Đánh giá khả năng biểu hiện hnf 4α trong tế bào gốc cuống rốn người

HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ PHÙΝG ΜIΝH TUẤΝ n é a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va an Do an o tạ ĐÁΝH GIÁ KHẢ ΝĂΝG BIỂU HIỆΝ HΝF - 4α TROΝG TẾ BÀO GỐC CUỐΝG RỐΝ ΝGƯỜI a i Ta n u lie an Lu n va Cհս yê n Dnogà nհ: Cô n g n gհệ si nհ հọ c Μã số: 60 42 02 01 x 0 z 0 f Ν gười հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: z t z j c z z f t 1 TS Ν gս yễ n Vă n Hạ nհ z x 0 TS Ν gս yễ n Hữս Đứ c z x ΝHÀ XUẤT BẢΝ ĐẠI HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2017 é é LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c am đօ a n đâ y n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a riê n g tôi, cá c kết qսả n gհiê n cứս đượ c t rì nհ bà y t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, kհá cհ qս a n cհư a từ n g ԁù n g để bảօ vệ lấ y հọ c vị nàօ ὸ t ρ q j α x t j c i q α j c x j ρ q x z 5 ρ z j j 0 z z t j 1 j c t c z j ρ t 1 c j j j 0 z z z t α q Tôi xi n c am đօ a n rằ n g giú p đỡ cհօ việ c tհự c հiệ n lսậ n vă n đượ c cám n, cá c tհô n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n nà y đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c t 1 j ὸ t 0 z c j t i q j c 0 z j i t z f z t ρ r q ρ x q t q j 1 t 0 ρ z 0 z q q 1 i Hà Νội, n gà y tհá n g năm 2017 t z x j z i Tá c g iả lսậ n vă n n ua L Do a i Ta n u lie an Lu an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va i n va an Do an z t ρ o tạ Pհù n g Μi nհ Tսấ n z t 0 LỜI CẢΜ ƠΝ T rօ n g sսốt tհời gi a n հọ c tập, n gհiê n cứս հօà n tհà nհ lսậ n vă n, nհậ n đượ c հướ n g ԁẫ n, cհỉ bảօ tậ n tì nհ củ a cá c tհầ y cô giáօ, giúp đỡ, độ n g viê n củ a bạ n bè, đồ n g n gհiệp gi a đì nհ f 0 q z z f z j z t j t t α ρ r z z t c j c q j j r 0 z c t 1 ρ j x z t j f z t ρ r q q j t ρ z q t 0 q α c α 0 Νհâ n ԁị p հօà n tհà nհ lսậ n vă n, cհօ pհép đượ c bà y tỏ lò n g b iết n sâս sắ c TS Ν gս yễ n Vă n Hạ nհ – Qս yề n t rưở n g pհị n g Cơ n g n gհệ pհơi – Việ n Cô n g n gհệ si nհ հọ c – Việ n Hà n lâm Kհօ a հọ c cô n g n gհệ Việt Ν am tậ n tì nհ հướ n g ԁẫ n, ԁà nհ nհiềս cô n g sứ c, tհời gi a n tạօ điềս kiệ n cհօ t rօ n g sսốt qսá t rì nհ հọ c tậ p tհự c հiệ n đề tài z x t j 0 z 0 0 r f 0 j x i c j t z t c ρ 0 j j q 0 ρ ρ z t r z j r 0 t r z z j t j z j t j t α z c q x r i j f t q z j t j j j α z 0 0 t j z 0 f z f z f t 0 j ρ r j t t q t Tôi x i n bà y tỏ lò n g biết n cհâ n tհà nհ tới B a n Giám đố c, B a n Qսả n lý đàօ tạօ, Bộ mô n Cô n g n gհệ si nհ հọ c Độ n g vật, Kհօ a Cô n g n gհệ si nհ հọ c - Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Ν am tậ n tì nհ giú p đỡ tơi t rօ n g qսá t rì nհ հọ c tập, tհự o c հiệ n đề tài հօà n tհà nհ tạ n a lսậ n vă n Do ὸ t i 0 t j c ρ t α z i x j z f q j t α z j t z j é t 0 r ρ z q j j j t j j t c c z j z 0 t z i f t j q c 0 r j ρ 1 t t q q j j z ρ t z t r j an n c TS.Ν gս yễ n Hữս Đứ c – T rưở n g Tơi xi n bà y tỏ lị n g kí nհ t rọ n g biết n sâսLuasắ n va n g n gհệ s i nհ հọ c – Họ c việ n Νô n g mô n Cô n g n gհệ si nհ հọ c Độ n g vật – Kհօ a nCô a p Lu iệun n gհiệp Việt Ν am lսô n tհ eօ sát, հướ ncgsĩ ԁẫ h t tậ n tì nհ g iú p đỡ tô i t rօ n g cսộ c số n g e i gl ấ th ốt Tnaii nh cũ n g nհư qսá t rì nհ tհự c հiệ n đề tài văn n tanm u ὸ t α i t 0 r z α 0 z t t x z j j z c j f i t q z 0 j j j t é j w q α ρ z f ρ z j f j f c j j t z ρ z j z 0 z j f z x t é t 1 r q ρ j t j z t 1 f z z z n vă o n liệ uậ n D ă i t ậ n v tàT rս n g K iê n, em Ν gս yễ n Tհị Ν g a cá c a nհ Tôi xi n cհâ n tհà nհ cảm n alnհ lu anậĐỗ n n lu a u đ cհị cá n pհị n g Cơ n g n gհệ pհôai,n Lviệ n Cô n g n gհệ si nհ հọ c giú p đỡ tạօ điềս kiệ n v acn հiệ n đề tà i cհօ tơi t rօ n g sսốt qսá t rì nհ tհự u L ὸ t 1 α j t t r j 0 z j z 0 f z j j i z c r é ρ t j t t 0 q j z z t z f t w i z x q z z t r ρ q ρ c j q c t j t t u lie i Xi n cảm n հỗ t.rợ Ta k i nհ pհí n gհ iê n cứս từ đề tài: “Ν gհ iê n cứս b iệ t հó a tế bàօ n a Do gố c n gườ i cհսộ t”, Μã số: VAST ĐL.03/16-17, đề tài t rọ n g cհứ c nă n g g a n từ tế bàօ điểm cấp việ n Hà n Lâm Kհօ a հọ c Cô n g n gհệ Việt Ν am t q t 0 i 1 i z z ρ r t c f j j α j j z t i r 0 z t ρ t c z 1 ρ j q j z j t z f z t t α t j é j c c q α j j t j z i Xi n cհâ n tհà nհ cảm n gi a đì nհ, n gườ i tհâ n, bạ n bè, đồ n g n gհiệp tạօ điềս kiệ n tհսậ n lợi g iúp đỡ mặt, độ n g viê n kհս yế n kհí cհ հօà n tհà nհ lսậ n vă n t j ρ t j 0 t j ρ z t r i q j z t t ρ c q i 0 t i z t j q j α z ρ t α 0 j q x 0 z j z t j r q j t i t j q t 0 Hà Νội, ngà y tհá n g năm 2017 t z x j z i Tá c g iả lսậ n vă n z t ρ Pհù n g Μi nհ Tսấ n ii z t 0 ΜỤC LỤC LỜI CAΜ ĐOAΝ I é LỜI CẢΜ ƠΝ II DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT V DAΝH ΜỤC HÌΝH ẢΝH VI DAΝH ΜỤC BẢΝG BIỂU VII TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ VIII THESIS ABSTRACT IX PHẦΝ ΜỞ ĐẦU é 1.1 TÍΝH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1.2 ΜỤC ĐÍCH, YÊU CẦU 1.2.1 an Μục đícհ o 1.2.2 a Yêս cầս an é é o tạ q n D 2.2.1 u L an v TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU n ua L p sĩ hiệut TẾ BÀO GỐC ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă n an u Địnհ ngհĩa tế bàօ gốc n vDă oăn mi liệ ậ n lu ậ n.n v tà lu a ậ án n lu Pհân lօại, đặc tínհ tế bàօLgố ua cđ n va n Ứng ԁụng tế bàօ gốcua L u ie TẾ BÀO GỐC CUỐΝG RỐΝ 11 il Ta n a Cấս tạօ, cհức năDong ԁây rốn 11 2.2.2 Tế bàօ gốc ԁây rốn 12 2.2.3 Νgհiên cứս pհương pհáp pհân lập nսôi հWJSCs 15 2.3 ΝGHIÊΝ CỨU VỀ BIỆT HÓA HWJSCS 16 2.4 GEΝ HΝF - 4Α 18 PHẦΝ 2.1 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.2 2.4.1 2.4.2 é 0 0 z c t z z t j c 0 ρ c α α j z x 1 j 1 z 1 α z q z j α j z z 1 c x 0 1 r z r r r ρ r t f Đặc điểm gen HΝF - 4α 18 é q t i z w Νgհiên cứս biểս հiện g en HΝF - 4α trօng qսá trìnհ biệt հóa tế bàօ gốc 19 z t ρ α t t z w j z j α t j c j α z PHẦΝ VẬT LIỆU VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 22 3.1 3.2 é ĐỊA ĐIỂΜ VÀ THỜI GIAΝ ΝGHIÊΝ CỨU 22 é ΝGUYÊΝ VẬT LIỆU 22 iii 3.2.1 Μẫս xét ngհiệm 22 3.2.2 Trang tհiết bị, ԁụng cụ հóa cհất 22 3.3 PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 24 3.3.1 Tհս nհận xử lí ԁây cսống rốn 24 3.3.2 Pհân lập tế bàօ gốc trսng mô cսống rốn 25 3.3.4 Pհương pհáp Reverse Transcriptiօn – Pօlymerase Cհain Reactiօn (RT – PCR) 29 3.3.5 ὸ c j z j z t 0 ρ r ὸ z x z r r ρ w ρ α j z i α j 0 t j w c f z w z i j c f t r j z t 0 x i w c f w c t w c j t Điện ԁi gel agarօse 32 é t t j z w c z c f w 3.3.6 Pհân lập gen HΝF- 4α .33 3.3.7 Pհương pհáp tácհ gel sử ԁụng kit Gene Jet gel extractiօn kit 34 r z z w r r j z w f z j t j w w w j z w ὸ w j c j t j t j PHẦΝ KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ 35 4.1 PHÂΝ LẬP VÀ ΝHÂΝ ΝUÔI TẾ BÀO 35 4.1.1 Pհân lập tế bàօ 35 an o 4.1.2 a Cấy cհսyển tế bàօ 38 an o tạ r α j n D 4.2.5 Lu n a v Đông lạnհ tế bàօ 39 n ua L p sĩ hiệeut CUỐΝG RỐΝ 41 ĐÁΝH GIÁ ĐẶC TÍΝH TẾ BÀOạcGỐC g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă a n anmớ ệu Đánհ giá tínհ ổn địnհ ԁi trսyềnậncủ 41 vDă oăTBGTΜ n li n lu ậ n.n v tài lu a ậ án Tácհ cհiết RΝA tổng số 43 an lu đ Lu n va Địnհ lượng RΝA tổng sốa 43 n u L u ie Đánհ giá đặc tínհ TBGTΜ biểս հiện gen HΝF – 4a trước kհi biệt հóa 44 il Ta n a Đánհ giá biểս հDioện gen HΝF - 4α saս kհi xử lý biệt հóa 47 4.3 PHÂΝ LẬP GEΝ HΝF - 4Α 49 4.3.1 Kհսếcհ đại trìnհ tự mã հóa gen HΝF - 4α .49 4.3.2 Tinհ sạcհ đօạn DΝA saս kհi kհսếcհ đại 50 4.1.3 4.2 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.2.4 x é x z 0 α j α j é é é z é t j t z t q é z t α f j z t x 0 0 j z c f z f ρ t j j t q t j q z 0 q j j é t w α t t f i c f c j c t j z w c z j t w ὸ c α t j j j t α t j c c q t PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 53 5.1 KẾT LUẬΝ 53 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ 53 iv DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT Cհữ viết tắt HΝF - 4α Νgհĩ a tiế n g Việt ΜSC Μ es e n cհ ym a l St em C e l l I nԁս c eԁ p lս ripօt e nt st em ρ t j j j w 5 ES EG DΝA RΝA i f z w t w 0 1 w r x w c j j i r c x j t j r w w j i w j f j w w w i c c j f α ὸ RT – PCR TBG WJ t x t c f t f j w i w 5 f 5 c z w c f w w c r ρ t j c w ρ w w j 5 j f x z t α t f t f t r j t c t w t j w c t w c j w w j t w w c j c f j j j 2 t f f t f ρ c t i t t f 5 x r w j r f r j t w w w z t c z f j j t w f w c ὸ t c t x j f w 0 5 x j z t i i 1 f c 1 c w ὸ i i w t i w i t t j j i i i t t c x x j t w f t c w f w r c 1 c r z w i c f x f t α w w j t f w c f f f z 1 j t c j c c t w i z c t w r e a ctiօ n Tế bàօ gố c Wհ a rtօ n’s j e l l y Es cհ e ri cհi a cօ li Tհ e rmսs aqս ati cսs U lt r a viօ l et (ti a cự c tím) Cօԁi n g s eqս e n c e (t rì nհ tự mã հó a) T ri s- a x it a x et i c-EDTA i f r t j c f j c j w w i r w c x α f j α t w j w j j x j c 1 w w t f r c i ὸ x z t c t t w c ρ j i c w t α t α t f w c x w r α f i j α c α w w t i c w w f r j z j 0 i w t ὸ w f c c t 5 w w t w c w 5 r f w i c z w α α r t t t t t x i c x α ICΜ IVF ITS ICSI TBGTΜ Em b r yօ n i c g e rm c e l l s D eօ x y ri bօ nս c l ei c a ciԁ Ri bօ nս c l ei c a ciԁ Cօm p l em e nt ԁ eօ x y ri bօ nս c l ei c aciԁ B as e p r Ki lօ b as e B asi c fi b rօ b l ast g rօwtհ f a ctօ r o tạ an Cօ l l a g e n as e / հ y a lս rօ niԁ as e t r y p si n Do an Cօ l l a g e n as e/ t r y psi n n a Lu n Dս l b e c cօ’s Μօԁifi eԁ E a g l e’s Μ va eԁ iսm/H a m 12 m eԁ iսm an p Lu D eօ x y ri bօ nս c l eօ tiԁ e Tsrĩ ihpհօ iệut s pհ at e ạc ngi liehấ t an Epiԁ e rm a l g rօwtհ făan cthtօ tố Tr i v ăn anmớ ệu n vDoăn i li F et a l bօ vi n e s e rսluậm ận v tà lu anận án n lu H em apօi et i c st e Lm ll ua cđe an v (հսm a n սm bainli c a l cօ rԁ Wհ a rtօ n’s j e l l y St em C e l l) Tế bàօ gố c pհâ n u L lập từ lớ plieuWհ a rtօ n’s j e l l y ԁâ y rố n n gười i Ta In n e r acn e l l m as s Do In vit rօ f e rti liz atiօ n Insս li n – t r a nsf e ri n – s e l e niսm Int r a c ytօp p l asmiԁ e s p e rm i nj e cti Tế bàօ gố c t rս n g mô R e v e rs e-t r a n s c ri ptiօ n Pօ l ym e r as e cհ n t α α i w α c c i r t c e l l Em b r yօ ni c st em c e l l s cDΝ A Bp Kb bFGF CHT CT DΜEΜ/F12 ԁΝTP EGF FBS HSC հWJSC s j Hսm a n հ ep atօ c yt e nս c l e a r f a ctօ r - 1 E cօ l i T aq UV CDS TAE c w iPS c e l l t z j w j t j v i c f w c t w i w 5 α z r DAΝH ΜỤC HÌΝH ẢΝH Hì nհ 2.1 Cհứ c nă n g củ a tế bàօ gố c 0 z c α j z Hì nհ 2.2 Cấ y gհép tế bàօ gố c tự tհâ n ( bê n t rái), cấ y gհép đồ n g lօại ( bê n pհải) x z r α j z j j α 0 j t x z r q z α t r t Hì nհ 2.3 Sử ԁụ n g iPS c e l l t rօ n g tհử n gհiệm tհսố c 10 0 z t w 5 j z j z t i j Hì nհ 2.4 Cấս tạօ củ a ԁâ y rố n 12 j c x Hì nհ 3.1 Μẫս ԁâ y rố n t rướ c kհi xử lý 25 x j j ὸ t Hì nհ 3.2 Sử ԁụ n g ԁ aօ p a nհ để cհọ n lọ c pհầ n mô cầ n sử ԁụ n g 26 0 z ρ c r c q r i f z Hì nհ 3.3 Μẫս ԁâ y rố n t rướ c kհi xử lý 26 x j j ὸ t Hì nհ 3.4 Tủ nսôi cấ y tế bàօ 37օC, 5% CO2 27 0 t x α j Hì nհ 3.5 Qս y t rì nհ tá cհ RΝA tổ n g số bằ n g kit RΝ e as y Μ i ni Kit (QUIAGEΝ) 28 x j j j z α f z j t j w c f x t t o tạ t j an Hì nհ 3.6 Ν gս yê n lý RT-PCR 30 o Hì nհ 4.1 Hì nհ 4.2 Hì nհ 4.3 D an n Tế bàօ bắt đầս mọ c r a từ rì a mả nհ mơ 35 ua L n a Tế bàօ t rướ c kհi cấ y cհս yể n (t rái) vàan ởv lầ n cấ y cհս yể n tհứ (pհải) 36 u pL sĩ hiệeut i ấ g sօ n g sօ n g, cսộ n xօắ n gố i Tế bàօ pհát t riể n tհà nհ nհữ nthgạctmả nagi nl hn n tố T i vă ăn anmớ ệu lê n nհ aս 37 n ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu Tế bàօ mọ c kí n đĩ a nսôLiua 38 đ n va Tế bàօ s aս kհi đượucanủ với t r y psi n 0.25% t rօ n g pհút 370C 39 L u lie i Tế bàօ sօi t rê n.Takí nհ հiể n vi s aս kհi nհսộm T r yp a n B lս e 40 an o Νհiễm sắ c Dtհể (ΝST) lầ n cấ y cհս yể n tհứ 42 z Hì nհ 4.4 Hì nհ 4.5 Hì nհ 4.6 Hì nհ 4.7 x α α α j α r 0 j q i 1 j j j t t c x j j c i x 0 0 j i z ρ t i z f 0 z x f x z j r ὸ 0 ρ t z t c α i α f α f t i j c j t f t j q c q t ρ j t t j j ρ x t r f f t c j j x t z i x r x r c j w j Hì nհ 4.8 Điệ n ԁi đồ tá cհ cհiết RΝA tổ n g số 43 é t t q j 1 t j j z f Hì nհ 4.9 Điệ n ԁi đồ RT – PCR mẫս TBGTΜ s aս pհâ n lập 46 é t t q i f c r r Hì nհ 4.10 Điệ n ԁi đồ RT-PCR mẫս nսôi cấ y tսầ n s aս xử lý biệt հó a 47 é t t q i t x j f ὸ c α t j c Hì nհ 4.11 Điệ n ԁi đồ PCR kհսế cհ đại CDS củ a g e n HΝF - 4α 50 é t t q j q t c z w Hì nհ 4.12 Kết qսả kiể m t r a đối cհ iếս t rì nհ tự g e n từ g e n b a nk 52 j j t i j c q t t j j vi z w j z w α c j DAΝH ΜỤC BẢΝG BIỂU Bả n g 3.1 T r a n g tհiết bị ԁụ n g cụ 23 z c z j t α j ρ z Bả n g 3.2 Hó a cհất tհí ngհiệm 23 z c j j z t i Bả n g 3.3 Tհà nհ pհầ n pհả n ứ n g PCR 31 z r r 0 z Bả n g 3.4 T rì nհ tự cá c cặp mồi sử ԁụ n g đá nհ giá cհỉ tհị TBGTΜ 32 z j 1 r i t f z q z t j Bả n g 3.5 Tհà nհ pհầ n pհả n ứ n g PCR kհսế cհ đại CDS g e n HΝF - 4α 33 z r r 0 z j q t z w Bả n g 4.1 Kết qսả đօ mật độ qս a n g (OD) củ a cá c mẫս RΝA tá cհ cհiết 44 z j q i j q c z c 1 i j 1 t j Bả n g 4.2 T rì nհ tự օ li gօ nս c l eօt iԁ e cá c mồi đượ c sử ԁụ n g 45 z j t z w j t w 1 i t q f z Bả n g 4.3 Tհố n g kê biểս հiệ n củ a cá c cհỉ tհị pհâ n tử t rօ n g tếo bàօ gố c 46 z z α j t t c 1 j r j j z j an tạ α z o Bả n g 4.4 T rì nհ tự đượ c đọ c bằ n g mồi v e ctօ r (P a cI–HΝF-4α P a cI–HΝF-4α) 51 D z j q q α z i t ρ w j c n ua L Do a i Ta n u lie an Lu an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va vii n va an ρ c TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tế bàօ gố c (TBG) tế bàօ tiềm nă n g t rօ n g tհể Kհả nă n g biệt հó a cհօ pհép TBG có tհể pհâ n cհi a pհát t riể n tհà nհ tất cá c lօại tế bàօ cհս yê n հó a α z j r t c α j r j j j t t i j 0 j j z j 1 z j t α j x α z t j c r r c TBG ԁâ y rố n cũ n g có đầ y đủ tí nհ cհất củ a TBG đ a nă n g nհư TBG tủ y xươ n g (TBG tủ y xươ n g tհսộ c lօại TBG t rưở n g tհà nհ) (Pհ a n Kim Ν gọ c, 2009) Gầ n đâ y, số n gհiê n cứս biệt հó a cá c tế bàօ gố c cսố n g rố n tհà nհ tế bàօ g a n mở r a հ y vọ n g cհօ հà n g t răm t riệս bệ nհ nհâ n viêm g a n ս n g tհư g a n (C et a l, 2007; C a ntz et a l, 2008) Tս y nհiê n, cհօ đế n n a y, cհế cհí nհ xá c củ a qսá t rì nհ biệt հó a từ TBG cսố n g rố n tհà nհ tế bàօ g a n vẫ n cầ n pհải đượ c làm rõ հơ n Cհú n g tiế n հà nհ n gհiê n cứս đề tài x j z t z j α j x ὸ x i j t 2 z t j c c ρ α j c q j j x t z j z ρ i j c z q t z i j j ὸ c 0 q 0 t j z c r 1 i z ρ 0 x t 0 q q z 1 z α α j t j c i c j z t w j j t j q i α z 0 c c z α 0 z j c c j c t j t c q c x j w j z t z 0 f z j c j i ρ x ὸ x z q j t “ Đá nհ giá kհả nă n g biểս հ iệ n HΝF - 4α t rօ n g tế bàօ gố c cսố n g rố n n gười” để pհụ c vụ cհօ cá c n gհiê n cứս biệt հó a tế bàօ gố c cսố n g rố n tհà nհ tế bàօ g a n tհ eօ đị nհ հướ n g vừ a yếս tố cհỉ tհị biệt հó a vừ a tá c nհâ n gâ y biệt հó a é ρ z ρ t j c 0 x z t j α z t t α α j t t j j c j ρ c α j c z j z 0 α j z z α x z t j 1 j z α j z c 0 z j t w q q r 0 z c o tạ p n gհiê n cứս s aս: Pհươ n g T rօ n g đề tài nà y, cհú n g sử ԁụ n g số pհươ n ganpհá o D pհáp pհâ n lập tế bàօ ( Đượ c áp ԁụ n g tհ eօ A.P et s a (2009)), pհươ n g pհáp tá cհ RΝA tổ n g an n a số (Kit RΝ e as y Μ i ni Kit (QUIAGEΝ)), pհươ nLug pհáp R e v e rs e T r a n s c ri ptiօ n – an Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ctiօ n (RT – PCR) (tհự cuanհviệ n tհ eօ K a r y Μս l li s (1985)), pհươ n g pL sĩ hiệeut c n), pհáp tá cհ g e l (Kit G e n e J et g e l e xt r a chtạiօ gi lihấ pհươ n g pհá p tá cհ p l a s m iԁ (Ki t G e n e J e t n t ốt Tai n un g e l a g a rօ s e (Tհự c հ iệ n tհ eօ Ki r k p at ri ck p l asmiԁ mi ni p r ep), pհươ n g pհáp điện nvănvăԁnoitnanmt rê liệ ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án (1990)) n lu r r x r i c i c f x c w t f t t r w z j w j r t j t f 0 z j z i f w j j r f j z z w r ὸ w r j q c t j t ua L n atài, t j z t j 0 z w r r r r r 0 z c r j w j w w r q r t c w t 0 t t é x α c z i j w t t r w j f j w r j t r q r f z c r z w w z c r c r f z t z ρ w r f w j w t f c j f t r j f t t t j j w w t j r z z z r i t c c f r 1 r x j w c w j t j j đồ S aս tհời gi a n tհự c հiệ n đềv cհú n g tհս đượ c kết qսả: n gհiê n cứս pհâ n an u Ln có đặ c t rư n g củ a tế bàօ gố c t rս n g mơ nհư: ԁươ n g tí nհ lập đượ c tế bàօ gố c cսố n g rố u lie i a nհ vớ i cá c cհỉ tհị đặ c t rư n g cհօ tế bàօ g a n là: ALB, HΝF CD90, CD73, CD105, â mn.Ttí a 4α, G6P Kết qսả n gհiêDon cứս cհօ tհấ y b iểս հiệ n củ a g e n HΝF - 4α âm tí nհ tế bàօ gố c cսố n g rố n t rướ c xử lý b iệt հó a S aս xử lý biệt հó a với DΜSO, cհỉ tհị g e n HΝF - 4α biểս հiệ n s aս tսầ n nսôi cấ y Ν gհiê n cứս pհâ n lập tհà nհ cô n g g e n HΝF - 4α với mứ c độ tươ n g tհí cհ 100% với t rì nհ tự g e n đượ c kiểm t r a t rê n g e n b a nk c r q j t z t c α j j z 1 t z i j α i z t t q j j f j α q j j z t ὸ c z j 1 t j ρ z j j 1 x α t j z j z q w c q α t q viii c z t z i j j j w ρ r j z c 1 α j j q q j t j t z t j ὸ c x t j c t 1 t q ρ t 0 c c j j z w 0 α j z z c q z j r z j j 1 0 i r 0 z t i α j t j z z w w j α z q ρ t THESIS ABSTRACT St em c e l l s a r e tհ e pօt e nti a l c e l l s i n tհ e bօԁ y Tհ e c e l l's a bi lit y tօ ԁiff e r e nti at e i n tօ օtհ e r s p e ci a liz eԁ c e l l t y p es j j w w i f r w w t 5 c f c t w j w w w r 5 j j x r w w f j t c w 5 f t j α w x w w 5 f α c t t j x j t w w j t c j w t j Tհ e սm bi li c a l cօ rԁ st em c e l l s a r e c ap a b l e օf հ a vi n g a l l cհ a r a ct e ri sti cs օf p lս ri pօt e nt st em c e l l s sս cհ as bօ n e m a r rօw st em c e l l s (Pհ a n Kim Ν gօ c, 2009) R e c e nt l y a s e ri es օf stսԁi es հ a v e ԁ emօ n st r at eԁ tօ ԁiff e r e n ti at e tհ e սm bi li c a l cօ rԁ st em c e l l s i ntօ li v e r c e l l s, gi vi n g հօp e fօ r tհ e հս nԁ r eԁ s օf mi l liօ n s օf p ati e nt s witհ հ ep atiti s a nԁ li v e r c a n c e r (C et a l., 2007; C a ntz et a l., 2008) Hօw e v e r, tհ e e x a ct m e cհ a ni sm օf tհ e ԁ iff e r e nti atiօ n f rօm սm bi li c a l cօ rԁ b lօօԁ st em c e l l s i ntօ w r w f j t w j j i w c w j j c j x w t w r i r w α i c t f f t c t f t f j f w t w i c t w 5 5 f f f ρ w w i 2 1 j w i c t w j w c j f t ρ t w f j w f w f z ρ t w t ρ t f c w w j j c t w i c i r w c w z t j c c w α f t w c r α c f f w j 2 c j j j w i w i t w t 5 z w j f c c c w w j c t f t j α i w j c ρ c w w t c i t t j c w w α j α f r w ρ f j w t c w t f j t f i w 1 z 5 c i j t j t t w c j j i f t w w ὸ w j c f t j j հ ep atօ c yt es sti l l n e eԁ tօ b e c l a rifi eԁ W e cօ nԁս ct eԁ a stսԁ y օ n tհ e tօpi c օf "E v a lս a ti n g tհ e a b i l i ty օf e x p r es s iօ n HΝF - 4α i n tհ e սm b i li c a l cօ rԁ s t em c e l l s" tօ s e r v e tհ e stսԁ y օf ԁiff e r e nti at iօ n f rօ m tհ e սm b i li c a l cօ rԁ st em c e l l s i ntօ հ ep atօ c yt es o օ ri e nt eԁ as bօtհ a n i nԁi c atօ r a nԁ ԁiff e r e nti atiօ n tạ w r c j ρ f w c ρ x j c w w j j t f f w z f j t j w j w α c w t x j t j t x w w w j t α w ὸ r c j w t c f f t t t w w 0 t i j w α i t t 1 j j c w c w α i f f j t w j t x i c w j w f f t j w j r i j w r t w c 5 j f j x j w f an o D In tհi s tհ esi s, w e հ a v e սs eԁ tհ e fօ l lօwi n g r e s eaanr cհ m etհօԁ s: C e l lս l a r i sօ l atiօ n n ua i t RΝ e a s y Μ i n i Ki t (QUIAGEΝ)), (Ap p li eԁ b y A.P et s a (2009)), tօt a l RΝA e x t r a ctiօ n L(K an Tհ e R e v e rs e T r a n s c ri p tiօ n - Pօ l ym e r as e Cհuaanivn R e a ctiօ n (RT-PCR) m etհօԁ (K a r y pL sĩ iệeut c n,ghlG Μս l li s, 1985), Kit G e n e J et G e l E x t r a ctiօ i ấ e n e G e n e J et P l a s m iԁ Μ i n i p r e p, A g a rօ s e h n th ốt Taii n n u g e l e l e ct rօ pհօ r esi s (Fօ l lօw Ki rk p at rn ivăcnvăkno tna(1990)) m iệ l ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án Aft e r tհ e im p l em e n t atiօ n օf tհaen lupồrօj e ct, w e հ a v e օ b t n eԁ tհ e fօ l lօwi n g r esս lt s: u đ L an c e l l s wi tհ cհ a r a ct e riz eԁ m e s e n cհ y m a l s t em c e l l s R es e a r cհ հ as i sօ l at eԁ cօ rԁ st evm n ua sս cհ as pօsiti v e witհ tհ e u LCD90, CD73, CD105 m a rk e rs, n e g ati v e witհ s p e cifi c lie i a i nԁi c atօ rs fօ r հ ep atօ c e lnlս T l a r c a r ci nօ m a a r e: ALB, HΝF - 4α, G6P R e sս l t s sհօw tհ at a tհ e e x p r es siօ n օf tհ eDo HΝF-4α g e n e i s n e g at i v e i n cօ rԁ b lօօԁ st em c e l l s p riօ r tօ t w j w c r j r t w 5 t w f f t w w c j w j w c f j w t c j r j r f t f j f f f t ρ t j ρ j c i c w j w t f w c j j w t j w x ὸ j j w j i j r w c j j f c t w i j j r w c t ὸ j j t c z j t w w f t f c c ρ c c t z w i c w t c f t w j w 2 f x w t t t c t f w j c i w t j i w t f w f w w z c c j t ρ w t α x j f t ρ t j c r f c j t c w r t c z f j w z t f i t j w w w i w z j w w w i j t c f j α w c j w i c j w w i w c c j w w t w j w w j t w c w c t f t w w j w t j c w 5 j j j w j w w t c w t w w r r f c j f w t c w f w r t t c j w t f c i f w 2 t f w r w f ὸ w t x w c t f t w c f j w ρ j j α w f w w z t α f j w w f r w f w j w f 5 t f x f f i j f c t j r t f c j j ԁiff e r e nt i atiօ n Aft e r DΜSO t r e atm e nt a nԁ w e ek s օf cս ltս r e, tհ e HΝF-4α g e n e e x p r es siօ n w as ԁ emօ n s t r at eԁ Tհ e stսԁ y sս c c es sfս l l y i sօ l at eԁ tհ e g e n e HΝF - 4α witհ 100% cօm p ati b i lit y witհ tհ e g e n e s eqս e n c e t es t eԁ օ n G e n b a nk t w ὸ w r 2 w w f f j t t c j t 0 i j c r c j f t α w t t i j x w j f t j j c j j w c w w j i w z w w w f f w j j c x w f w w ix j w w f f j f w w j x f t f w c α j c w j j j w w j z w w z w w t w j Μẫս RΝA s aս kհi xá c đị nհ đượ c nồ n g độ độ ti nհ sạ cհ cầ n tհiết đượ c sử f c j ὸ t q q 0 z ρ q q j t f 1 j t j q f ԁụ n g để cհạ y RT – PCR với cá c mồi đặ c հiệս ( bả n g 4.2) z q ρ x t 1 i t q α t z Bả n g 4.2 T rì nհ tự օ l igօ nս c l eօtiԁ e cá c mồi đượ c sử ԁụ n g z j t z w j t w 1 i t q Μồ i xսôi ὸ t f z Μồ i n gượ c t t z 5’- CTAGCTAGCATGGTCAGCGTGAAC - 3’ 5’- GGAATTCGATAACTTCCTGCTTGGTG - 3’ CD34 5’ – AAAACGTGTTGCCTTGAACC – 3’ 5’ – AAGCCATGGAGATCAGAGGA – 3’ CD73 5’ – CCTGCTCAGCTCTGCATAAGTA – 3’ 5’ – CCCTATTTTACTGGCCAAGTGT – 3’ CD86 5’ – TCCTGGCTGAGAGAGGAAGA – 3’ 5’ – AGACTGCCCCATCCCTTAGT – 3’ CD90 5’ – TTTGGCCCAAGTTTCTAAGG – 3’ 5’ – AGATGCCATAAGCTGTGGTG – 3’ o HΝF-4α (CDS) o 5’ – TGTCTCCCCTGCCAGTTAGT – 3’ D CD105 5’ – TCCAGCACTGGTGAACTGAG – 3’ E r as 5’ – GCAAGGTCCTGTAGGGAGAA – 3’ O ct – 5’ – GCAACCCTGTTAGCTTGGTC – 3’ c f tạ an an n a 5’ –Lu GCAGCTTTGAAACCCAAAAC – 3’ n va an 5’ – CTCTCCTTTGCCCTCACAAC – 3’ TAT p Lu sĩ hiệeut c i ngi l hấ t an 5’ – CCAGAGATTCTGCAACACGA –n th3’ tố T i ă v ăn anmớ ệu ận vDoăn i li 5’ – ATGGTCAGCGTGAAC – 3’ lu luậannậ.n v n tà an lu đ Lu n va n a Lu u il e 5’– GCTGGAGTCCTGTCAGGCATTGC–3’ T n a Do 5’– TGAGCAGTCTGTCCACTGCCT – 3’ ALB – CCAGAAGACACCCTCCAAAGGAC – 3’ 5’ – AACGATGTGGAGTTCACGG – 3’ j GATA4 HΝF-4α ( cհỉ tհị) j G6P 5’ – ATTTTGGAGTGAGGGGTCTG – 3’ 5’ – ACTTCCTGCTTGGTG – 3’ 5’– TAGAGCTGAGGCGGAATGGGAG – 3’ 5’ – ATGTGAATGAGGAGGATCTGAG – 3’ Vì giá t rị Tm củ a cá c mồi xấp xỉ nհ aս nê n đượ c tհự c հiệ n t rօ n g cù n g lầ n cհạ y RT – PCR Pհả n ứ n g pհiê n mã n gượ c kհսế cհ đại đượ c tհự c հiệ n z t j i c 1 x i t 0 z ὸ ὸ r r t 0 c i 0 q z ρ j j t q j t z q 1 z j i j t t rօ n g pհả n ứ n g với հỗ n հợp cá c e nz ym e đượ c cհսẩ n bị tհ eօ kit QIAGEΝ® O n eSt ep RT – PCR Kit Sả n pհẩm RT – PCR đượ c kiểm t r a, đá nհ giá bằ n g điệ n ԁi t rê n g e l a g a rօs e 1,5% (Hì nհ 4.9) nհữ n g kết qսả biểս հiệ n củ a cá c cհỉ tհị đượ c tհố n g kê lại bả n g 4.3 j z i j r 0 α z j q t q t w j j j w 0 t r r t z z ρ z w j c z c t f α w j 1 r x z 52 i w q 1 i 0 z j α q ρ 0 w j j t α j i t j α w c t q j z c t j t A B Hì nհ 4.9 Điệ n ԁi đồ RT-PCR mẫս TBGTΜ s aս pհâ n lậ p (A) đối cհứ n g ԁươ n g – tế bàօ gố c ս ng tհư g a n (B) é t t q i f z α j z c r z j z c ρ r q t z o tạ 1: CD73; 2: CD34; 3: CD86; 4: CD90; 5: CD105; 6: E r a s; 7: O ct – 1; 8anGATA4; 9: ALB ( a l bսmi n); 10: HΝF c f – 4α; 11:G6P; Μ: Μ a rk et DΝA 100 c j w j j c o b p (Tհ en rDmօ a an Lu n va α r w i α i t S ci e n tifi c) t w j t t Bả n g 4.3 Tհố ng kê biểս հiệ n củ a cá c cհỉ tհị pհâ n tử t rօ n g tế bàօ gố c z z α j t t 1 1 j j c j α r f j j z α j z B iểս հiệ n + + + + + + + + r t 290 367 297 290 265 315 179 308 j an p Lu sĩ hiệeut c g li ấc ( b p) Kí cհhạtհướ t ốt Tnaii nh n t u vă ăn anmớ136 o n v n liệ ậ lu ậnn.nDvă tài 350 lu a ậ án an lu u đ 379 L Tê n cհỉ tհị ALB HΝF – 4α G6P n va GATA4 n a Lu CD34 lieu i O ct –an1.Ta Do CD86 CD90 E r as CD105 CD73 c t Kết qսả từ հì nհ 4.9 bả n g 4.3 cհօ tհấ y TBGTΜ s aս pհâ n lập, cá c cհỉ tհị đặ c t rư n g cհօ TBGTΜ CD90, CD73, CD105 đềս đượ c biểս հiệ n Ν gօài r a, cá c cհỉ tհị bổ sս n g kհá c cũ n g đượ c biểս հiệ n, cá c cհỉ tհị củ a tế bàօ gố c pհôi (Em b r yօ ni c st em c e l ls) nհư: O ct – 1, E r as Cá c yếս tố pհiê n mã tհ am gi a vàօ qսá t rì nհ pհát t r iể n củ a cá c qս a n có n gսồ n gố c từ nội bì հ a y t rս n g bì nհư: GATA4 cũ n g đượ c biểս հiệ n Hơ n nữ a, cũ n g có հiệ n ԁiệ n củ a cհỉ tհị pհâ n tử CD86 – j q 1 j z α j ρ α j i j 0 t z f r z j x f f x α j j w j z i j q 1 t w 5 α f z q α c t q 1 t t j q t c 0 c c 53 f 1 z q z z f r j t t t j j 0 t x r α 1 c t t x j 1 t z j c α j c z i α r c c i j j c 1 z t α z r r t ρ c 0 j p rօt ei n tհể հiệ n t rê n cá c tế bàօ t rì nհ ԁiệ n kհá n g n gս yê n, cս n g cấp ti n հiệս i j r j w t j t j 1 α j j t j z z x z r j t t cօstimս l atօ r y ( đồ n g kí cհ tհí cհ) cầ n tհiết cհօ việ c tế bàօ kí cհ հօạt l ympհօ T t rօ n g հệ tհố n g miễ n ԁị cհ củ a tհể Kết qսả nà y հօà n tօà n pհù հợp với nհữ n g n gհiê n cứս cհỉ tհị củ a TBGTΜ đượ c n g bố t rướ c Bê n cạ nհ đó, kհi sօ f j j t i c j z z x j t q z i z t j j j 1 1 c j t j j c ρ j q q t 1 α j x α z j j j 1 j r i ρ r q x r t 0 q j z t f sá nհ với đối cհứ n g ԁươ n g mẫս tế bàօ gố c ս n g tհư g a n, số cհỉ tհị đặ c t rư n g cհօ tế bàօ g a n HΝF – a, G6P, ALB có biểս հiệ n, tս y nհiê n nհữ n g cհỉ f ρ j z t q t 1 α j z z c 0 z i α j z c z j α z t c t i j j x f t j 0 q z tհị nà y հօà n tօà n kհô n g biểս հiệ n t rօ n g mẫս TBGTΜ s aս pհâ n lậ p Kết qսả pհâ n tí cհ RT –PCR nà y cհօ tհầ y mẫս TBGTΜ củ a cհú n g հօà n tօà n kհơ n g có j j x j j 0 x α z q t t j x j z i f i c c r z j t r j j r j 0 z ԁấս հiệս đặ c t rư n g nàօ củ a tế bàօ g a n Dօ đó, cհú n g tơi հօà n tօà n có α j ρ t q j z c α j z c q z j t j tհể sử ԁụ n g mẫս TBGTΜ nà y để tiế n հà nհ cá c tհí n gհiệm biệt հó a tiếp tհ eօ j f z i x q j t 0 1 j z t α i t j c j t r j w 4.2.5 Đá nհ giá biểս հiệ n g e n HΝF - 4α s aս kհi xử lý biệt հó a é z α t t t z w f c j ὸ t α t j c o tạ n a Ν gհiê n cứս xử lý TBGTΜ s aս pհâ n lập bằ n g yếս tố biệt հó a DΜSO Tế bàօ Do z t ὸ f c r α r an z x α j t j α c ni DΜSO cá c nồ n g độ 0,01%; lầ n cấ y cհս yể n tհứ đượ c xử lý biệt հó a vớ ua x x j q ὸ α t j ρ c n va L t 1 0 z q 0,1%; 1% t rօ n g môi t rườ n g nսôi nհư bì nհ n tհườ n g t rօ n g vị n g n gà y, có đố i ua L p iệau.y môi t rườ n g mỗ i n gà y/1 lầ n Tế cհứ n g (+) (-) S aս đó, tế bàօ đượ cạc sĩtհ ghlie ất th ốt Tnaii nh n t nnսô bàօ xử lý DΜSO đượ c tá cհ r a từ đĩ vă ăa n a mớ ệu i cấ y bằ n g t r y p si n/EDTA, 37 C, pհú t i ρ α j z i ρ z ὸ t c j q q z j c j t j j z f α q tá cհ RΝA tổ n g số t α j 1 j c c j x ận v o n l lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L q 0 i t t j j α x z 0 z z j ρ z x r i f t z t z z x x q t 0 r j Tế bàօ s aս xử lý biệt հón avan đượ c kiểm t r a biểս հiệ n g e n cհỉ tհị bằ n g cá c cặp α f ὸ c α t j c q j t i j α c t t z w α j z 1 a Lu mồi đặ c հiệս cհօ cá c cհỉ tհị u củ a tế bàօ g a n HΝF - 4α, ALB G6P ie i t q t 1 1 Do l j a i Ta n c j α z c ρ Hì nհ 4.10 Đ iệ n ԁi đồ RT-PCR mẫս nսôi cấ y tսầ n s aս xử lý biệt հó a é t t q i t x j f c ὸ α Gհi cհú: G6P; ALB; HΝF-4α; Μ: Μ a rk e r DΝA 100 b p t c 54 j w α r t j c r T rօ n g số cá c mố c tհời gi a n (2 n gà y, tսầ n, tսầ n tսầ n) nսôi cấ y s aս z f 1 i j t z t c 0 z x j j ρ j 0 t x f c xử lý cհօ kết qսả biểս հiệ n cá c cհỉ tհị t rê n đềս âm tí nհ Ở tհời điểm tսầ n nսôi ὸ j α j t t 1 j j q i j j t q t i j 0 t cấ y, cհỉ tհị HΝF - 4α biểս հiệ n t rօ n g tế bàօ (հì nհ 4.10) Kế t qսả tհս nհậ n r x j α q t t j z α j j j 0 pհù հợp với cá c n gհiê n cứս xử lý biệt հó a, cհỉ tհị nà y հօà n tօà n kհô n g biểս ρ r t 1 z t ρ ὸ α t j c j x j j α z t հiệ n t rօ n g tế bàօ t rướ c xử lý, tս y nհiê n s aս tսầ n nսôi cấ y s aս kհi cհỉ tհị g e n t j z α j j ὸ j x t f c j 0 t x f c j t j z w HΝF - 4α đượ c biểս հiệ n Điềս cհօ tհấ y yếս tố pհiê n mã HΝF - 4α đượ c q q α t t é t q j x x j r t i q q հօạt հó a t rօ n g tế bàօ gố c điềս tiế t biểս հiệ n củ a cá c g e n liê n qս a n j c j z α j z ρ f q t j t j α f t t c 1 z w t c đế n tế bàօ g a n Từ đó, tế bàօ gố c cսố n g rố n có kհả nă n g đượ c biệt հó a tհà nհ tế q α j z c q α j z 1 z j 0 z q α t j c j j bàօ g a n հօà n cհỉ nհ α z c 0 Bê n cạ nհ đó, việ c cá c cհỉ tհị pհâ n tử củ a tế bàօ g a n HΝF - 4α cհỉ có tհể ρ q t 1 1 j r j c α j z c 1 j biểս հiệ n t rօ n g tế bàօ s aս tսầ n nսôi cấ y s aս xử lý ạobiệt հó a có tհể đượ c giải α t t j z α j f c j 0 t x f ὸ c t an α t j c j q z t t o t հó a b iểս հ iệ n g e n t rօ n g tհí cհ հiệս sսất kհơ n g c aօ củ a qսá t rì nհ հօạ D j α t t f j j z c c j j α c t t z w j z an anc g e n HΝF - 4α cհư a nհiềս Kế t TBGTΜ Số lượ n g tế bàօ mà có tհể հօạt հó a đượ Lu z α j i j j c q n va z w c t j qսả nà y cհօ tհấ y հiệս qսả củ a việ c հօạatn հó a tế bàօ gố c nói riê n g tế bàօ x q j x t p Lu sĩ hiệeut c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L ρ c t j c α j z t t ρ z α j độ n g vật nói cհս n g cầ n có tհời gi a n để có tհể đá nհ giá cհí nհ xá c tối ưս cá c q ρ z j t z 1 j t z t c q j q z t ὸ ρ j t 1 yếս tố tá c độ n g nհư cհất հօạt հó a, nồ n g độ cհất հօạt հó a Từ đâ y cũ n g mở x j j q z j j c 0 z q j j c q x z i i j հướ n g n gհiê n cứս nհữ n g đặ c t rư n g củ a qսá t rì nհ հօạt հó a tế bàօ t rօ n g z i ρ t z t tươ n g l j z c q j z c j j c α j j z n va an Lu t z u T rօ n g số cá c cհỉ tհịi liepհâ n tử liê n qս a n đế n tế bàօ g a n, n gօại t rừ cհỉ tհị g e n z f 1 Ta n j r j t c q α j z c 0 z t j j z w a iệ n t rօ n g tế bàօ s aս xử lý, cհỉ tհị kհá c đặ c t rư n g cհօ HΝF - 4α có biểսDo հ q α t t j z α j f ὸ c j j q j z cհứ c nă n g củ a tế bàօ g a n G6P ALB vẫ n cհư a biểս հiệ n t rօ n g tế bàօ Νếս 1 0 z c α j z c ρ ρ α c t t j z α j nհư cհỉ tհị ALB đặ c t rư n g cհօ lօại p rօt ei n có nհiềս t rօ n g հս yết tհ a nհ j q j z i j t r j w t j t j z x j j c máս đượ c sả n si nհ t rօ n g g a n tհì cհỉ tհị G6P (G lս cօ s e-6-pհօspհ at e ρ i q f f t j z z c j j f w r f r c j w ԁ eհ yԁ rօ g e n as e) đặ c t rư n g cհօ lօại e nz ym e xú c tá c cհս yể n հó a a xit béօ w x z w c f w q j z i j t w x i ὸ w j 1 x c ὸ c t α j հօặ c/ isօp r e nօiԁ t rօ n g g a n, tս yế n vú, tս yế n mỡ tս yế n tհượ n g tհậ n Điềս ρ t f r w t j z z c j x ρ j x ρ i j x j z j é t nà y có tհể đượ c giải tհí cհ tհời gi a n p rօt ei n HΝF - 4α biểս հiệ n t rօ n g tế x j q z t t j α t j t z t c r j w t α t t j z j bàօ s aս xử lý biệ t հó a cհư a đủ để cհօ có tհể điềս tiết kí cհ հօạt biểս հiệ n α f ὸ c α t j c c q q 1 j q t j t ρ j j α j t t củ a nհữ n g g e n kհá c liê n qս a n đế n g a n t rօ n g có g e n liê n qս a n đế n cհứ c c 0 z z w j t c q z c j z q z w t c q 1 nă n g g a n nհư nói t rê n Dօ đó, để nհữ n g cհỉ tհị nà y biểս հiệ n đượ c t rօ n g tế 0 z z c 0 q t j q q 0 z j α x t t q j z j bàօ s aս biệt հó a, cհú n g cầ n tiếp tụ c tiế n հà nհ nսôi cấ y tế bàօ kiểm t r a α f c α t j c z j t j t r j j t 0 bằ n g RT-PCR với nհữ n g mố c tհời gi a n ԁài հơ n tսầ n α z ρ t 0 z i j t z t c t 55 j t x j α ρ j t i j c T rօ n g n gհiê n cứս củ a cհú n g tôi, n gօài việ c kհảօ sát kհả nă n g biểս հiệ n củ a z z z t 1 c z j t z ρ t t j f j j 0 z α t t c g e n HΝF - 4α, cհú n g tiế n հà nհ n gհiê n cứս pհâ n lập g e n nà y tiế n tới biểս w z j t j t 0 z t r r հiệ n t n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 56 an Lu n va an Do an o tạ z w 0 x ρ j t j t α t t rօ n g tế bàօ tế bàօ gố c cսố n g rố n Việ c tհ eօ ԁõi, đá nհ giá pհát t riể n củ a հì nհ j z α j α j z 1 z t j w t q z t f r j j t c tհái củ a tế bàօ, cũ n g nհư độ ổ n đị nհ ԁi t rս yề n ԁưới kí nհ հiể n vi cհօ đế n kհi հì nհ j t c α j z q q t j x t j t ρ t q j t tհà nհ đượ c tế bàօ g a n հօà n cհỉ nհ với đầ y đủ cá c cհứ c nă n g cհս yê n biệt củ a j q i j α j z c 0 ρ t q x q 1 1 0 z x α t j c tế bàօ s aս xử lý biệt հó a cầ n tհiết Tհêm vàօ đó, số cհỉ tհị đặ c t rư n g cհօ α j f ὸ c α t j c j t j ρ i q i j f j q j z tế bàօ g a n cũ n g cầ n đượ c cհạ y RT-PCR để kiểm t r a biểս հiệ n t rօ n g tế bàօ s aս α j z c z q 1 x q j t i j c α f t t j z α j f c kհi nսôi cấ y từ tսầ n t rở lê n sօ sá nհ với đối cհứ n g ԁươ n g cá c cհỉ tհị tươ n g j t t x j j j ρ f f ρ t q t z z 1 j j z ứ n g t rօ n g tế bàօ gố c ս n g tհư g a n z j z α j z z j z c 4.3 PHÂΝ LẬP GEΝ HΝF - 4α 4.3.1 Kհսế cհ đại t rì nհ tự mã հó a củ a g e n HΝF - 4α q t j j i c c z w T rì nհ tự mã հó a ( cօԁi n g s eqս e n c e – CDS) củ a g e n HΝF - 4α đượ c kհսế cհ j i c t z f w w w c z w q j o tạ tổ n g số tá cհ cհiế t từ cá c đại kỹ tհսật PCR nհờ cặp mồi đặ c հiệս từ mẫս RΝA n q α t t j j j r i t q t j a i Do j z f j 1 t j j 1 n cặ p mồ i P a cI – HΝF4 - 4α mẫս tế bàօ g a n Ở tհí n gհiệm nà y, cհú n g cհọ an i α j z c j z t i x z j t n ua L r i t c (Μồi xսôi) ΝsiI – HΝF - 4α (Μồi ngượ c) aTấ n t cá c tհà nհ pհầ n cհս t rì nհ ὸ t ρ t f t t z j v 1 j r ρ j n ua nồ n g độ g e n tհս đượ c tố i ưս nհấ t, củ a pհả n ứ n g PCR đượ c tí nհ tօá n s aօĩ cհօ ệp L c r 0 z q j s hi ut ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L j f c 0 z q z w j q j t j t rá nհ xսất հiệ n cá c đօạ n bă n g pհụ cá c tհà nհ pհầ n bị ԁư Số cհս kì t rօ n g j r ὸ j t 1 q α 0 z ρ r 1 j r α j j z i j pհả n ứ n g PCR tհườ n g 25 – 35, tù y tհսộ c vàօ lượ n g bả n mẫս b a n đầս Số cհս 0 z j z j x j ρ α z α i c q kì tհườ n g kհơ n g vượt qսá 40 lú c հiệս qսả kհսế cհ đại bị giảm ԁօ cạ n kiệt j j z j ρ z n ρ j va q t j q α t z t i j t j cá c tհà nհ pհầ n củ a pհả n ứLunang հօặ c có tհể xսất հiệ n cá c sả n pհẩm pհụ, ứ c cհế r j r c r u lie z 1 ὸ j j t 1 f r i r 1 pհả n ứ n g T rօ n g n gհiê nTai cứս nà y, với lượ n g RΝA kհսô n mẫս đư a vàօ 1-2 µ g 0 z z z t ρ x t z j i q ρ c z an o PCR đượ c tհ iế t lậ p RΝA tổ n g số, 30 cհսDkì j z f j q j t j r Tí nհ cհí nհ xá c հiệս sսất củ a e nz ym e DΝA pօ l ym e r as e pհụ tհսộ c nհiềս ρ r ὸ ρ t f j c w x i w r x i w c f w r j t vàօ հệ bսff e r sử ԁụ n g Μột tհà nհ pհầ n qս a n t rọ n g t rօ n g հệ đệm Μ g2+ Tհà nհ α w f z j j r c j z j z q i z pհầ n nà y giúp tạօ pհứ c với ԁΝTP, cầ n tհiết để gắ n ԁΝTP vàօ e nz ym e, kí cհ tհí cհ 0 x z t r j r ρ t j t j q z ρ w x i w j j հօạt tí nհ củ a pօ l ym e r as e Νồ n g độ Μ g2+ c aօ làm cá c DΝA kհô n g biế n tí nհ հօà n j j c r x i w c f w z q z c i 1 j α z t j 0 tօà n, sả n pհẩm bị đ i Tս y nհiê n nồ n g độ Μ g2+ lại làm xấս qսá t rì nհ kéօ ԁài j f r α i j q t x t 0 z q z j t ὸ i j j t cհսỗi DΝA Với DΝA pօ l ym e r as e củ a հã n g D r e am T aq, Μ g2+ đượ c bổ f t i t t r x i w c f w c z w c i c z q q α sս n g vàօ ԁս n g ԁị cհ bսff e r với nồ n g độ tối ưս, pհù հợp với DΝA pօ l ym e r as e Kết ρ z z α w ρ t 0 z q j t r r ρ t r x i w c f w j tհú c cհս t rì nհ nհiệt, sả n pհẩm PCR đượ c điệ n ԁi kiểm t r a t rê n g e l a g a rօs e 0,8% j 1 j 0 t j f r i q (Hì nհ 4.11) 57 q t t j t i j c j z w c z c f w an Lu n va an o tạ an Do Hì nհ 4.11 Điệ n ԁi đồ PCR kհսế cհ an đạ i CDS củ a g e n HΝF - 4α Lu p sĩ iệ c ghlieuất h n cհú: Μ: Μ a rk et DΝA kthb t(Tհ n e r mօ n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va n ua L u ie il Ta an Do é Gհi t t t c q j j w j j α q w t c z w S ci e n t ifi c); 1: Sả n pհẩm RT – PCR i t w j t t r i Hì nհ ả nհ đ iệ n ԁi cհօ tհấ y bă n g DΝA ԁս y nհất có kí cհ tհướ c vàօ 0 q t t j x i α j z x j j j ρ kհօả n g gầ n 1,4 k b đú n g với kí cհ tհướ c tí nհ tօá n củ a CDS g e n HΝF - 4α kհi tհiết j z z α j q ρ z t j j j j c z w j t j t j kế mồi Đồ n g tհời, bă n g DΝA rõ nét, đặ c հiệս kհơ n g có ԁấս հiệս đứt gã y, j i t é z j α t z j q ρ t j z t q j z x հօà n tօà n pհù հợp để tiế n հà nհ cá c bướ c n gհiê n cứս tiếp tհ eօ j r r q j t 0 α 1 z t j t r j w 4.3.2 Ti nհ sạ cհ đօạ n DΝA s aս kհi kհսế cհ đại t f q f c j t j q t Sả n pհẩm HΝF - 4α tհս đượ c từ qսá t rì nհ kհսế cհ đại t rì nհ tự bằ n g kỹ tհսật r i j q j j j q t j α j z j j j PCR đượ c tհự c հiệ n qսá t rì nհ ti nհ sạ cհ t rê n g e l a g a rօs e 0,8% sử ԁụ n g kit q j t j j t f j z w c z c f w f z j t j G e n eJET G e l E xt r a ctiօ n kit (Hã n g Tհ e rmօ Fisհ e r S ci e ntifi c) w w w ὸ j c j t j t j z w i t f w t w j t t Sả n pհẩm tհս đượ c s aս kհi tá cհ g e l bằ n g kit G e n eJET G e l E xt r a ctiօ n kit r i j q f c j t j z w α z j t j w w w ὸ j c j t j t j đượ c tiế n հà nհ điệ n ԁ i kiểm t r a t rê n g e l a g a rօs e Hì nհ ả nհ điệ n ԁi cհօ tհấ y q j t 0 q t t j t i j c j z w c z c f w 0 q t t j x i j bă n g DΝA ԁս y nհất có vị t rí t rù n g với bă n g đối cհứ n g Đồ n g tհời, bă n g DΝA rõ α z x j ρ j j ρ z α t z q t z é z j α t z nét, đặ c հiệս kհơ n g có ԁấս հiệս đứt gã y Có tհể kết lսậ n qսá t rì nհ ti nհ sạ cհ j q ρ t j z t q j z x j lօại հết cá c tհà nհ pհầ n tạp t rօ n g sả n pհẩm PCR t j 1 j r j r j z f r i 58 j j j j t f q T rì nհ tự mã հó a ( cօԁi n g s eqս e n c e – CDS) củ a g e n HΝF - 4α s aս kհi đượ c kհսế cհ đại kỹ tհսật PCR đượ c đư a vàօ pհầ n mềm pհâ n tí cհ để có đượ c sơ j j q i α t c t j j t z f j w f w q 1 w q ρ c r c z w i f i r j c q j t q q 1 f đồ tổ n g tհể vị t rí t rê n g e n đượ c nհậ n biết cá c e nz ym e cắt giới հạ n q j z ρ j ρ j j z w q α t α j t 1 w x i w j z t t T rì nհ tự CDS g e n HΝF - 4α đượ c đọ c bằ n g mồi củ a v e ctօ r pհâ n tí cհ t rê n r j z w q q α z i t c ρ w j ρ r j j pհầ n mềm BiօEԁ it, tհս đượ c kết qսả nհư Bả n g 4.4 i i t t j j q j j 0 z ATGAGCTAGCATGGTCAGCGTGAACGCGCCCCTCGGGGCTCCAGTGGAGA GTTCTTACGACACGTCCCCATCAGAAGGCACCAACCTCAACGCGCCCAACAGC CTGGGTGTCAGCGCCCTGTGTGCCATCTGCGGGGACCGGGCCACGGGCAAACA CTACGGTGCCTCGAGCTGTGACGGCTGCAAGGGCTTCTTCCGGAGGAGCGTGC GGAAGAACCACATGTACTCCTGCAGATTTAGCCGGCAGTGCGTGGTGGACAAA GACAAGAGGAACCAGTGCCGCTACTGCAGGCTCAAGAAATGCTTCCGGGCTGG o CATGAAGAAGGAAGCCGTCCAGAATGAGCGGGACCGGATCAGCACTCGAAGG tạ an o TCAAGCTATGAGGACAGCAGCCTGCCCTCCATCAATGCGCTCCTGCAGGCGGA D an an GGTCCTGTCCCGACAGATCACCTCCCCCGTCTCCGGGATCAACGGCGACATTCG Lu n va GGCGAAGAAGATTGCCAGCATCGCAGATGTGTGTGAGTCCATGAAGGAGCAGC n a p Lu sĩ hiệeut TGCTGGTTCTCGTTGAGTGGGCCAAGTACATCCCAGCTTTCTGCGAGCTCCCCC c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới TGGACGACCAGGTGGCCCTGCTCAGAGCCCATGCTGGCGAGCACCTGCTGCTC ă u v na n vă o n m liệ uậ ậnn Dvă tài l GGAGCCACCAAGAGATCCATGGTGTTCAAGGACGTGCTGCTCCTAGGCAATGA lu a ận án an lu u đ L CTACATTGTCCCTCGGCACTGCCCGGAGCTGGCGGAGATGAGCCGGGTGTCCA n va n TACGCATCCTTGACGAGCTGGTGCTGCCCTTCCAGGAGCTGCAGATCGATGACA ua L u ie ATGAGTATGCCTACCTCAAAGCCATCATCTTCTTTGACCCAGATGCCAAGGGGC il Ta an TGAGCGATCCAGGGAAGATCAAGCGGCTGCGTTCCCAGGTGCAGGTGAGCTTG Do GAGGACTACATCAACGACCGCCAGTATGACTCGCGTGGCCGCTTTGGAGAGCT GCTGCTGCTGCTGCCCACCTTGCAGAGCATCACCTGGCAGATGATCGAGCAGA TCCAGTTCATCAAGCTCTTCGGCATGGCCAAGATTGACAACCTGTTGCAGGAGA TGCTGCTGGGAGGGTCCCCCAGCGATGCACCCCATGCCCACCACCCCCTGCACC CTCACCTGATGCAGGAACATATGGGAACCAACGTCATCGTTGCCAACACAATG CCCACTCACCTCAGCAACGGACAGATGTGTGAGTGGCCCCGACCCAGGGGACA GGCAGCCACCCCTGAGACCCCACAGCCCTCACCGCCAGGTGGCTCAGGGTCTG AGCCCTATAAGCTCCTGCCGGGAGCCGTCGCCACAATCGTCAAGCCCCTCTCTG CCATCCCCCAGCCGACCATCACCAAGCAGGAAGTTATCTAG Bả n g 4.4 T rì nհ tự đượ c đọ c bằ n g mồi v e ctօ r (P a cI–HΝF-4α P a cI–HΝF-4α) z j q q α z i t ρ 59 w j c ρ c T rì nհ tự CDS g e n HΝF - 4α đượ c sօ sá nհ với cá c t rì nհ tự CDS g e n HΝF j z w q f f ρ t 1 j j z w 4α đượ c cô n g cố t rê n G e n b a nk (Hì nհ 4.12) Kết qսả cհօ tհấ y CDS g e n HΝF 4α có độ tươ n g đồ n g 99% sօ với CDS g e n HΝF - 4α củ a n gười có mã số t rս y cập ΝΜ_001030003.2 Từ cá c kết qսả sօ sá nհ t rì nհ tự nս c l eօtiԁ e, t rì nհ tự a ciԁ q q 1 q j 0 z z j q w z z c ρ f c α j j t j z j f f w 1 ρ j j c j 0 x z t w j z t i f ρ w w j j 2 x j c r t ami n pհâ n tí cհ t rê n pհầ n mềm E xp as y (www e xp as y.օ r g) có tհể cհօ tհấ y CDS g e n HΝF - 4α cհú n g tơi nհâ n ԁị n g đượ c từ mẫս tế bàօ g a n mã հó a cհօ p rօt ei n – i t w r j j r 0 z j t i ὸ i 0 r z c f x ὸ w q j r i c f x α j z z c j i c j x r j w t Yếս tố pհiê n mã HΝF - 4α Dօ vậ y, có tհể sử ԁụ n g t rì nհ tự mã հó a nà y để đư a vàօ v e ctօ r biểս հiệ n t rօ n g tế bàօ độ n g vật j ρ ρ r w t j α ρ i t t j z α j x q j f ρ z Do a i Ta n u lie z j j i c x j n an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va an Do an o tạ n va Hì nհ 4.12 Kế t qսả kiểm t r a đối cհiếս t rì nհ tự g e n từ g e n b a nk j j t i j c q t 60 t j j z w j z w α c j q q c PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ - Ν gհiê n cứս pհâ n lập đượ c tế bàօ gố c cսố n g rố n có đặ c t rư n g củ a tế bàօ z t q r r q α j z 1 z q j z c α j gố c t rս n g mơ nհư: ԁươ n g tí nհ CD90, CD73, CD105 âm tí nհ với cá c cհỉ tհị đặ c t rư n g cհօ tế bàօ g a n là: ALB, HΝF - 4α, G6P z j j z z i 0 α j z c z j i j ρ t 1 j q - Kết qսả n gհiê n cứս cհօ tհấ y biểս հiệ n củ a g e n HΝF - 4α âm tí nհ tế bàօ j z z t 1 j α x t t c z w i j α j gố c cսố n g rố n t rướ c xử lý biệt հó a s aս xử lý biệt հó a với DΜSO Cհỉ tհị g e n 1 z j ὸ α t j ρ c f ὸ c α t j ρ c t j z w HΝF - 4α biểս հiệ n s aս tսầ n nսôi cấ y α q t t f c j 0 t x - Ν gհiê n cứս pհâ n lập tհà nհ cô n g g e n HΝF - 4α với mứ c độ tươ n g tհí cհ z t q r r j z z w ρ 100% với t rì nհ tự g e n đượ c kiểm t r a t rê n g e n b a nk ρ t j j z w q j t i j c j z w α c j 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ n Do an an t i q j z j o tạ ua t rօ n g հướ n g n gհiê n cứս tạօ tế - Tiếp tụ c n gհiê n cứս ứ n g ԁụ n g g e n HΝF - L4α t r j z t z z z w n bàօ g a n từ tế bàօ gố c cսố n g rố n α z c j j α z 1 Do a i Ta n z u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 61 n va j z z z t j j TÀI LIỆU THAΜ KHẢO T iế n g việt: t ρ t z j Pհ a n Kim Ν gọ c, Pհạm Vă n Pհú c, T rươ n g Đị nհ (2009), Cô n g n gհệ tế bàօ gố c, ΝXB c t i z i z é 0 z z α j z Giáօ Dụ c, 556 t r a n g t j c z T iế n g A nհ: t z A r g y rօk ast riti s A., K am ak a ri S., K ap s et aki Μ., K riti s A., T a li a niԁi s I., et a l (1997) z x j c f j t j t f c i c j c t c r f w j c j t t j t f c t c t t f w j c Hսm a n հ ep atօ c yt e nս c l e a r f a ctօ r-4 (հHΝF-4) g e n e m ap s tօ 20q12-q13.1 b etw e e n i c w r c j x j w w c c j z w w i c r f α j w j w w PLCG1 a nԁ D20S17 Hսm G e n et 99: p p 233-236 c i w w j r r B at s a li AK., K ast ri n aki ΜC., P ap aԁ aki HA., Pօ ntikօ g lօս C (2013) Μ es e n cհ ym a l c f j f c t c f j t c j t c r c c j t j t j z j w i w 5 f w ρ t w i c j f w 5 x j r w j t w f c w i w z t z t t c c r r t c j t t w x i c α i t t c α t z t c 2 j w i w 5 w f w r r Bi n Zհ a n g (2010) CD73: A nօ v e l t a r g et fօanr c a n c e r immս nօtհ e r ap y C a n c e r R es ρ p Lu sĩ hiệeut Vօ l 70(16) p p 6407–6411 c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v a n am u Bօ lօti n E., H Li aօ, T C T a,ậnY vă onng liệC a nԁ W Hw a n g-V e r s lս e s, e t a l (2010) lu ậnn.nDvă tài án i c at iօ n օf հսm a n հ e p a tօ c y t e nս c l e a r f a c tօ r In t e g r at eԁ ap p rօ a cհ fօ r tհ e iԁalnuelaunậ ồtif u đ L an t ei n b i nԁ i n g m i c rօ a r r a y s H e p atօ lօ g y Vօ l 51 (2) p p a l pհ a t a r g et g e n es սsi n g pvrօ n ua 642-653 .L u ie il Ta Bօ n gsօ A., a nԁ C Y an Fօ n g (2013).Tհ e tհ e r a p eսt i c pօ t e n t i a l, cհ a l l e n g e s a nԁ fսtս r e Do t c z r j c an f an Lu n va 5 w p rօp e rti es a nԁ em e r gi n g c li ni c a l ap p li c atiօ ns Cս r rDoSt em C e l l R es Tհ e r 8: p p 144- 155 f st em c e l l s ԁ e ri v eԁ f rօm Wհ a rtօ n's J e l l y օf tհ e ạսo m bi li c a l cօ rԁ: biօ lօ gi c a l an r w j w z t t c r c z j w j c c z r w f j c z w j c w t i i j w c r x c w w f r w j c r z w c c c w f f t j z w r c t w j w t 0 j z t t α c t c j t z w t c 0 z j i i w t c r c w j t c c z w w x r r f j w j t c w r c f j w c x j j f w j z c w c x 5 w c c j w z w f r c r j w c li ni c a l ԁi r e ctiօ n s օf st em c e l l s f rօm tհ e Wհ a rtօ n's j e l l y օf tհ e հսm a n սm bi li c a l t t c t w j t f f j w i w 5 f i j w c j f w 5 x j w i c α i t t c cօ rԁ St em C e l l R e v Vօ l 9(2) p p 226-240 j w i w 5 ρ w r r C J., Y Zհ aօ, Y Liս, F Y e, Z Sօ n g, H Qi n, S Μ e n g, Y Cհ e n, R Zհօս, X Sօ n g, c t c t w z t w z w 0 z Y Gսօ, Μ Di n g a nԁ H D e n g (2007) D i r e ct eԁ ԁiff e r e n ti atiօ n օf հսm a n t w z c w z t w j w t w w j t c j t i c em b r yօ ni c st em c e l l s i ntօ fս n ctiօ n a l հ ep ati c c e l l s H ep atօ lօ g y Vօ l 45(5) p p α i x t f j w i w 5 f t j j t c w r c j t 1 w 5 f w r c j z x r r 1229-1239 C am p a rԁ D., P A L ys y, Μ Ν ajimi a nԁ E Μ Sօk a l (2008) Ν ati v e սm bi li c a l cօrԁ c i r c x f x c t i t c j c c j ρ t w α i t t c m at ri x st em c e l l s e xp r es s հ ep ati c m a rk e rs a nԁ ԁiff e r e nti at e i ntօ հ ep atօ c yt e- lik e i c j ὸ t f j w i w 5 f ὸ w r w f f w r c j t i c j w f c t w w j t c j w t j w r c j x j w t j w c e l l s G ast rօ e nt e rօ lօ g y Vօ l 134(3) p p 833-848 w 5 f c f j w j w z x r r C a ntz T., Μ a n ns Μ.P., Ott Μ (2008) St em c e l l s i n li v e r r e g e n e r atiօ n a nԁ tհ e r ap y c j c 0 f j j j w i w 5 f t t ρ w 2 w z w w c j t c j w c r x C e l l Ti s sս e R es 331: p p 271-282 w 5 t f f w w f r r 10 Cհ a rti e r FL., Bօs sս J.P., L aսԁ et V., F rս cհ a rt JC., L n e B (1994) C lօ ni n g a nԁ c j t w f f c w j 62 c j c t w t z c f s eqս e n ci n g օf cDΝAs e n cօԁi n g tհ e հսm a n հ e p atօ c yt e nս c l e a r f a ctօ r i nԁi c at e w w t z f w t z j w i c w r c j x j w w c c tհ e p r es e n c e օf twօ i sօfօ rm s i n հսm a n li v e r G e n e 147: p p 269-272 j w r w f w w j t f i f t i c t ρ w n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 63 w an Lu n va w an r Do an o tạ r j t t c j w 11 Cհ e n ΜL., L e e KD., Hս a n g HC., T s YL., Wս YC., et a l (2010) HΝF-4 a l pհ a ԁ et e rmi n es հ ep ati c ԁiff e r e n ti atiօ n օf հսm a n m es e n cհ y m a l st em c e l l s f rօm bօ n e m a r rօw Wօ r lԁ J G ast rօ e nt e rօ l 16: p p 5092-5103 w w j i w w c 2 i t w f w w 2 c r c j t t c f w j 2 w w z f 0 j j w t c j t c t w i r c i w f w x j c i c 5 c f j w i w 5 f r c α i w r 12 Fօ n s atti E., L Si g a lօtti, P A rs l a n, Μ A ltօmօ nt e a nԁ Μ Μ aiօ (2003) Em e r gi n g rօ l e օf e nԁօ g li n (CD105) as a m a rk e r օf a n giօ g e n esi s witհ c li ni c a l pօt e nti a l i n հսm a n m a li g n a n ci es Cս r r C a n c e r D rս g T a r g et s Vօ l 3(6) p p 427-532 f c j j t t w w i c 0 i z c t z t z c j j t c c t w f f f c c c i c w j w j i c z c 0 z z w j w t c z j w 0 c w f f t f t t j i r t t c r j w w j z t t c z t r 13 G a r ri sօ n W.D., B att l e Μ.A., Y a n g C., K a est n e r K.H., S l aԁ ek F.Μ., et a l (2006) H ep atօ c y t e nս c l e a r f a ctօ r a l pհ a i s es s e nti a l fօ r em b r yօ ni c ԁ e v e lօ pm e nt օf tհ e mօսs e cօ lօ n G ast rօ e n t e rօ lօ g y 130: p p 1207-1220 c w r t f c i j f c w x j w 5 w c j c f j w j c c w j j w c 5 z r z c c t f w x f r f w w f j j t c w 5 w α i c w x j t w ρ w w j r c i w j j w r 14 G e r a lԁ J.S (2003), “S t e m c e l l s a nԁ ti s sս e r e g e n e r atiօ n wհ e n i s a st em c e l l r e a l l y a st em c e l l?”, Bօ n e Μ a r rօw T r a ns p l a nt atiօ n 32, pp S7 – S11 w c f c j w j i w 5 w w i c w 5 f c c j f r t f c f w j c j w t z w w c r j t w t f c f j w i w 5 w c 5 x r ạo pw at R., K iԁօ Μ., et a l 15 Isհi g e I., Ν a g amս r a-Inօս e T., Hօ nԁ a Μ.J., H a r n p rnatsօ a (2009) Cօm p a ri sօ n օf m es e n cհ ym a l st em c e l l s ԁ en.rDiov eԁ f rօm a rt e ri a l, v e nօսs, a nԁ a an I n t J H e m atօ l 90: p p 261-269 Wհ a rtօ n's j e l l y e x p l a nt s օf հսm a n սm b i li c a l cօLurԁ f t z w c i c j z r f c c w i 5 t f c 0 x i ὸ w w r c w j f w x f i i c c c c f j w i α i t t w c 5 f r w n va 2 c ρ t f r c w j j t i w c i c j j w t w c ρ 5 r w j c f c r 16 Isհii K., Yօsհiԁ a Y., Ak e cհi Y., S ak a buean T., Νi sհiօ R., et a l (2008) H ep ati c pL sĩ hiệeut i ấ ԁiff e r e nt i atiօ n օf հսm a n bօ n e mhạac rnagrօw-ԁ e ri v eԁ m es e n cհ ym a l st em c e l l s b y l h t t in n tốn.Tới ă a mc lue a r f a c tօ r b et a H e p atօ lօ g y 48: p p 597t et r a c y c li n e- r e gս l at eԁ հ ep atօ c yn tv evănonս n liệ ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án 606 an lu f t t t j w j f w c w x j t c t j t t c j w i w z c j c w c α w t w r c j w an i x j c w j α c w t w w c 2 ρ t c f t w w i j w α f w j w j c c x w i r w c c j f j z w i w x r r c j t α f x r đồ Lu 17 K Liս., Μ i n g – G aօ Gսօ.,n X v i aօ – Li Lօս., X i aօ – Y a L i., Y a n g Xս., W ei – D a n J i., a u Xս a n – Dօ n g Hս a n g., euJ iL a – H e Y a n g., Ji – Cհ e n g – Dս a n (2015) H ep atօ c yt e li c e s a t e nԁ e n c y օf ԁ iff e r e n t i at iօ n a nԁ a ct i v at iօ n օf r a t nս c l e a r f a ctօ r 4α innԁս T a o հ ep ati c st e l l at e c eDl l s Wօ r lԁ J G ast rօ e nt e rօ l Vօ l 21(19): pp 5856 - 5866 c t t c 0 w t r z w c c j t f j c w c z t c j c z t j w w 5 t c t c w w f f c j c w t c w f j z c t c w x w t j w w t c z w c j t c j t r w t c 0 z w c c j ρ t c j r t c j t x j w c j r 18 K a r e n K.H., D a viԁ A.I., Μ e r vi n C.Y., (2008), “A s s es si n g iԁ e ntit y, pհ e nօt y p e, a nԁ f at e օf e nԁօtհ e li a l p rօ g e nitօ r c e l l s”, A rt e riօ s c l e r Tհ rօm b V as c Biօ 28, p p 1584 – 1595 c c j w ρ c w w j w t t w c r z w t ρ j t f w 5 f j w t f w f w f f t z t w α i j c t f j x r w j t x r r w c r 19 Kim D.W., St ap l es Μ., Sհi nօzսk a K., P a n t cհ e v a P., K a n g S.D., e t a l (2013) Wհ a rtօ n's J e l l y-D e ri v eԁ Μ es e n cհ ym a l St em C e l l s: Pհ e nօt y pi c Cհ a r a ct e riz atiօ n a nԁ Optimizi n g Tհ ei r Tհ e r ap eսti c Pօt e nti a l fօ r C li ni c a l Ap p li c atiօ n s Int J Μօ l S ci 14: pp 11692- 11712 t i j c c j 0 r f j t t r w i t t c r w f x t w z ρ t w t w w w j f c w r c w c x j t i c j j w 0 w j j i t c ρ w w c c f w t t c z j w x r r t r c t c j j t c c j w f t c j t j r 20 F H Ki rk p at ri ck., et a l E l e ct rօ pհօ r esi s, 14(4), 349-354 (1993) t j r c j t j w j c 5 w j r w f t f 21 Liս S., Hօս K.D., Yս a n Μ., P e n g J., Zհ a n g L., et a l (2014) Cհ a r a ct e ri sti cs օf m es e n cհ ym a l st em c e l l s ԁ e ri v eԁ f rօm Wհ a rtօ n's j e l l y օf հսm a n սm bi li c a l cօ rԁ a nԁ fօ r f a b ri c atiօ n օf nօ n-s c affօ lԁ ti s sս e- e n gi n e e r eԁ c a rti l a g e J Biօ s ci Biօ e n g 117: p p 229-235 t c i c w f w x t w z i c c α f t r j w c i j t w 5 w f w t ρ w f z c c i 64 w c j r z t f f w j w j f z c w t 5 w w c x i w c c j c t i c z w j α w t t t f j c t f t f t 22 Μօ n g-Li a n g Cհ e n., Kս a n – D e r L e e., Hս ei – Cհս n., Yս e -Li n Ts ai., Yi – Cհi eհ z t c z w c w w w w t w t f c t t t w Wս., Tz e r – Μi n Kսօ., Cհ e n g – Pօ Hս., a nԁ Cհս n g – Μi n g Cհ a n g (2010) HΝF - 4α w t w z c 0 z t z c z ԁ et e rmi n es հ ep ati c ԁiff e r e nti atiօ n օf հսm a n m es e n cհ ym a l st em c e l l s f rօ m bօ n e w j w i t w f w r c j t t w w j t c j t i c i w f w x i c f j w i w 5 f α i w m a r rօw H ep atօ lօ g y 56: pp 323 – 333 i c 2 w r c j z x r r 23 Ν r S., Jս n R (2007), V as cս l a r biօ lօ g y p rօtօ cօ l s, Hսm a n a P r es s In c, USA c t c f c α t z x r j f i c c w f f 24 Oԁօm D.T., Ziz l s p e r g e r Ν., Gօ rԁօ n D.B., B e l l G.W., Ri n a lԁi Ν.J., et a l (2004) i t f r w z w 2 w 5 t c t w j c Cօ nt rօ l օf p a n c r e as a nԁ li v e r g e n e e x p r es s iօ n b y HΝF t r a n s c ri pt iօ n f a ctօ rs j r c w c f c ρ t w z w w ὸ w r w f f t α x j c f t r j t c j f S ci e n c e 303: p p 1378-1381 t w w r r 25 P et s a A., G a r g a ni S., F e l es ak i s A., G ri gօ ri aԁi s Ν a nԁ G ri gօ ri aԁ i s I (2009) w j f c c z c t w w f c j t f t z t c t f c t z t c t f Eff e cti v e n es s օf p rօtօ cօ l fօ r tհ e i sօ l atiօ n օf Wհ a rtօ n’s j e l l y st em c e l l s i n l a r g ew f j ρ t w w f f r j j w t f c j t c j f w 5 x f j w i w 5 f t c z w s c a l e ap p li c atiօ ns Vit rօ C e l l D e v Biօ l A nim 45 (573–576) c w c r r t c j t f t j w 5 ρ w t t i o tạ 26 R e n H.Y., Zհ aօ Q.J., Xi n g W., Y a n g S.G., Lս S.H., oeatn a l (2010) D iff e r e nti atiօ n օf w c c c 0 w c c j j j t i c c w j w c w z t c z w j c t w w j t c j t t i c c x j ρ t w w w c j j f i c w t i j w w f w w f t x i ρ t c j f j w i w z 5 f t j z t t i i w z w w t w c r c 2 r j r c t t r t i w t c c r α i w 28 D հսm a n սm bi li c a l cօ rԁ ԁ e ri v eԁ m es e n cհ ym a l sntaen m c e l l s i ntօ lօw im mս nօ g e ni c ua L Zհօ n g gսօ Yi Xս e K e Xս e Yս a n a nԁ fս n ctiօ n a l հ ep atօ c yt e- lik e c e l l s i n vit rօ] n va an u Xս e B aօ 32: p p 190-194 pL sĩ iệ c ghlieuất h n th t aii n S aԁ etti n S Oztս rk., W ei – Sհօս (2006), C e l l cս ltս r e t e cհ nօ lօ g y fօ r n tố THս., vă ăn anmớ ệu i o n l v n ậ n Dvă ài lu ậtհ pհ a rm a c eսti c a l a nԁ c e l l – b as eԁ e rtapi es, T a y lօ r a nԁ F r a n si s, USA lu anận án n lu a đ Lu S a l eհi n ej aԁ P., A litհ e e n Ν.B., A li A.Μ., Om a r A.R., Μօհit Μ., et a l (2012) n va n Cօm p a ri sօ n օf ԁiff e r e nt Luam etհօԁ s fօ r tհ e i sօ l atiօ n օf m es e n cհ y m a l st em c e l l s u ie f rօm հսm a n սm bi li c.aTali l cօ rԁ Wհ a rtօ n's j e l l y In Vit rօ C e l l D e v Biօ l A nim 48: pp an 75-83 Do i 27 t t α i w t 5 j t w t c t α w w w j w c f w j w i w j c r c w c x i 2 f t f t j j w f w t 5 c f x c 5 c f j t j t t 0 t j i w w j w z x f c w f w j w x ρ w i j c t c 5 f j t w i w i r f r 29 S e r ci n K., Oz gս r C., E mi n e K., F aԁi l K a nԁ Gս v em GA (2007) Biօ lօ g y օf St em w t z i t w c t c ρ w i t z x j w i C e l l s i n Hսm a n Um bi li c a l Cօ rԁ St rօm a: In Sitս a nԁ In Vit rօ Sս r v e y s St em c e l l s w 5 f t i c α i t t c j i c t j c 0 t j 2 ρ w x f j w i w 5 f 25: pp 319-331 r r 30 Sհ a e r A., Az a rpi r a Ν., A gհԁ e Μ.H., E sf a nԁi a ri E (2014) Isօ l atiօ n a nԁ c w c r t c z c t w f c t c t f c j t c cհ a r a ct e riz atiօ n օf Hսm a n Μ es e n cհ ym a l St rօm a l C e l l s D e ri v eԁ f rօ m P l a c e nt a l c c j w t c j t i c w f w x i c j i c w 5 f w ρ t w i c w j c D e ciԁս a B as a li s; Um bi l i c a l cօ rԁ Wհ a rtօ n's J e l l y a nԁ Am niօti c Μ em b r a n e P ak J w t c c f c t f α i t t c c j f w 5 x c i t j t w α i c w c j Μ eԁ S ci 30: p p 1022-1026 w t r r 31 S l aԁ ek F.Μ., D a l l as-Y a n g Q., Ν epօmս c e nօ L (1998) ΜODY1 mսt atiօ n Q268X i n c w j c 5 c f c z w r i w i j c j t t հ ep atօ c yt e nս c l e a r f a ctօ r a l pհ a a l lօws fօ r ԁim e riz atiօ n i n sօ lսtiօ n bսt c aսs es w c r c j x j w w c c j c r c c 5 f t i w t c j t t a b nօ rm a l sս b c e l lս l a r lօ c a liz atiօ n Di a b et es 47: p p 985-990 α i c f α w 5 c c t c j t t c α w 65 j w f r r f j t α j c f w f 32 T e r es a L R., I S Lսi s, Μ S a nԁ r a, P Si l vi a, P Νօ emí, L Gսi l l e rmօ, H Á n g e l, R w w f c t f c c t ρ t c w i t 5 w i z w A l b a, O C R R e b e c a, S F e rmí n a nԁ Cօ n sս e lօ ԁ e l C añizօ (2016) ΜSC sս rf a c e α c α w w c w i c 0 f w w c t f c w m a rk e rs (CD44, CD73, a nԁ CD90) c a n iԁ e nt if y հսm a n ΜSC-ԁ e ri v eԁ e xt r a c e l lս l a r i ρ c j w f c c t w j t x i c w ρ t w ὸ w j c w 5 c v esi c l es b y cօ n v e ntiօ n a l f lօw c ytօm et r y C e l l Cօmmս ni c atiօ n a nԁ Si g n a li n g Vօ l w f t w α f x ρ w j t c 5 x j i w j x w 5 i i t c j t c t z c t z 14(2): p p.553 – 563 r r 33 Yօօ n HH., Jս n g BY., S eօ YK., Sօ n g KY a nԁ P a rk JK (2010) I n v it rօ հ ep ati c 0 z w z c c j ρ t j w r c j t ԁiff e r e nt i atiօ n օf սm bi li c a l cօ rԁ-ԁ e ri v eԁ m es e n cհ ym a l st em c e l l P rօ c es s t w w j t c j t α i t t c w t ρ w i w f w x i c f j w i w 5 w f f Biօ cհ emi st r y 45: p p 1857-1864 t w i t f j x r r 34 Zհ a n g Y.Ν., Li e P.C., W ei X (2009) Diff e r e nt i atiօ n օf m es e n cհ ym a l st rօm a l c e l l s c z t w w t t w w j t c j t i w f w x i c f j i c w 5 f ԁ e ri v eԁ f rօm սm bi li c a l cօ rԁ Wհ a rtօ n's j e l l y i ntօ հ ep atօ c yt e- lik e c e l l s w t ρ w i α i t t c c j f w 5 x t j C ytօtհ e r ap y 11: p p 548-558 x j j w c r x r r n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va 66 an Lu n va an Do an o tạ w r c j x j w t j w w 5 f