(Luận văn) phân lập và thiết kế vector biểu hiện gen zmnf yb2 và zmnac1 nhằm đáp ứng khả năng chống chịu với điều kiện hạn hán ở cây ngô

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT lu an NGUYỄN HỮU KIÊN n va ie gh tn to p PHÂN LẬP VÀ THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN GEN ZmNF-YB2 VÀ ZmNAC1 NHẰM ĐÁP ỨNG KHẢ NĂNG CHỐNG CHỊU VỚI ĐIỀU KIỆN HẠN HÁN Ở CÂY NGÔ d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC z m co l gm @ an Lu n va HÀ NỘI, năm 2014 ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn si BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT - lu NGUYỄN HỮU KIÊN an n va gh tn to p ie PHÂN LẬP VÀ THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN GEN ZmNF-YB2 VÀ ZmNAC1 NHẰM ĐÁP ỨNG KHẢ NĂNG CHỐNG CHỊU VỚI ĐIỀU KIỆN HẠN HÁN Ở CÂY NGÔ d oa nl w an lu nf va Chuyên ngành : Sinh học thực nghiệm oi lm ul Mã số: 60420114 z at nh z LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC m co l gm @ Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Văn Đồng an Lu HÀ NỘI, năm 2014 n va ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn si MỤC LỤC Lời cảm ơn…………………………………………………………………………………i Lời cam đoan…………………………………………………………………… ………ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT………………………………… iii DANH MỤC CÁC BẢNG…………………………………………………………… v DANH MỤC CÁC HÌNH……………………………………………………………….vi lu MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU an n va 1.1 Tổng quan ngô Nguồn gốc địa lý ngô 1.1.2 Nguồn gốc di truyền ngô 1.1.3 Đặc điểm nông sinh học ngô 1.1.4 Vai trò ngô kinh tế 1.1.5 w p ie gh tn to 1.1.1 oa nl Tình hình sản xuất ngô giới Việt Nam d 1.1.5.1 Tình hình sản xuất ngô giới an lu 1.1.5.2 Tình hình sản xuất ngô Việt Nam 10 nf va 1.2 Tình hình phát triển ngơ biến đổi gen giới Việt Nam 11 Các phương pháp chuyển gen vào ngô 11 1.2.2 Thành tựu triển vọng ngô biến đổi gen giới Việt Nam 13 oi lm ul 1.2.1 z at nh 1.3 Ảnh hƣởng hạn hán đến trồng phản ứng trồng với điều kiện hạn hán 16 Hạn hán nhu cầu tạo trồng kháng hạn 16 1.3.2 Khái niệm tính chiu hạn phản ứng trồng với điều kiện hạn17 z 1.3.1 gm @ l 1.4 Tổng quan gen NF-YB2 NAC1 19 m co 1.4.1 Khái niệm vai trò nhân tố phiên mã với điều kiện bất lợi phi sinh học…………………………………………………………………………………… 19 an Lu Tổng quan gen NF-YB2 20 1.4.3 Tổng quan gen NAC1 22 n va 1.4.2 ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn si Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Vật liệu nghiên cứu 26 2.1.1 Vật liệu thực vật 26 2.1.2 DNA plasmid chủng vi khuẩn 26 2.1.3 Hóa chất 26 2.1.4 Các thiết bị máy móc 27 2.1.5 Địa điểm nghiên cứu 27 2.2 Phƣơng pháp 27 lu an 2.2.1 Phương pháp tìm kiếm liệu thiết kế mồi đặc hiệu cho gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 27 va n 2.2.2 Phương pháp tổng hợp cDNA 28 gh tn to 2.2.3 Tách dòng gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 từ cDNA giống NTCB 32 p ie 2.2.4 Thiết kế vector siêu biểu gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 37 nl w 2.2.5 Khảo sát khả tiếp nhận gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 số dịng ngơ Việt Nam 42 d oa 2.2.6 Các tiêu theo dõi đánh giá 43 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 lu va an 3.1 Kết tách chiết RNA tổng số từ giống NTCB 44 nf 3.2 Kết phân lập gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 từ cDNA giống NTCB 45 oi lm ul 3.3 Thiết kế vector siêu biểu pZY:CaMV35S::ZmNF-YB2 pZY:CaMV5S::ZmNAC1 51 z at nh 3.4 Kết đánh giá khả tiếp nhận gen số dịng ngơ Việt Nam sử dụng vector pZY:CaMV35S::ZmNFYB2 pZY:CaMV35S::ZmNAC1 55 z 3.4.1 Kết biến nạp gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 vào dịng ngơ 55 @ m co l gm 3.4.2 Kết phân tích mang gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 kỹ thuật PCR…………………………………………………………………………………… 59 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 63 PHỤ LỤC………………………………………………………………………………68 an Lu n va ac th Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn si i Lời cảm ơn Trước hết Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới thầy cô cán công tác Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật dạy dỗ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình học tập viện Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Văn Đồng, người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ hỗ trợ tơi suốt q trình cơng tác thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn lu Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cán bộ, anh, chị, em an Phịng Thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Tế bào Thực vật, Viện Di truyền Nông n va nghiệp giúp đỡ động viên tơi q trình cơng tác nghiên cứu khoa học vừa to gh tn qua p ie Cuối cùng, tơi xin chân thành cảm ơn gia đình bạn bè nhiệt tình động viên, w giúp đỡ tơi q trình học tập, nghiên cứu khoa học sống oa nl Luận văn thực từ nguồn kinh phí từ đề tài “Nghiên cứu tạo giống d ngô chịu hạn cơng nghệ gen” thuộc chương trình đề tài cấp nhà nước lĩnh vực Xin chân thành cảm ơn! ul nf va an lu CNSH Nông nghiệp oi lm Hà nội, tháng năm 2014 z at nh z gm @ Nguyễn Hữu Kiên m co l an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si ii Lời cam đoan Tôi xin cam đoan trực tiếp thực nghiên cứu luận văn Mọi kết thu nguyên bản, không chỉnh sửa chép từ nghiên cứu khác, số liệu, sơ đồ kết luận văn chưa công bố Mọi liệu hình ảnh, biểu đồ trích dẫn tham khảo luận văn thu thập sử dụng từ nguồn liệu mở với đồng ý tác giả Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm với lời cam đoan trên! lu Tác giả an n va tn to p ie gh Nguyễn Hữu Kiên d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Acetosyringone A.tumefaciens Agrobacterium tumefaciens BAP 6-Benzyl Amino Purine (Benzyladeninpurin) Bp Base pair cDNA Complementary DNA Cs Cộng lu AS an n va gh tn to Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide p ie CTAB DNA Deoxyribonucleic Acid oa nl w DEPC Diethyl pyrocarbonate d lu Deoxyribonucleotide triphosphate Ethylen dimine tetra acetic acid z at nh g/l Escherichia coli oi lm EDTA ul E.coli nf va an dNTP Gam/lít z Isopropylthio-beta-D-galactoside Kb Kilobase kDa KiloDalton m co l gm @ IPTG an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si iv lu an n va LB Luria Bertani mg/l Miligam/lít NTCB Ngơ tẻ cao OD Optical density PCR Polymerase Chain Reaction RNA Ribonucleic Acid Rnase Ribonuclease tn to SDS Sodium dodecyl sulphate ie gh Tris-Acetic acide-EDTA p TAE w Thermus aquaticus polymerase an 5-brom-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactosidase oi lm ul nf va X-Gal Tris-EDTA lu TE d oa nl Taq polymerase z at nh z m co l gm @ an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Dự báo nhu cầu ngô giới đến năm 2020 Bảng 1.2 Diện tích, suất, sản lượng ngơ giới 2009 – 2012 10 Bảng 1.3 Sản xuất ngô Việt Nam từ năm 2009 – 2012 11 Bảng 2.1 Trình tự cặp mồi sử dụng nghiên cứu 27 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng 29 Bảng 2.3 Thành phần phản ứng 31 lu Bảng 2.4 Thành phần phản ứng tổng hợp cDNA 31 an Bảng 2.5 Thành phần phản ứng PCR gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 từ cDNA 32 n va Bảng 2.6 Chu trình nhiệt phản ứng PCR 33 to gh tn Bảng 2.7 Thành phần phản ứng gắn 3’A Overhang 34 Bảng 2.8 Thành phần phản ứng gắn đoạn gen vào vector tách dòng 35 ie p Bảng 2.9 Thành phần phản ứng PCR từ khuẩn lạc 36 nl w Bảng 2.10 Thành phần phản ứng cắt enzyme giới hạn 37 d oa Bảng 2.11 Thành phần phản ứng cắt DNA plasmid 38 an lu Bảng 2.12 thành phần phản ứng loại nhóm 5’ phosphatase 39 Bảng 2.13 Thành phần phản ứng gắn đoạn gen vào vector 39 va ul nf Bảng 2.14 Thành phần phản ứng cắt plasmid pZY:CaMV35S 40 oi lm Bảng 3.1 Kết tách chiết RNA tổng số giống NTCB 44 z at nh Bảng 3.2 Kết biến nạp vector pZY:CaMV35S::ZmNF-YB2 pZY:CaM35S::ZmNAC1 vào dịng ngơ Việt Nam 56 z Bảng 3.3 Kết phân tích dịng ngơ chuyển gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 hệ T0 dịng ngơ sử dụng biến nạp 59 m co l gm @ an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơ chế đáp ứng thực vật điều kiện hạn hán 19 Hình 2.1 Vector plasmid pGEM-T Easy mở vịng 35 Hình 2.2 Bản đồ cấu trúc vector biểu pZY:CaMV35S 38 Hình 3.1 Kết điện di kiểm tra RNA tổng số 45 Hình 3.2 Kết khuếch đại gen ZmNF-YB2 từ cDNA 46 Hình 3.3.a Kết PCR gen ZmNAC1 từ cDNA; b Kết PCR đoạn gen ZmNAC1 dự kiến sau xử lý với sorbitol 12 47 lu an Hình 3.4.a Kết điện điện di kiểm tra sản phẩm PCR từ khuẩn lạc mang gen ZmNFYB2; b Kết kiểm tra sản phẩm PCR khuẩn lạc mang gen ZmNAC1 49 n va Hình 3.5 Cấu trúc vector siêu biểu pZY:CaMV35S::ZmNF-YB2 52 to gh tn Hình 3.6 Cấu trúc vector siêu biểu pZY:CaMV35S::ZmNAC1 52 p ie Hình 3.7.a Kết PCR gen ZmNF-YB2 sử dụng cặp mồi 35S-F/ZmNF-YB2Asc-R; b Kết PCR khuẩn lạc sử dụng cặp mồi 35S-F/ZmNAC1BamHI-R 53 oa nl w Hình 3.8.a Kết cắt vector pZY:CaMV35S::ZmNF-YB2 enzyme giới hạn AscI; b Kết cắt vector pZY:CaMV35S::ZmNAC1 enzyme giới hạn BamHI 54 d Hình 3.9 Quy trình biến nạp gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 vào dịng ngơ Việt Nam 59 lu nf va an Hình 3.10 Kết phân tích PCR gen chọn lọc (Bar) ngô chuyển genZmNFYB2 hệ To 60 oi lm ul Hình 3.11 Kết phân tích PCR gen đích ZmNF-YB2 ngô chuyển gen hệ To 60 z at nh Hình 3.12 Kết phân tích PCR gen chọn lọc (Bar) ngô chuyển gen ZmNAC1 hệ To 61 z m co l gm @ an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si 62 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I KẾT LUẬN Tách dịng thành cơng đoạn gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 thuộc nhóm nhân tố phiên mã có khả nâng cao khả chống chịu với điều kiện hạn hán từ giống ngơ tẻ Cao Bằng Kết tách dịng cho thấy gen ZmNF-YB2 có 537 nucleotide mã hóa cho 178 amino acid, gen ZmNAC1 có 882 nucleotide mã hóa cho 293 amino acid Thiết kế thành công vector siêu biểu có chứa đoạn gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 điều khiển promoter 35S lu Kết phân tích PCR dịng ngơ sau biến nap chứng tổ tổ hợp an n va vector siêu biểu pZY:CaMV35S::ZmNF-YB2 pZY:CaMV35S:ZmNAC1 có tn to thể sử dụng để chuyển gen vào dòng ngô chọ lọc Việt Nam KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu quy trình biến nạp ngơ nhằm nâng cao hiệu chuyển gen p ie gh II Tiếp tục phân tích đánh giá sau chuyển gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 hệ oa nl w ZmNF-YB2 ZmNAC1 vào dịng ngơ Việt Nam d kỹ thuật PCR, Southern blot… Từ kết thu chuyển gen, tiếp tục nghiên cứu đánh giá biểu an lu oi lm ul nf va gen ZmNF-YB2 ZmNAC1 điều kiện hạn hán khác z at nh z m co l gm @ an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TRONG NƢỚC Nguyễn Văn Đồng, Phạm Thị Lý Thu, Lê Thị Mai Hương, Phạm Thị Hương, Lê Thị Thu Về, Lê Thị Lan, Nguyễn Chiến Hữu, Lê Huy Hàm (2013), Nghiên cứu biến nạp gen kháng hạn vào số dịng ngơ chọn lọc thơng qua vi khuẩn Agrobacterium Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam, 2(41): 61-67 Lê Thị Thu Hiền cộng (2003),Cây trồng biến đổi di truyền: thực trạng triển lu vọng, Công nghệ sinh học, 1(3): 265-285 an Nguyễn Hữu Hoàng (2009), Giá trị dinh dưỡng ngô, Viện Khoa học Nông va n nghiệp Việt Nam to Nguyễn Thị Thanh cộng (1999), Tạo cải (Brassica oleracea var botrycis) cải xanh (B juncea) mang gen kháng sâu cry1ac gen bar kháng ie gh tn p thuốc cỏ dại thông qua A tumefaciens, Báo cáo khoa học Hội nghị Cơng nghệ sinh w học tồn quốc: 1121-1128 Phạm Thị Lý Thu (2007), Nghiên cứu xây dựng hệ thống tái sinh từ phôi non xác oa nl d định phương pháp chuyển gen thích hợp ngô Luận án Tiến Sĩ sinh học, Viện Công va an lu nghệ Sinh học Ngơ Hữu Tình (2009), Chọn lọc lai tạo giống ngô, Nxb Nông nghiệp Phạm Văn Ty, Vũ Nguyên Thành (2007), Công nghệ sinh học tập năm công nghệ vi oi lm ul nf sinh môi trường, Nxb Giáo dục Vũ Văn Vụ (1996), Sinh lý học thực vật, Nxb Giáo Dục TÀI LIỆU NƢỚC NGOÀI z at nh z @ Aida M., Ishida T., Fukaki H., Fujisawa H., & Tasaka M (1997), Genes involved in gm m co Plant Cell, 9:841-857 l organ separation in Arabidopsis: an analysis of the cup-shaped cotyledon mutant, 10 Boyer J.S (1982), Plant productivity and environment, Science, 218:443-448 an Lu 11 Cook E R., Seager R., Cane M A., Stahle D.W (2007), Earth, Sci Rev, 81:93-134 n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si 64 12 Collinge M., & Boller T (2001), Differential induction of two potato genes, Stprx2 and StNAC, in response to infection by Phytophthora infestans and to wounding, Plant Mol Biol, 46(5):521e9 13 Cutler S R., Rodriguez P L., Finkelstein R R., Abrams S R (2010), Abscisic acid: emergence of acoresignaling network”, Annual Reviewof Plant Biology, 61:651-679 14 Edmeades O G (2007), Drought tolerance in Maize: An Emerging Reality Companion document to excutive summary, ISAAA briefs: 39-2008 lu 15 Fang Y., You J., Xie K., Xie W., Xiong L (2008), Systematic sequence analysis and an va identification of tissue-specific or stress-responsive genes of NAC transcription n factor family in rice, Mol Genet Genomics, 280:535-46 to gh tn 16 Gusmaroli G., Tonelli C., Mantovani R (2001), Regulation of the CCAAT-binding NF-Y subunits in Arabidopsis thaliana, Gene, 264:173-185 ie p 17 Hankenberg D., Wu Y., Voigt A., Adams R., Schramm P., Grimm B (2011), Studies nl w on differential nuclear translocation mechanism and assembly of the three subunits d oa of the arabidopsis thaliana transcription factor NF-Y, Mol Plant, doi: an lu 10.1093/mp/ssr107 18 Hao Y J., Wei W., Song Q X., Chen H W., Zhang Y Q., Wang F., Zou H F., Lei va ul nf G., Tian A G., Zhang W K., Ma B., Zhang J S., Chen S Y (2011), Soybean NAC oi lm transcription factor promote abiotic stress tolerance and lateral root formation in transgenic plants, The Plant Journal, 68:302-313 z at nh 19 Hu H., Dai M., Yao J., Xiao B., Li X., Zhang Q., et al (2006), Overexpressing a NAM, ATAF and CUC (NAC) transcription factor enhances drought resistance and z gm @ salt tolerance in rice, Proc Natl Acad Sci USA, 103(129):87-92 20 Huang T., Duman J G (2002), Cloning and characterization of a thermal hysteresis l (antifreeze) protein with DNA-binding activity from winter bittersweet nightshade, an Lu 21 IFPRI (2003), 2020 Projections, Washington, D.C m co Solanum dulcamara, Plant Mol Biol, 48:339-50 n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si 65 22 Ishiguro S., & Nakamura K (1994), Characterization of a cDNA encoding a novel DNA-binding protein, SPF1, that recognizes SP8 sequences in the 5, upstream regions of genes coding for sporamin and b-amylase from sweet potato, Mol Genet Genomics, 244:563-571 23 James, C (2013), Global status of commercialized biotech/GM crops: 2013, ISAAA: Ithaca, NY 24 Katia P., Roderick W K., Nerina G., Valentina C., Monica F., Chiara T., Ben F H., Roberto M (2012), The promiscuous life of plant nuclear factor Y transcription lu an factors, The Plant Cell, 24: 4777-4792 expression in Arabidopsis and improvement of stress tolerance in crop plants by n va 25 Kazuo N., Kazuko Y S (2005), Molecular studies on stress-responsive gene gh tn to regulon biotechnology, JARQ39 (4): 221-229 p ie 26 Kim T H., Bohmer M., Hu H., Nishimura N., Schroeder J I (2010), Guard cell Signal transduction network: Advances in understanding abscisis acid, CO1, and nl w Ca2+ signaling, Annu Rev Plant Biol, 61:561-591 d oa 27 Kumimoto R W., Zhang Y., Siefers N., Holt B F (2010), NF-YC3, NF-YC4 and an lu NF-YC9 are required for constants-mediated, photoperiod-dependent flowering in Arabidopsis thaliana, Plant J, 63:379-391 va ul nf 28 Kizis D., Pages M (2002), Maize DRE-binding proteins DBF1 and DBF2 are oi lm involved in rab17 regulation through the drought-responsive element in an ABAdependent pathway, Plant J, 30:679-689 z at nh 29 Le D T., Nishiyama R., Watanabe Y., Mochida K., Yamaguchi-Shinozaki K., Shinozaki K., Tran L S P (2011), Genome-wide survey and expression analysis of z gm @ the plant-specific NAC transcription factor family in soybean during development and dehydration stress, DNA Research, 18:263-276 l m co 30 Li W X., Oono Y., Zhu J., He X J., Wu J M., Lida K., Lu X Y., Cui X., Jin H., Zhu J K (2010), The Arabidopsis NFYA5 transcription factor is regulated an Lu transcriptionally and postranscriptionally to promote drought resistance, The Plant Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn n va Cell, 20:2238-2251 ac th si 66 31 Liu J.X., Howell S.H (2010), bZIP28 and NF-Y transcription factors are activated by ER stress and assemble into a transcriptional complex to regulate stress response genes in Arabidopsis, Plant Cell, 22:782-796 32 Lu M., Ying S., Zhang D F., Shi Y S., Song Y C., Tian Y., Li Y (2012), A maize stress-responsive NAC transcription factor, ZmNAC1, confers enhanced tolerance to dehydration in transgenic Arabidopsis”, Plant Cell Reports, 31(9):1701 33 Maity S.N., Crombrugghe B D (1998), Role of the CCAAT-binding protein CBF/NF-Y in transcription, Trends Biochem Sci, 23:174-178 lu an 34 Manuela M C., João P M., João S P (2003), Understanding plant response to drought from genes to the whole plant, Functional Plant Biology, 30:239-264 n va 35 Masiero S., Imbriano C., Ravasio F., Favaro R., Pelucchi N., Gorla M S., gh tn to Mantovani R., Colombo L., Kater M M (2002), Ternary complex formation between MADS-box transcription factors and the histone fold protein NF-YB, ie p J.Biol Chem, 277(22):6529-26435 nl w 36 Mochida K., Yoshida T., Sakurai T., Yamaguchi- Shinozaki K., Shinozaki K., Tran d oa L-S.P (2009), In silico analysis of transcription factor repertoire and prediction of an lu stress responsive transcription factors in soybean, DNA Res 37 Mohammed N., Akhter M S., Shoshi K., (2013), Roles of NAC transcription factors va oi lm 10.3389/fmicb ul nf in the regulation of biotic and abiotic stress responses in plants, Microbiology 4:doi 38 Nakashima K., Takasaki H., Mizoi J., Shinozaki K., & Yamaguchi-shinozaki K z at nh (2012), NAC transcription factors in plant abiotic stress responses, Biochimica et Biophysica Acta, 1819:97-103 z gm @ 39 Nakashima K., Ito Y., & Yamaguchi-shinozaki K (2009), Transcriptional regulatory networks in response to abiotic stresses in Arabidopsis and grasses, Plant Physiol, m co l 149:88-95 40 Nakashima K., Tran L P., Nguyen D V., Fujita M., Maruyama K., Todaka D., et al an Lu (2007), Functional analysis of a NAC-type transcription factor OsNAC6 involved in Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn n va abiotic and biotic stress responsive gene expression in rice, Plant J, 51:617e30 ac th si 67 41 Nelson D E., Repetti P P., Adams T R., Creelman R A., Wu J., Warney D C., Anstrom D C., Bensen R J., Castiglioni P P., Donnarummo M G., HinChey B S., Kumimoto R W., Maszle D R., Canales R D., Krolikowski K A., Dotson S B., Gutterson N., Ratcliffe O J., Heard J E (2007), Plant nucleare factor Y (NF-Y) B subunits confer drought tolerance and lead to improved corn yields on water-limted acres, Pnas, 104:16450-16455 42 Ooka H., Satoh K., Doi K., Nagata T., Otomo Y., Murakami K (2003), Comprehensive analysis of NAC family genes in Oryza sativa and Arabidopsis lu an thaliana, DNA Res, 20:239-247 Chappellaz J., Davis M., Delaygue G., Delmotte M., Kotlyakov V M., Legrand M., n va 43 Petit J R., Jouzel J., Raynaud D., Barkov N I., Barnola J M., Basile I., Bender M., gh tn to Lipenkov V Y., Lorius C., Pespin L., Ritz C., Saltzman E., Stivernard M (2009), p ie Climate and atmospheric history of the past 420,000 years from the Vostok ice core, w Antarctica, Nature, 399:429-436 oa nl 44 Pingali P L., Pandey S (2001), World maize needs meeting: technological opportunities and priorities for the public section, Pingali P (ed) CIMMYT 1999- d an lu 2000 World maize facts and trends Meeting world maize needs: technological nf va opportunities and priorities for the public section.CIMMYT, Mexico city: 1-3 oi lm ul 45 Riechmann J L., Heard J., Martin G., Reuber L., Jiang C Z., Keddie J., Adam L., Pineda O., Racliffe O J., Samaha R R (2000), Arabidopsis transcription factors: z at nh genome-wide comparative analysis among eukaryotes, Science, 290: 2105-2110 z 46 Rivero M R, Kojima M., Gepstein A., Sakakibara H., Mittler R., Gepstein S., Blumwald E (2007), Delayed leaf senescence induces extreme drought tolerance in a flowering plant, PNAS, 104(49):19631-19636 gm @ 47 Roderick W K., Chamindika L S., Krystal K G., Jan R R., Nicholas S., Ben F H l m co (2013), Nuclear factor Y transcription factors have both opposing and additive roles in ABA-mediated seed germination, PLoS ONE, 8(3):e59841 an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si 68 48 Rushton P J., Bokowiec M T., Han S., Zhang H., Brannock J F., Chen X., et al (2008), Tobacco transcription factors: novel insights into transcriptional regulation in the Solanaceae, Plant Physiol 49 Saibo N J M., Lourenco T., Oliveira M M (2009), Transcription factors and regulation of photosynthetic and related metabolism under environmental stresses, Annals of Botany, 103: 609-623 50 Salinger M J, Sivakumar M V K., Motha R (2005), Climatic, Change, 70:341–362 51 Schmutz J., Steven B C., Jessica S., Jianxin M., Therese M., Nelson W., David L lu an H., Qijian S., Jay J T., Jianlin C., Xu D., Hellsten U., May G D., Yu Y., Sakurai T., va Umezawa T., Bhattacharyya M K., Sandhu D., Valliyodan B., Lindquist E., Peto n M., Grant D., Shu S., Goodstein D., Barry K., Montona F G., Abernathy B., gh tn to Jianchang D., Zhixi T., Liucun Z., Navdeep G., Trupti J., Marc L., Anand S., Zhang p ie X C., Shinozaki K., Nguyen H T., Wing R A., Cregan P., Specht J., Grimwood J., Rokhsar D., Stacey G., Shoemaker R C., Jackson S A (2010), Genome sequence of nl w the palaeopolyploid soybean, Nature, 463:178-183 d oa 52 Shinozaki K., Yamaguchi-Shinozaki K (2007), Gene networks involved in drought an lu stress response and tolerance, J Exp Bot, 58:221-227 53 Siefers N., Dang K K., Kumimoto R W., Bynum W E T., Tayrose G., Holt B F va ul nf (2009), Tissue-specific expression patterns of Arabidopsis NF-Y transcription 149:625-641 oi lm factors suggest potential for extensive combinatorial complexity, Plant Physiol, z at nh 54 Sinha S., Maity S N., Lu J., de Crombrugghe B (1995), Recombinant rat CBF-C, the third subunit of CBF/NFY, allows formation of a protein-DNA complex with z 92:1624-1628 l gm @ CBF-A and CBF-B and with yeast HAP2 and HAP3, Proc Natl Acad Sci USA, m co 55 Tiwari S B., Shen Y., Chang H C., Hou Y., Harris A., Ma S F., McPartland M., Hymus G J., Adam L., Marion C., Belachew A., Repetti P P., Reuber T L., an Lu Ratcliffe O J (2010), The flowering time regulator constans is recruited to the Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn n va flowering locus T promoter via a unique cis-element, New Phytol, 187:56-66 ac th si 69 56 Tran L.S., Nishiyama R., Yamaguchi-Shinozaki K., Shinozaki K (2010), Potential utilization of NAC transcription factors to enhance abiotic stress tolerance in plants by biotechnological approach, GM Crops, 1(1):32-39 57 Udvardi M K., Kakar K., Wandrey M., Montanari O., Murray J., Andriankaja A., Zhang J Y., Benedito V., Hofer J M I., Chueng F., et al (2007), Legume transcription factors: global regulators of plant development and response to the environment, Plant Physiol, 144: 538-549 58 Umezawa T., Nakashima K., Miyakawa T., Kuromori T., Tanokura M., Shinozaki lu an K., Yamaguchi-Shinozaki K (2010), Molecular basis of the core regulatory network va in ABA responses: Sensing, Signaling and transport, Plant Cell Physiol, n 51(11):1821-1839 to gh tn 59 Vavilov N.I (1926), Studies on the Conbining Ability of CIMMYT Germplasm, p ie CIMMYT Research Highlights: 24-33 60 Wang Y, Ying J., Kuzma M , Chalifoux M., Sample A., Arthur M C., Uchacz T., nl w Sarvas C., Wan J., Dennis T D , Court M P., Huang Y (2005), Molecular tailoring an lu 43:413-424 d oa of farnesylation for plant drought tolerance and yield protection, The Plant Journal, 61 Xia N., Zhang G., Sun Y F., Zhu L., Xu L S., Chen X M., Liu B., Yu Y T., Wang va ul nf X J., Huang L L., & Kang Z S (2010), TaNAC8, a novel NAC transcription factor oi lm gene in wheat, responds to stripe rust pathogen infection and abiotic stresses, Physiol Mol Plant Pathol, 74: 394e402 z at nh 62 Xiao H., Sha T., Yi A., Dong-Chao Z., Xin-Li X., Wie-Lun Y (2013), Overexpression of the poplar NF-YB7 transcription factor factor drought tolerance z 64(14):4589-4601 l gm @ and improves water-use efficiency in Arabidopsis, Journal of Experimental Botany, m co 63 Yamaguchi-shinozaki K., Koizumi M., Urao S., & Shinozaki K (1992), Molecular cloning and characterization of cDNAs for genes that are responsive to desiccation an Lu in Arabidopsis thaliana: sequence analysis of one cDNA clone that encodes a Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn n va putative transmembrane channel protein, Plant Cell Physiol, 33:217-224 ac th si 70 64 Yamamoto A., Kagaya Y., Toyoshima R., Kagaya M., Takeda S., Hattori T (2009), Arabidopsis NF-YB subunits LEC1 and LEC1-like activate transcription by interacting with seed-specific ABRE-binding factors, The Plant Journal 58:843-856 TÀI LIỆU WEB 65 FAOSTAT (2014), http://faostat.fao.org/ 66 ISAAA (2009), Brief report 41-2009 67 ISAAA (2014), lu http://www.isaaa.org/gmapprovaldatabase/commercialtrait/default.asp?TraitTypeID an =6&Trait=Abiotic%20Stress%20Tolerance n va 68 PlantTFDB database, http://planttfdb.cbi.pku.edu.cn/ to 69 NCBI, http://ncbi.nlm.nih.gov/ p ie gh tn d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si PHỤ LỤC Phụ lục Môi trường nuôi cấy khuẩn Môi trƣờng LB: - Môi trường LB lỏng: 5g/l Yeast extract, 10 g/l Triptone, 10 g/l Nacl, pH=7 - Môi trường LB đặc: LB lỏng bổ sung 15g/l Bactor-agar, pH=7 lu Môi trƣờng YEB: an n va - Môi trường YEB lỏng: tn to 55g/l Yeast extract, 10 g/l Peptone, 10 g/l Nacl pH=7 ie gh - Môi trường YEB đặc: YEB lỏng bổ sung 15 g/l Bactor-agar, pH=7 p Phụ lục Thành phần môi trường nuôi cấy ngô w CCM ReM EcM SeM RM + + + + + - + + + + + - - - - - + - - - + 5ml 5ml 5ml 5ml 30 g 30 g 30 g 30 g an lu N6 salts d oa nl IM va Thành phần N6 vitamin nf - MS vitamin 5ml - z at nh Glycine (0,2g/500ml) oi lm ul MS salts 68.5 g Glucose 36 g L-proline 0.7 g 0.7 g 0.7 g MES 0.5 g 0.5 g 0.5 g 2,4-D, 1mg/ml 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml z Sucrose 60 g l gm @ 0.7 g 0.7 g m co 0.5 g 0.5 g an Lu 1.5 ml n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si BAP (mg/l) 1mg 100 mg Myo inositol (mg/l) pH w/KOH 5.2 Gellan-gum (g/l) 5.8 5.8 5.8 5.8 5,5-6 5,5-6 5,5-6 5,5-6 Agar (g/l) 5.8 8-9 lu Khử trùng, sau bố sung: an n va 0.1 ml L-cysteine 0.4 g 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 1ml 1ml 1ml mg/l mg/l 5mg/l 5mg/l gh tn to Silver nitrate, 8.5 mg/ml ie Acetosyringone, 100 mM p ml 1ml d oa nl w Cefotaxime (250mg/ml) ul nf va Hygromycin an lu PPT (Phosphinothricin) oi lm MS*: Thành phần muối khoáng vitamin theo Murashige Skoog (Murashige et al., 1962) z at nh N6*: Thành phần muối khoáng vitamin theo Chu et al (1975) z Phụ lục Trình tự nucleotide amino acid mã hóa gen NTCB-ZmNF-YB2 @ gm ATG GCG GAA GCT CCG GCG AGC CCT GGC GGC GGC GGC GGG AGC CAC l GAG AGC GGG AGC CCC AGG GGA GGC GGA GGC GGT GGC AGC GTC AGG m co GAG CAG GAC AGG TTC CTG CCC ATC GCC AAC ATC AGT CGC ATC ATG an Lu AAG AAG GCC ATC CCG GCT AAC GGG AAG ATC GCC AAG GAC GCT AAG GAG ACC GTG CAG GAG TGC GTC TCC GAG TTC ATC TCC TTC ATC ACT n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si AGC GAA GCG AGT GAC AAG TGC CAG AGG GAG AAG CGG AAG ACC ATC AAT GGC GAC GAT CTG CTG TGG GCC ATG GCC ACG CTG GGG TTT GAA GAC TAC ATT GAA CCC CTC AAG GTG TAC CTA CAG AAG TAC AGA GAG ATG GAG GGT GAT AGC AAG TTA ACT GCT AAA TCT AGC GAT GGC TCG ATT AAA AAG GAT GCT CTT GGT CAT GTG GGA GCA AGT AGC TCA GCT GCA GAA GGG ATG GGC CAA CAG GGA GCA TAC AAC CAA GGA ATG GGT TAT ATG CAA CCT CAG TAC CAT AAC GGG GAT ATC TCA AAC TAA MAEAPASPGGGGGSHESGSPRGGGGGGSVREQDRFLPIANISRIMKKAIPANGKIAKDAK lu an ETVQECVSEFISFITSEASDKCQREKRKTINGDDLLWAMATLGFEDYIEPLKVYLQKYRE n va MEGDSKLTAKSSDGSIKKDALGHVGASSSAAEGMGQQGAYNQGMGYMQPQYHNGDISN* tn to Phụ lục Kết so sánh trình tự nucleotide gen NTCB-ZmNF-YB2 phân lập từ ie gh giống ngô tẻ Cao Bằng với giống ngô B73(gb|DQ333304.1|) ZmNF-YB2 p 61 301 340 DQ333304.1 ZmNF-YB2 361 400 DQ333304.1 ZmNF-YB2 421 460 DQ333304.1 ZmNF-YB2 481 520 DQ333304.1 541 60 60 120 120 159 180 219 240 279 300 339 360 399 420 459 z DQ333304.1 ZmNF-YB2 z at nh 241 280 oi lm DQ333304.1 ZmNF-YB2 ul 181 220 nf DQ333304.1 ZmNF-YB2 va 121 160 an DQ333304.1 ZmNF-YB2 lu 61 121 d DQ333304.1 ZmNF-YB2 oa nl w DQ333304.1 ZmNFY-B2 ATGGCGGAAGCTCcggcgagccctggcggcggcggcgggagccacgagagcgggagcccc |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATGGCGGAAGCTCCGGCGAGCCCTGGCGGCGGCGGCGGGAGCCACGAGAGCGGGAGCCCC aggggaggcggaggcggTGGCAGCGTCAGGGAGCAGGACAGGTTCCTGCCCATCGCCAAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGGGGAGGCGGAGGCGGTGGCAGCGTCAGGGAGCAGGACAGGTTCCTGCCCATCGCCAAC ATCAGTCGCATCATGAAGAAGG -CCATCCCGGCTAACGGG |||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||| ATCAGTCGCATCATGAAGAAGGCCATCCCGGCTAACGGGAAGACCATCCCGGCTAACGGG AAGATCGCCAAGGACGCTAAGGAGACCGTGCAGGAGTGCGTCTCCGAGTTCATCTCCTTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGATCGCCAAGGACGCTAAGGAGACCGTGCAGGAGTGCGTCTCCGAGTTCATCTCCTTC ATCACTAGCGAAGCGAGTGACAAGTGCCAGAGGGAGAAGCGGAAGACCATCAATGGCGAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATCACTAGCGAAGCGAGTGACAAGTGCCAGAGGGAGAAGCGGAAGACCATCAATGGCGAC GATCTGCTGTGGGCCATGGCCACGCTGGGGTTTGAAGACTACATTGAACCCCTCAAGGTG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GATCTGCTGTGGGCCATGGCCACGCTGGGGTTTGAAGACTACATTGAACCCCTCAAGGTG TACCTACAGAAGTACAGAGAGATGGAGGGTGATAGCAAGTTAACTGCTAAATCTAGCGAT ||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||| TACCTGCAGAAGTACAGAGAGATGGAGGGTGATAGCAAGTTAACTGCAAAATCTAGCGAT GGCTCGATTAAAAAGGATGCTCTTGGTCATGTGGGAGCAAGTAGCTCAGCTGCAGAAGGG ||||| |||||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||| GGCTCAATTAAAAAGGATGCCCTTGGTCATGTGGGAGCAAGTAGCTCAGCTGCACAAGGG ATGGGCCAACAGGGAGCATACAACCAAGGAATGGGTTATATGCAACCTCAGTACCATAAC ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||| ATGGGCCAACAGGGAGCATACAACCAAGGAATGGGTTATATGCAACCCCAGTACCATAAC GGGGATATCTCAAACTAA 537 |||||||||||||||||| GGGGATATCTCAAACTAA 558 540 m co l gm @ 480 519 an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si NTCB-NFYB2 DQ333304.1 NTCB-NFYB2 55 DQ333304.1 NTCB-NFYB2 61 114 DQ333304.1 NTCB-NFYB2 121 174 DQ333304.1 181 MAEAPASPGGGGGSHESGSPRGGGGGGSVREQDRFLPIANISRIMKKAIPANGK -MAEAPASPGGGGGSHESGSPRGGGGGGSVREQDRFLPIANISRIMKKAIPANGK MAEAPASPGGGGGSHESGSPRGGGGGGSVREQDRFLPIANISRIMKKAIPANGKTIPANG -IAKDAKETVQECVSEFISFITSEASDKCQREKRKTINGDDLLWAMATLGFEDYIEPLKV IAKDAKETVQECVSEFISFITSEASDKCQREKRKTINGDDLLWAMATLGFEDYIEPLKV KIAKDAKETVQECVSEFISFITSEASDKCQREKRKTINGDDLLWAMATLGFEDYIEPLKV YLQKYREMEGDSKLTAKSSDGSIKKDALGHVGASSSAAEGMGQQGAYNQGMGYMQPQYHN YLQKYREMEGDSKLTAKSSDGSIKKDALGHVGASSSAA+GMGQQGAYNQGMGYMQPQYHN YLQKYREMEGDSKLTAKSSDGSIKKDALGHVGASSSAAQGMGQQGAYNQGMGYMQPQYHN GDISN 178 GDISN GDISN 185 54 60 113 120 173 180 Phụ lục Kết trình tự nucleotide trình tự mã hóa amino axit gen NTCBZmNAC1 lu ATGAGCGGCGCCGGTCCGGATCTGCAGCTGCCACCGGGGTTCCGGTTCCACCCGACGGAC an n va GAGGAGCTGGTGATGCACTACCTCTGCCGCCGCTGCGCCGGCCTGCCCATCGCCGTCCCC ATCATCGCCGAGATCGACCTCTACAAGTTCGACCCATGGCAGCTCCCCAGGATGGCACTG to gh tn TACGGCGAGAAGGAGTGGTACTTCTTCTCCCCGCGGGACCGCAAGTACCCGAACGGGTCC AGGCCCAACCGCGCCGCCGGGGCTGGGTACTGGAAGGCCACCGGCGCTGACAAGCCCGTG ie p GGCACGCCCAAGCCGCTGGCCATCAAGAAGGCGCTCGTCTTCTACGCCGGCAAGGCGCCC nl w AAGGGCGAGAAGACCAACTGGATCATGCACGAGTACCGCCTCGCCGACGTCGACCGCTCG oa GCGCGCAAGAAGAACAGCCTCAGGTTGGATGACTGGGTCCTGTGCCGCATCTACAACAAG d AAGGGCGGCGGGCTGGAGAAGGCGCCGGCGGCCGGCGGCGACCACAAGCCTGTGTTCGCC lu va an ACGGCGGCGGTGAGCTCCCCGCCGGAGCAGAAGCCGTTCGTGGCGGCGGCGGGCGGGCTG nf CCCCCGGCGTTCCCGGGGCTGGCGGCGTACTACGACCGGCCATCGGACTCGATGCCGCGG oi lm ul CTGCACGCGGACTACTCCAGCTGCTCGGAGCAGGTGCTGTCCCCGGAGCAGCTGGCGTGC GACCGGGAGGTGCAGAGCCAGCCCAAGATCAGCGAGTGGGAGCGGACCTTCGCCTCCGAC z at nh CCCGTGAGCCCCGCGGGCTCCATGCTCGACCCCGTCCTCGGCCACGCCGGCGGCGACCCG CTGCTGCAGGACATCCTCATGTACTGGGGCAAGCCGTTCTAG z gm @ MSGAGPDLQLPPGFRFHPTDEELVMHYLCRRCAGLPIAVPIIAEIDLYKFDPWQLPRMAL YGEKEWYFFSPRDRKYPNGSRPNRAAGAGYWKATGADKPVGTPKPLAIKKALVFYAGKAP l m co KGEKTNWIMHEYRLADVDRSARKKNSLRLDDWVLCRIYNKKGGGLEKAPAAGGDHKPVFA TAAVSSPPEQKPFVAAAGGLPPAFPGLAAYYDRPSDSMPRLHADYSSCSEQVLSPEQLAC an Lu DREVQSQPKISEWERTFASDPVSPAGSMLDPVLGHAGGDPLLQDILMYWGKPF n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si Phụ lục Kết so sánh trình tự gen ZmNAC1 phân lập từ giống NTCB với trình tự gen có mã số gb|EU224278.1| lu an n va Query Sbjct Query 26 61 Sbjct Query 86 121 Sbjct Query 146 181 to 206 241 Sbjct Query 266 301 p ie gh tn Sbjct Query 626 661 Sbjct Query 686 721 Sbjct Query 746 781 Sbjct Query 806 841 Sbjct 866 60 85 120 145 180 205 240 265 300 325 360 385 420 445 480 505 540 565 600 625 660 685 720 z Sbjct Query z at nh 566 601 oi lm Sbjct Query ul 506 541 nf Sbjct Query va 446 481 an Sbjct Query lu 386 421 d Sbjct Query oa 326 361 nl Sbjct Query w ATGAGCGGCGCCGGTCCGGATCTGCAGCTGCCACCGGGGTTCCGGTTCCACCCGACGGAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATGAGCGGCGCCGGTCCGGATCTGCAGCTGCCACCGGGGTTCCGGTTCCACCCGACGGAC GAGGAGCTGGTGATGCACTACCTCTGCCGCCGCTGCGCCGGCCTGCCCATCGCCGTCCCC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GAGGAGCTGGTGATGCACTACCTCTGCCGCCGCTGCGCCGGCCTGCCCATCGCCGTCCCC ATCATCGCCGAGATCGACCTCTACAAGTTCGACCCATGGCAGCTCCCCAGGATGGCACTG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATCATCGCCGAGATCGACCTCTACAAGTTCGACCCATGGCAGCTCCCCAGGATGGCACTG TACGGCGAGAAGGAGTGGTACTTCTTCTCCCCGCGGGACCGCAAGTACCCGAACGGGTCC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TACGGCGAGAAGGAGTGGTACTTCTTCTCCCCGCGGGACCGCAAGTACCCGAACGGGTCC AGGCCCAACCGCGCCGCCGGGGCTGGGTACTGGAAGGCCACCGGCGCTGACAAGCCCGTG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGGCCCAACCGCGCCGCCGGGGCTGGGTACTGGAAGGCCACCGGCGCTGACAAGCCCGTG GGCACGCCCAAGCCGCTGGCCATCAAGAAGGCGCTCGTCTTCTACGCCGGCAAGGCGCCC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGCACGCCCAAGCCGCTGGCCATCAAGAAGGCGCTCGTCTTCTACGCCGGCAAGGCGCCC AAGGGCGAGAAGACCAACTGGATCATGCACGAGTACCGCCTCGCCGACGTCGACCGCTCG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGGGCGAGAAGACCAACTGGATCATGCACGAGTACCGCCTCGCCGACGTCGACCGCTCG GCGCGCAAGAAGAACAGCCTCAGGTTGGATGACTGGGTCCTGTGCCGCATCTACAACAAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GCGCGCAAGAAGAACAGCCTCAGGTTGGATGACTGGGTCCTGTGCCGCATCTACAACAAG AAGGGCGGCGGGCTGGAGAAGGCGCCGGCGGCCGGCGGCGACCACAAGCCTGTGTTCGCC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGGGCGGCGGGCTGGAGAAGGCGCCGGCGGCCGGCGGCGACCACAAGCCTGTGTTCGCC ACGGCGGCGGTGAGCTCCCCGCCGGAGCAGAAGCCGTTCGTggcggcggcgggcgggctg |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACGGCGGCGGTGAGCTCCCCGCCGGAGCAGAAGCCGTTCGTGGCGGCGGCGGGCGGGCTG cccccggcgttcccggggctggcggcgTACTACGACCGGCCATCGGACTCGATGCCGCGG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCCCCGGCGTTCCCGGGGCTGGCGGCGTACTACGACCGGCCATCGGACTCGATGCCGCGG CTGCACGCGGACTACTCCAGCTGCTCGGAGCAGGTGCTGTCCCCGGAGCAGCTGGCGTGC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTGCACGCGGACTACTCCAGCTGCTCGGAGCAGGTGCTGTCCCCGGAGCAGCTGGCGTGC GACCGGGAGGTGCAGAGCCAGCCCAAGATCAGCGAGTGGGAGCGGACCTTCGCCTCCGAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GACCGGGAGGTGCAGAGCCAGCCCAAGATCAGCGAGTGGGAGCGGACCTTCGCCTCCGAC CCCGTGAGCCCCGCGGGCTCCATGCTCGACCCCGTCCTCGGCCACGCCGGCGGCGACCCG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCCGTGAGCCCCGCGGGCTCCATGCTCGACCCCGTCCTCGGCCACGCCGGCGGCGACCCG CTGCTGCAGGACATCCTCATGTACTGGGGCAAGCCGTTCTAG 882 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTGCTGCAGGACATCCTCATGTACTGGGGCAAGCCGTTCTAG 907 m co l gm @ 745 780 805 840 865 an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va Số hoá Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ac th si