(Luận văn) nghiên cứu xác định một số trình tự adn mã vạch và nhân giống cây kim tiền thảo (desmodium styracifolium (osb ) merr ) bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT TRƢỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP NGUYỄN THỊ HIÊN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH MỘT SỐ TRÌNH TỰ ADN lu MÃ VẠCH VÀ NHÂN GIỐNG CÂY KIM TIỀN THẢO an n va (Desmodium styracifolium (Osb.) Merr.)BẰNG KỸ THUẬT p ie gh tn to NUÔI CẤY IN VITRO w CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC d oa nl MÃ NGÀNH:8420201 an lu nf va LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC z at nh oi lm ul NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS HÀ BÍCH HỒNG z m co l gm @ an Lu Hà Nội, 2020 n va ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi, hướng dẫn khoa học TS Hà Bích Hồng Các kết trình bày luận văn trung thực, phần cơng bố Tạp chí khoa học - cơng nghệ, phần cịn lại chưa cơng bố cơng trình khác Luận văn sử dụng thông tin, số liệu từ báo nguồn tài liệu tác giả khác có trích dẫn thích nguồn gốc đầy đủ Nếu có gian lận tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội lu dung luận văn an Hà Nội, ngày 20 tháng 05 năm 2020 va n Ngƣời cam đoan p ie gh tn to nl w d oa Nguyễn Thị Hiên nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cô, Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp,Trường Đại học Lâm Nghiệp trang bị kiến thức cho suốt q trình học tập Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến TS Hà Bích Hồng PGS TS Nguyễn Văn Việt tận tình bảo hướng dẫn tơi suốt q trình nghiên cứu đề tài hoàn chỉnh Luận văn Thạc sĩ Tôi xin cảm ơn thầy cô cán Viện Công nghệ Sinh học Lâm lu nghiệp – Trường Đại học Lâm nghiệp tạo điều kiện cho tơi hồn thành an luận văn va n Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè đồng nghiệp gh tn to sát cánh hỗ trợ động viên vật chất tinh thần suốt Xin chân thành cảm ơn! p ie trình học tập nghiên cứu nl w Hà Nội, ngày 20 tháng 05 năm 2020 d oa Học viên nf va an lu z at nh oi lm ul Nguyễn Thị Hiên z m co l gm @ an Lu n va ac th si iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Kim tiền thảo lu 1.1.1 Nguồn gốc hệ thống phân loại an va 1.1.2 Đặc điểm thực vật Kim tiền thảo n 1.1.3 Đặc điểm sinh thái phân bố to 1.1.5 Các nghi n cứu h a sinh h c dược h c Kim tiền thảo ie gh tn 1.1.4 Giá trị dược liệu p 1.1.6 Một số thuốc dân gian Kim tiền thảo w 1.2 Tình hình nhân giống số loài thuộc chi Desmodium 10 oa nl 1.3 Kỹ thuật nuôi cấy in vitro thực vật 12 d 1.3.1 Cơ sở khoa h c phương pháp nuôi cấy mô -tế bào thực vật 12 lu an 1.3.2 Các giai đoạn ch nh phương pháp nuôi cấy mô - tế bào thực vật 13 nf va 1.4 Tổng quan ADN mã vạch 14 lm ul 1.4.1 Giới thiệu ADN mã vạch (DNA barcoding) 14 1.4.2 Một số locus sử dụng làm thị mã vạch ADN thực vật 16 z at nh oi 1.4.3 nh h nh nghi n cứu ADN mã vạch thực vật 21 1.4.3 Ứng dụng ADN mã vạch 27 z Chƣơng MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 gm @ 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 30 l 2.1.1 Mục ti u tổng quát 30 co 2.1.2 Mục ti u cụ thể 30 m 2.2 Nội dung nghiên cứu 30 an Lu 2.3 Vật liệu nghiên cứu 30 n va ac th si iv 2.3.1 Đối tượng nghi n cứu 30 2.3.2 hiết bị dụng cụ 31 2.3.3 H a chất 31 2.4 Phương pháp nghiên cứu 32 2.4.1 Xác định số ADN mã vạch để xác định loài Kim tiền thảo 32 2.4.2 Nghi n cứu nhân giống in vitro loài Kim tiền thảo 35 2.5 Phương pháp thu thập xử lí số liệu 39 2.5.1 Phương pháp thu thập số liệu 39 2.5.2 Phương pháp xử lý số liệu 40 2.5.3 Địa điểm thời gian bố tr th nghiệm 40 lu Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 41 an va 3.1 Xác định số trình tự ADN mã vạch cho loài Kim tiền thảo 41 n 3.1.1 Kết tách chiết ADN tổng số 41 to 3.1.3 Kết giải tr nh tự so sánh tr nh tự đoạn ADN mã vạch 45 ie gh tn 3.1.2 Kết nhân tr nh tự ADN mã vạch cho loài Kim tiền thảo 42 p 3.1.4 o sánh hiệu giám định loài Kim tiền thảo số tr nh tự ADN nl w mã vạch 54 oa 3.2 Kết nhân giống in vitro loài Kim tiền thảo 55 d 3.2.1 Kết nghi n cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng đến khả lu nf va an tạo mẫu tái sinh chồi in vitro 55 3.2.2 Kết nghi n cứu ảnh hưởng nồng độ chất ĐH đến nhân lm ul nhanh chồi Kim tiền thảo 57 z at nh oi 3.2.3 Kết nghi n cứu ảnh hưởng hàm lượng chất hữu đến khả nhân nhanh chồi 60 3.2.4 Kết nghi n cứuảnh hưởng chất ĐH đến khả rễ z Kim tiến thảo 62 @ gm 3.2.5 Kết ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sống, sinh l trưởng Kim tiền thảo 64 m co KẾT LUẬN - TỒN TẠI - KIẾN NGHỊ 67 PHỤ BIỂU an Lu TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 n va ac th si v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Trình tự cặp mồi sử dụng đề tài 31 Bảng 2.2: Thành phần phản ứng PCR 34 Bảng 2.3: Chu trình nhiệt độ cho phản ứng PCR 34 Bảng 2.4: Bố trí thí nghiệm khử trùng vật liệu hạt Kim tiền thảo 36 Bảng 2.5: Bố trí thí nghiệm nhân nhanh chồi Kim tiền thảo 36 Bảng 2.6: Ảnh hưởng hàm lượng chất hữu đến khả nhân nhanh chồi Kim tiền thảo 37 Bảng 2.7: Thiết kế thí nghiệm rễ Kim tiền thảo 37 lu an Bảng 2.8: Ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh n va trưởng 38 đoạn trình tự matK mẫu Kim tiền thảo 48 gh tn to Bảng 3.1: Các trình tự đoạn gen matK tương ứng với tên loài tương đồng với p ie Bảng 3.2: Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến tỷ lệ sống tái sinh chồi 56 Bảng 3.3: Ảnh hưởng nồng độ chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 58 nl w Bảng 3.4: Ảnh hưởng hàm lượng chất hữu đến khả nhân nhanh chồi 60 d oa Bảng 3.5: Ảnh hưởng nồng độ α-NAAvà than hoạt tính đến khả 62 an lu rễ 62 nf va Bảng 3.6: Ảnh hưởng thành phần ruột bầu đến khả sống, sinh trưởng z at nh oi lm ul Kim tiền thảo 64 z m co l gm @ an Lu n va ac th si vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Cây Kim tiền thảo (Desmodium styracifolium (Osb.) Merr) Hình 1.2: Hình thái Kim tiền thảo Hình 3.1: Kết tách chiết ADN tổng số từ mẫu Kim tiền thảo 41 Hình 3.2: Kết điện di sản ph m PCR đoạn trình tự ADN mã vạch 42 Hình 3.3: Trình tự nucleotide đoạn gen MatK mẫu Kim tiền thảo 46 Hình 3.4: Kết so sánh trình tự nucleotide đoạn gen matK mẫu Kim tiền thảo (query với loài Desmodium styracifolium NCBI (sbjct) 47 Hình 3.5: Cây quan hệ di truyền mẫu Kim tiền thảo với trình tự lu an tương đồng ngân hàng gen quốc tế NCBI 49 va n Hình 3.6: Trình tự nucleotide đoạn gen rbcL mẫu Kim tiền thảo 50 tn to Hình 3.7: Cây quan hệ di truyền mẫu Kim tiền thảo với trình tự tương ie gh đồng NCBI dựa trình tự đoạn gen rbcL 51 p Hình 3.8: Trình tự nucleotide đoạn gen ITS mẫu Kim tiền thảo 52 w Hình 3.9: Cây quan hệ di truyền mẫu Kim tiền thảo với trình tự oa nl tương đồng ngân hàng gen trình tự ITS 52 d Hình 3.10: Trình tự nucleotide đoạn gen ycf1b mẫu Kim tiền thảo 53 lu nf va an Hình 3.11: Cây quan hệ di truyền mẫu Kim tiền thảo với trình tự tương đồng ngân hàng gen dựa trình tự đoạn gen ycf1b 54 lm ul Hình 3.12: Hạt Kim tiền thảo khử trùng công thức sau tuần z at nh oi nuôi cấy 57 Hình 3.13: Cụm chồi Kim tiền thảo môi trường nhân nhanh NN1 (A MN2 (B) 59 z gm @ Hình 3.14: Cụm chồi Kim tiền thảo mơi trường NC1 sau tuần ni cấy 61 Hình 3.15: Cây Kim tiền thảo nuối cấy với công thức R5 64 l m co Hình 3.16: Cây Kim tiền thảo nuôi cấy công thức B3 66 an Lu n va ac th si vii DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1: Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến tỉ lệ mẫu tỉ lệ nảy mầm công thức khử trùng 56 Biểu đồ 3.2: Hệ số nhân chồi tỉ lệ chồi hữu hiệu môi trường 59 Biểu đồ 3.3: Hệ số nhân chồi tỉ lệ chồi hữu hiệu công thức mơi trường có bổ sung chất hữu khác 61 Biểu đồ 3.4: Ảnh hưởng Chất ĐHST đến tỉ lệ chồi rễ (A số rễ trung bình, chiều dài rễ cơng thức thí nghiệm (B 63 lu an Biểu đồ 3.5: Tỉ lệ sống chiều cao TB Kim tiền thảo nuối n va cấy cơng thức thí nghiệm 65 p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện hợp chất tự nhiên phân lập từ dược liệu sử dụng rộng rãi nhiều ngành công nghiệp, nông nghiệp, chúng sử dụng để sản xuất thuốc chữa bệnh, thuốc bảo vệ thực vật, làm nguyên liệu cho ngành công nghiệp thực ph m mĩ ph m… Trong hệ thống lồi thực vật Việt Nam, có nhiều lồi thuộc họ Đậu (Fabaceae) có giá trị sử dụng cao, dùng để bào chế làm thuốc chữa bệnh, có Kim tiền thảo Đối với Kim tiền thảo lu phận như: rễ, thân, sử dụng Các nghiên cứu an dược lý đại cho thấy Kim tiền thảo có tác dụng lợi tiểu, lợi mật, kháng va n sinh, kháng viêm, dãn mạch, hạ huyết áp, tăng tiết mật, giảm đau ống mật, tn to tăng lưu lượng máu thận, tăng tuần hoàn máu não động mạch đùi… ie gh Song công dụng chủ yếu lợi mật, thông tiểu tiện, thường dùng chữa sỏi p thận, sỏi mật, sỏi bàng quang, sỏi đường tiết niệu, viêm gan vàng da, viêm nl w thận phù thũng, chữa bệnh trĩ, chữa viêm mật (Đỗ Tất Lợi, 1999) Tuy nhiên, oa hầu hết nguồn dược liệu nhập từ nước ngồi chưa có d nghiên cứu đầy đủ nhân giống, gieo trồng, chế biến Kim tiền thảo nên lu nf va an suất chất lượng cịn hạn chế Để có nguồn dược liệu Kim tiền thảo chất lượng tốt, bền vững đáp ứng lm ul nhu cầu chăm sóc sức khỏe người đồng thời đảm bảo hàm lượng z at nh oi hoạt tính dược liệu sản ph m sau thu hoạch, cần phải có biện pháp hữu hiệu bảo tồn phát triển loài dược liệu đa tác dụng Vì vậy, nhân z giống lồi Kim tiền thảo phương pháp nuôi cấy in vitro giúp tạo số gm @ lượng lớn thời gian ngắn, đáp ứng nguồn giống cho m co công tác bảo tồn nguồn gen thuốc l vùng sản xuất dược liệu, nhằm nâng cao thu nhập cho người dân phục vụ an Lu Mặt khác, để giám định hay định danh xác lồi Kim tiền thảo phục vụ cho lựa chọn lồi đưa vào nhân giống in vitro phương pháp ADN mã n va ac th si vạch cho có độ tin cậy cao Phương pháp ADN mã vạch trở thành công cụ hữu hiệu cho nhà khoa học việc phân loại, đánh giá đa dạng di truyền quan hệ di truyền loài động vật thực vật Với mục tiêubước đầu xây dựng sở liệu ADN mã vạch cho loài nhằm đảm bảo độ tin cậy xác nhân giống Cây Kim tiền thảo tơi thực đề tài: “Nghiên cứu xác định số trình tự ADN mã vạch nhân giống Cây Kim Tiền Thảo (Desmodium styracifolium (Osb.) Merr.) kỹ thuật nuôi cấy in vitro” lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si 73 ADN Nested PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism” Journal of Food and Drug Analysis, Vol 18, No 1, P: 58-63 43 Mark Y S H.P.D.N (2008), “Barcode of life’’, Seientific American: 82- 88 44 Murray M.G., Thompson W.F (1980 ,“Rapid isolation of high molecular weight plant DNA” Nucleic Acids Res Vol 8(19):4321-4325 45 Nerea Larranaga, José L Hormaza (2015 “DNA barcoding of perennial fruit tree species of agronomic interest in the genus Annona (Annonaceae)” Front Plant Sci (6): 589 46 Park SU, Kim YK, Lee SY (2009 , “Improved in vitro plant regeneration lu DNA micropropagation of Rehmannia glutinosa L.”, Journal of Medicial an Plants Research, 3(1): 031-034 va n 47 Preeti S, Deo B, Tiwari S K (2013 , “High frequency in vitro multiplication gh tn to of an endangered medicinal plant Desmodium gangeticum L (DC ”,Research journal of biotechnology, 8(5): 3-10 ie p 48 San Thandar, Tun O M (2015 ,“In vitro micropropagation of desmodium nl w triquetrum DC Myanmar medicinal plan” International Journal of Technical oa Research ADN Applications e-ISSN, 2320-8163: 133-138 d 49 Scharaschklin T., Doyle J.A (2005 , “Phylogeny ADN historical an lu biogeography of Anaxagorea (Annonaceae) using morphology ADN nf va noncoding chloroplast sequence data”, Syst Bot 30: 712–735 lm ul 50 Schoch, C.L., Seifert K.A.(2012 , “Nuclear ribosomal internal transcribed z at nh oi spacer (ITS) region as a universal DNA barcode marker for Fungi”, Proceedings of the National Academy of Sciences, 109 (16): 6241- 6246 z 51 Srimara R.S.U, Sreejayn(2010 ,“Assesing species admixtures in raw drug l of Eth 130: 208-215 gm @ trade of phyllanthus, a hepatoprotective plant using molecular tools”, Journal m co 52 Steinke, D., T, S, Zemlak, J A Boutillier & P D N Hebert (2009), “DNA an Lu barcoding of pacific Cannada’s fishes” Marine Biology, 156: 2641 - 2647 53 Taberlet P., Eric C., Franỗois P., Ludovic G., Christian M., Alice V., Thierry n va ac th si 74 V., Gérard C., Christian B., ADN Eske W (2007 , “Power ADN limitations of the chloroplast trnL (UAA) intron for plant DNA barcoding”, Nucleic Acids Res, 35(3): 14 54 Van DeWiel C C M., Van Der Schoot J., Van Valkenburg J L., Duistermaat C H., Smulders (2009 , “DNA barcoding discriminates the noxious invasive ranunculoides plant L.f.), from species, floating non-invasive pennywort (Hydrocotyle relatives” Molecular Ecology Resources 9: 1086-1091 55 Van DeWiel C C M., Van Der Schoot J., Van Valkenburg J L., lu Duistermaat C H., Smulders (2009 , “DNA barcoding discriminates the an va noxious invasive plant species, floating pennywort n ranunculoides L.f.), from non-invasive relatives”, (Hydrocotyle Molecular Ecology gh tn to Resources 9: 1086-1091 ie 56 Vasantha M.M, Shivanna K, Manchanahally B (2005 ,“Callus mediated p regeneration of Desmodium oojeinense Roxb”, Phytomorphology An nl w International Journal of Plant Morphology, 55(3): 171-177 d oa 57 Vijayan K ADN Tsou C H (2010 , “DNA barcoding in plants: taxonomy in an lu a new perspective” Current science 99: 1530 – 1540 nf va 58 Wang W., Wu Y., Yan Y., Ermakova M., Kerstetter R (2010 “DNA barcoding of the Lemnaceae a family of aquatic monocots”, BMC Plant z at nh oi lm ul Biology 10: 205 59 Wenpan Dong, Chao Xu1, Changhao Li, Jiahui Sun, Yunjuan Zuo, Shuo Shi, Tao Cheng, Junjie Guo, Shiliang Zhou (2015 “ycf1, the most promising cientific report, 12/2/2015 z plastid DNA barcode of land plants” @ gm 60 Wu F., Mueller L A., Crouzillat D., Petiard V., Tanksley S D (2006), l “Combining bioinformatics ADN phylogenetics to identify large sets of single- m co copy orthologous genes (COSII) for comparative, evolutionary DNA 1407-1420 an Lu systematic studies: A test case in the euasterid plant clade” Genetics, 174: n va ac th si 75 61 Xie H, Li J (2018), Gao H (2009) Total flavone of Desmodium styracifolium relieved apoptosis ADN autophagy of COM-induced HK-2 cells by regulating KIM-1 via p38/MAPK pathway Mol Cell Biochem,442(1-2):169-175 62 Xiaohui Pang, Jingyuan Song, Yingjie Zhu, Hongxi Xu, Linfang Huang, Shilin Chen (2011 , “Applying plant DNA barcodes for Rosaceae species identification”.Cladistics 27 (2) 63 Yao H., Song J., Liu C., Luo K., Han J (2010 , “Use of ITS2 region as theuniversal DNA barcode for plants ADN animals”, PLoS ONE, 5: 13102 64 Yong H L., Jinlan R., Shilin C., Jingyuan S., Kun L., Dong L ADN Hui Y lu (2010 , “Authentication of Taxillus chinensis using DNA barcoding an va technique” Journal of Medicinal Plants Research 4(24): 2706-2709 n 65 Yu, J., Xue J.H., ADN Zhou S.L (2011 , “New universal matK primers for gh tn to DNA barcoding angiosperms”, Journal of Systematics ADN Evolution, 49 p ie (3): 176-181 66 Zhou J, Jin J, Li X, Zhao Z, Zhang L, Wang Q, Li J,Zhang Q, Xiang S nl w (2018 ,“Total flavonoids of Desmodium styracifolium attenuates the d oa formation of hydroxy-L-proline-induced calcium oxalate urolithiasis in rats” nf va WEBSITE an lu Urolithiasis, 46(3): 231-241 67 http://www.barcodinglife.org/ lm ul 68 www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST.cgi z at nh oi z m co l gm @ an Lu n va ac th si lu an n va p ie gh tn to PHỤ BIỂU d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Phụ biểu Kết kiểm tra tỉ ệ mẫu hạt Kim tiền thảo công thức khử trùng khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * SOMAUSACH Missing Percent 277 N Total Percent 100,0% N 0,0% Percent 277 100,0% lu an CT * SOMAUSACH Crosstabulation va SOMAUSACH n ,00 to Count Total 1,00 38 55 93 40,9% 59,1% 100,0% 12 81 93 12,9% 87,1% 100,0% 83 91 8,8% 91,2% 100,0% 58 219 277 20,9% 79,1% 100,0% tn CT1 % within CT ie gh CT Count CT2 p % within CT Count w CT3 oa nl % within CT Count d Total nf va an lu % within CT Value Pearson Chi-Square a 34,034 Likelihood Ratio 32,778 Linear-by-Linear Association 28,626 df Asymp Sig (2- z at nh oi lm ul Chi-Square Tests sided) ,000 ,000 ,000 z 277 gm @ N of Valid Cases a cells (0,0%) have expected count less than The minimum m co l expected count is 19,05 an Lu n va ac th si Phụ biểu Kết kiểm tra tỉ ệ nảy mầm hạt Kim tiền thảo công thức khử trùng khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * SOHATNAYMAM Missing Percent 277 N 100,0% Total Percent N 0,0% Percent 277 100,0% lu CT * SOHATNAYMAM Crosstabulation an SOHATNAYMAM va ,00 n to Count Total 1,00 53 40 93 57,0% 43,0% 100,0% 38 55 93 40,9% 59,1% 100,0% 57 34 91 62,6% 37,4% 100,0% 148 129 277 53,4% 46,6% 100,0% 1,00 tn % within CT gh Count 2,00 % within CT p ie CT Count % within CT nl w 3,00 oa Count Total d % within CT nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Phụ biều Kết kiểm tra tỉ ệ chồi hữu hiệu Kim tiền thảo sử dụng tổ hợp chất ĐHST nồng độ khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * CHOIHUUHIEU Missing Percent 1482 N Total Percent 100,0% N 0,0% Percent 1482 100,0% CT * CHOIHUUHIEU Crosstabulation CHOIHUUHIEU lu Count 1,00 84 314 398 21,1% 78,9% 100,0% 104 237 341 30,5% 69,5% 100,0% 75 157 232 32,3% 67,7% 100,0% 80 102 182 44,0% 56,0% 100,0% 86 46 132 65,2% 34,8% 100,0% 72 29 101 71,3% 28,7% 100,0% 92 96 lm ul an ,00 Total 95,8% 4,2% 100,0% 593 889 1482 40,0% 60,0% 100,0% va NN1 n % within CT to Count tn NN2 % within CT gh Count % within CT p ie NN3 Count NN4 w CT oa nl % within CT Count d NN5 % within CT % within CT ĐC Count % within CT z at nh oi Count nf va an lu Count NN6 Total % within CT Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2- z 298,614 Linear-by-Linear Association 261,770 ,000 ,000 expected count is 38,41 an Lu a cells (0,0%) have expected count less than The minimum m 1482 co N of Valid Cases ,000 l Likelihood Ratio 279,557 gm Pearson Chi-Square @ sided) a n va ac th si Phụ biểu Phân tích phƣơng sai số nhân tố ảnh hƣởng tổ hợp chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi Kim tiền thảo ANOVA SOCHOI TB/MAU Sum of Squares Between Groups Mean Square 29,659 4,943 ,165 14 ,012 29,823 20 Within Groups Total df F Sig 420,437 ,000 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Phụ biểu Kết kiểm tra tỉ ệ chồi hữu hiệu Kim tiền thảo sử dụng hàm ƣợng chất hữu bổ sung khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * CHOIHUUHIEU Missing Percent 1583 N 100,0% Total Percent N 0,0% Percent 1583 100,0% lu an CT * CHOIHUUHIEU Crosstabulation va CHOIHUUHIEU n ,00 to Count Total 1,00 246 440 686 35,9% 64,1% 100,0% 221 341 562 39,3% 60,7% 100,0% 158 177 335 47,2% 52,8% 100,0% 625 958 1583 39,5% 60,5% 100,0% tn NC1 % within CT ie gh CT Count NC2 p % within CT Count w NC3 oa nl % within CT Count d Total nf va an lu % within CT Value Pearson Chi-Square a 12,047 Likelihood Ratio 11,942 Linear-by-Linear Association 11,346 df Asymp Sig (2- z at nh oi lm ul Chi-Square Tests sided) ,002 ,003 ,001 z 1583 gm @ N of Valid Cases a cells (0,0%) have expected count less than The minimum m co l expected count is 132,26 an Lu n va ac th si Phụ biểu Phân tích phƣơng sai số nhân tố ảnh hƣởng hàm ƣợng chất hữu bổ sung đến khả nhân nhanh chồi Kim tiền thảo ANOVA SOCHOI TB/MAU Sum of Squares Between Groups Mean Square 21,310 10,655 ,506 ,084 21,817 Within Groups Total df F Sig 126,245 ,000 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Phụ biều Kết kiểm tra tỉ ệ rễ Kim tiền thảo sử dụng chất ĐHST nồng độ khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * SOCAYRARE Missing Percent 548 N Total Percent 100,0% N 0,0% Percent 548 100,0% CT * SOCAYRARE Crosstabulation SOCAYRARE ,00 Count Total 1,00 55 36 91 60,4% 39,6% 100,0% 45 46 91 49,5% 50,5% 100,0% 42 49 91 46,2% 53,8% 100,0% 35 55 90 38,9% 61,1% 100,0% 88 92 4,3% 95,7% 100,0% 28 65 93 30,1% 69,9% 100,0% 209 339 548 38,1% 61,9% 100,0% R1 lu % within CT an Count va R2 % within CT n to Count R3 tn % within CT CT gh Count % within CT p ie R4 Count R5 nl w % within CT oa Count R6 d % within CT lu Count an Total % within CT nf va Chi-Square Tests a Pearson Chi-Square 73,684 Likelihood Ratio 87,660 Linear-by-Linear Association 47,833 548 Asymp Sig (2sided) ,000 ,000 ,000 z N of Valid Cases df z at nh oi lm ul Value @ a cells (0,0%) have expected count less than The minimum gm expected count is 34,32 l Test of Homogeneity of Variances df2 Sig 12 ,017 an Lu 4,365 df1 m Levene Statistic co CHIEUDAIRE n va ac th si Phụ biều Kết phân tích phƣơng sai số nhân tố chiều dài rễ Kim tiền thảokhi sử dụng tổ hợp chất ĐHST nồng độ khác ANOVA CHIEUDAIRE Sum of Squares Between Groups Mean Square 23,512 4,702 ,020 12 ,002 23,533 17 Within Groups Total df F Sig 2775,242 ,000 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Phụ biểu Kết phân tích phƣơng sai số nhân tố số rễ trung bình/ chồi Kim tiền thảo sử dụng tổ hợp chất ĐHST nồng độ khác ANOVA SORE Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 62,444 12,489 7,333 12 ,611 69,778 17 F Sig 20,436 ,000 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Phụ biều 10 Kết kiểm tra tỉ ệ sống Kim tiền thảo sử dụng thành phần ruột bầu khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * SOCAYSONG Missing Percent 466 N Total Percent 100,0% N 0,0% Percent 466 100,0% CT * SOCAYSONG Crosstabulation lu an SOCAYSONG ,00 va n Count Total 1,00 79 14 93 84,9% 15,1% 100,0% 77 17 94 81,9% 18,1% 100,0% 17 77 94 18,1% 81,9% 100,0% 44 49 93 47,3% 52,7% 100,0% 77 15 92 83,7% 16,3% 100,0% 294 172 466 63,1% 36,9% 100,0% RB1 tn to % within CT Count gh RB2 % within CT ie Count p RB3 CT % within CT w Count oa nl RB4 % within CT d Count lu RB5 Total % within CT nf va Count an % within CT z at nh oi lm ul Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2sided) z 5,698 466 ,000 ,017 an Lu expected count is 33,96 m a cells (0,0%) have expected count less than The minimum co N of Valid Cases l Linear-by-Linear Association 146,695 ,000 gm Likelihood Ratio 141,861 @ Pearson Chi-Square a n va ac th si Phụ biểu 11 Kết phân tích phƣơng sai số nhân tố chiều dài rễ Kim tiền thảo sử thành phần ruột bầu khác ANOVA CHIEUDAIRE Sum of Squares Between Groups Mean Square 23,512 4,702 ,020 12 ,002 23,533 17 Within Groups Total df F Sig 2775,242 ,000 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si