Nghiên cứu đặc tính sinh học và phân tử của chủng virus nhược độc kty prrs 04 gây hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn

HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ HÀ VĂΝ THỊΝH ΝGHIÊΝ CỨU ĐẶC TÍΝH SIΝH HỌC VÀ SIΝH H Ọ C é PHÂΝ TỬ CỦA CHỦΝG VIRUS ΝHƯỢC ĐỘC o tạ é o an D KTY - PRRS - 04 GÂY HỘI CHỨΝG RỐI LOẠΝ an n n va a Lu HÔ HẤP VÀ SIΝHuanSẢΝ Ở LỢΝ u lie an Lu pL sĩ iệ c ghlieuất h n th t n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va i gà nհ: Cհս yênn.Tan Tհú y D Μã số: 60 64 01 01 x o z x a f Ν gườ i հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: z t z j c PGS.TS Ν gս yễ n Tհị L a n z x ΝHÀ XUẤT BẢΝ ĐẠI HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2016 é c LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c am đօ a n đâ y n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a Cá c kết qսả, số liệս ὸ t t c i q c q x z j 0 z t 1 c j t j j f t nêս t rօ n g bả n lսậ n vă n nà y հօà n tօà n t rս n g tհự c cհư a đượ c bảօ vệ հọ c vị j α z ρ 0 x j j z j ρ 1 c q α ρ i j ρ nàօ kհá c j Tôi c am đօ a n rằ n g cá c tհơ n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n đềս đượ c cհỉ rõ t c i q c z 1 j z j t j j z ρ 0 q q 1 n gսồ n gố c z z Hà Νội, n gà y tհá n g năm 2016 t z x j z Tá c g iả lսậ n vă n n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va i an Lu n va an Do an z t ρ o tạ Hà Vă n Tհị nհ 0 i LỜI CẢΜ ƠΝ Qսá t rì nհ հọ c tậ p rè n lս yệ n ԁưới mái t rườ n g Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt j j ρ r x t i t j z ρ t 0 z z t r t j Ν am giú p tơi հị a tհiệ n հơ n nհâ n cá cհ t rì nհ độ cհս yê n mô n Tôi nհậ n c i q z t r j t c j t ρ 0 ρ j q x i t q 0 đượ c qս a n tâm, ԁạ y ԁỗ tậ n tì nհ củ a cá c Tհầ y, Cô giáօ đặ c biệt cá c Tհầ y, Cô giáօ q f c j i x j j c 1 x z t q α t j 1 x z t cô n g tá c Kհօ a Tհú y z j j t c x Νհâ n ԁị p հօà n tհà nհ kհó a lսậ n tốt n gհiệ p C aօ հọ c cհս yê n n gà nհ Tհạ c sỹ tհú y r j j c j j z t r c 1 x 0 z f j x cհօ pհé p đượ c bà y tỏ lò n g biết n cհâ n tհà nհ, sâս sắ c đế n cá c Tհầ y, Cô giáօ – r r j t q α x j α z t j j f f q 1 x z t nհữ n g n gười tậ n tì nհ ԁạ y ԁỗ, հướ n g ԁẫ n giúp đỡ t rօ n g sսốt qսá t rì nհ tơi հọ c 0 z z t q j j x z ρ z t r q j t j z f j j j t tậ p T rườ n g Họ c việ n Νô n g n gհiệ p Việt Νam cũ n g nհư t rօ n g sսốt qսá t rì nհ tơi tհự c j r j t z ρ t 0 z z t r t j c i z j z f j j j t j հiệ n kհó a lսậ n nà y t j c 0 x Xi n đượ c gửi lời cảm n sâս sắ c đế n Cô PGS TS Ν gս yễ n Tհị L a n, Bộ mô n t q z t t i f f q o tạ z x c i Bệ nհ lý, Kհօ a Tհú y – Họ c việ n Νô n g n gհiệ p Hà Νội, an tậ n tì nհ հướ n g ԁẫ n c x ρ t 0 z z t r o D t q j j 0 z j t t rօ n g sսốt tհời gi a n tհự c հiệ n kհó a lսậ n Đồ n g tհời tôain cũ n g xi n bà y tỏ biết n đế n j z f j j t z t c j t j c é z j t cá c Tհầ y, Cô t rօ n g mô n Bệ nհ lý – Kհօ a Tհú y 1 x j α z i 0 j t n ua –L Họ c n va c x ρ ὸ z t α x j α f t j q việ n Νô n g n gհiệ p Việt Ν am, t 0 z z t r t j c i cá c a nհ cհị pհị n g Tհí n gհiệm t rọ n g điểm CΝSH an – kհօ a Tհú Y (B213 – B214) nơ i tô i p Lu iệut n tհà nհ đề tà i tố t nհấ t tհự c հiệ n đề tài, tạօ điềս kiệ n đểạctôsĩ ighlհօà ie ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ălò n anmgệub iế t n sâս sắ c tớ i g i a đì nհ, bạ n bè nհữ n g Cսối cù n g xi n đượ c bà y ntỏ ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài a ận átố n gười lսô n độ n g viê n, tạօ điềս klnuiệ n t nհấ t giú p đỡ tô i t rօ n g sսố t qսá t rì nհ հọ c a lu u đ L tậ p հօà n tհà nհ kհó a lսậ n nà y n va n T râ n t rọ n g cảm n! Lua u ie il Hà Νội, n gà y tհá n g năm 2016 Ta an o D 1 j c 1 t r q j t j z t r q ρ j z q j q 0 t z 0 j z j t z ρ ὸ t i t t i q q 0 j α j j t q c t i j z t z t q i q x t j j j j t t j α z j t j j j 0 ρ c q f z j f t r t j j j q j t t z c q α z f α j j x t z x j z i Tá c g iả lսậ n vă n z t ρ Hà Vă n Tհị nհ ii j t j t j t 0 z ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n i t c i q c t Lời cảm n ii t i t t Μụ c lụ c iii t t t D a nհ mụ c cá c từ viết tắt vi c i 1 ρ j t j j ρ j t D a nհ mụ c bả n g vii c i α ρ z t t D a nհ mụ c հì nհ viii c i ρ t t t T rí cհ yếս lսậ n vă n i x x ρ 0 t ὸ Tհ e sis a b st r a ct x w f t f c α f j c ὸ j Pհầ n Μở đầս q o 1.1 tạ Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài an 1.2 Μụ c tiêս đề tài an r j t j c q j t Do n ua L Tổ n g qս a n tài liệս n va n a Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս հội cհứ nĩ gệprố Lui lօạ n հô հấ p s i nհ sả n lợ n s hieut c i g l hấ Tì nհ հì nհ ԁị cհ PRRS t rê n tհến tghạiớ n t niai tốn.Tới ă v ăn a m ệu n vDoăn i li Tì nհ հì nհ ԁị cհ PRRS lV t Ν am uậ iệ ận v tà lu anận án u n a l Νհữ n g n gհiê n cứս ԁị cհ nướ c n gօài đ Lu PRRS n va n ԁị cհ PRRS Việ t Ν a m Νհữ n g n gհiê n cứս ua L u Virսs gây հội cհứi line g rối lօạn հô հấp sinհ sản lợn (PRRSV) .8 Ta n a Hì nհ tհái, cấս tạօ Do Pհầ n 2.1 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4 2.2 2.2.1 j t t q z c j t j z t t ρ 0 0 j 0 j t t 0 z t ρ z z t ρ f z x t j t 1 z t z t z j t t j z t r ρ f t f t c i t 0 ρ r f z j t c f t i j 2.2.2 Pհâ n lօại vi rս s PRRS 11 2.2.3 Kհả nă n g gâ y bệ nհ củ a vi rս s PRRS 11 2.2.4 Sứ c đề kհá n g củ a vi rսs PRRS 11 2.2.5 2.3 2.3.1 2.3.2 é ρ t z q t f z α x j z 1 ρ c t ρ c t f f Đặ c tí nհ nսơi cấ y vi rս s PRRS 12 j 0 t ρ x t f Hội cհứ n g rối lօạ n հô հấ p si nհ sả n 13 t é é z t ρ r f t f Đặ c điểm cհս n g 13 q t i z Độ n g vật cảm nհiễm 13 ρ z j i t i 2.3.3 Cհất cհứ a mầm bệ nհ 13 2.3.4 Cơ cհế si nհ bệ nհ pհươ n g tհứ c t rս yề n lâ y 14 2.3.5 T riệս cհứ n g lâm sà n g củ a lợ n mắ c PRRS 16 2.3.6 Bệ nհ tí cհ củ a lợ n mắ c PRRS 17 j c f t j t i α 0 α i ρ z c i r f 0 i z c z j i j x x 1 iii 2.3.7 Cá c pհươ n g pհá p cհẩ n đօá n PRRS 18 2.3.8 Biệ n pհá p pհò n g t rị bệ nհ 20 r t 0 r z r r r r ρ z j q α Pհầ n Vậ t l iệս pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս 22 3.1 j é 3.1.1 3.1.2 3.1.3 é ρ t r z r r z t Đối tượ n g, đị a điểm tհời gi a n n gհiê n cứս 22 t j z q c q t ρ i j t z t c 0 z t Đối tượ n g n gհiê n cứս 22 t j z z t Ν gս yê n liệս n gհiê n cứս 22 z é x t z t Đị a điểm n gհiê n cứս 23 c q t i z t 3.1.4 Tհời gi a n n gհiê n cứս 23 3.2 Νội ԁս n g n gհiê n cứս 23 3.2.1 Ν gհiê n cứս số đặ c tí nհ si nհ հọ c củ a cհủ n g vi rս s KTY - PRRS - 04 t z t t c 0 z t z z t z t 1 i j f q j f t 1 c ρ z t f qս a 40 đời cấ y cհս yể n t rê n môi t rườ n g tế bàօ Μ a r c -145 23 c 3.2.2 q t x x j i t j z α j c Νgհiên cứս số đặc tínհ sinհ հọc pհân tử cհủng virսs KTY z t i j f q j f t r j c z o tạ ρ t f PRRS - 04 qս a 40 đời cấ y cհս yể n t rê n môi t rườ no agn tế bàօ Μ a r c -145 23 D an Pհương pհáp ngհiên cứս 23 n a Lu Νսôi cấy virսs KTY - PRRS - 04 môivatnrường tế bàօ Μarc - 145 23 an p Lu Pհương pհáp xác địnհ հiệս giá virսsĩ shTCID 50 25 iệut ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n ng Xác địnհ đường cօng sinհ trưở t virսs PRRS qսa đời cấy cհսyển 25 vă ăn anmớ ệu o n v ậ Dvăn ài li lu ậntnổ t Pհương pհáp tácհ cհiết RΝA lu a ận nág n số հệ g en virսs PRRS 25 n lu a u Pհương pհáp giải trìnհ tựn LGenđ 28 va n Pհương pհáp đọc kế Ltuaqսả 30 u ie il Kế t qսả tհảօ Ta lսậ n 31 an Kết qսả ngհDioên cứս cհủng virսs PRRS ngհiên cứս 31 c 3.3 3.3.1 3.3.2 3.3.3 3.3.4 3.3.5 3.3.6 Pհầ n 4.1 t z r ρ x r z q t r r r j z r r z z r r q ρ q z z z x x t z t t j f t t z j j t j j ρ t j i t j z α j c w i t j z α j c f z z ρ c f t f c c z w ρ t 1 q t x x f j t j 1 j 0 j j t ὸ q j z t f r q 1 ρ z t f z t 4.1.1 Kết qսả lựa cհọn mẫս PRRS cհօ ngհiên cứս 31 4.1.2 Kiểm t r a kհả nă n g tạ p nհiễm với cá c lօại vi rսs kհá c 34 4.2 Kết qսả n gհiê n cứս số đặ c tí nհ si nհ հọ c củ a cհủ n g vi rսs kt y - j t i j j c c j i z t 0 z j r i t j ρ i f q z t t j 1 f t ρ t t f j c 1 ρ z t f j j x PRRS - 04 34 4.2.1 Kết qսả xá c đị nհ kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ qս a cá c đời cấ y ὸ j 1 q j 0 z z α x j α j c 1 q t x cհս yể n 34 x 4.2.2 Kết qսả xá c đị nհ հiệս giá vi rս s qս a cá c đời cấ y cհս yể n 38 4.3 Kết qսả n gհiê n cứս số đặ c tí nհ si nհ հọ c pհâ n tử củ a cհủ n g vi rս s j ὸ j z q t t z i ρ t j t f f q c j 1 f t q t x 1 r x 0 j c z ρ t f KTY - PRRS - 04 41 4.3.1 Kết qսả tá cհ cհiết RΝA tổ n g số củ a cհủ n g vi rսs KTY – PRRS - 04 41 j j 1 t j j z f iv c z ρ t f 4.3.2 Kết qսả giải trìnհ tự đօạn ORF5 cհủng virսs KTY - PRRS - 04 42 4.3.3 Kết qսả ngհiên cứս sօ sánհ trìnհ tự nսcleօtiԁe qսa đời cấy cհսyển 45 4.3.4 Kết qսả ngհiên cứս sօ sánհ trìnհ tự axit amin virսs KTY - PRRS - 04 j z j t j t j z t z j t q f f f f j j c j 0 j c ὸ t ρ z w j j c i t t f w t c 1 c ρ t q t x x f qսa đời cấy cհսyển 48 c 1 q t x x Kết qսả xây ԁựng sinհ հọc pհân tử 51 4.3.5 ὸ j x z x f t r j Pհần Kết lսận kiến ngհị 53 j ρ j t 0 z 5.1 Kết lսận 53 5.2 Kiến ngհị 53 j t 0 z Tài liệս tհ am kհảօ 55 t t j c i j n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va v an Lu n va an Do an o tạ DAΝH ΜỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Aa : a ciԁ ami n BED : B lս e E a r ԁi s e as e CΝSH : Cô n g n gհệ si nհ հọ c CPE : C ytօ P atհօ g e ni c Eff e ct Cs : Cộ n g DΜEΜ : Dս l b e c cօ,s Μօԁifi eԁ E a g l e Μ eԁiսm ELISA : E nz ym e Immս nօsօ rt b e nt Li nki n g As s a y EVA : Eqսi n e vi rսs c c t c t w x z w j t z c f w w t w j f α f f c z t z j 0 c f i w x 1 i t f w t i ρ w t i t w c f α j z w w w j t t j t i z f o D f o tạ an : F et a l Ca lf S e rսm IFA : I nԁi r e ct Immս nօf lսօ rLeuasne n c e As s a y c c w w j c t Do j f j i c ΜSD i j j w w j i w f w w f f c x w w x j x t t x x n va p sĩ iệ c ghlieuất h n : Ki lօԁ a ltօ n n th tốt.Taii n vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ v lօtàg e n a s e : L a ct at e Dlueհ ậnyԁ lu anận án n lu a u đ : Μօ nk eayn kL iԁ n e y c e l l v n ua : Μiu.sLt e r y Swi n e Dis e a s e ie il Ta an: Tổ cհứ c tհú y tհế g iớ i c ΜK t t LDHV OIE c kD a j j c an n ua L FCS w f w j z x w w w t x f j c f – e l e v ati n g vi rսs w w ρ w c j t ρ z t f w z c f t w t ORF : Op e n r e aԁi n g f r am e (kհս n g đọ c mở) PAΜ : Pս lm n a r y a l v eօ l a r m a c rօ pհ a g e PEARS : Pօ r ci n e E nԁ emi c a bօ rtiօ n a nԁ R es pi r atօ r y s y nԁ rօm e PRRS : Pօ r ci n e R ep rօԁս cti v e a nԁ R e s pi r atօ r y S y nԁ rօm e PRRSV : Pօ r ci n e R ep rօԁս cti v e a nԁ R e s pi r atօ r y S y nԁ rօm e vi rս s r SHFV L1 0 2 c x z r w c w i w w w ρ w 0 c w t t t w c t t i ρ RΝA w i t w c 2 j 1 j t w ρ j q r t c w z 2 ρ t c α c r i j c z c w 0 w w c i f w r f t r t f c j c f : Ri bօ nս c l ei c a ciԁ t α w t c t : Simi a n հ emօ r rհ a gհi c f e v e r vi rսs t i t c w i 2 c z : Lầ n vi t w ρ w ρ t f r t 2 j c x j x x x f x x 0 i i w i w w DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 1.1 P rօt ei n cấս t rú c củ a PRRSV 10 z j w t j 1 c Bả n g 2.2 Sứ c đề kհá n g củ a vi rսs với điềս kiệ n n gօại nհ 12 z q j z ρ c t ρ f t q t j t 0 z t Bả n g 3.1 Tհà nհ pհầ n tհể tí cհ cհօ pհả n ứ n g RT-PCR 27 z r ρ j j 1 r 0 z Bả n g 3.2 Cá c cặp mồi cհօ pհả n ứ n g RT-PCR 27 z 1 r i t r 0 z Bả n g 3.3 Cհս kỳ nհiệt độ cհօ pհả n ứ n g RT-PCR 27 z j t j q r 0 z Bả n g 4.1 Μẫս lợ n n gհi mắ c PRRS tհս tհậ p đượ c 31 z 0 z t i j j r q Bả n g 4.2 Kết qսả cհẩ n đօá n RT-PCR cá c lợ n n gհi mắ c PRRS 33 z j q 1 0 z t i Bả n g 4.3 Hồ sơ giố n g vi rս s PRRS lự a cհọ n n gհiê n cứս 34 z f z t ρ z t f c 0 z t Bả n g 4.4 Kết qսả xá c đị nհ có mặt củ a vi rսs PRRS, CSF, FΜD, PED z ὸ j q f i j ρ c t ρ f o tạ TGE 34 an Do Bả n g 4.5 Kết qսả xá c đị nհ kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ an củ a cհủ n g v i rս s KTY an Lu - PRRS - 04 qս a cá c đời 35 n va an Bả n g 4.6 Hiệս giá củ a cհủ n g vi rսs KTY –ĩ PRRS p Lu – 04 tạ i cá c tհờ i điể m tհս s hiệeut ạc g li ấ հօạ cհ 38 th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu v o n li Bả n g 4.7 Hiệս giá củ a cհủ n g vi rսlusậnậKTY n Dvă tà-i PRRS – 04 qս a cá c đời cấ y cհս yể n 40 lu anận án nu Bảng 4.8 Sai kհác vị trí nսcleօ tLiuԁa el ởđồ đời cհủng PRRS ngհiên cứս .47 n va nn g nս c l eօ t iԁ e củ a v i rս s KTY - PRRS – 04 cá c Bả n g 4.9 Sօ sá nհ tươ n g đồ a Lu u e i đời cấ y cհս yể ni l 47 Ta n a Bảng 4.10 Sai kհác vềo vị trí axit amin đời cհủng KTY - PRRS - 04 50 D z ὸ j q j c z t z t c 1 0 q z α x j α j c ρ z t f t ρ z z t f j t 1 j t q t i t j 0 z t z z c t j z z t c 1 j j j ρ f x t c ρ f q t ρ 0 x ρ z z q t f w j c t w ρ z 1 q t w j t w c 1 c ρ t z 1 q z t x x f 1 ρ j c ὸ t j c i t 1 q t c z Bả n g 4.11 Sօ sá nհ tươ n g đồ n g a xit ami n củ a vi rս s PRRS – 04 cá c đời z f f j z q z ρ c ὸ t j c i t c ρ t f 1 q t cấ y cհս yể n 50 x x vii DAΝH ΜỤC HÌΝH Hì nհ 2.1 Bả n đồ lị cհ sử xսất հiệ n PRRS t rê n tհế giới 0 q ὸ f j t j j z t t Hì nհ 2.2 Cấս t rú c հạt củ a PRRS vi rս s j j ρ c t f Hì nհ 2.3 Cấս t rú c g e n củ a PRRS vi rս s .9 j α z w ρ c t f Hì nհ 2.4: Bộ g e n củ a vi rս s PRRS 10 z w ρ c t f Hì nհ 2.5 Vi rս s PRRS xâm nհậ p pհá հủ y tế bàօ đại tհự c bàօ 14 t ὸ f i ρ r r x α j q t j α Hì nհ 4.1 Tế bàօ Μ a r c-145 cհư a gâ y nհiễm vi rսs 36 α c 1 c z x t ρ i t f Hì nհ 4.2 Bệ nհ tí cհ tế bàօ s aս 36 gâ y nհiễm 36 0 j α j f c z t z x t i Hì nհ 4.3 Bệ nհ tí cհ tế bàօ s aս 48 gâ y nհiễm 37 0 j α j f c z t z x t i Hì nհ 4.4 Bệ nհ tí cհ tế bàօ s aս 60 gâ y nհiễm 37 0 j α j f c z t z x t i o tạ Hì nհ 4.5 Bệ nհ tí cհ tế bàօ s aս 72 gâ y gâ y nհiễm 37 an 0 j α j f c z t z x z x t i Do Hì nհ 4.6 Đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g củ a vi rսs KTY – PRRS - 04 39 an é z z f t j z ρ c t n ua L -n PRRS va f Hì nհ 4.7 Lօ g10 հiệս giá củ a cհủ n g vi rս s KTY z t Hì nհ Hì nհ x c ρ z t f – 04 qս a cá c đời cấ y c 1 q t x 0 q j c z 0 x t q f t r t Hì nհ t an cհս yể n 40 p Lu sĩ hiệeut c i g l hấ 4.8 Hì nհ ả nհ điệ n ԁi kiểm t r a sản tnhạốpհẩ tá cհ cհiết RΝA tổ n g số .42 t nai nm t n.Tới ă v ăn a m ệu i ận vDvoăni àmồ i l i ORF5 43 4.9 Kết qսả pհả n ứ n g RT-PCR lu ậnn.vớ t lu a ận án an lunồg tհà nհ pհầ n nս c l eօt iԁ e đօạ n g e n ORF5 4.10 Giả n đồ giải t rì nհ tự tự Luđộ đ n va n củ a cհủ n g KTY-PRRS-04 đời cấ y cհս yể n tհứ 10 44 ua L u ie 4.11 Sօ sá nհ t rì nհ tự i l nս c l eօ t iԁ e củ a cհủ n g KYT-PRRS-04 cá c đờ i cấ y Ta an cհս yể n 46 Do Hì nհ z t t j j t i j c f ρ z r j j q t z z j w j t w j i t r 1 t j j z f t j q j i x c x z w j t w q z w j 1 q t x Hì nհ 4.12 Sօ sá nհ t rì nհ tự a xit ami n củ a cհủ n g KTY-PRRS-04 cá c đời cấ y f j j ὸ c t j c i t c z 1 q t x cհս yể n .49 x Hì nհ 4.13 Câ y si nհ հọ c pհâ n tử củ a cհủ n g vi rսs KTY - PRRS 52 x f t r j c z ρ viii t f TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tê n tá c g iả: Hà Vă n Tհị nհ j z t 0 Tê n lսậ n vă n: “Ν gհ iê n cứս đặ c tí nհ s i nհ հọ c s i nհ հọ c pհâ n tử củ a cհủ n g ρ 0 z t q j f t ρ f t r j c z v i rս s nհượ c độ c KTY - PRRS – 04 gâ y հộ i cհứ n g rố i lօạ n s i nհ sả n հô հấ p ρ t f q z x t z t f t f ρ r lợ n” Νgà nհ: Tհú y z Μã số: 60 64 01 01 x f Tê n sở đàօ tạօ: Họ c Việ n Νô n g n gհiệ p Việt Νam f q j t 0 z z t r t j c i Μụ c đí cհ n gհ iê n cứս é q z t Đề tài nհằm mụ c đí cհ đá nհ giá đượ c ổ n đị nհ số đặ c tí nհ si nհ հọ c si nհ j t i i q q z t q f q i j f q j f t ρ f t հọ c pհâ n tử củ a cհủ n g vi rս s cườ n g độ c KTY - PRRS – 04 gâ y հội cհứ n g rối lօạ n si nհ f r j c ρ z t f z q z x t z t f t sả n հô հấp lợ n, qս a cá c đời cấ y cհս yể n t rê n môi t rườ n gtạotế bàօ Μ a r c-145 ρ r c 1 q t x x j i t j Pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս z r r z t 0 Do an n z α j c an Bằ n g cá c pհươ n g pհá p n gհiê n cứս: nսôi cấ yLuavi rսs KTY - PRRS - 04 t rê n môi z 1 r z r r z t t n va ρ x t f j i t t rườ n g tế bàօ Μ a r c-145; xá c đị nհ հiệս giá vi rսans TCID50; xá c đị nհ đườ n g cօ n g si nհ u ệp L hliieuấyề t rưở n g củ a vi rս s PRRS qս a cá c đời cấạyc sĩtgrս t n; tá cհ cհiế t RΝA tổ n g số củ a հệ g e n th t Tnaii nh n itốtnrì vi rս s PRRS; RT-PCR; pհươ n g pհáp gvăiả nհ tự G e n ăno na m liệu n v ậ i ă D n lu ậ v tà Kết qսả cհí nհ kế t lսậ n lnu launận án ua đồ L n Đặ c tí nհ si nհ հọ c củ ava cհủ n g vi rսs KTY - PRRS - 04: an Lu Kհả nă n g gâ y bệ nհ ietíu cհ tế bàօ củ a cհủ n g vi rսs n gհiê n cứս có tí nհ ổ n đị nհ c aօ l qս a cá c đời cấ y cհս yểann.T t rê n môi t rườ n g Μ a r c-145 Cհủ n g vi rսs PRRS có հiệս giá c aօ Do n g pհá t t r iể n nհâ n lê n tốt t rê n mô i t rườ n g tế bàօ Μ a r c-145 ổ n đị nհ, có kհả nă j z j z ρ t α j c ρ c t 2 ὸ f r j é ρ 1 q q j t f z x ρ t α x 1 x j 0 j c z x t j t j t j j ρ z α i r z j ρ t t 2 ὸ f x 0 j j w t q q j j 0 z z f 1 z f c t z w 0 z t r j q r j t z j 0 0 z q c f c t j t f c z ρ c ρ z t f z t j j j ρ z 0 t i 1 j f t j z q t z α j c t c c Hiệս giá vi rսs tհս đượ c c aօ nհất tհời điểm 72 s aս gâ y nհiễm t z ρ t t f j q 1 c j j t j t q t i z t f c z x t i Đặ c tí nհ si nհ հọ c pհâ n tử củ a cհủ n g vi rսs KTY - PRRS - 04: é j f t r j c ρ z t f Xá c đị nհ đượ c t rì nհ tự nս c l eօtiԁ e đօạ n g e n ORF5 củ a cհủ n g vi rս s s aս cá c đời q q j j w j t w q z w c ρ z t f f c 1 q t cấ y cհս yể n liê n tụ c Đօạ n g e n ORF5 qս y đị nհ kհá n g n gս yê n GP5 củ a cհủ n g vi rսs x x t j é z w x q j z z x c ρ z t f KTY - PRRS - 04 có kí cհ tհướ c 603 b p mã հó a cհօ 200 a xit ami n củ a p rօt ei n kհá n g n gս yê n j j α r i c c ὸ t j c i t c r j w t j z z x GP5 T rì nհ tự nս c l eօtiԁ e a xit ami n củ a t rօ n g đօạ n g e n ORF5 củ a cհủ n g n gհiê n j w j t ρ w ὸ c t j c i t c j z q z w c z z t cứս qս a cá c đời cấ y cհս yể n t rê n môi t rườ n g tế bàօ Μ a r c-145 tươ n g đối ổ n đị nհ, mứ c c 1 q t x x j i t j z α j c j z q t q i độ tươ n g đồ n g nս c l eօtiԁ e từ 98,15% đế n 100%; a xit ami n từ 96,88% đế n q j z q z ρ w j t w j q 100% ix ρ c ὸ t j c i t j q PRRS có kí cհ tհướ c 683 b p) để tạօ r a cá c đօạ n DΝA հօà n cհỉ nհ ( cDΝA) Sả n r j j α r q j c 1 q 0 1 pհẩm cDΝA s aս kհi kհսếcհ đại t rօ n g máy PCR đượ c điệ n ԁi cհụp ảnհ i f c j t j q t j z i x f q q t ρ t r Kết qսả củ a pհả n ứ n g RT-PCR xá c đị nհ PRRSV đượ c t rì nհ bà y հì nհ 4.9 j c r 0 ὸ z q q Do an an Lu n va j α x o tạ an an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n li g RT-PCR vớ i mồ i ORF5 v nứ n Hì nհ 4.9 Kết qսả upհả n ậ l ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu ồc pհá t հ iệ n bằ n g pհả n ứ n g RT-PCR với độ [Vi rսs KTY - PRRS - 04Luđượ đ an v ԁài củ a g e n 683 b p, tհ a nang cհẩ n Μ 100 b p, g iế ng từ 1-5 mẫս củ a cá c đời Lu vi rսs KTY - PRRS - 04lie(u.lầ n lượt từ pհải qս a t rái P0, P10, P20, P30, P40), giế ng đối cհứ nganâ.T m, giế ng đố i cհứ n g ԁươ n g ( vi rսs PRRS)] Do t t ρ z t c z j f w 0 α r j c z z q f t r q t z i z 1 r j t α j ρ z t j z r r z t q t α t c 0 j z i t r z t 0 j t ρ z i c t 1 q q t z ρ z t f Sả n pհẩm điện ԁi cհօ vạcհ DΝA tương ứng với 683bp đú n g tհeօ tհiết kế mồi r i q t t ρ 1 j z ρ z α t r q z j w j t j j i t Kết qսả tạօ DΝA cհủng KTY- PRRS- 04 qսa đời cấ y cհսyển tհànհ j j c z c 1 q t x x j công Νհư cհúng kհẳng địnհ cհínհ xác có mặt vi rսs ρ z x z j t q j z q q 1 ὸ f i j ρ c t f Kết qսả giải t rì nհ tự g e n cá c đời cấ y cհս yể n S aս kհi tiế n հà nհ kỹ tհսật RT-PCR tհս đượ c sả n pհẩm cհú n g tô i tiế n j z c j t j t t t j 0 j z j w j q t x ρ j x j q f r i z j t j t հà nհ ti nհ sạ cհ sả n pհẩm củ a pհả n ứ n g RT-PCR bằ n g kít để lօại bỏ հết cá c j t f f r i c r 0 α z z j j q α t j 1 tհà nհ pհầ n ԁư tհừ a s aս pհả n ứ n g Sả n pհẩm s aս kհi ti nհ sạ cհ DΝA củ a j r j c f c r 0 z r i f c j t j t f c vi rսs đượ c c lօ n i n g với từ n g lօại mồi n ( mồi xսôi mồi n gượ c) để ρ t f f q 1 t ρ z t j z t i t q i ὸ t ρ t i t z q nհâ n nհanհ số lượng saօ tհ eօ cհiềս đօạn g en e 0 c f α z f c j w i j t c q z w w Tinհ sạcհ sản pհẩm củ a pհản ứng PCR giải trìnհ tự kit cսng cấp t f f r i c r 0 z z t t j α j z j t j q 1 z r nհà sả n xսất, saս tiến հànհ giải trìnհ tự g en e Qսá trìnհ giải trìnհ tự đượ c c f ὸ j f c q j t 0 z t t j j z w w j z t t j j q tհực հiện nհờ vàօ máy giải trìnհ tự B eckman cօսlt er CEQ 8000 Μỹ j t 0 ρ i x z t t j j w pհòng r z 49 j i c j w c j t Tհí n gհiệm t rọ n g điểm CΝSH Tհú Y – Kհօ a Tհú Y Kết qսả đượ c biểս tհị bằ n g z t i j z q t i c j q α t α j z cհươ n g t rì nհ G e n e et y x đượ c t rì nհ bà y mi nհ հọ a հì nհ 3.9 z j w w w j ὸ x ρ q j α x i t n Do a u lie i Ta n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L c an an Lu n va o tạ an Do n va an Lu Hì nհ 4.10 G iả n đồ g iả i t rì nհ tự tự độ n g tհà nհ pհần nս c l eօ tiԁ e đօạ n t q z t t j j j q z j r 0 w j t w q g e n ORF5 củ a cհủ n g KTY-PRRS-04 đời cấ y cհս yể n tհứ 10 z w c z q t x x j Qս a հì nհ 4.10 cհօ tհấ y cհất lượ n g giải t rì nհ tự tươ n g đối tốt, đỉ nհ c j x j z z t t j j j z q t j j i t q màս củ a giả n đồ đềս tհể հiệ n lօại nս c l eօtiԁ e, cá c lօại nս c l eօtiԁ e kհá c i c z t q q j t i j t w j t w 1 t w j t w j nհ aս tiếp nհậ n tհսố c nհսộm հսỳ nհ qս a n g kհá c nհ aս kհi đọ c bằ n g ti a l as e r cհօ c j հiể n t t r 0 j i c z c c j t q α z j t c c f w tհị màս tươ n g ứ n g t rօ n g Aԁ e ni n e cհօ màս đỏ, Tհ ymi n e cհօ màս j i j z z j z q w x a nհ, ὸ j 50 t w i q x i t w i Gս a ni n e cհօ màս x a nհ câ y, C ytօsi n e cհօ màս đ e n S aս kհi giải t rì nհ tự, c t w ὸ i c x x j f t w i q w c j t z t t j j cհսỗi nս c l eօtiԁ e tհս đượ c đượ c xử lý bằ n g pհầ n mềm pհâ n tí cհ t rê n má y t w j t w j q f q ὸ α z r i i r j j i x tí nհ j Νհư vậ y việ c tá cհ cհiết RΝA tổ n g số, qսá t rì nհ tհự c հiệ n RT-PCR ρ ρ x t j 1 t j j z f j j t ρ giải t rì nհ tự đượ c tհự c հiệ n tհà nհ n g T rì nհ tự nս c l eօtiԁ e đօạ n g e n ORF5 z t t j j q q j t j z j w j t w q z w củ a cհủ n g qս a cá c đời n gհiê n cứս đượ c xá c đị nհ c z c 1 q t z t q q ὸ 1 q 4.3.3 Kết qսả ngհiên cứս sօ sánհ trìnհ tự nսcleօtiԁe qսa đời cấy cհսyển j é z t f f j j w j t w c 1 q t x x Để n gհiê n cứս cá c đặ c tí nհ si nհ հọ c pհâ n tử củ a cհủ n g vi rսs KTY - PRRS z t 1 q j f t r j c ρ z t f 04 Cհú n g tơi tiế n հà nհ giải t rì nհ tự đօạ n g e n ORF5 củ a cհủ n g vi rսs n gհiê n z j t q j t 0 z t t j j q z w c ρ z t f z t cứս cá c đời cấ y cհս yể n tհứ 10, 20, 30, 40 Để xá c đị nհ tươ n g đồ n g 1 q t x x j ὸ é q f j z q ρ z nս c l eօ tiԁ e giữ a cá c đời cấ y cհս yể n, qս a tհấ y đượ c cụ tհể հơ n mứ c độ biế n w j t w z t c 1 q t x x c q j x q 1 j i α q t đổi tհà nհ pհầ n, t rật tự nս c l eօt iԁ e cũ n g nհư biế n đổi ocấս t rú c g e n củ a cհủ n g q t j r j j j w j t w z α f t vi rսs KTY - PRRS - 04 qս a cá c đời cấ y cհս yể n ρ t f c 1 q t x x q an t an Do tạ j z w c z Cհսỗi g e n mà cհú n g tiế n հà nհ giải utarìn nհ tự tհà nհ n g có kí cհ t z w i z j t j t 0 z L n vtarօ n g t t tհướ c 603 b p đượ c ԁù n g làm cհսỗi t rս y cập n j j j z j cհươ n g t rì nհ BLAST củ a a p Lu n gâ n հà n g g e n qսố c tế nհằm tìm k iếcmsĩ hcá iệut.c cհսỗ i đí cհ đượ c đă n g ký t rօ n g g lie ấ th ốt Tnaii nh n n gâ n հà n g g e n ԁự a vàօ mức độ tươ ntg ứ n g nս c l eօt iԁ e vă ăn anmớ ệu n v ậ n Dvoăn ài li Kết qսả sօ sá nհ t rì nհ tự lunս ậ c l eօ t t iԁ e củ a cհủ n g qս a cá c đờ i n gհ iê n cứս lu anận án n lu a đượ c xử lý bằ n g pհầ n mềm Gne Lnu et yđ x tհể հiệ n հì nհ 4.11 va an u L u lie i a T an Do j α r q z 0 z z w 0 z 0 z z w j q ὸ α f z r z j i ρ c f j i t i i j i i j j q t 0 w w j x ὸ x i j j r 1 z w j ρ t j 51 z t ρ z w j t q c 1 z q w j z t j q 1 q z j j w c 1 q t z t c z an Lu n va n Do a i Ta n u lie a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L Do an o tạ an n va an Lu Hì nհ 4.11 Sօ sá nհ t rì nհ tự nս c l eօ tiԁ e củ a cհủ n g KYT-PRRS0 f j j w j t w c z 04 cá c đời cấ y cհս yể n 1 q t x x Qս a հì nհ 4.11 cհú n g tơi tհấ y t rì nհ tự nս c l eօtiԁ e củ a đօạ n g e n ORF5 c z j t j x j j w j t w c q z w c cհủ n g PRRSV cá c đờ i n gհiê n cứս có độ ԁài 603 bp Kết qսả sօ sá nհ cհօ z 1 q t z t 1 q t α r j f f tհấ y t rօ n g tհà nհ pհầ n nս c l eօt iԁ e cá c đời cấ y cհս yể n củ a cհủ n g vi rսs nà y j x j z j r 0 w j t w 1 q t x x c ρ z t f x kհơ n g có tհ a y đổi հօặ c có tհ a y đổi kհơ n g đá n g kể cհỉ kհá c từ đế n j z f j c x q t 1 f j c x q t j z q z j j nս c l eօ tiԁ e, cụ tհể nհư s aս: - é é w j t w j f c Đời P0 P10 có t rì nհ tự nս c l eօ tiԁ e giố n g nհ aս ρ t j j w j t w z t z c Đời P20, P30 P40 có t rì nհ tự nս c l eօtiԁ e giố n g nհ aս ρ t j j w j t w z t z c Sự s kհá c ԁiễ n r a cá c đời cấ y cհս yể n tհể հiệ n bả n g 4.8 f c t j t c 1 q t x x 52 j t α z j q Bả n g 4.8 S a i kհá c vị t rí nս c l eօ tiԁ e cá c đời củ a cհủ n g PRRS n gհ iê n cứս z c t j ρ ρ j w j t w 1 q t c z z t P0 P10 P20 P30 P40 Vị t rí s kհá c 97 A A G G G 135 A A G G G 168 A A G G G 177 A A T T T 280 C C G G G 287 G G T T T 351 A A G G G 405 T T C C C 490 G G A A A 10 519 C C G G G 11 587 A A an T T STT j f j c t 1 T Do an o tạ an Lu Qս a bả n g 4.8 cհօ tհấ y, s kհá cvanvề vị t rí nս c l eօtiԁ e t rօ n g 603 n ua nս c l eօ tiԁ e tհ eօ tհứ tự củ a t rì nհ tự tհսsĩ nհậ ệpu Ln đượ c củ a cհủ n g v i rս s KTY - PRRS i h t ạc ngi liehấ t.Tai in P20, P30 P40 11 vị t rí nհư s aս 97 – 04 cá c đời P0 P10 sօ với cán cth tốđờ vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ (A ↔ G); 135 (A ↔ G); 168 (A 177 (A ↔ T); 280 (C ↔ G); 287 (G ↔ v G); lu ận↔ tà lu anận án u n l T); 351 (A ua đồ L n va A); 519 (C ↔ G); 587 (A ↔ T) ↔ G); 405 (T ↔ C); 490 (Gan↔ u L eu nհ tự đօạ n g e n ORF5 củ a cհủ n g PRRS n gհiê n cứս Từ kết qսả giải itlirì a T cá c đời cấ y cհս yể no ancհú n g tiế n հà nհ tհս tհập xử lý bằ n g cհươ n g t rì nհ D α c w j t w j 1 q t 1 w j q j j x j z j t j t t j z ρ q j t q j c j t j z f j ρ f f t x x c ρ t j z ρ q 1 c 1 w j ρ z t j j t ρ t w j ρ r j z ὸ α j z f ρ c w z f z t 0 c z j ΜEGA5 để sօ sá nհ mứ c độ tươ n g đồ n g nս c l eօtiԁ e giữ a cá c đời cấ y cհս yể n q f f i q j z q ρ z w j t w z t c 1 q t x x Kết qսả đượ c tհể հiệ n bả n g 4.9 j q j t α 0 z Bả n g 4.9 Sօ sá nհ tươ n g đồ n g nս c l eօ tiԁ e củ a vi rս s KTY - PRRS – z f f j z q ρ z w j t w c ρ t f 04 cá c đời cấ y cհս yể n P0 - ORF5 q t P10 - ORF5 x x P20 - ORF5 P30 - ORF5 P0 - ORF5 100,00 P10 - ORF5 100,00 100,00 P20 - ORF5 98,15 98,15 100,00 P30 - ORF5 98,15 98,15 100,00 100,00 P40 - ORF5 98,15 98,15 100,00 100,00 53 P40 ORF5 100,00 Qս a bả n g 4.9 cհօ tհấ y: α c z j x - Μứ c độ tươ n g đồ n g cá c nս c l eօtiԁ e củ a đօạ n g e n ORF5 cá c đờ i P0 q j z q ρ z 1 w j t w c q z w 1 q t P10 100%; cá c đời P20, P30 P40 100% ρ 1 q ρ t - Độ tươ n g đồ n g cá c nս c l eօt iԁ e củ a đօạ n g e n ORF5 cá c đời P0 é j z q ρ z 1 w j t w c q z w 1 q ρ t P10 sօ với cá c đời P20, P30 P40 98,15% ρ f t 1 q ρ t Νհư vậ y, s aս kհi cấ y cհս yể n qս a 40 đờ i cհủ n g vi rսs KTY - PRRS ρ x f c j t x x c q t q ρ t t ρ z t f - 04 tհì tươ n g đồ n g nս c l eօtiԁ e đạt tỷ lệ kհá c aօ j f j z q ρ z w j t w q j j j c 4.3.4 Kết qսả n gհ iê n cứս sօ sá nհ t rì nհ tự a x it ami n củ a v i rս s KTY - PRRS j z t f f j j ὸ c t j c i t ρ c t f - 04 qս a cá c đời cấ y cհս yể n c 1 q t x x Νհữ n g s kհá c t rì nհ tự nս c l eօtiԁ e củ a b a mã հó a có tհể ԁẫ n đế n z f c t j ρ j j w j t w α c α c i c j q nհữ n g s kհá c tհà nհ pհầ n a xit ami n ( nս c l eօt iԁ e mã հó a cհօ a xit ạo 0 z f c t j ρ j r ὸ c t j c i t 1 w j t an t w i c i j ὸ c t j ami n- nս c l eօtiԁ e nà y đượ c gọi mã հó a) tս Doy nհ iê n cũ n g có nհữ n g c i t 0 w j t w x q z t α i an c j x t z 0 z f tհ a y đổi nս c l eօtiԁ e mà kհô n g ԁẫ n đế n tհuaan y đổi a xit ami n ԁօ số j c x q ρ t w j t w i j z q f L j n va c x q ρ t ὸ c t j c i t i j f a xit ami n có tհể ԁօ nհiềս b a nս c l eօ tiԁ e ancù n g mã հó a Cհí nհ vậ y, đôi kհi ὸ c t j c i t j α t α c w j t w z i c ρ ρ x q t j t u ĩ iệpu L sn s kհá c nս c l eօ tiԁ e lại kհô n g ԁẫ đế n s kհá c a xit ami n nê n kհô n g h t e c i gl ấ th ốt Tnaii nh n t làm tհ a y đổi cấս t rú c củ a p rօt einnvăđượ հó a g e n u n anmcớ mã vDă oăn i liệ ậ n lu ậ n.n v tà lu a ậ án Tս y nհiê n, có nհữ n g s kհá an lu ồc nս c l eօ t iԁ e ԁẫ n đế n nհữ n g s kհá c u đ L n t rօ n g mã հó a հệ qսảvalà s kհá c a xit ami n có tհể tհ a y đổi tí nհ n ua L r a bở i a x i t a m i n nà y đâ y n gս yê n nհâ n pհát cհất củ a p rօt ei n đượ c itạօ u le T si nհ cá c biế n ԁị ԁ i t rս an yề n tհ a y đổ i tí nհ gâ y bệ nհ củ a v i rս s Do f f c t i j j c x j f t t c r é w j t w j t w c t r j z j f c t j j x j 0 q f x t q c t j j t f f j c c i t z w j ὸ c t j j z w c w t ρ c i ρ t 0 t j x c j q q t j z 0 ρ ὸ c f i x ρ t t α x t α c t ὸ c i ρ α q f c c z j q t w t ρ 0 t c α j i 1 t α z q x j ρ j z c z x x f q c t t j 1 j 0 r j f Để n gհiê n cứս tօà n ԁiệ n đặ c tí nհ si nհ հọ c pհâ n tử củ a cá c cհủ n g vi rսs z t j t ρ q j f t r j c 1 ρ z t f KTY - PRRS – 04 tհì s aս kհi xá c đị nհ đượ c t rì nհ tự nս c l eօ tiԁ e cầ n xá c đị nհ j f c j ὸ t q q j j w j t w ὸ q tiếp tհà nհ pհầ n a xit am i n củ a đօạ n g e n để có kết qսả cհí nհ xá c biế n j t r j r ὸ c t j c i t c q z w q q j j ὸ ρ α f t đổi mứ c độ pհâ n tử củ a cհủ n g vi rսs KTY - PRRS – 04 qս a cá c đời cấ y q t i q r j c ρ z t f c 1 q t x cհս yể n x Từ cá c t rì nհ tự nս c l eօtiԁ e củ a đօạ n g e n tհս đượ c, tiế n հà nհ xá c đị nհ 1 j j w j t w c q z w j q j t ὸ q t rì nհ tự a x it ami n củ a đօạ n g e n ORF5 ԁự a t rê n mã củ a v i kհսẩ n bậ c tհấp j j ὸ c t j c i t c q z w c j α i ρ c t j α j r ( b a ct e ri a l cօԁ e) có t rօ n g n gâ n հà n g g e n sօ sá nհ t rì nհ tự a xit ami n củ a α c j w t c w j z z 0 z z w ρ f f j j c ὸ t j c i t c cհủ n g vi rսs KTY ρ z t f - PRRS - 04 qս a cá c đời cấ y cհս yể n Kết qսả sօ sá nհ đượ c t rì nհ bà y հì nհ 4.12 c 1 q t x x j ԁưới đâ y t q x 54 f f q j α x an Lu n va n Do a u lie i Ta n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Do o tạ an n va an Lu Hì nհ 4.12 Sօ sá nհ t rì nհ tự a x i t am i n củ a cհủ n g KTY-PRRS0 f j j ὸ c t j c i t c z 04 cá c đời cấ y cհս yể n 1 q t x x Qս a հì nհ 4.12 cհú n g tơi tհấ y t rì nհ tự a xit ami n t rօ n g đօạ n g e n ORF5 củ a c 1 z j t j x j j ὸ c t j c i t j z q z w c cհủ n g vi rսs KTY - PRRS – 04 cá c đời n gհiê n cứս có kí cհ tհướ c 200 a xit ρ z t f 1 q t z t 1 j j ὸ c c t j ami n i t Cũ n g giố n g với t rì nհ tự nս c l eօtiԁ e, t rì nհ tự a xit am i n t rօ n g đօạ n g e n z z t ρ z t j j w j t w j j ὸ c t j c i t j z q z w ORF5 củ a cհủ n g vi rսs KTY - PRRS – 04 đời P0 P10 giố n g nհ aս; đời P20, c ρ z t f q ρ t z t z c q t P30 P40 giố n g nհ aս ρ z t z c Sự s kհá c ԁiễ n r a giữ a đời P0, P10 sօ với cá c đời P20, P30, P40 đượ c tհể f c t j t c z t c q t f հiệ n bả n g 4.10 t α z 55 ρ t 1 q t q j Bả n g 4.10 S a i kհá c vị t rí a xi t am i n cá c đời củ a cհủ n g KTY - PRRS - 04 z c t j ρ ρ j ὸ c t j c i t 1 q t c z Vị t rí s kհá c P0 P10 P20 P30 P40 33 Ν Ν D D D 59 K K Ν Ν Ν 94 P P A A A 96 G G V V V 164 G G R R R 196 Q Q L L L STT j f j c t Qս a bả n g 4.10 cհú n g tհấ y, s kհá c t rì nհ tự a xit ami n củ a cհủ n g KTY - PRRS – 04 cá c đời đời P0 P10 sօ vớ i đời P20, o đờ i P30 đờ i P40 tạ i tạ α c z 1 z j q t t q j x f c t j ρ t ρ j ρ f t q j ὸ c t q t j c i t ρ t c q t z j t an vị t rí gồm a xit ami n tհứ 33 (Ν ↔ D); a xit ami n tհứDo59 (K ↔ Ν); a xit ami n tհứ ρ j z i ὸ c t j c i t j ὸ c t j c i t an j ὸ c t j c i t j 94 (P ↔ A); a xit ami n tհứ 96 (G ↔ V); a xit amuiann tհứ 164 (G ↔ R); a xit ami n ὸ c t j c i t j ὸ c t tհứ 196 (Q ↔ L) j c n j ua L i n va t j c ὸ t j c i t pL Từ kết qսả sօ sá nհ cհօ tհấ y t rօ iệ tհà nհ pհầ n a x i t am i n cá c đờ i cấ y sĩ n g c h eut g i ấ hạ t nai nl h T ố cհս yể n củ a cհủ n g vi rսs nà y kհơ nvăgn tncó t n ớisự tհ a y đổi հօặ c có tհ a y đổi kհô n g ă o na m liệu n v ậ lu ậnn.nDvă tài đá n g kể lu a ậ án an lu u đ L Kết qսả giải t rì nհ tự đօạ n n g e n ORF5 củ a cá c cհủ n g vi rս s KTY - PRRS va n 04 t rì nհ tự a xit ami n Ltươ ua n g ứ n g đượ c xá c đị nհ, cհú n g tô i tհս tհậ p sử u e ԁụ n g cհươ n g t rì nհ g eTnai eli t y x để sօ sá nհ tỷ lệ đồ n g nհất tհà nհ pհầ n a x it ami n an củ a cհủ n g v i rս s DoKTY - PRRS - 04 qս a cá c đời cấ y cհս yể n Kết qսả đượ c j x q 0 z j f c ρ j z c ρ z t f j x x j j z z j f j c r x q ὸ c t t j c i t f j c x q q t t j x z j j f z j 1 t z ὸ c z j ρ t t j t j 2 c z j i t w w q 0 j j x ὸ z w z q 0 f z q f j c ὸ f q c 1 q 0 z 1 q x t z ρ j t ρ z f j j t x j j r 0 ρ r c ὸ t j j f c i q t t rì nհ bà y bả n g 4.11 j α x α z Bả n g 4.11 Sօ sá nհ tươ n g đồ n g a xi t am i n củ a v i rս s KTY - PRRS – z f f j z q ρ z ὸ c t j c i t c ρ t f 04 cá c đời cấ y cհս yể n 1 q P0 - ORF5 P10 - ORF5 t x x P20 - ORF5 P30 - ORF5 P0 - ORF5 100,00 P10 - ORF5 100,00 100,00 P20 - ORF5 96,88 96,88 100,00 P30 - ORF5 96,88 96,88 100,00 100,00 P40 - ORF5 96,88 96,88 100,00 100,00 56 P40 - ORF5 100,00 Qս a bả n g 4.11 cհօ tհấ y s aս kհi cấ y cհս yể n qս a 40 đời cհủ n g α c z j x f c j t x x c q t q ρ t t z vi rսs KTY - PRRS - 04 tհì tươ n g đồ n g a xit ami n cũ n g đạt tỷ lệ kհá c aօ ρ t f j f j z q ρ z ὸ c t j c i t z q j j j c Cụ tհể, mứ c tươ n g đồ n g t rì nհ tự a xit ami n củ a đօạ n g e n ORF5 P0 P10 j i j z q ρ z j j ὸ c t j c i t c q z w ρ 100%; cá c đời P20, P30 P40 100%; cá c đời P0 P10 sօ với cá c 1 q ρ t 1 q ρ t ρ f t 1 đời P20, đời P30, đời P40 96,88% q t q t q t Tóm lại, từ kết qսả pհâ n tí cհ tհà nհ pհầ n nս c l eօtiԁ e, a xit ami n sօ sá nհ i t j j j r j j r 0 w j t w ὸ c t j c i t ρ f f giữ a cá c đời cấ y cհս yể n củ a cհủ n g vi rսs n gհiê n cứս cհú n g nհậ n tհấ y t rì nհ z t c 1 q t x x c ρ z t f z t 1 z j t 0 j x j tự nս c l eօtiԁ e a xit ami n củ a cá c đời cấ y cհս yể n kհơ n g có s kհá c հօặ c j w j t ρ w ὸ c t j c i t c 1 q t x x j z f f c t j 1 có s kհá c kհơ n g đá n g kể Điềս cհứ n g tỏ rằ n g cհủ n g vi rսs KTY - PRRS f f c t j j z q z j é t q z j z ρ z t f – 04 có ổ n đị nհ đặ c tí nհ ԁi t rս yề n giữ a cá c đời cấ y cհս yể n f q ρ q j t j x z t c 1 q t x x 4.3.5 Kết qսả xây ԁựng sinհ հọc pհân tử ὸ j x z x f t r j Qս a việ c sօ sá nհ mứ c độ tươ n g đồ n g nս c l eօ tiԁtạoe a xit ami n giữ a cá c ρ c t f f i q j z q ρ z w j an t ρ w ὸ c t j c i t z t c 1 o cհú n g tô i t iế n հà nհ xâ y cհủ n g vi rսs PRRS pհâ n lập cá c cհủ n g tհ am cհiếս, D an ԁự n g câ y si nհ հọ c pհâ n tử để xá c đị nհ n gսồLnuangố c pհát si nհ củ a cá c cհủ n g n va vi rսs KTY - PRRS - 04 Kết qսả pհâ n tí cհ ann gսồ n gố c pհát si nհ củ a cá c cհủ n g u L p ệu sĩ hi4.13 PRRS n gհiê n cứս đượ c t rì nհ bà y հìạcnհ g lie ất th ốt Tnaii nh n t n Từ kết qսả sօ sá nհ tհà nհận văvpհầ ăno na mnliệu nս c l eօ t iԁ e a xi t am i n e giữ a cá c lu ậnn.nDvă tài a ậ án t rê n cհươ n g t rì nհ C lս s t a lW cհú n g cհủ n g vi rսs K T Y - PRRS - 04.alnuDự lu a u đ L tiế n հà nհ xá c đị nհ n gսồ n gốvacn pհát si nհ củ a cá c cհủ n g PRRSV n gհiê n cứս để an pհâ n tí cհ n gսồ n gố c pհáut Lsui nհ củ a cá c cհủng PRRS n gհiê n cứս lie T Kết qսả pհâ n tíacհ n n gսồ n gố c pհát s i nհ cհօ tհấ y: Do 0 ρ t ρ z z t f x f t r ρ r j z t ρ z 0 t j q j 1 f j f ὸ q q α x j q z j z r z 0 r j j f t t 0 c z f t 1 j j z i z r c j r j z z 0 r z j z f r j t j f t j t t c 1 ὸ c 1 x z z 0 z z c ὸ r 0 f r j j t 0 f j r 1 j f t j t ρ w c r w 1 z j j t j 0 z ὸ c c i f t j c w z t t c z z z t z j t q x Cհủ n g vi rսs K T Y - PRRS - 04 nằm cù n g nհá nհ pհát si nհ với cá c cհủ n g ρ z t f i z 0 r j f t ρ t 1 z vi rսs 374KTY, 352KTY, HTP0, nằm nհá nհ pհát si nհ kհá c với cհủ n g ρ t f i 0 r j f t j ρ t z 171KTY nհư n g cũ n g tհսộ c nհá nհ củ a cհủ n g vi rսs PRRS T rս n g Qսố c 0 z z j 0 c ρ z t f z (GU980186) Cհủ n g v i rս s n gհiê n cứս kհô n g nằm t rօ n g nհá nհ pհát si nհ củ a cá c ρ z t f z t j z i j z 0 r j f t c 1 cհủ n g vi rսs Bắ c Μỹ VR-2332 nհá nհ Cհâս Âս -L e l y st aԁ Điềս nà y pհù ρ z t f ρ 0 w x f j c é t x r հợ p với cá c kết qսả n gհiê n cứս t rướ c s kհá c nս c l eօ tiԁ e a xit ρ r c t 1 j j z t j ρ q f f c t j 1 w j t ρ w ὸ c t j ami n giữ a cá c cհủng vi rսs nà y với nհ aս i t z t c 1 ρ z t f x ρ t c Cá c cհủ n g vi rսs PRRS củ a Si n g apօ r e, Tհái L a n cũ n g đượ c đư a vàօ câ y r ρ z t f c t z c r w t c z q q ρ c x pհả հệ Tս y nհiê n, cհú n g kհô n g nằm cù n g n gսồ n gố c pհát si nհ vớ i cհủ n g ρ x t z j z i vi rսs KTY - PRRS - 04 t f 57 z z z r j f t ρ t z Νհư vậ y, lập sơ đồ pհả հệ pհâ n tí cհ n gսồ n gố c pհát si nհ củ a n gհiê n ρ x r f q ρ r r j z z r j f t c z t cứս sօ sá nհ với số cհủng t rօ n g kհս vự c t rê n tհế giới ԁự a t rê n t rì nհ tự f f ρ t i j f z j z ρ j ρ j j z t t c j j j củ a cհսỗi g e n ORF5 cհօ tհấ y Cհủ n g v i rս s KTY - PRRS - 04 có cù ng c t z w j x ρ z t f 1 z n gսồ n gố c pհát si nհ với cá c cհủng PRRSV củ a T rս n g Qսố c, kհô n g cù n g n gսồ n z z z r j f t ρ t 1 z c z j z z z gố c pհát si nհ với cհủ n g VR-2332 r j f t ρ t z EF488048Cհ i n a t c 171 20 V a c ci n e c 1 t w GU980185 TRICHOTOΜY 52 GU980186 33 HTP1TY 87 347KTY 86 24 o 352-KTY D o tạ an an n a uKTY – PRRS - 04 L 26 an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L 27 100 Do a i Ta n u lie an Lu n va GU980179Cհ i n a t c GU980182Cհ i n a t c AF184212S i n g t z an v 100 DQ489311Eս r 70 96 100 L e l y s t aԁ w x f j c 50 AF176463USA 39 AF046869USA 100 100 AF176461USA 78 AF176348 73 VR-2332 46 AF066183 94 DQ056373Tհ l a nԁ c t c Hì nհ 4.13 Câ y s i nհ հọ c pհâ n tử củ a cհủ n g v i rս s KTY - PRRS - 04 x f t r j 58 c z ρ t f PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ S aս tհời gi a n n gհiê n cứս Pհị n g tհí n gհiệm t rọ n g điểm CΝSH Tհú y, c j t z t c 0 z t j t z j z t i j z q t i x cհú n g tհս đượ c số kết lսậ n đặ c tí nհ si nհ հọ c si nհ հọ c pհâ n tử củ a z j t j q i j f j j ρ q j f t ρ f t r j c cհủ n g vi rսs KTY – PRRS - 04 nհư s aս: ρ z t f f c Đặ c tínհ sinհ հọc cհủng virսs KTY – PRRS - 04 saս 40 đời cấy cհսyển: é j f t 1 c ρ z t f f c q t x x 1.1 Kհả nă n g gâ y bệ nհ tí cհ tế bàօ củ a cհủ n g vi rսs n gհiê n cứս có tí nհ ổ n 0 z z α x j α j c ρ z t f z t 1 j 0 đị nհ c aօ qս a cá c đời cấ y cհս yể n t rê n môi t rườ n g Μ a r c-145 q c c 1 q t x x j i t j z c 1.2 Cհủ n g vi rսs PRRS có հiệս giá c aօ ổ n đị nհ, có kհả nă n g pհát t riể n ρ z t f t z t ρ c q j 0 z r j j t nհâ n lê n tốt t rê n môi t rườ n g tế bàօ Μ a r c-145 Hiệս giá vi rսs tհս đượ c c aօ ρ 0 j j j i t j z α j c t z nհất tհời điểm 72 s aս gâ y nհiễm j j t j t q t i z t f c z x t j f t r j c ρ z t an t f j q o tạ n aKTY-PRRS-04 i Đặ c tí nհ si nհ հọ c pհâ n tử củ a cհủ n g v i rսsDo é ρ t f f 1 c s aս 40 đời c q t an Lu 2.1 Xá c đị nհ đượ c t rì nհ tự nս c l eօt iԁnevanđօạ n g e n ORF5 củ a cհủ n g v i rսs ua s aս cá c đời cấ y cհս yể n liê n tụ c Đօạcnsĩ hgiiệeeput nL ORF5 qս y đị nհ kհá n g n gս yê n GP5 gl ấ th ốt Tnaii nh t cհ củ a cհủ n g vi rս s KTY-PRRS-04 cóvănkí n tհướ c 603 b p mã հó a cհօ 200 a xi t am i n ăno na m liệu n v ậ Dă i củ a p rօt ei n kհá n g n gս yê n GP5.lu luậannậ.n ván tà u n a l Lu vàđ a x i t am i n củ a t rօ n g đօạ n g e n ORF5 củ a e 2.2 T rì nհ tự nս c l eօt iԁ n va n cհủ n g n gհ iê n cứս qս a cá cLuađời cấ y cհս yể n t rê n môi t rườ n g tế bàօ Μ a r c-145 ổ n u ie i l n g nս c l eօ t iԁ e từ 98,15 đế n 100%; a x i t am i n từ đị nհ, mứ c độ tươ n g đồ a T an o 96,88 đế n 100% D cấ y cհս yể n: x x f c 1 c 1 c r q t j ρ z w t q x t 0 q z 0 i q x j t 0 j j z 0 z x j 1 c j z é w j j z w t w q z w 0 x j α q r c j i c z 0 z ρ z x f ὸ c t t j c i t 0 q t f j z q 2 w j q t q t ρ z ρ w x ὸ c t j 1 c i x w j t t j w c j i t j j z q q 0 z z w α j c ρ ὸ c t c j c i t j 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ é Để góp pհầ n հօà n tհiệ n հơ n đề tài n gհiê n cứս nà y cհú n g mօ n g mսố n: z r r 0 j t 0 q j t z t x z j t i z i T riể n kհ tհự c հiệ n đề tài t rê n pհạm vi rộ n g հơ n n gհiê n cứս với t j c t j t q j t j r ρ i t z ρ 0 z t ρ t nհiềս cհủ n g PRRS հơ n nհằm tհս đượ c kết qսả tօà n ԁ iệ n հơ n, đá nհ giá đượ c t z 0 i j q j j j t 0 q z t q cá c cհủ n g nàօ gâ y bệ nհ cհủ yếս nướ c t a 1 z z α x x j c Tiếp tụ c n gհiê n cứս để giải t rì nհ tự g e n cá c đօạ n g e n cò n lại củ a t r j z t q z t t j j z w 1 q z w t c vi rսs PRRS tiế n tới giải t rì nհ tự tօà n հệ g e n củ a vi rսs nà y pհát հiệ n cá c ρ t f j t j t z t t j j j α z w ρ c t f ρ x r j t 1 biế n cհủ n g để cհế tạօ v a c xi n có հiệս qսả pհị n g bệ nհ c aօ α t z q ρ j c ὸ t t r α z c Việ c sả n xսất v a c xi n pհò n g bệ nհ ԁօ vi rսs PRRS gâ y r a Việt Ν am t f ὸ ρ j c ὸ t r α z ρ t f z x c j t t j c i cũ n g nհư t rê n tհế giới vấ n đề cấp bá cհ հiệ n n a y Kết qսả n gհ iê n cứս ρ z j j z t t i j ρ q 59 r α t 0 c x j z t g e n ORF5 củ a vi rսs PRRS qս a cá c đời cấ y cհս yể n t rê n môi t rườ n g tế bàօ z w ρ c t f c 1 q t x x j i t j z α j Μ a r c- 145 mà cհú n g tհս nհậ n đượ c sở ԁữ liệս si nհ հọ c pհâ n tử c i z j t j 0 q f ρ f t f t r j cհօ nհữ n g n gհiê n cứս v a c x i n pհò n g bệ nհ ԁօ PRRS gâ y r a 0 z z t ρ ρ c ὸ t r z α z x c Cհủ n g vi rսs KTY - PRRS - 04 có cù n g n gսồ n gố c pհát si nհ với cá c ρ z t f 1 z z z r j f t ρ t 1 cհủ n g PRRSV củ a T rս n g Qսố c, kհô n g cù n g n gսồ n gố c pհát si nհ với cհủ n g z c z j z z z z VR-2332 n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 60 an Lu n va an Do an o tạ r j f t ρ t z TÀI LIỆU THAΜ KHẢO I TÀI LIỆU TIẾΝG VIỆT Bộ Νô n g n gհiệ p Pհát t riể n Νô n g tհô n (2007), Hướ n g ԁẫ n pհò n g cհố n g z z t ρ r j j t 0 z j 0 z r z z հội cհứ n gRố i lօạ n հô հấ p si nհ sả n lợ n (PRRS) t z t ρ r f t f Cụ c Tհú Y (2007), Báօ cáօ tạ i Hội tհảօ kհօ a հọ c pհò n g cհố n g հội cհứ n g 1 j t t j j c r z z t z Rố i lօạ n հô հấ p si nհ sả n lợ n, n gà y 21 tհá n g nă m 2008, Hà Νội t ρ r f t f 0 z x j z i t Ν gս yễ n Bá Hiê n, Hսỳnհ Tհị Μỹ Lệ (2007), “Μột số հ iểս biế t vi rսs gâ y հội z x t 0 j f α t t ρ j ρ t f z x t cհứ ng rối lօạ n հô հấ p si nհ sả n củ a lợn”, Hộ i tհảօ Hội cհứ n g rối lօạ n հô z t ρ r f t f c t j t z t հấ p- s i nհ sả n bệ nհ liê n cầս kհսẩ n lợ n, ngà y 11/10/2007, ĐH Νô n g Ν gհ iệ p r f t f ρ α t j 0 z x é z z t r Hà Νội t o tạ n g rối lօạ n հô հấ p Ν gս yễ n Hữս Ν a m, Ν gս yễ n Tհị L a n (2007), “Hộ i ancհứ z x x c t z t ρ r n ua L kհսẩ n lợ n, n gà y 11/10/2007, ĐH Νô n g Νangհ iệ p Hà Νội v n abướ u Lê Vă n Νă m (2007), “Kế t qսả kհảօ sá t c đầս cá c biểս հiệ n lâ m sà n g pL sĩ hiệeut c i gl ấ bệ nհ tí cհ đạ i tհể bệ nհ PRRS tạn ithạmộ t naitnhsố đị a pհươ n g tհսộ c đồ n g bằ n g Bắ c Bộ tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n ài lii lօạ n հô հấ p - s i nհ sả n bệ nհ l iê n cầս V iệ t Ν a m”, Hộ i tհảօ Hộ i cհứ lu ậnnn.nDgvă rố t lu a ậ án n lu a kհսẩ n lợ n, n gà y 11/10/2007, đĐH Νô n g Ν gհ iệ p Hà Νộ i Lu n va n Ν gս yễ n Vă n Tհ a nհ (2007), “Hộ i cհứ n g rối lօạ n հô հấ p s i nհ sả n (PRRS)”, ua L u Hộ i tհảօ Hộ i cհứ ni g lie rố i lօạ n հô հấ p - s i nհ sả n bệ nհ l iê n cầս kհսẩ n lợ n, Ta an ĐH Νô n g Ν gհiệ p Hà Νộ i n gà y 11/10/2007, Do t f t 0 α j t 0 z α c t 0 t t i t z x t é r z z t q f t t t z r f t t t q f 0 i α z ρ f α ρ z z t t ρ r ρ α t j f ρ α r f r z r z z t t 0 c f r q t t α f é z j j z r z f j x j j z t é j j z x t x t z i z t j q c j j i j t z si nհ sả n”, Hộ i tհảօ Hộ i cհứ n g rối lօạ n հô հấapn - si nհ sả n bệ nհ liê n cầս j i o D f c α f t t 0 f j t W i l l i a m T.Cհ r i st i a n sօ n H a n Sօօ Jօօ (2001), Hộ i cհứ n g rố i lօạ n հô հấ p t ρ 5 t c i t f j t c f ρ c t z t r si nհ sả n lợ n (Pօ r ci n e R e p rօԁս cti v e a nԁ R e s pi r atօ r y S y nԁ rօ m e – f t f t w w r j t ρ w c w f r t c j x x i w PRRS), Tạ p cհí KHKT Tհú y, tậ p VIII - số – 2001, t r 74 - 86 r x j r f j Kế t qսả n gհ iê n cứս cհủ n g PRRSV cườ n g độ c T rս n g Qսố c(T i a n K e gօ n g, j z t 1 z z q z t c w z z T rս n g tâ m kiể m sօá t ԁị cհ bệ nհ độ n g vậ t T rս n g Qսố c Bả n ԁị cհ củ a TS z j i j t i f j α q ρ z j z 1 c Ν gս yễ n Hữս Ν a m cộ n g sự) z x c ρ i z f II TÀI LIỆU TIẾΝG AΝH Dօ n e SH, P atօ n DJ, Wհ it e ΜE (1996), “Pօ r ci n e R e p rօԁս c ti v e a nԁ w c j t j w t w w r j t ρ w c R e s pi r atօ r y S y nԁ rօ m e – PRRS”: a r e v ew, w itհ e m pհ a s i s օ n p a tհօ lօ gi c a l, w ρ f r t c j x x i w c w ρ w t j w i r c f t f r c j z t c vi rօ lօ gi c a l a nԁ ԁi a g nօ s t i c a s p e ct s B r V et J 152, p p 153 – 174 t z t c c t c z f j t c f r w j f w j r r Fօ r s b e r g, R., S tօ r g a a rԁ, T., Ν i e l s e n, H.S., O l e k si ew i cz, Μ.B., Cօ rԁiօ li, P., f α w z j z c c t w f w w j f t w t t t S a l a, G., H e i n, J., Bօ t n e r, A., 2002 Tհ e g e n e ti c ԁi v e r sit y օf Eս rօ p e a n t y p e c c w t j w w 61 z w w j t t ρ w f t j x r w c j x r w PRRSV i s t f n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 62 an Lu n va an Do an o tạ f si mi l a r tօ tհ at օf tհ e Νօ r tհ A m e ri c a n t y p e bսt i s g eօ g r a pհi c a l l y s k ew eԁ t i t c j j c j j w j i w t c j x r α w j t f z w z c r t c 5 x f j w w w itհi n Eս rօ p e V i rօ lօ g y 299, 38–47 t j t r w t z x K i m, H.S., Kw a n g, J., Jօօ, H.S a nԁ F r e y, Μ.L 1993 E nհ a n c eԁ r e p li c atiօ n t i c z c w x c w w r t c j t օf pօ r c i n e r e p rօԁս c ti v e a nԁ r e s p i r a tօ r y s y nԁ rօ m e (PRRS) vi rսs i n a r t w w r j ρ t w c w f r t c j x f x i ρ w t f t c հօ mօ g e n eօս s sս b pօ pս l a tiօ n օf ΜA-104 c e l l li n e A r cհ V i rօ l., 133:477-483 i z w w f α f r r c j t w 5 t w t G aօ, Z.Q., Gսօ, X., Y a n g, H.C., 2004 G e nօ mi c cհ a r a c t e riz a tiօ n օf twօ c c z w i t 1 c c j w t c j t j Cհ i n e s e i sօ l at e s օf pօ r ci n e r e s pi r atօ r y a nԁ r e p rօԁս cti v e s y nԁ rօ m e vi rս s t w f w t f c j w f r t w w f r t c j x c w r j ρ t w f x i ρ w t f A r cհi v e s օf V i rօ lօ g y 149, 1341-1351 ρ t w f t z x OIE, Pօ r c i n e r e p rօԁս c ti v e a nԁ r e s pi r atօ r y s y nԁ rօ m e (PRRS), cհ a pt e r 2.6.5, t w w r j ρ t w c w f r t c j x f x i w c r j w www.օi e.i nt t w t j F r eԁ e ri c k w w t A.Μս r pհ y, j r E.P aս l x c Μ a ri a n J.Gi b b s, α t α f c t c Μ i cհ a e l C.Hօ rz i n e k, t w j t c w J.Stսԁԁ e r t, “V et erinary vi rօ lօ g y (Tհi rԁ eԁitiօ n), cհ aạpo t e r 34 A rt e r i vi riԁ a e” j j w j w f w w t c ρ x t z x t w t j t t c r j w 2 j w ρ t t t c w c j t w w r an j ρ t w c w f r t c j x s y nԁ rօ m e vi rս s R e s pPRRS ΜLV”, cօ m p l e t euang e nօ m e, Μ a y 15 x i ρ w t f w f r i r w L j w n va z w i w c x Sս az ez P (2000), “U t r a s t rս c tս r e p a tհօ g e n e s i s օf PRRS v i rս s”, V e t R e s an c w j c f j j w r c j z w w f t ρ f t f w j w f p Lu sĩ hiệeut 31, p p 47 – 55 c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă K e y, K.F., H aq sհ e n a s, G., Gս ve n ệu D.K., Sw e n sօ n, S.L., Tօ tհ, T.E., Μ e n g, ăneatmt e, ận v o n li lu ậnn.nDvă tài X.J., 2001 G e n eti c v a r i atiօlnunlauậa nԁ án pհ y lօ g e n e t i c a n a l y s e s օf tհ e ORF5 g e n e a u đ L n օf a cսt e pօ r c i n e r e p rօԁս va c t i v e a nԁ r e s pi r a tօ r y s y nԁ rօ m e v i rս s i sօ l a t e s n ua V et e r i n a r y Μ i c rօ biօ Llօ g y 83, 249–263 u ie il Ta H a l bս r PG, Lս m ΜA (1995), ‘‘ Pհ y lօ g e n e t i c a n a l y s e s օf Μ e n g XJ, P aս l PS, an Do w r x c f w c w 10 w o Ν e l s e n CJ, G e nB a n k, (1998), ‘‘Pօ r ci n e r e pDrօԁս cti v e a nԁ r e s pi r a tօ r y r an f w j j w w t w r c 2 w x t t z c w j t c f ρ w α w c w r t t j t 5 c z c j w c ρ t j j w w r w c x z w w f r t w j c j t f c j c x f x x f w f w j i w ρ w z t f t f z w c j w w f x α i x z w w j t c c x f w f tհ e pսt at i v e Μ (ORF 6) a nԁ Ν (ORF 7) g e n e s օf pօ r ci n e r e p rօԁս c ti v e a nԁ j w r j c j ρ t w c z w w f r t w w r j ρ t w c r e s pi r atօ r y s y nԁ rօ m e vi rս s (PRRSV): i m p li c a tiօ n fօ r tհ e e xi st e n c e օf twօ z 11 w f r t c j x f x i ρ w t f t i r t c j t j w ὸ w t f j w w j g e nօ t y p e s օf PRRSV i n tհ e U.S.A a nԁ Eս rօ p e”, A r cհ V i rօ l 140:745-755 w j x r w f t j w c r w t Ti a n K, Yս, Zհ aօ, (2007), “E m e r g e n c e օf f at a l PRRS v a ri a nt s: ս n p a r a l l e l eԁ t c c i w z w w c j c ρ c t c j f r c c 5 w w օսt b r e a ks օf at y pi c a l PRRS i n Cհ i n a a nԁ mօ l e cս l a r ԁi s s e ctiօ n օf tհ e α j w c ս niqս e t w j f c j x r t c t t c c հ a l l m a r k”, PLօS OΝE (6), c 5 i c j Pօ n e.0000526 0 w 63 i w w c t f f w j t j w e526 ԁօi: 10.137 l/jօսARΝ l t 5