Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn phân cực cao ethyl acetat của dược liệu bìm bịp (clinacanthus nutans acanthaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGÔ VĂN DƯNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN PHÂN CỰC CAO ETHYL ACETAT CỦA DƯỢC LIỆU BÌM BỊP (Clinacanthus nutans Acanthaceae) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC CẦN THƠ - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ NGÔ VĂN DƯNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN PHÂN CỰC CAO ETHYL ACETAT CỦA DƯỢC LIỆU BÌM BỊP (Clinacanthus nutans Acanthaceae) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: ThS NGUYỄN THỊ TRANG ĐÀI CẦN THƠ - 2018 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên cho xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, cảm ơn cha mẹ bên cạnh động viên hỗ trợ cho lúc thực đề tài nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn cô ThS Nguyễn Thị Trang Đài, tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm vô quý báu mặt chuyên môn mà cịn sống, ln bên cạnh, động viên hỗ trợ em Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô công tác Liên môn Dược liệu - Dược cổ truyền - Thực vật quan tâm, giúp đỡ hỗ trợ em suốt trình thực đề tài Liên môn Em xin cảm ơn quý thầy cô Bộ mơn Hóa dược, Liên mơn Hóa phân tích - Kiểm nghiệm - Độc chất, Liên môn Quản lý dược - Công nghiệp dược - Bào chế tận tình hỗ trợ để em hồn thành đề tài Em không quên gửi lời cảm ơn sâu sắc đến quý thầy cô Khoa Dược, Trường Đại học Y Dược Cần Thơ tận tình giảng dạy, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu cho em năm tháng ngồi ghế giảng đường Con xin gửi lời cảm ơn đến bác Tình tổ Bảo vệ trường giúp đỡ tạo điều kiện cho thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn anh Lê Văn Cường, anh Võ Phước Lộc, chị Trần Hồng Kiều Trang quan tâm, động viên chia sẻ kinh nghiệm đáng quý giúp em hoàn thành tốt đề tài Cuối cùng, xin cảm ơn bạn nhóm đề tài Dược liệu, Hóa dược, Kiểm nghiệm, Bào chế bên cạnh giúp đỡ, hỗ trợ động viên vượt qua lúc khó khăn để hoàn thành tốt đề tài Xin chân thành cảm ơn Cần Thơ, ngày 14 tháng 06 năm 2018 Ngô Văn Dưng LỜI CAM ĐOAN Tôi Ngô Văn Dưng, xin cam đoan kết luận văn hồn tồn riêng tơi chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu trước Cần Thơ, ngày 14 tháng 06 năm 2018 Ký tên Ngô Văn Dưng i MỤC LỤC Trang TRANG PHỤ BÌA LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG .vi DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH vii ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan thực vật học 1.1.1 Vị trí phân loại thực vật học 1.1.2 Đặc điểm họ Ơ rơ (Acanthaceae) 1.1.3 Đặc điểm loài Clinacanthus nutans 1.2 Tổng quan thành phần hóa học 1.3 Tổng quan tác dụng sinh học công dụng 1.3.1 Tính vị, tác dụng theo y học cổ truyền 1.3.2 Tác dụng sinh học 1.3.3 Công dụng 15 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.2 Dung mơi, hóa chất trang thiết bị 16 2.2.1 Dung mơi, hóa chất 16 2.2.2 Trang thiết bị 16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Sơ lược trình nghiên cứu thành phần hóa học dược liệu Bìm bịp 17 2.3.2 Phân lập tinh chế .19 2.3.3 Kiểm tra độ tinh khiết 20 ii 2.3.4 Khảo sát cấu trúc hợp chất phân lập 20 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 21 3.1 Phân lập tinh chế hợp chất 21 3.1.1 Sắc ký cột cổ điển phân đoạn CNB2b 21 3.1.2 Xử lý phân đoạn thu .24 3.1.3 Tóm tắt trình phân lập hợp chất từ phân đoạn CNB2b 30 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 33 3.2.1 Xác định cấu trúc hợp chất CN2b-1 33 3.2.2 Xác định cấu trúc hợp chất CN2b-2 38 Chương BÀN LUẬN 46 4.1 Phân lập tinh chế hợp chất 46 4.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 47 4.2.1 Hợp chất CN2b-1 47 4.2.2 Hợp chất CN2b-2 49 KẾT LUẬN 53 KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Từ gốc Ý nghĩa 95% C.I 95% confidence interval Khoảng tin cậy 95% 2,2’-azobis(2-amidinopropan) 2,2’-azobis(2-amidinopropan) dihydrochloride dihydrochlorid AAPH Bảo tàng giống chuẩn Hoa ATCC American Type Culture Collection BuOH Butanol Dung môi butanol CC50 Cytotoxic Concentration 50% Nồng độ gây độc 50% Cf Chloroform Dung môi cloroform CMIR Cell-Mediated Immune Response COSY Correlation spectroscopy Phổ COSY-NMR DNA Deoxyribonucleic acide Acid deoxyribonucleic DCM Dichloromethane Dung môi dicloromethan DEPT Distortionless enhancement by polarization transfer Kỳ Phản ứng miễn dịch qua trung gian tế bào Phổ DEPT-NMR d Doublet DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl EC50 Effective Concentration 50% Nồng độ hiệu 50% EtOAc Ethyl acetate Dung môi ethyl acetat EtOH Ethanol Dung môi ethanol N-formyl-methionyl-leucyl- N-formyl-methionyl-leucyl- Phenylalanine Phenylalanin The ferric reducing antioxidant Năng lực chống oxy hóa fMLP FRAP Đỉnh đôi 1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl iv Chữ viết tắt HMBC HSQC Từ gốc Ý nghĩa power phương pháp khử ion sắt (III) Heteronuclear Multiple Bond Correlation Heteronuclear Single Quantum Correlation Phổ HMBC-NMR Phổ HSQC-NMR HSV Herpes simplex virus Vi-rút Herpes simplex IC50 Inhibitor Concentration 50% Nồng độ ức chế 50% IL Interleukin Interleukin IR Infrared Spectroscopy Quang phổ hồng ngoại Dung môi isopropyl alcohol IPA Isopropyl alcohol m Multiplet Đỉnh phức MeOH Methanol Dung môi methanol Me2CO Acetone Dung môi aceton MIC Minimum Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối thiểu MPO Myeloperoxidase Myeloperoxidase MS Mass Spectrometry Khối phổ NMR Nuclear Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Organisation for Economic Co- Tổ chức Hợp tác Phát triển operation and Development Kinh tế PE Petroleum ether Dung môi ether dầu hỏa PFU Plaque-forming unit Đơn vị mảng hình thành RCT Randomized Clinical Trial SAG Superoxide Anion Generation Thế hệ anion superoxid SI Selectivity Index Chỉ số chọn lọc SKC Sắc ký cột Sắc ký cột OECD hay isopropanol Thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên v Chữ viết tắt Từ gốc Ý nghĩa SKLM Sắc ký lớp mỏng Sắc ký lớp mỏng t Triplet Đỉnh ba TMS Tetramethylsilane Tetramethylsilan UV Ultra Violet Tử ngoại UV-Vis Ultra Violet-Visible Quang phổ tử ngoại- khả kiến VLC Vacuum Liquid Chromatography Sắc ký cột chân không VS Vanillin - Sulfuric Thuốc thử vanillin - sulfuric WST Water Soluble Tetrazolium Water Soluble Tetrazolium vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 IC50, SI CC50 C nutans HSV-1 HSV-2 10 Bảng 3.1 Kết thăm dò hệ dung môi khai triển SKC phân đoạn CNB2b 22 Bảng 3.2 Tính chất hợp chất tinh khiết phân lập 32 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR CN2b-1 so sánh với tài liệu tham khảo 37 Bảng 3.4 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CN2b-2 42 Bảng 4.1 Dữ liệu phổ NMR hợp chất CN2b-1 48