Nghiên cứu xác định một số trình tự adn mã vạch phục vụ công tác phân loại và nhận dạng các giống na dai (annona squamosa) tại thái nguyên

KHOA HỌC CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH MỘT SỐ TRÌNH TỰ ADN MÃ VẠCH PHỤC VỤ CƠNG TÁC PHÂN LOẠI VÀ NHẬN DẠNG CÁC GIỐNG NA DAI (Annona squamosa) TẠI THÁI NGUYÊN Hà Bích Hồng1, Nguyễn Thị Huyền1, Bùi Văn Thắng1, Phùng Thị Kim Cúc2, Vũ Thị Nguyên3 TÓM TẮT Cây Na trồng nơng nghiệp có giá trị kinh tế tỉnh Thái Nguyên, đặc biệt Na trồng huyện Võ Nhai Tuy nhiên, nghề trồng Na dai Võ Nhai gặp số khó khăn như: giống cịn hạn chế, người dân chủ yếu tự chiết cành chọn hạt to để làm giống, kỹ thuật canh tác nghèo nàn, đường giao thông chưa cải thiện, chưa xây dựng thương hiệu để cạnh tranh với sản phẩm khác sản phẩm loại Các loài thuộc chi Na có nhiều đặc điểm thống nhất, đặc biệt liên quan đến chiều cao cây, hệ thống rễ, vỏ cây, đặc điểm hoa Vì vậy, việc nghiên cứu xác định số thị ADN mã vạch cho giống Na dai Võ Nhai đặc sản tỉnh Thái Nguyên cần thiết nhằm mục tiêu bảo tồn phát triển nguồn gen giống Na dai, nhận dạng, truy xuất nguồn gốc đăng ký quyền giống sản phẩm chúng Nghiên cứu xác định hai trình tự ADN mã vạch matK trnL-trnF phục vụ định danh phân tích đa dạng di truyền giống Na dai tỉnh Thái Nguyên Với trình tự đoạn gen matK, tất mẫu Na dai thu thập tỉnh Thái Nguyên có độ tương đồng 100% (mã số ngân hàng Gen quốc tế: MT947750) tương đồng 100% với loài Annona squamosa Ngân hàng Gen quốc tế Đối với trình tự trnL-trnF, mẫu Na dai huyện Võ Nhai có trình tự giống lại phân biệt rõ ràng với giống Na dai trồng huyện khác tỉnh Bên cạnh đó, trình tự đoạn gen trnLtrnF giúp phân biệt tương đối tốt giống Na dai Na bở trồng địa bàn huyện Võ Nhai (cả hai trình tự có mã số đăng ký Ngân hàng Gen quốc tế là: MT947748, MT947749) Những kết sở cho công tác bảo tồn, khai thác cách có hiệu nguồn gen Na dai địa Việt Nam Từ khóa: matK, trnL-trnF, mã vạch ADN, Na, Annona squamosa ĐẶT VẤN ĐỀ ADN mã vạch (DNA barcodes) trình tự ADN có kích thước nhỏ sử dụng tiêu chuẩn để nhận dạng loài cách nhanh chóng xác ADN mã vạch giúp nhà phân loại học công tác phân loại xác định loài, nâng cao lực kiểm soát, hiểu biết tận dụng đa dạng sinh học Ngồi ra, kỹ thuật có triển vọng nghiên cứu ứng dụng khoa học sống, khoa học pháp y, y tế, nghiên cứu y dược, sản xuất kiểm soát chất lượng thực phẩm, truy xuất nguồn gốc, bảo hộ sản phẩm… Phương pháp vơ có ý nghĩa trường hợp mẫu vật Viện Công nghệ Sinh học Lâm nghiệp, Trường Đại học Lâm nghiệp Công ty TNHH Xây dựng Phát triển Nông nghiệp xanh Thái Nguyên Trường Đại học Nông lâm, Đại học Thái Nguyên sinh học cần giám định qua xử lý, chế biến dạng chế phẩm thuốc hay thực phẩm qua chế biến Chi Na chi thực vật điển hình họ Na (Annonaceae), thường sinh trưởng chủ yếu vùng nhiệt đới, có số lồi sinh sống vùng ơn đới (Pinto et al., 2005) Chi Na có 160 lồi (Chatrou et al., 2012) Chi có nhiều đặc điểm thống nhất, đặc biệt liên quan đến chiều cao cây, hệ thống rễ, vỏ cây, đặc điểm hoa (Lizana Reginato, 1990) Na ăn có giá trị tiềm kinh tế lớn góp phần khơng nhỏ việc xóa đói, giảm nghèo số vùng miền núi đồng thời góp phần phủ xanh đất trống đồi núi trọc tạo công ăn việc làm dư thừa lớn xã hội Hạt Na nhỏ, có màu vàng trắng Quả Na thường dùng ăn tươi, có vị ngon độ chua thấp, coi loài thuộc chi Annona thường tiêu thụ tươi trái tráng miệng, pha ch nc trỏi Nông nghiệp phát triển nông thôn - KỲ - TH¸NG 11/2020 17 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ cây, kem làm rượu Phần ăn chiếm khoảng 28 - 37% tổng khối lượng tươi quả; hạt tương ứng với 31 - 41% vỏ đến 23 - 40% Các carbohydrate có thịt na fructose (3,5%), sucrose (3,4%), glucose (5,1%) oligosaccarides (1,2 - 2,5%) (FAO, 1990) Các giống Na Việt Nam trồng phổ biến nhà vườn ba miền Bắc, Trung, Nam Đặc biệt, số tỉnh như: Thái Nguyên, Tuyên Quang, Lạng Sơn, Quảng Ninh số tỉnh Nam Tại tỉnh Thái Nguyên, Na trồng phổ biến huyện, tập trung nhiều huyện Võ Nhai Diện tích trồng Na địa bàn huyện Võ Nhai 230 (năm 2017) trồng tất xã huyện Nhưng tập trung ba xã La Hiên, Lâu Thượng Liên Minh Na dai Võ Nhai khơng to kích thước nịch, có vị sắc so với giống Na dai địa phương khác Bên cạnh đó, Na dai trồng huyện Võ Nhai tỉnh Thái Ngun cịn gặp số khó khăn: giống hạn chế, người dân chủ yếu tự chiết cành chọn hạt to để làm giống, kỹ thuật canh tác nghèo nàn, đường giao thông chưa cải thiện, chưa xây dựng thương hiệu để cạnh tranh với sản phẩm khác sản phẩm loại Tại Việt Nam, chưa có nghiên cứu xác định ADN mã vạch cho Na Vì vậy, việc nghiên cứu xác định số thị ADN mã vạch cho giống Na Dai Võ Nhai đặc sản tỉnh Thái Nguyên cần thiết Việc xác định số thị ADN mã vạch cho giống Na dai Võ Nhai cung cấp sở khoa học thực tiễn để bảo tồn phát triển nguồn gen giống Na Dai, nhận dạng, truy xuất nguồn gốc đăng ký quyền giống sản phẩm chúng VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu Vật liệu nghiên cứu gồm 36 mẫu Na thu thập từ Na tuyển chọn (cây sai quả, to, ngọt) địa điểm khác tỉnh Thái Nguyên Kí hiệu mẫu vị trí thu mẫu thể bảng Bảng Kí hiệu mẫu Na sử dụng cho nghiên cứu TT Kí hiệu Địa điểm thu mẫu N1.1 Xã Quang Sơn - huyện Đồng Hỷ N1.2 Xã Quang Sơn - huyện Đồng Hỷ N2.1 Xã Sông Cầu - huyện Đồng Hỷ N2.2 Xã Sông Cầu - huyện Đồng Hỷ 18 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 N3.1 N3.2 N4.1 N4.2 N5.1 N5.2 N6.1 N6.2 N7.1 N7.2 N8.1 N8.2 N9.1 N9.2 N10.1 N10.2 N11.1 N11.2 N12.1 N12.2 N13.1 N13.2 N14.1 N14.2 N15.1 N15.2 N16.1 N16.2 N17.1 N17.2 N18.1 N18.2 Xã Hóa Thượng - huyện Đồng Hỷ Xã Hóa Thượng - huyện Đồng Hỷ Xã Nhã Lộng - huyện Phú Bình Xã Nhã Lộng - huyện Phú Bình Xã Thượng Đình - huyện Phú Bình Xã Thượng Đình - huyện Phú Bình Xã Tân Hịa - huyện Phú Bình Xã Tân Hịa - huyện Phú Bình Xã Yên Đổ - huyện Phú Lương Xã Yên Đổ - huyện Phú Lương Xã Yên Ninh - huyện Phú Lương Xã Yên Ninh - huyện Phú Lương Xã Yên Trạch - huyện Phú Lương Xã Yên Trạch - huyện Phú Lương Xã Lâu Thượng - huyện Võ Nhai Xã Lâu Thượng - huyện Võ Nhai Xã La Hiên - huyện Võ Nhai Xã La Hiên - huyện Võ Nhai Xã Phú Thượng - huyện Võ Nhai Xã Phú Thượng - huyện Võ Nhai Xã Tràng Xá - huyện Võ Nhai Xã Tràng Xá - huyện Võ Nhai Xã Bình Long - huyện Võ Nhai Xã Bình Long - huyện Võ Nhai Xã Dân Tiến - huyện Võ Nhai Xã Dân Tiến - Huyện Võ Nhai Xã Tiên Hội - huyện Đại Từ Xã Tiên Hội - huyện Đại Từ Xã Hồng Nơng - huyện Đại Từ Xã Hồng Nơng - huyện Đại Từ Xã An Khánh - huyện Đại Từ Xã An Khánh - huyện Đại Từ 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp tách chiết ADN hệ gen ADN hệ gen tách chiết theo phương pháp CTAB (Cetyl trimethyl ammonium bromide) Saghai - Maroof et al (1984) với thay đổi nhỏ Khoảng 100 mg mô nghiền cối chày sứ 600 l đệm CTAB (4% CTAB thay 2%, 20 mM EDTA, 1,4 M NaCl, 1% beta-mercaptoethanol, 100 mM Tris-HCl pH 8.0) Mẫu chuyển vào ống ly tâm 1,5 ml ủ 650C bể ổn nhiệt 30 phút, sau để nguội nhiệt độ phịng chiết xuất với thể tích chloroform: isoamylalcohoh (tỷ lệ thể tích 24 : 1) Các mẫu ly tâm 10.000 vòng/phút, 15 phút Pha dung dịch chuyển sang ống ly tâm 1,5 ml ADN kết tủa cách thêm 500 l isopropanol lạnh ly N«ng nghiƯp phát triển nông thôn - K - THáNG 11/2020 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ tâm 10.000 vịng/phút, 15 phút ADN tủa sau rửa cồn 70% Làm khơ hịa tan ADN 100 l đệm TE 2.2.2 Phương pháp khuếch đại PCR giải trình tự nucleotide Phản ứng PCR thực máy PCR 9700 với thành phần chu kì nhiệt trình bày bảng Tên mồi, trình tự nucleotide mồi ADN mã vạch nhiệt độ gắn mồi mồi sử dụng nghiên cứu thể bảng Bước Sản phẩm PCR điện di gel agarose 1% có bổ sung thuốc nhuộm axit nucleic (Redsafe) Sau điện di, gel agarose soi đèn UV chụp ảnh Bảng Thành phần phản ứng PCR với mồi RAPD Thể tích (μl) Thành phần Nước deion khử trùng 7,5 Mồi (10 pmol) 1,5 PCR Master mix 2x 10 ADN tổng số 1,0 Tổng thể tích 20 Bảng Chu kì phản ứng PCR Phản ứng Nhiệt độ (oC) Biến tính ADN sợi kép thành 94 Biến tính ADN sợi kép thành 94 Gắn mồi 35 - 40 Tổng hợp (kéo dài) 72 Hoàn tất kéo dài chuỗi 72 Kết thúc phản ứng Thời gian phút 45 giây 45 giây phút phút Chu kỳ 35 chu kỳ Bảng Danh sách trình tự nucleotide cặp mồi Tên gen Kí hiệu mồi Trình tự mồi (5’-3’) Kích thước Nhiệt độ (0C) nhân gắn mồi ( C) matK_F1 ACCCAGTCCATCTGGAAATCTTGGTTC matK 850 bp 52 matK_R1 CGTACAGTACTTTTGTGTTTACGAG trnL_F1 CGAAATCGGTAGACGCTACG trnL-trnF 450 bp 54 trnF_R1 GGGGATAGAGGGACTTGAAC Những sản phẩm sau khuếch đại thành có phương pháp điều chỉnh cơng tinh kit Prification Kit thích hợp hàm lượng chất lượng ADN thu tốt Nagori et al (2014) nghiên Hãng Norgen - Canada sản xuất cứu tách chiết ADN loài Na Annona reticulata Sau tinh sản phẩm PCR gửi cho cho thấy công việc khó khăn Cơng ty 1st Base Malaysia để giải trình tự Trình tự diện polysaccharides, tannin, alkaloids, nucleotide đoạn ADN xác định polyphenol chất chuyển hóa thứ cấp khác cản máy giải trình tự tự động, sử dụng Kit BigDye® trở q trình tách chiết Tuy nhiên, qua kết Terminator v3.1 Cycle Sequencing, theo nguyên lý nghiên cứu cho thấy phương pháp tách chiết dựa Sanger CTAB sử dụng diatomit để loại bỏ polyphenol 2.2.3 Phương pháp phân tích liệu mã vạch polysaccharide chứng minh tốt ADN ADN (ADN barcode) tách chiết theo phương pháp cho chất Trình tự nucleotide đoạn gen xử lý lượng ADN tổng số tốt thích hợp cho phản ứng phân tích phần mềm BioEdit 6.0; Mega 7; PCR Nghiên cứu tham khảo kết nghiên công cụ BLAST website NCBI cứu Nagori et al (2014) có cải tiến cho phù hợp KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN với mẫu Na ADN tổng số 36 mẫu Na lấy từ 3.1 Kết tách chiết ADN tổng số tuyển chọn tách chiết thành công Tách chiết ADN tổng số bước quan trọng, (Hình 1) Kết điện di kiểm tra ADN gel chất lượng ADN tổng số thu (hàm lượng, độ agarose 0,8% cho thấy băng ADN tổng số thu tinh sạch) có ảnh hưởng trực tiếp đến hiệu tương đối sắc nét Các băng ADN có độ sáng phản ứng PCR sau Tuy nhiên, loài khỏc Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - TH¸NG 11/2020 19 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ cho thấy hàm lượng mẫu đồng Kết điện di cho thấy ADN tổng số bị đứt gãy ít, có độ tinh tương đối cao đủ tiêu chuẩn để tiến hành phương pháp PCR Hình Kết điện di ADN tổng số 36 mẫu Na nghiên cứu Ghi chú: giếng - 36 tương ứng với mẫu 36 mẫu từ N1 đến N18 bảng 3.2 Kết nhân đoạn trình tự ADN mã vạch kỹ thuật PCR 3.2.1 Kết nhân đoạn trình tự matK Gen matK gen mã hóa biến đổi thực vật, nhân cách dễ dàng Đây trình tự gen sử dụng rộng rãi để tiến hành khuếch đại, xây dựng mối quan hệ sinh thái loài để định danh loài thực vật (Vijayan Tsou, 2010) matK hệ gen lục lạp 36 mẫu Na dai tỉnh Thái Nguyên (Hình 2) Kết kiểm tra sản phẩm PCR nhân đoạn gen matK gel agarose 1,0% cho thấy đoạn gen matK nhân đặc hiệu tất 36 mẫu nghiên cứu, băng ADN có kích thước khoảng 800 bp tính tốn lý thuyết (so sánh với thang chuẩn 100 bp) Do đó, khẳng định nhân thành công đoạn gen matK lồi Na với kích thước 800 bp sản phẩm nhân đoạn gen matK tinh giải trình tự nucleotide Trình tự đoạn gen matK nhân 36 mẫu Na dai tỉnh Thái Ngun có kích thước khoảng > 800 bp so với đoạn trình tự gen matK nhân Trà hoa vàng Tam Đảo (Camellia tamdaoensis) có kích thước nhân đoạn gen nhân 951 bp (Hà Văn Huân, Nguyễn Văn Phong, 2015) có số nucleotide Nghiên cứu sử dụng cặp mồi để nhân đoạn gen matK với trình tự mồi xi: 5’-TCCATGGG TTTATATGGATCCTTCCTGGTT-3’ mồi ngược: 5’-CCCG CCATGGATG GAAGAATTCAAAAGATA3’, trình tự cặp mồi khác với trình tự cặp mồi sử dụng nghiên cứu Qua thấy, gen matK nghiên cứu lại sử dụng cặp mồi để nhân đoạn trình tự khác nhau, cho sản phẩm PCR có kích thước khác 3.2.2 Kết nhân đoạn trình tự trnL - trnF Hình Kết nhân trình tự đoạn matK 36 mẫu Na dai Thái Nguyên Giếng - 36: tương ứng với mẫu N1 - N18 bảng 1, (-): mẫu đối chứng âm thay ADN khuôn H2O; M: ADN marker 100 bp Đối với lồi Na, số trình tự đoạn ADN mã vạch matK công bố Ngân hàng Gen quốc tế Do đó, để nghiên cứu giám định lồi Na đa hình di truyền lựa chọn đoạn gen matK Cặp mồi matK_F/R sử dụng để nhân đoạn gen 20 Hình Kết nhân trình tự đoạn trnL-trnF 36 mẫu Na dai Thái Nguyên Giếng 1-36: tương ứng với mẫu N1 – N18 bảng 1, (-): mẫu đối chứng âm thay ADN khuôn H2O; M: ADN marker 100 bp Gen trnL- trnF trình tự gen nằm lục lạp nhân cách dễ dàng nhiều loài thực vật sử dng rng rói xõy dng mi Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - THáNG 11/2020 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ quan hệ hệ sinh thái lồi có liên quan chặt chẽ để định danh loài thực vật (Taberlet et al., 2007) Đoạn gen trnL-trnF khuếch đại thành công tất 36 mẫu Na nghiên cứu (Hình 3), băng ADN thu sáng rõ, xuất băng ADN với kích thước khoảng 500 bp (khi so sánh với thang ADN chuẩn 100 bp) Các trình tự trnL-trnF sau nhân tinh xác định trình tự nucleotide Việc giải trình tự nucleotide bước quan trọng để khẳng định tương đồng di truyền mẫu Na dai nghiên cứu 3.3 Phân tích trình tự đoạn mã vạch ADN với đoạn mồi khác 3.3.1 Trình tự nucleotide đoạn gen matK Kết xác định trình tự nucleotide đoạn matK 36 mẫu Na dai cho thấy đoạn gen nhân có kích thước 820 bp Sau xử lý trình tự nucleotide phần mềm BioEdit đoạn gen có kích thước 800 bp có chất lượng giải trình tự tốt, đoạn đầu đoạn cuối gen bị nhiễu nên loại bỏ để trình phân tích trình tự xác Hình So sánh trình tự đoạn gen matK mẫu Na dai tỉnh Thái Nguyên với trình tự tương đồng Ngân hàng Gen quốc tế Tất 36 trình tự đoạn gen matK so sánh với kết cho thấy độ tương đồng 100%, tức đoạn gen matK có trình tự nucleotide bảo thủ tất mẫu Na dai Thái Nguyên Với kết giống trình tự này, lựa chọn trình tự nucleotide mẫu N1.1 trình tự đại diện cho tất 36 mẫu Na dai tỉnh Thái Nguyên để so sánh với trình tự tương đồng Ngân hàng Gen quốc tế trình tự tương đồng lồi thuộc chi Annona lựa chọn để so sánh khỏc bit v Nông nghiệp phát triển nông thôn - KỲ - TH¸NG 11/2020 21 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ trình tự nucleotide với trình tự matK mẫu N1.1, sai khác trình tự thể hình squamosa Kết luận thể rõ ràng quan hệ di truyền hình Hình cho thấy trình tự matK mẫu N1.1 tương đồng 100% với trình tự matK loài A squamosa (mã số EU715064.1) tương đồng 99% (99,37% - 99,62%) với loài khác thuộc chi Annona Vị trí nucleotide sai khác mẫu N1.1 so với loài thuộc chi Annona vị trí, có vị trí khác biệt thể rõ ràng loài A squamosa mẫu N1.1 so với lồi cịn lại vị trí số 135 (mẫu N1.1 A squamosa nucleotide loại C lồi cịn lại A) vị trí 408 (mẫu N1.1 lồi A squamosa nucleotide loại G lồi cịn lại T) Kết phân tích trình tự nucleotide cho thấy: trình tự nucleotide đoạn matK không bị biến đổi bên lồi A squamosa có sai khác nhỏ với lồi chi, trình tự đoạn gen matK thị ADN mã vạch hiệu để định danh giám định loài A squamosa tất 36 mẫu Na dai trồng tỉnh Thái Nguyên loài A Larranaga Hormaza (2015) phát triển thị matK rbcL cho loài họ hàng gần thuộc chi Annona (A cherimola, A reticulata, A squamosa, A muricata, A macroprophyllata, A glabra A purpurea) cho thấy trình tự matK phân biệt xác tất lồi mức độ đa dạng trình tự nucleotide lồi thấp so với lồi Trình tự matK Sangeethe et al (2018) sử dụng để giám định loài A reticulata phân bố vùng địa lý khác nhau, kết cho thấy việc sử dụng thị matK giám định xác lồi xác định mức độ đa dạng di truyền Đối với 36 mẫu Na dai Thái Ngun, trình tự đoạn gen matK lại có độ tương đồng tuyệt đối (100%), điều phù hợp với nhiều nghiên cứu trình tự gen matK trình tự gen lục lạp bảo thủ cấp độ lồi 3.3.2 Trình tự nucleotide đoạn gen trnL-trnF Hình Trình tự nucleotide đoạn gen trnL-trnF 36 mẫu Na dai tỉnh Thái Nguyên Ký hiệu mẫu thể theo thứ tự mẫu bng 22 Nông nghiệp phát triển nông thôn - KỲ - TH¸NG 11/2020 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ Kết giải trình tự nucleotide đoạn gen trnL-trnF 36 mẫu Na dai cho thấy, đoạn gen trnLtrnF nhân có kích thước từ 520 bp đến 545 bp Tuy nhiên, chất lượng đọc trình tự hai đầu đoạn gen không tốt nên đoạn đầu đoạn cuối trình tự loại bỏ trước tiến hành so sánh trình tự với để đảm bảo kết so sánh xác Do đó, trình tự đoạn gen trnL-trnF sau loại bỏ đoạn đầu đoạn cuối có kích thước 487 bp 100%, mẫu Na dai huyện Phú Bình Đồng Hỷ có sai khác tương đối Đặc biệt, sai khác trình tự nucleotide thể rõ ràng vị trí nucleotide (vùng đóng khung hình 5) 12 mẫu Na dai Võ Nhai so với mẫu Na dai huyện khác Điều khẳng định trình tự đoạn gen trnL-trnF có khả phân biệt giống Na dai khác nhau, trình tự trnL-trnF Na dai Võ Nhai đặc trưng cho giống phân biệt với giống Na dai khác tỉnh Thái Nguyên Sử dụng phần mềm BioEdit để so sánh 36 đoạn trình tự gen trnL-trnF cho thấy nửa đầu đoạn gen bảo thủ, toàn 248 nucleotide tất 36 trình tự giống 100%, khác biệt trình tự nucleotide thể tương đối lớn nửa sau đoạn gen trnL-trnF (Hình 5) Trong đó, 12 mẫu Na dai huyện Võ Nhai, mẫu Na dai huyện Phú Lương mẫu Na dai huyện Đại Từ có trình tự đoạn gen trnL-trnF tương đồng Để khẳng định trình tự nucleotide đoạn gen trnL-trnF giống Na dai Võ Nhai đặc hữu, tiến hành phân tích thêm trình tự nucleotide đoạn gen trnL-trnF mẫu Na bở Võ Nhai Kết cho thấy trình tự giống Na có sai khác 21 vị trí nucleotide (Hình 6) Trong đó, tất mẫu Na bở huyện Võ Nhai có trình tự đoạn gen trnL-trnF giống 100% (N19.1, N19.2, N19.3) giống 95,7% so với giống Na dai huyện Võ Nhai Hình So sánh trình tự nucleotide đoạn gen trnL-trnF mẫu Na dai Na bở huyện Võ Nhai, tỉnh Thái Nguyên N10.1: mẫu Na dai; N19.1-N19.3: 03 mu Na b Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - THáNG 11/2020 23 ... phẩm loại Tại Việt Nam, chưa có nghiên cứu xác định ADN mã vạch cho Na Vì vậy, việc nghiên cứu xác định số thị ADN mã vạch cho giống Na Dai Võ Nhai đặc sản tỉnh Thái Nguyên cần thiết Việc xác định. .. chất lượng giải trình tự tốt, đoạn đầu đoạn cuối gen bị nhiễu nên loại bỏ để q trình phân tích trình tự xác Hình So sánh trình tự đoạn gen matK mẫu Na dai tỉnh Thái Nguyên với trình tự tương đồng... nucleotide Việc giải trình tự nucleotide bước quan trọng để khẳng định tương đồng di truyền mẫu Na dai nghiên cứu 3.3 Phân tích trình tự đoạn mã vạch ADN với đoạn mồi khác 3.3.1 Trình tự nucleotide