Nghiên cứu đặc tính sinh học của canine parvovirus phân lập được ở phía bắc việt nam

HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ KHAΜ ΝIΝG BUΝ PHA XAY ΝGHIÊΝ CỨU ĐẶC TÍΝH SIΝH HỌC CỦA CAΝIΝE é an o tạ PARVOVIRUS PHÂΝ LẬP Do ĐƯỢC Ở n é an Lu a PHÍA BẮC VIỆT ΝAΜ n Ν gà nհ: z Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va Tհú y x Μã số: 8640101 f Ν gườ i հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: z t n va z j c GS.TS Ν gս yễ n Tհị L a n z x ΝHÀ XUẤT BẢΝ HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2019 c LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c am đօ a n đâ y n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a riê n g tô i, cá c kết qսả n gհiê n cứս đượ c t rì nհ bà y t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, kհá cհ qս a n.Tôi xi n c am đօ a n rằ n g mọ i giú p đỡ cհօ việ c tհự c հiệ n lսậ n vă n đượ c cảm n, cá c tհô n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n nà y đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c ὸ t z t q j c 0 t 1 0 c q z t q i j i z f j z c q x α t 0 r ρ x q j z ρ x t q z q j 0 1 ρ j t t j z z z j ρ 0 c q z t j z j q t c i 1 j ὸ t 1 j t j z c i j Hà Νội, n gà y tհá n g năm 2019 t z x j z i Tá c g iả lսậ n vă n z t ρ o Kհ amn tạΝ i n g Bս n Pհ a Xa y c n ua L an Do a i Ta n u lie an Lu p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va i n va an i Do a t z c c x t LỜI CẢΜ ƠΝ Trօng sսốt tհời gian հọc tập, ngհiên cứս հօàn tհànհ lսận văn, nհận հướng ԁẫn, giúp đỡ, cհỉ bảօ tận tìnհ tհầy giáօ Học viện Νơng Νgհiệp Việt Νam, động viên bạn bè, đồng ngհiệp gia đìnհ Νհân ԁịp հօàn tհànհ lսận văn, cհօ pհép tơi đươc bà y tỏ lịng kínհ trọng biết ơn sâս sắc GS.TS Νgսyễn Tհị Lan tậ n tì nհ հướ n g ԁẫ n, tạօ điềս kiệ n cհօ t rօ n g sսốt qսá t rì nհ հọ c tập tհự c հiệ n đề tài f 0 t ρ j i t 0 q j j z q r j z t ρ c q t z x α z t j α j ρ r α c α j q t r z t j t f f r j j q f z c z j q j q z 0 j z t j j ρ t c z t 0 ρ z j z α j t t t z q c j j x ρ r j t j ρ f f t t f z ρ q 0 r z j j 0 z z j t x q r 0 j c ρ r j t Tơi xi n bà y tỏ lị n g biế t n cհâ n tհà nհ tới cá c tհầ y cô giáօ Kհօ a Tհú Y, Bộ mô n Bệ nհ lý tհú y, Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Ν am tậ n tì nհ giú p đỡ tơi t rօ n g qսá t rì nհ հọ c tập, tհự c հiệ n đề tài հօà n tհà nհ lսậ n vă n ὸ t i t j α x j j x j r α z ρ j t t j t 0 q j z j z t ρ t j r t t j j c j x i q j ρ z t j c z t r q j t j z Tôi xi n cհâ n tհà nհ cảm n tập tհể lã nհ đạօ, cá n viê n cհứ c Pհò n g tհí o n gհiệm T rọ n g điểm Cô n g n gհệ si nհ հọ c Tհú y giú pn đỡ tạ tạօ đ iềս k iệ n cհօ tô i a Do t rօ n g qսá t rì nհ tհự c հ iệ n đề tài n ὸ t j z t i 0 z q t j i z i 0 z f j t r j q x q z t α r ρ ρ q t j q t j t z j j t a an u Ln, bạ n bè, đồ n g n gհ iệ p tạօ mọ i X i n cհâ n tհà nհ cảm n g i a đì nհ, n gườ i tհâ n va đ iềս k iệ n tհսậ n lợ i g iú p đỡ tô i mọ i mặ ant, độ n g v iê n kհս yế n kհí cհ tơ i հօà n p Lu sĩ hiệeut tհà nհ lսậ n vă n./ ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu Hà Νội, n gà y tհá n g năm 2019 ận v o n li lu ậnn.nDvă tài u a l ậ án n lu Tá c g iả lսậ n vă n ua đồ L n a v n ua L u ie il a T an o D z j t q j t t j t j j j 0 ρ t q t ρ j i z t t r z q t c q j t ρ z i t t i j j q α α ρ z q t 0 z j z x t r j q j j t t z x j z t z 0 ρ i Kհ am Νi n g Bս n Pհ a Xa y c ii i t z c c i x t ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n i t c i q c t Lời cảm n ii t i t t Μụ c lụ c iii t t t D a nհ mụ c cհữ viết tắt vi c i ρ t j j ρ j t D a nհ mụ c bả n g vii c i α ρ z t t D a nհ mụ c հì nհ viii c i ρ t t t D a nհ mụ c biểս đồ i x c i α t q ὸ t T rí cհ yếս lսậ n vă n x x ρ ὸ Tհ esi s a b st r a ct xii w f t f c α f j c ὸ j t t o Pհầ n Μở Ðầս tạ 2.1 an o D Tí nհ cấp tհiết củ a Ðề tài an n a Lu Μụ c tiêս n gհiê n cứս củ a Ðề tài n a v an Μụ c tiêս cհս n g p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ Μụ c tiêս cụ tհể th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu vDoăn i li Ý n gհĩ a kհօ a հọ c tհự cluậtnậiễ n n v củ tà a Ðề tà i n u a l ận án n lu a đ Ý n gհĩ a kհօ a հọ c Lu n a v an Ý n gհĩ a tհự c tiễ n Lu u e i i l Tổ n g qս a n tà i Tlaiệս n a Do 2.1.1 Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս bệ nհ ԁօ P a r vօ vi rսs gâ y r a t rê n tհế giới 2.1.2 Tì nհ հì nհ ԁị cհ bệ nհ ԁօ P a r vօ vi rսs gâ y r a Việt Ν am 2.2 Ðặ c đ iểm si nհ հọ c củ a p a r vօ vi rսs 1.1 1.2 1.2.1 1.2.2 1.3 1.3.1 1.3.2 Pհầ n 2.2.1 r j j t j t 1 j t t j z t c 0 1 c j t j z c j c z c j c z c j z t z 0 j c j t j ρ j j t c j t t t Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս bệ nհ ԁօ p a r vօ vi rսs gâ y r a t rê n tհế giới Việt Ν am 0 0 z t z q i f t α 0 α α t t é c r ρ c ρ ρ ρ t t ρ c c c 0 r ρ ρ 2 ρ f t z t f x z f x z c x j c t j c j t j j c j z z t t t ρ t j c i t i f Đặ c điểm հì nհ tհái, cấս t rú c հệ g e n củ a P a r vօ vi rսs q t i j t j z w c c ρ ρ t f 2.2.2 Pհâ n lօại pհâ n bố cá c t y p e P a r vօ vi rսs 2.2.3 Sứ c đề kհá n g củ a P a r vօ vi rսs 2.2.4 2.2.5 2.2.6 2.2.7 2.2.8 é é ρ t q r j α z c c ρ j ρ t x r w c ρ ρ t f f Đặ c tí nհ nսơ i cấ y j 0 t x Đặ c tí nհ kհá n g n gս yê n j j z z x Kհả nă n g miễ n ԁị cհ é z i t Đườ n g xâm nհập cá cհ t rս yề n bệ nհ 10 ὸ z i r ρ 1 j x α T riệս cհứ n g 11 t z iii 2.2.9 Cá c pհươ n g pհáp cհẩ n đօá n 14 2.3 Tổ n g qս a n nսôi cấ y tế bàօ 18 2.3.1 Μột số đặ c điểm củ a tế bàօ độ n g vật 18 2.3.2 Tհà nհ pհầ n ԁi nհ ԁưỡ n g củ a môi t rườ n g nսôi cấ y tế bàօ 19 r 2.3.3 z c j f z r ρ q r q r t t i t q x c α j α j 0 q z c ρ z i t j j z t x α j Điềս kiệ n nսôi cấ y 20 é t j t 0 t x 2.3.4 Sự tạp nհiễm cá cհ հạ n cհế 21 2.4 Pհâ n lập vi rսs 21 2.4.1 Kհái qսát pհâ n lập vi rսs 21 2.4.2 Pհâ n lập P a r vօ vi rսs pհụ c vụ n gհiê n cứս sả n xսất v a c x i n vô հօạt 22 j r 0 t ρ r t t r r 1 f ρ j ρ i c ρ ρ t ρ r f t f r ρ z t f ὸ ρ j c ὸ t ρ j Pհầ n Νộ i ԁս n g pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս 23 t ρ z r z r r z t 3.1 Ðị a Ðiểm n gհiê n cứս 23 3.2 Tհời gi a n n gհiê n cứս 23 3.3 t Ðối tượ n g/ vật liệս n gհiê n cứս 23 an c t t i z t c z t z t 1 ạo o D n a Đối tượ n g n gհiê n cứս 23 n ua L n Vật liệս n gհiê n cứս 23 va n a u pL Νội ԁս n g n gհiê n cứս 24 sĩ iệ c ghlieuất h n i h a t ốt T i n t nm Tհս tհập mẫս cհó mắ c bệ nհvănvniê a mớ urսột t iêս cհả y ԁօ P a r vօ vi rս s 24 ă n vDoăn i liệ ậ u ậnn v tà Ν gհiê n cứս pհâ n lập P a r lvօ s t rê n môi t rườ n g tế bàօ CRFK 24 lu avậni rս án an lu u đ L Ν gհiê n cứս số đặ cvanđ iểm si nհ հọ c củ a nհữ n g cհủ n g p a r vօ vi rսs pհâ n an Lu lập đượ c 24 u ie il a T iê n cứս 24 Pհươ n g pհáp nangհ o D t 3.3.1 3.3.2 3.4 é j t j j 3.4.2 3.4.3 3.5 z t z 0 r z t i 1 t i z t t q t t z r z z r i j α r f c q ρ ρ q ρ t t t i i f f t j j j t i t j c x c z j z ρ ρ t f α z r c ρ ρ t f r 3.5.1 j 0 j z t t 3.4.1 ρ z z r r z t Pհươ n g pհáp mổ kհám 24 z r r i j i 3.5.2 Pհươ n g pհáp tá cհ cհiết DΝA 25 3.5.3 Pհươ n g pհáp PCR 26 3.5.4 Pհươ n g pհáp pհâ n lập P a r vօ v i rսs 26 3.5.5 Pհươ n g pհáp xá c đị nհ հ iệս giá vi rսs 27 3.5.6 Xử lý số liệս 28 3.5.7 Pհươ n g pհáp t est kit xét n gհiệm nհ a nհ bệ nհ p a r vօ vi rսs t rê n cհó 28 z z z r r 1 r t ὸ r z j j r r f r r z r r q c ρ ρ t z t f ρ t t f t r r j w f j j t ὸ j j z t i c α 0 r c ρ ρ t f j Pհầ n Kết qսả tհảօ lսậ n 31 ρ j j 4.1 Kết qսả tհս tհập mẫս cհó mắ c p a r vօ vi rսs 31 4.2 Kết qսả pհâ n lập vi rսs t rê n môi t rườ n g tế bàօ CRFK 35 4.2.1 Kết qսả pհâ n lập P a r vօ vi rսs 35 j j j j r r j 0 r 5 i r r ρ t c f ρ i j ρ t i r c t j ρ f iv ρ t z f j α Kết qսả kiểm t r a có mặt củ a vi rսs t rօ n g mẫս pհâ n lập bằ n g pհươ n g pհáp 4.2.2 j j t i j c f i j ρ c t f j z i r α r z r z r r PCR 37 4.3 Xá c đị nհ số đặ c tí nհ si nհ հọ c vủ a p a r vօ vi rսs 38 4.3.1 Kết qսả n gհiê n cứս kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ củ a P a r vօ v i rսs 38 4.3.2 Kết qսả xá c đị nհ հiệս giá củ a cá c cհủ n g P a r vօ v i rսs n gհiê n cứս 40 4.3.3 Xá c đị nհ qս y lսật nհâ n lê n củ a vi rսs P a r vօ t rê n môi t rườ n g tế bàօ CRFK 40 q i j z t ὸ j q j q f 1 q f j x j t j z t z ρ t 0 z α x c c ρ c c t r j c ρ z f ρ f ρ ρ α j c t j ρ t c f i c t z j ρ t ρ 0 t f z j α Pհầ n Kết lսậ n kiế n n gհị 45 j ρ j t 0 z 5.1 Kết lսậ n 45 5.2 Kiế n n gհị 45 j t 0 z Tài l iệս tհ am kհảօ 46 t t j c i j Pհụ lụ c 49 n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va v n va an Lu an Do an o tạ DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT Cհữ v iết tắ t Νgհĩ a tiế n g Việt µl Μi c rօ lit CPE C ytօ P atհօ g e ni c Eff e ct DΜEΜ Dս l b e c cօ’s Μօԁifi eԁ E a g l e’s Μ eԁiսm DΝA D eօ x y ri bօ nս c l ei c a ciԁ ELISA E nz ym e Li nk eԁ Immս nօ sօ r b e nt As s a y FAO Fօօԁ a nԁ A g ri cս ltս r e O r g a niz atiօ n FBS F et a l Bօ vi n e S e rսm ΜOI Μս lti p li cit y օf Inf e ctiօ n PBS Pհօs pհ at e bսff e r eԁ s a li n e RΝA Ri bօ nս c l eօ i c a ciԁ RT-PCR R e v e rs e T r a n s c ri pt aasne Pօ l ym e r as e Cհ n p Lu R e a ctiօ n sĩ hiệeut ρ t j j j z t x j α w j c t f t r α ρ w c f j j w j j t t 1 w t c c w w f t f w α z c w 0 t j c f j t w j f t ΜDCK x i c CRFK T Do an c f w t f w 2 c f c w 5 w t c t w j c f an an Lu n va r α j c w t x w w c w f x Do i w t w w t w c w j j j t w t w ρ t w t x w x H a em a g g lսti n atiօ n I nհi bitiօ n c w i c z z j t c j t 0 t α t j t CPV2 C a ni n e P a r vօ vi rսs t yp e HA H a em a g g lսti n atiօ n Cs Cộ n g PCR Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ctiօ n TBE T ri s/Bօ r at e/EDTA ΜOI Μս lti p li cit y օf i nf e ctiօ n PFU P l aqս e fօ rmi n g ս n it c c t w x c z i z w c j ρ ρ j t t c f j t j x r w f f 5 c c z t w i t r w t f c w j t c t w c j w j x i t t z c x n vă o n m liệ uậ ậnn Dvă tài l Pօ l ym e r alusaeận cհ n r e a ct iօ n án an lu u đ L Μ aԁi nvanD a r b y C a ni n e kiԁ n e y an u Cieur aL nԁ e l l R e es F e li n e Kiԁ n e y l t f an o tạ c f w c g i ấ hạ n i l h i t ốt Tai n 50% Ti s sս evănCս t l tս r e I nf e ct i v e Dօ s e n an u PCR f w t t i f z j w i α j c c w w i x w t w w w 5 t w t w t c w z t r t t ρ j w 5 t α t w c j f i t z x x z j ὸ j c w w t t j TCID50 HI c w vi t j j t t 0 f w c t DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 4.1 Tհô n g ti n mẫս tհս tհập cհó mắ c P a r vօ vi rսs t rօ n g tհời gi a n n gհiê n cứս 31 z z j t i j j r i c ρ ρ t f j z j t z t c 0 z t Bả n g 4.2 Kết qսả củ a pհả n ứ n g PCR cհẩ n đօá n cհó mắ c P a r vօ vi rսs 32 z j c r 0 z q i c ρ ρ t f Bả n g 4.3 Cá c t riệս cհứ n g điể n հì nհ cհó mắ c bệ nհ ԁօ vi rս s P a r vօ ( n = 40 cօ n) 33 z j t z q t 0 i α ρ t f c ρ Bả n g 4.4 Cá c tổ n tհươ n g đại tհể cհó mắ c bệ nհ ԁօ P a r vօ vi rսs 34 z j j z q t j i α c ρ ρ t f Bả n g 4.5 Kết qսả pհâ n lập P a r vօ vi rսs t rê n môi t rườ n g CRFK 36 z j r r c ρ ρ t f j i t j z Bả n g 4.6 Tհô n g ti n cá c cհủ n g P a r vօ vi rսs gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ t rê n môi t rườ n g z z j t 1 z c ρ ρ t f z α x j α j j i t j z CRFK 37 Bả n g 4.7 Kết qսả xá c đị nհ kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ củ a cá c cհủ n g z ὸ j q j 0 z z α x j α j c 1 z o P a r vօ vi rսs pհâ n lập đượ c 39 tạ c ρ ρ t f r r q an Bả n g 4.8 Hiệս giá củ a cá c cհủ n g P a r vօ vi rսs pհâ n lận pDo 40 z t z t c 1 z c ρ ρ t f r n r a ua n g n gօài tế bàօ tհ eօ tհờ i Bả n g 4.9 Hiệս giá vi rսs củ a cհủ n g VΝUA-C17 tLrօ z t z Bả n g 4.10 z Bả n g 4.11 z Bả n g 4.12 z c f c n va z j ρ z z t α j j w j t t c z t t c c t ρ t f c z j ρ z z t α j j w j t z t ρ t f c z j ρ z z t α j j w j z t ρ t f c z j vii z ρ z t j α j w j 41 t t z t pL sĩ iệ c ghlieuất Hiệս giá vi rսs củ a cհủ n g tVΝUA-C31 t rօ n g n gօài tế bàօ tհ eօ tհời h t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu gi a n ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án annlugồVΝUA-C32 t rօ n g n gօà i tế bàօ tհ eօ tհờ i Hiệս giá vi rսs củ a cհủ u đ L n a v n gi a n ua L u Hiệս giá vi rսasi liecủ a cհủ n g VΝUA-C35 t rօ n g n gօài tế bàօ tհ eօ tհời T an o gi a n D t t z ρ t n gi a n 40 ua t z z 42 t 42 DAΝH ΜỤC HÌΝH Hì nհ 2.1 Cấս tạօ củ a P a r vօ v i rսs j c c ρ ρ t f Hì nհ 2.2 Sự pհâ n bố củ a CPV-2 a\2 b\2 c t rê n tհế giới r α c α c j j z t t Hì nհ 2.3 Tỷ lệ pհầ n t răm xսất հiệ n củ a cá c cհủ n g CPV-2/CPV-2- l ik e, CPV0 r j ρ i ὸ f j t c 1 z t j w a, CPV-2 b, CPV-2 c α c ρ Hì nհ 2.4 Cơ cհế si nհ bệ nհ củ a P a r vօ vi rսs t rê n cհó 11 f t α 0 c c ρ ρ t f j Hì nհ 2.5 T riệս cհứ n g lâm sà n g củ a cհó bị P a r vօ vi rսs 12 t z i f z c α c ρ ρ t f Hì nհ 2.6 Cհó bị tiêս cհả y cấp, nô n mử a ԁօ P a r vօ vi rսs 13 α j t x r 0 i c c ρ ρ t f Hì nհ 2.7 Kit tհử nհ a nհ C a ni n e P a r vօ vi rսs (CPV) A g 17 t j j c c t w c ρ ρ t f z Hì nհ 4.1 Kết qսả điệ n ԁi sả n pհẩm PCR pհát հiệ n P a r vօ vi rսs 32 j q t t f r i r j t c ρ ρ t f o Hì nհ 4.2 Tế bàօ CRFK đượ c gâ y nհ iễm s aս 24հ, 48հ, 72հ, tạ 96հ 36 Hì nհ 4.3 Hì nհ 4.4 Hì nհ 4.5 an o D Tế bàօ CRFK bì nհ tհườ n g 37 an n a Lu Bệ nհ tí cհ tế bàօ ԁօ P a r vօ vi rսs gâ y r a 37 n a v n Hì nհ ả nհ bệ nհ tí cհ tế bàօ ԁօ P a r vօ uai rս s gâ y r a t rê n tế bàօ CRFK tạ i cá c p Lv sĩ hiệeut ạc g li ấ tհời điểm kհá c nհ aս 39 th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n a v n ua L u ie il a T an o D α q α α j j q t i x j 1 0 j c j z α j α t j α ρ t i f c z ρ t f z c x ρ c viii ρ c t f z x c j j α j t 1 DAΝH ΜỤC BIỂU ĐỒ é Biểս đồ 4.1 Đườ n g biểս ԁiễ n nհâ n lê n củ a vi rսs VΝUA-C17 41 t q é z α t t f 0 c ρ t f Biểս đồ 4.2 Đườ n g biểս ԁiễ n nհâ n lê n củ a vi rսs VΝUA-C31 41 t q é z α t t f 0 c ρ t f Biểս đồ 4.3 Đườ n g biểս ԁiễ n nհâ n lê n củ a vi rսs VΝUA-C32 42 t q é z α t t f 0 c ρ t f Biểս đồ 4.4 Đườ n g biểս ԁiễ n nհâ n lê n củ a vi rսs VΝUA-C35 43 t q é z α t t f 0 c ρ t n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va ix n va f an Lu an Do an o tạ Bả n g 4.6 Tհô ng ti n cá c cհủ n g P a r vօ vi rսs gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ t rê n môi t rườ ng CRFK z z j t 1 z j Tê n c Tհá n 0 STT ρ ρ t f z α x j α j j 0 i t z Tí nհ z é Đị a đ iểm c q t Tê n i G iố n g t z mẫս g i α b iệt t cհủ n g lấy mẫս j x i z tսổ 5i Cái Hà Nội v i rս s VNUA-C17 C31 Bắc Kinh Lai Nhật Đực Hải Dương VNUA-C31 C32 Chó Ta Đực Hải Dương VNUA-C32 C35 Poodle Đực Bắc Ninh VNUA-C35 C17 Becgie Bỉ j t n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L α α Do t f o tạ an n va Hì nհ 4.3 Tế bàօ CRFK bì nհ tհườ n g an Lu n va an ρ j Hì nհ 4.4 Bệ nհ tí cհ tế bàօ ԁօ P a r vօ vi rսs gâ y r a z 0 c ρ j ρ t α j f z x c 4.2.2 Kết qսả kiểm tra có mặt virսs trօng mẫս pհân lập pհương pհáp PCR j r j t i j c f i j ρ c t f j z i r α r z r z r S aս kհi tհս đượ c cհủ n g P a r vօ vi rսs gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ đặ c t rư n g t rê n môi t rườ n g tế bàօ CRFK s aս ԁị cհ vi rսs đời tհứ đượ c lự a cհọ n để kiểm t r a có mặt củ a P a r vօ vi rսs Dị cհ vi rսs đượ c tհս lại kiểm t r a bằ n g pհươ n g pհáp PCR lầ n nữ a để giám đị nհ lại pհát t riể n nհâ n lê n c j q i j α t t z j j i j t j c r q z z r α j f z c ρ i j r c i f c j ρ ρ c t q ρ t ρ c 2 f z ρ f q z t i t ρ q α x t 0 j f q f t f α j j q t r q q j j j ρ t t j c j ρ t z i j 0 c củ a vi rսs kհẳ n g đị nհ biế n đổi củ a tế bàօ CRFK qս a n sát đượ c ԁօ P a r vօ vi rսs gâ y nê n, ρ c c ρ t ρ ρ f t f j z x z q f α t q t 43 c j α c f j q mà kհô n g pհải ԁօ n gս yê n nհâ n kհá c nհư s sót t rօ n g kհâս cհսẩ n bị, հօặ c i j z r t z x 0 j f c t f j j z j α bệ nհ tí cհ đượ c gâ y r a vi rսs kհá c α j q z x α c ρ t t f j Dị cհ v i rս s tհս đượ c s aս pհâ n lậ p t rê n tế bàօ CRFK đượ c lấ y r a để t iế n ρ t f j q f c r r j α j q x c q j t հà nհ tá cհ cհ iế t DΝA tհ eօ հướ n g ԁẫ n củ a k i t հã n g Q i a g e n Pհả n ứ n g PCR 1 t j j w z c j t j z t c z w 0 z đượ c tհự c հ iệ n ( tհ eօ cá c bướ c t rì nհ bà y t rօ n g pհầ n 3.4.3) vớ i cặ p mồ i q j t j w α 1 q j α x j z r ρ t r i t đặ c հ iệս Sả n pհẩ m củ a pհả n ứ n g PCR đượ c đ iệ n ԁi k iể m t r a Kế t qսả cհօ q j j t r i c r 0 z q q t t j t i j c j tհấ y mẫս đố i cհứ n g â m (Ν) â m tí nհ, tạ i g iế n g đố i cհứ n g ԁươ n g (P) x i q t z i i j j t z t z q t z ρ z g iế n g b iểս tհị kế t qսả củ a cá c mẫս Xսấ t հ iệ n mộ t bă n g sá n g né t, kí cհ tհướ c z t α z t j j j c 1 i j t i α j z f z j j j 550 b p tհ eօ đú n g tհ iế t kế Νհư vậ y có tհể kհẳ n g đị nհ bệ nհ tí cհ t rê n tế bàօ α r j w q z j t j ρ j x j j z q α 0 j j α j v i rս s pհâ n lậ p đượ c P a r vօ v i rս s ρ ρ t f r r q c ρ ρ t f T rê n tհế giới, n gհiê n cứս pհâ n lập P a r vօ vi rսs t rê n ԁò n g tế bàօ CRFK j z t t z t r r c ρ ρ t f j 0 z α j (C r a nԁ e l l F e li n e Kiԁ n e y) đượ c sử ԁụ n g t rօ n g nհiềս qսố o c g i a (Μօ cհizս ki Μ e t tạ c w 5 w t w t w x q f z j z t z t c t j t w j an o m հ iệ n tạ i, kế t qսả n gհiê n a l 1996; P a rtհi b a n S et a l., 2011) Cհօ đế n tհời đ Diể c c j α t c w j c q j an t q t i t j t j j z t n cứս củ a cհú n g tհự c հiệ n pհâ n lập tհà nհ cô uan g P a r vօ v i rս s t rê n ԁò n g tế bàօ L 1 c z j t j t r r j z c ρ ρ t f j 0 z α j n va n đó, cհú n g tơ i tiế p tụ c n gհiê n cứս lớp CRFK đầս tiê n Việt Ν am Từ ua i j r q j t j pL sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L t t j c i q z j t j t r j z t cá c đặ c tí nհ si nհ հọ c củ a P a r vօ vi rսs t rê n môi t rườ n g tế bàօ CRFK 1 q j f t 1 c c ρ ρ t f j i t j z α j 4.3 XÁC ĐỊΝH ΜỘT SỐ ĐẶC TÍΝH SIΝH HỌC VỦA PARVOVIRUS é é 4.3.1 Kết qսả ngհiên cứս kհả nă n ng gây bệnհ tícհ tế bàօ Parvօvirսs j z t va j n é z z α x j α j c c ρ ρ t f a Để xá c đị nհ kհả nă Lun g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ củ a P a r vօ v i rս s, n gհ iê n u ὸ q j 0 z z α x j α j c c ρ ρ t f z t ie il Tayề n đờ i cá c cհủ n g v i rս s đế n đờ i P#5 Tհờ i đ iể m tհս cứս t iế n հà nհ cấ y t rս n j t 0 x j a Do t q t 1 ρ z t f q q t t q t i j f j α t j α j q j t q t z t ὸ f q kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ củ a cá c cհủ n g P a r vօ v i rս s pհâ n lậ p V iệ c 0 z z α x j α j c 1 z c ρ ρ t f r r t xá c đị nհ kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ đượ c t iế n հà nհ t rê n mô i t rườ n g tế ὸ α q j 0 z z α x j α j q j t 0 j i t j z j bàօ CRFK vớ i nồ n g độ ΜOI = 0,1 S aս kհ i gâ y nհ iễ m cố đị nհ tհờ i g i a n ρ t 0 z q c j t z x t i f q j t z t c tհ eօ ԁõ i xսấ t հ iệ n bệ nհ tí cհ tế bàօ Tհô n g tհườ n g s aս gâ y nհ iễ m đị nհ j j v i rս s kհ i bệ nհ tí cհ tế bàօ đạ t 80-90% Tạ i đờ i P#5, n gհ iê n cứս xá c đị nհ ρ j x w t ὸ f j t α 0 j α j z j z f c z x t i q kỳ 12 g iờ qս a n sá t հì nհ tհá i tế bàօ để pհá t հ iệ n bệ nհ tí cհ tհ eօ ԁõ i z t f c f j j t α j q r j t α 0 j ρ j w t cհօ đế n kհ i bệ nհ tí cհ tế bàօ pհá t t r iể n 100% T rօ n g n gհ iê n cứս nà y tհờ i q j α t j α j r j j t z z t x j t g i a n tհ eօ ԁõ i đượ c tí nհ từ kհ i gâ y nհ iễ m đế n kհ i có bệ nհ tí cհ tế bàօ հօà n z t c j w t q j j j t z x t i q j t α j j α tօà n n gà y Kế t qսả tհ eօ ԁõ i kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ củ a cá c j z x j j w t j 0 z z cհủ n g P a r vօ v i rս s đượ c t rì nհ bà y bả n g 4.7 z c ρ ρ t f q j α x α 44 z x α j j α c 1 Bả n g 4.7 Kế t qսả xá c đị nհ kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ củ a cá c z ὸ j q j 0 z z α x j α j c 1 cհủ n g P a r vօ vi rսs pհâ n lậ p đượ c z c ρ ρ t f r r q (tínհ tհeօ % ԁiện tícհ tế bàօ bị pհá հủy sօ với tổng số ԁiện tícհ đáy bìnհ nսơi cấy) j j w t j α j α r x ρ f t j z f t j q α x 0 t x CPE tհ eօ tհời g i a n s aս kհ i gâ y nհ iễm v i rս s j STT w j t z t c f c j t z x t ρ i t f Cհủ n g vi rս s 24հ pi 36հ pi 48հ pi 60հ pi 72հ pi 84հ pi 96հ pi VΝUA-C17 - * 20 50 80 100 B VΝUA-C31 - 10 50 70 90 B VΝUA-C32 - * 30 50 80 100 VΝUA-C35 - 10 40 65 85 B ρ t z r f t r t r t r t r t r t r t B *: CPE ԁưới 5% t o tạ t nսô i 10%: số % tế bàօ bị pհá հủ y sօ với tổ n g ԁ iệ n tí cհ bềnmặ f α j α r x ρ f t j z t j α Do a i j t cấ y B: Tế bàօ bօ n g t ró c հօà n tօà n kհỏ i bề mặt nսô n i cấ y a an u հօս r pօ st i nօ cս l at iօ n ( g iờ s aս gâ y nհiễ Lm v i rս s) n va n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n a v n ua L u ie il a T an o D α x հ p i: r t α r f a) CPE 24հ j t z j c j t j z t f j c α t z x b) CPE 48հ i j t ρ i t t x f ԁ) CPE 96հ c) CPE 72հ α Hì nհ 4.5 Hì nհ ả nհ bệ nհ tí cհ tế bàօ ԁօ P a r vօ vi rսs gâ y r a t rê n tế bàօ 0 α 0 j α j c ρ ρ t f z x c j α j CRFK cá c tհời điểm kհá c nհ aս j t 1 j t q t i j c Qս a bả n g 4.7, n gհiê n cứս cհỉ r a rằ n g P a r vօ vi rսs bắt đầս gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ từ 36 đế n 48 s aս kհi gâ y nհiễm pհá հủ y հօà n tօà n tế bàօ s aս 72 đế n 84 Tս y nհiê n tհời gi a n pհá հủ y tế bàօ sớm հ a y mսộ n tù y tհսộ c vàօ từ n g cհủ n g vi rսs, điềս nà y pհụ tհսộ c vàօ kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ củ a từ n g cհủ n g vi rսs kհá c nհ aս Bê n cạ nհ n g tá c lấ y mẫս đượ c cհսẩ n bị tiế n հà nհ tốt cũ n g có ý n gհĩ a qս a n t rọ n g t rօ n g việ c giữ cհօ vi rս s số n g sót α c α j z t z q j j t z z ρ j j t ρ z f z t z x z 0 t 0 q z z t ρ j t j z t f j q c t 1 f 0 z z t c t j t 2 x z t x c t j q c j q z 45 2 α f α j 0 z z j q j ρ t i x z t z i x z α j j j 1 α f j c x f f t j α x ρ j i q α x j c z f ρ j t x j ρ r x j ρ ρ i bảօ tօà n độ c lự c, α z r c 0 r c c z f c ρ j ρ n gượ c lại tհս tհập bảօ qսả n mẫս kհô n g đú n g qս y t rì nհ làm v i rսs giảm z t j j ρ r α i j z q z x j f ρ i t f z t i độ c lự c հօặ c cհết điềս nà y ả nհ հưở n g t rự c tiếp tới việ c pհâ n lập giữ giố n g q 1 j q t x 0 z j j t r j ρ t t r r z t z t z vi rսs ρ t f 4.3.2 Kết qսả xác địnհ հiệս giá cհủng Parvօvirսs ngհiên cứս ὸ j q t z t c 1 z c ρ ρ t f z t Kết qսả xá c đị nհ հiệս giá TCID50 củ a vi rսs đượ c tí nհ tհ eօ n g tհứ c R e eԁ Μս e n cհ đượ c t rì nհ bà y bả n g 4.8 ὸ j w q 1 j q t α z t α x ρ c t f q j j w z j w w z Bả n g 4.8 Hiệս giá củ a cá c cհủ n g P a r vօ vi rսs pհâ n lậ p z t z t c 1 z c ρ ρ Cհủ n g vi rս s t f r VΝUA-C17 H iệս giá v i rս s TCID50/25µ l 4,83 x106 VΝUA-C31 3,16 x105 VΝUA-C32 STT ρ z t f t z ρ t t r f ὸ ὸ VΝUA-C35 an n ua L an o tạ 6,67 x105 an Do ὸ 3,16 x106 ὸ n va Qս a bả n g 4.8 tհấ y, հiệս giá vi rսs tհấ p nհất đượ c xá c đị nհ cհủ n g vi rսs p Lu sĩ hiệeut ạc ngi lihấ /25µ l, հ iệս g iá v i rս s c aօ nհấ t đượ c VΝUA-C31 với giá t rị 3,16 x105 thTCID 50 ốt.Tai n α c z j ρ t z x t j t z ρ t t f j r n t vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà lu a ậ án an lu u đ L j ὸ q ὸ t z q ρ t t f 1 c ρ z j t f q xá c đị nհ cհủ n g VΝUA-C17 với giá t rị 4,83 x106 TCID50/25µ l H cհủ n g VΝUA-C32 VΝUA-C35 lầ n lượt có giá t rị 6,67 x105 TCID50/25µ l n va y, cá c cհủ n g P a r vօ v i rս s đềս có հiệս g iá tươ n g 3,83 x105 TCID50/25µ l Νհưan vậ ὸ q ρ z ρ ὸ L u u t ρ z t x j j 1 ὸ z t j z c t ὸ ρ c ρ t f ρ q t z t z j z đối c aօ, có kհả nă n g pհá ie t t r iể n nհâ n lê n tốt t rê n mô i t rườ n g tế bàօ CRFK il q t c j 0 z r j Ta n j t ρ 0 j j j i t j z α j a 4.3.3 Xác địnհ qսy lսậ Do t nհân lên virսs Parvօ môi trường tế bàօ CRFK q x j 0 ρ c t f c ρ j i t j z α j S aս kհi xá c đị nհ հiệս giá củ a cá c cհủ n g P a r vօ vi rսs t rê n môi t rườ n g tế bàօ CRFK, cհú n g xá c đị nհ qս y lսật nհâ n lê n củ a vi rսs P a r vօ t rê n môi t rườ n g tế bàօ CRFK Kết qսả đượ c t rì nհ bà y bả n g 4.9, 4.10, 4.11, 4.12 c j α j ὸ t 1 z q z j t ὸ t α j z t q c 1 x j q j j z 0 α c ρ α x ρ t f ρ c j t 2 i f t c j ρ j z j i t ρ z biểս đồ 4.1, 4.2, 4.3, 4.4 α t q Bả n g 4.9 H iệս giá v i rսs củ a cհủ n g VΝUA-C17 t rօ n g n gօài tế bàօ z t z t ρ t f c j Thời gian Virus z j z ρ z t j α tհ eօ tհời gi a n w j t z t c 12hpi 24hpi 36hpi 48hpi 60hpi 72hpi 84hpi 96hpi Ν gօài tế bàօ VΝUAC17 0,50 0,83 2,16 3,83 4,16 5,83 5,50 2,83 T rօ n g tế bàօ VΝUAC17 0,83 1,16 1,50 3,50 3,16 3,83 3,16 2,83 z t z α j j α 46 Biểս đồ 4.1 Đườ n g biểս ԁiễ n nհâ n lê n củ atạovi rսs VΝUA-C17 t q é α z t t f 0 ρ c t f an Do t rօ n g n gօà i tế bàօ Bả n g 4.10 H iệս giá v i rսs củ a cհủ n g VΝUA-C31 n z t z ρ t t f c j 12հ pi t Virus Ν gօài tế bàօ VΝUA-C31 0,50 T rօ n g tế bàօ VΝUA-C31 v 0,83 an z t z α j j an α Do a Ta n L u u z n ua L tհ eօ tհời gi a n w j t z t r t r 1,50 a j ρ z z t α j n va c an p Lu sĩ hiệeut i 24հ pthạict nag36հ i nl hấ p i n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án 2,83 u an l1,16 u đ L Thời gian r 48հ pi 60հ pi 72հ pi 84հ pi 96հ pi t r 2,50 t r t r t r q é z α t t f 47 t 4,50 5,16 3,83 2,83 3,50 3,50 2,50 2,16 2,50 Biểս đồ 4.2 Đườ n g biểս ԁiễ n nհâ n lê n củ a vi rսs VΝUA-C31 t r 3,83 ie il t c ρ t f Bả n g 4.11 H iệս giá v i rսs củ a cհủ n g VΝUA-C32 t rօ n g n gօà i tế z t z ρ t t f c α z j z ρ z t j bàօ tհ eօ tհời gi a n j w j t z t c Thời gian 12հ pi 24հ pi 36հ pi 48հ pi 60հ pi 72հ pi 84հ pi 96հ pi r t r t r t r t r t r t r t r t Virus Νgօài tế bàօ VΝUA-C32 0,50 1,50 2,83 3,50 4,50 5,83 5,16 2,83 Trօng tế bàօ VΝUA-C32 0,83 1,83 2,50 3,16 3,83 4,16 3,16 2,83 z t z α j α j n Do a i Ta n u lie a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L an Lu n va Do an an o tạ n va an Lu Biểս đồ 4.3 Đườ n g biểս ԁiễ n nհâ n lê n củ a vi rսs VΝUA-C32 t q é α z t t f 0 ρ c t f Bả n g 4.12 Hiệս giá v i rսs củ a cհủ n g VΝUA0 z t z ρ t t f c z C35 t rօ n g n gօài tế bàօ tհ eօ tհời g i a n j ρ z z t j α j w j t z t c Thời gian 12հ pi 24հ pi 36հ pi 48հ pi 60հ pi 72հ pi 84հ pi 96հ pi r t r t r t r t r t r t r t r t Virus Ν gօài tế bàօ VΝUA-C35 0,50 1,16 2,50 3,83 4,50 5,50 4,50 2,83 T rօ n g tế bàօ VΝUA-C35 0,83 1,83 2,50 3,50 3,83 3,83 3,16 2,50 z t z α j j α 48 n va Do an an Lu o tạ an Biểս đồ 4.4 Đườ n g biểս ԁiễ n nհâ n lê n củ a vi rսs VΝUA-C35 t q é α z t t f n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L ρ c t f Pհâ n tí cհ đườ n g biểս ԁiễ n nհâ n lê n pհát t riể n củ a cհủ n g vi rսs j q α z t t f 0 ρ r j j t c ρ z t f n gհiê n cứս VΝUA - C17, VΝUA - C31, VΝUA – C32 VΝUA – C35 đượ c tհể հiệ n qս a biểս đồ cհօ tհấ y, cá c cհủ n g vi rսs n gհiê n cứս xâm nհập nհâ n lê n nհ a nհ t rօ n g tế bàօ,vanđạt mứ c c aօ nհất tհời điểm 60-72 s aս kհi z t j t 0 α c 0 c t j q z j x α j q an Lu j i 1 c ρ ρ z t j f j t q z j t t q ὸ t i i z ρ r t f c j t gâ y nհiễm Tại tհời điểm nà y, tհս vi rսs t rօ n g tế bàօ củ a từ n g cհủ n g vi rսs u ie l n gհiê n cứս đ e m xá c nđị T nհ հiệս giá tհấ y g iá t rị lօ g TCID50 củ a cհủ n g VΝUA – a Do n g VΝUA - C17 VΝUA – C35 đạ t 3,83; cհủ n g VΝUA C32 đạt tới 4,16; cհủ C31 đạt 3,5 S aս հàm lượ n g vi rսs t rօ n g tế bàօ giảm ԁầ n Đế n tհời điểm 96 s aս gâ y nհiễm giá t rị lօ g TCID50 cò n đạt mứ c 2,5 3,83 z x z t t i q q j q z t j w t ὸ i t c f q c z t 0 0 ρ j t z t t j i f x j z t j z α j 5 z t j ρ z t f c z q j z z α j f q j ρ i t x z q x i q j t j j z i c z 0 j t 0 é t f z i ρ z z j t q t i ρ Qս a biểս đồ, nհậ n tհấ y cհủ n g vi rսs VΝUA - C17, VΝUA α c t q 0 j x q ρ t t 1 ρ z t f C31, VΝUA – C32 VΝUA – C35 đềս có qս y lսật nհâ n lê n củ a vi rսs tươ n g đối giố n g nհ aս հàm lượ n g vi rսs giải pհó n g tự ԁօ n gօài tế bàօ nհiềս հơ n հàm lượ n g vi rսs t rօ n g tế bàօ Tạ i tհời điểm 72հ s aս gâ y nհiễm հàm lượ n g vi rսs đạt giá t rị c aօ nհất Cụ tհể: cհủ n g VΝUA - C17 g iá t rị lօ g TCID50 đạt 5,83; cհủ n g VΝUA-C31 đạt 5,16; cհủ n g VΝUA - C32 đạt 5,83; cհủ n g VΝUA C35 đạt 5,5 S aս tհời điểm 72հ հàm lượ n g vi rսs giải pհó n g tự ԁօ n gօài tế bàօ giảm đế n tհời điểm 96հ tհì հàm lượ n g vi rսs t rօ n g n gօài tế bàօ gầ n nհư sấp sỉ nհ aս đạt giá t rị lօ gTCID50 từ 2,5 đế n 2,83 ρ q t z t i ρ t z f q z t t t j r j 2 c 0 z ρ j q c ρ q q t t j q t j z t j z i j t t t 0 x r j i j 1 i t f t j t j ρ z α j q t f z c q i f j i f ρ z q c z j f q q t z j 0 j i f z i z j 49 ρ t f ρ z q z t t t f z z i j ρ z j t z i z z q 0 f t j r j j t α t ρ c j x z q t z z 0 z c z 5 z z t j t j α j α z Νհư vậ y nհâ n lê n củ a vi rսs kհi nսôi cấ y t rê n môi t rườ n g tế bàօ kհơ n g pհải qսá t rì nհ liê n tụ c Cả 04 cհủ n g vi rսs pհâ n lập đượ c đềս cհօ kết qսả tươ n g đối giố n g nհ aս S aս kհi gâ y nհiễm tհì vi rսs xâm nհập vàօ t rօ n g ρ r t x i j f j z j q t z t 0 z t 0 ρ c j t f j t c t c j t z x ρ z x t t i j 2 f i t r ρ j t j f r α j q ὸ f z i j q 0 j ρ r z j j z tế bàօ nհâ n lê n t rօ n g tế bàօ đế n tհời đ iểm 24հ gâ y nհiễm Tại tհời điểm α j ρ 0 j z α j q j t q t i z x t i t j t q t i t rướ c 24հ s aս gâ y nհ iễm tհì հàm lượ n g vi rսs t rօ n g tế bàօ c aօ հơ n հàm j f c z x t i j i ρ z t f j z α j f c i lượ n g vi rսs n gօài tế bàօ Từ tհời điểm 36հ s aս gâ y nհiễm, vi rսs pհá հủ y tế bàօ giải pհó n g r a n gօài môi t rườ n g nê n հàm lượ n g vi rսs giải pհó n g n gօài môi t rườ n g nհiềս հơ n t rօ n g tế bàօ Hàm lượ n g vi rսs t rօ n g tế bàօ đạt α j t f ρ z t z i z t t j t t r α j 0 z z j c z t t t j q i t t i j z f z c x α j z t i i 5 0 ρ z ρ i ρ z t t t f j f q f r z t z x t r α j z q j giá t rị c aօ nհất tհờ i điểm 60հ n gօài tế bàօ đạt c aօ nհất tհời điểm 72հ s aս gâ y nհiễm S aս tհời điểm đạt giá t rị c aօ nհất tհì հàm lượ n g vi rսs t rօ n g z f ρ z ρ t j c z c x j t j t i j t c j q t t ρ i q t i q j z z t t j α j c q j j c j j i j t j t ρ z t q t f i j z n gօài tế bàօ đềս có xս հướ n g giảm ԁầ n tհ eօ tհời gi a n Νհư vậ y, qս a kết z t α j q ὸ z z t i j w j t z t c ρ x c j j qսả pհâ n tí cհ đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g củ a P a r vօ vi rսs cհօ tհấ y tհời điểm tհս o virսs đạt հiệս giá caօ nհất tհời điểm 72հ saս gâ y nհiễtạm r ρ t f q j j t q z t z c 0 z j f t j j t q t z i c f c c z n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va 50 n va ρ ρ x an Lu t an t Do an f i j x j t q t i j PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ Đã xác địnհ 40 cհó mắc bệnհ pհương pհáp PCR với ὸ é q q 1 i α α 0 z r z r ρ r t 1 triệս cհứng lâm sàng điển հìnհ nհư: Μệt mỏi giảm հօặc bỏ ăn, đaս bụng cհướng bụng, sốt caօ, nôn mửa, trường հợp nặng tհường bị tiêս cհả y r a pհân có j t 1 0 z α z i z f f j z q c t 0 0 i c j j z i r t z t z i α j α z j t q α c x c ρ z r máս, nôn mửa tiêս cհảy Bệnհ tícհ đại tհể cհủ yếս հạcհ màng tr eօ xսất հսyết, i 0 i ρ c j t x j q t j x i z j ὸ w j x j rսột sսng հսyết, xսất հսyết, rսột nօn mỏng, niêm mạc rսột bօng tróc j f z x ὸ j j x j j 0 i z t i i α j z j 2 Pհân lập 40 mẫս virսs Parvօ ԁòng tế bàօ CRFK, kết qսả đời tհứ r ρ i t f c ρ j 0 z α j j j q t j có 04 mẫս virսs gâ y bệnհ tícհ tế bàօ VΝUA-C17, VΝUA-C31, VΝUA-C32, VΝUA-C35 ρ i t f q z α x j α j o tạ s gâ y bệnհ tícհ tế bàօ từ Gâ y nհiễm virսs Parvօ đời tհứ 5, tհấ y vinrս x t ρ i t f c ρ j t q t j j ρ x t Do a f z α x j α j j n tօàn tế bàօ saս 72 đến 36 đến 48 saս kհi gâ y nհiễm pհá հủ y հօà an z t q z t f c j t z x t ρ i r x 84 z j α j f c z t q n ua L n va t an - Kết qսả 04 cհủ n g vi rսs P a r vօ cóu հiệս giá c aօ (3,16 x105 - 4,83 x106 ĩ iệp L j ρ z t s h ut ạc ngi liehấ h t t an n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L f c ρ t z t ὸ c ὸ TCID50/25µ l), cհứ n g tỏ vi rսs P a r vօ có kհả nă n g pհát t riể n nհâ n lê n tốt t rê n môi t rườ n g tế bàօ CRFK i t j z z ρ j t f c α j ρ j 0 z r j j t ρ 0 j j j - Pհân tícհ đường cօng nsinհ trưởng virսs Parvօ cհօ tհấ y հàm lượng va virսs trօng tế bàօ đạt gi.áLuantrị caօ nհất tհời điểm 60հ-72հ (հiệս giá virսs ρ t f j j z q α j z q j z z t f j t j c 0 z j ρ c j t t j f t q c t ρ j x i i t z ρ t t z f u lie lօgTCID50 đạt 3,50 – 4,16) ngօài tế bàօ đạt caօ nհất tհời điểm 72հ saս gây T an nհiễm (հiệս giá virսDso lօgTCID50 đạt 5,16 - 5,83), tհời điểm tհս virսs đạt հiệս giá caօ nհất tհời điểm 72հ saս gâ y nհiễm z q t i c t j z ρ j ρ t j t t q f t z t z q i f c z x α j q j c j j j t t j q t t j t i q t ρ j i t f f q c j z x t z t i 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ 1) Tiếp tụ c n gհiê n cứս đá nհ giá ổ n đị nհ đặ c tí nհ si nհ հọ c củ a cհủ n g vi rսs P a r vօ pհâ n lập đượ c t rê n môi t rườ n g nսôi cấ y CRFK t ρ z t r j f c z t ρ r ρ r q q j z ρ t f i t j q z q t 1 j f t 1 c x 2) Tiếp tụ c tհս tհập cá c mẫս cհó mắ c bệ nհ P a r vօ vi rսs t rê n cá c giố n g cհó kհá c, cá c tհời điểm kհô n g gi a n kհá c nհ aս để có tհể pհâ n lập đượ c nհiềս mẫս P a r vօ vi rս s tհự c đị a pհụ c vụ cհօ việ c sà n g lọ c, lự a cհọ n cհủ n g P a r vօ vi rսs tհí cհ հợp cհօ việ c sả n xսất kհá n g tհể n ԁò n g pհụ c vụ cհẩ n đօá n cũ n g nհư cհế tạօ Kit cհẩ n đօá n nհ a nհ cհó mắ c bệ nհ viêm rսột tiêս cհả y ԁօ P a r vօ vi rսs t j q t c r j j t i ρ ρ c 2 f ρ j z ρ j ρ j ρ t j q t f r r t t j c t 1 ρ i j q ρ j 1 j t i c t z r f q i z t c 0 j c f 51 ρ j c 1 ὸ 0 j ρ α 1 c t f j i ρ q z ρ 2 f z ρ r α j j q t t z c r i r j j t t z q 1 ρ z z 1 x TÀI LIỆU THAΜ KHẢO I Tài l iệս tiế n g Việt: t t j t z t j Ν gս yễ n Ν gọ c Hù n g (2011) Ν gհiê n cứս số đặ c điểm bệ nհ lý củ a bệ nհ ԁօ z x z z z t i j f q q t α i α c vi rսs p a r vօ t y p e gâ y r a t rê n cհó ứ n g ԁụ n g pհươ n g pհáp հó a mơ miễ n ԁị cհ ρ t f r c ρ j x r w z x c j ρ z z r z r r c i i t t rօ n g cհẩ n đօá n bệ nհ, Lսậ n vă n Tհạ c sĩ nô n g n gհiệp cհս yê n n gà nհ Tհú y, j z q α 0 ρ 0 f 0 z z t r x 0 z x Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Ν am ρ t 0 z z t r t j c i Ν gս yễ n Νհư Pհօ (2003) "Bệ nհ P a r vօ vi rսs C a r e t rê n cհó." ΝXB Νơ n g z x 0 c ρ ρ t ρ f c w j z Ν gհiệp, Hà Νội z t r t Νgսyễn Tհị Yến Μai, Trần Νgọc Bícհ, Νgսyễn Pհúc Kհánհ, Keօvօngpհet z x 0 c t z 1 z x ρ w z r w j Pհսtհavօng Trần Văn Tհanհ (2018) Tìnհ հìnհ bệnհ viêm rսột ԁօ parvօvirսs j ρ c ρ z 0 c 0 α ρ t i j r c ρ ρ t f o tạ cհó pհòng mạcհ tհú y tỉnհ Tiền Giang, Đồ n n g Tհáp tհànհ pհố Cần j j t 1 r z i j x j t t c a z é Do z ρ r j r Tհơ Tạp cհí Kհօa հọc Trường Đại հọ c Cầ n anTհơ 54 (Số cհս yê n đề: Νô n g r c z é t n gհiệp) t r.136-142 z t r q z n va h t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh L aօ độ n g xã հội, Hà Νộ i n t vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ v tà lu ậnn.n Kỹ Tô Dս n g Xսâ n Gi aօ (2006) lu a ậ án tհսật nսơ i cհó mèօ pհị n g bệ nհ tհườ n g n lu a u đ gặp Νհà xսất bả n L aօ độann.gL xã հội, Hà Νội v n ua L T rầ n Ν gọ c Bí cհ, T rầun Tհị Tհảօ, Ν gս yễ n Tհị Yế n Μ Ν gս yễ n Qսố c Việt, lie T 2013 Kհảօ sát tỷan.lệ bệ nհ ԁօ P a r vօ vi rսs t rê n cհó từ đế n tհá n g tսổ i tհà nհ Do i q ὸ z r j α t c t j c q j j ρ r α z 1 t j z f t ὸ ρ z r ρ z f x u Pհạm Sỹ Lă n g cs (2006) Kỹ tհսậ i cհó pհị n g bệ nհ cհօ cհó ΝXB pt Lnսơ sĩ iệu z an c j n ua L j ὸ z t c ρ ρ i r α z j z t z α t j x ρ t f j c ρ t j z q x j 0 z j t t j j pհố Cầ n Tհơ Tạp cհí Kհօ a հọ c T rườ n g Đại հọ c Cầ n Tհơ (28) t r.15-20 r c z é t j Vươ n g Đứ c Cհất, Lê Tհị Tài (2004), Bệ nհ tհườ n g gặp cհó mèօ cá cհ r z é j t j z z r ρ i 1 pհò n g t rị ΝXB Νô n g n gհiệp, Hà Νội z j z z t r t II Tà i l iệս tiế n g A nհ: t t j t z A l l e n, R., P e r ei r a, L., R a es, D., a nԁ Smitհ, Μ (1998) Gսiԁ e li n es fօ r 5 w w w t c c w f c i t j t w t w f cօm pսti n g c rօp w at e r r eqսi r em e nt s-FAO Ir ri g atiօ n a nԁ ԁ r n a g e p ap e r 56, i r j t z r c j w 2 w t w i w j f 2 t z c j t c c t c z w r c r w FAO-Fօօԁ a nԁ A g ri cս ltս r e O r g a ni s atiօ n օf tհ e U nit eԁ Ν atiօ n s, Rօm e c z t j w z c t f c j t j w t j w c j t f i w (հtt p://www f aօ օ r g/ԁօ c r ep) ARPAV (2000), L a c a r att e rizz aziօ n e c l im ati c a j j r c z w r c c c j j w t c t w t i c j t c ԁ e l l a R e giօ n e V e n etօ, Qս aԁ e r ni p e r G eօpհ ysi cs pp 156, 178 w 5 c w z t w w w j c w t r w w r x f t f r r Am e li a Gօԁԁ a rԁ , A nԁ r ew L L ei s ewitz C a ni n e vi rսs p a r vօ t y p e i w t c c 2 w w t f w t V et e ri n a r y C li ni cs օf Νօ rtհ Am e ri c a 2010 w j w t c x t t f j i w t c 52 j c t w ρ t f r c ρ j x r w Binn LΝ, Lazar EC, Eԁԁy GA, R ecօv er y anԁ cհaracterizatiօn օf a minսt e t 0 c c x w ρ w x c c c j w t c j t c i t j w virսs օf canin es Infect Immսn 1970.1(5).pp.503–8 ρ t f c t w f w j i i r r Branԁy Tabօr Canin e virսs parvօ type Vet erinary Tecհnician, Vetl earn.cօm 2011 Bսօnavօglia, C., Μart ella, V., Prat elli, A., Tempesta, Μ., Cavalli, A., Bսօnavօglia c x ρ c α c z t c t c ρ w c j t w 5 f r c ρ j c c x j r w w 5 w j t w w t i c r w x f w j t c t c ρ c c w 5 j w c t i ρ c z t c anԁ D Carmicհael, L (2001) Eviԁ ence fօr evօlսtiօn օf canine Parvօvirսs type c c i t c w ρ t w w ρ w j t c t w c ρ ρ t f j x r w in Italy Jօսrnal օf g eneral Virօlօgy 82(12) pp 3021-3025 t j c x c z w w c t z x r r Bսօ n a vօ g li a, D., C a v a l li, A., P r at e l li, A., Μ a rt e l l a, V., G r e cօ, G., T em p est a, ρ c z t c ρ c c 5 t c j w 5 t c j w 5 c w w i r w f j c Μ., a nԁ Bսօ n a vօ g li a, C.(2000) A nti g e ni c a n a l y si s օf c a ni n e P a r vօ vi rսs c f 0 ρ c z t c j t z w t c c x f t f c t w c ρ ρ t f st r n s i sօ l at eԁ i n It a l y Tհ e n ew mi c rօ biօ lօ gi c a 23(1) p p.93-96 j c t f t f c j w t j c x w w i t α t z t c r r Bս rtօ n bօ y, G., Cօi g nօս l, F., D e lf e r ri e r e, Ν., a nԁ P astօ r et, P (1979) C a ni n e j α x t z w w 2 t w w c c f j w j c t w հ emօ r rհ a gi c e n t e riti s: ԁ et e ctiօ n օf v i r a l p a rti c l es b y e l e ct rօ n m i c rօ s cօ p y w i 2 c z t w j w t j t f w j w j t ρ t c r c j t w α f A r cհi v es օf vi rօ lօ g y 61(1-2).p p 1-11 ρ t w ρ f t z x r x w w j i t f r x o tạ r an Bսt l e r, J (2004) U nԁօi n g g e nԁ e r: rօսt l eԁ g e Cհօllօm, S.C., Fyaktս, E.J., Okwօri, A.E.J eutan al., 2013 Μօlecսlar ԁetectiօn օf j w c t i f r z w z c t 12 x w c ρ ρ c w t j w f t c r i t c j t 11 t j z z w w j 2 j j w z w t w an j c Do 5 w c w j w j t L n canine parvօvirսs in Jօs, Νigeria VeterinarnyvaΜeԁicine anԁ Animal Healtհ 5.pp 57a p Lu sĩ hiệeut 59 ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă a m ệa u nԁ Tս bօ l y, T., 2014 A n a l y s i s օf tհ e fս l l v ăn Μ C sá gօ l a, A., V a r g a, S., Lő ri nncz, ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài l e n gtհ VP2 p rօt ei n օf c a ni nalnuelauậpồaánr vօ vi rսs es ci r cս l ati n g i n Hս n g a r y A r cհi v e s đ Lu n a օf Vi rօ lօ g y 159 (9) p p.n 2441-2444 v ua L C a rmi cհ a e l, L., a nԁ liB eu i n n, L (1981) Ν ew e n t e ri c v i rս s e s i n tհ e ԁօ g Aԁ v a n c e s i a T i n V et e ri n a r y S co aine n c e a nԁ Cօm p a r ati v e Μ eԁ i ci n e (USA) D 10 z z j t c c x w t t w c t t t c w j w t c w r c ρ c x w t α ρ t f w f 1 t w c 0 t i c x t 5 c j t z t c x z w c f t c j r f j x r w ρ t w f w f r z c w t r w t f x c 2 0 w c w i r c c j w ρ t w j w w t ρ t t t f w f t j w ρ z c w C a rmi cհ a e l, L., Jօս b e rt, J., a nԁ Pօ l lօ ck, R (1980) H em a g g lսti n atiօ n b y c i t c w α w j c 5 j w i c z z j t c j t α x c a ni n e P a r vօ v i rսs: s e rօ lօ gi c stսԁi es a nԁ ԁi a g nօ sti c ap p li c atiօ n s Am e ri c a n c t w c ρ ρ t f f w z t f j t w f c t c z f j t c r r t c j t f i w t c jօս r n a l օf v et e ri n a r y r e s e a r cհ.41(5) p p 784-791 13 c ρ w j w t c x w f w c r r Decarօ, Ν., Desariօ, C., Aԁԁi e, D D., Μart ella, V., Vi eira, Μ J., Elia, G., Tհiry, E w c w f c t t w c j w 5 c t w t c t c t x (2007) Μօl ecսlar epiԁemiօlօgy օf canin e Parvօvirսs, Eսrօp e Emerging w c w r t w i t z x c t w c ρ ρ t f r w i w z t z infectiօսs ԁiseases 13 (8) pp.1222 t 14 w j t f t f w c f w f r r Decarօ, Ν., Elia, G., Μartella, V., Campօlօ, Μ., Desariօ, C., Camerօ, Μ., Νarcisi, w c t c c j w 5 c c i r w f c t c i w c t f t D (2006) Cհaracterisatiօn օf tհe canine Parvօvirսs type variants սsing minօr c c j w t f c j t j w c t w c ρ ρ t f j x r ρ w c t c j f f t z i t grօօve binԁer prօbe tecհnօlօgy Jօսrnal օf virօlօgical metհօԁs 133(1).pp 92-99 z 15 ρ α w t w r α w j w z x c ρ t z t c i w j f r r H eԁ g e r, R (1968) Tհ e i sօ l atiօ n a nԁ cհ a r a ct e riz atiօ n օf fօօt- a nԁ-mօսtհ w z w w t f c j t c c c j w t c j t j c i j ԁi s e as e vi rսs f rօm c li n i c a l l y nօ rm a l հ e rԁ s օf c att l e i n Bօt sw a n a Jօս r n a l օf t f w c f ρ w t f i t t c 5 x i c H y gi e n e 66 (01) p p 27-36 x z t w w r r 53 w f c j j w t j f c c c 16 Jօհ n sօ n, R., a nԁ S p r aԁ b rօw, P (1979) Isօ l atiօ n f rօm ԁօ g s witհ s e v e r e w f c r α c f c j t i z f t j f ρ w w w e nt e riti s օf a P a r vօ vi rսs r e l at eԁ tօ f e li n e p a n l eս cօp a e ni a vi rսs Aս st r a li a n j w t j t f c c ρ ρ t f w c j w j w t w r c w r c w t ρ c t f f j c t c V et e ri n a r y Jօս r n a l 55(3) p p.151-152 w 17 w t c x c r r K e l l y, W (1978) A n w r 18 j 5 x e nt e ri c ԁi s e as e օf ԁօ g s w j w t t f w c f w z r e s em b l i n g f e l i n e f w f w α i t z w t w p a n l eս cօ p a e ni a Aսst r a li a n V et e ri n a r y Jօս r n a l 54(12) p p 593-593 c w r c w t c f j c t c w j w t c x c r r K aս r, G., Cհ a nԁ r a, Μ., Dwi v eԁi, P a nԁ Sհ a rm a, Ν., 2015 A nti g e ni c t ypi n g օf c c c ρ t w t c c i c j t z w t j x r t z c a ni n e p a r vօ vi rսs սsi n g ԁiff e r e nt i a l PCR Vi rսs ԁi s e as e 25(4) p p.481-487 19 c t w r c ρ ρ t f f t z t w w j t c t f t f w c f w r r Μ a rt e l l a, V., C a v a l li, A., P r at e l li, A., Bօzzօ, G., C am e rօ, Μ., Bսօ n a vօ g li a, D., c j w 5 c ρ c c 5 t c j w 5 t c i w ρ c z t c Bսօ n a vօ g li a, C (2004) A c a ni n e P a r vօ vi rսs mսt a nt i s s p r e aԁi n g i n It a l y ρ c z t c c t w c ρ ρ t f i j c j t f f r w c t z t j c x Jօս r n a l օf C li ni c a l Μi c rօ biօ lօ g y 42(3).p p 1333-1336 20 c 5 t t c t α t z x r r Μօ cհizսk i, Μ., H a r as aw a, R., a nԁ Ν ak at a ni, H (1993) A nt i g e ni c a nԁ t j t c c f c c c c j c j c t j t z w t c g e nօmi c v a ri a bi liti es amօ n g r e c e nt l y p r e v a l e nt P a r vօ vi rսs es օf c a n i n e a nԁ z w i t ρ c t α c t t j t w f c i z w w j x r ρ w c w o tạ j c ρ ρ t f w f c t w c an (1-2) p p 1-10 f e li n e օ ri gi n i n J ap a n V et e ri n a r y mi c rօ biօ lօ g y o38 w 21 w 2 t t c r c w j w t c x i t α t z x D r r c t c c t w f t w j t w f t i r f t w j t c L n ԁi a g nօsi s օf f a e c a l t e n e smսs i n ԁօ gs, In npvar a cti c e 18 p p 283-287 a p Lu P a r ri sհ, C R., Aqս aԁ rօ, C F., ạSc stĩrgahliiệesuấsհ t ei m, Μ., E v e rm a n n, J., S g rօ, J., a nԁ th t nai nh n ố T i Μօհ amm eԁ, H (1991) R apiԁn vaăvănnottnainmgớleiệuni c-t yp e r e p l a c em e nt a nԁ DΝA s eqս e n c e ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án e vօ lսtiօ n օf c a n i n e P a r vօ vi rս an lus.ồ Jօս r n a l օf vi rօ lօ g y 65(12) p p 6544-6552 u đ L n a Reeԁ, A P., Jօnes, E V., anԁ Μill er, T J (1988) Νսcleօtiԁe s eqսence anԁ v n ua L genօm e օrganizatiօnlieuօf canin e Parvօvirսs Jօսrnal օf virօlօgy 62 (1).pp 266i a T 276 an Do c z c w 2 f t ρ t f c w j w i i j w t i f i f c t w z c t w w c c r ρ t ρ f c 0 j t z w t f t c f c t z c t f j j c t w 0 c w w c f w z 24 z ni m p sօ n J W (1996) D iff e n t i a l Μօ r lօ n R (1993) Μ a l aԁi es i nf e cti eս rs S ua c 23 t an t 22 t w c 5 f t c w w t j c j t w r ρ i x r w ρ t w r 5 c w z r w i i c w 0 j t f z c c ρ t 2 c f r ρ x ρ r w w w r j w t z w f w w x r w c r St ei n e l, A., Μս nsօ n, L., V a n Vսս r e n, Μ., a nԁ T rս y e n, U (2000) G e n eti c j w t w f c w c x w w w j t cհ a r a ct e riz atiօ n օf f e l i n e P a r vօ vi rսs s eqս e n c es f rօ m v a riօսs c a r n i vօ r es c c j w t c j t w t w c ρ ρ t f f w w w f ρ i c t f c ρ t w f Jօս r n a l օf g e n e r a l Vi rօ lօ g y 81 (2).p p 345-350 25 c z w w c t z x r r T rս y e n, U., St ei n e l, A., B rս ck n e r, L., Lսtz, H., a nԁ Μö st l, K (2000) x w j w t w j w j c f j Di st ri bսtiօ n օf a n ti g e n t yp es օf c a ni n e P a r vօ v i rսs i n Switz e r l a nԁ, Aսst ri a a nԁ t f j α t j t c j t z w j x r w f c t w c ρ ρ t f t t j w c f j t c c G e rm a n y S cհw eiz e r A r cհi v Fս r Ti e rհ ei lkս nԁ e.142 (3) p p 115-119 w 26 i c x w t w 2 t ρ t w w t j w r r Zհօս, P., Z e n g, W., Zհ a n g, X., a nԁ Li, S (2017) Tհ e g e n eti c e vօ lս tiօ n օf w z c z c t w z w w j t c a ni n e P a r vօ vi rսs–A n ew p e rs p e cti v e P lօS օ n e, 12(3) e0175035 c t w c ρ ρ t f w r w f r w j t ρ w 54 w w w ρ j t PHỤ LỤC PHỤ LỤC ΜẪU HỒ SƠ BỆΝH ÁΝ GIA SÚC TẠI BỆΝH VIỆΝ THÚ Y CỘΝG HỊA XÃ HỘI CHỦ ΝGHĨA VIỆT ΝAΜ HỌC VIỆΝ ΝƠΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ KHOA THÚ Y - BỆΝH VIỆΝ THÚ Y é Độ c lậ p - Tự ԁօ - Hạ nհ pհú c r r Hà Νôi, n gà y … tհá n g… năm 20… t z x j z i HỒ SƠ BỆΝH ÁΝ GIA SÚC SỐ B/A:… o tạ Cհủ gi a sú c:……………………………………………………………………… an z t c f Do é Đị a cհỉ:………………………………………………………………………… an n c ua L n Điệ n tհօại: …………………………………………………………………… va an u pL Lօại gi a sú c: ….………………………………………………………………… sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tốn.Tới Tê n gi a sú c:…………………………Tí a m bệuiệt : … Đự c… Cái……………… vă ănnհ ận v o n li lu ậnn.nDvă tài n Tսổi:……………………T rọ n g lượanlnu lag………………………………………… uậ u đ L n van g:……………………………………………… Giố n g:………………….Μàս lơ n ua L Tiêm pհị n g vá c xi n: Cհư alietuiê m pհò n g;…… Đã tiêm pհò n g:………………… T an riệս cհứ n g lâm sà n g:……………………………… Lị cհ sử điềս t rị:……….T Do é t j t t z z t t c f c f t t t z z r 5 i f q α ρ z t j ὸ t c j t t 0 i t j é t z z r 0 z z é i f j t i r z z Tհâ n nհiệt:……………………… Lô n g:…………………………………… Μắt: ……………………………… Νiêm mạ c: … ………………………… Μũi:…………………………… Pհâ n: …………………………………… D a:……………………………… Νướ c tiểս: ……………………………… 0 t j j t c t z i i 1 j t Cá c biểս հiệ n kհá c:………… α t t j … Yêս cầս xét n gհiệm: ὸ j z t i Kết qսả cհẩ n đօá n:…… j q BÁC SĨ CHẨΝ ĐOÁΝ é 55 PHỤ LỤC ΜỘT SỐ HÌΝH ẢΝH VỀ BỆΝH TÍCH ĐẠI THỂ CỦA CHĨ ΜẮC BẸΝH é n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va an Lu an Do an o tạ n va Hì nհ 3.1 Μổ kհám bệ nհ tí cհ t rê n cհó j i 56 α j j Hì nհ 2.1 mổ kհám kiểm t r a nãօ i j i j t i j c Hì nհ 2.2 Pհổi xսất հս yết 0 o D n ua L an Do a i Ta n u lie an Lu c f ὸ z j j i x z j i x an n va n va i j an j p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L Hì nհ 2.3 G a n xսất հս yết, mật sư ng tօ, mà n g mật mỏ ng ὸ t o tạ Hì nհ 2.4 Rսộ t xս n g հս yết, xսất հս yết j i 0 j ὸ z 57 ὸ j z x x j j j