(Luận văn) xác định một số trình tự adn mã vạch và nhân giống cây râu mèo (orthosiphon aristatus (blume) miq)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP CHU SỸ CƯỜNG lu XÁC ĐỊNH MỘT SỐ TRÌNH TỰ ADN MÃ VẠCH VÀ NHÂN an GIỐNG CÂY RÂU MÈO (ORTHOSIPHON ARISTATUS va n (BLUME) MIQ) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO gh tn to p ie CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC d oa nl w MÃ NGÀNH: 8420201 lu ll u nf va an LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC oi m z at nh NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: z PGS.TS NGUYỄN VĂN VIỆT m co l gm @ an Lu n va Hà Nội, 2020 ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi, hướng dẫn khoa học PGS.TS Nguyễn Văn Việt Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực chưa công bố hình thức Luận văn sử dụng thông tin, số liệu từ báo nguồn tài liệu tác giả khác có trích dẫn thích nguồn gốc đầy đủ Nếu có gian lận tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm nội lu an dung luận văn n va Học viên p ie gh tn to d oa nl w Chu Sỹ Cường ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cô, Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, Trường Đại học Lâm Nghiệp trang bị kiến thức cho suốt q trình học tập Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Văn Việt tận tình bảo hướng dẫn tơi suốt q trình nghiên cứu đề tài hồn chỉnh Luận văn Thạc sĩ Tôi xin cảm ơn thầy cô cán Viện Công nghệ Sinh học Lâm lu an nghiệp – Trường Đại học Lâm nghiệp tạo điều kiện cho tơi hồn thành n va luận văn tn to Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè đồng nghiệp gh sát cánh hỗ trợ động viên vật chất tinh thần suốt p ie trình học tập nghiên cứu oa nl w Xin chân thành cảm ơn! d Hà Nội, ngày 20 tháng 06 năm 2020 lu ll u nf va an Học viên oi m z at nh Chu Sỹ Cường z m co l gm @ an Lu n va ac th si iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Râu mèo lu an 1.1.1 Nguồn gốc, phân loại n va 1.1.2 Đặc điểm thực vật học Râu mèo gh tn to 1.1.3 Đặc điểm sinh thái Râu mèo 1.1.4 Giá trị dược liệu, công dụng p ie 1.2 Kỹ thuật nuôi cấy mô - tế bào w 1.2.1 Cơ sở khoa học phương pháp nuôi cấy mô - tế bào thực vật oa nl 1.2.2 Các bước tiến hành phương pháp nuôi cấy mô - tế bào thực vật d 1.3 Thành tựu nuôi cấy mô tế bào dược liệu Cây Râu mèo 10 lu va an 1.3.1.Nghiên cứu nước 11 u nf 1.3.2 Thế giới 13 ll 1.4 Tổng quan mã vạch ADN 15 m oi 1.4.1 Giới thiệu mã vạch ADN (DNA barcode) 15 z at nh 1.4.2 Một số mã vạch ADN thường sử dụng 18 z 1.4.3 Tình hình nghiên cứu mã vạch ADN thực vật 23 gm @ Chương MỤC TIÊU, NỘI DUNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 l 2.1 Mục tiêu tổng quát 28 m co 2.2 Mục tiêu cụ thể 28 an Lu 2.3 Đối tượng, phạm vi nghiên cứu 28 2.3.1 Đối tượng nghiên cứu 28 n va ac th si iv 2.3.2 Hóa chất 28 2.3.3 Dụng cụ - máy móc 29 2.4 Nội dung phương pháp nghiên cứu 30 2.4.1 Nội dung nghiên cứu 30 2.4.2 Phương pháp nghiên cứu 30 2.4.3 Chỉ tiêu theo dõi, đánh giá 36 2.4.4 Phương pháp theo dõi 37 2.4.5 Phương pháp xử lý số liệu 37 2.5 Địa điểm thời gian bố trí thí nghiệm 37 lu an Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 38 n va 3.1 Xác định số trình tự ADN mã vạch Râu mèo 38 3.1.2 Kết nhân đoạn ADN mã vạch 39 3.1.3 Phân tích trình tự đoạn mã vạch ADN với đoạn mồi khác p ie gh tn to 3.1.1 Kết tách chiết ADN tổng số 38 43 w oa nl 3.1.4 So sánh hiệu giám định loài ba trình tự ADN mã vạch ITS, d psbA - trnH,và rbcL 53 lu va an 3.2 Kết nhân giống Râu mèo kỹ thuật nuôi cấy in vitro 54 u nf 3.2.1 Kết tạo mẫu in vitro Râu mèo 54 ll 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP, Kinetin và NAA đến nhân m oi nhanh chồi 57 z at nh 3.2.4 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến tỷ lệ sống chất z lượng Râu mèo 61 gm @ 3.2.5 Nghiên chứu ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống và sinh trưởng l 64 m co KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ 67 PHỤ BIỂU an Lu TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 n va ac th si v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Các chữ viết tắt TT Nghĩa tiếng anh Nghĩa tiếng việt lu an -NAA -Naphthalene Acetic Acid -Naphthalene Acetic Acid ADN Axit deoxyribonucleic acid Axit deoxyribonucleic ATP Adenosin triphosphat Adenosin triphosphat BAP 6-Bezyl amino purine 6-Bezyl amino purine BME ß-mereaptoethanol ß-mereaptoethanol BOLD Barcode of Life Data Systems Cơ sở liệu mã vạch ADN Bp Base pair Cặp base Consortium for the Barcode of Life Hiệp hội mã vạch sống Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Fauna Flora Cơng ước bn bán quốc tế lồi nguy cấp n va p ie gh tn to CBOL CITES 10 cpDNA 11 CT va an lu d oa nl w Bộ gen lục lạp u nf Chloroplast DNA ll Công thức m oi Cetyl trimethylammonium bromide Cetyl trimethylammonium bromide CTAB 13 ĐC 14 dNTP Deoxyribonucleotide triphosphate 15 EDTA Ethylenediamine tetraacetic acid axit ethylenediamine tetraacetic 16 IBA Indole -3 -Butyric Acid Indole -3 -Butyric Acid z at nh 12 z Đối chứng @ m co l gm Deoxyribonucleotid triphosphate an Lu n va ac th si vi lu an TT Các chữ viết tắt 17 IGS intergenic Vùng liên kết gen 18 Kb Kilobase (1000 base) 1000 cặp base 19 KIN Kinetin (6 -furfurol amino Kinetin (6 -furfurol amino purine) purine) 10 MS Murashige & Skoog, 1962 Murashige & Skoog, 1962 21 mtDNA Mitochondrial DNA DNA ty thể 22 NAD(P) H Nicontinamide adenine dinucleotide phosphate Trung tâm Quốc gia Thông tin Công nghệ sinh học 23 NCBI National Center for Trung tâm thông tin Công Biotechnology Information nghệ sinh học Hoa Kỳ 24 ORF Open Reading Frame khung đọc mở Polymerase Chain Reaction Phản ứng chuỗi polymerase Ribonucleic acid Axit ribonucleic Ribosomal RNA ARN ribosome Nghĩa tiếng anh n va p ie gh tn to PCR w 25 RNA 27 rRNA 29 SDS 30 Ta 31 TAE Tris – Acetic acide – EDTA 32 tRNA Transfer RNA 33 UV Untraviolet d oa nl 26 Nghĩa tiếng việt lu Sodium dodecyl sulphate va an Sodium dodecyl sulphate ll u nf Nhiệt độ gắn mồi oi m Tris – Acetic acide – EDTA z at nh ARN vận chuyển Tia cực tím z m co l gm @ an Lu n va ac th si vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Trình tự thông tin cặp mồi đặc hiệu 29 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 32 Bảng 2.3 Chu kì nhiệt cho phản ứng PCR 33 Bảng 3.1 Bảng so sánh kết giám định lồi Râu mèo đoạn trình tự ITS, psbA - trnH rbcL 53 Bảng 3.2 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến tỷ lệ mẫu tái sinh chồi 55 lu an Bảng 3.3 Ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 58 n va Bảng 3.4 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ 60 tn to Bảng 3.5 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống 62 p ie gh Bảng 3.6 Ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sống 65 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si viii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình thái Râu mèo Hình 3.1 Kết điện di ADN tổng số mẫu Râu mèo 38 Hình 3.2 Kết nhân đoạn gen ITS từ mẫu Râu mèo dùng mồi ITS_F ITS_R 40 Hình 3.3 Kết nhân đoạn gen psbA-trnH từ mẫu Râu mèo thu dùng mồi psbA-trnH_F psbA-trnH_R 41 Hình 3.4 Kết nhân đoạn gen rbcL từ mẫu Râu mèo thu lu an dùng mồi rbcL_F rbcL_R 42 n va Hình 3.5 Trình tự nucleotide đoạn mã vạch ITS mẫu Râu mèo 44 tn to Hình 3.6 So sánh trình tự ITS Râu mèo (query) với loài Râu mèo gh (FJ593403.1) ngân hàng gen NCBI (sbjct) 46 p ie Hình 3.7 Cây quan hệ di truyền lồi Râu mèo với 06 lồi có trình tự w ITS tương đồng ngân hàng gen quốc tế NCBI 47 oa nl Hình 3.8 Trình tự nucleotide đoạn mã vạch psbA – trnH mẫu d Râu mèo 47 lu va an Hình 3.9 So sánh trình tự psbA – trnH Râu mèo (query) với loài Râu u nf mèo (LC456393.1) ngân hàng gen NCBI (sbjct) 49 ll Hình 3.10 Cây quan hệ di truyền loài Râu mèo với 06 lồi có trình tự m oi psbA - trnH tương đồng ngân hàng gen quốc tế NCBI 49 z at nh Hình 3.11 Trình tự nucleotide đoạn mã vạch rbcL mẫu Râu z mèo 50 @ Hình 3.12 So sánh trình tự rbcL Râu mèo (query) với lồi Râu mèo gm l (LC456392.1) ngân hàng gen NCBI (sbjct) 52 m co Hình 3.13 Cây quan hệ di truyền loài Râu mèo với 06 lồi có trình tự an Lu rbcL tương đồng ngân hàng gen quốc tế NCBI 53 Hình 3.14 Mẫu nảy chồi CT4 sau tuần 56 n va ac th si ix Hình 3.15 Cụm chồi Râu mèo (A) bình chồi Râu mèo (B) mơi trường RM2 59 Hình 3.16 Rễ Râu mèo công thức R2 (0,3 mg/l NAA) 61 Hình 3.17 Cây Râu mèo hồn chỉnh môi trường R1, R2, R3 R4 61 Hình 3.18 Cây Râu mèo trồng bầu sau ngày công thức T0 (A) T3 (B) 64 Hình 3.19 Cây Râu mèo trồng (A) sau tháng trồng (B) công thức RB1 66 lu an Hình 3.20 Cây Râu mèo trồng (A) sau trồng tháng (B) n va công thức RB3 66 p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 72 26 Chiou, S.-J., Yen J.-H., Fang C.-L., Chen H.-L., ADN Lin T.Y (2007) Authentication of medicinal herbs using PCR-amplified ITS2 with specific primers Planta medica, 73 (13): 1421-1426 27 Dorothy P, Sudarshana1 M.S, Nissar A.R ADN Girish H.V (2016) In vitro Cytological Studies of Leaf Callus Cultures of Orthosiphon aristatus (Blume) Miq Journal of British Biotechnology, 13(4): 1-6 28 Fazekas A.J, Burgess K.S, Kesanakurti P.R, Graham S.W, Newmaster S.G, HusbADN B.C, Percy D.M, Hajibabaei M, Barrett S.C (2008) Multiple multilocus DNA barcodes from the plastid genome lu an discriminate plant species equally well PLoS One, (7): e2802 n va 29 Ford C S, Ayres K L., Toomey N., Haider N., Van Alphen Stahl tn to J., Kelly L J, Wikström N (2009) Selection of cADNidate coding DNA gh barcoding regions for use on lADN plants Botanical Journal of the Linnean p ie Society 159: 1–11 30 Gao T.Y.H., Song J., Mori S.A., Pe Tronelli PROTEASE Et Al w oa nl (2009), Indentyficiation of medicinal plants in the family fabaceae using a d potential DNA barcode ITS2 Journal of Ethnopharmacology, 130, pp.116-121 lu va an 31 Hamilton M.B (1999) Four primer pairs for the aplification of ll Ecology, 8: 513-525 u nf chloroplast intergenic religions with intraspecific varation Molecular m oi 32 Hebert, P.D., Cywinska A., ADN Ball S.L (2003) Biological z at nh identifications through DNA barcodes Proceedings of the Royal Society of z London B: Biological Sciences, 270 (1512): 313-321 @ 33 Hebert, P.D., Penton E.H., Burns J.M., Janzen D.H., ADN gm l Hallwachs W (2004) Ten species in one: DNA barcoding reveals cryptic m co species in the neotropical skipper butterfly Astraptes fulgerator Proceedings (41): 14812-14817 an Lu of the National Academy of Sciences of the United States of America, 101 n va ac th si 73 34 Hebert P.D, Ratnasingham S ADN De Waard J.R (2003) Barcoding animal life: cytochrome c oxidase subunit divergences among closely related species Proceedings of the Royal Society of London B Biological Sciences, 270 (1): 96-99 35 Hilu K.W.L.H (1997) The matk gene: secuence variation ADN amplification in plant systematic American journal of Botany 84: 830-839 36 Hollingsworth M.L, ADN Clark A., et al (2009) Selecting barcoding loci for plants: evaluation of seven cADNidate loci with specieslevel sampling in three divergent groups of lADN plants Molecular Ecology lu an Resources, (2): 439-457 n va 37 Hollingsworth, P.M (2011) Refining the DNA barcode for ADN tn to plants Proceedings of the National Academy of Sciences, 108 (49):19451- 38 Hollingsworth, P.M., Graham S.W ADN Little D.P (2011) p ie gh 19452 Choosing ADN using a plant DNA barcode PloS one, (5): e19254 w oa nl 39 K Grover et al (2002) Medicinal plants of India with anti-diabetic d potential Journal of Ethnopharmacology, 81: 81-100 lu va an 40 Kapoor L.D (1990) HADN book of Ayurvedic Medicinal Plants u nf Boca Raton, F.L, CRC Press: 200-201 ll 41 Kress, J.W., K.J , Zimmer, E.A., Weight, L.A & Janzen, D,H m oi (2005), Use of DNA barcodes to identyfy flowering plants, Proc Natl Acad Sci z at nh USA, 102: 8369-8374 z 42 Lee H, Yi D, Kim J ADN Kim K (2007) Development of plant @ DNA barcoding markers from the variable noncoding regions of chloroplast gm m co conference Academia Sinica, Taipei, Taiwan l genome in Abstract presented at the second international barcode of life an Lu 43 Logacheva, M., Penin A., Samigullin T., Vallejo-Roman C., ADN Antonov A (2007) Phylogeny of flowering plants by the chloroplast genome n va ac th si 74 sequences: in search of a “lucky gene” Biochemistry (Moscow), 72 (12): 1324-1330 44 Peter M Hollingsworth, Laura L Forrest, John L Spouge, Mehrdad Hajibabaei, Sujeevan Ratnasingham, et al (2009) A DNA barcode for lADN plants Proceedings of the National Academy of Sciences, 106 (31): 12794-12797 45 Ren B.Q.X.X.R., Chen Z.D (2010) Species identification of Alnus using nrDNA ADN cpDNA genetics makers Mol.Eco.Res 10: 594-605 46 Reshi N.A, Sudarshana M.S ADN Rajashekar N (2013) Callus Induction ADN Plantlet Regeneration in Orthosiphon aristatus (Blume) Miq lu an A Potent Medicinal Herb Journal of Pharmacy ADN Biological Sciences n va Volume 6, Issue (May – Jun): 52-55 tn to 47 Reshi N.A ADN Sudarshana M.S (2015) In vitro micropropagation 48 Schoch C.L, Seifert K.A, et al (2012) Nuclear ribosomal internal p ie gh of Orthosiphon aristatus (Blume) Miq Academic Journals Vol.9: 962-967 transcribed spacer (ITS) region as a universal DNA barcode marker for Fungi w oa nl Proceedings of the National Academy of Sciences, 109 (16): 6241- 6246 d 49 Shaw J.L.E.B., Schiling E.E., Small R.L.(2007) Comparison of lu va an whole chloroplast genome sequences to choose noncoding regions for ll Jour.Bota 94: 275-288 u nf phylogenetic studies in angiosperms: the tortoise ADN the hare III Amer m oi 50 Shigematsu N, Asano R, Shimosaka M, Okazaki M (2001) Effect z at nh of administration with the extract of Gymnema sylvestre R Br leaves on lipid z metabolism in rats Biol Pharm Bull, 24(6): 713-717 @ 51 Srimara R.S.U, Sreejayn, et al (2010) Assesing species admixtures gm m co tools Journal of Eth 130: 208-215 l in raw drug trade of phyllanthus, a hepatoprotective plant using molecular an Lu 52 Van den Berg C., Higgins W E., Dressler R L., Whitten W M., Soto Arenas M A., Culham A., Chase M W (2000), “A phylogenetic n va ac th si 75 analysis of Laeliinae (Orchidaceae) based on sequence data from nuclear internal transcribed spacers (ITS) of ribosomal DNA”, Lindleyana 15: 96114 53 Van DeWiel C C M., Van Der Schoot J., Van Valkenburg J L., Duistermaat C H., Smulders (2009), “DNA barcoding discriminates the noxious invasive plant species, floating pennywort ranunculoides L.f.), from non-invasive relatives”, (Hydrocotyle Molecular Ecology Resources 9: 1086-1091 54 Vijayan K ADN Tsou C H (2010), “DNA barcoding in plants: taxonomy in a new perspective”, Current science, 99: 1530 – 1540 lu 55 Wai-Leng L, Lai-Keng C (2003) Establishment of Orthosiphon an va stamineus cell sespension culture for cell growth Jounal of Plant cell, Tissue n ADN Organ Culture, 78: 101-106 to gh tn 56 Wang W., Wu Y., Yan Y., Ermakova M., Kerstetter R (2010) p ie “DNA barcoding of the Lemnaceae, a family of aquatic monocots”, BMC Plant Biology 10: 205 nl w 57 Yao H, Song J, Liu C, Luo K, Han J (2010) Use of ITS2 region as d oa theuniversal DNA barcode for plants ADN animals PLoS ONE, 5: 13102 an lu 58 Yong H L, Jinlan R, Shilin C, Jingyuan S, Kun L, Dong L ADN va Hui Y (2010) Authentication of Taxillus chinensis using DNA barcoding ll u nf technique Journal of Medicinal Plants Research, (24): 2706 - 2709 oi m 59 Yu J, Xue J.H ADN Zhou S.L (2011) New universal matK primers (3): 176-181 z WEBSITE z at nh for DNA barcoding angiosperms Journal of Systematics ADN Evolution, 49 gm @ 60 http://www.barcodinglife.org/ m co l 61 https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi an Lu n va ac th si lu an n va p ie gh tn to PHỤ BIỂU d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si Phụ biểu 01 Tỷ lệ mẫu sạch, mẫu nhiễm ở cơng thức thí nghiệm khác CT * Mausach Crosstabulation Mausach maunhiem Count CT1 % within CT CT % within CT % within CT 91 46.2% 53.8% 100.0% 32 60 92 34.8% 65.2% 100.0% 86 92 6.5% 93.5% 100.0% 92 95 3.2% 96.8% 100.0% 90 93 3.2% 96.8% 100.0% 86 377 463 18.6% 81.4% 100.0% Count CT4 % within CT n va 49 Count CT3 lu an 42 Count CT2 Total mausach to Count % within CT gh tn CT5 ie Count p Total oa nl w % within CT d Phụ biểu 02 Kết quả kiểm tra tỷ lệ mẫu lu va an Chi-Square Tests Value df ll u nf Asymp Sig (2-sided) 000 102.478 000 83.847 000 @ 463 l gm N of Valid Cases z Linear-by-Linear Association 99.996a z at nh Likelihood Ratio oi m Pearson Chi-Square m co a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 16.90 an Lu n va ac th si Phụ biểu 03 Tỷ lệ mẫu bật chồi cơng thức thí nghiệm với thời gian khác CT * Maubatchoi Crosstabulation Maubatchoi khongbatchoi batchoi Count 49 42 % within CT 53.8% 46.2% Count 40 52 % within CT 43.5% 56.5% Count 31 61 % within CT 33.7% 66.3% Count 89 % within CT 6.3% 93.7% Count 21 72 % within CT 22.6% 77.4% Count 147 316 % within CT 31.7% 68.3% CT1 CT2 CT CT3 lu an CT4 n va gh tn to CT5 91 100.0% 92 100.0% 92 100.0% 95 100.0% 93 100.0% 463 100.0% p ie Total Total oa nl w Phụ biểu 04 Kết quả kiểm tra tỷ lệ mẫu bật chồi d Chi-Square Tests lu df Asymp Sig (2-sided) 000 65.449 000 000 42.437 463 z N of Valid Cases 58.474a z at nh Linear-by-Linear Association oi m Likelihood Ratio ll Pearson Chi-Square u nf va an Value @ m co l gm a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 28.89 an Lu n va ac th si Phụ biểu 05 Tỷ lệ chồi hữu hiệu ở công thức thí nghiệm khác CT * Choihuuhieu Crosstabulation Choihuuhieu Khonghuuhieu RM2 RM3 lu an va n RM4 tn to ie gh RM5 363 485 848 42.8% 57.2% 100.0% 296 881 1177 23.3% 76.7% 100.0% 325 566 891 36.5% 63.5% 100.0% 307 393 700 43.9% 56.1% 100.0% 304 413 717 42.4% 57.6% 100.0% 366 569 935 39.1% 60.9% 100.0% Count 317 495 812 39.0% 61.0% 100.0% 224 243 467 48.0% 52.0% 100.0% 180 239 419 43.0% 57.0% 100.0% 63 38 101 37.6% 100.0% 4322 7067 61.2% 100.0% % within CT Count % within CT Count % within CT Count % within CT Count % within CT p CT Count Choihuuhieu lu RM1 Total Count % within CT RM7 d oa nl w RM6 Count z 62.4% m co 38.8% l 2745 gm % within CT @ % within CT Count Total z at nh % within CT oi Count m DC % within CT ll RM9 Count u nf RM8 va an % within CT an Lu n va ac th si Phụ biểu 06 Kết quả kiểm tra tỷ lệ chồi hữu hiệu Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2-sided) Pearson Chi-Square 154.798a 000 Likelihood Ratio 159.185 000 43.424 000 Linear-by-Linear Association lu an 7067 n va N of Valid Cases gh tn to a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 39.23 p ie nl w d oa Phụ biểu 07 Kết quả phân tích ANOVA ảnh hưởng chất ĐHST đến số an lu chồi TB/mẫu nhanh Hesonhannhanh ll u nf va ANOVA df Mean oi m Sum of Between Groups 314 20 302.373 29 33.562 2138.172 000 z 302.060 Sig Square z at nh Squares F 016 m co l gm Total @ Within Groups an Lu n va ac th si Phụ biểu 08 Tỷ lệ rễ cơng thức thí nghiệm với nồng độ NAA khác CT * Tylerare Crosstabulation Tylerare khongrare rare Count 73 18 R0 R1 % within CT R2 lu an n va R3 tn to ie gh R4 19.8% 100.0% 34 66 100 35.5% 65.5% 100.0% 88 91 % within CT 3.3% 96.7% 100.0% Count % within CT Count 12 13.2% 36 79 86.8% 54 91 100.0% 90 % within CT 40.0% 60.0% 100.0% 165 298 463 35.6% 64.4% 100.0% Count % within CT p Count Total 91 80.2% Count CT Total d oa nl w % within CT Phụ biểu 09 Kết quả kiểm tra tỷ lệ rễ an lu Chi-Square Tests u nf va ll Value Asymp Sig (2-sided) df oi m 142.348a 158.736 46.687 4 z at nh z Pearson Chi-Square Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association 000 000 000 463 m co l gm @ N of Valid Cases an Lu a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 32.07 n va ac th si Phụ biểu 10 Kết quả phân tích ANOVA ảnh hưởng nồng độ NAA đến số rễ TB/ chồi ANOVA SoreTB Sum of Squares Between Groups Mean Square 21.117 488 10 21.605 14 Within Groups lu an Total df F Sig 5.279 108.226 000 049 n va tn to ie gh Phụ biểu 11 Kết quả phân tích ANOVA ảnh hưởng nồng độ NAA đến p chiều dài rễ TB an lu ChieudaireTB d oa nl w ANOVA df 20.204 ll Mean Square F Sig 5.051 43.795 000 oi m Between Groups u nf va Sum of Squares 1.153 10 21.357 14 115 z m co l gm @ Total z at nh Within Groups an Lu n va ac th si Phụ biểu 12 Tỷ lệ số sống sau huấn luyện ở thời gian khác CT * tylecaysong Crosstabulation tylecaysong Socaychet socaysong Count 48 43 T0 % within CT % within CT CT 47.3% 100.0% 44 49 93 47.3% 52.7% 100.0% 84 91 7.7% 92.3% 100.0% 90 91 1.1% 98.9% 100.0% 100 266 366 27.3% 72.7% 100.0% Count lu T2 an % within CT va n Count % within CT gh tn to T3 ie Count p Total oa nl w % within CT 91 52.7% Count T1 Total d Phụ biểu 13 Kết quả kiểm tra tỷ lệ số sống sau huấn luyện ở thời gian lu Chi-Square Tests Value df u nf va an khác ll Asymp Sig (2-sided) 97.511a 000 114.372 000 000 z at nh Likelihood Ratio oi m Pearson Chi-Square z 86.799 m co l 366 gm N of Valid Cases @ Linear-by-Linear Association an Lu a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 24.86 n va ac th si Phụ biểu 14 Tỷ lệ số sống sau bầu ngày CT * tylecaysong Crosstabulation tylecaysong Socaychet socaysong 60 31 Count T0 % within CT % within CT CT 34.1% 100.0% 38 55 93 40.9% 59.1% 100.0% 10 81 91 11.0% 89.0% 100.0% 88 91 3.3% 96.7% 100.0% 111 255 366 30.3% 69.7% 100.0% lu Count an T2 n va % within CT to Count % within CT ie gh tn T3 Count p Total d oa nl w % within CT 91 65.9% Count T1 Total an lu Phụ biểu 15 Kết quả kiểm tra tỷ lệ sống sau ngày bầu u nf va Chi-Square Tests ll Value df Asymp Sig (2-sided) 107.057a 000 117.222 000 000 z at nh Likelihood Ratio oi m Pearson Chi-Square z 101.958 m co l 366 gm N of Valid Cases @ Linear-by-Linear Association an Lu a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 27.60 n va ac th si Phụ biểu 16 Tỷ lệ số sống ở công thức thành phần ruột bầu khác CT * tylecaysong Crosstabulation tylecaysong Socaychet socaysong Count 38 53 RB2 % within CT CT RB3 lu an RB4 n va gh tn to RB5 p ie Total 91 41.8% 58.2% 100.0% 21 70 91 % within CT 23.1% 76.9% 100.0% Count % within CT 2.2% 90 97.8% 92 100.0% Count % within CT Count % within CT Count 17 18.5% 27 29.3% 105 75 81.5% 65 70.7% 353 92 100.0% 92 100.0% 458 % within CT 22.9% 77.1% 100.0% Count RB2 Total nl w d oa Phụ biểu 17 Kết quả kiểm tra tỷ lệ số sống ở công thức thí nghiệm Chi-Square Tests ll u nf va an lu thành phần ruột bầu khác 43.865a 52.477 4 4.396 036 df z at nh z m co l 458 gm @ N of Valid Cases oi m Pearson Chi-Square Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association Asymp Sig (2sided) 000 000 Value an Lu a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 20.86 n va ac th si Phụ biểu 18 Kết quả phân tích ANOVA ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến độ vượt chiều cao TB ANOVA ChieucaocayTB Sum of Squares Between Groups Mean Square df 47.743 813 10 48.556 14 Within Groups F Sig 11.936 146.750 000 081 lu an n va Total p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si