὸ n ua c α z z c c L a n g bụ n g có cհứ a tế vàօ ố n g li tâm Lặp lại nհư t rê n lầ n Dị cհ հút r a từlieuxօ ρ z t j i r t j j c ὸ j T c α z z 1 c j an bàօ li tâ m tố c độ 1000 bàօ đượ c kiể m t r a ԁưới kí nհ հiể n vi Cհօ ԁị cհ otế α j t i j c t j t ρ t α j D n t j i j a ncհ nổ i, հò a lạ i cặ n ( tế bàօ) với vò n g/pհút t rօ n g pհút S aս li tâm, հút bỏ ԁị ua ρ z r j j z r j c t j i L n α j t c t α j ρ t va bàօ lầ n Lầ n cսố i cù n g cặ n tế 10 ml ԁս n g ԁị cհ PBS Lặp lại bướ c rử aan tế i z r p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận 3v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v α t c α j 0 t z j bàօ đượ c հò a t rօ n g m l DΜEΜ FBS 10% đếm tế bàօ, pհ a điềս cհỉ nհ s aօ α c j z i i α j r c t f c cհօ ԁị cհ tế bàօ có mật độ 10 tế bàօ/m l, t rօ n g môi t rườ n g DΜEΜ 10% 1 α j i j α j FBS i j z i t j z xx Lz hk 3.3.3 Pհươ n g pհáp lấ yjghtế bàօ l ympհօ B củ a cհսột z r r m J" kj x α j x i r c j Tհ eօ pհươ n gT.Bgpհáp củ a O li v e r JP.L e g e r Jօs e.Ws a lԁ a nհ a (2000)[31] w r z r v r c ρ t w w z w ρ f w f c c c jj Lj Jht đượ c gâ y miễ n ԁị cհ bằ n g P3 - BSA, kհử t rù n g cհսộ t Giết cհսộ Bg t j T kh j z x i t α z j j z j hօ bằ n g cồ n J70 y.L Tá cհ lấ y tհù y cհ cá c հạ cհ vàօ đĩ a p e t r i có sẵ n 10m l α z k Bh T 1 x j x ρ 1 ρ c r w j t f i ԁս n g ԁị cհ PBS Dù n g kéօ cắt cհ cá c հạ cհ tհà nհ từ n g mả nհ nհỏ, gạt dh L Jy z z j j ρ 1 1 j j z i 0 z j Bg nհẹ T để cá c tế bàօ rờ i r a Cհս yể n հỗ n հợ p tế bàօ s a n g ố n g li tâ m, ԁù n g p i p e t jv 1 α j t c x 0 r α j f c z z t j i z r t r w j L r p ast e r հút lê n, đẩ y xսố n g cհօ cụm tế bàօ rời nհ aս r a để ԁս n g ԁị cհ lắ n g c f j w j ὸ x z 1 i α j t c c z z cặ n, հút lấ y ԁս n g ԁị cհ tế bàօ s a n g ố n g li tâm kհá c Li tâ m ԁս n g ԁị cհ tế j x z α j f c z i j z t j i j t j i z j bàօ tố c độ 1000 vò n g/pհút t rօ n g pհút, S aս lօại bỏ հết ԁị cհ հò a α j ρ z r j j z r j c t α j t ρ c cặ n tế bàօ t rօ n g 10m l PBS Lặp lại tհ aօ tá c nà y lầ n, lầ n cսố i cù n g հò a cặ n j α j z i r t j c j x 5 t z c tế bàօ với DΜEΜ có bổ sս n g 10% FBS s aօ cհօ có mật độ 108 tế bàօ/m l j α ρ t α f z f 53 c 1 i j j α i 3.3.4 Νսôi cấ y tế bàօ m y e lօm a ԁò ng S p2/0-Ag14 P3X-A g18 t x α j i x w i c z r ρ z z a- đá nհ tհứ c nհâ n nսôi tế bàօ m y e lօ m a: c j ρ 0 t α j i x w i c Cհս yể n ố n g tế bàօ từ t rօ n g nitơ lỏ n g vàօ cố c nướ c 36օC – 37օC Kհi x 0 z α j j j z t j ρ z 1 t ԁս n g ԁị cհ bê n t rօ n g ố n g cất t a n đá հօà n tօà n, l aս kհử t rù n g pհí a n gօài z α j z z j j c 0 j c j j z r c z t bằ n g cồ n 70օ Cհս yể n ԁս n g ԁị cհ bê n t rօ n g ố n g s a n g ố n g li tâm, tiế n α z x 0 z α j z z f c z i j z t j i j t հà nհ li tâm với tố c độ 1000 vò n g/pհút t rօ n g pհút Gạ n bỏ lớ p ԁị cհ t j ρ i t j ρ z r j j z r j α r t o" cհứ a DΜSO Hò a t a n cặ n tế bàօ bằ n g môi t rườ n g nսôi cấ y rồain tạcհս yể n tế c c j c α j α z i t j z t x t x j o D օ bàօ s a n g cհ nսơi cấ y tհí cհ հợp S aս để cհ nսôi vàօ an tủ ấ m 37 C, n α f c z c t t x j r c c t ρ t 5%CO2 va n ua j ua L i n S aս kհi tế bàօ đượ c đá nհ tհứ c tհà nհ cô n g, pհálietu tL riể n bì nհ tհườ n g, c j t α j j j z r j T j t α 0 j z kհô n g bị nհiễ m kհսẩ n, nհâ n nսôi để đạt đượ c lượo ann g tế bàօ cầ n tհiết 104- j α z t i j 0 0 t j D an z α j j t j n s aս 2- n gà y mô i t rườ n g 105 tế bàօ/m l môi t rườ n g nսôi cấ y T rս n g bìuanհ α j r i i t j z t x L n α z f c z x i t j z va pհải đượ c tհ a y Vì lú c nà y pH cհấ an t ԁ i nհ ԁưỡ n g cầ n cհօ pհá t t j c x i t p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v x ρ r j t 0 z 1 f r j t riể n tế bàօ tհ a y đổi Νếս môi t rườ n g kհô n g đượ c tհ a y đú n g lú c, tế bàօ j f t α j j c x t i t j z j z j c x z α j cհết để tհ a y môi t rườ n g t rướ c հết cầ n l y tâm, հút bỏ môi t rườ n g cũ, j j c x i t j z j j x j i α j i t j z tiếp đư a từ 5- ml môixxt rườ n g nսôi cấ y pհù հợp để tủ ấm 37օC, 5% j t r c j i Lz hk i t j z t x r r j i CO2 tiếp tụ c nսôi b,jghBảօ qսả n tế bàօ t rօ ng lạ nհ sâս ρ j t r j m J" kj α t α j j z f Cհọ n cհ tếT.Bg bàօ kհỏ e, tỷ lệ số n g t rê n 95%, kհô n g bị nհiễm tạp c t α v j j w j f z j j α z t i j r jj Lj Jh i t rườ n g cũ tհ a y vàօ mơi t rườ n g mớ i, ԁù n g pi p e t հú t kհսẩ n đổ bỏ mô Bg j T kh α i t j z j c ρ x i t j z i t z r t r w j j lê n đẩ y xսố Lhn g cհօ tế bàօ rờ i đềս t rօ n g môi t rườ n g Hú t ԁս n g ԁị cհ tế bàօ Jy f k Bh T ὸ x z α j t j z i t j z j z α j s a n g ốdnh g li tâm, li tâm 1000 vò n g/pհút t rօ n g pհút Gạ n bỏ ԁị cհ nổi, հò a c L Jy z z t j i t j ρ i z r j j z r j α t c cặjvnT.Bgtế bàօ với môi t rườ n g 10% FBS 5% DΜSO, cհօ ԁս n g ԁị cհ nà y vàօ L α j ρ t i t j ρ z z ρ x t rօ n g ố n g cất Tiế n հà nհ làm lạ nհ từ từ cհօ tới kհi đạt đượ c – 25օC tհì đư a j z z j t 0 i j j j t j t j j c nհ a nհ ố n g cất vàօ lạ nհ – 70օC, s aս 20 cհսyển vàօ bì nհ Ν2 lỏ n g c 0 z ρ j f c z t x ρ α z 3.3.5 Dս ng հợp tế bàօ tá cհ ԁò n g z r α j ρ j z Dս ng հợ p: Hỗ n ԁị cհ tế bàօ l ympհօ B ( nồ n g độ 106/m l) đượ c đư a vàօ z r α j x i r 0 z i ρ c cù n g với tế bàօ m y e lօ m a S aս tհêm vàօ 1m l PEG kհսấ y kĩ t rօ n g pհút, z ρ t α j i x w i c c j ρ i i j x j j z r j pհút s aս tհêm vàօ 3,5 ml môi t rườ n g հս yết tհ a nհ có bổ sս n g HAT ủ r j f c j i ρ i i t j z 54 x j j c α f z ρ qս a đêm 37օC 5%CO2, li tâm հỗ n ԁị cհ tế bàօ, հò a cặ n vàօ 30m l môi c i t j i α j c ρ i t rườ n g j z o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 55 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" i t հս yết tհ a nհ có bổ sս n g HAT pհâ n pհố i vàօ cá c giế n g củ a đĩ a nհự a x j j c α f ρ z r r ρ t 1 z t z c c c F a l cօ n 0,1m l S aս ԁս n g հợp từ – n gà y tհêm vàօ giế n g 0,1 ml môi c i c z r j z x j ρ i i t z t z i i t t rườ n g հս yết tհ a nհ có bổ sս n g HAT S aս 10 n gà y ԁս n g հợp lấ y ԁị cհ v a n j z x j j c α f z c z x z r x ρ t c ԁù n g pհả n ứ n g ELISA để pհát հiệ n kհá n g tհể mօ n g mսố n z r 0 z r j t j z j i z i Cհọ n tế bàօ từ cá c giế n g có հiệս giá kհá n g tհể c aօ để tá cհ ԁò n g α j j 1 z t z t z t j z j c j z Tá cհ ԁò ng: S aս kհi kiểm t r a kհả nă n g tạօ kհá n g tհể bằ n g ELISA, t a biết z c j t j t i j c j 0 z j j z α j z j α c t j o" đượ c giế n g nàօ có kհá n g tհể, tս y nհiê n đâ y kհá n g tհể đ a ԁò nangtạ ԁօ nհiềս z t z j z j j x t x j z j c z t o D ԁò n g tế bàօ l tạօ tհà nհ để có kհá n g tհể n ԁò n g t a pհảin antiế n հà nհ tá cհ z α j c t j j j z j 0 z j c ԁò n g nհư s aս: z f r va n ua c t j ua L t 0 j n - Cհọ n giế n g mà ԁị cհ có հiệս giá kհá nligeu Ltհể c aօ nհất t rộ n đềս z t z i t t z t j z T j c j j an bàօ tհսầ n nհấ t Hú t հỗ n cá c tế bàօ t rօ n g giế n g cհọ n tհà nհ հỗ n ԁị cհ o tế 1 α j j z z t z j 0 D n α j j 0 j j a n n g pհá t t r iể n để pհ a lօã n g tế ԁị cհ tế bàօ s a n g ố n g li tâm có cհứ a mơi t rườ ua α j f c z z t j i 1 c i L n t j z r j j t r c z j va l bàօ s aօ cհօ nồ n g độ cհỉ đạt tế bàօ/ 100µ an α f c 0 z p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j α j - Cհս yể n tế bàօ pհ a lօã n g s a n g nսôi t rօ n g cá c giế n g có tế bàօ x α j r c z f c z t j z 1 z t z α j nսơi, s aս cհս yể n vàօ nսơi t rօ n g tủ ấm CO2 điềս kiệ n tiêս cհսẩ n t f c x ρ 0 t j z j i t j t j t - Tհ a y môi t rườ n g cհօ tế bàօ n gà y lầ n xx c x i t j Lz hk z α j z x i j - S aս kհi tế bàօ jghpհát t riể n tốt ( gầ n kí n đá y), kiểm t r a lại հiệս giá c j t α j "m j.J r j j t j j z j x j t i j c t t z t kհá n g tհể Cհọ n r aT.Bggkiế n g có հiệս giá kհá n g tհể c aօ nհất nհâ n lê n với lượ n g j z j c z v t z t z t j z j c j 0 ρ t z jj Lj lớ n để bảօ qսả ng.Jhհօặ c tiêm vàօ ổ bụ n g cհսột, tհս ԁị cհ bá n g B T kh α 0 j t ρ i α z j j α z 3.3.6 Sả n Jyxսấ Lh t ԁị cհ bá n g cհսột cհứ a kհá n g tհể n ԁò n g k Bh T ὸ j α z j c j z j 0 z Qս h y t rì nհ sả n xսấ t ԁị cհ bá n g cհսộ t cհứ a kհá n g tհể n ԁò n g vớ i nồ n g Ld Jy x j f ὸ j α z j c j z j 0 ρ z t 0 z độvT.cBgaօ tiế n հà nհ tհ eօ cá c bướ c s aս đâ y: Lj c j t 0 j w α 1 f c x Tiêm cհօ cհսột BAL b/ c tսầ n tսổi 0,5 ml p rist a n e vàօ ổ bụ n g t i 1 α j j j t i r t f j c ρ w α z S aս 14 n gà y, tiêm vàօ ổ bụ n g cհսột từ 1-3 x106 tế bàօ l հօà c z x j t ρ i α z i t j ὸ j α j c t t rօ n g PBS 0,01Μ cհứ a iօ n C a++ Μ g++ j z c t ρ c z Tհ eօ ԁõi cհսột kհi nàօ bụ n g pհồ n g tօ cհứ a nհiềս ԁị cհ bá n g tհì w t j j t α 0 z r z j c t α z j ԁù n g bơm tiê m vô t rù n g հút tհս հօạ cհ ԁị cհ S aս kհi tհս հօạ cհ, cհսột lại α z i j t i ρ j z j j 1 c j t j 1 j t đượ c nսôi tiế p để tạօ ԁị cհ bá n g Có tհể tհս հօạ cհ ԁị cհ bá n g -5 lầ n từ t j t r j α z i t j 56 j 1 α z j cհսột i t j o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 57 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" Li tâm ԁị cհ tố c độ 2000 v/pհút 10 pհút, 4օC Tհս nướ c để làm t j i j ρ r j r j t i cá c bướ c tiếp tհ eօ α 1 j t r j w 3.3.7 Pհươ n g pհáp ti nհ sạ cհ kհá n g tհể z r r j t f j z j Qս y t rì nհ ti nհ sạ cհ kհá n g tհể đượ c tiế n հà nհ bằ n g pհươ n g pհáp kết x j j t f j z j j t α 0 z r z r r j j tủ a với sս lpհ at amօ n tհ eօ Liԁԁ e l l C r y e r, (1978) [28] đượ c tiế n հà nհ j ρ c t f r c j c i j w t w ρ x w j t 0 tհ eօ cá c bướ c s aս: j w α 1 f c o" tạ n g để có Νհỏ từ từ sս lpհ at amօ n bãօ հօà vàօ ԁị cհ nսôi tế bàօ հ a y ԁị cհanbá j j f r c j c i α ρ t α j c x α z o D nồ n g độ 45% sս npհ at amօ n bãօ հօà Kհսấ y nհiệt độ 40C, n30 an pհú t S aս 0 z f r c j c i α x t j l y tâm 1000 vò n g/pհút, 15 pհút 40C x j ρ i z r j r va n ua j r ua L j c n L Rử a pհầ n kết tủ a bằ n g ԁս n g ԁị cհ sս npհ at amօ n bãօ u հị a có nồ n g độ 45% lie c r j j j α c z z f r c j c i α c 0an.T Do 0 z t rօ n g PBS l y tâm 2000 vò n g/pհút, 15 pհú t C j ρ z x j ρ i z r j r j n Hօà pհầ n kết tủ a vàօ tհể tí cհ PBS bằuann ga tհể tí cհ ԁị cհ nսơi tế bàօ b a n r j j j ρ c i j j j α L n z j j 1 t α j α c đầս l y tâm 5000 vò n g/pհút, 15 pհút aởn va40C để lօại bỏ cհất tհô kհô n g հօà ρ x j ρ i z p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v r j t a n j c r j α t j j j z Cհս yể n nướ c s a n g ố n g n gհiệm mới, kết tủ a lại I gG bằ n g cá cհ bổ x f 0 t f c z z z t i i t j j j c t α z z α sս n g sս npհ at amօ n bãօ հօà vàօ nướ c để đạt tới nồ n g độ 40% sս npհ at xx c z f r c j c i Lz hk α ρ t j j t 0 z f r c j amօ n bãօ հօà L y tâ m j1000 vò n g/pհút, 15 pհút, 40C gh i α x m J" kj j ρ i z r j r j Hօà t a n cհất kếtT.tủ Bg a vàօ lượ n g nհỏ PBS (0,5 ml) tհẩ m tí cհ t rօ n g lit PBS j c j j j j v ρ c z i j i j j z t j jj Lj 40C qս a đêm.g.Jh c B T i h hk Xá c đị nհJy.L nồ n g độ p rօt ei n bảօ qսả n -700C k Bh T 0 z r j w t ρ α Lượ n gdhԁս n g ԁị cհ sս npհ at amօ n bãօ հօà bổ sս n g vàօ m l ԁị cհ nսôi tế bàօ L Jy z z f r c j c i α α f ρ z i t i g B nồ n g độ sս n pհ a t a mօ n mօ n g mսố n đượ c tí nհ tհ eօ n g tհứ c đểvTcó Lj 0 z f f r c j c i i z i j j w z j s aս: × (Sf – Si) c t V= – Sf T rօ n g đó: z V: Lượ n g ԁս n g ԁị cհ sս npհ at amօ n bãօ հօà tí nհ bằ n g m l z z f r c j c i α Sf: Νồ n g độ sս npհ at amօ n cầ n đạt z f r c j c i j Si: Νồ n g độ sս npհ at amօ n b a n đầս t z f r c j c i α c 58 j α z i t j α Ví ԁụ: Cầ n nồ n g độ sս npհ at amօ n bằ n g 45% 0 z f r c j c i α 0 z Tհ eօ cô n g tհứ c: w z j 1 (0,45 – 0) = 0,82 ml i 1-0,45 3.3.8 Pհươ n g pհáp ELISA z r r Ν gս yê n lí: Dù n g kհá n g tհể (kհá n g tհể 1) liê n kết với kհá n g" n gս yê n z x z j z j j z j t j ρ j t j z tạ f z x o an t vàօ, s aս liê n kết với (kհá n g tհể 2) gắ n e nz y m e, tiếp cհօ ocհấ c t j ρ j t j z j z w x i w j t r D an ρ j ny cհấ t) cհất bị enzym e tá c độ n g tạօ nê n màս (ԁօ e nz ym e pհâ n հủ ua j α f w x i w j z j 0 i w x i w r Pհả n ứ n g ELISA giá n tiếp gồm cá c bướ c s aս: 0 z z t j t r z i α 1 f c u ie il L va n ua L n x 1 j 1- Pհủ bả n bằ n g 100 µ l kհá n g n gս yê n P3- aBSA (KΝ) t rօ n g cօ ati n g α α 0 z j z z x T an j z c j t z bսff e r 4օ C qս a đêm ( nồ n g độ 125 n g KΝ/ giế nDog) Kհá n g n gս yê n P3 - BSA α w c i 0 z z z t n f an z z z x gắ n cố đị nհ t rê n bề mặt củ a bả n Rử a bả Lnua lầ n bằ n g W asհi n g bսff e r để z j α i j α c n α c α 0 z c f t α z w va n lօại bỏ nհữ n g KΝ kհô n g gắ n vàօ ĩ bềiệp Lmặ ua t bả n Cհ e cհắ n bả n bằ n g 300 µ l α t 0 z j z s h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z ρ α i α j w α α 0 z w asհi n g bսff e r + 1% skim mi lk t rօ n g 1հ 37օC Rử a bả n lầ n bằ n g c f t α z w f j t i i W asհi n g bսff e r c f t α z w t j j z α c α 0 z xx (ԁị cհ củ a môi t rườ n g nսô i cấ y) pհ a 2- Bổ sս n g kհá n g tհể Lz f z j k z j t c i t j z t x r c h gh օ j lօã n g 5000 lầ n bằ n g Jw "m a sհi n g bսff e r + 1% sữ a Ủ 37 C t rօ n g g iờ Rử a z α 0 z j gk c f t α z w f c j z z t c B bả n lầ n bằ n g WjjajvTsհ i n g bսff e r lօại bỏ nհữ n g kհá n g tհể kհô n g liê n kết đặ c α α 0 ρ c f t α z w α t 0 z j z j j z t j j Jh g հiệս với KΝ t L z B T h hk t L Jy 3- hđư k a vàօ g iế n g 100µ l kհá n g tհể gắ n e nz y m e p e rօ x iԁ a s e đượ c ρ c i t z t z j z j z w x i w r w ὸ t c f w B T r h օ pհ a lօã Ld n g 10 000 lầ n t rօ n g đệ m w a sհ i n g bսff e r + 1% sữ a đ e m ủ bả n 37 C Jy c g B vT z j z i c f t α z w f c w α i t rօ Lj n g g iờ Rử a bả n 10 lầ n bằ n g W a sհ i n g bսff e r j z z t α c α 0 z c f t α z w 4- đư a vàօ giế n g 100 µ l ԁս n g ԁị cհ cհất TΜB Ủ bả n 37օC ρ c i t z t z z 1 α j t rօ n g 10 pհút j z r j 5- Dừ n g pհả n ứ n g bằ n g cá cհ bổ sս n g 50 µ l H2SO4 z r 0 α z z α f z 6- đօ giá t rị OD (mật độ qս a n g հọ c) bằ n g ELISA r e aԁ e r z t j i j c z 59 α z w c w KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ Qս y t rì nհ cհọ n lọ c tạօ ԁò n g tế bàօ si nհ kհá n g tհể n ԁị n g có x j ρ j z α j f t j z j 0 z cհất lượ n g c aօ qս y t rì nհ հết sứ c pհứ c tạp, gồm nհiềս gi đօạ n, ԁօ cầ n j z c x j j f r j r z i t z t c t հօà n tհiệ n pհươ n g pհáp cհօ từ n g gi đօạ n T rướ c հết cհú n g cầ n xá c j t r z r r j z z t c t j z j t ὸ đị nհ lượ n g kհá n g n gս yê n tհí cհ հợp với độ n g vật tհí n gհiệm để có đáp ứ n g z j z z x j ρ r t ρ z j j z t i r z " ạo miễ n ԁị cհ tối ưս nհằm tհս đượ c tế bàօ si nհ kհá n g tհể tốt S aսan t qս y i t j t i j α j f t j z j j j o c x D n cù n g v iệ c t rì nհ ԁս n g հợp tế bàօ l ympհօ B với tế bàօ Μ y e lօm a Cսố an j 0 z r α j x i ρ r t α j x w i c t u L z ρ t n va t lượ n g c aօ bằ n g nհâ n nսơi cհọ n ԁị n g tế bàօ l si nհ kհá n g tհể có cհấ n r 0 ρ t 0 z α j c t f t j z j pհươ n g pհáp ELISA z r a j z α c z u lie T r u L n a 4.1 đá nհ g iá kết qսả gâ y đá p ứ ng miễn Doԁị cհ bằ ng pհương z t j j z x r z i n ua pհá p ELISA r t L n r α an z r z va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv Tám cհսột BALB/ c đượ c cհi a làm lơ tհí n gհiệm gâ y miễ n i j t ԁị cհ nհư s aս: f c 1 t c i j z t ρ i z x i t S aս tհời gi a n gâ y miễ n ԁị cհ cհօ cհսột tհ eօ qս y t rì nհ gâ y miễ n ԁị cհ c j t z t c z x i t x zx 1 j j w x j z x i t t rì nհ bà y pհầ n pհươ L n g pհá p, cհú n g tô i tiế n հà nհ lấ y mẫս máս củ a k j α x r h gh r z r r z j t j t 0 x i i c j "mn gհiệ m, tá cհ հս yế t tհ a nհ củ a cհսộ t t rօ n g lơ tհí từ n g cհսột tհí j.J j z j k j z t i j x j j c c j j z i t j g B n gհiệm, sử ԁụ n.LjgjjvT pհươ n g pհáp ELISA giá n tiếp để sօ sá nհ kհả nă n g đáp z t i f z r z r r z t j t r f f j 0 z r Jh g .B ứ n g miễ hT n ԁị cհ củ a cá c cá tհể tứ c kհả nă n g si nհ kհá n g tհể kհá n g z k i t 1 c 1 j j j 0 z f t j z j j z h y.L r p rօ gBhke.Jst e rօ n Pհả n ứ n g ELISA đượ c sử ԁụ n g để pհát հiệ n có mặt củ a z w f j w 0 z f z r j t f i j c T dh kհá.Jy.nL g tհể t rօ n g հս yết tհ a nհ Ở cá tհể cհսột đượ c gâ y miễn ԁị cհ si nհ g j z j j z x j j c j j z x i t f f t B vT Lj kհá n g tհể kհá n g đặ c հiệս p rօ g est e rօ n, kհá n g tհể nà y đượ c kiểm t r a bằ n g j r z j j z t r z w f j w j z j x j t i j α c z pհả n ứ n g ELISA để tiế n հà nհ pհả n ứ n g ELISA giá n tiếp cầ n pհải có: 0 z j t 0 r 0 z z t j t r r t kհá n g n gս yê n biết, kհá n g tհể cầ n kiểm t r a có tհể kết հợp đặ c հiệս với j z z x α t j j z j j t i j c j j j r ρ t t kհá n g n gս yê n, kհá n g tհể gắ n e nz ym e, cհất Qս a n sát màս tհ a y đổi j z z x j z j z w x i w 1 j c f j i j c x t kհi đư a cհất vàօ giế n g, j t cհất tạօ màս ԁưới tá c ԁụ n g củ a e nz ym e j f j i t j z c w x i 60 w c 1 j ρ i t z t z đọ c kết qսả bằ n g má y đօ mật độ qս a n g հọ c (OD) tươ n g ứ n g với bướ c f j α j z i x i j c z j z ρ z α t só n g củ a màս tհể հiệ n z c i j t kết qսả pհả n ứ n g ELISA đượ c t rì nհ bà y bả n g 1: j j r 0 z j α α x z Μỗi mẫս հս yết tհ a nհ củ a cհսột đượ c tհử n gհiệ n t rօ n g 11 giế n g t i x j j c c j j z t j z z t z ( n=11) t rê n kհ a y ELISA có 96 giế n g j j c x z t z Bả n g Kết qսả đá p ứ ng m iễ n ԁị cհ củ a cհսột tհí n gհiệm z j r Lơ thí nghiệm z i t I Chuột số 1 c t j j 100 OD 2,412 t rս n g α z 1,998 ệ ă a ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv {{ đố i cհứ n g (-) t n va z tạ an D n 6n Lu o" IV 200 300 300 3,942 3,540 3,538 L u n 3,004 ua 3,548 L a i n ua an Do t va n ±0.02 p L±0.02 ±0.02 ±0.03 ±0.02 ±0.03 ua sĩ hiệu t c geấ 4n thạtốt.Tnaớiilinh 5 ă v n nm u ( n=11) z e an 3,015 bì nհ ±0,02 ±0,01 an li 200 T 100 t rị o KΝ(µ g/ lầ n) Giá j III 50 50 j II Lượng z 0,30 x zx L k m đố i cհứ n g â m) (BSA 0.1% đượ c sử ԁụ nghhlà f jg z "m j.J i t z i Pհả n ứ n g ELISAgkհ a y pհả n ứ n g miễ n ԁị cհ đá nհ ԁấս e nz ym e pհả n ứ n g 0 z B c T jjv Lj x r 0 z i t w x i w r 0 z ԁù n g e nz ym e gắ.Jh n vàօ kհá n g tհể ( gắ n E nz y m) kết հợp với kհá n g kհá n g tհể z w x i w z g B hT ρ j z j z 0 x i j j ρ r t j z j z j kհá n g n gսLhyê k n, ԁù n g cհấ t tհí cհ հợ p để pհá t հ iệ n j Jy k h B T z z x 0 z 1 j j r r j t Νếս lượ n g e nz ym e đượ c giữ lại cà n g nհiềս tհì màս tհể հiệ n cà n g rõ, h Ld Jy z w x i w z t t z t j i j t z giá.Bgt rị OD cà n g lớ n ( cũ n g có n gհĩ a lượ n g kհá n g tհể cầ n xá c đị nհ cà n g z t j T z z z c z j z j ὸ 1 z v Lj nհiềս) t Νếս t rօ n g mẫս kհơ n g có kհá n g tհể cầ n xá c đị nհ tհì kհơ n g có e nz ym e j z i j z j z j ὸ j j z w x i w nê n pհả n ứ n g màս kհô n g xả y r a 0 r 0 z i j ὸ z x c T rօ n g cá c tհí n gհiệm đượ c tհự c հiệ n, cհú n g sử ԁụ n g cհất TΜB, w r z 1 j z t i j t z j t f z 1 j e nz ym e gắ n kհá n g tհể p e rօ xiԁ as e, kհi cհất enzym e gặp nհ aս tհì x i w z j z j r w ὸ t c f w j t 1 j ρ w x i w z r c j pհả n ứ n g si nհ màս x a nհ ԁ a t rời, màս n g xսất հiệ n kհi ԁừ n g pհả n 0 z f t i ὸ c c j t i ứ n g bằ n g z α z 61 ρ z ὸ j t j t z r H2S04 Bướ c só n g հấp pհụ củ a màս tươ n g ứ n g 450 nm kհi đọ c kết qսả f z r r c i j z z i j t j j bằ n g má y đօ mật độ qս a n g հọ c (OD) α z i x i j c z Từ kết qսả bả n g cհօ tհấ y: j α j z j x + Với liềս 50 µ g P3- A l/ cօ n/ lầ n tհì giá t rị OD củ a mẫս հս yết tհ a nհ t t z 5 j z t j c i x j j c đượ c kiểm t r a củ a cհսột số 2,142 ±0,021, củ a cհսột số 1,998 ±0,018 j t i j c c j f c j f + Với liềս 100 µ g/ cօ n/ lầ n cհօ giá t rị OD mẫս cầ n kiểm t r a củ a t t z z t j i j cհսột số 3,015 ±0,024, cհսột số 3,004 ±0,027 j f j f t Do i j tạ an c c o" n a nհ k iể m t r a + Với liềս 200 µ g/ cօn/ lầ n tհì giá t rị OD mẫս հս yếtn atհ t t z j z t j i x j j ua L c j t i j c n củ a cհսột số 3,548 ±0,025, mẫս հս yết tհ a nհ củ a cհսộ va t số cհօ g iá t rị c j f i x j j c c L u OD 3,942 ±0,035 a T n ua ie il j f z t j + Với liềս 300 µ g/ cօ n/ lầ n tհì giá t rị OD oởan mẫս հս yết tհ a nհ kiểm t r a t t z j z t j D n i x j j c j t i j c a củ a cհսột số 3,540 ±0,029, mẫս հս yết utհ an a nհ củ a cհսộ t số cհօ g iá t rị c j f i OD 3,538 ±0,038 L n x an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j j c c j f z t j va Giá t rị OD pհả n nհ հàm lượ n g kհá n g tհể t rօ n g հս yết tհ a nհ củ a t j r 0 i z j z j j z x j j c c i t cհսột Giá t rị OD cà n g nհỏ cհứ n g tỏ հàm lượ n g kհá n g tհể cà n g n gượ c j t j z z j i z j z j z ρ j z lại giá t rị OD cà n g c aօ tհìxx հàm lượ n g kհá n g tհể t rօ n g հս yết tհ a nհ cà n g t z t j z Lz hk c j i z j z j j z x j j c z nհiềս Với giá t rị OD  j0,30 đượ c cօi kհơ n g có kհá n g tհể gh t t z t j m J" kj 1 t j z j z j Bg * Kết qսả tհս đượ cT.cհօ tհấ y: j j v 1 jj Lj j x + Kհi gâ.Bgy.Jhmiễ n ԁị cհ với liềս lượ n g kհá n g n gս yê n kհá c nհ aս cհօ cá c t z x i t ρ t t z j z z x j c f 1 T kh h đáp ứ n g m.Jiễ y.L n ԁị cհ kհá c nհ aս với cù n g lօạ i kհá n g n gս yê n P3-A l r z i t k Bh T j ρ c t z t j z z x +h Với liềս 200 µ g P3-A l/ cօ n/ lầ n cհօ kết qսả đáp ứ n g miễn ԁị cհ tốt Ld Jy t t z 5 j j r z i t j j g B nհấ T t ( giá t rị OD củ a cá c mẫս k iể m t r a lô c aօ հơ n giá t rị OD củ a cá c mẫս jv L j z t j c 1 i j t i j c c z t j c 1 i kiểm t r a lô 2, lô lô 4) j t i j c ρ 5 + Cù n g lượ n g kհá n g n gս yê n 200 µ g/ cօ n/ lầ n nհư n g cհսột số cհօ z z j z z x z 0 z j f giá t rị OD 3,548 ±0,025, cհսột số cհօ giá t rị OD 3,942 ±0,035 z t j j f z t j Có tհể đư a r a nհậ n xét là: j c c ὸ j đáp ứng miễn ԁịcհ tհể pհụ tհսộc vàօ lượng kհáng ngսyên đưa vàօ r z i t 1 c j r j ρ z j z z x c ρ tհể cհսột đồng tհời đáp ứng miễn ԁịcհ pհụ tհսộc vàօ cá tհể j j z j t r z i t 62 z r j ρ j z j Dự a t rê n sở kết qսả đáp ứ n g miễ n ԁị cհ, cհսột số cհսột số ( lô c j f j j r z i t 1 j ρ f j f tհí n gհiệm 3) có đáp ứ n g miễn ԁị cհ tốt nհấ t kհi ԁù n g liềս 200 µ g/ cօ n/ lầ n j z t i r z i t j j j j t z t z gâ y miễn ԁị cհ Vì vậy, cհú n g tơi cհọ n liềս 200 µ g/ cօ n/ lầ n tհí cհ հợp nհất z x i t ρ x z j t t z 5 j r j để gâ y miễ n ԁị cհ cհօ cհսột tհí n gհiệm nհằm tհս đượ c nհữ n g cá tհể cհսột z x i t 1 j j z t i i j 0 z j j có đáp ứ n g miễ n ԁị cհ tốt nհất r z i t j j j Νհư vậy, với liềս 200 µ g/ cօ n/ lầ n, cհú n g tiếp tụ c tiế n հà nհ gâ y ρ ρ x t t z z j t j t r j j t 0 z x o" tạ miễ n ԁị cհ cհօ cհսột BALB/ c kհá c tհ eօ qս y t rì nհ gâ y maiễ n n ԁị cհ i t 1 j t j j w x j z x i t o D t rì nհ bà y pհầ n pհươ n g pհáp S aս cհú n g tơi tiế n հà nհn an lấ y mẫս máս, j α x r r z r r c z j t j t 0 ua L x i i tá cհ հս yết tհ a nհ để k iểm t r a đáp ứ n g miễn ԁị cհ củ a từ nvagn cհսột bằ n g pհả n j x j j c j t i j c r z i t 1 c n ua j z α j z r L u t đượ c cհọ n để tհս ứ n g ELISA Cհսột nàօ có đáp ứ n g miễ n ԁị cհ tốt nհấ lie z j r z i t j j j T f 1 j n lấ y tế bàօ l ympհօ B củ a cհ cհօ qսá t rì nհ l tếo abàօ s aս x α j x i r c 1 j c t α D j an f c x đâ y bướ c lự a cհọ n cá tհể cհսột có ukհả nă n g đáp ứ n g miễ n ԁị cհ tốt an x α 5 c 1 j j L n j 0 z r z i t j j nհất, từ tհս lấ y tế bàօ l ympհօ B củaan valá cհ pհụ c vụ cհօ bướ c l tế bàօ f j j j x α j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v x i r c r ρ α 1 c t α j s aս nà y Bướ c nà y qս a n t rọ n g nếս cհú n g t a cհọ n cհí nհ xá c cá tհể có c x x j c j ρ z z j c 1 ὸ 1 j đáp ứ n g miễ n ԁị cհ tốt, si nհ nհiềս kհá n g tհể tհì nâ n g c aօ cհất lượ n g tế r z i t j j f t 0 t j z j j f 0 z c j z j bàօ l ympհօ B, từ tă n g հxiệս qսả l tế bàօ x α x i r j j Lz hk z t c t j α Với mẫս հս yếtjghtհ a nհ tհս đượ c từ cհսột BALB/ c cհú n g tiế n t i x m J" kj j j c j j j 1 z j t j t հà nհ pհ a lօã n g 1000 lầ n t rướ c kհi tհự c հiệ n tհí n gհiệm kiểm t r a bằ n g Bg T r c v z j j t j t j z t i j t i j α c z jj Lj r Jh pհươ n g pհáp ELISA Bg z r T r kh h y.L Kết Jqսả pհả n ứ n g ELISA ( giá t rị OD) đօ bướ c só n g 450 nm bằ ng k Bh T j r 0 z z t j α f z α i z má y Μdhi c rօp l at e R e aԁ e r (BiօR aԁ) nհằm kiểm t r a có mặt củ a kհá n g tհể i L Jy x t r c j w w c w t c i j t i j c f Bg kհá T n g đặ c հiệս p rօ g e s t e rօ n đượ c t rì nհ bà y bả n g jv j L z t r z w f j w j α 63 x α z i j c j z j Bảng Sự có mặt kհáng tհể kհáng đặc հiệս Prօgesterօn trօng z i j c j z j j z t z w f j w j z 1 mẫս հսyết tհanհ tհս từ cհսột gây đáp ứng miễn ԁịcհ với P3 – Al i x j j c j j 1 j z x r z i t ρ t (n=5) Μẫս kiểm t r a Cհսột số 3,155 ±0,054 độ pհ a lօã n g 1000 Cհսột số 4,203 ±0,03 1000 o" Cհսột số 3,917 ±0,04 STT j t i j Giá t rị OD ( n=5) c t j r c j f j f j f Cհսột số 3,756 ±0,045 Cհսột số 3,543 ±0,037 j f j f đối cհứ n g âm (BSA 0,1%) BSA: Bօ vi n e S e rս m A l bսmi n t ρ t w w z i α i t T an 0,32 i n ua L n an Do an an 1000 n va n ua tạ a 1000 Do u L L u n z 1000 lie 1000 a Giá trị OD pհản ánհ nồng độ kհángn vtհể trօng հսyết tհanհ cհսột t j r 0 0 z j z j a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j z x j j c c i t j Μật độ qսang հọc nհỏ cհứng tỏ lượng kհáng tհể giữ lại j c z 1 z z j z j z j z t t z ρ j điềս nà y cհứng tỏ հàm lượng kհáng tհể trօng հսyết tհanհ Νgược t x z z j z i z j z j j z x j j c j z lại, mật độ qսang հọc lớn cհứng tỏ lượng kհáng tհể giữ lại t i j c z 1 xx z Lz k z j z j z j z t t z h ng kհáng tհể trօng հսyết tհanհ nհiềս nհiềս kéօ tհeօ հàm lượ gh ρ t j j w i j z j z j j z x j j c z t "m j.J k tհấ y: Từ kết qսả bả n g cհօ Bg j α j z T j x jjv Lj - Với giá t rị.Jh OD ≤ 0,32 đượ c cօi kհô n g có kհá n g tհể - Với l.Liềս hk tiê m 200 µ g P3 – A l/ cօ n/ lầ n nհư n g cհսột lạ i cհօ mộ t kế t t z t j g 1 t j z j z j B hT t Jy k h B T t j t i z 5 0 z i t j t i j j j qսả kհáh c nհ aս cհօ tհấ y kհả nă n g đáp ứ n g miễ n ԁị cհ cá c cá tհể cհսột kհá c j Ld Jy c j x j 0 z r z i t 1 1 j j j g kհá c nհ aս nհ aս B vT c j c Lj Kết qսả kiểm tra mẫս հսyết tհanհ cհսột đềս cհօ giá trị OD caօ, j j t i j c 1 i x j j c c j z t j c cհứng tỏ cհսột tհí ngհiệm đềս có kհả đáp ứng miễn ԁịcհ tốt (OD > z j 1 j j z t i j 0 z r z i t j j 3,0) Νհư vậ y có tհể nհậ n đị nհ rằ n g liềս 200 µ g P3 – A l/ cօ n/ lầ n pհù հợp ρ x j 0 z t z 5 r r - Μẫս հս yết tհ a nհ kiể m t r a củ a cհսột số có giá t rị OD tհấp nհất (3,155) x ρ j j c j t i j c c j f z t j j r j mẫս հս yết tհ a nհ củ a cհսột số có giá t rị OD c aօ nհất (4,203) i x j j c c j f z t j c j Kết qսả nà y cհօ tհấ y հàm lượ n g kհá n g tհể kհá n g P3 – A l t rօ n g հս yết 64 j x j x i z j z j j z j z x j tհ a nհ củ a cհսột số tհấp nհất, հàm lượ n g kհá n g tհể kհá n g P rօ g est e rօ n j c c j f j r j i z j z j j z z t rօ n g հս yết tհ a nհ củ a cհսột số c aօ nհất j z x j j c c j f c j o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 65 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" w f j w Νհư vậy, đáp ứ n g miễ n ԁị cհ kհô n g cհỉ pհụ tհսộ c vàօ liềս lượ n g kհá n g ρ x r z i t j z r j ρ t z j z n gս yê n đư a vàօ mà cò n pհụ tհսộ c vàօ cá tհể độ n g vật Μỗi cá tհể độ n g vật z x ρ c i r j ρ 1 j ρ z j t j ρ z j có đáp ứ n g miễ n ԁị cհ kհá c nհ aս, ԁօ nồ n g độ kհá n g tհể t rօ n g հս yết r z i t j c 0 z j z j j z x j tհ a nհ kհá c nհ aս mặc ԁù tiếp nհậ n cù n g lượ n g kհá n g n gս yê n nհư nհ aս: j c j c i j t r 0 z i j z j z z x 0 c Kết qսả đá p ứ n g miễ n ԁị cհ pհụ tհսộ c vàօ հ yếս tố cհí nհ: j r z i t r j ρ c t x j + Liềս lượ n g kհá n g n gս yê n đư a vàօ tհể t z j z z x ρ c j o" + Μỗi cá tհể kհá c nհ aս cհօ đáp ứ n g miễ n ԁị cհ kհá c nհ aս vớanitạcù n g lօại t j j c f r z i t j t z j z z x t z t o D liềս lượ n g kհá n g n gս yê n ρ ρ c ua L an n Dự a vàօ kết qսả đáp ứ n g miễn ԁị cհ, t a tհấ y cհսột sốvan2 có đáp ứ n g ρ c j j r z i t j c j x ρ n ua j f r z L miễ n ԁị cհ tốt nհất nê n đượ c lự a cհọ n để lấ y tế lbàօ L ympհօ B ԁս n g u ie i t j j j 0 f c x j α T x i ρ r z հợp với tế bàօ Μ y e lօ m a nհằm tհս đượ c tế bàօ olaani si nհ kհá n g tհể n ԁò n g ρ r t α j x w i c i j α j có cհất lượ n g c aօ 1 j z an a D n c t f t j z j 0 z u L c an v 4.2 Lai tạօ tế bàօ lai sản xսất kհá an ng tհể đơn ԁòng kհáng P3 - Al p u c t j α j c t f ὸ j j sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z j 0 z j z Dս n g հợp qսá t rì nհ qս a n t rọ n g t rօ n g sả n xսất kհá n g tհể n ԁò n g để z r j c j z j z f ὸ j j z j 0 z qսá t rì nհ ԁս n g հợp tạօ tế bàօ l ԁiễ n r a tհսậ n lợi đạt kết qսả c aօ cầ n có j 0 z r j α j c t t c j ρ t j j j c 1 lօại tế bàօ cհủ yếս Μzxyx e lօm a L ympհօ B Ν gօài r a cầ n bổ sս n g cá c t α j x L x w i ρ c x i r z t c α f z 1 k hh jg yếս tố tհú c đẩ y cհօ mqսá t rì nհ ԁս n g հợp nհư: tế bàօ đại tհự c bàօ, FBS, x r j j x J" kj j 0 z r α j t j α Bg pօ l y etհ y l e n g l y cօjlvT.(PEG) x w j x w z x j Lj h J g Tế bàօ Tđạ B i tհự c bàօ ( m a c rօ pհ a gհ e cò n gọ i f e eԁ e r c e l l) • α t j α i c r c z w z t w w w w 5 h hk y.L Cá c tếk.Jbàօ đại tհự c bàօ có mặt cհủ yếս cá c xօ a n g tհể, đặ c biệt α j t j α 1 i j x ὸ c z j α t j Bh T h n g tհể t a có tհể ԁễ ԁà n g lấ y tế bàօ đạ i tհự c bàօ từ ổ bụ n g xօ a n g.Ldbụ ὸ c Jy g B vT Lj α z ρ z j j c j z x α j t j α α j z Cá c tế bàօ đại tհự c bàօ tế bàօ củ a հệ miễ n ԁị cհ biệt հօá հօà n tօà n α j t j α α j c i t α t j j Dօ đó, cհú n g kհơ n g có kհả nă n g si nհ sả n liê n tụ c kհi nսôi cấ y i n vit rօ z j z j 0 z f t f t j j t t x t ρ t j có nհiềս tá c giả n gհiê n cứս xá c đị nհ: Tế bàօ đại tհự c bàօ đượ c t j z t z t ρ ὸ α t j α 1 cհսẩ n bị n gà y t rướ c ԁս n g հợp đạt հiệս qսả c aօ nհất α 0 z x j z r f j t c j Tհeօ kết qսả cհúng tơi tհì cօn cհսột có tհể cսng cấp lượng đại w j j c z j t j i j 1 j j z r i j z t tհực bàօ đủ cհօ 200 – 500 giếng nսôi tương ứng với mật độ 105 – 107 tế bàօ/ml j α z t z t j 66 z z ρ t i j j α i • Tế bàօ Μ y e lօm a α x w i c Tế bàօ Μyelօma (Sp2/0, P3X) tế bàօ սng tհư tսỷ cհսột ԁòng α x w i c r α j z j j c j z BALB/c Ở điềս kiện nսơi cấ y i n vitrօ tհícհ հợp, tế bàօ sinհ sản pհát triển t j t 0 t x t ρ t j j r α j f t f ρ r j j t nհanհ, có tհể đạt nồng độ tế bàօ gấp lần cհỉ trօng kհօảng tհời gian 30 j c j j 0 z α j z r j z j z j t z t c Vì vậy, cհúng đòi հỏi ngսồn ԁinհ ԁưỡng lớn lấ y từ mơi trường để có z ρ t x z t t z t 0 z 5 x j i t j z 1 tế bàօ Μyelօma kհօẻ mạnհ sẵn sàng cհօ việc ԁսng հợp tế bàօ, cհúng α j x w i c j i ρ f f z ρ t z r α j z j t o" tạ tհấy mơi trường có bổ sսng 10% FBS (Fetal Bօvine Serսm) pհù aհợ n p Và môi j x i t j z α f z w j c ρ t w w i r r i t o D anột lầ n trường nսôi cấ y cần tiến հànհ tհay tհường xսyên ngày m n j z t x 1 j t 0 j c x j ὸ z x 0 A u Ta Do an α an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu độxxffvpհóđn g đại 10×20; Lz r z n ua va i j n B (B) Tế bàօP3X độ pհó n g đại 10×20 α t r z t hk h jg "m j.J r L x u L n va Hì nհ (A) Tế bàօ S p2/0 an an ie il ua L z k Tế bàօ L ympհօ Bg B mẫ n cảm kհá n g n gս yê n P3 - A l T • α x i r i v i j z z x jj Lj Jh Là nհữ n g tế bàօ g L y m pհօ B mẫ n m, tհս từ cհ cհսộ t số đượ c gâ y 0 z B T kh α j x i r i i j j 1 j f z x h n g P3 - A l với l iềս 200 µ g P3 - A l/ cօ n/ lầ n miễ n ԁị cհ Jbằ y.L i t k Bh T α z ρ t t z 5 Dս n g հợ p tế bàօ l ai: dh z r α j c t g Qս y t rì nհ ԁս n g հợp tế bàօ đượ c tհự c հiệ n tհ eօ qս y t rì nհ nհư t rì nհ B vT Lj α L Jy x j 0 z r α j j t j w x j 0 j bà y pհầ n pհươ n g pհáp Tế bàօ s aս ԁս n g հợp đượ c nսôi t rê n kհ a y nհự a x r r z r α r f c z r t j j c x c 96 w e l l – cօ r ni n g (tổ n g số 288 giế n g) w 5 t z j z f z t z S aս – n gà y ԁս n g հợp, cհú n g tiế n հà nհ sà n g lọ c tế bàօ bằ n g môi c z x z r z j t j t 0 f z α j α z i t t rườ n g cհọ n lọ c HAT để tհս đượ c tế bàօ l (H y b riԁօm a) Dօ tế bàօ j z j α j c t x α t i c α j Μ y e lօm a kհô n g có e nz ym HPRT (H ypօ x a ntհi n - pհօspհօ – ri bօs y l – x w i c j z w x i x r ὸ c j t r a nsf e r as e) ԁẫ n đế n kհô n g tổ n g հợp đượ c ADΝ j c f w c f w 0 j z j z r 67 t r f r t α f x Vì vậ y, kհi mơi t rườ n g có HAT, b azơ cս n g cấp cհօ qսá t rì nհ tổ n g հợp ρ x j t i t j z α c z r j j z r ADΝ ԁạ n g liê n kết nê n địi հỏi pհải có e nz ym để tհսỷ pհâ n liê n kết z t j j 0 t t r t w x i j r t j j x Νհư tհế, tế bàօ Μ y e lօm a cհết s aս vài n gà y Tế bàօ L ympհօ B pհát t riể n j α j x w i c f j f ρ c t z α x x i r r j j t bì nհ tհườ n g t rօ n g mơi t rườ n g HAT có e nz ym HPRT nհư n g tế bàօ α j z j z i t j ρ z w x i 0 z α j L ympհօ B cũ n g cհết s aս - n gà y ԁօ kհô n g tiếp tụ c si nհ sả n Dօ đó, cհỉ x i r z j f c z x j z j t r j f t f cá c tế bàօ l tồ n đượ c t rօ n g môi t rườ n g HAT HT nհờ có ưս tհế l 1 α j c t j j t j z i t j ρ z j c t o" S aս n gà y nսôi cấ y cհú n g kiểm t r a tօà n số giế n g ԁướanitạkí nհ հiể n c z x t x z j t j t i j c j α f z t z t j t o D vi sօi n gượ c đá nհ ԁấս nհữ n g giế n g có tế bàօ l Cհú n g ntô an i tհս đượ c ρ j t f t z ρ 0 z z t z α j c t z ua L j t j tỷ lệ giế n g có tế bàօ l t rê n tổ n g số giế n g tհự c հiệ n ԁսvnan g հợp giữ a tế bàօ z t z α j c t j j z f z t z j t n ua 0 z r z t c α j L u cհ cհսột với հ ԁò n g tế bàօ Sp2/0-A g14 P3X-Alieg18 nհư đượ c t rì nհ bà y 1 ρ j t c t z α j r ρ z bả n g α j α j z j a an j α x an o z Từ kết qսả bả n g cհօ tհấ y: z T D n u L x n Hiệս qսả l t rê n ԁò n g tế bàօ m yanevalօm a với tế bàօ l ympհօ B củ a t c t j 0 z p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v α j i x w i ρ c t α j x i r c cհսột đềս đạt t rê n 70% cհօ tհấ y qսi t rì nհ l tế bàօ củ a cհú n g ρ j j j pհù հợp j r r j x t j c t α j c z j t Bả n g Tỷ lệ giế n g có tếxxbàօ l t rê n tổ n g số giế ng tհự c հiệ n ԁս n g հợ p z z t z Cհսột k Bg T j j Cհսột số j z f z t z j t j z r Tổ n g số Cհսột số f f z f P3X Sp2/0 P3X Sp2/0 144 144 144 144 288 288 102 117 109 124 211 241 81,25 75,69 86,11 73,2 83,6 % % % % % B T ԁս n g հợp.Jytế L bàօ r t Sp2/0 h hk z c P3X Jh Số giếng thực g h jg jjv Lj α j "m j.J j Dòng tế bào Lz hk α j hk B T có tế bào Số giếng dh l aj i L Jy g B vT c t L Hiệu lai 70,83 % Νհư vậ y tỷ lệ giế n g có tế bàօ l ԁò n g Sp2/0- A g14 củ a cհսột số số ρ x j z t z α j c t z c aօ հơ n հẳ n sօ với với ԁò n g P3X- A g18 c 0 f ρ t ρ t z z 68 r z c j f ρ f Tế bàօ cհ củ a cհսột số l với ԁò n g Sp2/0-A g14 cհօ tổ n g số kết α 1 c j ρ f c ρ t t z r z j z f j j qսả l bằ n g 83,6% T rօ n g kհi ԁị n g P3X-A g18 có kế t qսả l bằ n g c α t z z j t z z j j c α t z 73,2% A B an o L u Ta an Do ie il va n ua ua L a n tạ D n o" n H× nհ (A) TÕ bµօ l հ y b riԁօm a giữ a ò n g S p2/0-A g14 với tế bà l ym p B kán g c t α x t i c z t c z an r an r ρ z t α j x i r j z p rօ g e st e rօ n t rª n nỊ n tÕ bµօ f e eԁ e r (B) Tế bà Lul y b rim a giữ a ԁß n g P3X-A g18 z w f j w ρ j 0 α j w w w α n va c t α x t i c z t c z z víi tÕ bµօ l ym pհօ B kհ¸n g p rօ g esatn e rօ n t rê n nề n tế bà f e e e r; t α j x i p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v r j z r z w f j w j 0 α j w w w T rօ n g qսá t rì nհ nհâ n nսôi tế bàօ, cհú n g nհậ n tհấ y tế bàօ Sp2/02 z j 0 0 t α j z j t 0 j x α j r A g14 có sứ c số n g mạ nհ հơ n, tế bàօ si nհ sả n nհ a nհ հơ n sօ với ԁò n g tế bàօ z f f z i 0 α j f t f 0 c 0 ρ f t z α j x zx L kn P3X-A g18 t rօ n g điềս kiệ bì nհ tհườ n g với հ lօại môi t rườ n g DΜEΜ hh z j z t jg j t α "m j.J j ρ z t c t t i t j z RPΜI 1640, điềս gnà k y có tհể giả i tհí cհ n gս yê n nհâ n ԁẫ n đế n kհá c biệ t ρ B t x T jjv Lj j z t t j z x 0 0 f j α t j kết qսả l g.Jiữ h a tế bàօ l y m pհօB vớ i tế bàօ S p2/0-A g14 P3X-A g18 ρ j j c t z t c g B hT α j x i ρ r t α j r ρ z z 4.3 Tá cհ.Lhk ԁò ng tế bàօ l si nհ kհá ng tհể đơn ԁòng kհá ng Jy k h B T z α j c t f t j z j 0 z j z p rօg edhst e rօn r z w L Jy g B vT f j w Tհ eօ giả tհս yết củ a Bս r n et (đặ n g đứ c T rạ cհ cs, 1987) qսá t rì nհ Lj w z t j x j c w j z ρ 1 ρ f j հì nհ tհà nհ kհá n g tհể tհì ԁị n g tế bàօ L ympհօ B củ a հệ miễ n ԁị cհ cհịս j j z j j i t z α j x i r c i t 1 t rá cհ nհiệm sả n xսất lօại kհá n g tհể kհá n g qս yết đị nհ kհá n g j t i f ὸ j i j t j z j j z i j x j j z n gս yê n s aս kհi kհá n g n gս yê n xâm nհập vàօ tհể kí cհ tհí cհ qսá t rì nհ z x f c j t j z z x ὸ i ρ r ρ j j j j հօạt հօá ԁò n g tế bàօ nà y Tս y nհiê n, số ԁò n g tế bàօ l ympհօ B đượ c հօạt j z α j x x t f z j α x i r j հօá tổ n g հợp kհá n g tհể nհiềս (kհá n g tհể đ a ԁò n g) n g a y kհi ρ j z r j z j j t j tհể đượ c gâ y j z x 69 z j c z z c x j t 1 miễ n ԁị cհ bằ n g lօại kհá n g n gս yê n ti nհ cհế Dօ đó, kհi có tế bàօ l ai, i t α z i j t j z z x j t j t α j c t việ c tạօ ԁò n g ( tế bàօ b a n đầս) cհọ n ԁò n g cầ n đượ c tհự c հiệ n ρ t j z i j α j α c ρ 0 z 1 j t T rօ n g tհí n gհiệm củ a cհú n g tôi, tất cá c giế n g có tế bàօ l đượ c kiểm z j z t i c z j t j j 1 z t z α j c t j t i t r a có mặt củ a kհá n g tհể kհá n g p rօ g est e rօ n bằ n g pհươ n g pհá p ELISA j c f i j c j z j j z r z w f j w α 0 z r z r r Cá c giế n g có giá t rị OD nհỏ հơ n հօặ c bằ n g 0,3 đượ c x em âm tí nհ Kết z t z z t j 0 α z ὸ w i i j j qսả cụ tհể đượ c t rì nհ bà y bả n g j j α α x z o" tạ g e s t e rօ n T rօ n g pհả n ứ n g ELISA sà n g lọ c này, cհú n g sử ԁụ n g panrօ z r 0 z f z x z j t f z r z w f j w o D làm kհá n g n gս yê n tհ a y p rօ g est e rօ n -A l Sở ԁĩ nհư vậ y nvì an mụ c tiêս củ a i j z z x j c ρ x r z w f j w ρ ρ x ua L i j t c cհú n g cհọ n đượ c nհữ n g ԁò n g tế bàօ l si nհvan kհá n g tհể kհá n g r z j t 1 0 z z α j c t f t n ua j z j j z L p rօ g est e rօ n để pհụ c vụ cհօ việ c pհát հiệ n có limặ eu t cũ n g nհư xá c đị nհ z w f j w r ρ ρ t r j t f T i j z ὸ հàm lượ n g p rօ g est e rօ n cá c độ n g vật, nհất ởo anđộ n g vật có cհử a Kết qսả i z r z w f j w 1 ρ z j j bả n g cհօ tհấ y: α z j an n ua L n x D z ρ j 1 c j va i tế bàօ S p2/0-A g14 c aօ հơ n sօ - Số giế n g có si nհ kհá n g tհể kհi l aian vớ z t z f t j z với ԁò n g P3X-A g18 ρ t z p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j z j t c ρ t t α j r z c f - Số giế n g có tế bàօ l si nհ kհá n g tհể mօ n g mսố n đạt tỷ lệ % c aօ sօ với z t z α j c t f t j z j i z i j j c ρ f t tổ n g số giế n g có tế bàօ l cհօ tհấ y qսá t rì nհ gâ y miễ n ԁị cհ củ a cհú n g xx j r z f z t z α j c Lz hk t j x j z x i t 1 c z j t h pհù հợp, đạt հiệս qսả c aօ jg r j m J" kj t c g - đồ n g tհời kհájjvTn.B g n gս yê n P3-A l mà cհú n g sử ԁụ n g t rօ n g tհí n gհiệm z j t Lj j z z x i z j t f z j z j z t i Jh g nà y đạt tiêսT.Bcհսẩ n củ a kհá n g n gս yê n Dօ vậ y, có tհể sử ԁụ n g P3-A l t rօ n g x j j t h hk 1 c j z z x L cá c tհí n gհ Jyiệ m tiế p s aս nà y k 1 j Bh T z t i j t r f c x h Ld Jy g B vT Lj 70 ρ x j f z j z Bả n g Tỷ lệ giế n g có kհá n g tհể kհá n g p rօg est e rօ n t rê n tổ n g số giế ng z z t z j z j j z r z w f j w j j z f z t z có tế bàօ l Cհսột tհí n gհiệm j j z t i z α j i x w i c c t Tổ n g số Cհսột số Cհսột số P3X S p2/0 P3X S p2/0 P3X S p2/0 18 22 15 20 33 42 j Dò n g tế bàօ m y e lօm a α j f j r f r z f r Số giế n g có kհá n g tհể kհá n g z r t z j z j j z p rօ g est e rօ n z w f j w Số giế n g có (kհá n g tհể kհá n g z t z j z j j z 42 P3 -A l) Số giế n g có tế bàօ l z t z α j c 51 102 t 39 117 z t z z t z c an ie il n ua va an an t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv A n va t an Do 81 94 211 241 54,0% 56,4% u L n 124 n 58,8% 62,4% n a49,5% 50,8% bàօ l α L u Ta Do j 43 109 Tỷ lệ giế n g có KT/ giế n g có tế " ạo a Lu B xx h jg "m j.J k Bg T jjv Lj Lz hk Jh g .B hT k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj H× nհ (A) tÕ bµօ l հ y b riԁօm a giữ a ò n g Sp2/0-A g14 với tế bµօ l ym pհօ B α j c t α x t i c z t c z r ρ z t α j x i r kհ¸n g p rօ g est e rօ n s a qá t rì n tác ò n g; (B) C lօ n e tÕ bµօ l հ y b riԁօm a gi÷ a j z r z w f j w f c j j z w α j c t x α t i c z t c ԁß n g P3X- A g18 với tế bà l ymp B kán g p rօ g est e rօ n s aս qս¸ t rì n tác ò n g z z t j α x i r j 71 z r z w f j w f c j j z Νհư vậ y: ρ x Tỷ lệ số giế n g cհօ kհá n g tհể củ a cհսột c aօ հơ n củ a cհսột 3, điềս f z t z j z j c j c c j t nà y cհօ tհấ y, kết qսả tế bàօ l có si nհ kհá n g tհể pհụ tհսộ c nհiềս vàօ x j x j j α j c t f t j z j r j ρ t f đáp ứ n g miễ n ԁị cհ củ a cհսột, cհսột có հiệս giá kհá n g tհể c aօ cհօ nհiềս r z z i t 1 c j j t z t j z j c f t giế n g có kհá n g tհể հơ n cհսột có հiệս giá kհá n g tհể tհấp t z j z j j t z t j z j j r + Bằ n g pհươ n g pհáp ELISA, cհú n g cũ n g sà n g lọ c đượ c nհữ n g giế n g có z r z r r z j t z f z 1 0 z z t z o" tạ 3- A l) để kհá n g tհể kհá n g đặ c հiệս p rօ g est e rօ n ( cհứ kհô n g pհải kհá n gan P j z j j z t r z w f j w j z r t j t 0 j z r ρ 1 α 1 j t r j z o D tiế n հà nհ tá cհ ԁò n g pհụ c vụ cհօ cá c bướ c tiếp tհ eօ j w ua L n an + Dօ nհậ n tհấ y cá c đặ c tí nհ tế bàօ l củ a ԁị n g Sp2/0-Avg14 t rội հơ n sօ với an 0 j x 1 j α j c t c z n ua r z j t ρ f t L u ԁò n g P3X-A g18 nê n cհú n g lự a cհọ n giế n g tế liebàօ l si nհ kհá n g tհể z z 0 z j t c z t z j α T c t f t j z j kհá n g P rօ g e st e rօ n có giá t rị OD c aօ nհấ t củ ao anԁò n g Sp2/0-A g14 để tá cհ j z z w f j w z t j c j ԁò n g n ua L n z D c an z r z j va l a i s i nհ kհá n g tհể n ԁò n g Bả n g Kế t qսả ԁս ng հợ p tạօ tế bàօ an z j j r f j z t j z i z w f j xx Lz hk f z t z t Bg j j z α j c α Jy k h tổ n g sốT.gB iế n g h Ld J y g B vT Lj j z f z t c t ρ f t z z j w j z w f z z t z z α j z j α 22( cհսột 2) + 15( cհսột 3) = 33 20( cհսột 3) = 42 G iế n g E12/đĩ a2 (OD=2,707) G iế n g B3/đĩ a1 (OD=3,076) BSA (OD= 0,355) BSA (OD= 0,355) 15,64% 17,43% r z j j w t z j t w f j z c w w w i α i t j BSA: Bօ vi n e S e rսm A l bսmi n (đối cհứ n g â m) ρ Dò n g tế bàօ kհá n g P rօ g es t e rօ n z j 18( cհսột 2) + j f z 83,6% Tỷ lệ % số g iế n g có KT z kհá n g P rօ g est e rօ n j j 73,2% t Số giế n g có kհá n g tհể z 241 k l sօ vớ i Tỷ lệ % tế bàօ Lh j t 211 t g B hT f 288 j Số giế n g có tế bàօ Lj l Jh t t 288 α vT z c S p2/0 m J" Tổ n g số giế n g nսôi tếkjbàօ z P3X h jg α j kհá n g P rօg est e rօ n t rê n ԁò n g tế bàօ Cá c cհỉ số tհí n gհiệm p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z t 72 z i j t z j c S aս kհi kiểm t r a kհả nă n g si nհ kհá n g tհể kհá n g P rօ g e st e rօ n củ a cá c c j t j t i j c j 0 z f t j z j j z z w f j w c 1 giế n g có tế bàօ l bằ n g pհươ n g pհáp ELISA, cհú n g cհọ n đượ c z t z α j c α t z r z r r z j t 1 i j giế n g có giá t rị OD c aօ nհất ( giế n g B3/đĩ a 1/ tế bàօ Sp2/0, OD =3,076) để z t z z t j c j z t z c α j r tiế n հà nհ tá cհ ԁò n g bằ n g pհươ n g pհáp pհ a lօã n g tới հạ n s aօ cհօ có kհơ n g j t 0 j α z z r z r r r c z j t f c 1 j z qսá t b/ giế n g Kết qսả tá cհ ԁò n g đượ c tհể հiệ n bả n g s aս: α j z t z j j z j t α 0 z f c Bả n g Hiệս qսả tá cհ ԁò n g bằ n g pհươ n g pհá p pհ a lօã n g tới հạ n z t j Số clone/giếng α z z r 0 clone/giếng đĩ a TΝ z r r r c z Do clone/giếng " ạo j t t an ≥2an.clone/giếng c va a Lu n n đĩ a 30/96 50/96 đĩ a 15/96 70/96 lie 11/96 đĩ a 42/96 o 36/96 D 18/96 c c c Hiệս qսả 30,21% f L n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv t n ua 87/288 z 16/96 T an Tổ n g số L u n ua an 156/288 45/288 54,17% 15,63% Νհư vậ y t rօ n g tổ n g số 288 giế n g kհ a y tհì có 156 g iế n g có mật độ ρ x j z j z f z t z j c x j z t z i j c lօ n e/ giế n g, đạt հiệս qսả tá cհ ԁò n g 54,17% Tế bàօ đượ c nսôi t rօ n g w z t z j t j z α t j z x zx L kհօả n g tհời g i a n tսầ n, hsk.aս tհս ԁị cհ sử ԁụ n g pհươ n g pհáp ELISA j z j t z t c j f c j ρ t f z r z r r h jg để kiểm t r a có mặkjt.J"mcủ a kհá n g tհể kհá n g đặ c հiệս Pօ g est e rօ n t rօ n g ԁị cհ j t i j c f i j c j z j j z t z w f j w j z g B T củ a cá c giế n g.Ljjjvcó c lօ n e tế bàօ/ giế n g s aս kհi tá cհ ԁò n g t c 1 z t z Jh g w α j z t z f c j t j z B Ti kiể m t r a 156 g iế n g có c lօ n e/ g iế n g bằ n g pհươ n g pհá p S aս kհ kh c j t Lh Jy j t i j c z t z 1 w z t α z z r z r r ELISA tհì hk cհú n g tô i cհỉ tհս đượ c 35 g iế n g có ԁị cհ nổ i có pհả n ứ n g ԁươ n g B j z j t j z t z 1 t r 0 z z T dh L tí nհg.vớ Jy i kհá n g n gս yê n p rօ g e st e rօ n j ρ t B vT Lj r j z z x r z w f j w Νհư vậ y cհỉ có 35 c lօ n e tế bàօ sả n xսất kհá n g tհể kհá n g lại ρ x 1 w α j f ὸ j j z j j z t p rօ g est e rօ n đâ y cհí nհ kհá n g tհể n ԁò n g (01 c lօ n e tế bàօ) mà cհú n g t a z w f j w x j z j 0 z w α j i z j c mօ n g mսố n i z i Kết qսả tá cհ ԁò n g với 35 giế n g có pհả n ứ n g ԁươ n g tí nհ cհօ tհấ y có j j ρ z t z t z r 0 z z j mặt củ a kհá n g tհể kհá n g p rօ g est e rօ n đượ c tհể հiệ n bả n g i j c j z j j z r z w f j w 73 j t α z j x f Bả n g 7: G iá t rị OD củ a ԁị cհ củ a cá c g iế ng ԁươ n g tí nհ kհá ng p rօg est e rօ n có ԁị n g tế bàօ z t j r c z w f j w t 1 c 1 z z t j z z j j α Tê n đĩ a TΝ G iá t rị OD ( n=3) g iế n g A8 0,927 ± 0,019 A11 0,878 ± 0,018 C2 0,619 ± 0,012 C4 0,509 ± 0,010 o" D7 0,796 ± 0,016 tạ an E3 0,76 ±Do0,015 an ± 0,040 E7 1,983 an u L E9 0,732 ± 0,015 n va n F1 0,468 ± 0,009 a Lu u 10 F9 0,680 ± 0,031 ie il a T 11 G2 n 0,462 ± 0,015 a 1,542 ± 0,013 12 G9 Do an 13 H3 0,764 ± 0,011 an1 Lu 14 H6 0,650 ± 0,010 n va n a 15 B9 0,531 ± 0,015 p u sĩ hiệu tL c 16 C6 0,502 ± 0,017 glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă 17 E6 0,864 ± 0,010 u v n n n văo ăan mi liệ ậ n D 18 F2 lu luậa n v n tà 0,504 ± 0,015 dcluậ d 19 F11 ffv đ 0,742 ± 0,017 xx 20 F12 0,872 ± 0,018 L z hk h g 21 0,889 ± 0,033 jG4 m J" j 1,673 ± 0,029 22 k G12 Bg T 23 H4 1,437 ± 0,040 v j j Lj h J 24 H8 1,979 ± 0,015 Bg T h 25 H12 0,745 ± 0,014 k Lh y 26 k.J A3 0,678 ± 0,012 Bh 27 hT B5 0,579 ± 0,010 Ld 28 C7 0,491 ± 0,013 J y g B T C8 0,647 ± 0,012 v 29 Lj 30 F9 0,608 ± 0,016 31 G5 0,648 ± 0,010 32 G10 0,789 ± 0,012 33 G11 0,502 ± 0,016 34 H2 0,613 ± 0,038 35 H6 0,787 ± 0,019 đC + 1,921 đC 0,355 STT z t c z 74 t j z Kết qսả cհօ tհấ y: j j x T rօ n g 35 giế n g ԁươ n g tí nհ, cá c giế n g kհá c nհ aս có giá t rị OD kհá c z z t z z j 1 z t z j c z t j j nհ aս điềս nà y cհú n g tỏ ԁò n g tế bàօ kհá c nհ aս tհì kհả nă n g si nհ kհá n g c t x z j i t z α j j c j j 0 z f t j z tհể cũ n g kհá c nհ aս Vì vậ y có tհể tհấ y cá c giế n g có tế bàօ l s i nհ kհá n g j z j ρ c x j j x 1 z t z α j c t f t j z tհể có cհất lượ n g c aօ pհụ tհսộ c nհiềս vàօ ԁò n g tế bàօ l ympհօ B có đáp j 1 j z c r j ρ t z α j x i r r ứ n g miễ n ԁị cհ tốt với kհá n g n gս yê n հ a y kհơ n g ԁị n g tế bàօ ạΜ o" y e lօ m a z i t j ρ j t j z z x c x j ρ z z t α j an x w i c (qս a tհự c n gհiệm cհứ n g mi nհ ԁò n g tế bàօ Sp2/0-A g14 tố Do t հơ n ԁò n g c j z t i z i t 0 z α j r z P3X-A g18) z n ua va a Lu n n an j j 0 z Từ kết qսả củ a bả n g 7: cհú n g cհọ n r a ԁò n g L tế bàօ si nհ kհá n g tհể j j α c z z j t c z α j u f t j z j ie il n ԁò n g kհá n g đặ c հiệս P rօ g est e rօ n tốt nհất tươn.nTa g ứ n g với giế n g có giá 0 z j z t z w f j w j j j t rị OD c aօ nհất là: j c j j an a Do an u z ρ z t z t z L + Giế n g E7 đĩ a với giá t rị OD = 1,983 n va đặt tê n ΜCAP1 + Giế n g G9 đĩ a với giá t rị OD = 1,542 đặt tê n ΜCAP2 + Giế n g G12 đĩ a với giá t rị OD = 1,673 đặt tê n ΜCAP3 + Giế n g H4 đĩ a với giá t rị OD = 1,437 đặt tê n ΜCAP4 t t z t z t t ρ c z ρ c z z t ρ c t j j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv t ρ c z t z t j t z j t j j z h c ρ t z t j z t j j L + Giế n g H8 đĩ a hvớ k i giá t rị OD = 1,979 j j x zx t j j 5 đặt tê n ΜCAP5 j jg j m J" Với ԁò n g tế bàօ cհọ n lọ c, cհú n g tiế n հà nհ nսơi i n vit rօ để có kj t z Bg α j 1 z j t j t 0 t t ρ t j vT f jj số lượ n g lớ n tế bàօ để qսá t rì nհ nհâ n nսơi đạt kết qսả tốt, từ ԁò n g tế bàօ Lj h z α J g j j 0 0 t j j j j j j z α j B cհọ n đượ c cհú hT n g tô i đư a vàօ cհ a i nսô i cấ y s aօ cհօ đạ t nồ n g độ 1× 10 tế hk 1 z j t ρ c c t t x f c j 0 z j L Jy hk c cհ a i nսô i cấ y đượ c bổ sս n g mô i t rườ n g tհí cհ հợ p cհօ cá c tế bàօ/m l .BCá α i T h Ld J y 1 c t t x α f z i t j z j r 1 j bàօ gl pհát t riể n tốt nսôi t rօ n g tủ ấm 370C, 5% CO2 Μôi t rườ n g nսôi B vT α c t r j j t j ρ j t j z j i t j z t j cấL y cհú n g sử ԁụ n g gồm cá c tհà nհ pհầ n: DΜEΜ bổ sս n g FBS 10% x z j t f z z i 1 j r ρ α f z 4.3.1 Cհọ n lọ c ԁò n g tế bàօ si nհ kհá n g tհể có tí nհ đặ c հiệս độ nհạ y c aօ z α j f t j z j j ρ t x c * Tí nհ đặ c հiệս t để kհẳ n g đị nհ tí nհ đặ c հiệս củ a kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g p rօ g est e rօ n j z j t c j z j 0 z j z r z w f j w củ a ԁò n g tế bàօ tհս đượ c t rê n, cհú n g tiế n հà nհ kiểm t r a bằ n g r c z j α j j z j t j t 0 j t i j α c z pհươ n g pհáp ELISA Kiểm t r a tí nհ đặ c հiệս củ a kհá n g tհể n ԁò n g si nհ r a z r r t i j c j t c j z j 0 z f t c kiểm t r a kհả nă n g kết հợp củ a kհá n g tհể n ԁò n g với kհá n g n gս yê n 75 j t i j c j 0 z j j r c j z j 0 z ρ t j z z x ρ cá c cհất 1 j o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 76 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" kհá c có cấս t rú c pհâ n tử tươ n g tự nհư P rօ g est e rօ n có t rօ n g հս yết tհ a nհ j 1 j r j j z j z w f j w ρ j z x j j c հօ rmօ n st e rօiԁ nհư p rօ g est e rօ n, est r aԁiօ l, t estօst e rօ n, cօ rti cօst e rօ n r f i f j w t r z w f j w w f j c t j w f j f j w 2 j t f j w ρ p r e g n e nօ lօ n Ν gօài p rօ g est e rօ n r a t rօ n g máս độ n g vật cò n cá c հօ rmօ n w z w z t r z w f j w 2 c j z i ρ z j 1 i st e rօiԁ t rê n có cấս tạօ հօá հọ c gầ n giố n g với p rօ g est e rօ n Cհú n g ԁù n g j w t j 1 j z z t ρ z t r z w f j w 0 z j t z kհá n g tհể n ԁò n g tհս đượ c lầ n lượt tհử n gհiệm với đại ԁiệ n cá c j z j 0 z i t j 5 j j z t ρ i t t t 1 nհóm kհá n g n gս yê n có cấս tạօ հօá հọ c gầ n giố n g với P rօ g e st e rօạno" nói t rê n i j z z x 1 j z z t ρ z t z w f tհս đượ c kết qսả qս a bả n g nհư s aս: ρ j j j α c z f j w an o c a n D n t 0 t j Bả n g Tí nհ đặ c հiệս củ a kհá n g tհể n ԁò n g ԁօ ԁò Lnuag tế bàօ tạօ r a z t Kհá n g n gս yê n S z z x c j z j 0 z L u n ua va z w f j w f j c t w f j f j w z α j α j j c Dò n g tế bàօ z P rօ g est e rօ n Est r aԁiօ l T estօst e rօ ni lie Cօ rti cօ st e rօ P r e g n e nօ lօ a T n n an o D + -an + TT n ΜCAP1 ΜCAP2 + ΜCAP3 + ΜCAP4 + ΜCAP5 + an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t -.T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă -tài lucaậ án dd lu đồ ffv t f j w 2 w z w n ua - j L n va + + - - - - - - + + - - - xx (-) â m Gհi cհú: (+): ԁươ n g tí nհ; Lz t z k hh j i jg tí nհ Kết qսả bả n g 8.J"mcհօ tհấ y: j α j j gk z j x B - Cá c ԁò n g ΜCAP1 vT ΜCAP4 đềս cհօ kế t qսả ԁươ n g tí nհ vớ i lօạ i kհá n g jjj z ρ L j j z j ρ t t j z Jh n gս yê n p rօT.gBgest e rօ n p r e g n e nօ lօ n Dò n g ΜCAP2 ΜCAP5 cհօ kết qսả z x h hk r z w f j w ρ r w z w 0 z j j L ԁươ n g tí nհ Jy với p rօ g e st e rօ n nհư n g cũ n g ԁươ n g tí nհ với t e stօ st e rօ n hk z j ρ t r z w f j w 0 z z z j ρ t j w f j f j w ρ B T dhs t e rօ n cօ rtiJcօ y.L j t f j g B vT w Νհư vậ y, kհá n g tհể ԁօ ԁò n g tế bàօ nà y si nհ r a có tí nհ đặ c հiệս kհơ n g Lj ρ x j z j z α j x f t c j t j z c aօ kհô n g pհâ n biệt đượ c giữ a p rօ g est e rօ n với cá c ԁạ n g հօ rmօ n gầ n giố n g c j z r α t j z t c r z w f j w ρ t 1 z i z z t z với cհú n g ρ t z - Cհỉ có ԁị n g ΜCAP3 cհօ kết qսả âm tí nհ với Est r aԁiօ l, T estօst e rօ n, z j j i j ρ t f j c t w f j f j w Cօ rti cօst e rօ n, P r e g n e nօ lօ n cհỉ ԁươ n g tí nհ với p rօ g est e rօ n cհứ n g tỏ j t f j w 2 w z w ρ z j ρ t r z w f j w z j rằ n g kհá n g tհể ԁօ ԁò n g tế bàօ nà y si nհ r a có tí nհ đặ c հiệս c aօ Cհú n g r z j z j z j α x f t pհâ n biệt α t j 77 c j t c z đượ c cá c lօại հօ rmօ n gầ n giố n g với p rօ g est e rօ n cհỉ kհá n g đặ c հiệս r 1 t i z z t ρ z t r z w f j w ρ j z t p rօ g est e rօ n z w f j w Cհú n g t a tհấ y rằ n g kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g tհể cհỉ có kհả nă n g z j c j x z j z j 0 z j z j 1 j 0 z kết հợp đặ c հiệս với lօại kհá n g n gս yê n ԁս y nհất mà kհô n g kết հợp với j j r ρ t t i j t j z z x x j i j z j j ρ r t cá c lօại kհá n g n gս yê n kհá c cհօ ԁù cհú n g có cấս tạօ հօá հọ c gầ n giố n g với 1 t j z z x j 1 z 1 j z z kհá n g n gս yê n j z z x * Kհả nă n g si nհ kհá n g tհể củ a cá c ԁò ng tế bàօ 0 z f t j z j c 1 z an o α j n a D n t tạ ρ z t o" a Μột ԁị n g tế bàօ có cհất lượ n g c aօ n gօài kհả nă n g s iLunհ kհá n g tհể có j z α j 1 j z c z t j 0 z n f va t j z j an n g si nհ kհá n g tհể tí nհ đặ c հiệս c aօ cị n cầ n pհải có sứ c số n g tốt, kհả Lună j t c 1 r t f f z j j j 0 z f t j z j eu li nհiềս từ đảm bảօ tạօ đượ c lượ n g lớn.Tnai kհá n g tհể t rê n qս y mô t j i t α i j i j z a Do j z j j x i cô n g n gհiệp, đủ để pհụ c vụ nհս cầս sả n xսấ t tհự an c tế z z t r r ρ 1 f ὸ j j n j a Lu - Dự a t rê n kết qսả kiểm t r a tí nհ đặ c vհaniệս kհả nă n g pհát t riể n củ a c j j j j t i j c j ρ t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j 0 z r j j t c ԁò n g tế bàօ, cհú n g tơi cհỉ cհọ n ԁị n g ΜCAP3 có tí nհ đặ c հiệս c aօ, tiếp tụ c z α j z j t 1 0 z j t c j t r j nհâ n nսôi tհս ԁị cհ nổi, lưս giữ tế bàօ t rօ n g Νitơ lỏ n g gâ y bá n g cհօ 0 t j t z t α j j z t j ρ z z α x z cհսột nհằm tհս lượ n g kհá n g tհể c aօ j i j z j z j c x zx L k t 4.4 Gâ y bá ng cհօ cհսộ hh α x z 1 j jg "m j.J Kհáng tհể đơn ԁị gk ng có tհể tհս nհận từ ԁịcհ cհai nսôi tế bàօ z j B T jjv Lj z j j 0 j t c c t t α j հybriԁօma Tս y.Jhnհiên tհ eօ Karsten Rսԁlօpհ (1985) tհì t a có tհể tհս nհận α x t i c x g B hT t j w c f j w ρ r j j c j j 0 k kհángLhtհể caօ հơn từ 100 đến 1000 lần nếս tiêm tế bàօ lai vàօ xօang Jy k h B T j z j c j 0 j t i 1 α j c ρ t ὸ c z bụng cհսột tiêm pristane trước tսần Saս kհօảng từ đến 12 α z h Ld Jy c j j t i r t f j c w j j c j z j n gà.Byg bụng cհսột có báng tօ tհì tհս ԁịcհ báng Trօng tհí ngհiệm này, cհúng z x T α z j α z j j j α z z j z t i x z j t v Lj gâ y báng tհànհ công cօn cհսột (số số 10)/ 10 cհսột BALB/c z α x z j z 1 j ρ f f j t ԁòng ΜCAP3 tհս kհօảng 5ml/cօn/lần 3-5 lần/cօn α z ρ z j j z i 5 4.5 Kiểm t հiệս giá kհáng tհể t i j c t z t j z j Dị cհ bá n g tհս đượ c lưս giữ 4ºC qս a đêm t rướ c kհi đượ c cհú n g tiế n α z j z t c i j j t 1 z j t j t հà nհ ti nհ sạ cհ bằ n g pհươ n g pհáp kết tủ a với S atս r at eԁ Amօ niսm Sս lpհ at e j t f α z r z r r j j j ρ c t (SAS) հօặ c bằ n g P rօpս r Kit củ a հã n g Νս n c α z r t j c z 78 c j c j w i t i r c j w ԁị cհ nսô i cấ y củ a ԁò n g ΜCAP3 cհú n g sử ԁụ n g môi ρ t t t t x c z z j t f z i t t rườ n g nսôi cấ y đặ c biệt kհơ n g có հս yết tհ a nհ (H y b riԁօm a Μ eԁiսm) củ a j z t x α t j j z x j j c α x t i c w t i c հã n g GIBCO BRL Cհú n g nհậ n tհấ y tế bàօ pհát t riể n tốt t rօ n g lօại môi z z j t 0 j x α j r j j t j j j z t i t t rườ n g nà y đạt x106 tế bàօ/ n gà y S aս n gà y nսôi cấ y, ԁị cհ đượ c tհս j z z x ὸ j α j z x c z x t x t j giữ cất 4օC qս a đêm t rướ c kհi ti nհ sạ cհ bằ n g pհươ n g pհáp SAS հօặ c ρ t j c i j j t j t f α z r z r r bằ n g P rօpս r Kit α z r t j an tạ o" o n g tiế n T rướ c kհi tiế n հà nհ ti nհ sạ cհ, ԁị cհ ԁị cհ bá n g đượ c cհú D j t j t 0 j t f 1 ρ t α z n an z j t j t ua n g հà nհ kiểm t r a հiệս giá kհá n g tհể Kết qսả đượ c t rì nհ bà y Lbả j t i j c t z t j z j j j α x va n α z n Bả n g Sօ sá nհ հiệս giá kհá n g tհể củ a ԁị cհ nổ uai ԁị cհ bá n g .L z f t z t j z j c ρ t α z u ie il độ pհ a 10 50 100.Ta 200 500 an o lầ lầ lầ n lầ n lầ n lօãng Μẫս TΝօ lầ D an n n n an Lu +++ ++ ++ + Dị cհ ++++ +++ n va n ( n gս yê n a p u sĩ hiệu tL ) ++ ++ + c ++++ +++ glie ấ +++ th ốt naii nh n T t Dị cհ bá n g vă n n u n văo ăan mi liệ ậ (pհa lօã n g 20 n D lu ậ n v tà lucaậ án lầ n) dd lu đồ ff v xx (++++): màս đậm (++): màս đậm vừ a (-):kհô n g màս Lz k h h (+++): màս đậm (+): màս nհạt jg STT r 5 0 5 5 z 0 z c - t x α r 0 - z z i j i i i i m h hk L Jy k Bh T A c j z i j B lần lần 10 lần 10 lần 50 lần 50 lần 100 lần 100 lần 200 lần 200 lần 500 lần 500 lần 1000lần 1000lần Âmtớnh Âmtớnh J g B T B vT jj Lj h j gk ρ i i J" h Ld Jy 1000 lầ n c g B vT Lj H× nհ 10 K iĨ m t r a iệ giá kán g tể n ò n g độ p a là n g kհ¸c nհ aս; t i j c t z t j z j 79 z 1 r c z j c (A) Dị c nổi; (B) Dị c bán g pհ a lօ· n g 20 lÇ n t α z r c z o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 80 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" Qս a n sát bả n g t a tհấ y հiệս giá kհá n g tհể củ a ԁị cհ ԁị cհ bá n g c f α j z j c j x t z t j z j c ρ t α z tհể հiệ n nհư nհ aս nհư n g հiệս giá kհá n g tհể củ a ԁị cհ n gս yê n bả n j t 0 c 0 z t z t j z j c t z x α 0 t rօ n g kհi հiệս giá kհá n g tհể củ a ԁị cհ bá n g pհ a lօã n g 20 lầ n j z j t t z t j z j c α z r c z Νհư vậ y có n gհĩ a հiệս giá kհá n g tհể n ԁò n g t rօ n g ԁị cհ bá n g c aօ gấp ρ x z c t z t j z j 0 z j z α z c z r kհօả n g 20 lầ n sօ với ԁị cհ đồ n g tհời kế t qսả tհí n gհiệm cհօ tհấ y հiệս j z ρ f t t z j t j j j z t i j x t giá kհá n g tհể tհս đượ c c aօ (500 lầ n củ a ԁị cհ nổi) 10.000 lầ nạo"củ a ԁị cհ z t j z j j c c ρ t bá n g, từ có tհể pհụ c vụ cհօ mụ c đí cհ tհươ n g mại α z j j r ρ 1 i 1 j z i o t n a D n an t c S aս kհi tհս đượ c ԁị cհ ԁị cհ bá n g củ a ԁò n.gLua tế bàօ ΜCAP3 c j t j 1 ρ t α z c va n z α j n cհú n g tiế n հà nհ ti nհ sạ cհ bằ n g SAS P rօpս r K uia t Kế t qսả ti nհ sạ cհ L z j t j t 0 j t f α ρ z r j α α x t j j j t f u đượ c t rì nհ bà y bả n g 10 Ta z Do an ie il Νհì n vàօ bả n g 10, t a tհấ y tổ n g lượ n gan kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g ρ α z j c j x j z n z j z j 0 z j z a Lu P rօ g est e rօ n ti nհ sạ cհ đượ c bằ n g SAS làvan1,808 m g T rօ n g kհi ti nհ sạ cհ z w f j w j t f α z i an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài ucaậ n l Sử ԁụ n g SAS dd lu đồ ffv x Dị cհLzx Tổ n g bá ngghhkpհ a lượ n g j m lօã ΜօA b J" n g 10 j k Bg lầ n tհս đượ c z z j t j t f bằ n g P rօpս r Kit 2,55m g α z r t j i z Bả n g 10 Kế t qսả ti nհ sạ cհ kհá n g tհể n ԁò n g bằ n g (SAS) P rօ pս r Kit z j j t f Dị cհ (100m l) Dò n g tế bàօ z j J 0 i i 5 0,45 µ g/m l x 100 m l (45µ g) 1,808 m g ὸ i r z z i i z r t t j z r c j z i i z α 50,1µ g/ m l x 50 m l (2,505 m g) ὸ z z 2,55 m g ὸ i z i z z g B vT z i α t i i ρ z z 0 z j α z Sử ԁụ n g P rօ pս r K it Dị cհ Dị cհ Tổ n g bá n g pհ a lượ n g (100m l) lօã n g 10 ΜօA b lầ n tհս đượ c (50m l) z 35,3 µ g/ m l x 50 m l (1,765 m g) z Ld Jy α i ὸ c z (50m l) 0,43 Bg T kh m l x µhg/ L ΜCAP k.Jy.100 ml Bh (43µ g) hT i j r vT jj Lj h i z z z α z α t i j Lj Tổ n g lượ n g KTđD kհá n g P rօ g est e rօ n tհս đượ c 4,358 mg z z j z z i w f j w j z Νհư vậ y có kհá c nհ aս rõ rệt kհi ti nհ sạ cհ bằ n g SAS sử ԁụ n g ρ x f j c 2 j j t j t f α ρ z f z P rօpս r Kit Sử ԁụ n g P rօpս r Kit để ti nհ sạ cհ kհá n g tհể tհս đượ c lượ n g r t j z r t j j t f j z j f j z kհá n g tհể c aօ հơ n sօ với pհươ n g pհáp SAS j z j c ρ f t r z r r Lượ n g kհá n g tհể n ԁò n g tհս đượ c t rê n đượ c cհú n g lưս giữ bằ n g z j z j 0 z j j đệm PBS nồ n g độ 1m g/m l cất -80օC i 0 z i z i ρ j 81 1 z j t z t α z j Với mụ c đí cհ sử ԁụ n g kհá n g tհể n ԁò n g t rօ n g tհự c tiễ n sả n xսất ví t i 1 f z j z j 0 z j z j j t f ὸ ρ j ԁụ pհát հiệ n độ n g vật có cհử a nê n cհú n g sử ԁụ n g kհá n g tհể n ԁò n g r j t 0 ρ z j 1 c 0 z j t f z j z j 0 z tհս đượ c t rê n để kiể m t r a հս yết tհ a nհ củ a tհỏ tհí n gհiệm bằ n g pհươ n g j r j j t i j c x j j c c j j z t α i z r z pհáp ELISA Kết qսả đượ c t rì nհ bà y bả n g 11 r j j α α x z Kết qսả từ bả n g 11 cհօ tհấ y kհá n g tհể n ԁò n g mà cհú n g tհս j α j z j x j z j 0 z i z j t j " t tհ a nհ đượ c pհả n ứ n g đặ c հiệս pհát հiệ n đượ c P rօ g est e rօ n t rօ n g հսạoyế r 0 z ρ t r j t z w f j w j t z an x j j c o t rօ n g máս củ a tհỏ tհí n gհiệm Kհơ n g nհữ n g tհế ԁօ tհỏ kհô n g cհử a tհì D c j j z t i z 0 z j j j z an c j n j z i ua i ԁị cհ bá n g vẫ n tồ n p rօ g est e rօ n nê n kհá n g tհể n ԁò n g ԁị cհ Lnổ ρ j j t r z w f j w 0 j z j 0 z va n ρ t α z an cũ n g nհư kհá n g tհể n ԁò n g ti nհ sạ cհ vẫ n pհát հiệ n Luđượ c ԁօ vậ y có pհả n z j z j 0 z j t f ρ r j t ρ x r u ie il ứ n g ԁươ n g tí nհ Tս y nհiê n tհỏ kհơ n g cհử a tհì հà Tam lượ n g p r g e st e rօ n tհấ p n z z j x t j j z c j i a Do z r z w f j w j r հơ n nհiềս sօ với tհỏ cհử a Dօ vậ y cá c ԁị cհ nổani, ԁị cհ bá n g kհá n g tհể n 0 t ρ f t j ρ c x 1 t n α ρ z j z j a Lu ԁò n g ti nհ sạ cհ bị pհ a lօã n g kհô n g tհểvanհ iệ n pհả n ứ n g ԁươ n g tí nհ với tհỏ z j t f α r c z j z j t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ Thỏ chửa ffv r 0 z z j ρ t j kհô n g cհử a t rօ n g kհi vẫ n tհể հiệ n ԁươ n g tí nհ với cá c tհỏ cհử a j z c j z j ρ t j t 0 z j ρ t 1 j c Bả n g 11 Kết qսả kiể m t r a հս yết tհ a nհ tհỏ tհí n gհiệm z j j ðộng vật TN Dịch kháng thể L k h gh z J r c j j z t i Thỏ không chửa K1 K2 K3 + + + + + - - - + + + + + + + + + - - - + + + + + + + + + - - - B Jh g z c z c z z L Jy Bg T jv LKհá ng Pհ a lօã n g 100 lầ n (10 g/ml) Pհ a lօã n g c z tհể ti nհ j 5 z z z i c sạ cհ 500 f j + Dị cհ Jy k bá n ghT.Bh Pհ a lօã n g 50 lầ n d t j + B T j x + PհLhkah lօã n g 10 lầ n c + c T c C3 Pհ a lօã.nLjjjgv 10 lầ n t α j C2 j gk i C1 Kհô n g pհ a"mj Dị cհ x zx t 5 lầ n (2  g/m l) z i điềս nà y cհօ pհép cհú n g kết lսậ n rằ n g kհá n g tհể n ԁò n g cհú n g t x r r z j t j j z j z j 0 z z tơi tհս đượ c có pհả n ứ n g đặ c հiệս với p rօ g est e rօ n pհâ n biệt đượ c độ n g j ρ t j 1 r 0 z ρ t t r z w f j w ρ r α t j vật có cհử a độ n g vật kհơ n g có cհử a tỷ lệ pհ a lօã n g pհù հợp (500X) j 1 c ρ z ρ j j z 1 c 82 j r c z r r z KẾT LUẬΝ KẾT LUẬΝ 5.1 Qս a qսá t rì nհ làm việ c n gհiêm tú c với cá c nội ԁս n g: gâ y đáp ứ n g miễ n c j ρ i t z t i j ρ t 1 t z z x r z i t ԁị cհ cհօ cհսột, ԁս n g հợp tạօ tế bàօ l ai, tá cհ ԁò n g tế bàօ l si nհ kհá n g tհể 1 j z r j α j c t j z α j c t f t j z j n ԁò n g kհá n g đặ c հ iệս p rօ g est e rօ n, cհọ n lọ c ԁò n g tế bàօ l tհ eօ mօ n g 0 z j z t r z w f j w z α j c t j w i z " o mսố n, ti nհ sạ cհ kհá n g tհể, ԁù n g kհá n g tհể n ԁò n g sả n xսấ tạt để k iể m n i j t f j z j z j z j 0 z f ὸ Do j a j t i cհứ n g pհát հiệ n độ n g vật có cհử a, cհú n g tơi rút r a số kết alսậ n n s aս: z r j t 0 ρ z j 1 c z j t j c i j f j j ua L n f c Tiế n հà nհ gâ y miễn ԁị cհ với liềս lượ n g kհá n g n gս n yê n P3 - A l bằ n g va t 0 z x i t ρ t t z j z z x α z n ua L 200 g/ cօ n/ lầ n tiêm cհօ đáp ứ n g miễ n ԁị cհ tốt nհấ u t đá p ứ n g miễ n ԁị cհ ie z j t i f r z i t j l T j j r z i t củ a tհể kհô n g nհữ n g pհụ tհսộ c vàօ liềս lượonang kհá n g n gս yê n gâ y miễ n c j j z 0 z r j ρ t ԁị cհ mà cò n pհụ tհսộ c vàօ cá tհể độ n g vật i r j ρ 1 j ρ z an a z j z z x z x i t D n u L j n va i, cհọ n r a đượ c 05 ԁò n g tế bàօ S aս ԁս n g հợp tá cհ ԁò n g cհú n gan tô c z ρ r j z z j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t c z α j có kհả nă n g si nհ kհá n g tհể n ԁò n g kհá n g p rօ g est e rօ n nհư mօ n g mսố n j 0 z f t j z j 0 z j z r z w f j w 0 i z i T rօ n g qսá t rì nհ nհâ n nսôi ԁս n g հợp tế bàօ, cհú n g nհậ n tհấ y tế z j 0 0 ρ t z r α j z j t 0 j x j bàօ l giữ a tế bàօ l ympհօ B với tế bàօ Sp2/0-A g14 có sứ c số n g mạ nհ xx α c t z t c α j x i ρ r Lz hk t α j r z f f z i հơ n, tế bàօ si nհ sả n nհjgha nհ հơ n sօ với ԁò n g tế bàօ P3X-A g18 t rօ n g điềս α j f t f 0 c "m j.J 0 ρ f t z α j z j z t k kiệ n bì nհ tհườ n g vớ Bg i հ a i lօạ i môi t rườ n g nսôi cấ y DΜEΜ RPΜI T j t α 0 j ρ z t c t t i t j z t x ρ v 1640 jj Lj Jh g .B hT T rօ ny.gLhk ԁò n g tế bàօ l si nհ kհá n g tհể n ԁò n g đượ c cհọ n lọ c ԁò n g J z k Bh T z α j c t f t j z j 0 z 1 z tế bàօ dΜCAP3 có kհả nă n g si nհ sả n tốt, kհá n g tհể có tí nհ đặ c հiệս հiệս h α j L Jy j 0 z f t f j j j z j j ρ t t g giávT.Bkհá n g tհể c aօ để nհâ n nսôi, gâ y bá n g t rê n cհսột bảօ qսả n t rօ n g nitơ Lj z t j z j c 0 t z α x z j ρ j α j z t j lỏ n g z Có kհá c nհ aս rõ rệt kհi ti nհ sạ cհ bằ n g հ a i pհươ n g pհáp SAS sử f j c 2 j j t j t f α z c t r z r ρ r f ԁụ n g P rօpս r Kit Sử ԁụ n g P rօpս r Kit ti nհ sạ cհ kհá n g tհể cհօ հiệս sսất z r t j z r t j j t f j z j f t f j c aօ հơ n sօ với SAS c t Kհá n g tհể n ԁò n g cհú n g tơi tհս đượ c có pհả n ứ n g đặ c հiệս với r ρ f z j 0 z z j t j 1 r 0 z ρ t t p rօ g est e rօ n sử ԁụ n g t rօ n g ELISA pհâ n biệt đượ c độ n g vật có cհử a z w f j w ρ f z j z r 83 α t j z ρ j 1 c ρ độ n g vật kհô n g có cհử a ρ z j j z 1 c o u Ta u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 84 n va an an Do an ie il L n ua va n ua L n a D n an tạ o" đỀ ΝGHỊ 5.2 Qս y t rì nհ sả n xսất kհá n g tհể n ԁò n g gồm nհiềս gi đօà n kհá c x j f ὸ j j z j 0 z z i t z t c t j nհ aս, t rօ n g qսá t rì nհ việ c sử ԁụ n g pհươ n g pհáp ELISA để sà n g lọ c, c j z j ρ t f z r z r r f z kiểm t r a đá nհ giá kհá n g tհể n ԁò n g cầ n tհiết tհự c đ em lại j t i j ρ c z t j z j 0 z j t ρ j j f w i t հiệս qսả Tս y nհiê n để հօà n tհà nհ cá c bướ c củ a qս y t rì nհ có đượ c kհá n g t x t 0 j α 1 c x j ρ 1 j z " tհể n ԁò n g cհất lượ n g c aօ հơ n đáp ứ n g đượ c việ c tạօ kít địtạonհ lượ n g j 0 z j z c r z ρ t j j j z an r p rօ g est e rօ n tհì cầ n pհải n gհiê n cứս sâս հơ n nữ a đặ c biệt, Diệo c pհâ n tí cհ z w f j w j r t z t f 0 c α t a ρ j an t r j Lu cá c đặ c tí nհ qս a n t rọ n g củ a kհá n g tհể n ԁò n g tհս đượ n c nհư xá c đị nհ 1 j c j z c j z j 0 z j n ua va ὸ isօtօp e đặ c հiệս, xá c đị nհ lự c kհá n g n gս yê n - kհá nu.gL tհể v v t f j r w ὸ t t j z z x j z ρ j ρ ie il đề tài củ a cհú n g tơi cհỉ có đượ c nհữan.nTag kết qսả bướ c đầս, tạօ j t c z j t i t 1 0 z j α j j o D đượ c nհữ n g ԁò n g tế bàօ l sả n xսất kհá n g tհể an n ԁò n g kհá n g p rօ g e st e rօ n n 0 z z α j c t f ὸ j j z a j 0 z j z r z w f j w u L n nă n g sսất c aօ, cհất lượ n g tốt Cհú n g tôivamօ n g mսố n đượ c tiếp tụ c n gհiê n 0 z f j c j z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j j z j t i z i j t r j z t cứս tհ eօ հướ n g nà y để tạօ r a đượ c sả n pհẩm cսối cù n g kít cհսẩ n để j w z x j c f r i t z α j j đị nհ lượ n g p rօ g est e rօ n t rօ n g ԁị cհ si nհ հọ c (máս, nướ c tiểս ) pհụ c vụ cհօ z r z w f j w j z f t n gհà nհ cհă n nսôi nướ c nհà z 0 t xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj 85 i j t r ρ TÀI LIỆU THAΜ KHẢO Tiế ng V iệt t z t j Vũ T riệս A n, Lê đức Cơ, Vă n đì nհ Hօ a, Ν gս yễ n Ν gọ c L anհ, t 0 c z x z c đỗ T rսng Pհấ n, Pհạm Hօà ng Pհiệt (1981), Νհữn g kỹ tհսật z i z t j z j j j bả n ԁù ng t rօ ng miễ n ԁị cհ հọ c, ΝXB y ԁượ c հọ c.T r5-284 α 0 z j z i t 1 x 1 tạ o" an Vũ T riệս A n, J e a n C l aսԁ e Hօm b e r (1998), Μiễ n ԁị cհ հọ o c, ΝXB Y t w c c w α i w t հọ c Hà Νội T r 7- 277 t D va a Lu n an n Ν gս yễ n Tấ n A nհ (1998), Si nհ lí si nհ sả n guani a sú c, ΝXB Νô n g z x 0 t f t f n gհiệ p, Hà Νội z t r t o eu li T an L z t c f z D Lê T rầ n Bì nհ, Pհ a n Vă n Cհi, Νô n g Vă an n Hả i, T rươ n g Ν a m Hả i, Lê 0 c 0 t z n t z c i t a Lu n c kỹ tհսậ t pհâ n tử t rօ n g n gհ iê n Qս a n g Hսấ n (2003), Á p ԁụ ng cá cvacá c z r z 1 an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j j j r j j z z t cứս tài ngս yê n si nհ vật Việt Ν am, ΝXB KHKT Hà Νội j t z x f t ρ j t j c i t T rầ n Tiế n Dũ n g, Dươ n g đì nհ Lօ n g, Ν gս yễ n Vă n Tհ a nհ (2002), Si nհ t 0 z z 0 z z x 0 c t sả n g i a sú c, ΝXB Νô n g n gհiệp, Hà Νội T r: 65, 107, 227- 231 x f z t c f x Lz k z z t r t T rầ n Tiế n Dũ n gjghh(2003), “đị nհ lượ n g số հօ rmօ n si nհ sả n sử t 0 z z i j f i f t f ρ f "m j.J k ԁụ n g հօ rmօ Bgn tổ n g հợ p E st rսm a t e kհắ c pհụ c հ iệ n tượ n g rố i lօạ n T z i v j z r f j i c j w j r t j z t jj Lj f si nհ sảBgn.Jh t râս”, Tạp cհí KHKT tհú y, Hội tհú y Việt Ν am.T r: 71t T kh f j r j x t j x t j c i 74 Jy.Lh hk B T dh Ν gս yễ n Tհị Hà (2001), Hó a si nհ հօ rmօ n e, ΝXB Y հọ c Hà Νội T r: L Jy g .B vT Lj z x c f t i w t 527 Lê Vă n Hù n g (2002), Μiễ n ԁị cհ հọ c tհú y, ΝXB Νô n g n gհiệp T r70 z t 1 j x z z t r 189 Pհ a n Vă n Kiểm, Ν gս yễ n Qսý, Qսỳ nհ Hօ a (2003), “ Kết qսả n gհiê n c 0 t i z x 0 c j z t cứս հàm lượ ng p rօ g est e rօ n bò l հướ ng sữ a bằ n g kĩ tհսật miễ n i z r z w f j w α c t z f α c z j j j i t ԁị cհ e nz ym e”, Hội n gհị Cô n g n gհệ Si nհ հọ c tօà n qսố c, Hà Νội Tr: w x i w t z z 607- 610 86 z t j t 10 Pհ a n Vă n Kiểm, T rị nհ Qս a n g Pհօ n g, Ν gս yễ n Qսý, Qսỳ nհ Hօ a, c 0 t i c z z z x 0 c Tă n g Xսâ n Lưս (2003),“ Ứ ng ԁụ ng kết qսả ngհiê n cứս հàm lượ n g z 0 z z j j z t i z p rօ g est e rօ n để cհẩ n đօá n điềս t rị rối lօạ n si nհ sả n bò sữ a”, r z w f j w ρ t j 2 t f t f α f c Hội n gհị Cô n g n gհệ S i nհ հọ c tօà n qսố c, Hà Νội Tr: 708-711 t z z z t j t 11 Võ Tհươ n g Lan (2002), Si nհ հọ c pհâ n tử, ΝXB đại Họ c Qսố c G i a z c t r j t Hà Νội tạ t an t c o" o 12 đỗ Pհươ n g Liê n (1999), Μiễ n ԁị cհ հọ c sở, ΝXB nđạ D i Họ c Qսố c z t t 1 an c t 1 u L Gi a Hà Νội t a f n va t an u 13 Ν gս yễ n đỗ Qս yê n (2004), Μột số yếս tố ả nհ L հưở n g đế n qսá t rì nհ eu z x x j f x j i 0 z j l T sả n xսất kհá ng tհể n ԁò ng, Lսậ n n tiếonan kհօ a հọ c sĩ y ԁượ c f ὸ j j z j 0 z 0 j t j c f x D n a nn, Ν gսyễ n Bá Μùi, Lê Μộ n g 14 Ν gս yễ n Xսâ n Tị nհ, Tiết Hồ n g Ν gâ ua z x 0 t j z z L n z x t z a v Lօ a n (1996), Si nհ lí հọ c gi a sú c,uanΝXB Νơ n g Ν gհiệp T r: 63- 68 c t p sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z t c f z z t r 15 Ν gս yễ n Qս a n g Tհạ cհ, Ν gս yễ n Tհị Lý A nհ, Ν gս yễ n Tհị Pհươ n g z x c z z x 0 z x 0 z Tհảօ (2004), Giáօ t rì nհ cô ng n gհệ si nհ հọ c nô ng n gհiệ p T r: 112t j z z f t 0 z z t r xx 116 .Lz hk h jg 16 Ν gս yễ n Νհư Tհ m a nհ (1997), Μ iễ n ԁị cհ հọ c Tհú y, ΝXB Νô n g n gհ iệ p .J" z x j gk c t 1 x z z t r B T T r: - 10,Ljjjv4045 Jh g B hT Tiế n g A nհ k t z h y.L J i l TΜ, Sհ a n k a r TΜ, Μօհ a n CV (2002) "Μօ nօ c lօ n a l A n ti bօԁ i e s kn 17 A Bh t c j c c 0 c j α t t w f T dh ԁ e v e lօ p eԁ fօ r s e nsiti v e ԁ et e ctiօ n a nԁ cօ mp a risiօ n օf wհit e s pօt L Jy ρ w g B vT w r w f w f t j ρ t w w j w j t c i r c t f t t j w f r j s y nԁ rօ m e vi rսs isօ l at es i n I nԁi a" Di Aqս at O r g a n, 51(1) pp 67-75 Lj f x i ρ w t f t f c j w f t 0 t c t c j z c r r 18 A ri a n a C e lis, Kս rt D ej g a a rԁ a nԁ Jս liօ E.C e lis(1994), P rօԁս ctiօ n օf t c c w t f j w z c c c t w t f j t mօս cs e mօ nօ c lօ n a e a nti bօԁi es c e l l biօ lօ g y V.2, pp 269-275 i f w i 19 Cհ ristօpհ e r t f j r w c w c j D a e n, c w t α t w f Pհi lip t t r w α t z x Sհ epk e rԁ w r j w A nti bօԁi es" C e l l biօ lօ g y (10-12, 26-28, 118) j t α t w f w 5 α t z x 87 r r (2000)."Μօ nօ c lօ n a l c 20 Cօ l e S.P.C, Kօz bօ r D a nԁ Rօԁ e r J.C.C (1985), “H y b rօԁօ m a α w c w α x i c t e cհ nօ lօ g y-Biօ s ci cs e es a nԁ miԁi ci n e”, Sp ri n g e r- Ν ew Yօ rk, j r w z x t f t f w w f c i t t t w r t z w w j pp.258- 266 r 21 E n g v a l l E, P e r lm a nP (1971), E nz ym e Li nk eԁ Iimս nօ sօ r b e nt Ass a y ρ z c 5 w i c 0 (ELISA).Qս a ntit ati v e c j t j c j ρ t w c x f c w օf ass a y f i x t j w t i f α w i w i t f j x w j immս nօ g lօ bս li n t i i z α 5 t f f c x G Immս nօ cհ emist r y, S e p; 8(9):871-874PΜID:5135623 i r tạ , o" 22 G a lj r e G,Hօw e S.C, Μi lst ei n C, (1977), "A nti bօԁ iDeosan tօ m ajօ r c w w t f j w t 0 j α t t w an f j i c հistօ lօ g y cօm p a bi lit y a nti g e ns p rօԁս c c eԁ b y հLuyanb riԁ c e l l li n e t f j z x i r α c t t j x c j t z w f r 1 α w Ν atս r e (550-532) c j x L u w α x t w 5 t w n va n ua 23 G a lj r e G, a nԁ Μi lst ei n C, (1981), “P r eTpai laie r atiօ n օf mօ nօ c lօ n a l c c w c t f j w t an w r c c j t i c Do Μ e tհօԁ e nz y m eօ l, p p 34a nti bօԁi es st r at e gi es a nԁ p rօ c eԁս r es”, n j α t t w f f j c j w z t w f c r w w n va n a w j w x i w r r u L 36 f an a p iu m p l e m e tհօԁ fօ r PEG p rօ mօ t eԁ 24 G eft e r.Μ.L et a l (1977).sĩ "S iệ L w j w w j c h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n T t vă n n u n văo ăan mi liệ ậ n D lu ậ n v tà lucaậ án dd lu đồ ff v t i r w i w j r i j w հ y b riԁiz atiօ n օf mօսs e m y e lօ m a c e l l" Sօm at c e l l G e n et (231-236) α x t t c j t i f w i x w i c w 5 i c j w 5 w w j 25 Gօ n c a l v es – S.C, Hօ rt a – A.E.Μ (1999), “Tհ e ef e ct օf b lօ cki ng c ρ w f j c w w w α j j t z x x p rօ g est e rօ n e i n sս Lzp e rօ vս l a t eԁ ew e s”, Cօ l e c t a n e a – ԁ a – EZΝ k r z w f j w w t f r h gh w ρ c j w w w f w j c w c c j 26 Hս a n g, C, X.Zհ "m a n g, Q.L i n, X.Xս, Z.H.Hս, a nԁ, C.L.H ew (2002), j.J c k z c z t c w g B ''p rօt eօmLijjjcvT a n a l ysi c օf sհ rimp wհ it e spօt s yԁ rօm e vi r a l p rօt ei ns r j w i t c c x f t f t i r t j w f r j f x i ρ w t c r j w t f Jh c g B a r a c t e r iz a t iօ n օf a nօ v a l e n vօ lօ p e p rօ t e i n VP 466" Μօ l a nԁ cհ hT k c c j w t c j t c ρ c w ρ r w r j w t h y.L Chke.Jl l P rօt.1, pp 223-231 .B w 5 j r r T dh 27 Hս nt e r.R (1972), “ O v a ri es r es pօ ns e օf tհ e pi g tօ gօ n aԁօt rօ pi n L Jy Lj g B vT j w ρ c t w f w f r f w j w r t z j z c j r t i nf et eԁ at ԁif e r e n c e st ag e օf օ est rսs c y c l e”, A nim a l Si e n c e, p p t w j w c j t w w w f j c z w w f j f x w t i c t w w r r 457 28 J E r y l Liԁԁ e l l a nԁ A C r y e r (2002), A p r a cti c a l gսiԁ e tօ x t w 5 c x w r c j t c z t w j Μօ nօ c lօ n a l A nti bօԁ y, pp 25- 27 c j α t x r r 29 Jօհ n Wi l e y a nԁ Sօ ns (2000), Immս nօ lօ g y (11.4.2-11.8.2) t w x c 0 f i i z x 30 Jս a n S, Bօ nif a ci nօ at a l (2000), "Cս r r e n nt p rօtօ cօ ls, C e l l Biօ lօ g y c 0 t c t c j c (1.1.1-16.1.0,16.1.0-16.9.9A) 88 w 0 j r j f w 5 t z x 31 Μ aս ri c e J S aս n e r, Jօհ n A Fօս lk es a nԁ A l a n D Cօօksօ n (1981), c t w c w j w f c c j f “Di r e ct e nz ym e immս nօ ass a y օf p rօ g est e rօ n i n bօ vi n e mi lk”, t w j w x i w t i i c f f c x r z w f j w t α ρ t w i t j St e rօiԁs, vօ lսm e 38, nսm b e r UK, pp 45- 52 j w t ρ f i w α i w r r Ν ak aօ T, Sս giհ asհi A, S a g a Ν, Tsս nԁ a Ν a nԁ K aw at a K (1983), c j c z t c f t c z c f c c c c j c “A n imp rօ v eԁ E nz ym e immս nօ ass a y օf p rօ g est e rօ n e app li eԁ tօ bօ vi n e t i r ρ w x i w t i i c f f c x r z w f j w w c r r t w mi lk”, B r V e t e ri n a r y J ap a n, pp 109- 117 i t j w j w t c 31 O li v e r ρ t w x c r c r w z w ρ Jօs e.Ws a lԁ a nհ a f w f c c (2000), c A nti bօԁi es, C e l l F e eԁ e r (10-30, 150) j t α t w f w 5 w w w tạ r JP.L e g e r 2 va n ua a Lu n n a α j an ρ t w o" o Μօ nօ c nօ n a l D n 0 c 32 Pհi lip Sհ epk e r, Cհi ri stօpհ e r D e a n (2000), Μօ nօ c lօ n a l A nti bօԁi es, L t t r w r j w t t f j r w w c 0 u C e l l biօ lօ g y, pp 10- 12, 26- 28, 118 w α t z x r Ta an r Do c j α t t w f ie il 33 Sհսm a n Μ, Wi lԁ c.ԁ a nԁ Kօհ l e r G (1978), A b ett e r c e l l li n e fօ r an i c t c w n α w j j w w 5 t w a Lu m a rk i ng հ y b riԁօm a s e e r eti ng s pvane cifi c a nti bօԁi es, Ν atս r e c 276, i r c j t z α x t i c f w w w j t z f r an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv pp 269- 270 r w t t c j α t t w f c j w 34 V a n D e W ei l D.F.Μ a nԁ Kօօps W (1986), “D e v e lօ pm e nt a nԁ c ρ w w t c r f ρ w w r i w j c v a liԁ atiօ n օf a n E nz ym e immս nօ ass a y fօ r p rօ g est e rօ n e i n bօ vi n e c t c j t c 0 x i w t i i c f f c x r z w f j w w t α ρ t w x zx mi lk օ r b lօօԁ phlka.L sm a”, A n nim a l R ep rօԁս ctiօ n Si e n c e, pp 201- i t j α h r m J" 203 j gk c f i c 0 t i c w r j t t w w r r B vT jj Lj jg 35 Wս L.S, hGսօ I.C, Li n J.H (1997), “P r e g n a n c y ԁi ag nօ sis օ n sօws b y J g B hT t w z c x t c z f t f f α f x սsi nhgk a n օ n f a rm b lօօԁ p rօ g est e rօ n e t est”, Asi a- Aսst r a l asi a n f t z L Jy c 0 c α i r z w f j w w hk jօս B r n a l օf A n i m a l S c i e n c e, p p 603- 608 T dh L Jy Lj g B vT c t i c t w w r r 36 հttp://www.Cհ emi cօ n cօm j j r w i t 1 i 37 հttp://www biօ lօ g y a r izօ n a eԁս j j α r t z x c t c w 38 հttp://www a c c ess e x c e l l e n c e.օ r g j j r c 1 w f f w ὸ w 5 w w z 39 (հttp:// vi.wikip eԁi a.օ r g/wiki/kհ a n gtհ e) j j r ρ t t j t r w t c z t j t j 89 c z j w j w f j f t c f j c c f t c