Tổng quan
Giới thiệu về tình hình chăn nuôi tằm
Trên thế giới nghề nuôi tằm xuất hiện cách đây khoảng 5000 năm, Trung Quốc là quốc gia có nghề trồng dâu nuôi tằm sớm nhất trên thế giới và được gắn liền với tên tuổi của hoàng hậu Xilingshi [60] Bà là người đầu tiên tình cờ phát hiện ra tằm khoảng năm 2.640 trước Công Nguyên Từ đó người Trung Quốc biết nuôi tằm và thuần hóa giống tằm Theo cuốn biên niên sử, tơ tằm thời triều vua Châu Vương (cách đây khoảng 2.200 năm trước công nguyên) tơ lụa chỉ dành cho vua chúa và hàng quý tộc, thể hiện sự thuần phục của dân đối với nhà vua Bí mật của nghề trồng dâu nuôi tằm được người Trung Quốc giữ kín gần 1.000 năm sau đó mới để lộ và truyền sang các nước lân cận rồi phát triển khắp thế giới thông qua con đường tơ lụa [26].
Hiện nay có 32 nước trên thế giới phát triển nghề trồng dâu nuôi tằm. Những nước có nghề trồng dâu nuôi tằm phát triển đó là Trung Quốc, Nga, Hàn Quốc, Ấn Độ [30] Ở Việt Nam nghề trồng dâu nuôi tằm, ươm tơ dệt lụa xuất hiện sau nghề trồng lúa nước, từ thời kỳ Hùng Vương thứ 6 [31] Trải qua bao thăng trầm dịch bệnh và chiến tranh, nghề trồng dâu nuôi tằm ở nước ta vẫn được gìn giữ và phát triển cho đến ngày nay, được coi là nghề truyền thống. Trong chiến tranh, gần như nghề không được phát triển cho đến năm 1960, Nhà nước ta có chủ trương phát triển nghề trồng dâu nuôi tằm Đến năm
1986 cả nước ta có khoảng 5.000 ha dâu, sản xuất 1.200 tấn kén tằm, 175 tấn tơ, dệt gần 1 triệu mét lụa được xuất khẩu theo Nghị định thư với các nước Đông Âu là Liên Xô cũ trong những năm 1986 -1993 [25] Do chuyển đổi cơ chế, người dân được sử dụng đất đai đưa giống mới có năng suất cao vào sản xuất, diện tích sản xuất dâu tằm tơ tăng nhanh từ 5.000 ha (1986) lên 38.000 ha (1993) Năm 1994 – 1997 thời ký khó khăn của nghề, giá kén giảm, dịch bệnh, làm cho diện tích trồng dâu nuôi tằm giảm hơn 50% Năm
1998 thị trường tơ lụa thế giới khôi phục và phát triển trở lại kéo theo nghề
6 có tới 25.050 ha đất trồng dâu Toàn ngành dệt hiện nay đạt 5,5 triệu mét lụa mộc/năm Trong đó tổng công ty dâu tằm tơ đạt 1 triệu mét/năm, còn lại là các làng nghề và các cơ sở sản xuất khác [29].
Hiện nay Việt Nam cung cấp cho thị trường thế giới 2.652 tấn tơ/năm, chiếm 23% tổng sản lượng tơ thế giới Dự kiến trong những năm tới, tiềm năng sản xuất có thể đạt tới 3.640 tấn tơ các loại [32] Nhờ sự đa dạng hóa sản phẩm như: Sản xuất tơ lụa cao cấp, tơ lụa truyền thống phục vụ du lịch và xuất khẩu, các sản phẩm may mặc cao cấp khác Đặc biệt đời sống của người dân đang được nâng cao, nhu cầu lụa tơ tằm trong nước đang có xu hướng tăng nhanh, năm 1997 mới tiêu thụ có 150.000 mét/năm, từ năm 2001- 2006 tiêu thụ tơ lụa tăng vụt vào khoảng 1,2 -1,5 triệu mét/năm [29]
Như vậy, nghề trồng dâu nuôi tằm có một tương lai đầy triển vọng. Nhu cầu sử dụng sản phẩm tơ tằm, nhộng tằm đang có xu hướng tăng đối với thị trường trong nước và trên thế giới, cung chưa đáp ứng đủ với cầu. Để thúc đẩy sự phát triển của nghề nuôi tằm bằng cách hạn chế sự phát triển của dịch bệnh, đặc biệt bệnh do virus gây ra Hiện nay chưa tìm được kháng sinh có thể tiêu diệt và ngăn chặn sự phá hại của virus, do đó cần phải tìm ra biện pháp phòng bệnh hiệu quả hơn.
* Tình hình nghiên cứu về bệnh tằm
Bệnh tằm là trở ngại lớn của nghề nuôi tằm, muốn nâng cao sản lượng và chất lượng kén, cần phải ngăn chặn dịch bệnh đem lại lòng tin vào nghề cho người nuôi tằm[61].
Từ khi con người biết đến chăn nuôi tằm để lấy tơ dệt lụa, họ đã biết cách phòng chống bệnh cho tằm và chọn thời vụ hợp lý trong năm để phát triển tránh dịch bệnh Thời Đông Hán thế kỷ thứ II-III trước công nguyên, người Trung Quốc đã biết vệ sinh phòng dịch cho tằm, năm 1260 hai tác giả người Trung Quốc tên là Tư Nông và Nguyễn Triều đã mô tả một số triệu chứng tằm và nêu ra kinh nghiệm phòng tránh bệnh cho tằm trong cuốn “Nông tang tập yếu” [24] Vào đời nhà thanh Đức Mạc cũng là một tác giả người Trung Quốc đã mô tả tằm bệnh làm 24 triệu chứng được ghi trong cuốn “ Thực Kinh tằm tang” Những năm 1980- 1990 Trung Quốc đã kiểm soát được dịch ruồi E.Bombycis ký sinh ở tằm bằng cách sử dụng thuốc
Tepa(triethylenephosphoramide) hay Thio Tepa
(triethylenethiophosphoramide) nồng độ 0,02-0,04% dùng cho ruồi trưởng thành Exorista bombycis Louis ăm thêm, kết quả cho thấy sau giao phối đẻ trứng, trúng ruồi mất khả năng phát triển thành dòi, ngăn chặn được dịch bệnh ở tằm do ruồi ký sinh [26] Năm 1940, Dương Băng Kiệt người Trung Quốc đã đề xuất biện pháp xử lý nhiệt độ 124 o F-134 o F trong 10 giây để phòng tránh bệnh gai Năm 1960 Viện khoa học Nông Nghiệp Trung Quốc đã công bố kết quả nghiên cứu về virus gây bệnh bủng tằm là “ thể đa giác gây bệnh bủng là sản phẩm trao đổi chất của tế bào ký chủ khi có virus ký sinh, thể đa giác không phải là virus mà phân tử virus chứa trong thể đa giác” Năm 1971-1973 Trung Quốc đã ứng dụng thành công năng lượng nguyên tử notoron để xử lý trứng tằm nâng cao sức đề kháng của tằm trong điều kiện dễ phát sinh bệnh [25] Năm 1985 người ta đã tổng hợp thành công các chất 734-II, 738, 838.II ngăn chặn hiệu quả mần bệnh thối do virus đa diện gây ra [17].
Nhật Bản nghề trồng dâu nuôi tằm phát triển mạnh, nghiên cứu bệnh tằm cũng được chú trọng, Nhật Bản đã đưa việc phòng bệnh tằm vào chương trình quốc gia và được giảng dạy ở các trường TH phổ thông và cao đẳng Nông nghiệp và đã có nhiều phát hiện về bệnh tằm được công bố.Năm 1955 bác sĩ Yanafuzi đã công bố công trình nghiên cứu về bênh bủng tằm Năm 1907 ở Liên Xô người ta đã mô tả đặc điểm của tác nhân gây bệnh bủng là: “ qua lưới lọc vi khuẩn, siêu hiển vi, có khả năng di truyền qua phổi” [16] Ở Việt Nam ngay từ những năm 1960 đã xây dựng cơ sở sản xuất giống và nghiên cứu bệnh tằm, cùng với hai chuyên gia TrungQuốc Vương Hồng Văn và Châu Hồng Xương đã phát hiện ra bệnhNosema trên các giống tằm ở Việt Nam Năm 1973-1982 trường Đại họcNông nghiệp Hà Nội đã kết hợp với các cơ sở nghiên cứu trong cả nước đã
8 trong đó virus là tác nhân gây bệnh nguy hiểm và thường xuyên phát dịch lớn, rất khó phòng chống, hiện nay trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội đang ứng dụng kết quả dùng các chất Proponic, Salycilic Benroic cùng với một số chất hoạt tính sinh học cao đang được thực nghiệm phòng chống bệnh do virus gây ra [13].
Như vây, bệnh tằm đã và đang được nghiên cứu không chỉ ở Việt Nam mà cả trên thế giới Những nghiên cứu áp dụng khoa học sinh học phân tử để tác động vào gen virus, của tằm để tạo ra giống chống lại virus hiện vẫn đang được nghiên cứu chưa đưa vào sản xuất Đối với các nhóm gây bệnh như vi khuẩn, nẫm, động vật nguyên sinh có nhiều nghiên cứu ứng dụng và thành công [12], các bệnh do nhóm này gây ra cơ bản đã ngăn chặn được Riêng nhóm virus, chưa tìm ra loại thuốc nào để tiêu diệt khi dịch bênh xẩy ra, để phòng trừ có hiệu quả phải dựa vào đặc tính sinh học của nó Trong chăn nuôi tằm các cơ sở vẫn sử dụng các biện pháp phòng chống các bệnh do virus gây ra theo phương pháp truyền thống như xử lý môi trường, vệ sinh, phát hiện bệnh sớm và cách ly nhưng không dựa vào đặc tính sinh học của viurs cho nên hàng năm bệnh vẫn có xu hướng tăng.
Do đó nghiên cứu bệnh và đặc điểm sinh học của nhân tố gây bệnh làm cơ sở xây dựng biện pháp phòng chống bệnh hiệu quả là một vấn đề cần thiết và cấp bách hiện nay đối với nghề nuôi tằm.
Một số bệnh chính của tằm
Tằm là loại côn trùng biến thái hoàn toàn trải qua 4 giai đoạn chính: Trứng, tằm, nhộng và ngài Trong 4 giai đoạn, sự nhiễm bệnh thường xảy ra vào giai đoạn tằm, thuộc giai đoạn sinh trưởng sinh dưỡng Các nhân tố gây bệnh cho tằm có thể chia thành 2 nhóm.
* Nhóm gây bệnh không truyền nhiễm:
Do điều kiện thời tiết (nhiệt độ, độ ẩm, pH) thay đổi đột ngột hoặc không đảm bảo, làm ảnh hưởng đến tằm, gây mất khả năng miễn dịch dẫn đến nhiễm bệnh Hoặc do môi trường ô nhiễm, nhiễm các chất hoá học độc hại, thiếu dinh dưỡng cũng là nguyên nhân dẫn đến tằm mắc bệnh và còi cọc.
* Nhóm gây bệnh truyền nhiễm do các tác nhân
Nhón gây bệnh truyền nhiễm do các tác nhân như vi khuẩn, nấm, động vật nguyên sinh.
- Vi khuẩn: Gây bệnh vi khuẩn đường ruột, bệnh vi khuẩn độc tố.
- Nấm: Gây bệnh nấm cứng trắng, bệnh nấm cứng xanh, bệnh nấm cúc vàng.
- Động vật nguyên sinh: Gây bệnh tằm gai.
- Vi rút: Virus là tác nhân gây bệnh nguy hiểm và phổ biến nhất cho tằm, hiện nay đã phát hiện ra 4 loại virus gây bệnh trên tằm là:
+ Virus nhân đa diện NPV(Nuclear polyhedrosis virus) gây bệnh bủng. + Virus tế bào chất đa diện CPV (Cytoplasmic polyhydrosis virus) + VR nhân hình cầu IFV (Infections fracherie).
+ VR nhân hình DNV (Densonucleosis virus).
Trong các nhóm gây bệnh truyền nhiễm thì có nhóm gây bệnh như:
Vi khuẩn, nấm, động vật nguyên sinh đến nay về cơ bản đã phòng và có thuốc chữa trị hiệu quả Riêng nhóm gây bệnh do virus gây ra vẫn còn là một vấn đề nan giải đối với người nuôi tằm và nhà nghiên cứu bệnh tằm[2]. Trong nhóm virus gây bệnh ở tằm, thì virus gây bệnh bủng Nuclear polyhedrosis virus là nhóm gây bệnh trên tằm chiếm tỉ lệ cao, xẩy ra quanh năm, có nhiều địa phương phát triển thành dịch.
Mỗi một giống tằm và tuổi tằm có một sức đề kháng khác nhau nên khả năng nhiễm bệnh cũng khác nhau[34] Các nhóm bệnh do virus gây ra cho tằm cũng biểu hiện triệu chứng và bệnh tích khác nhau, dựa vào các đặc điểm đó chúng ta có thể nhận biết sơ bộ đối với từng loại bệnh thể hiện qua bảng sau:
Bảng 1: Một số bệnh chính ở tằm
Triệu chứng Vết bệnh Chuẩn đoán bệnh virus
Virus Nuclear polyhedrosis virus (NPV)
- Màu trắng sữa hoặc màu vàng
- Bò liên tục xung quanh cạp nong
- Cuối tuổi 4 đầu tuổi 5, tằm nhiễm bệnh thường quay đầu ra ngoài cạp nong nằm im, da căng dễ vỡ, có dịch màu trắng sữa rỉ ra, cơ thể co ngắn lại
- Giai đoạn cuối tằm chuyển màu vàng (vàng nghệ) và rỉ nước.
- Các tế bào bị nhiễm virus:
+ Tế bào màu + Tế bào biểu mô khí quản + Tế bào mỡ
- Thể đa diện và virus tự do nhân lên trong nhân tế bào, làm cho tế bào căng ra và vỡ, máu có màu trắng sữa.
- Sự phá vỡ các tế bào làm rối loạn quá trình trao đổi chất của tằm dẫn đế tằm teo dần và chết.
- Đầu màu xanh tối, không lột xác, da bóng, toàn thân chuyển nhanh sang màu trắng sữa, có dịch màu trắng sữa chảy ra.
- Lấy máu soi dưới kính hiển vi có độ phóng đại 400-600 lần, sẽ thấy sự xuất hiện của các thể đa giác
- Nhuộm Sudan II để phân biệt hạt mỡ và thể đa giác, hạt mỡ bắt màu hồng, thể đa giác không bắt màu
- Tằm sinh trưởng chậm, còi cọc, kém ăn, da có màu trắng đục.
- Các tế bào bị nhiễm virus:
+ Tế bào ruột giữa hình trụ
- Virus ký sinh trong tế bào
- Mổ tăm, lấy ruốt giữa ra quan sát bề mặt vách giữa xuất hiện những vạch tròn màu trắng chất đa diện virus (CPV) - Nếu bệnh xẩy ra ở tuổi lớn, ngực trong suốt, cơ thể teo dần, nôn mửa, ỉa chảy, phân màu trắng.
- Bệnh phát triển chậm và kéo dài. chất, và tạo ra các đa diện sữa.
- Giai đoạn đầu tằm kém ăn, tằm lốt xác không đều, kích thước cơ thể tằm khác nhau, nhiều tằm bé, phát triển chậm
- Cơ thể co lại, ruột trước rỗng chứa đầy nước
- Khi xâm nhập vào ruột giữa, virus tấn công vào tế bào hình cốc, không tạo thành khối đa diện
- Sau khi bị nhiễm tế bào hình cốc trương phồng lên sau đó teo đi thoái hóa thành những thể hình cầu.
- Tế bào bị phân hủy và virus phân tán vào ruột giữa.
- Mổ lấy một đoạn ruột giữa làm mẫu vật soi tươi
- Cố định bằng dung dịch hãm carnoy trong một phút, rửa mẫu nhẹ nhàng và nhuộm pironinmetyl xanh 5-10 phút, rửa hết chất nhuộn còn lại
- Soi dưới kinh hiển vi có độ phóng đai 400-600 lần quan sát sẽ thấy các thể hình cầu nhuộm màu đỏ anh đào, đó là bệnh IFV
Bảng 2: So sánh tính chất gây bệnh và triệu chứng gây bệnh của nhóm virus Đằc điểm NPV CPV IFV
Hình dạng virus Hình gậy Hình cầu Hình cầu
Vị trí ký sinh thích hợp
Các mô trong xong cơ thể
Tế bào chất của tế bào hình trụ ruột giữa
Tế bào chất của tế bào hình cầu, ruột giữa Đa diện Tạo thành trong nhân mặt lục giác 2-6 μmm
Trong tế bào chất, không đều lục giác, tứ giác 0,5-10 μmm
Không có đa diện, các thể hình cầu hình thành trong tế bào hình trụ
Triệu chứng Các đốt sưng to, thân màu trắng sữa hoặc màu vàng, chảy nước, bò liên tục, các cá thể phát triển không đều Đầu rỗng, ỉa chảy, bất động.
Phân màu trắng sữa Đầu rỗng, ỉa chảy, đầu và ngực vươn cao, bất động Phân lỏng hoặc hơi nâu.
Diễn biến bệnh Cấp tính Mãn tính Mãn tính
Máu Máu trắng, chứa nhiều đa diện
Trong suốt chứa nhiều đa diện
Trong suốt không có đa diện
Ruột giữa Bình thường Màu trắng sữa ở phần sau, có nếp nhăn vành khuyên
Xanh hơi ngả màu vàng
Chuẩn đoán Soi kính hiển vi thấy đa diện trong máu
Soi kính hiển vi thấy đa diện ở phần sau ruột giữa
Lấy mẫu tươi ruột giữa, nhuộm màu và soi
Như vậy dựa vào bảng 1 và bảng 2 [17] cho thấy bệnh bủng do virus Nuclear polyhedrosis virus gây ra rất nguy hiểm cho tằm, diễm biến bệnh nhanh, khả năng lây lan lớn bởi virus giải phóng từ tằm nhiễm bệnh bị vỡ Đối với virus chỉ có thể bị tiêu diệt khi ở ngoài cơ thể sồng (tiêu diệt mầm bệnh) còn khi virus đã xâm nhập và gây nhiễm trên đối tượng vật chủ chúng ta khó có thể kiểm soát được [15] Chưa có một kháng sinh nào được nghiên cứu để điều trị bệnh do virus gây ra Đó là vì khi nhiễm vào tế bào virus chỉ tuồn vào tế bào vật chủ phần lõi là axit Nucleic [20],nếu giả sử chúng ta sử dụng một hợp chất hóa học nào đó có tiêu diệt được axit Nucleic của virus thì chắc chắn hợp chất hóa học đó sẽ ảnh hưởng đến các thành phần có trong tế bào của vật chủ, mà ảnh hưởng đầu tiên đó là axit Nucleic của tế bào chủ[36] Đây là một khó khăn trong việc tìm ra kháng sinh để tiêu diệt virus, do đó việc phòng bệnh không để virus xâm nhập vào tế bào chủ là lựa chọn tốt nhất hiện nay [6].
Đại cương về virus
I.3.1 Đặc điểm chung của virus.
Thuật ngữ virus bắt nguồn từ tiếng La Tinh có nghĩa là chất độc [22]. Kích thước nhỏ từ 10-300nm Virus sống ký sinh bắt buộc, có khả năng gây bênh ở mọi cơ thể sống Virus có kích thước vô cùng nhỏ bé, đi qua màng lọc vi khuẩn, không lắng trong ly tâm thường Virus có cấu tạo đơn gian chỉ chứa một trong hai loại axid nucleic (AND hoặc ARN) , được bảo vệ bởi một lớp vỏ protein bên ngoài gọi là vỏ capsid Vỏ capsid có thể trần hoặc được được phủ bởi một lớp màng ngoài có bản chất là lypopolysaccharid, polysacharid Axid nucleic của virus được gọi là genom của virus [6]
Genom Virus là một loại axid nucleic có thể là AND (một mạch hoặc hai mạch) hoặc ARN (một mạch hoặc hai mạch) Ở một số loại virus trong chu trình nhân lên của chúng đã sử dụng cả hai loại axit nucleic, tuy chỉ có một loại tồn tại trong virion (VD virus viêm gan B khi sao chép phải thông quaARN trung gian, AND- ARN-AND) Cả 4 loại genom đều tìm thấy trong
ARNsd (Hepadnavirus) thẳng hoặc dạng vòng (khép kín) , có thể ở dạng đơn hoặc dạng kép Những virus có genom dạng AND kép thường có kích thước lớn, còn virus chứa genom dạng AND đơn có kích thước nhỏ
Virus có genom dạng ARN có hai loại:
- Loại chứa Genom ARN một mạch Trình tự nucleotide của genom dạng ARN đơn giống với trình tự nucleotide của mARN và được quy ước là genom (+), còn ngược lại được gọi là genom (-).
- Loại chứa genom ARN hai mạch(dạng kép) tất cả đều phân đoạn (trong mỗi hạt virus có nhiều đoạn) [7]
Có thể tóm tắt các dạng genom của virus như sau:
Các loại genom trong virion (virus thành thục)
- Khả năng gây nhiễm của virus:
+ Đối với nhiều loại virus, axit nucleic chỉ có khả năng lây nhiễm khi đã đưa vào trong tế bào Ví dụ khi được giải phóng khỏi vỏ capsid, bản thân axid nucleic có thể tự thực hiện quá trình gây nhiễm tế bào, bắt đầu chu trình gây nhiễm hoàn chỉnh để nhân lên.
+ Đối vối virus có genom dạng ARN (-) không có khả năng lây nhiễm. Muốn nhân lên chúng phải phiên mã thành ARN (+), nhờ sự hỗ trợ của emzym phiên mã ngược.
Vỏ capsid là lớp ngoài bao quanh genom, có bản chất là protein được cấu tạo bởi các đơn vị hình thái gọi là capsome, có chức năng bảo vệ genom.Trên lớp vỏ capsid có chứa các thụ thể đặc hiệu giúp cho virus bám vào bề mặt vật chủ Ngoài ra vỏ capsid còn chứa các kháng nguyên có tác dụng kích thích hệ thống miễn dịch của cơ thể của cơ thể vật chủ trong suốt thời gian nhiễm.
- Một số virus còn có vỏ ngoài (envelope) bao bọc vỏ capsit, vỏ ngoài được cấu tạo bởi lipid và protein.
+ Lipid gồm: photpholip và glycolypid với chức năng làm ổn định cấu trúc của virus.
+ Protein vỏ ngoài thường là glycoprotein,
Vỏ ngoài có đặc tính dễ bị biến tính do tác động của các yếu tố ngoại cảnh làm mất khả năng nhiễm bệnh của virus.
Một số virus ngoài các thành phần đã nêu trên còn có các enzyme đặc trưng cho virus đó, nhưng virus không có hệ thống enzyme hoàn chỉnh như vi khuẩn Enzym, virus có hai nhóm enzyme đó là: Nhóm enzyme tham gia vào quá trình sao mã và phiên mã, nhóm enzyme giúp virus xâm nhập vào tế bào và giải phóng virus mới
* Một số đặc tính của virus
+ Tính ký sinh bắt buộc trong tế bào sống.
Khi ở ngoài tế bào sống virus là một dạng vô bào Chúng không có cấu trúc tế bào, không có riboxom, không có nguồn năng lượng độc lập, không có hệ enzyme chuyển hóa hoàn chỉnh Chính vì vậy virus chỉ có thể sống và nhân lên trong tế bào sống.
* Sự nhân lên của virus Đây là quá trình trong đó virus chỉ đóng vai trò truyền các thông tin di truyền của virus cho tế bào vật chủ (tế bào bị nhiễm) , sau khi truyền thông tin di truyền virus sang tế bào chủ, virus chuyển hướng hoạt động bình thường của tế bào chủ sang việc tổng hợp các nguyên liệu để lắp ráp virus mới Sự nhân lên của các virus khác nhau là không giống nhau.
Sơ đồ nhân lên của một số loại virus:
+ Cách nhân lên của virus AND
AND virus -nhân bản -AND virus
ARN tt virus -ribosom capsit
+ Cách nhân lên của virus ARN không cần đến AND:
ARN bổ sung - ARN virus
+ Cách nhân lên của các virus ARN cần đến AND
ARN virus -AND trung gian -ARN tt -Ribosom
- Các giai đoạn của quá trình nhân lên của virus
Quá trình nhân lên của virus là một quá trình liên tục nhưng người ta có thể chia thành 5 giai đoạn:
+ Giai đoạn hấp phụ lên tế bào vật chủ
+ Giai đoạn xâm nhập tế bào chủ
+ Giai đoạn tổng hợp (Tổng hợp các thành phần của virus)
I.3.2 Đặc điểm của Nuclear polyhedrosis virus
Virus Nuclear polyhedrosis virus thuộc họ Baculoviridea là một trong 7 thành viên thuộc nhóm virus ký sinh côn trùng Virus Nuclear polyhedrosis virus ở thể hình gậy kích thước 330-80 nm.
Virus Nuclear polyhedrosis virus có cấu tạo gồm: Vỏ ngoài, vỏ capsid, và lõi axit Nucleic.
- Vỏ ngoài: là một lớp màng nhầy ngoài cùng có tính chất là protein và gọi là protein ngoài Protein ngoài mang trính kháng nguyên và có tác dụng kích thích hệ thống miễn dịch của cơ thể vật chủ.
- Vỏ capsid: Vỏ capsid nằm kế tiếp bên trong lớp vỏ ngoài và được ngăn cách với lớp vỏ ngoài bởi một lớp keo dính Protein cấu tạo nên vỏ Capsid được gọi là protein trong Protein trong mang tính kháng nguyên làm tăng khả năng gây bệnh của Virus [14]
- Genom của Nuclear polyhedrosis virus : Genom là một phân tử AND gồm 2 mạch xoắn kép (AND sd) Khi nhiễm vào tế bào vật chủ virus tuồn lõi AND vào tế bào vật chủ, AND của virus sử dụng năng lượng, nguyên liệu và riboxom của tế bào vật chủ để tổng hợp nên protein và quá trình nhân lên của AND Mặt khác khi tế bào bị nhiễm virus, AND của virus sinh ra men Azenaza ức chế AND của tế bào chủ và phân giải tạo thành các nucleotit tự do [11] Sau khi tổng hợp đủ các thành phần như vỏ, AND (lõi…), virus tiến hành lắp ráp để tạo thành virus mới
Quá trình nhân lên của virus Nuclear polyhedrosis virus và sự hình thành thể đa diện được tiến hành trong nhân tế bào, vỏ của thể đa diện được tổng hợp ở ngoài nhân sau đó vận chuyển vào trong nhân để hình thành các thể đa diện Số lượng virus và thể đa diện ngày một tăng, kêt quả phá vỡ tế bào chủ, giải phóng virus tự do và thể đa diện Virus tự do lại tiếp tục xâm nhập vào tế bào lân cận, bắt đầu chu trình phá vỡ tế bào tiêp theo Các tế bào chủ bị phá vỡ, quá trình phát bệnh biểu hiện ra bên ngoài.
Virus NPV tồn tại ở 2 dạng:
+ Dạng tự do: Dễ bị bất hoạt hơn khi ngâm trong cồn 70 %, virus tự do bất hoạt trong vòng 5 phút (nếu ở thể đa diện virus bị bất hoạt trong vòng 3 giờ) Trong cơ thể dạng tự do có thể xâm nhập tế bào gây nhiễm ngay.
Một số phương pháp chuẩn đoán bệnh
1.4.1 Phương pháp xét nghiệm chuẩn đoán bệnh
Dựa vào quan sát các triệu chứng của bệnh như: Tằm có đầu xanh, da bóng, toàn thân có màu trắng sữa, tằm bò liên tục xung quanh nong tằm, tằm cất cao đầu, dao động nhiều, nhả dịch vàng Nếu triệu chứng không biểu hiện rõ lấy mẫu máu để kiểm tra Chuẩn bị máu tươi soi dưới kính hiển vi phóng đại 400 – 600 lần, soi để kiểm tra sự có mặt của thể đa diện:
- Cách lấy máu xét nghiệm như sau:
+ Cắt gai đuôi lấy máu cho lên quan sát, lấy máu xét nghiệm: Lấy máu ở gai đuôi cho lên lam kính quan sát hoặc cho tằm ngửi ete, CCL4 hoặc bịt lỗ thở cho tằm nhả dịch tiêu hoá cho lên lam kính quan sát hoặc cho các cối sứ nghiêm thêm nước cất đun uống khuấy đều cho lên lam kính quan sát.
Sau khi nhỏ dịch mẫu lên tiêu bản làm khô (hơ trên ngọn lửa đèn cồn) nhỏ vào tiêu bản 1-2 giọt Tetrametyl paraamino, tripheuyl cacbinol 1% để khoảng thời gian 10 - 12 phút, rửa lại bằng nước, nhuộm tiếp axid picric 3-5 phút, dùng nước rửa tiêu bản bằng lần 2 hong khô tiêu bản rổi đưa lên kính kiểm tra Nếu tác nhân gây bệnh là đa giác sẽ có màu vàng kim.
Có thể hong khô tiêu bản trong điều kiện chân không, cố định tiêu bản bằng HCHO 40% + cồn 70% với tỉ lệ 1: 9 thời gian 10-12 phút, dùng giấy lọc hút khô nước, nhỏ NaOH 1% trong thời gian 1 phút, rửa tiêu bản bằng nước sạch, nhỏ vài giọt Eosin 5% để 3-5 phút thể đa diện sẽ bắt màu có màu hồng, còn các tác nhân bệnh khác như nấm, vi khuẩn không có màu.
Trong trường hợp có nhiều hạt mỡ nổi lên mặt trên của tiêu bản làm cho quá trình quan sát gặp khó khăn, nhỏ 1-2 giọt dịch NaOH 1% hoặc nhỏ
2 giọt ete, NaOH 1% hay ete có tác dụng làm tan các hạt mỡ trên bề mặt giúp cho quá trình quan sát được rõ ràng chính xác hơn Ngược lại nếu mỡ không tan sau khi đã nhỏ NaOH 1% (ete) ta nhuộm màu tiêu bản bằng sunda III, mỡ bắt màu hồng, có trường hợp không có màu. Để phân biệt thể đa diện trong máu và thể đa diện đường ruột ta nhỏ 2-3 giọt miễn dịch CrSO4 1% + Na2CO3 1%, thể tích ngang nhau để 10 phút rửa sạch sau đó quan sát:
+ Thể đa diện đường máu dầy, phình to, trong suốt.
+ Thể đa diện đường ruột: có trường hợp bắt màu hồng, có trường hợp không bắt màu.
Quan sát dưới kính hiển vi điện tử thể đa diện của Nuclear polyhedrosis virus có hình lục giác đều Khi nhuộm Sudal III các hạt mỡ bắt màu hồng, thể đa diện Nuclear polyhedrosis virus không bắt màu Trong trường hợp chưa phân định rõ ràng giữa hạt mỡ và thể đa diện Nuclear polyhedrosis virus nhỏ thêm vào tiêu bản 1 giọt NaOH 0,5% Nếu là hạt mỡ sẽ tan từ từ, nếu là thể đa diện Nuclear polyhedrosis virus tan ngay hoặc ta có thể sử dụng axits, HCl nhỏ thêm vào tiêu bản nếu là thể đa diện Nuclear polyhedrosis virus sẽ tụ lại với nhau, mỡ sẽ bị phân tán ra.
- Cách nhuộm màu thể đa diện Nuclear polyhedrosis virus. Để phân biệt thể đa diện Nuclear polyhedrosis virus và thể đa diện Cytoplasmic polyphedrosis virus ta làm tiêu bản tương tự và ngâm tiêu bản trong dịch formalin 10% trong thời gian 3 – 5 phút để cố định tiêu bản, sau đó cho HCl 2% trong thời gian 10 phút, tiếp tục nhuộm Malachitgrier 4 phút thể đa diện Nuclear polyhedrosis virus bắt màu xanh, thể đa diệnCytoplasmic polyphedrosis virus không bắt màu.
Bảng 3: Kết quả bảng nhuộm màu các hoá chất khác đến với thể đa diện Nuclear polyhedrosis virus và Cytoplasmic polyphedrosis virus.
Hoá chất nhuộm Đối tượng nhuộm HCl 1N NaOH 1N Malachitgrie r Sudal III
Thể đa diện NPV Kết tinh thành khối nhỏ
Hoàn tan Màu xanh Không
Không Hoàn tan Không Không
Mỡ Không Hoàn tan Không Màu đỏ
Hạt clbumin ở ruột Hoàn tan ngay Không Không Không
Tinh thể Oxalat Canxi Không Không Không Không
I.3.2 Phương pháp chuẩn đoán phân biệt Đây là phương pháp chuẩn đoán dựa trên triệu chứng của bệnh Mỗi bệnh có một biểu hiện và những dấu hiệu về triệu chứng riêng Căn cứ vào những biểu hiện khác nhau đó để ta chẩn đoàn bệnh như:
- Bệnh có biều hiện màng ngăn giữa các đốt phồng lên, da căng có màu trắng sữa ở tuổi 4-5 tằm nhiễm virus thường bò quay đầu ra ngoài phía cạp nong nằm im, đôi khi tằm bệnh có màu vàng da có các đốm đối xứng, hoặc đốm thương tích lan rộng đó là bủng do Nuclear polyhedrosis virus (NPV)
- Bệnh có triệu chứng biểu hiện tằm sinh trưởng chậm, còi cọc, kém ăn, màu trắng đục, nếu tằm mới lớn nhiễm bệnh ngực trong suốt đó là bệnh do Cytoplasmic polyphedrosis virus (CPV) gây ra.
- Tằm bệnh có triệu chứng biểu hiện như: kém ăn, lột xác không đều, kích thước cơ thể không đều Cơ thể co lại, ruột trước rỗng chứa nhiều nước, ỉa chảy, nôn mửa…đó là bệnh do virus hình cầu Infections flacheric virus (IFV) gây ra.
- Tằm bệnh có triệu chứng đầu căng rỗng chứa ít dịch, ruột giữa xanh màu lá cây, hơi vàng, da tằm bệnh dễ vỡ đó là bệnh do Densonuclesis virus
I.3.3 Phương pháp chẩn đoán phân lập
- Bằng phương pháp quan sát triệu chứng, thấy mẫu bệnh phẩm có vết tích của bệnh bủng Sử dụng mẫu nghiền nát, xử lý kháng sinh, cho thêm NaCl 0.9%, đông tan ba lần, quay ly tâm 3000 vòng/ phut, trong 5 phut Gạn lấy dịch chứa virus, bỏ cẵn
Tiêu dịch virus thu được vào nhung niệu phôi gà 9 ngày tuổi Sau khi tiêm 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ, soi trứng kiểm tra tỉ lệ sống chết, loại bỏ phôi chết 24 giờ Những phôi chết 48, 72, 96 bỏ vào tủ mát 24 giờ đua ra mổ và quan sát bệnh tích
Nếu bệnh tích biểu hiện trên phôi gà như: tụ máu đỏ đậm ở đỉnh đầu, cổ, bụng Xung huyết lấm tấm toàn thân Kết luận có sự xuất hiện của virus gây bệnh Có thể kết hợp kiểm tra dịch trứng thu được soi trên kính hiển có độ phóng đại 400- 600 lần để xác định chính xác virus cần phân lập.
I.5.2 Một số biện pháp phòng chống bệnh
Hiện nay các cơ sở nuôi tằm đã áp dụng các phương pháp phòng chống bệnh như:
Kết quả nghiên cứu
Kết quả phân lập virus từ các ổ bệnh
3.1.1 Thu thập bệnh phẩm để phân lập được virus gây bệnh bủng tằm từ những ổ tằm bị bệnh tự nhiên, chúng tôi đề ra nguyên tắc sau: bệnh phẩm là những tằm có triệu chứng bệnh tích điển hình của bệnh bủng tằm thường gặp, thu toàn bộ những tằm bệnh kể cả tằm bị bệnh chết và bảo quản lạnh. Chỉ những mẫu bệnh phẩm sau khi đã kiểm tra bằng phản ứng AGP với kháng thể chuẩn kháng virus gây bệnh bủng tằm cho kết quả dương tính mới dùng để phân lập, giám định virus.
Kết quả về thu mẫu được trình bày ở bảng 3.1 Những dấu hiệu tằm nghi bị nhiễm Nuclear Polyhedrosis virus (NPV) đó là các nong tằm thường thấy tằm bỏ ăn, bò khỏi đệm lá dâu để ra mép các nong và bò lên sạp nong. Một số con thấy các đốt bị phồng lên, chảy dịch màu vàng và teo dần lại… Thu tất cả những tằm có triệu chứng, bệnh tích làm mẫu bệnh phẩm.
Tằm bệnh đem nghiền với bột thủy tinh, cho thêm nước sinh lý theo tỷ lệ 1:1, ly tâm thu phần nước phía trên, xử lý kháng sinh, đông tan 3 lần, coi dung dịch nước này là kháng nguyên cần chẩn đoán (virus cần phân lập) Chỉ khi nào kháng nguyên này có phản ứng AGP dương tính với kháng thể chuẩn kháng virus gây bệnh bủng tằm thì mới dùng hỗn dịch này gây nhiễm cho tằm độ tuổi 4 và phôi trứng gà 9 - 10 ngày tuổi.
- Dùng tằm ở độ tuổi 4 khỏe mạnh không có biểu hiện bệnh bủng tằm. Trước khi chọn nong tằm làm thí nghiệm chúng tôi bắt ngẫu nhiên mốt số tằm để kiển tra nếu phản ứng AGP âm tính mới được chọn làm thí nghiêm
- Phôi gà dùng để phân lập hoặc tiếp truyền virus gây bệnh bủng tằm được chọn từ trứng gà khỏe mạnh ấp đảm bảo cá điều kiện để phôi phát triển tốt.
Kết quả gây nhiễm virus trên tằm mẫn cẩm bệnh được trình bày ở bảng 3.2 và kết quả bệnh tích đại thể được trình bày ở bảng 3.3.
Giữa lô thí nghiệm và lô đối chứng được nuôi cách ly triệt để trong 3 ngày để theo dõi lâm sàng Các lô thí nghiệm, sau 48 giờ gây nhiễm bằng hỗn dịch virus vào lá dâu bắt đầu có các triệu chứng lâm sàng điển hình: tằm ăn ít, bò khỏi vùng đệm lá dâu; đốt sưng to dần và mọng nước, sau 5 ngày gây nhiễm tỷ lệ tằm bệnh.
Bảng 3.1 Triệu chứng và bệnh tích của tằm nghi nhiễm virus gây bệnh bủng tằm Nuclear polyhedrosis (NPV)
TT Địa điểm thu mẫu
- Đốt thân tằm cằng phồng
- Bò liên tục xung quanh cạp nong
- Có dịch màu trắng sữa, màu vàng chảy ra
- Tằm bị teo dần và chết.
Tằm Trắng Trung Quôc - tằm vàng lai
- Tằm bò liên tục xung quanh nong
- Da căng bóng, chảy dịch màu vàng nghệ.
- Một số tằm bị teo
- Một số tằm bị chết
- Có dịch màu vàng chảy ra từ những tằm bệnh.
Tằm Trắng Việt Nam- Tằm Vàng nguyên
- Tằm bò liên tục xung quanh nong
- Da căng bóng, chảy dịch màu vàng nghệ.
- Một số tằm bị teo
- Một số tằm bị chết
- Có dịch màu vàng chảy ra từ những tằm bệnh.
Tỷ lệ tằm nhiễm bệnh sau gây nhiễm là rất cao đạt 80 - 100%, số tằm bị chết tới 60 - 70% trên tổng số tằm được gây nhiễm virus Trong khi đó lô đối chứng dương được gây nhiễm bởi virus gây bệnh bủng tằm của Trung Quốc tỷ lệ tằm bị bệnh đạt 100%
Bảng 3.2 Kết quả gây nhiễm virus trên tằm 4 tuổi.
Số lượng tằm thí nghiệm Độ pha loãng bệnh phẩm
Liều lượng (ml) Đường gây nhiễm
Tỷ lệ số tằm có triệu chứng lâm sàng
Tỷ lệ số tằm chết
BT-TB/09 100 1/1 1ml hỗn dịch/10 gam thức ăn
Cho tằm ăn lá dâu đã phun hỗn dịch virus
BT-HT/09 100 1/1 1ml hỗn dịch/ 10 gam thức ăn Cho tằm ăn lá dâu đã phun hỗn dịch virus 100% 70%
BT-PT/09 100 1/1 1ml hỗn dịch/ 10 gam thức ăn Cho tằm ăn lá dâu đã phun hỗn dịch virus
100 1/1 1ml hỗn dịch/ 10 gam thức ăn
Cho tằm ăn lá dâu đã phun hỗn dịch virus
100% 70% Đối chứng âm (Nước sinh lý)
BT-TB : Bủng tằm thu ở Thái Bình.
BT-HT : Bủng tằm thu ở Hà Tây.
BT-PT : Bủng tằm thu ở Phú Thọ.
Biểu đồ 3.2: Tỷ lệ số tằm có triệu chứng và số tằm chết
Trong 3 mẫu bệnh phẩm thu được từ 3 địa phương khác nhau, chúng tôi thấy mẫu bệnh phẩm thu được từ Hà Tây (cũ) tỷ lệ gây nhiễm cho tằm đạt 100% và cũng là lô có số lượng tằm thí nghiệm chết cao nhất tới 70%. Mặc dù khi thu mẫu, ở xí nghiệp giống tằm Chương Mỹ, Hà Tây có số lượng tằm nuôi khá lớn (1500 nong/đợt) tỷ lệ nhiễm bệnh là 21,13 %, thấp hơn so với các địa phương khác như Vũ Thư - Thái Bình (25,00%) và Thanh Thủy - Phú Thọ (25,93%) Do xí nghiệp giống tằm Chương Mỹ, Hà Tây là cơ sở làm giống tằm cho cả nước nên trình độ chăn nuôi ở đây có tính thâm canh cao, các biện pháp phòng trừ bệnh được áp dụng tốt Tuy nhiên khi gây nhiễm trong phòng thí nghiệm thì chủng virus thu được từ Hà Tây có tỷ lệ nhễm bệnh tới 100%, tỷ lệ chết tới 70%, điều đó chứng tỏ đây là chủng virus có độc lực cao đối với tằm và các biện pháp phòng chống bệnh tốt của cơ sở chăn nuôi tằm đã làm giảm được dịch bệnh bủng tằm.
Số tằm bị nhiễm Số tằm chết
BT-TB/09 BT-HT/09 BT-PT/09 ĐC + ĐC-
Bảng 3.3: Kết quả bệnh tích đại thể ở tằm gây nhiễm virus
Số lượng kiểm tra bệnh tích.
Kết quả đánh giá bệnh tích sau 120 giờ gây nhiễm Sưng đốt Chảy dịch vàng Teo thân Mức độ
Tỷ lệ % Trọng lượng thân trung bình (gam)
++ 80,00 ++ 73,33 ++ 63,33 0,113 ± 0,015 BT-HT/09 30 +++ 100,00 +++ 76,66 +++ 66,67 0,101 ± 0,012 BT-PT/09 30 +++ 83,33 +++ 73,33 +++ 66,67 0,105 ± 0,012 Đối chứng dương 30 +++ 93,33 +++ 73,33 +++ 70,00 0,100 ± 0,011 Đối chứng âm 30 - 0,00 - 0,00 - 0,00 0,131 ± 0,016
Ghi chú: +++: Bệnh tích rất điển hình.
Biểu đồ 3.3: So sánh mức độ biểu hiện bệnh tích ở 3 mẫu đã thu.
Trong 3 biểu hiện bệnh tích của tằm quan sát được, bệnh tích sưng đốt thân có tỷ lệ khá cao từ 80 - 100%, và mức độ bệnh tích khá rõ nét từ 2 + (+ +) đến 3 + (+++) Kết quả ở bảng 3.3 cho thấy có đến 2/3 số lượng tằm thí nghiệm đồng thời biểu hiện cả 3 bệnh tích Tương tự như kết quả ở bảng 3.2 lô tằm thí nghiệm với mẫu bệnh phẩm thu được ở Hà Tây có mức độ bệnh tích điển hình nhất Đặc biệt với bệnh tích teo thân, thân tằm bị teo là
Sưng đốt Chảy dịch vàng teo thân
BT-TB/09BT-HT/09BT-PT/09 Đối chứng dương Đối chứng âm vì tằm bệnh bị rỉ nước làm giảm trọng lượng của tằm, so sánh các lô thí nghiệm với lô đối chứng âm, trọng lượng tằm giảm trung bình 18,87% (P 0,05 Kết quả phân lập virus gây bệnh bủng tằm trong thí nghiệm của chúng tôi tương tự với kết quả của Phạm Công Hoạt đã phân lập năm 2000 (tài liệu chưa công bố), điều này chứng tỏ virus gây bệnh bủng tằm vẫn có độc lực cao và cũng giải thích tại sao dịch bệnh bủng tằm vẫn đang gây thiệt hại lớn cho người nông dân Lô đối chứng âm không chết phôi nào, lô đối chứng dương tiêm virus gây bệnh bủng tằm được phân
Bảng 3.4: Kết quả gây nhiễm trên phôi gà 9 - 10 ngày tuổi
Mẫu bệnh phẩm Số lượng phôi thí nghiệm Độ pha loãng của bệnh phẩm
Liều lượng (ml) Đường tiêm
Kết quả theo dõi sau tiêm
24 giờ 48 giờ 72 giờ 96 giờ Tổng số phôi chết n % n % n % n % N %
BT-TB/09 10 x 3 lần 1/10 0,2 Xoang niệu mô
BT-HT/09 10 x 3 lần 1/10 0,2 Xoang niệu mô
BT-PT/09 10 x 3 lần 1/10 0,2 Xoang niệu mô
16 53,33 Đối chứng âm (Nước sinh lý)
Ghi chú: n: Số phôi chết
%: Tỷ lệ phôi chết/ tổng số phôi gây nhiễm.
Sau 96 giờ tiêm truyền hỗn dịch bệnh phẩm, tất cả các phôi sống và phôi chết đều được mổ khám, đánh giá bệnh tích đại thể.
Bệnh tích phôi chủ yếu là:
- Màng phôi dày lên, có keo nhày.
- Xuất huyết mình và đầu phôi.
Những phôi gà thí nghiệm được mổ kiểm tra và thu nước trứng để làm phản ứng AGP, kết quả được trình bày ở bảng 3.5.
Bảng 3.5: Kết quả bệnh tích ở phôi gà được tiếp truyền virus bệnh phẩm
Kết quả mổ khám và kiểm chứng
BT-PT/09 10x 3 lần 90 80 50 80 + ĐC dương 10x 3 lần 90 80 60 80 + ĐC âm 10x 3 lần - - - - -
Ghi chú: ĐC: Đối chứng
(1): Tỷ kệ màng phôi keo nhầy (%)
(2): Tỷ lệ đầu phôi phù (%)
(3): Tỷ lệ xuất huyết 2 đùi (%)
(4): Tỷ lệ xuất huyết mình và đầu (%)
Kết quả ở bảng 3.5 cho thấy có tới 90% số phôi thí nghiệm đều có bệnh tích, những phôi chết ở 48 - 96 giờ sau tiêm mức độ biểu hiện bệnh tích nặng hơn Những chỗ xuất huyết trên đùi, thân mình và ở đầu phôi thường là xuất huyết điểm, nhìn rõ từng chấm xuất huyết mà không tạo thành mảng lớn Bệnh tích phôi được tiêm truyền virus gây bệnh bủng tằm đại trà nhất: màng phôi dày, có nhiều keo nhầy, lượng nước trứng ít, nhiều trường hợp không thu được nước trứng Thu nước trứng từ phôi thí nghiệm và tiến hành phản ứng AGP với kháng thể chuẩn kháng virus gây bệnh bủng tằm đều có kết quả dương tính Điều này chứng tỏ sự có mặt của virus gây bệnh bủng tằm trong mẫu bệnh phẩm nên virus đã gây bệnh tích cho tằm, cho phôi gà ở các thí nghiệm trên, kết quả thu được của chúng tôi tương tự như kết quả nghiên cứu của Huijuan Yang và cộng sự, 2008 [40].
Việc tiếp truyền virus phân lập được tiến hành nhiều đợt liên tục trên các môi trường nuôi cấy khác nhau và được trình bày cụ thể ở phần đặc tính sinh học của virus Qua các lần thí nghiệm từ nhiều mẫu bệnh phẩm thu được ở các ổ dịch tại các địa phương khác nhau Chúng tôi thấy tính chất bệnh đều giống nhau, chỉ có mức độ biểu hiện bệnh có khác nhau Dựa vào kết quả thí nghiệm, chúng tôi thấy mẫu bênh phẩm BT - HT/09 gây bệnh tích điển hình nhất và quyết định chọn mẫu bệnh phẩm virus này dùng cho các nghiên cứu tiếp theo.
3.2 Một đặc tính sinh học của virus gây bệnh bủng tằm phân lập ở Việt Nam.
3.2.1 Đặc tính gây bệnh trong tự nhiên
Virus gây bệnh bủng tằm ở Việt nam có độc lực cao, vào những năm 90 của thế kỷ trước là thời kỳ hoàng kim của dâu tằm tơ, trong nhiều năm các cơ sở sản xuất giống tằm đã phải tiêu hủy hàng ngàn nong tằm do bị bệnh bủng tằm và chết hàng loạt [58] Virus chủ yếu gây bệnh cho tằm lứa tuổi 4 và 5 hay nói cách khác ở lứa tuổi 4 và 5 rất mẫn cảm với Nuclear polyhedrosis virus Ở độ tuổi này tằm bị nhiễm virus với cường độ cao tỷ lệ chết có thể lên đến 100% [61] Song mức độ virus gây bệnh bủng tằm cũng phụ thuộc rất nhiều vào yếu tố như: giống tằm, thời tiết, điều kiện chăm sóc…[44] Qua việc theo dõi bệnh trên tằm để thu mẫu, chúng tôi thấy các giống tằm đang nuôi chủ yếu ở Việt Nam: tằm trắng Việt Nam, tằm trắng Trung Quốc, tằm vàng lai, tằm vàng nguyên… đều bị bệnh bủng do Nuclear polyhedrosis virus gây ra với các triệu chứng, bệnh tích rất điển hình: đốt sưng và mọng, chảy dịch vàng; tằm bị teo thân [51] Kết quả khảo sát khả năng gây bệnh của Nuclear polyhedrosis virus được thể hiện ở bảng
Đề xuất các biện pháp phòng trừ bệnh hiệu quả
Ngay từ thời xa xưa người nông dân nuôi tằm đã đúc rút kinh nghiệm để phòng bệnh cho tằm, nhiều kinh nghiệm để bây giờ được áp dụng Ví dụ như làm mành che kín nhà nuôi tằm không cho các côn trùng khác bay vào những vẫn đảm bảo thoáng mát cho tằm Hoặc nhanh chóng sang nong nuôi khi nhiệt độ ngoài trời quá cao, hoặc che kín khi có gió lạnh, phun nước để làm tăng độ ẩm nhà nuôi hoặc thay đổi lá dâu khi thấy tằm ăn ít.
Các xí nghiệp chăn nuôi tằm thường dùng các biện pháp khử trùng bằng clorua vôi 0,3%, và chọn tạo giống tằm có khả năng chống chịu bệnh tốt, đồng thời cải tiến việc cho ăn và chăm sóc tằm để tằm sức đề kháng chống lại bệnh cho tằm
Từ việc nghiên cứu biết được một số đặc tính sinh học của Nuclear polyhedrosis virus phân lập được ở Việt Nam chúng tôi đề xuất một số biện pháp phòng bệnh như sau:
3.3.1 Dựa theo đặc tính nuôi cấy và đặc tính gây bệnh của Nuclear polyhedrosis virus
Qua kết quả phân lập Nuclear polyhedrosis virus cũng như kết quả nghiên cứu về đặc tính sinh học của Nuclear polyhedrosis virus phân lập được ở Việt Nam cho thấy: Nuclear polyhedrosis virus rât dễ dàng nhân lên và gây bệnh tích điển hình trên phôi gà 9 - 10 ngày tuổi, trên tằm ở độ tuổi
4 Đặc biệt đối với tằm ở độ tuổi 4, đây là thời kỳ rất mẫn cảm với Nuclear polyhedrosis virus, tỷ lệ nhiễm đến 100%, tỷ lệ tằm bị bênh chết có khi lên đến 90% Mặt khác các độ tuổi của tằm cũng rất ngắn chỉ giao động 3 - 4 ngày, nếu không có biện pháp quản lý tốt trong các khâu chăn nuôi sẽ có sự nhiễm trùng và khi tằm đến độ tuổi mẫn cảm nhất sẽ bị bệnh đồng loạt.Trong quá trình nghiên cứu các lô thí nghiệm và lô đối chứng được chúng tôi chuẩn bị và cách ly tốt, không thấy có sự lây nhiễm từ lô gây nhiễm mầm bệnh sang lô không được gây nhiễm mần bệnh Từ đó chúng tôi khuyến cáo biện pháp phòng chống bệnh là:
- Mua giống tằm sạch bệnh (AGP âm tính), nuôi giống tằm ít cảm nhiễm hơn với bệnh.
- Với một nhà nuôi tằm thực hiện tốt khâu cùng vào cùng ra, quản lý riêng biệt từng nhà nuôi Dụng cụ chăn nuôi của nhà nuôi nào dùng đúng nhà nuôi đó, tuyệt đối không nên dùng chung.
- Nếu một người nuôi tằm phải chăm sóc cho nhiều nhà nuôi khác nhau thì bắt buộc phải mặc áo blu, và áo blu ở buồng nuôi nào thì mặc áo của buồng nuôi đó.
- Đảm bảo dinh dưỡng thật tốt cho tằm đặc biệt là tằm ở độ tuổi 3, 4 và 5 là độ tuổi dễ mẫn cảm với bệnh.
- Khi phát hiện một nong tằm nào đó có bệnh bủng tằm thì phải nhanh chóng tiêu hủy cả nong, tránh tình trạng chỉ nhặt những con tằm bị bệnh ra rồi tiếp tục nuôi nong tằm đó.
3.3.2 Dựa theo đặc tính chịu nhiệt và chịu pH của Nuclear polyhedrosis virus
Qua các nghiên cứu đặc tính này của virus ở phần trên thấy khả năng chịu nhiệt, chịu pH của Nuclear polyhedrosis virus phân lập ở Việt Nam phụ thuộc rất nhiều vào tình trạng virus bệnh Nếu virus ở dạng tự do thì khả nằng chịu nhiệt và pH rất kém Ngược lại nếu Nuclear polyhedrosis virus ở dạng thể bao hàm (hỗn dịch tế bào tằm bệnh) thì khả năng chịu nhiệt, chịu pH tăng rõ rệt Trong thực tế chăn nuôi tằm xuất hiện tằm bệnh thì virus chủ yếu ở dạng thể bao hàm, do đó cần thực hiện các công việc sau:
- Rửa sạch nong nuôi tằm bệnh bằng nhiều lần nước và phơi nắng.
- Xông formol vào các dụng cụ nhà nuôi tằm, ước lượng thể tích nhà nuôi để sử dụng liều lượng thích hợp đảm bảo hiệu quả cao, đồng thời tránh gây ô nhiễm môi trường xung quanh: số m 3 của thể tích nhà nuôi là số ml dung dịch Formol cần dựng để trộn với ẵ số lượng gam thuốc tớm theo thể tớch nhà.
- Xếp tất cả nong, dụng cụ, dàn nuôi vào trong nhà nuôi để xông khói.
- Sát trùng dụng cụ bằng nhiệt độ tối thiểu từ 70 0 C và thời gian ít nhất
- Khử trùng bằng vôi bột hoặc clorua vôi (là những hóa chất chủ đạo để ngăn chặn sự phát triển của Nuclear polyhedrosis virus (NPV).
3.3.3 Dựa theo khả năng tồn tại virus trong tự nhiên
- Nên để trống nhà nuôi khoảng 7 ngày trước lứa nuôi tằm tiếp theo.
- Không dùng nước thải ở nơi rửa các nong tằm bệnh để tưới cho vườn dâu đang thu hái.
Trên đây là một số biện pháp phòng bệnh bủng tằm dựa theo các kết quả nghiên cứu của chúng tôi thu được, nếu người nuôi tằm thực hiện tốt các khuyến cáo phòng bệnh trên chắc chắn tỷ lệ tằm bị bệnh bủng sẽ giảm đáng kể Bên cạnh đó Bộ Nông Nghiệp và Phát Triển Nông Thôn đã ban hành TCVN về quy định biện pháp sử dụng thuốc và phòng bệnh cho tằm.
Kết luận và kiến nghị
- Từ các mẫu bệnh phẩm thu tại Hà Tây (cũ), Thái Bình, Phú Thọ đã phân lập được 3 chủng Nuclear polyhedrosis virus Các chủng phân lập được ký hiệu: BT - HT/09, BT - TB/09, BT - PT/09 Trong đó chủng BT - HT/09 có động lực ổn định hơn được chọn làm đối tượng chính để nghiên cứu các đặc điểm sinh học của virus
- Nuclear polyhedrosis virus phân lập ở Việt Nam có độc lực cao và có các đặc tính tương tự như chủng Nuclear polyhedrosis virus chuẩn củaTrung Quốc
- Nuclear polyhedrosis virus phân lập ở Việt Nam dễ dàng nuôi trên phôi gà 9 - 10 ngày tuổi với bệnh tích điển hình Trên môi trường tế bào xơ phôi gà một lớp thì phải tiếp truyền nhiều đời mới cho bệnh tích ổn định. Các chỉ số nuôi cấy Nuclear polyhedrosis virus kết quả chuẩn độ Nuclear polyhedrosis virus trên các môi trường nuôi cấy:
+ Trên tằm tuổi 4: AID50 = 10 -5,3 /0,2 ml,
+ Trên phôi gà 9-10 ngày tuổi: EID50 = 10 -6,5 /0,2 ml,
+ Trên tế bào xơ phôi gà một lớp TCID50 = 10 - 4,7 / 0,2 ml.
- Nuclear polyhedrosis virus có khả năng tồn tại ngoài môi trường tự nhiên trong khoảng 5 - 6 ngày.
- Tằm ở độ tuổi 3 ở các giống thí nghiệm có khả năng chống chịu tốt hơn tằm ở độ tuổi 4 và 5.
- Nuclear polyhedrosis virus phân lập ở Việt Nam xử lý ở nhiệt độ
65 o C trong thời gian 60 phút có khả năng làm bất hoạt hoàn toàn virus, xử lý nhiệt độ 55 o C trong thời gian 60 phút có khả năng làm bất hoạt virus ở dạng tự do, nhưng virus ở dạng thể bao hàm vẫn không bị bất hoạt
- Nuclear polyhedrosis virus ở dạng tự do có khả năng chống chịu nhiệt và pH kém hơn nhiều so với virus dạng thể bao hàm.
+ Nuclear polyhedrosis virus ở dạng tự do bị bất hoạt hoàn toàn ở các ngưỡng pH là 3,5; 8,5 - 9,5 khi xử lý ở thời gian 30 phút.
+ Nuclear polyhedrosis virus ở dạng thể bao hàm bị bất hoạt hoàn toàn ở ngưỡng pH= 9,5 với thời gian xử lý là 15 phút, hoặc ở ngưỡng pH
=8,5 với thời gian xử lý là 30 phút.
- Có thể sử dụng phản ứng AGP để chẩn đoán sự có mặt của Nuclear polyhedrosis virus gây bệnh trên tằm.
- Để làm giảm dịch bệnh trong chăn nuôi tằm thì cần phải thực hiện tốt các biện pháp khử trùng, cách ly tốt.
- Tiếp tục nghiên cứu sâu các đặc tính sinh học của Nuclear polyhedrosis virus để đưa ra biện pháp phòng trừ có hiệu quả hơn.
- Nghiên cứu các đặc điểm sinh học phân tử virus để làm cơ sở sản xuất các chế phẩm sinh học.